JPH0570639B2

JPH0570639B2 -

Info

Publication number: JPH0570639B2
Application number: JP60118772A
Authority: JP
Inventors: Shogo Kagyama
Original assignee: Higeta Shoyu Co Ltd
Current assignee: Higeta Shoyu Co Ltd
Priority date: 1985-06-03
Filing date: 1985-06-03
Publication date: 1993-10-05
Also published as: JPS62284A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規なキラー因子Kh−及びびその
製造法に関するものである。更に詳細には、本発明は、塩類存在下で高活性
の新規なキラー因子Kh−及びその製造法に関
するものである。従来、キラー活性を有する酵母は数多く見出さ
れている。（化学と生物 Vol23，No.３ 151−
161頁1985）また、これら酵母によつて生産され
るそれぞれのキラー因子についてもかなり詳細に
解明されるに至つている。しかしながら、従来、高濃度食塩存在下で生育
するキラー因子生産菌が高濃度食塩存在下でキラ
ー活性を示すキラー因子を生産するという報告は
みられない。本発明者らは、高濃度食塩存在下で、生育し、
かつ、活性を有するキラー因子を生産する菌が見
出せれば、醤油醸造の菌そう制御に有効に利用で
きるとの発想のもとに、該菌を求めて鋭意研究し
たところ、この目的に合致する一菌株を分離する
ことに成功したのである。新たに分離された菌株はハンゼヌラ・アノマラ
（Hansenula anomala）に属すものと認められた
（ザ・イースト・ア・タキソノミツク・スタデ
イ・サード・リバイスド・アンド・エンラージ
ド・エデイシヨンによる）ので、ハンセヌラ・ア
ノマラKh−と命名され、微工研にFERM Ｐ−
8159として寄託された。ハンゼヌラ・アノマラKh−の菌学的性質は
次の通りである。１ YM培養地（ペプトン0.5％、麦芽エキス0.3
％、酵母エキス0.3％、グルコース１％）によ
く生育する。細胞は円形、楕円形又は伸長形を
なす。２胞子は山高帽状を呈す。３ YM液体培地で20℃６日間の培養により、ガ
スの発生が認められ、表面に弱く生育し、クリ
ープ状を呈す。培地はやや濁り、粉状の沈殿物
を生成する。４ YM寒天培地で20℃６日間の培養により、よ
く生育し、コロニーは隆起状となる。コロニー
表面はスムースで、きらきら輝く光沢を有し、
ムコイド状を呈す。５糖の資化性及びガス発生の有無

【表】６塩類添加培地でキラー因子Kh−をよく生
産する。次の表は各塩類を８％にしたYM培地
におけるキラー活性の生産を示すものである。

【表】ただし、−はキラー活性なし、＋はキラー活性あり
、は強いキラー活性あり、をそれぞれ意味
する。
７食塩濃度６〜10％で最適生育を示す。第５図
は各食塩濃度のYM培地（PH4.8）における30
℃４日培養の生育曲線を660nmの吸光度で示
す。８高食塩濃度でも十分生育する。第６図は食塩
16％添加培地における増殖曲線を示し、第７図
は食塩18％添加培地における増殖曲線を示す。９ PH３〜５に至適培養PHがある。第８図は各PH
におけるYM培地（食塩０％）で30℃４日間培
養した生育曲線である。 10 30℃に最適培養温度がある。第９図は各温度
におけるYM培地（食塩０％、PH4.8）で４日
間培養した生育曲線である。ハンゼヌラ・アノマラKh−の培養は、キラ
ー因子Kh−を生産しうる培地で行なわれる。
資化し得る炭素源、窒素源、栄養料等適宜含有す
る培地であればいかなる培地でもよい。また、醤
油諸味、醤油諸味液汁等またはこれらを含有する
培地で培養することも好ましい。次に示すのは、一般的で菌体の増殖及びキラー
因子Kh−の生産に好ましいYEPD培地である。（YEPD培地）グルコース２％ポリペプトン２％酵母エキス１％ NaCl ８％ IMマツキルバイン緩衝液（PH4.8） 10％培養は15〜25℃程度で、５〜６日間静置培養に
よつて行なわれる。得られた培養液は過して、培養液とし、こ
れをフオロフアイバーHIP−10（アミコン社製）
で濃縮し、濃縮液をセフアデツクスＧ−25でゲル
過にかけ、キラー因子Kh−の溶出画分をウ
ルトラフイルターUK−10（アドバンテイク社製）
にて限外過にかけ、得られた濃縮液をCM−セ
フアデツクスＣ−25でイオン交換し、キラー因子
Kh−溶出画分をウルトラフイルターUK−10
にて限外過にかけ、得られた濃縮液を真空凍結
乾燥して、キラー因子Kh−の乾燥白色粉末を
得る。次に、ここに得られたキラー因子Kh−の理
化学的性質を示す。１分子量：約30万ダルトン（ゲル過法による
測定）２元素分析：Ｃ：41.06％、Ｈ：6.12％、Ｎ：
9.54％３等電点：PH＝2.90 ４紫外線吸収スペクトル：第１図に示す通り。５赤外線吸収スペクトル：第２図に示す通り。６酵母に対する致死作用：塩類存在下において
のみ致死作用を示す。７致死作用PH：PH3.0〜6.0（２％食塩存在下）
15℃でチゴサツカロミセス・ルキシーに対する
活性曲線は第３図に示す通り。（キラー活性は
メチレンブルを含有するYM培地に感受性菌を
スプレーし、カツプをのせ、その中にキラー因
子を含む溶液10μを入れ20℃、４日間培養後
の阻止円の面積cm²で表示した）８分解性：パパインによつて分解される。麹菌
プロテアーゼによつて徐々に分解される。９温度感受性：食塩２％添加培地における各温
度におけるキラ−相対活性の経時変化は第４図
に示す通りである。 10 キラースペクトル：キラー因子Kh−のキ
ラースペクトルは表１に示される。（食塩２％
添加培地による）

【表】次に本発明の実施例を示す。実施例１グルコース２％ポリペプトン２％酵母エキス１％ NaCl ８％ IMマツキルバイン緩衝液（PH4.8） 10％上記組成のYEPD培地にハンゼヌラ・アノマラ
Kh−、FERM Ｐ−8159を接種し、20℃で、５
日間静置培養した。得られた培養液20をハイフロスーパーセルで
過し、得られた培養液20をフオロフアイバ
ーHIP−10（アミコン社製）で50mlに濃縮した。得られた培養濃縮液50mlをセフアデツクスＧ−
25でゲル過し、キラー因子Kh−溶出画分を
分離し、これをウルトラフイルターUK−10（ア
ドバンテイク社製）で限外過する。得られたゲル過濃縮液50mlをCM−セフアデ
ツクスＣ−25でイオン交換にかけ、キラー物質溶
出画分を分離し、これをウルトラフイルタ−UK
−10にて限外過にかけ、得られたイオン交換濃
縮液50mlを真空凍結乾燥し、キラー因子Kh−
の凍結乾燥白色粉末103mgを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、キラー因子Kh−の紫外線吸収ス
ペクトルを示す図で、第２図はその赤外線吸収ス
ペクトルを示す図で、第３図はその致死作用PHを
示す図で、第４図はその温度感受性を示す図で、
第５図はハンゼヌラ・アノマラKh−の各食塩
濃度における生育曲線を示す図で、第６図はその
食塩16％添加培地における増殖曲線を示す図で、
第７図はその食塩18％添加培地における増殖曲線
を示す図で、第８図はその各PHにおける生育曲線
を示す図で、第９図はその各温度における生育曲
線を示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】１下記の理化学的性質を有するキラー因子Kh
−。１分子量：約30万ダルトン（ゲル濾過法による
測定）２元素分析：Ｃ：41.06％、Ｈ：6.12％、Ｎ：
9.54％３等電点：PH＝2.90 ４紫外線吸収スペクトル：200nm〜340nmに吸
収あり。５赤外線吸収スペクトル：3500、1600、1400、
1080、950、670、550cm^-1に吸収あり。６酵母に対する致死作用：塩類存在下において
のみ致死作用を示す。７致死作用PH：PH3.0〜6.0（２％食塩存在下）、
15℃でチゴサツカロミセス・ルキシーに対して
キラー活性あり。８分解性：パパインによつて分解される。麹菌
プロテアーゼによつて徐々に分解される。９温度感受性：食塩２％添加培地において、保
温時間4.5時間で、15℃ではほぼ安定、20〜30
℃で75％、40℃で40％の残存活性を有する。 10 キラースペクトル：キラー因子Kh−のキ
ラースペクトルは表１に示される。（食塩２％
添加培地による）【表】２ハンゼヌラ属に属するキラー因子Kh−生
産菌を培養し、培養物によりキラー因子Kh−
を採取することを特徴とするキラー因子Kh−
の製造法。