JPH06500458A

JPH06500458A - ４―ヒドロキシ―２―シクロペンテン―１―オン及び２′，２′―ジメチルプロパン―１′，３′―ジオールとのケタールのｓ（−）―及びｒ（＋）―エステルの酵素によるエナンチオ選択的合成

Info

Publication number: JPH06500458A
Application number: JP51238090A
Authority: JP
Inventors: シャペーラー　ステファン; シェパー　トーマス; シュゲール　カルル
Original assignee: オイローペイシェ　ヴィルトシャフツゲマインシャフト　（エーヴェーゲー）
Priority date: 1989-09-25
Filing date: 1990-09-17
Publication date: 1994-01-20
Also published as: PT95404A; WO1991004337A1; EP0419988A1; DK37392D0; IE903437A1; CA2066689A1; DK37392A; LU87593A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２’、　２’−ジメチルプロパン−１’、　３’−ジオールとのケタールの５（−）−及びＲ（＋）−エステルの酵素によるエナンチオ選択的合成本発明は、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２’、　２’− ジメチルプロパン−１’、　３’−ジオールとのケタールの５（−）−及びＲ（＋）−エステルの酵素によるエナンチオ選択的合成法に係り、特に、本発明はそれぞれ下記式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）で表される前記５（−）−及びＲ（＋）−エステル［各種用途において重要な中間体、すなわち化合物（特に保存時に安定なキラルブロスタグランジン誘導体）の立体選択的及びエナンチオ選択的合成における中間体である］のエナンチオ選択的製法に係る。

ドイツ国特許公開明細書第３７２４７２１号には、酵素の存在下におけるエステルの加水分解開裂による、換言すれば酵素加水分解によるラセミケタールアセテートからの相当する５（−）−アルコール（Ｒ（＋　）−エステルはそのままで残る）の製法が開示されている。しかしながら、反応混合物（ｐ［Ｉ７）中に含有される５（−）−アルコールは水性反応系中では不安定であり、エステル化反応によってさらにこれらを処理して５（−）−エステルとすることは技術的に極めて煩雑であり、得られる所望最終生成物の収率は比較的低い。

従って、本発明の目的は、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２’、　２’−ジメチルプロパン−１’、　３’−ジオールとのケタールの５（ −）−及びＲ（＋）−エステルを選択的に製造できる方法（該方法は極めて工業的であり、所望最終生成物を高純度及び高収率で生成できる）を開発することにある。

発明者らは、本発明によれば、当該目的が、上述の特許公開明細書に開示されたｐＨ７に緩衝化した水性媒体中でのラセミケタールアセテートの酵素によるエナンチオ選択的開裂の逆反応において、酵素の存在下、有機溶媒中における相当するラセミヒドロキシ化合物及び酸エステル（アシル供与体として）からの酵素による立体選択的及びエナンチオ選択的合成法により４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′。

２′−ジメチルプロパン−１’、　３’−ジオールとのケタールの５（−）−及びＲ（＋）−エステルを調製することによって達成されるとの知見を得た。

従って、本発明は、それぞれ式（Ｉａ）及び（Ｉ　ｂ）で表される４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２’、　２’−ジメチルプロパン−１’ 、　３’−ジオールとのケタールの５（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法において、ａ）式（ｎ）で表される４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン又は２ ’、　２’−ジメチルプロパン−１’、３’−ジオールとのケタールのラセミ混合物を、酵素の存在下、有機相中、好ましくは無水有機相中、室温又はそれ以上の温度でアシル供与体である一般式（Ｉ［［）で表されるエステルと下記反応式に従って反応させて、式（Ｉ　ａ）で表される相当する５（−）−エステルを生成すると共に、式（ｎ　ｂ）で表されるＲ（＋）−アルコールをそのままで残し、［ここで、Ａｃｙｌは各種の所望な酸残基、好ましくは有機性Ｃｌ−２２カルボン酸残基であり、Ｒは任意に置換された非分枝状又は分枝状の炭素数１ないし２２、好ましくは１ないし１２、特に１ないし６のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基、任意に置換された炭素数６ないし１２、好ましくは６ないし１０のアリール基、又は任意に置換された環構成原子数５ないし１０、好ましくは５ないし７の複素環基（ヘテロ原子として少なくとも１の窒素、酸素及び／又はイオウ原子を含有する）である］；ｂ）前記工程ａ）で得られた生成物の混合物を、クロマトグラフィー又は抽出によって、式（Ｉ　ａ）で表される５（−）−エステル（第１の最終生成物として得られる）及び式（ｆｆ　ｂ）で表されるＲ（十）−アルコールに分別し：Ｃ）前記工程ｂ）のＲ（＋）−アルコールを、下記反応式に従い、一般式（ｍ）で表されるエステルでの化学的又は酵素によるエステル化反応によって式（Ｉｂ）で表されるＲ（＋）−エステルに変化させ、得られたＲ（＋）−エステルをクロマトグラフィー又は抽出によって第２の最終生成物として純粋な形で得ることを特徴とする。

本発明による方法では、直接的な酵素によるエナンチオ選択的合成法によって、不安定な５（−）−ヒドロキシ化合物の生成を回避して４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２’、　２’−ジメチルプロパン−１′、　３’− ジオールとのケタール（これらは、保存時に安定なキラルブロスタグランジンシントン（５ｙｎｔｈｏｎ）の合成用の重要な中間体である）を工業的にかつ経済的に調製できる。特に、４−アセトキシシクロベンテノン及びそのケタールは、シクロペンタノイド天然物質の合成におけるキー物質である［ドイツ国特許公開明細書第３７２４７２１号；　Ｒ，Ｎｏｙｏｒｉら。

Ａｎｇｅｖａｎｄｔｅ　Ｃｈｅｍｉｅ、９６，８５４（１９８４）及びＥ、Ｗｉｎｔｅｒｆｅｌｄｔら、Ａｎｇｅｖａｎｄｔｅ　Ｃｈｅｍｉｅ、　９４．４９６　（１９８２）参照コ。

本発明による方法を行う際には、所望の最終生成物が安定な形でかつ非常に高い純度及び収率で得られる。

さらに、本発明による方法は、ドイツ国特許公開明細書第３７２４７２１号に開示された方法と比べて次の工業的利点を有する。、すなわち、合成工程の数が少ないこと以外に、溶媒の要求量が明らかに低減すること；反応を非常に少ない容量で実行できること；直接的なワーキングアップ（ｗｏｒｋｉｎｇ　ｕｐ）が可能であるため、有毒性又は発ガン性の抽出溶媒を使用する必要がないこと（エネルギーの節約にもなる）；酵素が容易に回収されるため（たとえば濾過による）、不動化が必要でないこと；酵素カートリッジ（固定床）の連続使用が可能であること；及び可溶化剤の使用が不要であることである。

本発明による方法の実施に当たり、好適に使用されるアシル供与体は、一般式（Ｖ）Ｒ，−Ｃ−ＯＲ２（式中、Ｒ１及びＲ２は同−又は異なるものであって、それぞれ前記Ｒについて示した意義を有する）で表されるエステルである。

特に、アシル供与体として酢酸エチルエステル及び炭素数１ないし２２の有機酸のグリセリントリエステル（特にトリアセチン、トリブチリン等）（無毒性及び高反応速度により特徴づけられる）を使用することが好適である。

本発明による方法を実施する際、後述の実施例で使用しているように、抽出操作よりも一般的なフラッシュカラムクロマトグラフィーが好適である［５ｔｉｌｌら。

Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｗ、、　４３．２９２３　（１９７８）参照］。本発明による方法の工程Ｃ）の実施の際には、標準的な化学的エステル化反応（酸クロリド／酸無水物及びピリジン及びアルコールによる）よりも酵素によるエステル化反応が好適である。この方法の操作手続は、エナンチオ選択的エステル化反応の手続と同じである。ケタール化化合物に関しては、本発明による直接的な酵素によるエナンチオ選択的エステル化反応が特に有利であり、２’、　２’−ジメチルプロパン−１’、　３’−ジオールとのケタール（＝ケタールアルコール）と共に鏡像体の完全分離を達成でき、この場合、つづく脱ケタール化反応［たとえば、室温において１時間振とつするか又はＭｅｒｃｋ製シリカケシリカゲルＮｏ８５上に４８時間放置することによる酢酸又はギ酸の接触付加反応にょるコにより、非ケタール化４−ヒドロキシシクロベンテノン（＝ケトアルコール）の鏡像異性的に純粋なエステルを得ることが容易である。

一方、式（ｎ）で表されるケト物質の場合、本発明による方法の工程ａ）において好適に使用される酵素は豚の肝臓からのエステラーゼであり、式（ｎ）で表されるケタールの場合に好適に使用される酵素はリパーゼ、特にシュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏａ＋ｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）から得られたリパーゼ（＾ｍａｎｏリパーゼＰ１バッチＮｏ、　ＬＰＬ　０５５１ｇ）である。

本発明によれば、シュードモナス・フルオレッセンスからのリパーゼ（たとえばＡｍａｎｏリパーゼＰ１バッチＮｏ、ＬＰＬ　０５５１８又はＲｏｈｍ、　ＥＬ　２２０−８８）を使用した場合、ケト物質の酵素によるエナンチオ選択的エステル化率６０％を達成できる。ケタール化化合物の場合には、次のリパーゼ、すなわちシュードモナス・フルオレッセンスからのリパーゼ（たとえば、ＡｍａｎｏリパーゼＰ１バッチＮｏ、　ＬＰＬ　０５５１ｇ又はＲＱｈｉ、　ＥＬ　２２０−８８）、カンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｎａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）からのリパーゼ（中でもＡｍａｎｏリパーゼＡＹ１バッチＮｏ。

ＬＡＹ　ＭＯ３５１７又はＳｉｇｍａ、　ｃａｔ、　Ｎｏ、Ｌ−１７５４、バッチＮｏ。

３４Ｆ−０６２１）、ポルシン・パンクレアス（ｐＯｒｃｔｎｅｐａｎｃｒｅａｓ）からのリパーゼ（中でも、Ｒ（５ｈａ、バッチＮｏ。

７０２３Ｃ；　Ｓｉｇａ＋ａ、　ｃａｔ、　Ｎｏ、　Ｌ−３１２６、バッチＮｏ、　７４Ｆ−０４７０）及びムコール・ミエイ（Ｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅｈｅｉ）からのリパーゼ（Ｇ１５ｔ　−Ｂｒｏｃａｄｅｓ、バッチＮｏ、　０２８２）により、鏡像体の完全分離を達成できる。

好ましくは、酵素は過剰量で使用される。酵素の活性度（Ｕ）に左右されるが、酵素／アルコールの比（容量）　０．５：　１ないし１０：１が有利であることが証明されている［対照反応ニトリグリセリド又は溶媒エステルの加水分解、Ｕ＝酵素製造者の報告に従い、水性エマルジョン中、一定ｐＨにおける１分当たりの脂肪酸当量（μモル）］。たとえば、ＲＣ１ｈｍ製の不動化シュードモナス系リパーゼは６倍低い活性を有し、従って、これに応じて多量使用する必要がある。

本発明による方法の実施に当たり工程ａ）で好適に使用される有機溶媒は、ｎ− へブタン、ｉ−オクタン等の炭化水素、又はエステル（特にシクロヘキシルアセテート、特異的にはアシル供与体として使用されるエステル、中でもトリブチリン）である。

本発明による方法の工程ａ）におけるエステル交換反応は、室温又はそれ以上の温度、好ましくは４０ないし７５℃、特に５８ないし６２℃の温度（特に６０℃ ）で行われる。

本発明による方法の工程ａ）において、有機溶媒及び式（ｌ［ｌのアルコールは、好ましくは比（容量）４：１ないし１００：１、特に５：１ないし１０：１で使用される（溶媒：アルコールの比は、使用するアルコールの溶解度によって厳しく決定される）。

本発明による方法の工程ａ）において、酵素及び式（Ｕ）のアルコールは、比（容量）０．５：１ないし１０．１、好適には０．５・１ないし１．５：Ｉ、特に０．７：１ないし０．９：１で使用される。

本発明の方法の特に好適な具体例によれば、工程Ｃ）での式（、ｎ　ｂ）で表されるＲ（＋）−アルコールのエステル化反応中に、該アルコールのラセミ化及び工程ａ）への再循環を行うことができ、これにより、式（ｎ）のラセミヒドロキシ化合物の式（Ｉａ）で表される５（−）−エステルへの完全なエナンチオ選択的エステル化の達成が可能になる。

反応の進行及び鏡像異性体の比率は、高圧液クロマトグラフィー（キラルＤａｉｃｅｌ　Ｏ＾ＨＰＬＣカラム、溶離液：ｎ−ヘキサン／イソプロパツール＝１０：１を使用するＨＰＬＣ）又はキャピラリーガスクロマトグラフィー（Ｌｉｐｏｄｅｘ　Ａカラム：　Ｍａｃｈｅｒｅｙ　＆　Ｎａｇｅｌ）によって測定される。これらの操作の詳細は一般的な実験室的基準に相当するものである（製造者のマニュアルを考慮する）。最後に、鏡像異性体の比率及び給体配置は、Ｍｏ５ｈｅｒエステルのｔｌＮＭＩ？による常法で確認される［Ｊ、＾。

Ｄａｌｅら、ＪＡＣ３，９５，５１２−５１９（１９７３）及びドイツ国特許公開明細書第３７２４７２１号参照）。

本発明に従って使用される酵素は、遊離形（すなわち有機反応媒体中に溶解又は懸濁されたもの）又は不動化形（たとえば重合体基材に係止された形状）で使用される。

上述の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（ｎ）及び（Ｉｔ　ｂ）は、反応式の表示を簡略化するために、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及びそのエステル、及び２’、　２’−ジメチルプロパン−１’、　３’−ジオールとのケタール及びそのエステル誘導体の２つの構造式を併せて１つの式で示すようにした併合形の式である。たとえば、下記の如（、式（ｎ）は式（■′）及び（■′）の組合せを示す。

上述の定義を考慮すると、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン（Ａ）、又は２’、　２’−ジメチルプロパン−１’、　３’−ジオールとのケタール（Ｂ）を原料として、アシル供与体として酢酸エチルを使用する場合の本発明による方法の過程は、下記の如く表さ本発明の方法によるアセチル化反応に関する好適な反応パラメーターは、変動する条件、たとえば比（容量）又は各場合で使用する酵素の比活性度、所望の酸残基（たとえば、酢酸残基、酪酸残基又はオレイン酸残基）の選択等に左右される。本発明の方法によるアセチル化反応に関する最適パラメーターは次のとおりである。

酵素：豚の肝臓からのエステラーゼ又はシュードモナス・フルオレッセンスからのリパーゼ（ＡｍａｎｏリパーゼＰ１パッチＮｏ、ＬＰＬ　０５５１８）溶媒ニトリアセチン（グリセリントリアセテート；天然物質であるため、環境問題を全（生じない）乾燥したエステル／ケタールアルコールの比（容量）＝６＝１酵素／ケタールアルコールの比（容量）　＝　１　：　１反応部度：４０℃±１ ℃ 酵素の水分含量：３．１７％（凍結乾燥した酵素：製造者から入手したものを直接反応に使用）本発明を下記の実施例によりさらに詳述するが、これらに限定されない。

実施例１磁石スタークー上に設置した油浴（４０℃）に浸漬した丸底フラスコ（１０１１）内において、トリブチリン３冨Ａ’（３，１９，９ミリモル）中、ケタールアルコール（　２．　８３ミリモル）及びＡｍａｎｏリパーゼＰ　（バッチＮｏ．　ＬＰＬ０５５１８）　５１１．３りを反応させた。

４５時間後、反応を停止させ、酵素を濾取し、アセトンで洗浄し、全抽出液を５０４Ｆシリカカラム（　Ｍｅｒｃｋ製フラッシフラッシュシリカゲル６０．　９３８５）及び流動相として石油エーテル／エーテル（　２／　１）を使用して分別した。

Ｓ（−）−ケタールブチレート（鏡像異性純度〉９５％ｅｅ　；　ＨＰＬＣによる）　２４０．１１９　（０．９８ミリモル）及びＲ　（＋　）　−ケタールアルコール（〉９５％ｅｅ　；　ＨＰＬＣによる’）　２８１．２ｍ９　（１．５３ミリモル）　を得た。

実施例２磁石スタークー上に設置した油浴（６０℃）に浸漬した丸底フラスコ（　Ｌｏｗｌ）内において、乾燥したシクロヘキシルアセテート２寓ｌ（１３．６ミリモル）、ＡｍａｎｏリパーゼＰ（実施例１のものと同じ）　２５０ｍｇ及びケタールアルコール　３０ｇ．　Ｏｔ９（　１．　６８ミリモル）を反応させた。

２０時間後、反応を停止し、酵素を濾取し、アセトンで洗浄し、濾液を５０９シリカカラム（Ｍｅｒｃｋｌ！！！Ｎｏ．　９３８５）及び石油エーテル／エーテル混合物（　１／　１）を使用して分別した。

収量：Ｒ（＋）−ケタールアルコール（〉９５％ｅｅ：ＨＰＬＣ及びＭｏｓｈｅｒエステルのＨＮＭＲによる）１４０．　２冨９（０．フロミリモル）及びＳ（ −）−ケタールブチレート（〉９５％ｅｅ：■ＰＬＣＩこよる）　２０３．　４Ｂ　（　０．　８３ミリモル）補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成４年３月２４日

Claims

【特許請求の範囲】１　それぞれ式（Ｉａ）及び（Ｉｂ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉａ）▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｉｂ）で表される４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′，２′−ジメチルプロパン−１′．３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法において、ａ）式（ＩＩ）で表される４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン又は２′，２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのラセミ混合物を、酵素の存在下、有機相中、アシル供与体である一般式（ＩＩＩ）で表されるエステルと下記反応式に従って反応させて、式（Ｉａ）で表される相当するＳ（−）−エステルを生成すると共に、式（ＩＩｂ）で表されるＲ（＋）−アルコールをそのままで残し、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）＋Ａｃｙ１−ＯＲ（ＩＩＩ）→▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉａ）＋▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩｂ）＋Ｒ−ＯＨ（Ｉ■）［ここで、Ａｃｙ１は各種の所望な酸残基、好ましくは有機性Ｃ１−２２カルボン酸残基であり、Ｒは任意に置換された非分枝状又は分枝状の炭素数１ないし２２、好ましくは１ないし１２、特に１ないし６のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基、任意に置換された炭素数６ないし１２、好ましくは６ないし１０のアリール基、又は任意に置換された環構成原子数５ないし１０、好ましくは５ないし７の複素原基（ヘテロ原子として少なくとも１の窒素、酸素及び／又はイオウ原子を含有する）である］；ｂ）前記工程ａ）で得られた生成物の混合物を、クロマトグラフィー又は抽出によって、式（Ｉａ）で表されるＳ（−）−エステル（第１の最終生成物として得られる）及び式（ＩＩｂ）で表されるＲ（＋）−アルコールに分別し；ｃ）前記工程ｂ）のＲ（＋）−アルコールを、下記反応式に従い、一般式（ＩＩＩ）で表されるエステルでの化学的又は酵素によるエステル化反応によって式（Ｉｂ）で表されるＲ（＋）−エステルに変化させ、▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩｂ）＋Ａｃｙ１−ＯＲ（ＩＩＩ）→▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉｂ）＋Ｒ−ＯＨ（ＩＵ）得られたＲ（＋）−エステルをクロマトグラフィー又は抽出によって第２の最終生成物として純粋な形で得ることを特徴とする、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′，２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。２　請求の範囲第１項記載の製法において、前記アシル供与体が、一般式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ１及びＲ２は同一又は異なるものであって、それぞれ請求の範囲第１項に記載のＲについて示した意義を有する）で表されるエステルである、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′，２′−ジメチルプロパン− １′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。３　請求の範囲第１項又は第２項記載の製法において、前記アシル供与体として、酢酸のエチルエステル（酢酸エチル）又は炭素数２２以下の有機酸のグリセリントリエステル、特にトリアセチン又はトリブチリンを使用する、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′．２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。４　請求の範囲第１項ないし第３項のいずれか１項記載の製法において、前記式（ＩＩ）で表されるケト物質の場合の酵素として豚の肝臓からのエステラーゼを使用する、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′，２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋） −エステルのエナンチオ選択的製法。５　請求の範囲第１項ないし第３項のいずれか１項記載の製法において、前記式（ＩＩ）で表されるケタール物質の場合の酵素として、シュードモナス・フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）からのリパーゼを使用する、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′，２′ −ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。６　請求の範囲第１項ないし第５項のいずれか１項記載の製法において、前記工程ａ）における有機溶媒として、炭化水素及び／又はエステル（好ましくは前記アシル供与体として使用するエステル）を使用する、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′，２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。７　請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか１項記載の製法において、前記工程ａ）におけるエステル交換反応を、室温又はそれ以上の温度、好ましくは４０ないし７５℃、好ましくは５８ないし６２℃、特に６０℃で行う、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′，２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。８　請求の範囲第１項ないし第７項のいずれか１項記載の製法において、前記工程ａ）に当たり、有機溶媒及び一般式（ＩＩＩ）で表されるアルコールを、比（容量）４：１ないし１００：１、好ましくは５：１ないし１０：１で使用する、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１−オン及び２′，２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。９　請求の範囲第１項ないし第８項のいずれか１項記載の製法において、前記工程ａ）に当たり、酵素及び一般式（ＩＩＩ）で表されるアルコールを、比（容量）０．５：１ないし１０：１、好ましくは０．５：１ないし１．５１、特に０．７：１ないし０．９：１で使用する、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン−１ −オン及び２′，２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。１０　請求の範囲第１項ないし第９項のいずれか１項記載の製法において、前記工程ｃ）における式（ＩＩｂ）で表されるＲ（＋）−アルコールのエステル化反応中に、Ｒ（＋）−アルコールのラセミ化及び前記工程ａ）への再循環を行い、式（ＩＩ）で表されるラセミ化合物を式（Ｉａ）で表されるＳ（−）−エステルに完全にエナンチオ選択的変換させる、４−ヒドロキシ−２−シクロペンテン− １−オン及び２′，２′−ジメチルプロパン−１′，３′−ジオールとのケタールのＳ（−）−及びＲ（＋）−エステルのエナンチオ選択的製法。