JPH05130881A - カルボン酸誘導体の酵素加水分解方法 - Google Patents
カルボン酸誘導体の酵素加水分解方法Info
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- JPH05130881A JPH05130881A JP4110468A JP11046892A JPH05130881A JP H05130881 A JPH05130881 A JP H05130881A JP 4110468 A JP4110468 A JP 4110468A JP 11046892 A JP11046892 A JP 11046892A JP H05130881 A JPH05130881 A JP H05130881A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 カルボン酸誘導体の酵素加水分解方法
【構成】 カルボン酸誘導体を水と僅かにしか混和し得
ない有機溶剤中に溶解し、溶液を水で飽和し、水- 飽和
された有機溶液をヒドロラーゼと接触させ、加水分解を
行い、その後反応溶液を再び水で飽和し、ヒドロラーゼ
と接触させ、次いで所望の変換度合が達成されるまで再
び水で飽和することによる、カルボン酸誘導体の酵素加
水分解方法。
ない有機溶剤中に溶解し、溶液を水で飽和し、水- 飽和
された有機溶液をヒドロラーゼと接触させ、加水分解を
行い、その後反応溶液を再び水で飽和し、ヒドロラーゼ
と接触させ、次いで所望の変換度合が達成されるまで再
び水で飽和することによる、カルボン酸誘導体の酵素加
水分解方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、有機溶剤中でカルボン
酸誘導体の酵素加水分解方法に関する。
酸誘導体の酵素加水分解方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】多数の酵素は、多かれ少なかれ特異的に
カルボン酸誘導体を加水分解することができる。ヒドロ
ラーゼのこの性質は、長い間経済的に利用されている。
この場合ヒドロラーゼは通常良好な変換率及び水性溶液
中で一般に低い活性損失を示すが、これが水に溶け、水
性反応溶液からめったにしか回収することができず、再
び使用されないことを考慮しなければならない。共有固
定されたヒドロラーゼを実際水性溶液から回収すること
ができるが、これらはより低い変換率を有し、非- 固定
形で使用されたヒドロラーゼの同一量よりも悪い活性を
有する。更に酵素を常に水性系中で酵素固定剤なしで溶
解する。
カルボン酸誘導体を加水分解することができる。ヒドロ
ラーゼのこの性質は、長い間経済的に利用されている。
この場合ヒドロラーゼは通常良好な変換率及び水性溶液
中で一般に低い活性損失を示すが、これが水に溶け、水
性反応溶液からめったにしか回収することができず、再
び使用されないことを考慮しなければならない。共有固
定されたヒドロラーゼを実際水性溶液から回収すること
ができるが、これらはより低い変換率を有し、非- 固定
形で使用されたヒドロラーゼの同一量よりも悪い活性を
有する。更に酵素を常に水性系中で酵素固定剤なしで溶
解する。
【０００３】それ故に、すでに有機媒体中で酵素加水分
解を実施が試みられている。かくて、生化学のパキスタ
ンジヤーナル、第１０巻、Ｎｏ．２，１９７６中には、
カルボン酸エステルの加水分解の間、有機媒体中での加
水分解の最初の割合は、時々水性媒体中に於けるよりも
高いが、ヒドロラーゼが有機溶剤に敏感なので、ヒドロ
ラーゼの活性は有機媒体中で速やかに減少することが開
示されている。
解を実施が試みられている。かくて、生化学のパキスタ
ンジヤーナル、第１０巻、Ｎｏ．２，１９７６中には、
カルボン酸エステルの加水分解の間、有機媒体中での加
水分解の最初の割合は、時々水性媒体中に於けるよりも
高いが、ヒドロラーゼが有機溶剤に敏感なので、ヒドロ
ラーゼの活性は有機媒体中で速やかに減少することが開
示されている。
【０００４】したがって、ケミカルアブストラクト、第
１１２巻、１５４３８７ｚ中に、ヒドロラーゼを、有機
溶剤に対するその許容を増加するために化学的に変化さ
せることが提案されている。
１１２巻、１５４３８７ｚ中に、ヒドロラーゼを、有機
溶剤に対するその許容を増加するために化学的に変化さ
せることが提案されている。
【０００５】ケミカルアブストラクト第１０９巻、１８
８８３２ｎ中に、水-飽和されたベンゼン中で化学的に
変化されたヒドロラーゼを用いる酵素加水分解が記載さ
れている。
８８３２ｎ中に、水-飽和されたベンゼン中で化学的に
変化されたヒドロラーゼを用いる酵素加水分解が記載さ
れている。
【０００６】今や、本発明者は、水と僅かな程度でしか
混和しない有機溶剤を使用するならば及び水が消費され
ている間、有機溶剤は加水分解のうちに水で飽和された
ままであることに注目するならば、良好な変換率及び有
機溶剤中のヒドロラーゼの一定の高活性にとって、ヒド
ロラーゼを化学的に変化することは不必要であること
を、予期せずに見い出した。
混和しない有機溶剤を使用するならば及び水が消費され
ている間、有機溶剤は加水分解のうちに水で飽和された
ままであることに注目するならば、良好な変換率及び有
機溶剤中のヒドロラーゼの一定の高活性にとって、ヒド
ロラーゼを化学的に変化することは不必要であること
を、予期せずに見い出した。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、カルボン酸
誘導体を水と僅かにしか混和し得ない有機溶剤中に溶解
し、その後溶液を水で飽和し、これをヒドロラーゼと接
触させ、加水分解を水の消費と共に行い、その後有機反
応溶液を水で再び飽和し、これを所望の変換度合が達成
されるまでヒドロラーゼと接触させることを特徴とす
る、カルボン酸誘導体の酵素加水分解方法に関する。
誘導体を水と僅かにしか混和し得ない有機溶剤中に溶解
し、その後溶液を水で飽和し、これをヒドロラーゼと接
触させ、加水分解を水の消費と共に行い、その後有機反
応溶液を水で再び飽和し、これを所望の変換度合が達成
されるまでヒドロラーゼと接触させることを特徴とす
る、カルボン酸誘導体の酵素加水分解方法に関する。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明による方法は、ヒ
ドロラーゼを用いて酵素的に加水分解することができる
カルボン酸誘導体の加水分解に適する。この様なカルボ
ン酸誘導体は、たとえばカルボン酸エステル、ジエステ
ル、トリエステル、カルボン酸アミド、カルボン酸チオ
エステル等又は同族のそのチオカルボン酸誘導体であ
る。特に重要なことは、カルボン酸誘導体の加水分解法
にあり、この誘導体は、酸部分中に又は分子中にキラル
中心を生じる誘導体部分中に置換基を有するものか又は
加水分解の結果としてキラル中心を生じるものである。
この様なキラル又はプロキラルカルボン酸誘導体を、立
体特異性ヒドロラーゼを用いて加水分解して、光学的に
活性な化合物となすことができる。この化合物に於て可
能な鏡像体の１つは、ヒドロラーゼの立体特異性に応じ
て、少なくとも濃縮形（enriched form)で存在し、キラ
ルカルボン酸誘導体とは、ラセミ混合物及び少なくとも
濃縮形で可能な鏡像体の１つが存在する混合物を意味す
る。
ドロラーゼを用いて酵素的に加水分解することができる
カルボン酸誘導体の加水分解に適する。この様なカルボ
ン酸誘導体は、たとえばカルボン酸エステル、ジエステ
ル、トリエステル、カルボン酸アミド、カルボン酸チオ
エステル等又は同族のそのチオカルボン酸誘導体であ
る。特に重要なことは、カルボン酸誘導体の加水分解法
にあり、この誘導体は、酸部分中に又は分子中にキラル
中心を生じる誘導体部分中に置換基を有するものか又は
加水分解の結果としてキラル中心を生じるものである。
この様なキラル又はプロキラルカルボン酸誘導体を、立
体特異性ヒドロラーゼを用いて加水分解して、光学的に
活性な化合物となすことができる。この化合物に於て可
能な鏡像体の１つは、ヒドロラーゼの立体特異性に応じ
て、少なくとも濃縮形（enriched form)で存在し、キラ
ルカルボン酸誘導体とは、ラセミ混合物及び少なくとも
濃縮形で可能な鏡像体の１つが存在する混合物を意味す
る。
【０００９】好ましいカルボン酸誘導体とは、鏡像体キ
ラルカルボン酸エステルの混合物である。このエステル
は、酸部分にキラル中心を有するもの、特に２- 置換さ
れたアルカン酸エステル、特に好ましくは２- ハロプロ
ピオン酸エステルである。
ラルカルボン酸エステルの混合物である。このエステル
は、酸部分にキラル中心を有するもの、特に２- 置換さ
れたアルカン酸エステル、特に好ましくは２- ハロプロ
ピオン酸エステルである。
【００１０】したがって形成された加水分解生成物は、
カルボン酸又はチオカルボン酸及びアルコール、アミ
ン、チオール等である。この際カルボン酸もしくはアル
コール、アミン、チオール等々であるか、その代りに双
方が所望の反応生成物として表わされ、回収することが
できる。
カルボン酸又はチオカルボン酸及びアルコール、アミ
ン、チオール等である。この際カルボン酸もしくはアル
コール、アミン、チオール等々であるか、その代りに双
方が所望の反応生成物として表わされ、回収することが
できる。
【００１１】本発明による方法を実施するために、カル
ボン酸誘導体を先ず水に僅かにしか溶けない有機溶剤中
に溶解する。使用される有機溶剤は、たとえば炭化水
素、たとえばペンタン、ヘキサン、ベンゼン、トルエ
ン、ハロゲン化炭化水素、たとえばメチレンクロライ
ド、クロロホルム、四塩化炭素、エチレンクロライド、
クロルベンゼン、又はエーテル、たとえばジエチルエー
テル、ジイソプロピルエーテル、又はこの様な溶剤の混
合物である。好ましい溶剤はエーテル、特にジイソプロ
ピルエーテルである。ここでの溶剤の選択は重要であ
る。というのは反応が別の溶剤中よりも特定の溶剤中
で、より速やかに進行することができるからである。一
定の条件下で、有機溶剤に有機共- 溶剤の少量を加える
のが有利である。その共溶剤は、水と混和し、たとえば
アルコール、たとえばメタノール、エタノール又はイソ
プロパノール、ケトン、たとえばアセトン等々であり、
これによって有機溶剤中のカルボン酸誘導体の溶解度を
増加する。しかし添加された共- 溶剤の量は、極めて低
くなければならないので、有機溶剤は、共- 溶剤の添加
の結果として水とまったく混和しない。所望の変換用溶
剤は、簡単な予備実験によって当業者に容易に見い出す
ことができる。
ボン酸誘導体を先ず水に僅かにしか溶けない有機溶剤中
に溶解する。使用される有機溶剤は、たとえば炭化水
素、たとえばペンタン、ヘキサン、ベンゼン、トルエ
ン、ハロゲン化炭化水素、たとえばメチレンクロライ
ド、クロロホルム、四塩化炭素、エチレンクロライド、
クロルベンゼン、又はエーテル、たとえばジエチルエー
テル、ジイソプロピルエーテル、又はこの様な溶剤の混
合物である。好ましい溶剤はエーテル、特にジイソプロ
ピルエーテルである。ここでの溶剤の選択は重要であ
る。というのは反応が別の溶剤中よりも特定の溶剤中
で、より速やかに進行することができるからである。一
定の条件下で、有機溶剤に有機共- 溶剤の少量を加える
のが有利である。その共溶剤は、水と混和し、たとえば
アルコール、たとえばメタノール、エタノール又はイソ
プロパノール、ケトン、たとえばアセトン等々であり、
これによって有機溶剤中のカルボン酸誘導体の溶解度を
増加する。しかし添加された共- 溶剤の量は、極めて低
くなければならないので、有機溶剤は、共- 溶剤の添加
の結果として水とまったく混和しない。所望の変換用溶
剤は、簡単な予備実験によって当業者に容易に見い出す
ことができる。
【００１２】有機溶剤中に出発化合物を有する溶液を、
可能な限り濃縮して製造する。溶剤中の出発化合物の濃
度は、夫々の場合に使用される夫々の出発化合物及び溶
剤による。
可能な限り濃縮して製造する。溶剤中の出発化合物の濃
度は、夫々の場合に使用される夫々の出発化合物及び溶
剤による。
【００１３】次いで有機溶液を水で混和する。水での飽
和のために、溶液を結合水を含有する及び有機溶剤と接
触してこの水を放つことができる系と接触させるか水性
相と接触させるかのどちらかである。結合水を含有する
系は、たとえば水含有ヒドロゲル、たとえばポリアクリ
ルアミドゲル、多糖類ゲル等々である。結合水のある量
を、溶液を水で飽和するのに十分である有機溶液に加
え、この際水は純粋な水及び緩衝液又は塩溶液を意味す
る。使用されるヒドロゲルの量は、この場合ヒドロゲル
の及び有機溶剤の水吸収容量に依存する。
和のために、溶液を結合水を含有する及び有機溶剤と接
触してこの水を放つことができる系と接触させるか水性
相と接触させるかのどちらかである。結合水を含有する
系は、たとえば水含有ヒドロゲル、たとえばポリアクリ
ルアミドゲル、多糖類ゲル等々である。結合水のある量
を、溶液を水で飽和するのに十分である有機溶液に加
え、この際水は純粋な水及び緩衝液又は塩溶液を意味す
る。使用されるヒドロゲルの量は、この場合ヒドロゲル
の及び有機溶剤の水吸収容量に依存する。
【００１４】適する水性相は、純粋な水、緩衝溶液又は
その代りに水性塩溶液である。使用される緩衝溶液は、
これ中でヒドロラーゼが高変換率及び高い特異性を示す
ものの１つであるのが好ましい。水での飽和のために、
有機溶液をそのまま水性相に入れるか、水性相と混合
し、放置し、２相を生じせしめる。
その代りに水性塩溶液である。使用される緩衝溶液は、
これ中でヒドロラーゼが高変換率及び高い特異性を示す
ものの１つであるのが好ましい。水での飽和のために、
有機溶液をそのまま水性相に入れるか、水性相と混合
し、放置し、２相を生じせしめる。
【００１５】水- 飽和された溶液を、次いでヒドロラー
ゼと接触させる。出発化合物及び所望生成物に従って、
可能なヒドロラーゼは、夫々の反応に適するヒドロラー
ゼである。ヒドロラーゼの例は、エステラーゼ、プロテ
アーゼ、アミダーゼ等である。所望の反応に従ってヒド
ロラーゼを使用して、できる限り立体特異的にキラル又
はプロキラルカルボン酸誘導体の場合、できる限り特異
的に反応を実施するのが好都合である。リパーゼを本発
明による方法に使用するのが好ましい。本発明による方
法の利点は、ヒドロラーゼを化学溶剤に対するその許容
量を増加するのに化学的に変化させてはならないことで
ある。しかし化学的変化したヒドロラーゼを、本発明に
よる方法で使用することもできる。
ゼと接触させる。出発化合物及び所望生成物に従って、
可能なヒドロラーゼは、夫々の反応に適するヒドロラー
ゼである。ヒドロラーゼの例は、エステラーゼ、プロテ
アーゼ、アミダーゼ等である。所望の反応に従ってヒド
ロラーゼを使用して、できる限り立体特異的にキラル又
はプロキラルカルボン酸誘導体の場合、できる限り特異
的に反応を実施するのが好都合である。リパーゼを本発
明による方法に使用するのが好ましい。本発明による方
法の利点は、ヒドロラーゼを化学溶剤に対するその許容
量を増加するのに化学的に変化させてはならないことで
ある。しかし化学的変化したヒドロラーゼを、本発明に
よる方法で使用することもできる。
【００１６】ヒドロラーゼを、たとえば担体、たとえば
セオライト、シリカゲル、ダスト、ガラスビーズ上に吸
着して又はその代りに固定形で使用することができる。
ヒドロラーゼを、不活性担体、特に好ましくはセオライ
ト上に吸着して使用するのが好ましく、その際これは、
ヒドロラーゼとセオライトを簡単に混合して、セオライ
ト上にヒドロラーゼを吸着するので十分である。
セオライト、シリカゲル、ダスト、ガラスビーズ上に吸
着して又はその代りに固定形で使用することができる。
ヒドロラーゼを、不活性担体、特に好ましくはセオライ
ト上に吸着して使用するのが好ましく、その際これは、
ヒドロラーゼとセオライトを簡単に混合して、セオライ
ト上にヒドロラーゼを吸着するので十分である。
【００１７】本法の実質上の利点は、ヒドロラーゼが有
機溶剤中に不溶性であるので固定形で導入されてはなら
ないことである。水含有ヒドロゲルを、水による有機溶
剤の飽和に使用した場合、ヒドロラーゼをそのまま、ヒ
ドロゲルがまだ存在する水- 飽和溶液に加える。水- 飽
和された溶液とヒドロラーゼとの接触で、加水分解が酵
素特異性範囲まで及び酵素特異性選択性をもって行わ
れ、この際加水分解中に消費された水をヒドロゲルから
補うので、有機反応溶液は常に水- 飽和される。
機溶剤中に不溶性であるので固定形で導入されてはなら
ないことである。水含有ヒドロゲルを、水による有機溶
剤の飽和に使用した場合、ヒドロラーゼをそのまま、ヒ
ドロゲルがまだ存在する水- 飽和溶液に加える。水- 飽
和された溶液とヒドロラーゼとの接触で、加水分解が酵
素特異性範囲まで及び酵素特異性選択性をもって行わ
れ、この際加水分解中に消費された水をヒドロゲルから
補うので、有機反応溶液は常に水- 飽和される。
【００１８】キラル又はプロキラルカルボン酸誘導体を
使用する場合、反応を所望の変換度合になるまで進め
る。この度合を旋光性の測定によって確かめる。所望の
変換度合を達成した後に酵素及びヒドロゲルを濾去す
る。所望の生成物によって、次いで溶液を常法で後処理
し、この際抽出、再結晶、蒸留又はクロマトグラフィー
によって所望の生成物を得る又は精製することができ
る。
使用する場合、反応を所望の変換度合になるまで進め
る。この度合を旋光性の測定によって確かめる。所望の
変換度合を達成した後に酵素及びヒドロゲルを濾去す
る。所望の生成物によって、次いで溶液を常法で後処理
し、この際抽出、再結晶、蒸留又はクロマトグラフィー
によって所望の生成物を得る又は精製することができ
る。
【００１９】水性相を使用して、有機溶液を水で飽和す
る場合、ヒドロラーゼを反応容器中に、たとえばカラム
中に入れ、水- 飽和された有機溶液を容器を通して及び
ヒドロラーゼ上にポンプ送入するので、ヒドロラーゼは
水性相と接触することがない。
る場合、ヒドロラーゼを反応容器中に、たとえばカラム
中に入れ、水- 飽和された有機溶液を容器を通して及び
ヒドロラーゼ上にポンプ送入するので、ヒドロラーゼは
水性相と接触することがない。
【００２０】ヒドロラーゼと有機の、水- 飽和された溶
液との接触で、加水分解は酵素- 特異性範囲に及び酵素
- 特異的立体選択性で行われる。この処理で、水- 飽和
された溶液を、連続的にヒドラーゼ上に通し、次いで水
性相を通す。というのは所望の変換度合が一般にヒドロ
ラーゼと反応溶液との一回の接触で達成することができ
るからである。一般のヒドロラーゼを、光学的に活性な
カルボン酸誘導体の２つの鏡像体と反応させることがで
き、しかしその場合好ましくはこれが鏡像体１個と反応
するので、一般にキラル又はプロキラルカルボン酸誘導
体の場合に夫々の鏡像体過剰の尺度である反応溶液の旋
光性を連続的に測定するのに及びできる限り鏡像的に純
粋である精製物を得るために、ヒドロラーゼによって選
ばれた鏡像体の変換後、反応を停止するのに適してい
る。
液との接触で、加水分解は酵素- 特異性範囲に及び酵素
- 特異的立体選択性で行われる。この処理で、水- 飽和
された溶液を、連続的にヒドラーゼ上に通し、次いで水
性相を通す。というのは所望の変換度合が一般にヒドロ
ラーゼと反応溶液との一回の接触で達成することができ
るからである。一般のヒドロラーゼを、光学的に活性な
カルボン酸誘導体の２つの鏡像体と反応させることがで
き、しかしその場合好ましくはこれが鏡像体１個と反応
するので、一般にキラル又はプロキラルカルボン酸誘導
体の場合に夫々の鏡像体過剰の尺度である反応溶液の旋
光性を連続的に測定するのに及びできる限り鏡像的に純
粋である精製物を得るために、ヒドロラーゼによって選
ばれた鏡像体の変換後、反応を停止するのに適してい
る。
【００２１】有機の、水- 飽和された溶液を酵素上に連
続ポンプ送入した間、溶液は常に酵素の接触で水- 飽和
されることを考慮しなければならない。水１モルは加水
分解の間切断される結合モルあたりで消費されるので、
この水を、有機溶剤が再びヒドロラーゼと接触する前に
戻さねばならない。
続ポンプ送入した間、溶液は常に酵素の接触で水- 飽和
されることを考慮しなければならない。水１モルは加水
分解の間切断される結合モルあたりで消費されるので、
この水を、有機溶剤が再びヒドロラーゼと接触する前に
戻さねばならない。
【００２２】消費された水を、たとえばカラム中に存在
する塩基性、水酸化物イオン- 含有剤上でヒドロラーゼ
と接触後、たとえば有機溶液を通過させて戻すことがで
きる。この方法で、カルボン酸塩１モル及び水１モルを
カルボン酸１モルあたりで生じるので、加水分解の間に
消費される水を戻し、溶液は水-飽和されたままであ
る。使用することができる塩基性剤は、たとえばＯＨ形
でイオン交換体及び、アルカリ金属又はアルカリ土類金
属水酸化物である。カラムを通った後、溶液はもはや酵
素溶液中に形成されたカルボン酸を含有しない。という
のはこれは塩基性剤と結合したままであるが、カルボン
酸塩あたり水１モルの形成によって、水で再び飽和され
るからである。反応溶液を連続的にヒドロラーゼ上にポ
ンプ送入し、次いで水酸化物イオン含有剤を含有カラム
に、所望の変換度合が達成されるまで通す。しかし水で
飽和するために、有機反応溶液を、ヒドロラーゼと接触
した後に水性相に通し、水性相と混合し、沈降させるこ
ともできる。可能な水性相は純粋な水、緩衝溶液又は塩
溶液である。反応で形成された酸の導入のゆえに低下す
る、水性相のｐＨを、塩基の添加によってほぼ一定に保
つのが好ましい。ｐＨは３以下に下る又は１１以上に上
ってはならない。５〜１０、特に好ましくは６〜８のｐ
Ｈ範囲を保つ。
する塩基性、水酸化物イオン- 含有剤上でヒドロラーゼ
と接触後、たとえば有機溶液を通過させて戻すことがで
きる。この方法で、カルボン酸塩１モル及び水１モルを
カルボン酸１モルあたりで生じるので、加水分解の間に
消費される水を戻し、溶液は水-飽和されたままであ
る。使用することができる塩基性剤は、たとえばＯＨ形
でイオン交換体及び、アルカリ金属又はアルカリ土類金
属水酸化物である。カラムを通った後、溶液はもはや酵
素溶液中に形成されたカルボン酸を含有しない。という
のはこれは塩基性剤と結合したままであるが、カルボン
酸塩あたり水１モルの形成によって、水で再び飽和され
るからである。反応溶液を連続的にヒドロラーゼ上にポ
ンプ送入し、次いで水酸化物イオン含有剤を含有カラム
に、所望の変換度合が達成されるまで通す。しかし水で
飽和するために、有機反応溶液を、ヒドロラーゼと接触
した後に水性相に通し、水性相と混合し、沈降させるこ
ともできる。可能な水性相は純粋な水、緩衝溶液又は塩
溶液である。反応で形成された酸の導入のゆえに低下す
る、水性相のｐＨを、塩基の添加によってほぼ一定に保
つのが好ましい。ｐＨは３以下に下る又は１１以上に上
ってはならない。５〜１０、特に好ましくは６〜８のｐ
Ｈ範囲を保つ。
【００２３】中和に適する塩基は、通常の塩基、たとえ
ばアルカリ金属又はアルカリ土類金属水酸化物、炭酸塩
及び炭酸水素塩又はＮＨ4 ＯＨ等であり、アルカリ金属
水酸化物、たとえば水酸化カリウム又は水酸化カリウム
を使用するのが好ましい。塩基を水性溶液として、好ま
しくはｐＨ- 測定システム、たとえば水素電極と好まし
くは自動化された形で組合せて加える。塩基の添加の結
果として、カルボン酸は添加された塩基と塩を形成し、
これは水性相中にざんぞくするので、形成されたカルボ
ン酸を加水分解平衡から除き、一方で有機溶液を、その
低い混和性のために水性相から分離し、この処理の間水
で飽和する。次いで水- 飽和された有機溶液を再びヒド
ロラーゼ上に通す。この処理を、所望の変換度合が達成
されるまで続ける。次いで反応を停止し、反応精製物を
単離し、場合により精製する。
ばアルカリ金属又はアルカリ土類金属水酸化物、炭酸塩
及び炭酸水素塩又はＮＨ4 ＯＨ等であり、アルカリ金属
水酸化物、たとえば水酸化カリウム又は水酸化カリウム
を使用するのが好ましい。塩基を水性溶液として、好ま
しくはｐＨ- 測定システム、たとえば水素電極と好まし
くは自動化された形で組合せて加える。塩基の添加の結
果として、カルボン酸は添加された塩基と塩を形成し、
これは水性相中にざんぞくするので、形成されたカルボ
ン酸を加水分解平衡から除き、一方で有機溶液を、その
低い混和性のために水性相から分離し、この処理の間水
で飽和する。次いで水- 飽和された有機溶液を再びヒド
ロラーゼ上に通す。この処理を、所望の変換度合が達成
されるまで続ける。次いで反応を停止し、反応精製物を
単離し、場合により精製する。
【００２４】上記塩として単離された処理の間に形成さ
れたカルボン酸が、常法で、酸性化及び必要ならば抽出
によって得られ、蒸留、クロマトグラフィー又は再結晶
によって精製することができる。
れたカルボン酸が、常法で、酸性化及び必要ならば抽出
によって得られ、蒸留、クロマトグラフィー又は再結晶
によって精製することができる。
【００２５】処理の間形成されたカルボン酸が所望精製
物でなく、第二加水分解生成物、すなわち、たとえばア
ルコール、アミン又はチオールである場合、あるいはカ
ルボン酸及びアルコール、アミン又はチオールともに所
望の生成物である場合、あるいは塩基を有機反応溶液を
水で飽和する間添加しない場合、所望生成物が、常法で
反応の停止後、たとえば抽出、蒸留、結晶化及び再結晶
又はクロマトグラフィーによって有機反応溶液から得ら
れる及び（又は）精製する。
物でなく、第二加水分解生成物、すなわち、たとえばア
ルコール、アミン又はチオールである場合、あるいはカ
ルボン酸及びアルコール、アミン又はチオールともに所
望の生成物である場合、あるいは塩基を有機反応溶液を
水で飽和する間添加しない場合、所望生成物が、常法で
反応の停止後、たとえば抽出、蒸留、結晶化及び再結晶
又はクロマトグラフィーによって有機反応溶液から得ら
れる及び（又は）精製する。
【００２６】クロロホルムをカルボン酸誘導体用有機溶
剤として使用しない場合、酵素活性が、反応サイクルの
後及び次の反応サイクルの前にヒドロラーゼをクロロホ
ルムで洗滌して著しく上昇することは予期されなかった
ことである。リパーゼの比活性はリパーゼｇあたり１３
８〜３３９ｍｍｏｌ／ｈのいくつかの反応サイクルの間
極めて上昇する。その後リパーゼの比活性は、ほぼ一定
に保たれる。
剤として使用しない場合、酵素活性が、反応サイクルの
後及び次の反応サイクルの前にヒドロラーゼをクロロホ
ルムで洗滌して著しく上昇することは予期されなかった
ことである。リパーゼの比活性はリパーゼｇあたり１３
８〜３３９ｍｍｏｌ／ｈのいくつかの反応サイクルの間
極めて上昇する。その後リパーゼの比活性は、ほぼ一定
に保たれる。
【００２７】処理を、ヒドロラーゼが最も高い活性を示
す温度で実施するのが好都合である。この場合温度は、
一般に０〜４０℃、好ましくは２０〜３０℃、特に好ま
しくは室温で、特別な場合さらに高く、しかしすべての
場合溶剤の沸点以下で、使用されるヒドロラーゼの不活
性化温度以下である。
す温度で実施するのが好都合である。この場合温度は、
一般に０〜４０℃、好ましくは２０〜３０℃、特に好ま
しくは室温で、特別な場合さらに高く、しかしすべての
場合溶剤の沸点以下で、使用されるヒドロラーゼの不活
性化温度以下である。
【００２８】処理を連続的に又は非連続的に実施するこ
とができ、好ましくは連続的に実施することができる。
キラル又はプロキラルカルボン酸誘導体の場合、ヒドロ
ラーゼとの反応で形成される、得られた精製物中の鏡像
体の鏡像体過剰が、ヒドロラーゼの低い立体特異性のた
めに十分である場合、１つの反応サイクル後に得られる
生成物をカルボン酸誘導体に再び変換し、本発明による
方法で使用することができる。生成物の所望鏡像体の更
なる濃縮が達成される。時々、より高い鏡像体純度を得
るために、小さい変換率の後でさえも処理を停止するの
も好都合である。
とができ、好ましくは連続的に実施することができる。
キラル又はプロキラルカルボン酸誘導体の場合、ヒドロ
ラーゼとの反応で形成される、得られた精製物中の鏡像
体の鏡像体過剰が、ヒドロラーゼの低い立体特異性のた
めに十分である場合、１つの反応サイクル後に得られる
生成物をカルボン酸誘導体に再び変換し、本発明による
方法で使用することができる。生成物の所望鏡像体の更
なる濃縮が達成される。時々、より高い鏡像体純度を得
るために、小さい変換率の後でさえも処理を停止するの
も好都合である。
【００２９】処理の特に好ましい実施態様で、光学的に
活性なカルボン酸誘導体、特に光学的に活性なカルボン
酸エステル──これはキラル中心を酸部分中に有し、所
望の生成物は主に光学的に活性なカルボン酸の鏡像体で
ある──をイソプロピルエーテル又はトルエン中に可能
な限り濃厚に溶解し、水性相が入っている保存容器中に
水性相と撹拌しながら混合して、水で飽和する。ポンプ
を用いて、水- 飽和された有機相を保存容器から、リパ
ーゼ上に通す。このリパーゼは、保存容器の外側の不活
性担体上に吸着され、カラム中に装填されているのが好
ましい。よってリパーゼは保存容器の水性相と接触しな
い。この間、加水分解が酵素- 特異性範囲で行われる。
次いで有機反応溶液を、保存容器の水性相に戻す。形成
されたカルボン酸の導入によって下降した水性相のｐＨ
を、水性水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム溶液の添
加によってほぼｐＨ７で保つ。結果としてカルボン酸は
塩を形成し、水性溶液中に残る。遊離アルコール及び未
反応出発化合物は、有機反応溶液中に溶解残存する。こ
の溶液は、その低い水−混和性のために、保存容器の水
性相から分離され、再びヒドロラーゼ上を通り、次いで
所望の変換度合が得られるまで、循環処理中再び水性相
上を通る。次いで反応を停止し、水性相を有機相から分
離する。形成されたカルボン酸を単離するために、水性
相を常法で酸性化し、遊離されたカルボン酸を抽出す
る。再結晶、蒸留又はクロマトグラフィーによる精製を
加える。これは所望の鏡像体の更なる濃縮を得ることが
できるのに有利である。
活性なカルボン酸誘導体、特に光学的に活性なカルボン
酸エステル──これはキラル中心を酸部分中に有し、所
望の生成物は主に光学的に活性なカルボン酸の鏡像体で
ある──をイソプロピルエーテル又はトルエン中に可能
な限り濃厚に溶解し、水性相が入っている保存容器中に
水性相と撹拌しながら混合して、水で飽和する。ポンプ
を用いて、水- 飽和された有機相を保存容器から、リパ
ーゼ上に通す。このリパーゼは、保存容器の外側の不活
性担体上に吸着され、カラム中に装填されているのが好
ましい。よってリパーゼは保存容器の水性相と接触しな
い。この間、加水分解が酵素- 特異性範囲で行われる。
次いで有機反応溶液を、保存容器の水性相に戻す。形成
されたカルボン酸の導入によって下降した水性相のｐＨ
を、水性水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム溶液の添
加によってほぼｐＨ７で保つ。結果としてカルボン酸は
塩を形成し、水性溶液中に残る。遊離アルコール及び未
反応出発化合物は、有機反応溶液中に溶解残存する。こ
の溶液は、その低い水−混和性のために、保存容器の水
性相から分離され、再びヒドロラーゼ上を通り、次いで
所望の変換度合が得られるまで、循環処理中再び水性相
上を通る。次いで反応を停止し、水性相を有機相から分
離する。形成されたカルボン酸を単離するために、水性
相を常法で酸性化し、遊離されたカルボン酸を抽出す
る。再結晶、蒸留又はクロマトグラフィーによる精製を
加える。これは所望の鏡像体の更なる濃縮を得ることが
できるのに有利である。
【００３０】本発明による方法の特に好ましい実施態様
で、蒸留水を保存容器中に入れ、ジイソプロピルエーテ
ル中にカルボン酸エステル──これは酸部分の２- 位
が、好ましくはハロゲンによって置換されている──を
有する鏡像体混合物の溶液と撹拌しながら混合し、沈降
させる。次いで有機相を保存容器の外側のカラム中に装
填されたセオライト上に吸着されて存在するリパーゼ上
に連続的に戻し、次いで保存容器の水性相中に戻す。水
性相のｐＨを、６〜９の範囲に水性アルカリ金属水酸化
物の添加によって一定に保つ。水性相をこの間に保存容
器から除き、新たな水性相の添加によって代える。有機
相──これは主にキラルカルボン酸エステルの鏡像体を
含有し、酵素と形成されるアルコールによって使用され
ない──を所望の変換度合の達成後に保存容器から除く
こともでき、新たな有機相によって代える。水性溶液か
ら光学的に活性なカルボン酸の純粋な又は濃縮された鏡
像体の回収は、酸性化及び水性溶液をカルボン酸用有機
溶剤で抽出して行われる。
で、蒸留水を保存容器中に入れ、ジイソプロピルエーテ
ル中にカルボン酸エステル──これは酸部分の２- 位
が、好ましくはハロゲンによって置換されている──を
有する鏡像体混合物の溶液と撹拌しながら混合し、沈降
させる。次いで有機相を保存容器の外側のカラム中に装
填されたセオライト上に吸着されて存在するリパーゼ上
に連続的に戻し、次いで保存容器の水性相中に戻す。水
性相のｐＨを、６〜９の範囲に水性アルカリ金属水酸化
物の添加によって一定に保つ。水性相をこの間に保存容
器から除き、新たな水性相の添加によって代える。有機
相──これは主にキラルカルボン酸エステルの鏡像体を
含有し、酵素と形成されるアルコールによって使用され
ない──を所望の変換度合の達成後に保存容器から除く
こともでき、新たな有機相によって代える。水性溶液か
ら光学的に活性なカルボン酸の純粋な又は濃縮された鏡
像体の回収は、酸性化及び水性溶液をカルボン酸用有機
溶剤で抽出して行われる。
【００３１】本発明による方法によって、カルボン酸誘
導体を簡単な方法で有機溶剤中で酵素加水分解し、所望
の生成物を簡単な方法で単離する。この際酵素を非- 固
定形で導入することができ、特にキラル出発化合物の鏡
像体混合物を光学活性の高度に濃縮された鏡像体に、必
要ならばいくつかの反応サイクルを用いて変換すること
ができ、溶剤を再三使用し、実際に酵素の損失又は酵素
活性の損失は長期間発生せず環境汚染廃棄物は形成され
ず、再び使用されるか棄てられる。かくしてこの方法
は、技術の強化を表わしている。
導体を簡単な方法で有機溶剤中で酵素加水分解し、所望
の生成物を簡単な方法で単離する。この際酵素を非- 固
定形で導入することができ、特にキラル出発化合物の鏡
像体混合物を光学活性の高度に濃縮された鏡像体に、必
要ならばいくつかの反応サイクルを用いて変換すること
ができ、溶剤を再三使用し、実際に酵素の損失又は酵素
活性の損失は長期間発生せず環境汚染廃棄物は形成され
ず、再び使用されるか棄てられる。かくしてこの方法
は、技術の強化を表わしている。
【００３２】
【実施例】以下に本発明の例を示す。 〔例１〕２- エチルヘキシルＳ- ２- ブロモプロピオナ
ート５．６１ｇ及び２- エチル- ヘキシルＲ- ２- ブロ
モプロピオナート１４．４４ｇの鏡像体混合物２０．０
５ｇ──これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体４４％に相当
し、２- ブロモプロピオン酸と２- エチルヘキサノール
との対応する鏡像体混合物のエステル化によって製造さ
れる──を、ジイソプロピルエーテルを用いて溶解し、
溶液１７０ｍｌが得られる。この溶液を、エタノール
５．５ｍｌと混合された水１４０ｍｌ中に入れ、撹拌
し、容器中に入れる。この工程の間、２相が生じる。次
いで水- 飽和された有機相をカンジダシリンドラセア(C
andida cylindracea) リパーゼ１．５ｇ上にポンプ送入
する。このリパーゼを、容器の外側のカラムに装填され
たセライト１２ｇとおおよそのポンプ速度１００ｍｌ／
分で混合して導入する。カラムの通過後、有機反応相
を、容器の水性相中に通す。水性相のｐＨを、水性２Ｍ
水酸化ナトリウムの添加によって５〜８で自動的に保
つ。この処理によって、反応中に生じる２- ブロモ- プ
ロピオン酸のナトリウム塩を形成し、これは水性溶液中
に残存する。一方有機反応溶液を水で飽和し、容器の水
性相から分離する。水で再度飽和された有機溶液を、再
び連続的にリパーゼ上にポンプ送入し、次いで水性相を
通す。０．５時間後、２．０５ｍｌ、１．５時間後５．
８５ｍｌの２Ｍ水性水酸化ナトリウムをこの処理で消費
し、変換度合１５％を達成する。次いで水性溶液を硫酸
で酸性化し、この処理によって遊離された２- ブロモプ
ロピオン酸をジイソプロピルエーテルを用いて抽出し、
抽出剤の蒸発によって単離する。この方法で、旋光性
（α)20 D ２２．５o を有するＲ- 及びＳ- ２- プロモ
プロピオン酸の鏡像体混合物１．６５ｇが得られ、これ
は鏡像体過剰のＲ- 鏡像体９０．４％に相当し、すなわ
ち０．０８ｇのＳ-及び１．５７ｇのＲ- ２- ブロモ-
プロピオン酸を形成する。リパーゼの比活性は、リパー
ゼｇあたり５．２ｍｍｏｌ／ｈである。
ート５．６１ｇ及び２- エチル- ヘキシルＲ- ２- ブロ
モプロピオナート１４．４４ｇの鏡像体混合物２０．０
５ｇ──これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体４４％に相当
し、２- ブロモプロピオン酸と２- エチルヘキサノール
との対応する鏡像体混合物のエステル化によって製造さ
れる──を、ジイソプロピルエーテルを用いて溶解し、
溶液１７０ｍｌが得られる。この溶液を、エタノール
５．５ｍｌと混合された水１４０ｍｌ中に入れ、撹拌
し、容器中に入れる。この工程の間、２相が生じる。次
いで水- 飽和された有機相をカンジダシリンドラセア(C
andida cylindracea) リパーゼ１．５ｇ上にポンプ送入
する。このリパーゼを、容器の外側のカラムに装填され
たセライト１２ｇとおおよそのポンプ速度１００ｍｌ／
分で混合して導入する。カラムの通過後、有機反応相
を、容器の水性相中に通す。水性相のｐＨを、水性２Ｍ
水酸化ナトリウムの添加によって５〜８で自動的に保
つ。この処理によって、反応中に生じる２- ブロモ- プ
ロピオン酸のナトリウム塩を形成し、これは水性溶液中
に残存する。一方有機反応溶液を水で飽和し、容器の水
性相から分離する。水で再度飽和された有機溶液を、再
び連続的にリパーゼ上にポンプ送入し、次いで水性相を
通す。０．５時間後、２．０５ｍｌ、１．５時間後５．
８５ｍｌの２Ｍ水性水酸化ナトリウムをこの処理で消費
し、変換度合１５％を達成する。次いで水性溶液を硫酸
で酸性化し、この処理によって遊離された２- ブロモプ
ロピオン酸をジイソプロピルエーテルを用いて抽出し、
抽出剤の蒸発によって単離する。この方法で、旋光性
（α)20 D ２２．５o を有するＲ- 及びＳ- ２- プロモ
プロピオン酸の鏡像体混合物１．６５ｇが得られ、これ
は鏡像体過剰のＲ- 鏡像体９０．４％に相当し、すなわ
ち０．０８ｇのＳ-及び１．５７ｇのＲ- ２- ブロモ-
プロピオン酸を形成する。リパーゼの比活性は、リパー
ゼｇあたり５．２ｍｍｏｌ／ｈである。
【００３３】〔例２〜１０〕例２〜７を例１に示したの
と同一の方法で実施するが、例１の同一カンジダシリン
ドラセアリパーゼを使用し、反応時間を約４時間に延ば
し、反応を変換度合約４４％が達成されて停止する。カ
ンジダシリンドラセアリパーゼを含有するカラムを、夫
々の反応サイクルの後ジイソプロピルエーテルで洗滌す
る。
と同一の方法で実施するが、例１の同一カンジダシリン
ドラセアリパーゼを使用し、反応時間を約４時間に延ば
し、反応を変換度合約４４％が達成されて停止する。カ
ンジダシリンドラセアリパーゼを含有するカラムを、夫
々の反応サイクルの後ジイソプロピルエーテルで洗滌す
る。
【００３４】例８〜１０を、例１に示したのと同一の方
法で実施するが、２-エチルヘキシル２- ブロモプロピ
オナートの、ジイソプロピルエーテルの、水の及びエタ
ノールの６倍量を用い、例１〜７と同一のカンジダシリ
ンドラセアリパーゼを使用する。カンジダシリンドラセ
アリパーゼを含有するカラムを、夫々の反応サイクル後
ジイソプロピルエーテルで洗滌する。
法で実施するが、２-エチルヘキシル２- ブロモプロピ
オナートの、ジイソプロピルエーテルの、水の及びエタ
ノールの６倍量を用い、例１〜７と同一のカンジダシリ
ンドラセアリパーゼを使用する。カンジダシリンドラセ
アリパーゼを含有するカラムを、夫々の反応サイクル後
ジイソプロピルエーテルで洗滌する。
【００３５】この場合、表１及び２中にまとめられた結
果が得られる。表 １ 例 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ｈ 下記時間後の変換率 0.5 7.3 6.3 7.1 5.8 3.3 2.2 1.8 1.0 13.8 14.6 1.5 19.6 20.4 20.5 2.0 24.9 26.2 29.1 2.5 29.9 29.9 32.0 30.4 34.9 27.5 7.3 5.3 3.0 34.7 39.4 3.5 38.9 4.0 42.6 46.6 4.2 43.9 43.9 44.2 43.9 4.5 43.9 18.0 35.7 19.0 37.7 20.5 39.4 24.13 44.1 24.25 44.1 44.1表 ２ 例 Ｇ（ｇ） α（o ） ｅｅ（％） 比活性 ２ ４．６６ ＋２７．１ ９６．４ ５．３ ３ ４．６７ ＋２６．２ ９３．２ ５．３ ４ ４．９１ ＋２６．４ ９４．０ ５．９ ５ ４．６６ ＋２８．２ １００．４ ５．３ ６ ４．６８ ＋２５．７ ９１．５ ５．４ ７ ４．６０ ＋２８．６ １０１．３ ４．９ ８ ２８．０ ＋２７．３ ９７．２ ５．５ ９ ２７．７ ＋２７．７ ９８．６ ５．５ １０ ２８．０３ ＋２８．５ １０１．０ ５．５ 例１のカンジダシリンダラセアを、活性を失うことなく
９５時間全部使用する。 表中 ｈ： 反応時間（時間）を示す。 変換率： ２- エチルヘキシル -２- ブロモプロピ
オナートの鏡像体混合物の反応割合を示す。 Ｇ（ｇ）： グラムあたりの収量を示す。 α（o ) ： 旋光性（α)20 D を示す。 ｅｅ（％）： Ｓ- ２- ブロモプロピオン酸に比して鏡
像体過剰の得られたＲ-２- ブロモプロピオン酸を示
す。 Ａｃｔ： リパーゼｇあたりｍｍｏｌ／ｈでカンジ
ダシリンドラセアリパーゼの比活性を示す。
果が得られる。表 １ 例 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ｈ 下記時間後の変換率 0.5 7.3 6.3 7.1 5.8 3.3 2.2 1.8 1.0 13.8 14.6 1.5 19.6 20.4 20.5 2.0 24.9 26.2 29.1 2.5 29.9 29.9 32.0 30.4 34.9 27.5 7.3 5.3 3.0 34.7 39.4 3.5 38.9 4.0 42.6 46.6 4.2 43.9 43.9 44.2 43.9 4.5 43.9 18.0 35.7 19.0 37.7 20.5 39.4 24.13 44.1 24.25 44.1 44.1表 ２ 例 Ｇ（ｇ） α（o ） ｅｅ（％） 比活性 ２ ４．６６ ＋２７．１ ９６．４ ５．３ ３ ４．６７ ＋２６．２ ９３．２ ５．３ ４ ４．９１ ＋２６．４ ９４．０ ５．９ ５ ４．６６ ＋２８．２ １００．４ ５．３ ６ ４．６８ ＋２５．７ ９１．５ ５．４ ７ ４．６０ ＋２８．６ １０１．３ ４．９ ８ ２８．０ ＋２７．３ ９７．２ ５．５ ９ ２７．７ ＋２７．７ ９８．６ ５．５ １０ ２８．０３ ＋２８．５ １０１．０ ５．５ 例１のカンジダシリンダラセアを、活性を失うことなく
９５時間全部使用する。 表中 ｈ： 反応時間（時間）を示す。 変換率： ２- エチルヘキシル -２- ブロモプロピ
オナートの鏡像体混合物の反応割合を示す。 Ｇ（ｇ）： グラムあたりの収量を示す。 α（o ) ： 旋光性（α)20 D を示す。 ｅｅ（％）： Ｓ- ２- ブロモプロピオン酸に比して鏡
像体過剰の得られたＲ-２- ブロモプロピオン酸を示
す。 Ａｃｔ： リパーゼｇあたりｍｍｏｌ／ｈでカンジ
ダシリンドラセアリパーゼの比活性を示す。
【００３６】〔例１１〕２- エチルヘキシルＲ- 及びＳ
- ２- ブロモプロピオナートのラセミ混合物２０ｇを、
ジイソプロピルエーテル１５０ｍｌ中に溶解する。この
溶液を、水７０ｍｌが入っている容器に入れ撹拌する。
２つの相が処理の間に生じる。次いで有機水- 飽和され
た相を、セオライト２．８ｇと混合されたカンジダシリ
ドラセアリパーゼ５０ｍｇ上にポンプ送入し、容器の外
側のカラムにおおよそのポンプ速度１００ｍｌ／分で導
入する。カラムを通過後、有機反応溶液を例１に記載し
た様に処理する。
- ２- ブロモプロピオナートのラセミ混合物２０ｇを、
ジイソプロピルエーテル１５０ｍｌ中に溶解する。この
溶液を、水７０ｍｌが入っている容器に入れ撹拌する。
２つの相が処理の間に生じる。次いで有機水- 飽和され
た相を、セオライト２．８ｇと混合されたカンジダシリ
ドラセアリパーゼ５０ｍｇ上にポンプ送入し、容器の外
側のカラムにおおよそのポンプ速度１００ｍｌ／分で導
入する。カラムを通過後、有機反応溶液を例１に記載し
た様に処理する。
【００３７】６．２２時間後、変換度合２９．１７％が
得られ、反応を停止する。この方法で旋光性（α)20 D
＋２０．６o を有するＲ- 及びＳ- ２- ブロモプロピオ
ン酸の鏡像体混合物４．３ｇが得られ、これは鏡像体過
剰のＲ- 鏡像体７３．３％に相当する。
得られ、反応を停止する。この方法で旋光性（α)20 D
＋２０．６o を有するＲ- 及びＳ- ２- ブロモプロピオ
ン酸の鏡像体混合物４．３ｇが得られ、これは鏡像体過
剰のＲ- 鏡像体７３．３％に相当する。
【００３８】リパーゼの比活性は、リパーゼｇあたり７
０．７８ｍｍｏｌ／ｈである。 〔例１２−１７〕例を、例１１に記載した様に、同一の
出発量、例１１と同一のリパーゼを含有するカラムを用
いて実施し、そのカラムは夫々の新たな通過の前にクロ
ロホルムで洗滌する。この場合、表３中に挙げた結果が
得られる。表 ３ 例 変換率 下記時間後 α（o ） ｅｅ（％） 比活性 （時間） １２ ２９．８ ３．２５ ＋２１．６ ７６．９ １３８．５ １３ ３０ １．７５ ＋２２．１ ７８．６ ２５８．３ １４ ２９．８ ２．２３ ＋２１．３ ７５．８ ２３６．８ １５ ３０ １．５８ ＋２２．７ ８０．８ ２８５．５ １６ ３０ １．３３ ＋２０．０ ７１．２ ３３９．０ １７ ３０ １．８０ ＋１７．２ ６１．２ ２５１．１ 〔例１８〕２- エチルヘキシルＲ- 及びＳ- ２- ブロモ
プロピオナートのラセミ混合物４５．１ｇ及びカンジダ
シリンドラセアリパーゼ５０mgを用いて例１１に記載し
た様に実施する。この場合変換度合４５％が、１９．２
５時間後に得られる。鏡像体過剰のＲ- 鏡像体７６．５
％に相当する、旋光性（α)20 D ＋２１．５o を有する
Ｒ- 及びＳ- ２- ブロモプロピオン酸の鏡像体混合物
９．８８ｇが得られる。
０．７８ｍｍｏｌ／ｈである。 〔例１２−１７〕例を、例１１に記載した様に、同一の
出発量、例１１と同一のリパーゼを含有するカラムを用
いて実施し、そのカラムは夫々の新たな通過の前にクロ
ロホルムで洗滌する。この場合、表３中に挙げた結果が
得られる。表 ３ 例 変換率 下記時間後 α（o ） ｅｅ（％） 比活性 （時間） １２ ２９．８ ３．２５ ＋２１．６ ７６．９ １３８．５ １３ ３０ １．７５ ＋２２．１ ７８．６ ２５８．３ １４ ２９．８ ２．２３ ＋２１．３ ７５．８ ２３６．８ １５ ３０ １．５８ ＋２２．７ ８０．８ ２８５．５ １６ ３０ １．３３ ＋２０．０ ７１．２ ３３９．０ １７ ３０ １．８０ ＋１７．２ ６１．２ ２５１．１ 〔例１８〕２- エチルヘキシルＲ- 及びＳ- ２- ブロモ
プロピオナートのラセミ混合物４５．１ｇ及びカンジダ
シリンドラセアリパーゼ５０mgを用いて例１１に記載し
た様に実施する。この場合変換度合４５％が、１９．２
５時間後に得られる。鏡像体過剰のＲ- 鏡像体７６．５
％に相当する、旋光性（α)20 D ＋２１．５o を有する
Ｒ- 及びＳ- ２- ブロモプロピオン酸の鏡像体混合物
９．８８ｇが得られる。
【００３９】〔例１９〕例１８中に得られた２- ブロモ
プロピオン酸を、化学的に２- エチルヘキサノールでエ
ステル化する。エステルを、例１８に記載されたリパー
ゼとそこに記載された様に反応させる。この場合、変換
度合７２．３％が、１５．２５時間後に得られる。この
方法で、鏡像体過剰のＲ-２- ブロモプロピオン酸９４
％に相当する、旋光性（α)20 D ＋２６．４o を有する
Ｒ- 及びＳ- ２- ブロモプロピオン酸の鏡像体混合物
６．６２ｇが得られる。
プロピオン酸を、化学的に２- エチルヘキサノールでエ
ステル化する。エステルを、例１８に記載されたリパー
ゼとそこに記載された様に反応させる。この場合、変換
度合７２．３％が、１５．２５時間後に得られる。この
方法で、鏡像体過剰のＲ-２- ブロモプロピオン酸９４
％に相当する、旋光性（α)20 D ＋２６．４o を有する
Ｒ- 及びＳ- ２- ブロモプロピオン酸の鏡像体混合物
６．６２ｇが得られる。
【００４０】〔例２０〜２５〕例２０−２１、２２−２
３及び２４−２５を、例１８−１９の様に夫々の場合出
発物の同量を用い、及び夫々例１８の同一カンジダシリ
ンドラセアリパーゼを用いて実施する。結果を表４中に
まとめて示す。表 ４ 例 反応（％） 下記時間後（ｈ） 収量（ｇ） α（o ) ｅｅ（％） ２０ ５３．６ １７ １２．６ ＋１８．７ ６６．５ ２１ ６３．７ ２２ ８．０ ＋２６．２ ９３．２ ２２ ４２．６ ２２ １１．１ ＋１７．８ ６３．３ ２３ ６２．９ ２６．７５ ６．７ ＋２６．２ ９３．２ ２４ ４３．２ ２５．５ １１．５ ＋１５．９ ５６．６ ２５ ５７．２ １９．５ ６．５ ＋２７．２ ９６．８ 〔例２６〕ブチル -Ｒ- 及びＳ- ２- クロロプロピオナ
ートのラセミ混合物４１ｇを、ジイソプロピルエーテル
３６０ｍｌ中に溶解し、容器中に入っている水２００ｍ
ｌと撹拌しながら容器中に入れる。この処理の間２つの
相が生じる。有機の上相をゲオトリチムカンジズム(Geo
trichum candidum) リパーゼ１５ｇ上にポンプ速度１０
０ｍｌ／分で送入する。このリパーゼは、容器の外側に
設置されたカラム中でセオライト６０ｇと混合されてい
る。次いで有機反応溶液を２Ｍ水性水酸化ナトリウムの
添加で自動化されたｐＨ測定装置によってｐＨ６〜８で
保たれた容器の水性相中に戻す。この処理によって、反
応で生じる２- クロロプロピオン酸のナトリウム塩が生
じ、それは水性相中に残存する。有機反応溶液を水性相
から分離し、連続的にリパーゼ上にポンプ送入し、次い
で再び水性相に通す。
３及び２４−２５を、例１８−１９の様に夫々の場合出
発物の同量を用い、及び夫々例１８の同一カンジダシリ
ンドラセアリパーゼを用いて実施する。結果を表４中に
まとめて示す。表 ４ 例 反応（％） 下記時間後（ｈ） 収量（ｇ） α（o ) ｅｅ（％） ２０ ５３．６ １７ １２．６ ＋１８．７ ６６．５ ２１ ６３．７ ２２ ８．０ ＋２６．２ ９３．２ ２２ ４２．６ ２２ １１．１ ＋１７．８ ６３．３ ２３ ６２．９ ２６．７５ ６．７ ＋２６．２ ９３．２ ２４ ４３．２ ２５．５ １１．５ ＋１５．９ ５６．６ ２５ ５７．２ １９．５ ６．５ ＋２７．２ ９６．８ 〔例２６〕ブチル -Ｒ- 及びＳ- ２- クロロプロピオナ
ートのラセミ混合物４１ｇを、ジイソプロピルエーテル
３６０ｍｌ中に溶解し、容器中に入っている水２００ｍ
ｌと撹拌しながら容器中に入れる。この処理の間２つの
相が生じる。有機の上相をゲオトリチムカンジズム(Geo
trichum candidum) リパーゼ１５ｇ上にポンプ速度１０
０ｍｌ／分で送入する。このリパーゼは、容器の外側に
設置されたカラム中でセオライト６０ｇと混合されてい
る。次いで有機反応溶液を２Ｍ水性水酸化ナトリウムの
添加で自動化されたｐＨ測定装置によってｐＨ６〜８で
保たれた容器の水性相中に戻す。この処理によって、反
応で生じる２- クロロプロピオン酸のナトリウム塩が生
じ、それは水性相中に残存する。有機反応溶液を水性相
から分離し、連続的にリパーゼ上にポンプ送入し、次い
で再び水性相に通す。
【００４１】４４．５時間後、変換度合２０．６％が得
られ、反応を停止する。水性溶液を硫酸の添加によって
酸性化し、クロロホルムで抽出し、有機溶剤を硫酸ナト
リウムを介して乾燥し、蒸発する。
られ、反応を停止する。水性溶液を硫酸の添加によって
酸性化し、クロロホルムで抽出し、有機溶剤を硫酸ナト
リウムを介して乾燥し、蒸発する。
【００４２】この方法で旋光性（α)20 D −１２oを有
するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体混合
物５．３ｇが得られ、これは鏡像体過剰のＳ- 鏡像体７
３．２％に相当する。
するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体混合
物５．３ｇが得られ、これは鏡像体過剰のＳ- 鏡像体７
３．２％に相当する。
【００４３】〔例２７〕２- エチルヘキシルＲ- 及びＳ
- ２- クロロプロピオナートのラセミ混合物５５．５ｇ
を、ジイソプロピルエーテル３６０ｍｌ中に溶解し、水
２００ｍｌが入れられている容器中に撹拌しながら加え
る。２つの相がこの処理の間に生じる。有機の、水- 飽
和された上相を、カンジダシリンドラセアリパーゼ１ｇ
上の通す。このリパーゼは、容器の外側でセオライト１
０ｇと混合してカラム中に装填されて存在する。次いで
例１中に記載した様な処理を実施する。変換度合３２％
を達成した後、反応を停止する。この方法で、旋光性
（α)20 D ＋６．９o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロ
プロピオン酸の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過
剰のＲ- 鏡像体４２．１％に相当する。リパーゼの比活
性は、リパーゼｇあたり１１．５８ｍｍｏｌ／ｈであ
る。
- ２- クロロプロピオナートのラセミ混合物５５．５ｇ
を、ジイソプロピルエーテル３６０ｍｌ中に溶解し、水
２００ｍｌが入れられている容器中に撹拌しながら加え
る。２つの相がこの処理の間に生じる。有機の、水- 飽
和された上相を、カンジダシリンドラセアリパーゼ１ｇ
上の通す。このリパーゼは、容器の外側でセオライト１
０ｇと混合してカラム中に装填されて存在する。次いで
例１中に記載した様な処理を実施する。変換度合３２％
を達成した後、反応を停止する。この方法で、旋光性
（α)20 D ＋６．９o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロ
プロピオン酸の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過
剰のＲ- 鏡像体４２．１％に相当する。リパーゼの比活
性は、リパーゼｇあたり１１．５８ｍｍｏｌ／ｈであ
る。
【００４４】〔例２８〕２- エチルヘキシルＲ- 及びＳ
- ２- クロロプロピオナートのラセミ混合物５５．５ｇ
を、ジイソプロピルエーテル３６０ｍｌ中に溶解し、水
２００ｍｌが入れられた容器中に撹拌しながら加える。
２つの相が、この処理の間に生じる。有機の、水- 飽和
された上相を、ポンプ速度１００ｍｌ分で、カンジダシ
リンドラセアリパーゼ２ｇを含有するカラム上にポンプ
送入する。このリパーゼは、ジイソプロピルエーテル中
で５０％グルタルアルデヒド２ｍｌと撹拌によって橋か
け結合され、セオライト１３ｇと混合されている。次い
で例１に記載した様な処理を実施する。変換度合３２％
が達成された後、反応を停止する。この方法で、旋光性
（α)20 D ＋７．３o を有するＲ- 及びＳ- ２-クロロ
プロピオン酸の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過
剰のＲ- 鏡像体４４．５％に相当する。リパーゼの比活
性は、リパーゼｇあたり４．８ｍｍｏｌ／ｈである。
- ２- クロロプロピオナートのラセミ混合物５５．５ｇ
を、ジイソプロピルエーテル３６０ｍｌ中に溶解し、水
２００ｍｌが入れられた容器中に撹拌しながら加える。
２つの相が、この処理の間に生じる。有機の、水- 飽和
された上相を、ポンプ速度１００ｍｌ分で、カンジダシ
リンドラセアリパーゼ２ｇを含有するカラム上にポンプ
送入する。このリパーゼは、ジイソプロピルエーテル中
で５０％グルタルアルデヒド２ｍｌと撹拌によって橋か
け結合され、セオライト１３ｇと混合されている。次い
で例１に記載した様な処理を実施する。変換度合３２％
が達成された後、反応を停止する。この方法で、旋光性
（α)20 D ＋７．３o を有するＲ- 及びＳ- ２-クロロ
プロピオン酸の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過
剰のＲ- 鏡像体４４．５％に相当する。リパーゼの比活
性は、リパーゼｇあたり４．８ｍｍｏｌ／ｈである。
【００４５】〔例２９〕２- エチルヘキシル２- クロロ
プロピオナートのラセミ混合物５５．２ｇ、ジイソプロ
ピルエーテルの代りにヘキサン４００ｍｌ及びセオライ
ト２１ｇと混合されたカンジダシリンドラセアリパーゼ
３ｇを用いて、例２６に記載した方法で変換度合７８．
６％が、１９時間後に得られる。この方法で、旋光性
（α)20 D ＋２．５o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロ
プロピオン酸の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過
剰のＲ- ２- クロロプロピオン酸１５．２％に相当す
る。未反応エステル中の鏡像体過剰のＳ- 鏡像体は５６
％である。
プロピオナートのラセミ混合物５５．２ｇ、ジイソプロ
ピルエーテルの代りにヘキサン４００ｍｌ及びセオライ
ト２１ｇと混合されたカンジダシリンドラセアリパーゼ
３ｇを用いて、例２６に記載した方法で変換度合７８．
６％が、１９時間後に得られる。この方法で、旋光性
（α)20 D ＋２．５o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロ
プロピオン酸の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過
剰のＲ- ２- クロロプロピオン酸１５．２％に相当す
る。未反応エステル中の鏡像体過剰のＳ- 鏡像体は５６
％である。
【００４６】〔例３０〕２- エチルヘキシル２- クロロ
プロピオナートのラセミ混合物２９４．１ｇ、純粋なジ
イソプロピルエーテルの代りにジイソプロピルエーテル
１００ｍｌとアセトン２０ｍｌ及びセオライト５０ｇと
混合されたカンジダシリンドラセアリパーゼ１０ｇを用
いて例２６に記載した方法で実施して、変換度合５７％
を生じる。この方法で、旋光性（α)20 D ＋６．１o を
有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体混
合物が得られこれは鏡像体過剰のＲ- クロロプロピオン
酸３７％に相当する。
プロピオナートのラセミ混合物２９４．１ｇ、純粋なジ
イソプロピルエーテルの代りにジイソプロピルエーテル
１００ｍｌとアセトン２０ｍｌ及びセオライト５０ｇと
混合されたカンジダシリンドラセアリパーゼ１０ｇを用
いて例２６に記載した方法で実施して、変換度合５７％
を生じる。この方法で、旋光性（α)20 D ＋６．１o を
有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体混
合物が得られこれは鏡像体過剰のＲ- クロロプロピオン
酸３７％に相当する。
【００４７】〔例３１〕ジイソプロピルエーテル４００
ｍｌ中に溶解されたフエニルエチルＲ- 及びＳ-２- ク
ロロプロピオナートのラセミ混合物５７．２ｇ及びセオ
ライト１５ｇと混合されたカンジダシリンドラセアリパ
ーゼ３ｇを用いて例２６に記載した方法で１．３０時間
後、変換度合６０％が得られる。この方法で、旋光性
（α)20 D ＋６．１o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロ
プロピオン酸の鏡像体混合物が得られこれは鏡像体過剰
のＲ- 鏡像体３７％に相当する。
ｍｌ中に溶解されたフエニルエチルＲ- 及びＳ-２- ク
ロロプロピオナートのラセミ混合物５７．２ｇ及びセオ
ライト１５ｇと混合されたカンジダシリンドラセアリパ
ーゼ３ｇを用いて例２６に記載した方法で１．３０時間
後、変換度合６０％が得られる。この方法で、旋光性
（α)20 D ＋６．１o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロ
プロピオン酸の鏡像体混合物が得られこれは鏡像体過剰
のＲ- 鏡像体３７％に相当する。
【００４８】リパーゼの比活性は、リパーゼｇあたり４
１．７ｍｍｏｌ／ｈである。 〔例３２〕反応を、出発化合物として、ジイソプロピル
エーテル４００ｍｌ中に溶解されたフエニルエチルＲ-
及びＳ- ２- クロロプロピオナートのラセミ鏡像体混合
物１５９ｇ及びジイソプロピルエーテルで洗滌された、
例３１で使用したリパーゼを用いて例３１に記載した様
に実施する。４．１２時間後、変換度合６７％が得ら
れ、反応を停止する。この方法で、旋光性（α)20 D ＋
５．３o を有するＲ-及びＳ- ２- クロロプロピオン酸
の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像
体３２．３％に相当する。
１．７ｍｍｏｌ／ｈである。 〔例３２〕反応を、出発化合物として、ジイソプロピル
エーテル４００ｍｌ中に溶解されたフエニルエチルＲ-
及びＳ- ２- クロロプロピオナートのラセミ鏡像体混合
物１５９ｇ及びジイソプロピルエーテルで洗滌された、
例３１で使用したリパーゼを用いて例３１に記載した様
に実施する。４．１２時間後、変換度合６７％が得ら
れ、反応を停止する。この方法で、旋光性（α)20 D ＋
５．３o を有するＲ-及びＳ- ２- クロロプロピオン酸
の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像
体３２．３％に相当する。
【００４９】リパーゼの比活性は、リパーゼｇあたり４
０．８ｍｍｏｌ／ｈである。 〔例３３〜３５〕ブチル２- クロロプロピオナートのラ
セミ鏡像体混合物４１ｇを、溶剤３６０ｍｌ中に溶解
し、水２００ｍｌが入っている容器中に撹拌しながら加
える。２つの相がこの処理の間に生じる。次いで有機水
- 飽和された相を、セオライト９ｇと混合されたカンジ
ダシリンドラセアリパーゼ３ｇをポンプ送入し、含有す
るカラムに、変換度合３３％までポンプ送入する。次い
で例１記載した処理を実施する。この方法で、次の結果
が得られる： 例 溶剤 Ａｃｔ α ３３ ジイソプロピルエーテル ２７．１８ ＋５．４ ３４ ｎ- ヘプタン １２．７８ ＋５．２ ３５ クロロホルム ２．１７ ＋５．６ Ａｃｔ： リパーゼｇあたりの比活性ｍｍｏｌ／ｈ α： 旋光性（α)20 D 〔例３６〕２- エチルヘキシル２- クロロプロピオナー
トのラセミ混合物５５．２ｇをジイソプロピルエーテル
４００ｍｌ中に溶解し、水２００ｍｌが入れられた容器
中に撹拌しながら加える。２つの相がこの処理の間に生
じる。有機の、水- 飽和された相をセオライト２０ｇと
混合されたフミコララヌギノーザ(HumicolaIanuginosa)
リパーゼ６ｇ上に通す。次いで処理を例１に記載した
様に制限する。２５時間後、変換度合３２．４％が得ら
れ、反応を停止する。
０．８ｍｍｏｌ／ｈである。 〔例３３〜３５〕ブチル２- クロロプロピオナートのラ
セミ鏡像体混合物４１ｇを、溶剤３６０ｍｌ中に溶解
し、水２００ｍｌが入っている容器中に撹拌しながら加
える。２つの相がこの処理の間に生じる。次いで有機水
- 飽和された相を、セオライト９ｇと混合されたカンジ
ダシリンドラセアリパーゼ３ｇをポンプ送入し、含有す
るカラムに、変換度合３３％までポンプ送入する。次い
で例１記載した処理を実施する。この方法で、次の結果
が得られる： 例 溶剤 Ａｃｔ α ３３ ジイソプロピルエーテル ２７．１８ ＋５．４ ３４ ｎ- ヘプタン １２．７８ ＋５．２ ３５ クロロホルム ２．１７ ＋５．６ Ａｃｔ： リパーゼｇあたりの比活性ｍｍｏｌ／ｈ α： 旋光性（α)20 D 〔例３６〕２- エチルヘキシル２- クロロプロピオナー
トのラセミ混合物５５．２ｇをジイソプロピルエーテル
４００ｍｌ中に溶解し、水２００ｍｌが入れられた容器
中に撹拌しながら加える。２つの相がこの処理の間に生
じる。有機の、水- 飽和された相をセオライト２０ｇと
混合されたフミコララヌギノーザ(HumicolaIanuginosa)
リパーゼ６ｇ上に通す。次いで処理を例１に記載した
様に制限する。２５時間後、変換度合３２．４％が得ら
れ、反応を停止する。
【００５０】この方法で、旋光性（α)20 D ＋８．９o
を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体
混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体５４．
３％に相当する。リパーゼの比活性は、リパーゼｇあた
り０．５４ｍｍｏｌ／ｈである。
を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体
混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体５４．
３％に相当する。リパーゼの比活性は、リパーゼｇあた
り０．５４ｍｍｏｌ／ｈである。
【００５１】〔例３７〕反応を、例３６に使用されたの
と同一の出発化合物及び量及び同一リパーゼを用いて、
ジイソプロピルエーテルで酵素含有カラムを洗滌して、
例３６の様にくり返す。４８時間後、変換度合６４．８
％が得られ、反応を停止する。
と同一の出発化合物及び量及び同一リパーゼを用いて、
ジイソプロピルエーテルで酵素含有カラムを洗滌して、
例３６の様にくり返す。４８時間後、変換度合６４．８
％が得られ、反応を停止する。
【００５２】この方法で、旋光性（α)20 D ＋４．７o
を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体
混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体２８．
７％に相当する。リパーゼの比活性は、リパーゼｇあた
り０．５６ｍｍｏｌ／ｈである。
を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体
混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体２８．
７％に相当する。リパーゼの比活性は、リパーゼｇあた
り０．５６ｍｍｏｌ／ｈである。
【００５３】〔例３８〕２- エチルヘキシル２- クロロ
プロピオナート１９．４ｇを含有する、例３７からの有
機相、セオライト１２．５Ｇと混合されたシュードモナ
スフルオレッセンス(Pseudomonas fluorescens) リパー
ゼを用いて、変換率３５．８％が例３６中に記載された
方法で８．６時間後に得られる。
プロピオナート１９．４ｇを含有する、例３７からの有
機相、セオライト１２．５Ｇと混合されたシュードモナ
スフルオレッセンス(Pseudomonas fluorescens) リパー
ゼを用いて、変換率３５．８％が例３６中に記載された
方法で８．６時間後に得られる。
【００５４】この方法で、旋光性（α)20 D −１２．６
o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像
体混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＳ- 鏡像体７
６．８％に相当する。リパーゼの比活性は、リパーゼｇ
あたり１．４８ｍｍｏｌ／ｈである。 〔例３９〕対応する２- クロロプロピオ酸鏡像体を２-
エチルヘキサノールでエステル化して製造された鏡像体
過剰のＳ- 鏡像体５８．５％を有する２- エチルヘキシ
ルＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオナートの鏡像体混合
物１０２．５ｇ及びセオライト１０ｇと混合されたクロ
マバクテリウムビスコスム(Chromabakteriumviscosum)
リパーゼ４．８mgを用いて、変換度合２２．５％が、例
３６中に記載され方法で得られる。
o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像
体混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＳ- 鏡像体７
６．８％に相当する。リパーゼの比活性は、リパーゼｇ
あたり１．４８ｍｍｏｌ／ｈである。 〔例３９〕対応する２- クロロプロピオ酸鏡像体を２-
エチルヘキサノールでエステル化して製造された鏡像体
過剰のＳ- 鏡像体５８．５％を有する２- エチルヘキシ
ルＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオナートの鏡像体混合
物１０２．５ｇ及びセオライト１０ｇと混合されたクロ
マバクテリウムビスコスム(Chromabakteriumviscosum)
リパーゼ４．８mgを用いて、変換度合２２．５％が、例
３６中に記載され方法で得られる。
【００５５】この方法で、旋光性（α)20 D −１２．９
o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像
体混合物４．７ｇが得られ、これは鏡像体過剰のＳ- 鏡
像体７８．７％に相当する。リパーゼの比活性は、リパ
ーゼｇあたり１．０４ｍｍｏｌ／ｈである。
o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像
体混合物４．７ｇが得られ、これは鏡像体過剰のＳ- 鏡
像体７８．７％に相当する。リパーゼの比活性は、リパ
ーゼｇあたり１．０４ｍｍｏｌ／ｈである。
【００５６】〔例４０〕例２７中に記載された方法で、
しかしセオライト２４ｇと混合されたカンジダシリンド
ラセア６ｇを用いて、例２７中に記載されたラセミ鏡像
体混合物５７．６ｇを５時間かけて変換度合７０％で旋
光性（α)20 D ＋４．３o を有するＲ-及びＳ- ２- ク
ロロプロピオン酸の鏡像体混合物に変換し、これは鏡像
体過剰の２６％に相当する。リパーゼの比活性は、リパ
ーゼｇあたり５．８３ｍｍｏｌ／ｈである。
しかしセオライト２４ｇと混合されたカンジダシリンド
ラセア６ｇを用いて、例２７中に記載されたラセミ鏡像
体混合物５７．６ｇを５時間かけて変換度合７０％で旋
光性（α)20 D ＋４．３o を有するＲ-及びＳ- ２- ク
ロロプロピオン酸の鏡像体混合物に変換し、これは鏡像
体過剰の２６％に相当する。リパーゼの比活性は、リパ
ーゼｇあたり５．８３ｍｍｏｌ／ｈである。
【００５７】〔例４１〕例４０中に記載された方法で、
しかし１０℃の温度で、変換度合７０％が２．８時間で
達成される。リパーゼの比活性は、リパーゼｇあたり１
０．３ｍｍｏｌ／ｈである。得られた鏡像体混合物の比
活性（α)20 D は４．４o である。
しかし１０℃の温度で、変換度合７０％が２．８時間で
達成される。リパーゼの比活性は、リパーゼｇあたり１
０．３ｍｍｏｌ／ｈである。得られた鏡像体混合物の比
活性（α)20 D は４．４o である。
【００５８】〔例４２〕２- エチルヘキシル２- クロロ
プロピオナートのラセミ鏡像体混合物５６．６ｇを、水
- 飽和されたジイソプロピルエーテル４００ｍｌ中に溶
解し、容器中に入れる。溶液を、セオライト１５ｇと混
合されたカンジダシリンドリパーゼ３ｇ上にポンプ送入
する。この処理で生じた反応溶液を、セオライト２０ｇ
と混合された水酸化カルシウム１０ｇを含有するカラム
を通してポンプ送入する。この方法で、反応で生じた２
- クロロプロピオン酸が塩形成のために、カラム中に残
存し、一方加水分解の間消費される有機溶液中の水を、
再び戻す。次の反応処理を上記方法で、４時間後に変換
度合３４．３％を達成するまで、上記方法で連続的に実
施する。この方法で、旋光性（α)20 D ＋７．０o を有
するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体混合
物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体４３％に相
当する。
プロピオナートのラセミ鏡像体混合物５６．６ｇを、水
- 飽和されたジイソプロピルエーテル４００ｍｌ中に溶
解し、容器中に入れる。溶液を、セオライト１５ｇと混
合されたカンジダシリンドリパーゼ３ｇ上にポンプ送入
する。この処理で生じた反応溶液を、セオライト２０ｇ
と混合された水酸化カルシウム１０ｇを含有するカラム
を通してポンプ送入する。この方法で、反応で生じた２
- クロロプロピオン酸が塩形成のために、カラム中に残
存し、一方加水分解の間消費される有機溶液中の水を、
再び戻す。次の反応処理を上記方法で、４時間後に変換
度合３４．３％を達成するまで、上記方法で連続的に実
施する。この方法で、旋光性（α)20 D ＋７．０o を有
するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体混合
物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体４３％に相
当する。
【００５９】〔例４３〕ブチル２- クロロプロピオナー
トのラセミ鏡像体混合物６．５９ｇを、ジイソプロピル
エーテル７５ｍｌ中に溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ＝７）１．６ｍｌ、水中に前もって膨潤されたセ
フアデックスＧ５０（フアルマシア社）０．１ｇ、セラ
イト６ｇ及びゲオトリチムカンジズムリパーゼ６ｇと混
合し、混合物を室温で撹拌する。１６８．８時間後、変
換度合３７．４％が得られ、反応を停止する。
トのラセミ鏡像体混合物６．５９ｇを、ジイソプロピル
エーテル７５ｍｌ中に溶解し、リン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ＝７）１．６ｍｌ、水中に前もって膨潤されたセ
フアデックスＧ５０（フアルマシア社）０．１ｇ、セラ
イト６ｇ及びゲオトリチムカンジズムリパーゼ６ｇと混
合し、混合物を室温で撹拌する。１６８．８時間後、変
換度合３７．４％が得られ、反応を停止する。
【００６０】この方法で、旋光性（α)20 D −８．８o
を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体
混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＳ- 鏡像体５３．
７％に相当する。
を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体
混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＳ- 鏡像体５３．
７％に相当する。
【００６１】〔例４４〕例４３中に記載されている様
に、しかしプロピル２-クロロプロピオナートのラセミ
鏡像体混合物１５ｇ、ゲオトリチムカンジズムリパーゼ
５ｇ、セオライト５ｇ、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ＝７）２．５ｍｌ及び水中で前もって膨潤され
たヒドロゲルエバーグリーン５００ ３４０ｍｇ（ヘミ
ーリンツ社）を用いて変換率２４．５％が１１８．５時
間得られる。この方法で、旋光性（α)20 D ＋３．０o
を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体
混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体１８．
３％に相当する。
に、しかしプロピル２-クロロプロピオナートのラセミ
鏡像体混合物１５ｇ、ゲオトリチムカンジズムリパーゼ
５ｇ、セオライト５ｇ、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝
液（ｐＨ＝７）２．５ｍｌ及び水中で前もって膨潤され
たヒドロゲルエバーグリーン５００ ３４０ｍｇ（ヘミ
ーリンツ社）を用いて変換率２４．５％が１１８．５時
間得られる。この方法で、旋光性（α)20 D ＋３．０o
を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオン酸の鏡像体
混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＲ- 鏡像体１８．
３％に相当する。
【００６２】〔例４５〕例４３中に記載されている様
に、しかしセフアデックスＧ５０の代りに水中に前もっ
て膨潤されたヒドロゲルエバーグリーン５００ ０．１
ｇ（ヘミーリンツ社）を用いて、４６．８時間後、変換
度合２４％が得られる。この方法で、旋光性（α)20 D
−１１．７o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオ
ン酸の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＳ-
鏡像体７１．３％に相当する。
に、しかしセフアデックスＧ５０の代りに水中に前もっ
て膨潤されたヒドロゲルエバーグリーン５００ ０．１
ｇ（ヘミーリンツ社）を用いて、４６．８時間後、変換
度合２４％が得られる。この方法で、旋光性（α)20 D
−１１．７o を有するＲ- 及びＳ- ２- クロロプロピオ
ン酸の鏡像体混合物が得られ、これは鏡像体過剰のＳ-
鏡像体７１．３％に相当する。
【００６３】〔例４５〕ブチル２- クロロプロピオナー
トのラセミ鏡像体混合物６．５８ｇを、ジイソプロピル
エーテル５０ｍｌ中に溶解し、セオライト１ｇ、水中に
前もって膨潤されたセフアテックスＧ５０ ０．１ｇ
（ファルマシア社）、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ＝７）０．８ｇ及びカンジダシリンドラセアリパ
ーゼ０．８ｇと混合し、混合物を室温で撹拌する。１．
７５時間後、変換度合は３４．５％である。反応を停止
し、ヒドロゲル及びリパーゼを濾去する。反応溶液は、
旋光性（α)20 D ＋４．３o を有するＲ- 及びＳ- ２-
クロロプロピオン酸の鏡像体混合物を含有し、これは鏡
像体過剰のＲ- 鏡像体２６．２％に相当する。リパーゼ
の比活性は、リパーゼｇあたり９．８６ｍｍｏｌ／ｈで
ある。
トのラセミ鏡像体混合物６．５８ｇを、ジイソプロピル
エーテル５０ｍｌ中に溶解し、セオライト１ｇ、水中に
前もって膨潤されたセフアテックスＧ５０ ０．１ｇ
（ファルマシア社）、１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ＝７）０．８ｇ及びカンジダシリンドラセアリパ
ーゼ０．８ｇと混合し、混合物を室温で撹拌する。１．
７５時間後、変換度合は３４．５％である。反応を停止
し、ヒドロゲル及びリパーゼを濾去する。反応溶液は、
旋光性（α)20 D ＋４．３o を有するＲ- 及びＳ- ２-
クロロプロピオン酸の鏡像体混合物を含有し、これは鏡
像体過剰のＲ- 鏡像体２６．２％に相当する。リパーゼ
の比活性は、リパーゼｇあたり９．８６ｍｍｏｌ／ｈで
ある。
【００６４】例中に示された、得られた生成物の比旋光
性（α)20 D を、すべての例中クロロホルム中、波長５
８９ｎｍ（ナトリウムＤ線）、２０℃、Ｃ＝１で測定す
る。例中で使用されるセオライトは、フルカ(Fluka) の
“セオライトヒフロスーパーセル(Celite Hyflo Super-
Cel)" 、粒子サイズ２〜２５μである。
性（α)20 D を、すべての例中クロロホルム中、波長５
８９ｎｍ（ナトリウムＤ線）、２０℃、Ｃ＝１で測定す
る。例中で使用されるセオライトは、フルカ(Fluka) の
“セオライトヒフロスーパーセル(Celite Hyflo Super-
Cel)" 、粒子サイズ２〜２５μである。
【００６５】〔例４７〜５２〕夫々の場合、１- フエニ
ルエチルＲ- 及びＳ- オクタノアートのラセミ鏡像体混
合物７．０ｇを、ジイソプロピルエーテル３００ｍｌ中
に溶解し、水２００ｍｌが入れられている容器中に撹拌
しながら加える。２つの相がこの処理の間に生じる。例
１に記載した様に、有機の、水- 飽和された相を、セオ
ライト２２ｇと混合されたカンジダシリンドラセア３ｇ
（メイト社）を含有するカラムを通してポンプ送入す
る。同一リパーゼを例４７〜５２のすべてに使用する。
例１中に記載されている様に、水性相のｐＨを５〜８で
保つ。変換度合約３０％が達成された後に、水性相をジ
イソプロビルエーテルで抽出し、反応を停止する。ジイ
ソプロピルエーテルの蒸発後、１- フエニル- エタノー
ルを、減圧蒸留によって残存する残留物から単離する。
この方法で表５中にまとめた結果が、得られる。表 ５ 例 変換率 下記時間後（時間） α（o ) ｅｅ（％） Ａｃｔ ４７ ３２ ２２．０ ４１．２ ９２ ０．１３７ ４８ ３０ ２２．０ - - ０．１２８ ４９ ３１ ２３．０ ４１．２ ９２ ０．１２７ ５０ ２６ ２０．５ - - ０．１１９ ５１ ２９ ２４．５ - - ０．１１１ ５２ ２９ ２６．５ ３９．７ ８８ ０．１０３ Ａｃｔ： リパーゼｇあたりのｍｍｏｌ／ｈでカンジ
ダシリンドラセアの比活性 ａｌｐｈａ：波長５８９ｎｍ、２０℃、メタノール中Ｃ
＝１で測定された旋光性 ｅｅ： 鏡像体過剰の得られたＲ- とＳ- １- フエ
ニルエタノール − 反応溶液は未処理
ルエチルＲ- 及びＳ- オクタノアートのラセミ鏡像体混
合物７．０ｇを、ジイソプロピルエーテル３００ｍｌ中
に溶解し、水２００ｍｌが入れられている容器中に撹拌
しながら加える。２つの相がこの処理の間に生じる。例
１に記載した様に、有機の、水- 飽和された相を、セオ
ライト２２ｇと混合されたカンジダシリンドラセア３ｇ
（メイト社）を含有するカラムを通してポンプ送入す
る。同一リパーゼを例４７〜５２のすべてに使用する。
例１中に記載されている様に、水性相のｐＨを５〜８で
保つ。変換度合約３０％が達成された後に、水性相をジ
イソプロビルエーテルで抽出し、反応を停止する。ジイ
ソプロピルエーテルの蒸発後、１- フエニル- エタノー
ルを、減圧蒸留によって残存する残留物から単離する。
この方法で表５中にまとめた結果が、得られる。表 ５ 例 変換率 下記時間後（時間） α（o ) ｅｅ（％） Ａｃｔ ４７ ３２ ２２．０ ４１．２ ９２ ０．１３７ ４８ ３０ ２２．０ - - ０．１２８ ４９ ３１ ２３．０ ４１．２ ９２ ０．１２７ ５０ ２６ ２０．５ - - ０．１１９ ５１ ２９ ２４．５ - - ０．１１１ ５２ ２９ ２６．５ ３９．７ ８８ ０．１０３ Ａｃｔ： リパーゼｇあたりのｍｍｏｌ／ｈでカンジ
ダシリンドラセアの比活性 ａｌｐｈａ：波長５８９ｎｍ、２０℃、メタノール中Ｃ
＝１で測定された旋光性 ｅｅ： 鏡像体過剰の得られたＲ- とＳ- １- フエ
ニルエタノール − 反応溶液は未処理
【００６６】
【発明の効果】本発明によれば、極めて簡単な方法で、
しかも環境汚染もなく、カルボン酸誘導体を有機溶剤中
で酵素加水分解することができる。
しかも環境汚染もなく、カルボン酸誘導体を有機溶剤中
で酵素加水分解することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ローベルト・エステルマン オーストリア国、リンツ、ライシエクスト ラーセ、25 (72)発明者 ヘルベルト・マイルホーフエル オーストリア国、エンゲルウイツツドル フ、フライシユテツテル−ストラーセ、42 (72)発明者 ゲラルト・バンコ オーストリア国、リンツ、ケフエルグート ストラーセ、26
Claims (10)
- 【請求項１】 カルボン酸誘導体を水と僅かにしか混和
し得ない有機溶剤中に溶解し、溶液を水で飽和し、これ
をヒドロラーゼと接触させ、加水分解を水の消費と共に
行い、有機反応溶液を水で飽和し、これをヒドラーゼと
接触させ、所望の変換度合が達成されるまで続けること
から成る、カルボン酸誘導体の酵素加水分解方法。 - 【請求項２】 有機相の水による飽和を、水含有ヒドロ
ゲルを用いて実施する請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 水による飽和を、加水分解の後、有機反
応溶液を水酸化物イオン含有剤上を通して実施し、形成
されたカルボン酸を反応平衡から除去し、加水分解の間
消費された水を戻す、請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 カルボン酸誘導体を有機溶剤中に溶解
し、形成された有機溶液を保存容器の水性相に入れ、そ
れによって有機溶液を水で飽和し、水性相を分離し、こ
の水- 飽和された有機溶液をヒドロラーゼを含有する反
応容器に通してポンプ送入し、形成された有機反応溶液
を、ｐＨが塩基の添加によって一定に保たれた保存容器
の水性相にポンプ送入で戻し、それによって形成された
カルボン酸が添加された塩基の塩として水性相中に残存
し、カルボン酸を加水分解平衡から除去し、一方有機相
を再び水で飽和し、水性相を分離し、有機相をヒドロラ
ーゼ上にポンプ送入し続け、次いで所望の変換度合が達
成されるまで水性相に送入する、請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 ヒドロラーゼを反応サイクル終了後、こ
れを新しい反応サイクルで使用する前にクロロホルムで
洗滌する、請求項４記載の方法。 - 【請求項６】 キラル又はプロキラルカルボン酸誘導体
を使用する、請求項１記載の方法。 - 【請求項７】 ハロプロピオン酸エステルの鏡像体を使
用する、請求項１記載の方法。 - 【請求項８】 有機溶剤としてエーテルを使用する、請
求項１記載の方法。 - 【請求項９】 ヒドロラーゼとしてリパーゼを使用す
る、請求項１記載の方法。 - 【請求項１０】 担体上に吸着されたヒドロラーゼを使
用する請求項１記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT886/91 | 1991-04-29 | ||
| AT0088691A AT398081B (de) | 1991-04-29 | 1991-04-29 | Verfahren zur enzymatischen hydrolyse eines carbonsäurederivates |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05130881A true JPH05130881A (ja) | 1993-05-28 |
Family
ID=3502090
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4110468A Withdrawn JPH05130881A (ja) | 1991-04-29 | 1992-04-28 | カルボン酸誘導体の酵素加水分解方法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5278054A (ja) |
| EP (1) | EP0511526A1 (ja) |
| JP (1) | JPH05130881A (ja) |
| AT (1) | AT398081B (ja) |
| AU (1) | AU662134B2 (ja) |
| CA (1) | CA2065550A1 (ja) |
| CZ (1) | CZ130992A3 (ja) |
| DK (1) | DK0511526T3 (ja) |
| HU (1) | HUT62940A (ja) |
| NZ (1) | NZ242279A (ja) |
| SK (1) | SK130992A3 (ja) |
| ZA (1) | ZA923072B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009278930A (ja) * | 2008-05-23 | 2009-12-03 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 有機カルボン酸エステルからの光学活性有機カルボン酸の製造方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993013215A1 (en) * | 1991-12-23 | 1993-07-08 | Genzyme Limited | Synthesis of homochiral 2-hydroxy acids |
| DE4328231C1 (de) * | 1993-08-23 | 1994-07-28 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von (L)-2-Chlorpropionsäure und deren Salzen |
| DE19501452A1 (de) * | 1995-01-19 | 1996-07-25 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven 2-Halogenpropionsäuren |
| US6022977A (en) * | 1997-03-26 | 2000-02-08 | Dupont Pharmaceuticals Company | Dynamic resolution of isoxazoline thioesters to isoxazoline carboxylic acids |
| KR100378741B1 (ko) * | 2000-06-01 | 2003-04-07 | 에스케이 주식회사 | 효소를 이용하여 R-폼 또는 S-폼의 α-치환 헤테로싸이클릭 카르복실산 및 이와 상반되는 광학특성을 갖는 α-치환 헤테로싸이클릭 카르복실산 에스테르를 제조하는 방법 |
| WO2001092553A1 (en) * | 2000-06-01 | 2001-12-06 | Sk Corporation | Method for optically resolving a racemic alpha-substituted heterocyclic carboxylic acid using enzyme |
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|---|---|---|---|---|
| US4601987A (en) * | 1985-02-27 | 1986-07-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Enzymatic production of optical isomers of 2-halopropionic acids |
| US4668628A (en) * | 1985-04-01 | 1987-05-26 | Stauffer Chemical Company | Resolution of racemic mixtures of aliphatic acid esters |
| JPS6352896A (ja) * | 1986-08-22 | 1988-03-07 | ストウフア− ケミカル カンパニ− | リパ−ゼ酵素反応の実施方法 |
| US5032523A (en) * | 1987-01-14 | 1991-07-16 | Lion Corporation | Preparation of optically active esters |
| US4800162A (en) * | 1987-04-01 | 1989-01-24 | Sepracor, Inc. | Method for resolution of steroisomers in multiphase and extractive membrane reactors |
| US5057427A (en) * | 1988-04-07 | 1991-10-15 | Sepracor, Inc. | Method for resolution of stereoisomers |
| US5108916A (en) * | 1989-06-05 | 1992-04-28 | Rhone-Poulenc Rorer, S.A. | Process for stereoselectively hydrolyzing, transesterifying or esterifying with immobilized isozyme of lipase from candida rugosa |
-
1991
- 1991-04-29 AT AT0088691A patent/AT398081B/de not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-04-07 CA CA002065550A patent/CA2065550A1/en not_active Abandoned
- 1992-04-08 DK DK92106039.8T patent/DK0511526T3/da active
- 1992-04-08 NZ NZ242279A patent/NZ242279A/xx unknown
- 1992-04-08 EP EP92106039A patent/EP0511526A1/de not_active Withdrawn
- 1992-04-17 US US07/870,429 patent/US5278054A/en not_active Expired - Fee Related
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- 1992-04-28 JP JP4110468A patent/JPH05130881A/ja not_active Withdrawn
- 1992-04-29 CZ CS921309A patent/CZ130992A3/cs unknown
- 1992-04-29 SK SK1309-92A patent/SK130992A3/sk unknown
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009278930A (ja) * | 2008-05-23 | 2009-12-03 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 有機カルボン酸エステルからの光学活性有機カルボン酸の製造方法 |
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| CZ130992A3 (en) | 1994-01-19 |
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| ATA88691A (de) | 1994-01-15 |
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