JPH0539B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野） 本発明はラセミ体２，３−ジクロロ−１−プロ
パノールの微生物処理による光学活性Ｒ−（＋）−
２，３−ジクロロ−１−プロパノールの分取法に
関する。 （従来の技術） ２，３−ジクロロ−１−プロパノール（以下、
本化合物をβ−DCHと略称する。）は、下記構造
式（） にて表わされる物質であり、そして光学活性β−
DCHは光学活性エピクロルヒドリンと共に各種
の医薬、農薬等の中間原料として重要なものであ
る。 しかしながら、従来、光学活性β−DCHを得
るには合成法によつてつくられたラセミ体β−
DCHから光学活性体を分離する方法、例えば、
β−DCHの水酸基を無水酢酸でアセチル化して
１−アセトキシ−２，３−ジクロロプロパンとし
た後リパーゼを作用させる方法等の、他の誘導体
を経由して行う複雑で純度の低い製法しか知られ
ていなかつた。 （発明が解決しようとする課題） 本発明者は既にラセミ体β−DCHとＲ−（＋）
−β−DCH資化性菌とを接触させて高純度な光
学活性Ｓ−（−）−β−DCHを得る方法（特開昭
61−132196号公報）を開発したが、これらとは逆
の光学異性体、すなわちＲ−（＋）−β−DCHの
簡便な製造方法は知られていない。この課題を解
決したのが本発明である。 （課題を解決するための手段） 本発明者は微生物処理により上記光学活性Ｒ−
（＋）−β−DCHを簡便に、また高純度に製造し
得ることを見出し本発明を完成させた。 すなわち本発明は、Ｓ−（−）−２，３−ジクロ
ロ−１−プロパノール資化能を有するアルカリゲ
ネス属に属する細菌、又はその培養菌体を、培地
中でラセミ体２，３−ジクロロ−１−プロパノー
ルと作用せしめてＲ−（＋）−２，３−ジクロロ−
１−プロパノールを分取することを特徴とする微
生物処理による光学活性ジクロロプロパノールの
製法である。 本発明者が土壌中より分離採取して本発明にお
いて用いた微生物の菌学的性質は表１に示すとお
りである。

【表】

【表】 以上の結果をもとにバージエイズ・マニユア
ル・オブ・システマテイツク・バクテリオロジイ
（Bergey's Manual of systematic
Bacteriology）第一巻の記載に基づき帰属同定
を行うと本菌はアルカリゲネス属の特徴を有す
る。本発明者は本菌をアルカリゲネス
（Alcaligenes）sp.DS−Ｋ−S38と命名した（以
下、本菌をDS−Ｋ−S38株という）。なお本菌は
工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第
11114号（FERM Ｐ−11114）として寄託されて
いる。 本発明においては、上記DS−Ｋ−S38株、その
変種、変異株ばかりでなく、アルカリゲネス属に
属しＳ−（−）−２，３−ジクロロ−１−プロパノ
ール資化能を有する細菌であればすべて使用する
ことができる。 本発明は上記細菌によつて上記ラセミ体β−
DCHの光学活性化を行うものである。本発明に
おいては上記細菌又はその培養菌体を用いてもよ
いし、或いはこれらを固定化させても実施できる
が、上記細菌の培養方法ならびに固定化方法は通
常よく用いられる方法でよい。すなわち培養方法
は、上記細菌をブイヨン培地、あるいは加糖ブイ
ヨン培地等、炭素源、窒素源、有機栄養源、無機
栄養源を含む栄養培地中で培養せしめ、よく生育
させておき、これから得られる培養物あるいは培
養菌体を用いればよい。炭素源としてはグリセリ
ン等の炭水化物、あるいはクエン酸、マレイン
酸、リンゴ酸等の有機酸及びその塩類を、窒素源
としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機
態窒素、及びペプトン、カゼイン、酵母エキス、
肉エキス等の有機態窒素を用いることができる。
その他の無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウ
ム塩、カリ塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩等が用いられ
る。その培養条件は通常、温度約20〜45℃、好ま
しくは25〜37℃、PH約５〜９、好ましくはPH6.0
〜7.5で振盪あるいは通気撹拌等の手段で好気的
に行われる。 また、固定化方法は例えばアクリルアミド、β
−カラギーナン、寒天、ゼラチン、アルギン酸ナ
トリウム等を用いて生菌体を包括する方法でよ
く、固定化後、適当な大きさ、形状に破砕して用
いればよい。 上記細菌とラセミ体β−DCHとの反応はラセ
ミ体β−DCHを含有する培地、例えば合成培地
中で上記細菌又はその培養菌体、或いはこれらの
固定化物を撹拌しよく接触させればよく、その接
触時間は通常半日〜10日でありβ〜DCHの濃度
は培地中約0.1〜0.6容量％程度であればよい。 反応終了後、反応液をとり出して濾過し、培養
菌体と上清液、或いは固定化物と上清液とを分離
し、上清液中に残存するＲ−（＋）−β−DCHを
活性炭カラム処理、エーテル抽出、減圧蒸留等の
操作によつて分取する。 また本発明方法において固定化させた菌体を使
用すれば遠心分離等の操作が容易になり、さらに
固定化物はくり返し使用できる。 （実施例） 以下実施例により具体的に説明する。例中％は
特に記さない限り重量基準である。 実施例 １ 酵母エキス1.0％、グリセリン2.0％、ポリペプ
トン1.0％、PH7.0の培地20を30容ジヤーフア
ーメンターに入れ、常法どおり加熱減菌後、DS
−Ｋ−S38株を接種し、次の条件下で24時間培養
した。 温度 30℃ PH 初発PH7.0 通気量 20／min 撹拌回転数 300r.p.m. 培養終了後、微生物菌体と培養濾液とを遠心分
離機を用いて分離し生菌体600gを得た。続いて、
生菌体は、以下に示す合成培地にけんだくさせ10
容とした後、常法どおりアクリルアミドで固定
化した。固定化物は、ミキサーで0.5〜１mm角の
大きさに破砕し合成培地でよく洗浄した。 合成培地の成分 硫酸アンモニウム 0.05重量％ 硝酸アンモニウム 0.05 〃 リン酸水素第２カリウム 0.1 〃 リン酸第１ナトリウム 0.2 〃 リン酸第２ナトリウム 0.1 〃 硫酸マグネシウム 0.05 〃 硫酸鉄、硫酸銅、硫酸マンガン 微量 PH 初発 PH6.8 次に、このようにして調整した固定化物は100
容ジヤーフアーメンターの中に入れ合成培地と
ともに80とする。そしてさらに、ラセミ体β−
DCHを320ml、炭酸カルシウム160gを加え、以下
の条件下で撹拌した。 温度 30℃ 通気量 40／min 回転数 300r.p.m. 反応開始後72時間後に上清液と固定化物とを濾
別し、此の液から残存するβ−DCHを活性炭カ
ラム、エーテル抽出、減圧蒸留によつて分取し
152gを採取した。本物質の同定は次の方法で行
つた。 １ ガスクロマトグラフイーによる同定 カラム担体PEG−2OMP、５％、60〜80メツ
シユを用いて市販β−DCHと比較した結果、そ
の保持時間は全く同じであつた。純度98.2％以
上。 ２ IR（赤外吸収スペクトル）による同定 第１図に示したチヤートのように、その吸収パ
ターンは市販β−DCHと全く同一であつた。 以上から本物質は明らかにβ−DCHである事が
判明した。又本物質がＲ−（＋）−β−DCHであ
る事の確認は以下の方法によつた。 １ 旋光度の測定 市販β−DCH及び本物質の比旋光度は次の如
くである。 市販β−DCH 〔α〕²⁰ _D＝0.0° Ｃ＝１， ジクロロメタン 本物質 〔α〕²⁰ _D＝＋10.4° Ｃ＝１， ジクロロメタン ２ Ｒ−（＋）−α−メトキシ−α−トリフルオロ
メチルフエニルアセテートエステルの調整なら
びに高速液体クロマトグラフイーによる分析 Ｒ−（＋）−α−メトキシ−α−トリフルオロメ
チルフエニルアセテートクロライドを市販β−
DCHならびに本物質に反応せしめ、そのエステ
ル誘導体を調整した後、液体クロマトグラフイー
での分析結果は次のようであつた。

【表】

【表】 かつた。
３ ジクロロプロピル−Ｎ−フエニルカルバメー
トの調整及びその旋光度 市販β−DCH、及び本物質1gとフエニルイソ
シアネート0.9gを乾燥アセトン30ml、トリエチル
アミン0.3mlに加え、約３時間加熱還流し、その
ジクロロプロピル−Ｎ−フエニルカルバメートを
調整した後、その比旋光度を測定した。 市販β−DCH 〔α〕²⁰ _D＝0.0° Ｃ＝１， メタノール 本物質 〔α〕²⁰ _D＝＋16.4°C＝１， メタノール 以上の結果から本物質は、Ｒ−（＋）−β−
DCHであり、その光学純度は99％以上であるこ
とが判つた。 実施例 ２ 実施例１と同様に酵母エキス1.0％、ポリペプ
トン1.0％、グリセリン2.0％、PH7.0の培地２を
５容ジヤーフアーメンターに入れ常法どおり、
加熱減菌後、DS−Ｋ−S38株を接種し、実施例１
と同じ条件下で24時間培養した。 次に100容ジヤーフアーメンターに実施例１
に示した合成培地80及び炭酸カルシウム160g、
ラセミ体β−DCH320ml、ポリペプトン40gを入
れ、加熱減菌のあと、常法どおり上記培養物を接
種し温度30℃、通気量40／min、回転数
300rpmの条件下で培養しながら反応させた。 反応開始後48時間後に反応液は、遠心処理機に
て、上清液と菌体、沈澱物とに分離し、上清液か
ら残存するβ−DCHを、実施例１と同様に分取
し、Ｒ−（＋）−β−DCH148gを得た。 得られたＲ−（＋）−β−DCHの比旋光度は
［α］²⁰ _D＝＋10.4β（Ｃ＝1.0、ジクロロメタン）であ
り、実施例１と同様に分析した結果、光学純度は
99％以上であつた。 （発明の効果） 本発明によれば土壌中より分離したシルカリゲ
ネス属に属する細菌を利用してラセミ体２，３−
ジクロロ−１プロパノールより簡便に且つ高純度
に光学活性なＲ−（＋）−２，３−ジクロロ−１−
プロパノールを得ることができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１により得られたＲ−（＋）−
２，３−ジクロロ−１−プロパノールおよび市販
品の同物質の赤外線吸収スペクトルである。――
―は市販β−DCHを、−−−はＲ−（＋）−β−
DCHを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ Ｓ−（−）２，３−ジクロロ−１−プロパノ
   ール資化能を有するアルカリゲネス属に属する細
   菌、又はその培養菌体を、培地中でラセミ体２，
   ３−ジクロロ−１−プロパノールと作用せしめて
   Ｒ−（＋）−２，３−ジクロロ−１−プロパノール
   を分取することを特徴とする微生物処理による光
   学活性ジクロロプロパノールの製法。 ２ Ｓ−（−）−２，３−ジクロロ−１−プロパノ
   ール資化能を有するアルカリゲネス属に属する細
   菌、又はその培養菌体を固定化して使用する特許
   請求の範囲第１項記載の製法。