JPH04335899A - L−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量法および定量用組成物 - Google Patents
L−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量法および定量用組成物Info
- Publication number
- JPH04335899A JPH04335899A JP13832591A JP13832591A JPH04335899A JP H04335899 A JPH04335899 A JP H04335899A JP 13832591 A JP13832591 A JP 13832591A JP 13832591 A JP13832591 A JP 13832591A JP H04335899 A JPH04335899 A JP H04335899A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phosphate
- glycerol
- reduced
- nads
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 16
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 16
- CIEYFQRZEULHJV-UHFFFAOYSA-N 1,1-dihydroxypropan-2-one;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.CC(=O)C(O)O CIEYFQRZEULHJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 99
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims abstract description 46
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims abstract description 40
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 27
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 claims abstract description 25
- CXONXVMMINSQBV-NNYOXOHSSA-N (2r,3r,4s,5r)-5-[[[[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-2-(3-carbamothioylpyridin-1-ium-1-yl)-4-hydroxyoxolan-3-olate Chemical compound NC(=S)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)[O-])=C1 CXONXVMMINSQBV-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims abstract description 17
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 13
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims abstract description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 8
- NYRJSROCIMIKPS-NNYOXOHSSA-N (2r,3r,4s,5r)-5-[[[[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-2-(3-carbamothioylpyridin-1-ium-1-yl)-4-hydroxyoxolan-3-olate Chemical compound NC(=S)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)[O-])=C1 NYRJSROCIMIKPS-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 7
- GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone phosphate Chemical compound OCC(=O)COP(O)(O)=O GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 73
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 49
- 108010041921 Glycerolphosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 25
- 102000000587 Glycerolphosphate Dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 25
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 claims description 23
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 21
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- -1 thionicotinamide adenine dinucleotide phosphates Chemical class 0.000 claims description 12
- XQWBMZWDJAZPPX-UHFFFAOYSA-N pyridine-3-carbothioamide Chemical compound NC(=S)C1=CC=CN=C1 XQWBMZWDJAZPPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 9
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 claims description 8
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 claims description 7
- DGVSIBCCYUVRNA-UHFFFAOYSA-O [[5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [3,4-dihydroxy-5-(6-oxo-3h-purin-9-yl)oxolan-2-yl]methyl hydrogen phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+](C2C(C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC3C(C(O)C(O3)N3C4=C(C(N=CN4)=O)N=C3)O)O2)O)=C1 DGVSIBCCYUVRNA-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 7
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims description 7
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 5
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 5
- KPVQNXLUPNWQHM-RBEMOOQDSA-N 3-acetylpyridine adenine dinucleotide Chemical compound CC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 KPVQNXLUPNWQHM-RBEMOOQDSA-N 0.000 claims description 4
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940101270 nicotinamide adenine dinucleotide (nad) Drugs 0.000 claims 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 abstract description 33
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 abstract 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 abstract 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 37
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 34
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 21
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 13
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 8
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 description 7
- IDNYCOXVOUHNHN-SLBHZGEVSA-N [1-heptadecanoyloxy-3-[[3-heptadecanoyloxy-2-[(10z,13z)-nonadeca-10,13-dienoyl]oxypropoxy]-hydroxyphosphoryl]oxypropan-2-yl] (10z,13z)-nonadeca-10,13-dienoate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCCC(=O)OC(COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCC(COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC IDNYCOXVOUHNHN-SLBHZGEVSA-N 0.000 description 7
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000007986 glycine-NaOH buffer Substances 0.000 description 5
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-L (R)-2-Hydroxy-3-(phosphonooxy)-propanal Natural products O=C[C@H](O)COP([O-])([O-])=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-L 0.000 description 4
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde 3-phosphate Chemical compound O=C[C@H](O)COP(O)(O)=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 4
- DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N N-phosphocreatine Chemical compound OC(=O)CN(C)C(=N)NP(O)(O)=O DRBBFCLWYRJSJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000593950 Streptomyces canus Species 0.000 description 4
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010082072 ATP Synthetase Complexes Proteins 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010068561 Fructose-Bisphosphate Aldolase Proteins 0.000 description 3
- 102000001390 Fructose-Bisphosphate Aldolase Human genes 0.000 description 3
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 3
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 3
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 102000013460 Malate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 108010054790 glycerol-3-phosphate oxidase Proteins 0.000 description 3
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 3
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 3
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 2
- AJKVQEKCUACUMD-UHFFFAOYSA-N 2-Acetylpyridine Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC=N1 AJKVQEKCUACUMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 2
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 2
- 102000003736 ATP Synthetase Complexes Human genes 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000146387 Chromobacterium viscosum Species 0.000 description 2
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 2
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 108700040097 Glycerol dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 description 2
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 2
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 2
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 2
- LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N acetyl dihydrogen phosphate Chemical group CC(=O)OP(O)(O)=O LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N alpha-D-fructofuranose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@](O)(COP(O)(O)=O)O[C@@H]1COP(O)(O)=O RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 2
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 2
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940120503 dihydroxyacetone Drugs 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940025237 fructose 1,6-diphosphate Drugs 0.000 description 2
- HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N glyoxylic acid Chemical compound OC(=O)C=O HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930029653 phosphoenolpyruvate Natural products 0.000 description 2
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N phosphoenolpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=C)OP(O)(O)=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZPLUZNXSYCCJOE-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.OP(O)(O)=O ZPLUZNXSYCCJOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- LMOIEPYPVQOZCT-DFWYDOINSA-N (2R)-2,3-dihydroxypropanal phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)C=O LMOIEPYPVQOZCT-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 6-Phospho-D-gluconate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 1
- 102000004567 6-phosphogluconate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020001657 6-phosphogluconate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100028207 6-phosphogluconate dehydrogenase, decarboxylating Human genes 0.000 description 1
- 108010092060 Acetate kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000382839 Cupriavidus oxalaticus Species 0.000 description 1
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108700033381 EC 1.1.1.42 Proteins 0.000 description 1
- 108700035000 EC 1.1.1.94 Proteins 0.000 description 1
- 102100031375 Endothelial lipase Human genes 0.000 description 1
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012011 Isocitrate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010075869 Isocitrate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 108010064700 L-arabinitol 4-dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-L NADH(2-) Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-L 0.000 description 1
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-J NADPH(4-) Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-J 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102100032967 Phospholipase D1 Human genes 0.000 description 1
- 101710163410 Probable glycerol kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000147083 Streptomyces chromofuscus Species 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N acetaldehyde Chemical compound [14CH]([14CH3])=O IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 1
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229940045189 glucose-6-phosphate Drugs 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 108090000471 glyoxylate dehydrogenase (acylating) Proteins 0.000 description 1
- YUDNQQJOVFPCTF-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetone phosphate Chemical compound CC(=O)COP(O)(O)=O YUDNQQJOVFPCTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODBLHEXUDAPZAU-UHFFFAOYSA-N isocitric acid Chemical compound OC(=O)C(O)C(C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940116298 l- malic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N semicarbazide Chemical compound NNC(N)=O DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
め要約のデータは記録されません。
Description
検査等におけるL−グリセロール−3−リン酸またはジ
ヒドロキシアセトンリン酸の酵素サイクリング反応を用
いた新規な高感度定量法および定量用組成物に関する。
には化学法に代わり、より特異性の高い酵素法が普及し
つつある。L−グリセロール−3−リン酸を測定する方
法としては、グリセロール−3−リン酸オキシダーゼ(
EC 1.1.3.21)を用いて、生じた過酸化水
素をペルオキシダーゼ反応等を用いて検出可能な物質に
変換する方法、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
(ホスフエート)(NAD(P))の存在下にグリセロ
ール−3−リン酸デヒドロゲナーゼ(EC 1.1.
1.8、EC 1.1.1.94)を用いて還元型補
酵素の340nmにおける吸収を分光学的に測定する方
法等が知られており、これらの方法は、例えば血清中の
トリグリセライドやグリセロールを測定する際に、L−
グリセロール−3−リン酸を生成する他の酵素反応系と
併せて、共役反応系として用いられている。
ドロゲナーゼは下記の反応を触媒する酵素である。
グリセロール−3−リン酸を定量するときのように、正
反応の方向に反応を進行させるためには、反応液のpH
を9〜10のアルカリ側にし、しかも、生成物であるジ
ヒドロキシアセトンリン酸を反応系から除去することが
必要になる。このためには、反応液にヒドラジンやセミ
カルバジド等の捕捉剤を加え正反応を促進させなければ
ならない。また、生成した還元型NAD(P)をジアホ
ラーゼ、ニトロブルーテトラゾリウムを用いてホルマザ
ン色素とし、測定する方法もあるが、この色素は不溶性
であり、自動分析器には適さない。グリセロール−3−
リン酸デヒドロゲナーゼは、その逆反応を利用して、ジ
ヒドロキシアセトンリン酸の定量のためにも用いられる
。この反応系はアルドラーゼ(EC 4.1.2.1
3)、トリオ−スリン酸イソメラーゼ(EC 5.3
.1.1)活性測定等に活用されている。
定しようとする対象物質を分光学的に検出可能な過酸化
水素や還元型NAD(P)等に変換することが行われ、
この場合、検出可能な物質の量は化学量論的に測定対象
物と等しくなる。現在、この検出可能な物質を測定する
方法としては、分光分析機器を用いる方法が最も普及し
ているが、これも感度上に限界があり、測定対象物の含
量が少ない場合適さないという欠点があった。そこで、
測定対象物の含量が少ない場合や、測定対象物を含む被
検体が少量の場合等は、分光分析よりも感度の優れた蛍
光分析、発光分析等が行われている。しかしながら、こ
れらの方法も臨床検査等の汎用検査においては、機器の
普及という点からはあまり適したものではなかった。
としては、該物質が等量の補酵素等に変換できる場合、
2種類の酵素を用いて補酵素等を増幅する、いわゆる酵
素サイクリング法が知られている。例えば、NADサイ
クリング、CoAサイクリング、ATPサイクリングな
どがあるが、これらの方法は臨床検査等のルーチン分析
においては、操作が煩雑なため、殆ど用いられていない
のが現状であった。しかしながら、最近、グリセロール
−3−リン酸オキシダーゼ及びグリセロール−3−リン
酸デヒドロゲナーゼを組合せた、操作の簡便な酵素サイ
クリング反応によるL−グリセロール−3−リン酸また
はジヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量法が報告さ
れているが(特公平2−20239号)、これらは具体
的には、該サイクリング反応によって減少する還元型N
ADの量または増加する過酸化水素量を検出するもので
あり、還元型NADの340nmにおける吸光度の減少
を分光学的に測定する以外には、別の検出のための反応
系を組み合わせて、これらの変化量を検出しなければな
らない。
定対象物の含量が少ない場合はもとより、測定に必要な
検体量を減らすことができるため、例えば血清のように
種々の成分を含むものを被検体に用いる場合は、その測
定系に及ぼす共存物質の影響を小さくすることができる
。また、ある限られた被検体量で検査できる項目数を増
やすことも可能である。更に、検体が人血液である場合
などは、採血量を減らすことができるため、被採血者へ
の心理的な負担を軽減することもできるし、廃棄物の減
少により環境汚染を軽減することに貢献することにもな
る。
セロール−3−リン酸及びジヒドロキシアセトンリン酸
の酵素を用いた測定について種々の方法が知られており
、酵素サイクリング法による高感度な測定法も報告され
ているが、それらの欠点を有さない更に簡便で高感度な
方法が望まれている。
題点につき鋭意検討した結果、L−グリセロール−3−
リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の定量におい
て、チオニコチンアミドアデニンジヌクレオチド類(以
下、チオNAD類という)およびチオニコチンアミドア
デニンジヌクレオチドホスフエート類(以下、チオNA
DP類という)からなる群より選ばれた一つと、ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド類(以下、NAD類と
いう)およびニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホ
スフエート類(以下、NADP類という)からなる群よ
り選ばれた一つの補酵素に作用するグリセロール−3−
リン酸デヒドロゲナーゼおよびチオNAD(P)類とN
AD(P)類との2種の補酵素を用いることにより、サ
イクリング反応を形成せしめることを見出し、かつその
反応後における吸光度の測定に際し、NAD(P)類の
アナログであるチオNAD(P)類とNAD(P)類の
還元型吸収波長がそれぞれ400nm付近、340nm
付近と異なつていることを利用し、他物質の吸収波長の
混雑が回避できる酵素サイクリング反応が実施でき、高
感度な測定が可能であることを確認し、本発明を完成す
るに至った。
ナーゼを用いた酵素サイクリング反応を実施するに当り
、上記二種類の補酵素の一つにチオNAD(P)類を使
用して、どちらか一方の補酵素の変化量のみを分別定量
するものであり、その結果、L−グリセロール−3−リ
ン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸を高感度に測定
できるものである。
成されたものであって、L−グリセロール−3−リン酸
またはジヒドロキシアセトンリン酸を含有する被検液に
、(1)チオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホ
スフエート類(以下チオNADP類という)及びチオニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチド類(以下チオNA
D類という)からなる群より選ばれた一つと、ニコチン
アミドアデニンジヌクレオチドホスフエート類(以下N
ADP類という)及びニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチオド類(以下NAD類という)からなる群より選ば
れる一つとを補酵素とし、少なくともL−グリセロール
−3−リン酸を基質としてジヒドロキシアセトンリン酸
を生成する可逆反応をなすグリセロール−3−リン酸デ
ヒドロゲナーゼ、(2)A1、(3)B1、を含有する
試薬を作用せしめて、次の反応式
、NADP類またはNAD類を示し、A2はA1の還元
型生成物を示し、B1はA1がチオNADP類またはチ
オNAD類のときは還元型NADP類または還元型NA
D類を、A1がNADP類またはNAD類のときは還元
型チオNADP類または還元型チオNAD類を示し、B
2はB1の酸化型生成物を示す)で表されるサイクリン
グ反応を形成せしめ、該反応によって変化するA2また
はB1の量を測定することを特徴とするL−グリセロー
ル−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の高
感度定量法を提供するものである。
) (1)チオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホス
フエート類(以下チオNADP類という)及びチオニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド類(以下チオNAD
類という)からなる群より選ばれた一つと、ニコチンア
ミドアデニンジヌクレオチドホスフエート類(以下NA
DP類という)およびニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチド類(以下NAD類という)からなる群より選ばれ
た一つとを補酵素とし、少なくともL−グリセロール−
3−リン酸を基質としてジヒドロキシアセトンリン酸を
生成する可逆反応をなすグリセロール−3−リン酸デヒ
ドロゲナーゼ、(2)A1、(3)B1、(但し、A1
はチオNADP類、チオNAD類、NADP類またはN
AD類を示し、A2はA1の還元型生成物を示し、B1
はA1がチオNADP類またはチオNAD類のときは還
元型NADP類または還元型NAD類を、A1がNAD
P類またはNAD類のときは還元型チオNADP類また
は還元型チオNAD類を示す)を含有することを特徴と
するL−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシ
アセトンリン酸の定量用組成物を提供するものである。
−3−リン酸デヒドロゲナーゼとは少なくともL−グリ
セロール−3−リン酸+NAD(P)+ =ジヒドロキ
シアセトンリン酸+NAD(P)H+H+ なる反応を
触媒するものであって、チオNADP類およびチオNA
D類からなる群より選ばれた一つと、NADP類および
NAD類からなる群より選ばれた一つを補酵素とするも
のなら特に限定されない。
ツカロミセス カールスベルゲンシス(Saccha
romyces carlsbergensis)等
に由来するNADに特異的な酵素(EC 1.1.1
.8)と、NADおよびNADP両方の補酵素に作用す
る大腸菌(E.Coli)由来の酵素(EC 1.1
.1.94)が知られている(酵素ハンドブツク、p3
、p35、朝倉書店(1983)。このうち、ウサギ筋
肉由来の酵素は例えば、ベーリンガーマンハイム社、シ
グマ社より市販されており、補酵素に対する相対活性は
100mMトリス塩酸(pH9.5)ではNADを用い
た時を100%とすると、チオNADで2%程度であり
、NADPには作用しない。NADPについては、逆反
応で10%程度の活性を示すという報告もある(臨床酵
素ハンドブツク、p260、講談社(1982))。他
の起源の酵素についても適宜系に使用可能であり、使用
する酵素の補酵素NAD(P)類、チオNAD(P)類
に対する特異性としては、基質であるL−グリセロール
−3−リン酸に対して反応性を有するものであればよく
、そのような酵素の性質はこれら補酵素と基質を用いて
確認できるものである。
オNADP類、チオNAD類、NADP類、NAD類を
示すが、チオNADP類またはチオNAD類としては、
例えばチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホス
フエート(チオNADP)、チオニコチンアミドヒポキ
サンチンジヌクレオチドホスフエート、およびチオニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド(チオNAD)、チ
オニコチンアミドヒポキサンチンジヌクレオチドが挙げ
られる。
例えばニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフエ
ート(NADP)、アセチルピリジンアデニンジヌクレ
オチドホスフエート(アセチルNADP)、アセチルピ
リジンヒポキサンチンジヌクレオチドホスフエート、ニ
コチンアミドヒポキサンチンジヌクレオチドホスフエー
ト(デアミノNADP);及びニコチンアミドアデニン
ヌクレオチド(NAD)、アセチルピリジンアデニンジ
ヌクレオチド(アセチルNAD)、アセチルピリジンヒ
ポキサンチンジヌクレオチド、ニコチンアミドヒポキサ
ンチンジヌクレオチド(デアミノNAD)が挙げられる
。
1がチオNAD(P)類である場合、B1はNAD(P
)H類であることが必要であり、A1およびB1の関係
において一つのチオ型補酵素を使用するものである。又
、定量に用いるグリセロール−3−リン酸デヒドロゲナ
ーゼが(チオ)NAD類のみを補酵素とする場合は、上
述のチオNAD類とNAD類より、また、用いるグリセ
ロール−3−リン酸デヒドロゲナーゼが(チオ)NAD
P類のみを補酵素とする場合は、上述のチオNADP類
及びNADP類より、また用いるグリセロール−3−リ
ン酸デヒドロゲナーゼが(チオ)NAD類及び(チオ)
NADP類を共に補酵素とする場合は、上述のチオNA
D類およびチオNADP類と上述のNAD類およびNA
DP類より適宜選択して用いればよい。
中にもともと含有されているL−グリセロール−3−リ
ン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸を測定すること
ができるが、更に、これらの物質を遊離または生成する
酵素系における基質や、その酵素活性を測定することも
できる。更に、本発明の高感度定量法を用いれば、上記
のようなL−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロ
キシアセトンリン酸を遊離、または生成する酵素系と連
結し得る、単一の、もしくは複数の工程からなる酵素系
における基質や、その酵素活性をも測定することができ
る。これらの酵素系は、特に限定されるものではないが
、例えば以下に示す種々の酵素の反応系が挙げられる。
する酵素反応系: (1)ATP、グリセロールとグリセロキナーゼ(EC
2.7.1.30)の酵素反応系によって遊離、生
成するL−グリセロール−3−リン酸を定量するための
もの。 グリセロール+ATP→L−グリセロール−3−リン酸
+ADP (2)上記(1)の酵素反応系におけるグリセロールが
ホスフアチジルグリセロールとホスホリパーゼD(EC
3.1.4.4)の酵素反応系由来である場合ホス
フアチジルグリセロール+H2 O→グリセロール+ホ
スフアチジン酸 (3)上記(1)の酵素反応系におけるグリセロールが
、モノ、ジまたはトリグリセライドとリパーゼ(EC
3.1.1.3)の酵素反応系由来である場合
20】グリセライド+nH2 O→n脂肪酸+グリセロ
ール (4)上記(1)の酵素反応系におけるATPが、クレ
アチンリン酸、ADPとクレアチンキナーゼ(EC
2.7.3.2)の酵素反応系由来である場合クレアチ
ンリン酸+ADP→クレアチン+ATP(5)上記(1
)の酵素反応系におけるATPが、ホスフオエノールピ
ルビン酸、ADPとピルビン酸キナーゼ(EC 2.
7.1.40)の酵素反応系由来である場合 ホスフオエノールピルビン酸+ADP→ピルビン酸+A
TP (6)上記(1)の酵素反応系におけるATPが、アセ
チルリン酸、ADPと酢酸キナーゼ(EC 2.7.
2.1)の酵素反応系である場合 アセチルリン酸+ADP→酢酸+ATP
ヒドロキシアセトンリン酸を遊離、生成する酵素反応系
: (7)フルクトース−1,6−ジリン酸とフルクトース
ジリン酸アルドラーゼ(EC 4.1.2.13)の
酵素反応系によって遊離、生成するジヒドロキシアセト
ンリン酸を定量するためのもの フルクトース−1,6−ジリン酸→D−グリセロアルデ
ヒド−3−リン酸+ジヒドロキシアセトンリン酸(8)
D−グリセロアルデヒド−3−リン酸とトリオースホス
フエートイソメラーゼ(EC 5.3.1.1)の酵
素反応系由来である場合 D−グリセロアルデヒド−3−リン酸→ジヒドロキシア
セトンリン酸
セロール−3−リン酸とヒドロキシアセトンリン酸の合
計量に比較して過剰量であること、かつグリセロール−
3−リン酸デヒドロゲナーゼのA1及びB1それぞれに
対するKm値に比較して過剰量であることが必要であり
、特にL−グリセロール−3−リン酸とジヒドロキシア
セトンリン酸の合計量の20〜10000倍モルが好ま
しい。本発明のL−グリセロール−3−リン酸またはジ
ヒドロキシアセトンリン酸定量用組成物においては、A
1及びB1の濃度は0.02〜100mM、特に0.0
5〜20mMが好ましく、グリセロール−3−リン酸デ
ヒドロゲナーゼの量は10〜1000u/ml、特に2
0〜400u/mlが好ましいが、その量は被検体の種
類等により適宜決定することができ、これ以上の量を用
いることもできる。
方法も包含するものである。即ち、本発明はL−グリセ
ロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸
を含有する被検液に、(1)チオNADP類及びチオN
AD類からなる群より選ばれた一つと、NADP類及び
NAD類からなる群より選ばれる一つとを補酵素とし、
少なくともL−グリセロール−3−リン酸を基質として
ジヒドロキシアセトンリン酸を生成する可逆反応をなす
グリセロール−3−リン酸デヒドロゲナーゼ、(2)A
1、(3)B1または/およびB2、(4)L−グリセ
ロール−3−リン酸に作用せず、B2からB1への反応
を形成する第二のデヒドゲロゲナーゼ及び該第二のデヒ
ドロゲナーゼの基質、を含有する試薬を作用せしめて、
次の反応式
P類またはNAD類を示し、A2はA1の還元型生成物
を示し、B1はA1がチオNADP類またはチオNAD
類のときは還元型NADP類または還元型NAD類を、
A1がNADP類またはNAD類のときは還元型チオN
ADP類または還元型チオNAD類を、B2はB1の酸
化型生成物を示し、B2からB1への反応はB2を補酵
素として第二のデヒドロゲナーゼにてB1を生成する酵
素反応を示す)で表されるサイクリング反応を形成せし
め、該反応によって変化するA2の量を測定することを
特徴とするL−グリセロール−3−リン酸またはジヒド
ロキシアセトンリン酸の高感度定量法である。
、グリセロール−3−リン酸デヒドロゲナーゼがNAD
類及びNADP類を共に補酵素とする場合、2つの補酵
素にチオNAD類とNAD類もしくはNADP類との組
合せ、またはチオNADP類とNAD類もしくはNAD
P類との組合せを選んだときには、さらに、被検体に(
4)成分のL−グリセロール−3−リン酸に作用せず、
B2からB1への反応を形成する第二のデヒドロゲナー
ゼ及び該第二のデヒドロゲナーゼの基質を作用せしめる
ことにより、後記反応式(II)のごとく、B1とB2
の間にB1の再生のための反応系を付与せしめることに
より当該サイクリング反応を形成させるのである。
ては、この測定系において実質的にA1に作用し得ない
条件を設定することが好ましく、そのためには、例えば
A1を本質的に補酵素として利用しない酵素を選択する
組合せ、A1とB2の量的関係により第二のデヒドロゲ
ナーゼが実質的にA1に作用しない条件を選択する組合
せ等により条件を設定することができる。定量に際して
は反応により生成したA2の量を測定する。
P類またはNAD類を示し、A2はA1の還元型生成物
を示し、B1はA1がチオNADP類またはNAD類の
ときは還元型チオNAD類または還元型NAD類を、A
1がチオNAD類またはNAD類のときは還元型チオN
ADP類または還元型NADP類を示し、B2はB1の
酸化型生成物を示し、B2からB1への反応はB2を補
酵素としてB1を生成する酵素反応を示す)
】上記の成分(4)を用いるL−グリセロール−3−リ
ン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸定量用組成物に
おいて、A1の濃度は0.02〜100mM、特に0.
05〜20mMが好ましく、B2または/及びB1の濃
度は0.05〜5000μM、特に5〜500μMが好
ましい。L−グリセロール−3−リン酸デヒドロゲナー
ゼの濃度は10〜1000u/ml、特に20〜500
u/mlが好ましく、第二のデヒドロゲナーゼはB2に
対するKm値(mM単位)の20倍量(u/ml単位)
以上になるように調製すればよく、例えば1〜100u
/mlが好ましく、また第二のデヒドロゲナーゼの基質
は過剰量、例えば0.05〜20mMが好ましい。これ
らの量は被検体の種類等により適宜決定することができ
、これ以上の量を用いることもできる。
めに補助的に添加するものであり、これによってB1の
使用量を少なくすることが可能となり、特にB1が高価
な場合は有効である。又、B1の代わりにB2あるいは
B1とB2の混合物を用いて反応を行つてもよい。この
場合、B1または/及びB2の使用量は特に限定される
ものではないが、一般的にはA1の1/10モル以下が
好ましい。
ては、例えばB2がNAD類またはチオNAD類のとき
は、アルコールデヒドロゲナーゼ(EC 1.1.1
.1)とエタノール、グリセロールデヒドロゲナーゼ(
EC 1.1.1.6)(E.Coli由来)とグリ
セロール、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ(EC 1.1
.11.37)(ブタ心筋、ウシ心筋由来)とL−リン
ゴ酸、グリセロアルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼ(E
C 1.1.1.12)(ウサギ骨格筋、肝、酵母、
E.Coli由来)とD−グリセロアルデヒドリン酸と
リン酸。
ときは、グルコース−6−リン酸デヒドロゲナーゼ(E
C 1.1.1.49)(酵母由来)とグルコース−
6−リン酸、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ(EC
1.1.1.42)(酵母、ブタ心筋由来)とイソクエ
ン酸、グリオキシル酸デヒドロゲナーゼ(EC1.2.
1.17)(Pseudomonas oxalat
icus由来)CoAとグリオキシル酸、ホスホグルコ
ン酸デヒドロゲナーゼ(EC 1.1.1.44)(
ラツト肝、ビール酵母、E.Coli由来)と6−ホス
ホ−D−グルコン酸、グリセロアルデヒドリン酸デヒド
ロゲナーゼ(EC 1.2.1.13)(植物葉緑体
由来)とD−グリセロアルデヒド−3−リン酸とリン酸
、ベンズアルデヒドデヒドロゲナーゼ(EC 1.2
.1.7)(pseudomonas fluore
scens由来)とベンズアルデヒド等が挙げられる。
下の各方法もまた本発明に包含される。即ち、本発明は
L−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセ
トンリン酸を含有する被検液に、(1)チオNADP類
及びチオNAD類からなる群より選ばれた一つと、NA
DP類及びNAD類からなる群より選ばれる一つとを補
酵素とし、少なくともL−グリセロール−3−リン酸を
基質としてジヒドロキシアセトンリン酸を生成する可逆
反応をなすグリセロール−3−リン酸デヒドロゲナーゼ
、(2)A1または/およびA2、(3)B1、(5)
L−グリセロール−3−リン酸に作用せず、A2からA
1への反応を形成する第三のデヒドゲロゲナーゼ及び該
第三のデヒドロゲナーゼの基質、を含有する試薬を作用
せしめて、次の反応式(III)
P類またはNAD類を示し、A2はA1の還元型生成物
を示し、B1はA1がチオNADP類またはチオNAD
類のときは還元型NADP類または還元型NAD類を、
A1がNADP類またはNAD類のときは還元型チオN
ADP類または還元型チオNAD類を示し、B2はB1
の酸化型生成物を示し、A2からA1への反応はA2を
補酵素として第三のデヒドロゲナーゼにてA1を生成す
る酵素反応を示す)で表されるサイクリング反応を形成
せしめ、該反応によって変化するB1の量を測定するこ
とを特徴とするL−グリセロール−3−リン酸またはジ
ヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量法である。
1)チオNADP類及びチオNAD類からなる群より選
ばれた一つと、NADP類及びNAD類からなる群より
選ばれる一つとを補酵素とし、少なくともL−グリセロ
ール−3−リン酸を基質としてジヒドロキシアセトンリ
ン酸を生成する可逆反応をなすL−グリセロール−3−
リン酸デヒドロゲナーゼ、 (2)A1、(3)B1または/およびB2、(4)L
−グリセロール−3−リン酸に作用せず、B2からB1
への反応を形成する第二のデヒドゲロゲナーゼ及び該第
二のデヒドロゲナーゼの基質、
D類、NADP類またはNAD類を示し、A2はA1の
還元型生成物を示し、B1はA1がチオNADP類また
はチオNAD類のときは還元型NADP類または還元型
NAD類を、A1がNADP類またはNAD類のときは
還元型チオNADP類または還元型チオNAD類を示し
、B2はB1の酸化型生成物を示す)を含有することを
特徴とするL−グリセロール−3−リン酸またはジヒド
ロキシアセトンリン酸の定量用組成物である。
)および(5) (1)チオNADP類及びチオNAD類からなる群より
選ばれた一つと、NADP類及びNAD類からなる群よ
り選ばれる一つとを補酵素とし、少なくともL−グリセ
ロール−3−リン酸を基質としてジヒドロキシアセトン
リン酸を生成する可逆反応をなすL−グリセロール−3
−リン酸デヒドロゲナーゼ、(2)A1または/および
A2、(3)B1、(5)L−グリセロール−3−リン
酸に作用せず、A2からA1への反応を形成する第三の
デヒドゲロゲナーゼ及び該第三のデヒドロゲナーゼの基
質、
D類、NADP類またはNAD類を示し、A2はA1の
還元型生成物を示し、B1はA1がチオNADP類また
はチオNAD類のときは還元型NADP類または還元型
NAD類を、A1がNADP類またはNAD類のときは
還元型チオNADP類または還元型チオNAD類を示し
、B2はB1の酸化型生成物を示す)を含有することを
特徴とするL−グリセロール−3−リン酸またはジヒド
ロキシアセトンリン酸の定量用組成物である。
量組成物においては、グリセロール−3−リン酸デヒド
ロゲナーゼがNAD類及びNADP類を共に補酵素とす
る場合、2つの補酵素にチオNAD類とNAD類もしく
はNADP類との組合せ、または、チオNADP類とN
AD類もしくはNADP類との組合せを選んだときには
、更に被検体に(5)成分のL−グリセロール−3−リ
ン酸に作用せず、A2からA1への反応を形成する第三
のデヒドロゲナーゼ及び該第三のデヒドロゲナーゼの基
質を作用せしめることにより、後記反応式(III)の
ごとく、A1とA2の間にA1の再生のための反応系を
付与せしめることにより当該サイクリング反応を形成さ
せるのである。
ては、この測定系において実質的にB1に作用し得ない
条件を設定することが好ましく、そのためには、例えば
B1を本質的に補酵素として利用しない酵素を選択する
組合せ、B1とA2の量的関係により第三のデヒドロゲ
ナーゼが実質的にB1に作用しない条件を選択する組合
せ等により条件を設定することができ、定量に際しては
B1の消費量を測定する。
、NADP類またはNAD類を示し、A2はA1の還元
型生成物を示し、B1はA1がチオNADP類またはN
ADP類のときは還元型チオNAD類または還元型NA
D類を、A1がチオNAD類またはNAD類のときは還
元型チオNADP類または還元型NADP類を示し、B
2はB1の酸化型生成物を示し、A2からA1への反応
はA2を補酵素としてA1を生成する酵素反応を示す)
−3−リン酸またはジドロキシアセトンリン酸定量用組
成物において、B1の濃度は0.02〜100mM、特
に0.05〜20mMが好ましく、A2または/及びA
1の濃度は0.05〜5000μM、特に5〜500μ
Mが好ましい。グリセロール−3−リン酸デヒドロゲナ
ーゼの濃度は10〜1000u/ml、特に20〜50
0u/mlが好ましく、第三のデヒドロゲナーゼはA2
に対するKm値(mM単位)の20倍量(u/ml単位
)以上になるように調製すればよく、例えば1〜100
u/mlが好ましく、また第三のデヒドロゲナーゼの基
質は過剰量、例えば0.05〜20mMが好ましく、ま
た第三のデヒドロゲナーゼの基質は過剰量、例えば0.
05〜20mMが好ましい。これらの量は被検体の種類
等により適宜決定することができ、これ以上の量を用い
ることもできる。
めに補助的に添加するものであり、これによってA1の
使用量を少なくすることが可能となり、特にA1が高価
な場合には有効である。また、A1の代わりにA2ある
いはA1とA2の混合物を用いて反応を行ってもよい。 この場合、A1または/及びA2の使用量は特に限定さ
れるものではないが、一般的にはB1の1/10モル以
下が好ましい。
えば、A1がNAD類またはチオNAD類のときは、ア
ルコールデヒドロゲナーゼ(EC 1.1.1.1)
とアセトアルデヒド、グリセロールデヒドロゲナーゼ(
EC 1.1.1.6)(E.Coli由来)とジヒ
ドロキシアセトン、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ(EC
1.1.1.37)(ブタ心筋、ウシ心筋由来)とオ
キザロ酢酸、グリセロアルデヒドリン酸デヒドロゲナー
ゼ(EC 1.1.1.12)(ウサギ骨格筋、肝、
酵母、E.Coli由来)と1,3−ジホスホ−D−グ
リセリン酸。
ときは、グルコース−6−リン酸デヒドロゲナーゼ(E
C 1.1.1.49)(酵母由来)とグルコノラク
トン−6−リン酸、グリセロアルデヒドリン酸デヒドロ
ゲナーゼ(EC 1.2.1.13)(植物葉緑体由
来)と1,3−ジホスホ−D−グリセリン酸等が挙げら
れる。
ール−3−リン酸デヒドロゲナーゼの各種補酵素間の相
対活性等を考慮して2種の補酵素を適宜選択し、その後
正反応/逆反応の至適pH条件を酵素サイクリング反応
が効率よく進行するように設定すればよい。これら使用
する酵素は単独でも、あるいは適宜2種以上を組み合わ
せて用いてもよい。斯くして、調製された本発明のL−
グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトン
リン酸定量用組成物によって被検体中のL−グリセロー
ル−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸を測
定するには、上記成分(1)〜(3)、(1)〜(4)
、あるいは(1)〜(3)及び(5)を含有する組成物
に被検体0.001〜0.5mlを加え、約37℃の温
度にて反応させ、反応開始一定時間後の2点間の数分な
いし数十分間、例えば3分後と4分後の1分間、または
3分後と8分後の5分間における生成されたA2の量ま
たは消費されたB1の量を、それぞれの吸収波長に基づ
く吸光度の変化によつて測定すればよい。
DHの場合、A2の生成を400nm付近の吸光度の増
加により測定するか、あるいはB1の消費を340nm
付近の吸光度の減少により測定し、既知濃度のL−グリ
セロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン
酸を用いて測定したときの値と比較すれば、被検液中の
L−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセ
トンリン酸量をリアルタイムで求めることができる。
リセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリ
ン酸そのもを酵素サイクリング反応に導くものであり、
被検液中の共存物質の影響を受けにくいため、被検液の
ブランク測定を省略することができ、レイトアツセイに
よる簡便な測定を成し得る。尚、本発明においてはA2
またはB1の測定に当り、吸光度測定の代わりに他の公
知の測定法を使用して定量を行うことができる。
長の異なる補酵素を用いるため測定誤差が生じず、また
、酵素のサイクリング反応を組合せることによつて感度
を増大させることができるため、少量の検体で迅速かつ
正確に被検体中のL−グリセロール−3−リン酸または
ジヒドロキシアセトンリン酸を定量することができる。
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例 1 L−グリセロール−3−リン酸の定量 <反応液> 40 mM グリシンNaOH緩衝液(pH10.
0)4 mM チオNAD(シグマ社製)0.1
mM 還元型NAD(オリエンタル酵母社製)2
mM EDTA 200u/ml グリセロール−3−リン酸デヒドロ
ゲナーゼ(ベーリンガー社製:ウサギ筋肉由来)
50】<操作>上記試薬1mlをキユベツトにとり、0
、20、40、60、80、100μMのL−グリセロ
ール−3−リン酸(ベーリンガー社製)溶液をそれぞれ
20μl添加し、37℃にて反応を開始させた。 反応開始後2分目と5分目の400nmにおける吸光度
を読み取り、その差を求めた。その結果を図1に示した
。図1から明らかなように、L−グリセロール−3−リ
ン酸量に対する吸光度変化量は良好な直線性を示した。
mM ATP(シグマ社製) 1 mM 塩化マグネシウム 0.3u/ml グリセロールキナーゼ(東洋醸造社
製:ストレプトマイセスカナス(Streptomyc
es canus)由来)
.0) 8 mM チオNAD(シグマ社製)0.2 m
M 還元型NAD(オリエンタル酵母社製)5 m
M EDTA 400u/ml グリセロール−3−リン酸デヒドロ
ゲナーゼ(ベーリンガー社製:ウサギ筋肉由来)
53】<操作>上記の反応液(1)0.5mlをキユベ
ツトにとり、0、20、40、60、80、100μM
のグリセロール溶液をそれぞれ20μl 添加し、37
℃に加温した。グリセロール添加後2分目に反応液(2
)を0.5ml添加し、37℃にて酵素サイクリング反
応を開始した。反応液(2)添加後2分目と5分目の4
00nmにおける吸光度を読み取り、そのを求めた。 その結果を図2に示した。図2から明らかなように、グ
リセロール量に対する吸光度変化量は良好な直線性を示
した。
反応液(1)> 20 mM トリス塩酸緩衝液(pH8.0)1
mM ATP(シグマ社製) 1 mM 塩化マグネシウム 1 mM 塩化カルシウム 0.3u/ml グリセロールキナーゼ(東洋醸造社
製:ストレプトマイセスカナス(Streptomyc
es canus)由来) 2u/ml ホスホリパーゼ−D(東洋醸造社製:ス
トレプトマイセスクロモフスカス(Streptomy
ces chromofuscus)由来)
5】<反応液(2)> 100 mM グリシンNaOH緩衝液(pH10
.0) 8 mM チオNAD(シグマ社製)0.16
mM 還元型デアミノNAD(シグマ社製)5 m
M EDTA 1360u/ml グリセロール−3−リン酸デヒド
ロゲナーゼ(ベーリンガー社製:ウサギ筋肉由来)
056】<操作>100mg/mlのL−α−ホスフア
チジル−DL−グリセロール溶液(クロロホルム:メタ
ノール(98:2))(シグマ社製)をエバポレータに
て蒸発乾固し、2500倍容の0.5%トリトンX−1
00(シグマ社製)溶液を用いて溶解させた(4.0μ
g/ml)。このものを水で希釈し0.8、1.6、2
.4、3.2、4.0μg/mlのL−α−ホスフアチ
ジル−DL−グリセロール溶液を調製した。
にとり、0.8、1.6、2.4、3.2、4.0μg
/mlのL−α−ホスフアチジル−DL−グリセロール
溶液をそれぞれ50μl 添加し、37℃に加温した。 L−α−ホスフアチジル−DL−グリセロール添加後5
分目に反応液(2)を0.5ml添加し、37℃にて酵
素サイクリング反応を開始した。反応液(2)添加後2
分目と7分目の400nmにおける吸光度を読み取り、
その差を求めた、その結果を図3に示した。図3から明
らかなように、L−α−ホスフアチジル−DL−グリセ
ロール量に対する吸光度変化量は良好な直線性を示した
。
クテリウム・ビスコサム(Chromobacteri
um viscosum)由来 5 mM 塩化カルシウム 1% トライトンX−10020 mM
トリス塩酸緩衝液(pH8.0)
液(2)> 20 mM トリス塩酸緩衝液(pH8.0)1
mM ATP(シグマ社製) 1 mM 塩化マグネシウム 0.3u/ml グリセロールキナーゼ(東洋醸造社
製:ストレプトマイセスカナス(Streptomyc
es canus)由来)
.0) 8 mM チオNAD(シグマ社製)0.2 m
M 還元型NAD(オリエンタル酵母社製)5 m
M EDTA 400u/ml グリセロール−3−リン酸デヒドロ
ゲナーゼ(ベーリンガー社製:ウサギ筋肉由来)
61】<操作>上記の反応液(1)0.2mlをキユベ
ツトにとり、37℃にて予備加熱した。3種類の血清サ
ンプルをそれぞれにつき4μl 各キユベツトに加え、
37℃にて反応を5分間行った。その後、反応液(2)
を0.3 ml 添加し、37℃にて3分間反応せしめ
た後に反応液(3)を0.5ml添加し、37℃にて酵
素サイクリング反応を開始した。反応液(3)添加後2
分目と5分目の400nmにおける吸光度を読み取り、
その差を求めた。試薬ブランクとして血清サンプルの代
わりに蒸留水を加えたものについて同様の測定を行った
。図2の標準曲線よりグリセロール量を求め、血清中の
トリグリセリド量を求めた結果を表1に示す。
クテリウム・ビスコサム(Chromobacteri
um viscosum)由来 5 mM 塩化カルシウム 1% トライトンX−10020 mM
トリス塩酸緩衝液(pH8.0)
液(2)> 20 mM トリス塩酸緩衝液(pH8.0)1
mM ATP(シグマ社製) 1 mM 塩化マグネシウム 0.3u/ml グリセロールキナーゼ(東洋醸造社
製:ストレプトマイセスカナス(Streptomyc
es canus)由来)
.0) 8 mM チオNAD(シグマ社製)0.2 m
M 還元型NAD(オリエンタル酵母社製)5 m
M EDTA 400u/ml グリセロール−3−リン酸デヒドロ
ゲナーゼ(ベーリンガー社製:ウサギ筋肉由来)
66】<操作>上記の反応液(1)0.2mlをキユベ
ツトにとり、37℃にて予備加熱した。3種類の血清サ
ンプルをそれぞれにつき4μl 各キユベツトに加え、
37℃にて反応を5分間行った。その後、反応液(2)
を0.3 ml 添加し、37℃にて3分間反応せしめ
た後に反応液(3)を0.5ml添加し、37℃にて酵
素サイクリング反応を開始した。反応液(3)添加後2
分目と5分目の400nmにおける吸光度を読み取り、
その差を求めた。試薬ブランクとして血清サンプルの代
わりに蒸留水を加えたものについて同様の測定を行った
。図2の標準曲線よりグリセロール量を求め、血清中の
トリグリセリド量を求めた結果を表1に示す。
る。
の定量曲線である。
Claims (6)
- 【請求項1】 被検体に、(1)チオニコチンアミド
アデニンジヌクレオチドホスフエート類(以下、チオN
ADP類という)およびチオニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチド類(以下、チオNAD類という)からなる
群より選ばれる一つと、ニコチンアミドアデニンジヌク
レオチドホスフエート類(以下、NADP類という)お
よびニコチンアミドアデニンジヌクレオチド類(以下、
NAD類という)からなる群より選ばれる一つとを補酵
素とし、少なくともL−グリセロール−3−リン酸を基
質としてジヒドロキシアセトンリン酸を生成する可逆反
応をなすグリセロール−3−リン酸デヒドロゲナーゼ、
(2)A1、(3)B1、を含有する試薬を作用せしめ
て、次の反応式 【化1】 (式中、A1はチオNADP類、チオNAD類、NAD
P類またはNAD類を示し、A2はA1の還元型生成物
を示し、B1はA1がチオNADP類またはチオNAD
類のときは還元型NADP類または還元型NAD類を、
A1がNADP類またはNAD類のときは還元型チオN
ADP類または還元型チオNAD類を示し、B2はB1
の酸化型生成物を示す)で表されるサイクリング反応を
形成せしめ、該反応によって変化するA2またはB1の
量を測定することを特徴とするL−グリセロール−3−
リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量
法。 - 【請求項2】 チオNADP類がチオニコチンアミド
アデニンジヌクレオチドホスフエート(チオNADP)
またはチオニコチンアミドヒポキサンチンジヌクレオチ
ドホスフエートである請求項1記載の高感度定量法。 - 【請求項3】 チオNAD類がチオニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド(チオNAD)またはチオニコチ
ンアミドヒポキサンチンジヌクレオチドである請求項1
記載の高感度定量法。 - 【請求項4】 NADP類がニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチドホスフエート(NADP)、アセチルピ
リジンアデニンジヌクレオチドホスフエート(アセチル
NADP)およびニコチンアミドヒポキサンチンジヌク
レオチドホスフエート(デアミノNADP)からなる群
より選ばれた補酵素である請求項1記載の高感度定量法
。 - 【請求項5】 NAD類がニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチド(NAD)、アセチルピリジンアデニンジ
ヌクレオチド(アセチルNAD)およびニコチンアミド
ヒポキサンチンジヌクレオチド(デアミノNAD)から
なる群より選ばれた補酵素である請求項1記載の高感度
定量法。 - 【請求項6】 次の成分(1)〜(3)(1)チオN
ADP類およびチオNAD類からなる群より選ばれた一
つと、NADP類およびNAD類からなる群より選ばれ
る一つとを補酵素とし、少なくともL−グリセロール−
3−リン酸を基質としてジヒドロキシアセトンリン酸を
生成する可逆反応をなすグリセロール−3−リン酸デヒ
ドロゲナーゼ、(2)A1、(3)B1、(式中、A1
はチオNADP類、チオNAD類、NADP類またはN
AD類を示し、A2はA1の還元型生成物を示し、B1
はA1がチオNADP類またはチオNAD類のときは還
元型NADP類または還元型NAD類を、A1がNAD
P類またはNAD類のときは還元型チオNADP類また
は還元型チオNAD類を示す)を含有することを特徴と
するL−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシ
アセトンリン酸の定量用組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP3138325A JP3036709B2 (ja) | 1991-05-14 | 1991-05-14 | L−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量法および定量用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP3138325A JP3036709B2 (ja) | 1991-05-14 | 1991-05-14 | L−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量法および定量用組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH04335899A true JPH04335899A (ja) | 1992-11-24 |
JP3036709B2 JP3036709B2 (ja) | 2000-04-24 |
Family
ID=15219269
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP3138325A Expired - Lifetime JP3036709B2 (ja) | 1991-05-14 | 1991-05-14 | L−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量法および定量用組成物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3036709B2 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0727495A3 (en) * | 1995-02-17 | 1996-11-06 | Kureha Chemical Ind Co Ltd | Quantification of inorganic phosphate and trehalose |
US6380380B1 (en) * | 1999-01-04 | 2002-04-30 | Specialty Assays, Inc. | Use of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) and nicotinamide adenine dinucliotide phosphate (NADP) analogs to measure enzyme activities metabolites and substrates |
JP4527925B2 (ja) * | 2000-02-08 | 2010-08-18 | シスメックス株式会社 | 腎障害の検査方法 |
-
1991
- 1991-05-14 JP JP3138325A patent/JP3036709B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0727495A3 (en) * | 1995-02-17 | 1996-11-06 | Kureha Chemical Ind Co Ltd | Quantification of inorganic phosphate and trehalose |
US6380380B1 (en) * | 1999-01-04 | 2002-04-30 | Specialty Assays, Inc. | Use of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) and nicotinamide adenine dinucliotide phosphate (NADP) analogs to measure enzyme activities metabolites and substrates |
JP4527925B2 (ja) * | 2000-02-08 | 2010-08-18 | シスメックス株式会社 | 腎障害の検査方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP3036709B2 (ja) | 2000-04-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5302513A (en) | Method for determination of components | |
EP0147713B1 (en) | Enzymatic atp and fmn assay | |
EP0632133B1 (en) | Highly sensitive determination of d-3-hydroxybutyric acid or acetoacetic acid and composition therefor | |
CA2291912A1 (en) | Method and reagent for quantitative determination of 1,5-anhydroglucitol | |
JP3036708B2 (ja) | D−グルコース−6−リン酸の高感度定量法および定量用組成物 | |
US5286627A (en) | Method of high-sensitive analysis of bile acid and reagent composition for the analysis | |
JPH04335899A (ja) | L−グリセロール−3−リン酸またはジヒドロキシアセトンリン酸の高感度定量法および定量用組成物 | |
JP3034987B2 (ja) | D−グリセロアルデヒド−3−リン酸、無機リン、または1,3−ジホスホグリセリン酸の高感度定量法および定量用組成物 | |
JPH02104298A (ja) | 1,5−アンヒドログルシトールの定量法 | |
JPH0220239B2 (ja) | ||
JPH08280399A (ja) | トレハロースまたは無機リンの定量法 | |
CS227331B2 (en) | Method of glycerol determination | |
JP3034986B2 (ja) | D−ソルビトール又はd−フルクトースの高感度定量法および定量用組成物 | |
JP3034984B2 (ja) | D−ガラクトースの高感度定量法および定量用組成物 | |
JP3034979B2 (ja) | グリセロール、ジヒドロキシアセトンまたはd−グリセロアルデヒドの高感度定量法および高感度定量用組成物 | |
JP2818696B2 (ja) | Nadhキナーゼを用いる高感度定量法 | |
JP3023700B2 (ja) | L―リンゴ酸又はオギザロ酢酸の高感度定量法及び定量用組成物 | |
JP2001078797A (ja) | グルコースおよび/またはグルコノ−1,5−ラクトン消去試薬 | |
US4349625A (en) | Method for assaying fatty acids | |
JP5633669B2 (ja) | Adpの測定方法およびadp測定用キット | |
JPS63116700A (ja) | 微量物質の分析方法 | |
JPH04346796A (ja) | 乳酸またはピルビン酸の高感度定量法および定量用組成物 | |
JPH0673477B2 (ja) | D―3―ヒドロキシ酪酸またはアセト酢酸の高感度定量法および定量用組成物 | |
JPH06253894A (ja) | 1,5−アンヒドログルシトールの定量法 | |
JPH04341198A (ja) | アルコール類またはアルデヒド類の高感度定量法および高感度定量用組成物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20000208 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080225 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090225 Year of fee payment: 9 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090225 Year of fee payment: 9 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090225 Year of fee payment: 9 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100225 Year of fee payment: 10 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110225 Year of fee payment: 11 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110225 Year of fee payment: 11 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120225 Year of fee payment: 12 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120225 Year of fee payment: 12 |