JPH04211696A - アミカシン前駆体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、化５（Ａ）で表わされ
るＯ−３−アミノ−３−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラ
ノシル−（１→６）−Ｏ−［６−アミノ−６−デオキシ
−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−Ｎ１　−
（４−アミノ−２−ヒドロキシ−１−オキソブチル）−
２−デオキシ−Ｄ−ストレプタミンの前駆体の合成に関
するものである。

【０００２】

【化５】

【０００３】

【従来の技術】化５（Ａ）の化合物は米国特許第３，７
８１，２６８号公報に記載された半合成的抗生物質であ
り、以下の記載においては国際的に非専有なものとされ
ている名称である「アミカシン」と呼ぶことにする。

【０００４】アミカシンは一般名「カナマイシンＡ」と
以下に指定された化６（Ｂ）で表わされるＯ−３−アミ
ノ−３−デオキシ−アルファ−デイ−グルコピラノシル
−（１→６）−Ｏ−［６−アミノ−６−デオキシ−α−
Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−２−デオキシ−
Ｄ−ストレプタミンの１位のアミノ基のアシル化による
生成物である。

【０００５】

【化６】

【０００６】カナマイシンＡは化６（Ｂ）で表わされる
化合物と同様に、その誘導体である化７（Ｃ）で表わさ
れるＬ−（−）−４−アミノ−２−ヒドロキシ酪酸を含
む。

【０００７】

【化７】

【０００８】上記の米国特許第３，７８１，２６８号に
よれば、アミカシンは６’−Ｎ−モノベンジルオキシカ
ルボニルカナマイシンＡとＬ−（−）−Ｎ−ベンジルオ
キシカルボニル−４−アミノ−２−ヒドロキシ酪酸の活
性エステルとの処理、好ましくはそのエステルと化８（
Ｄ）のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドとの処理により、

【０００９】

【化８】

【００１０】さらにこれによって得られる１−Ｎ−［Ｌ
−（−）−４−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−
ヒドロキシブチリル］−６’−Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニルカナマイシンＡの水素化分解によって調製される
。

【００１１】さらに、他のもっと有利なアミカシンの製
造方法が提案されている。すなわち、それらの方法はカ
ナマイシンＡに存在する他の反応基の保護を提供する。 なぜなら、米国特許第３，７８１，２６８号に開示され
ている６’−ＮＨ２　基のみの保護だけでは、アミカシ
ンの収率が不十分なものになるからである。そこで、米
国特許第３，９７４，１３７号はアルデヒドによるアミ
ノ基の保護を提供し、また米国特許第４，３４７，３５
４号および第４，４２４，３４３号は全体的なシリル化
および部分的な脱シリル化よる保護を提供している。

【００１２】また、米国特許第４，１３６，２５４号お
よび第４，２３０，８４７号はカナマイシンＡの３位お
よび６’位にあるアミノ基の保護を開示している。この
場合の保護は、事前に他のアミノ基を、銅、ニッケル、
コバルト、およびカドミウムから選択された二価の遷移
金属により錯体化し、３位および６’位におけるＮ−保
護基を導入し、そして錯体化された金属を除去すること
によってなされるものである。類似の方法として、米国
特許第第４，２９７，４８５号に開示された方法がある
。この米国特許の方法は、事前に他のアミノ基の亜鉛に
よる錯体化、３位および６’位におけるＮ−保護基の導
入、そして錯体化された金属の除去からなるものである
。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】上記の文献によれば、
アミカシンの前駆体を与える反応性誘導体，化８（Ｄ）
による１−ＮＨ２　基の直接的アシル化を行ない、その
後に保護基を除去する（米国特許第４，１３６，２５４
号および第４，２３０，８４７号）か、または、トリフ
ルオロアセチル基によって３”−ＮＨ２　基を事前に保
護し、１位においてアシル化を行ない、そしてトリフル
オロアセチルおよびベンジルオキソカルボニル基とを除
去する（米国特許第第４，２９７，４８５号）ことによ
って、いずれの場合もアミカシンに添加される３，６’
−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡを得ることができる
。 前者の場合、３”位の遊離アミノ基の存在は直接的なア
シル化工程において好ましくない副反応を包含する。ま
た後者の場合、エチルトリフルオロアセテ−トを用いる
ことは、製造工程を困難なものにする。

【００１４】ヨーロッパ特許出願第２１８，２９２号は
アミカシンの製造方法を開示しており、この方法は３位
および６’位においてＮが保護されたカナマイシンＡを
、亜鉛、ニッケル、鉄、コバルト、マンガン、銅および
カドミウムから選択される金属カチオンで錯体化する工
程と、得られた錯体とＮ−保護化された酸，化７（Ｃ）
の反応性誘導体とを反応させる工程とを含む。この文献
によれば、出発基質の量に対する二価金属塩量のモル比
は、１：１から１０：１まで、好ましくは１：２から１
：６の範囲で変化させることができるが、特記されたプ
ロセスにおけるモル比は約１：３．５である。

【００１５】アミカシンの製造方法でもっとも重要な方
法の一つは、３，６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシン
Ａ、好ましくは３，６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニルカナマイシンＡの使用を含む。したがって、これ
らの中間反応物の製造方法の改良方法は非常に適当なも
のである。実際、米国特許第４，１３６，２５４号およ
び第４，２３０，８４７号は一端にあり、またむしろ汚
染物質としてある錯体化金属を使用する米国特許第４，
２９７，４８５号は他端に存在する。米国特許第４，２
９７，４８５号に用いられる亜鉛でさえも特別な回収処
理を必要とする。

【００１６】米国特許第４，２９７，４８５号によれば
、カナマイシンＡ／亜鉛の最適モル比は１．０３／４．
５５であるが、１．０３ミリモルのカナマイシンＡと１
．２４ミリモルの亜鉛アセテ−トジヒドレ−トを用いた
場合では３，６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル
カナマイシンＡの収率は５１％であった。これに対し、
ニッケル（ＩＩ）アセテ−トテトラヒドレ−トを錯体化
試薬として用いた場合の収率は７．３％であった（米国
特許第４，１３６，２５４号および第４，２３０，８４
７号）。

【００１７】

【課題を解決しようとする手段】カナマイシンＡをアル
ミニウム、すなわち三価金属および三価の金属のみと錯
体化させ、３位および６’位のアミノ酸のジ−Ｎ−アシ
ル化を行ない、そして最後に錯体を分解することによっ
て極めて容易に３，６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシ
ンＡを製造し得ることが現在見出されている。

【００１８】また驚くべきことに、そのような錯体の形
成における基質／アルミニウム塩のモル比は、１：１か
ら１：４までの範囲で可能であり、それ以上のモル比で
ある必要はないこともわかった。

【００１９】さらに、アルミニウム錯体の３，６’−ジ
−Ｎ−アシル化は高収率の反応であり、塩基性媒体での
錯体の分解は困難性なく、優れた高収率で純粋な３，６
’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡを与えることもわ
かった。

【００２０】その上、錯体化、３，６’−ジ−Ｎ−アシ
ル化およびアルミニウム錯体の分解の後に、未反応の原
料カナマイシンＡはほとんど残っていないこともわかっ
た。

【００２１】加えて、驚くべきことにアミカシンが極め
て簡単な方法によって製造され得ることがわかった。す
なわち、その方法は３および６’位のＮが保護されたカ
ナマイシンＡの水溶性懸濁液を完全な溶解状態とするま
で酸性化し、その後、１位にあるアミノ基のアシル化を
行い、３位および６’位の脱保護化を選択的に行なうこ
とによって、トリアシル化された前駆体を得ることがで
きる。

【００２２】このようにプロトン化された３，６’−ジ
−Ｎ−アシル−カナマイシンＡの１位におけるＮ−アシ
ル化は高収率で起こり、その反応終了時に塩基でｐＨ調
製することよってアミカシン前駆体が十分満足のできる
精製度かつ高収率で得られることがわかった。

【００２３】最後に、カナマイシンＡから出発するアミ
カシン前駆体の全合成はカナマイシンＡのアルミニウム
錯体に対する３，６’−ジ−Ｎ−アシル化反応の終了時
に得られたアルミニウム錯体に酸処理を施して３”位お
よび１位にアミノ基を有する３，６’−ジ−Ｎ−アシル
−カナマイシンＡを得ることによって３，６’−ジ−Ｎ
−アシル−カナマイシンＡを単離することによって、実
行され得ることがわかった。

【００２４】この発見は非常に重要なことである。なぜ
なら、１，３”−脱プロトン化生成物の存在下において
さえ、３”−アミノ基の選択的保護は予期できないこと
だからである。

【００２５】したがって、要するに本発明は、カナマイ
シンＡから出発してアミカシン前駆体を製造するための
方法に関するものである。この方法は２つの主要な反応
段階、すなわちアルミニウム錯体を経た３，６’−ジ−
Ｎ−アシル−カナマイシンＡの製造段階と、プロトン付
加による３”−Ｎ−保護を経た３，６’−ジ−Ｎ−アシ
ル−カナマイシンＡの１−アシル化段階とを含む。これ
らの反応段階は新規的なものであり、１位および３”位
のアミノ基を有する３，６′−ジ−Ｎ−アシル−カナマ
イシンＡの新規な塩が上記製造工程における有益な中間
体として利用される。

【００２６】さらに詳しく、本発明は化１（Ｉ）を有す
るアミカシン前駆体の製造方法に関するものである。

【００２７】この化１において、アシル基はアシル化さ
れているＮ−保護基である。この製造方法は、（ａ）有
機性水溶液中におけるカナマイシンＡとアルミニウム塩
と反応させる工程と、（ｂ）そのようにして得られたカ
ナマイシンＡのアルミニウム錯体を化２（ＩＩ）を有す
る反応性誘導体と反応させる工程と、（ｃ）３，６’−
ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡのアルミニウム錯体を
、そのままあるいは塩基性媒体中で分解した後に、プロ
トン供与体で処理してｐＨが６とする工程と、（ｄ）プ
ロトン付加された３，６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイ
シンＡを化３（ＩＩＩ）を有するＮが保護されたＬ−（
−）−４−アミノ−２−ヒドロキシ酪酸の反応性誘導体
（化３において、アシル基はアシル化されているＮ−保
護基である）で処理し、最後にこのようにして得られた
化１（Ｉ）の１−Ｎ−アシル化生成物を単離する段階と
を含む。

【００２８】（ａ）の反応段階において、原料のカナマ
イシンＡは不活性有機溶媒、好ましくは水を混和するこ
とが可能なもの中に溶解あるいは懸濁され好ましくは有
利塩基として用いられる。特に好適な有機溶媒は、例え
ばジメチルスルフォキシド、ジメチルフォルムアミドま
たはジメチルアセトアミドなどの極性非プロトン性化合
物である。

【００２９】アルミニウム塩として、ｐＫａ　の値が約
３から約５の範囲内にある弱酸を含むアルミニウム塩が
用いられ、好ましくは塩化アルミニウムと酢酸ナトリウ
ムとの反応によって新たに調製された水溶液中において
有利に塩基性アセテ−トが用いられる。

【００３０】この反応に使用されるアルミニウム塩の量
は、原料となるカナマイシンＡの１モルにつき少なくと
も１モルであり、この条件で高い収率を得ることが可能
である。しかし、その場合にカナマイシンＡ／アルミニ
ウムのモル比は１：１から１：４、好ましくは１：１．
５から１：４、より好ましくは１．２：１．３の範囲内
で変えることができる。また、大量のアルミニウム塩は
必要ない。

【００３１】この反応は、約１０℃から約５５℃、好ま
しくは１５℃から４５℃で２ないし４時間行われる。

【００３２】反応段階（ｂ）では、カナマイシンＡのア
ルミニウム錯体を含む反応混合物は、化２で表わされる
酸（ＩＩ）の反応性誘導体によって処理される。

【００３３】化２（ＩＩ）において、アシル基はカナマ
イシンＡの３位および６’位に導入されたアシル化Ｎ−
保護基である。

【００３４】その保護基には当該技術分野においてよく
知られた第一級のアミノ基を保護するための通常のブロ
ック基を含む。すなわち、アシル基は穏和な酸加水分解
または触媒による水素添加によって除去され得る。

【００３５】特に好適なＮ−保護基は、ｔ−ブトキシカ
ルボニルおよびｔ−アミロキシカルボニルなどのアルコ
キシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニルなどのア
ラルコキシカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボ
ニルなどのシクロアルキルオキシカルボニル基、トリク
ロロエトキシカルボニルなどのハロアルコキシカルボニ
ル基、およびフタロイル、Ｏ−ニトロフェノキシアセチ
ルなどのアシル基を含む。

【００３６】好ましいＮ−保護アシル基は、ベンジルオ
キシカルボニルである。

【００３７】酸アシル−ＯＨの反応性誘導体としてはア
ミンをアシル化できる機能性誘導体が用いられ得る。例
えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはアシドク
ロライドによって当然に活性化されるその酸自体、酸塩
化物その無水物、または混合無水物、４−ニトロフェノ
−ルエステルなどの活性エステル、好ましくはＮ−ヒド
ロキシコハク酸イミドを有するエステルがある。この好
ましい産物は化９（Ｅ）のＮ−ベンジルオキシカルボニ
ルオキシコハク酸イミド（Ｎ−ＢＣＳと略す）である。

【００３８】

【化９】

【００３９】３，６’−ジ−Ｎ−アシル化反応は当該技
術分野において既知の方法に従って実施される。好まし
くは、反応段階（ａ）で用いられる溶媒と同一の溶媒中
で実施される。実際は、反応段階（ａ）の不活性有機溶
媒に含まれる化２で表わされる酸（ＩＩ）の反応性誘導
体溶液は反応段階（ａ）の終わりに得た反応混合物に添
加される。室温で２−４時間経過後、３，６’−ジ−Ｎ
−アシル化反応を停止させ、３、６’−ジ−Ｎ−アシル
−カナマイシンＡのアルミニウム錯体が次の反応段階に
さらされる。

【００４０】よって、反応段階（ｃ）では、反応混合物
は塩基性溶液でそのｐＨを９と１１との間、好ましくは
９．　５と１０．　５との間までに上げる処理が施され
得る。

【００４１】このようにしてアルミニウム錯体が分解さ
れ、簡単な瀘過処理によって３、６’−ジ−Ｎ−アシル
−カナマイシンＡが単離される。アルカリ水酸化物また
はカルボン酸、あるいはアンモニア水酸化物は塩基とし
て使用可能である。

【００４２】このようにして、単離された３、６’−ジ
−Ｎ−アシル−カナマイシンＡは以下の化１０（ＩＶ）
（ここで、化１０中においてアシル基はアシル化されて
いるＮ−保護基である）を有する。

【００４３】

【化１０】

【００４４】この単離された３、６’ージーＮーアシル
ーカナマイシンＡを水に懸濁し、その懸濁液を完全溶解
まで酸性化する。この酸性化のために用いられる酸は、
強酸または弱酸であるプロトン供与体であり、もしその
酸をある量添加した場合にその溶液をｐＨ６程度にする
ことのできるものである。このようなｐＨの値で、原料
物質はすべて溶解するが、その溶液は乳白光を発するよ
うになる。

【００４５】酸としては、有機プロトン供与体が用いら
れる。そのような供与体としては、フェノール、リゾル
シノールまたはチオフェノール、あるいはギ酸、酢酸、
プロピオン酸、トリメチル酢酸、安息香酸、サリチル酸
、オキザロ酸、マロン酸、クエン酸、リンゴ酸、マレイ
ン酸、フマル酸、フタル酸またはコハク酸などのモノ−
、ジ−またはポリカルボキシル酸、メタン−またはｐ−
トルエンスルホン酸などのスルホン酸、亜リン酸または
それらのモノ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルエステルが挙げら
れる。

【００４６】鉱酸もまた使用可能である。例えば、塩酸
、硫酸またはそれらのモノ（Ｃ１−Ｃ４）アルキルエス
テル、リン酸またはそのモノ−、ジ−（Ｃ１−Ｃ４アル
キルエステル、ピロリン酸、臭酸などが挙げられる。 ピリジンまたはトリエチルアミン塩化水素酸塩またはト
シル酸塩などの有機酸を含む強酸もプロトン化試薬とし
て用いることが可能である。強酸は好適に用いられる。

【００４７】本発明の都合のよい実施態様によれば、酸
が化１０で表わされる化合物（ＩＶ）の水溶性懸濁液に
加えられ、その酸の添加はその化合物が完全に溶解する
まで行われる。化１０で表わされる化合物（ＩＶ）の水
溶性懸濁液の酸化は室温、好ましくは１８℃から２５℃
の範囲内で実施可能である。その水溶性懸濁液のｐＨが
望ましい値になった際に酸添加を停止するために、この
酸化処理中のｐＨの変化をモニターするのがよい。もち
ろん、操作条件が標準化されたならば、そのようなｐＨ
変化の追跡は当該技術分野の熟練者にとって必要ない。

【００４８】ｐＨ６の溶液は、プロトン付加された形で
の遊離アミノ基を有する化１０で表わされる化学構造式
（ＩＶ）の２箇所プロトン付加されたカナマイシンＡを
含む。すでに述べたように、使用される酸の濃度は化１
０で表わされる化合物（ＩＶ）の１モルにつき約２モル
である。

【００４９】化１０で表わされる化合物（ＩＶ）の水溶
性懸濁液の初期ｐＨ値は約６であり、かつｐＨが低過ぎ
ると１−Ｎ−アシル化産物の収率が低下するので、その
ようなｐＨ値において３”位のアミノ基はプロトン付加
されていると考えられる。

【００５０】さらに、約２モルの酸が用いられるので、
１位のアミノ基上で第二のプロトン付加が起こる。この
第二のプロトン付加反応はさらなる１−Ｎ−アシル化反
応にとっては何ら保護効果は認められない。この事実は
意外である。

【００５１】好ましい実施態様によれば、最初の酸化反
応がメタンスルホン酸のような強酸によって行なわれる
際に、ｐＨの値を４よりも高く維持するために１−Ｎ−
アシル化反応中、ｐＨを調整することが望ましい。

【００５２】緩衝液の使用は強酸が初期の溶解に用いら
れる際には特に有利となり得る。

【００５３】初期の酸化処理が酢酸のような弱酸で行な
われる際、１−Ｎ−アシル化反応中におけるｐＨ値の補
正は必要でない。

【００５４】例えば３，６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニルカナマイシンＡを出発物質として用いた場合
、プロトン付加された化合物の構造は下記の化１１の化
学構造式（Ｖ）で示される。

【００５５】

【化１１】

【００５６】ここで、たとえ化１１で表わされる化合物
がその二塩の形態で実際に単離されるとしても、３”−
位において実際に保護しているプロトンのみが示されて
いる。

【００５７】このようにして、得られたプロトン付加生
成物は溶液中に残り、そしてそのような溶液はそのまま
次の反応段階に供せられる。

【００５８】しかしながら、プロトン付加された３，６
’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡのニ塩は単離され
、かつ特徴づけされ得る。

【００５９】また、反応段階（ｃ）は、反応段階（ｂ）
の最後に得られ、かつ３，６’−ジ−Ｎ−アシル−カナ
マイシンＡのアルミニウム錯体を含む反応混合物を上記
のプロトン供与体の作用にさらすことによって実行され
得る。

【００６０】したがって、化１０で表わされる化学構造
式（ＩＶ）の３，６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシン
Ａを単離することなく、プロトン付加された３，６’−
ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡが得られる。

【００６１】反応段階（ｄ）では、反応段階（ｃ）の終
わりに得られ、かつプロトン付加された３，６’−ジ−
Ｎ−アシル−カナマイシンＡまたはその単離された塩を
含む溶液はＮの保護されたＬ−（−）−４−アミノ−２
−ヒドロキシ酪酸の反応性誘導体で、好ましくは前述の
化８で表わされる化学構造式（Ｄ）を有する化合物で処
理される。

【００６２】第一級アミンをアシル化することが可能な
機能性誘導体のひとつとしてＬ−（−）−４−アシルア
ミノ−２−ヒドロキシ酪酸の反応誘導体を用いることが
できる。このようなものとしては、ジシクロヘキシルカ
ルボジイミドによって当然に活性化されたその酸自体、
またはその酸塩化物、その酸塩化物の無水物、または混
合無水物、４−ニトロフェニルエステルのような活性エ
ステル、または、好ましくは、Ｎ−ヒドロオキシコハク
酸イミドを含むエステルが挙げられる。好ましい生成物
は、化８で表わされる化学構造式（Ｄ）によって示され
る。上記反応は水の混和不可能な有機溶媒中、好ましく
は塩化メチレン、１，２−ジクロロエタンまたは１，１
，１−トリクロロエタン中において１０℃から３０℃ま
で、好ましくは１５℃から２５℃までの温度で行なわれ
、そしてプロトンが付加されかつ３，６’−ジ−Ｎ−保
護されたカナマイシンＡの水溶液に添加される。２−３
時間経過後、常法に従って反応混合物から３，６′−ジ
−Ｎ−２箇所保護された１−Ｎ−アシル化カナマイシン
Ａが単離される。

【００６３】例えば、その反応混合物は６．５と７．０
との間、好ましくは６．８のｐＨまで塩基性水溶液で処
理される。このようにして脱プロトン化が達成され、化
１で表わされる化学構造式（Ｉ）の最終生成物が簡単な
濾過によって単離される。

【００６４】アルカリ性の水酸化物または炭酸塩、ある
いは水酸化アンモニウムは塩として用いることが可能で
ある。

【００６５】化１で表わされる化学構造式（Ｉ）の生成
物は３，６’−ジ−Ｎ−アシルカナマイシンＡから十分
精製された状態で、かつ５８％−６０％から８０％まで
の高収率で単離される。そして、この化合物は酸加水分
解または水素化分解によるアシル化Ｎ−保護基の除去に
より当該技術分野において既知の方法に従ってアミカシ
ンに変換され得る。

【００６６】アシル基がベンジルオキシカルボニルであ
る化１で表わされる化学構造式（Ｉ）の化合物の触媒的
水素添加は、米国特許第４，１３６，２５４号および同
第４，２３０，８４７号に開示されている。

【００６７】本発明の製造方法によれば、化１０で表わ
される化学構造式（ＩＶ）の３，６’−ジ−Ｎ−アシル
−カナマイシンＡが高い精製度で、かつ非常に満足でき
る全収率でカナマイシンＡから得られる。さらに、本発
明によれば、カナマイシンＡ／アルミニウムの比を１：
１にすることによって、最終生成物を少なくとも６０％
すなわち米国特許第４，２９７，４８５号に開示された
カマナイシンＡ／亜鉛の比１：１．２で得られた収率よ
りも高い収率で得ることができる。さらに、カナマイシ
ンＡ／アルミニウムの比を１：２にすることによって最
終生成物の収率が約９０％ととなり、少量のアルミニウ
ムの使用で非常に高い収率を確保することが可能である
。

【００６８】さらに、本発明の製造方法によれば、反応
段階（ａ）、（ｂ）および３，６’−ジ−Ｎ−アシル−
カナマイシンＡの単離の各最終段階において回収される
未反応のカナマイシンＡの量は非常に少ない。通常、こ
れらの反応段階の終わりに回収される未反応のカナマイ
シンＡの量は約５％以下である。

【００６９】最後に、本発明によれば、３，６’−ジ−
Ｎ−アシル−カナマイシンＡを単離することなく、カナ
マイシンＡからアミカシンを合成することが可能である
。このことは、上記３，６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマ
イシンＡのアルミニウム錯体からプロトンが付加された
３，６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡを直接製造
することによって可能となる。

【００７０】このように、プロトンが付加された３，６
’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡはアミカシン前駆
体の合成における重要な中間体であり、本発明のさらな
る目的を表わすものである。

【００７１】さらに、本発明は化４で表わされる化学構
造式（ＶＩ）のプロトン付加３，６’−ジ−Ｎ−アシル
−カナマイシンＡに関するものでもある。

【００７２】この化合物に関連したアニオンは、有機プ
ロトン供与体または鉱酸の残基である。好ましいアニオ
ンとしては、モノカルボキシル酸の残基、より好ましく
は酢酸塩およびプロピオン酸塩のアニオン、およびスル
ホン酸の残基、より好ましくはメタンスルホン酸塩（メ
シラート）およびｐ−トルエンスルホン酸塩（トシラー
ト）アニオンが挙げられる。

【００７３】以下の実施例は本発明を記載したものであ
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。

【００７４】

【実施例】実施例　　１ ２００ｍｌのジメチルスルホキシド中にカナマイシンＡ
塩基　　２４．　２ｇ（５０ミリモル）を懸濁させた懸
濁液に、水４０ｍｌ中に塩化アルミニウム６水和物１２
．　０７ｇ（５０ミリモル）と無水酢酸ナトリウム　　
４．　１ｇ（５０ミリモル）とを溶解した水溶液を添加
する。室温で２時間攪拌したのち、１５０ｍｌのジメチ
ルスルホキシド中にＮ−ＢＣＳ　　２５ｇ（１００ミリ
モル）を溶解した溶液を添加する。さらにこの混合物を
室温で３時間攪拌し、混合物を、ｐＨ１０の水酸化アン
モニウム水溶液に注ぎ、沈殿物を濾過し、乾燥すると、
３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナマイ
シンＡが、２８．　３ｇ得られる。

【００７５】実施例　　２ ２００ｍｌのジメチルアセトアミド中にカナマイシンＡ
塩基　　２４．　２ｇ（５０ミリモル）を懸濁させた懸
濁液に、水８０ｍｌ中に塩化アルミニウム６水和物２４
．　１４ｇ（１００ミリモル）と酢酸ナトリウム３水和
物　　２７．　２０ｇ（２００ミリモル）とを溶解した
水溶液を添加する。この混合物を４５℃まで昇温し、４
０−４５℃で２時間攪拌後、室温になるまで放置する。 この反応混合物に、１５０ｍｌのジメチルアセトアミド
にＮ−ＢＣＳ　　２５ｇ（１００ミリモル）を溶解した
溶液を添加し、さらに室温で３時間攪拌する。この混合
物を、ｐＨ１０．　５の水酸化アンモニウム水溶液に注
ぎ、室温で２時間攪拌後、沈殿物を濾過し、水で洗浄後
、乾燥すると、３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカル
ボニルカナマイシンＡが、３８．　２ｇ得られる。

【００７６】実施例　　３ ２００ｍｌのジメチルスルホキシド中にカナマイシンＡ
　　２４．　２ｇ（５０ミリモル）を懸濁させた懸濁液
に、水１６０ｍｌ中に塩化アルミニウム６水和物４８．
　２８ｇ（２００ミリモル）と酢酸ナトリウム３水和物
　　２７．２０ｇ（２００ミリモル）とを溶解した水溶
液を添加する。この混合物を４５℃まで昇温し、４０℃
−４５℃で２時間攪拌する。室温まで冷却した後、この
反応混合物に、１５０ｍｌのジメチルスルホキシド中に
Ｎ−ＢＣＳ　　２５ｇ（１００ミリモル）を溶解した溶
液を添加し、さらに室温で３時間攪拌する。次いでこの
混合物を、ｐＨ１０．　５の水酸化アンモニウム水溶液
に注ぎ、室温で２時間攪拌後、沈殿物を濾過し、水で洗
浄後、乾燥すると、３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニルカナマイシンＡが、３３．　１ｇ得られる。

【００７７】実施例　　４ ２００ｍｌのジメチルホルムアミド中にカナマイシンＡ
塩基　　２４．　２ｇ（５０ミリモル）を懸濁せた懸濁
液に、水８０ｍｌ中に塩化アルミニウム６水和物２４．
　１４ｇ（１００ミリモル）と酢酸ナトリウム３水和物
　　２７．２０ｇ（２００ミリモル）とを溶解した水溶
液を添加する。この混合物を自然に４５℃まで昇温させ
、４０℃−４５℃で２時間攪拌後、室温になるまで放置
する。 この反応混合物に、１５０ｍｌのジメチルホルムアミド
中にＮ−ＢＣＳ　　２５ｇ（１００ミリモル）を溶解し
た溶液を添加し、さらに室温に３時間おき、次いでこの
反応混合物を、ｐＨ１０．　５の水酸化アンモニウム水
溶液に注ぎ、室温で２時間攪拌後、沈殿物を濾過し、水
で洗浄後、乾燥すると、３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオ
キシカルボニルカナマイシンＡが、３６．　８ｇ得られ
る。

【００７８】実施例　　５ ５０ｍｌの脱イオン水中に純度８５％（ＨＰＬＣ）の３
、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナマイシ
ンＡ　　６ｇを懸濁した懸濁液に、室温（約２０℃）で
攪拌しながら、酢酸を添加してｐＨ６にする。このよう
にして得られた水溶液を、１５℃まで冷却し、次いで、
Ｌ−（−）−４−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２
−ヒドロキシ酪酸のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエス
テル　　４．３ｇを含有する塩化メチレン　　８７．　
５ｍｌを３０分間かけて添加する。この反応混合物を６
０分間攪拌すると、その温度は約１８℃まで昇温し、ｐ
Ｈは４．　７にまで下がる。１０−１５分経過すると、
この反応混合物の懸濁状態が観察される。さらに、６０
分間攪拌すると、反応混合物の温度は２０℃にまで昇温
する。 得られた濃厚な懸濁液は、十分に純粋な３、６’−ジ−
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−Ｎ−［Ｌ−（−）
−４−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキ
シブチリル］カナマイシンＡを含有するものであり、ア
ミカシンの前駆体として使用可能なものである。

【００７９】実施例　　６ 実施例　　５に記載されたように処理すると、アシル化
の終了時に濃厚な懸濁液が得られ、この濃厚な懸濁液を
濃縮してその溶媒を除去する。ここで得られた残渣が水
（４０ｍｌ）と混合され、水酸化アンモニウムにより処
理されると、ｐＨ６．　８となる。この生成物を濾過し
、水で洗浄して、一定の重量になるまで、真空下、３５
℃−４０℃で乾燥させると、５５．　９７％の純度（Ｈ
ＰＬＣ）の３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニ
ル−１−Ｎ−［Ｌ−（−）−４−ベンジルオキシカルボ
ニルアミノ−２−ヒドロキシブチリル］カナマイシンＡ
が８．　８５ｇ得られる。収率：７２．　２％。

【００８０】実施例　　７ ５００ｍｌの水中に純度８７．　１１％の３、６’−ジ
−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナマイシンＡ６０ｇ
を懸濁させた懸濁液に、メタンスルホン酸　　８．７５
ｍｌを添加して、ｐＨ６とする。次いで、得られた溶液
を＋１５℃まで冷却し、この溶液にＬ−（−）−４−ベ
ンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ酪酸の
Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルの塩化メチレン
溶液８６０ｍｌ（塩化メチレン　　８０ｍｌに溶解した
ジシクロヘキシルカルボジイミド　　２８．　４ｇの存
在下、塩化メチレン　　７５０ｍｌ中でＬ−（−）−４
−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ酪
酸　　３７．　５ｇを、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド
　　１６．　２５ｇと、室温で反応させることにより得
られるもの）を、３０分間かけて添加する。次いで、実
施例　　５および６に記載したように処理すると、純度
４６．　５％（ＨＰＬＣ）の、３、６’−ジ−Ｎ−ベン
ジルオキシカルボニル−１−Ｎ−［Ｌ−（−）−４−ベ
ンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシブチリ
ル］カナマイシンＡが、８７．　７ｇ得られる。収率：
５９．　３％。

【００８１】実施例　　８ ５００ｍｌの水中に純度８７．　１１％の３、６’−ジ
−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナマイシンＡ　　６
０ｇを懸濁させた懸濁液に、メタンスルホン酸８．　７
５ｍｌを添加して、ｐＨ６とする。次いで、得られた溶
液を＋１５℃まで冷却し、Ｌ−（−）−４−ベンジルオ
キシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ酪酸のＮ−ヒド
ロキシコハク酸イミドエステルの塩化メチレン溶液　　
８６０ｍｌ（実施例　　７に記載されたように調製され
たもの）を、３０分間かけて添加する。この混合物を６
０分間攪拌すると、温度が約１８℃まで昇温し、水酸化
アンモニウムを添加することにより、ｐＨを４．　５と
５．　０の間に保持する。

【００８２】さらに６０分間攪拌すると、その混合物の
温度は２０℃にまで上がり、ｐＨは上記の範囲以上に保
持される。濃厚な懸濁液が得られ、これを減圧下、濃縮
して溶媒を除去し、次いで、残渣に５００ｍｌの水を混
合して、水酸化アンモニウムで処理して、ｐＨを６．　
８５とする。この生成物を濾過し、水で洗浄して、一定
の重量になるまで、真空下、３５℃−４０℃で乾燥させ
ると、５８．　２３％の純度（ＨＰＬＣ）の３、６’−
ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−Ｎ−［Ｌ−（
−）−４−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒド
ロキシブチリル］カナマイシンＡが８９．　２５ｇ得ら
れる。 収率：７５．　７％。

【００８３】実施例　　９ （ａ）プロトン化された３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオ
キシカルボニルカナマイシンＡ ５０ｍｌの脱イオン水中に純度８９．　５％（ＨＰＬＣ
）の力価を有する、３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニルカナマイシンＡ　　６．　４２ｇ（７．　６
ミリモル）懸濁させた懸濁液に、プロピオン酸　　１．
　１４ｍｌ（１５．　３ミリモル）を２０℃−２２℃で
添加して、ｐＨ６とする。この溶液を真空下、濃縮し、
得られた残渣をイソプロパノ−ル　　３０ｍｌで処理し
、濾過後、３５℃で真空下乾燥すると、３、６’−ジ−
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナマイシンＡ　　ジ−
プロピオネ−ト（ａ）が６．　５ｇ得られる。

【００８４】（ｂ）３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニル−１−Ｎ−［Ｌ−（−）−４−ベンジルオキ
シカルボニルアミノ−２−ヒドロキシブチリル］カナマ
イシンＡ １５℃まで冷却した、上記中間体（ａ）　　６．　５ｇ
の溶液に、８０ｍｌの塩化メチレン中にＬ−（−）−４
−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ酪
酸のヒドロキシコハク酸イミドエステル　　４．　３ｇ
を溶解した溶液を３０分かけて添加する。この混合物を
６０分間攪拌すると、濃厚な懸濁液が得られる。この懸
濁液を濾過し、水で洗浄して、真空下、３５℃−４０℃
で乾燥させると、アミカシンの前駆体として使用可能な
、３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−
Ｎ−［Ｌ−（−）−４−ベンジルオキシカルボニルアミ
ノ−２−ヒドロキシブチリル］カナマイシンＡが８．　
４ｇ得られる。

【００８５】実施例　　１０−１３ 実施例　　９の工程（ａ）に記載したのと同様に処理し
、プロピオン酸を適当なプロトン供与体に置換すると、
次のような３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニ
ルカナマイシンＡ塩が得られる。

【００８６】３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニルカナマイシンＡ　　ジアセテ−ト（実施例　　１０
）、３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナ
マイシンＡ　　ジメタンスルホネ−ト（実施例　　１１
）、３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナ
マイシンＡ　　オキザレ−ト（実施例　　１２）、３、
６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナマイシン
Ａ　　ハイドロジェンシトレ−ト（実施例　　１３）。

【００８７】実施例　　１４ ２００ｍｌのジメチルスルホキシド中にカナマイシンＡ
　　２４．　２ｇ（５０ミリモル）を懸濁させた懸濁液
に、８０ｍｌの水中に塩化アルミニウム６水和物２４．
　１４ｇ（１００ミリモル）と酢酸ナトリウム３水和物
　　２７．２０ｇ（２００ミリモル）とを溶解した溶液
を添加する。この混合物を４５℃まで昇温し、反応混合
物を２時間撹拌しながら、４０℃−４５℃に保持する。 １８℃−２０℃まで冷却後、１５０ｍｌのジメチルスル
ホキシド中にＮ−ＢＣＳ　　２５ｇ（１００ミリモル）
を溶解した溶液を添加し、この混合物を１８℃−２０℃
で３時間攪拌して保持する。この時点で、その溶液中に
３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナマイ
シンＡのアルミニウム錯体が存在する。この溶液を１０
℃−１２℃に冷却し、水　　２５０ｍｌ、次いでプロピ
オン酸　　１５ｍｌを添加してｐＨ６とする。この溶液
には、プロトン化された３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオ
キシカルボニルカナマイシンＡが含有されている。この
溶液を１５℃に冷却し、この溶液にＬ−（−）−４−ベ
ンジルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ酪酸の
Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルの塩化メチレン
溶液（ジシクロヘキシルカルボジイミド　　１８．　０
６ｇの存在下、Ｌ−（−）−４−ベンジルオキシカルボ
ニルアミノ−２−ヒドロキシ酪酸　　２３．　８５ｇを
、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド　　１０．　３３ｇと
、塩化メチレン　　４０ｍｌ中で２０℃−２５℃で反応
させることにより得られるもの）５４７ｍｌを添加する
。この混合物を６０分間攪拌すると、その温度が１８℃
まで上昇する。さらに６０分間以上攪拌して、その温度
が２０℃になるまで攪拌すると、濃厚な懸濁液が得られ
、これを濃縮して、塩化メチレンを除去し、残渣に水　
　１１０ｍｌを添加し、水酸化アンモニウムで処理して
、ｐＨを６．　８５とする。この生成物を濾過し、水で
洗浄して、真空下、３５℃−４０℃で乾燥させると、７
９％の純度（ＨＰＬＣ）の３、６’−ジ−Ｎ−ベンジル
オキシカルボニル−１−Ｎ−［Ｌ−（−）−４−ベンジ
ルオキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシブチリル］
カナマイシンＡが、５５．　７８ｇ得られる。これは、
アミカシンの前駆体として使用可能なものである。

【００８８】実施例　　１５ アミカシンの調製 （ｉ）　　１２５ｍｌの含水アセトン中に純度６４．　
５％の３、６’−ジ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−
１−Ｎ−［Ｌ−（−）−４−ベンジルオキシカルボニル
アミノ−２−ヒドロキシブチリル］カナマイシンＡ　　
２５ｇ（１６．３ミリモル）を溶解した溶液に、５％−
Ｐｄ／Ｃ（５０％ｗｅｔ）　　１３．５ｇと８５％のギ
酸　　１６．　５ｍｌを添加する。水素化分解が終了し
たら触媒を取り除き、アセトンを蒸発させた後、この溶
液を、アンモニウム体の弱酸性樹脂のカラムに通し、ア
ミカシンを含有するフラクションを５０℃でエタノ−ル
により処理すると、アミカシン塩基が８８％の収率で得
られる。この生成物は、ＵＳＰ標準特性と一致する。未
反応のカナマイシンＡを含有するフラクションを濃縮し
、５０％硫酸、次いでメタノ−ルで処理することにより
、未反応のカナマイシンＡが硫酸塩として回収される。

【００８９】（ｉｉ）　　他の調製方法において、３位
および６’位のベンジルオキシカルボニル基が、次の手
順に従って外される。前記出発物質　　２．　６ｇを、
水／メタノ−ル（１／１）の混合物　　４０ｍｌに溶解
し、５％−Ｐｄ／Ｃ０．　２ｇ存在下、３時間、水素化
する。次いで、触媒を濾過により除去し、濾液を減圧下
、濃縮する。このようにして得られた残渣は、アミカシ
ンからなるものであり、定量的に得られるものである。

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　化１（Ｉ） 【化１】 （ここでアシル基はアシル化されているＮ−保護基であ
   る）で表わされたアミカシン前駆体の製造方法であって
   、 （ａ）カナマイシンＡを、水−有機媒体中でアルミニウ
   ム塩と反応させる工程と、 （ｂ）前記（ａ）工程で得られたカナマイシンＡのアル
   ミニウム錯体を、化２（ＩＩ） 【化２】 （ここでアシル基はアシル化されているＮ−保護基であ
   る）で表される酸の反応性誘導体と反応させる工程と、
   （ｃ）前記（ｂ）工程で得られた３、６’−ジ−Ｎ−ア
   シル−カナマイシンＡのアルミニウム錯体を、そのまま
   あるいは塩基性媒体中で分解した後、プロトン供与体で
   処理してｐＨ約６とする工程と、 （ｄ）前記（ｃ）工程で得られた溶液を、化３（ＩＩＩ
   ） 【化３】 （ここでアシル基はアシル化されているＮ−保護基であ
   る）のＮの保護されたＬ−（−）−４−アミノ−２−ヒ
   ドロキシ酪酸の反応性誘導体で処理し、化１（Ｉ）の１
   −Ｎ−アシル化生成物を単離する工程とを含むアミカシ
   ン前駆体の製造方法。
2. 【請求項２】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の製
   造方法において、前記工程（ａ）において、約３から約
   ５までのｐＫａを有する弱酸を含むアルミニウム塩が、
   アルミニウム塩として使用されるものであるアミカシン
   前駆体の製造方法。
3. 【請求項３】　　請求項２に従うアミカシン前駆体の製
   造方法において、前記アルミニウム塩が塩基性の酢酸塩
   であるアミカシン前駆体の製造方法。
4. 【請求項４】　　請求項３に従うアミカシン前駆体の製
   造方法において、塩基性のアルミニウム酢酸塩が、塩化
   アルミニウムと酢酸ナトリウムとから新たに調製された
   水溶液の形態で使用されるアミカシン前駆体の製造方法
   。
5. 【請求項５】　　請求項１ないし４のいずれかに従うア
   ミカシン前駆体の製造方法において、前記工程（ａ）に
   おけるカナマイシンＡとアルミニウムとのモル比が、１
   ：１から１：４であるアミカシン前駆体の製造方法。
6. 【請求項６】　　請求項５に従うアミカシン前駆体の製
   造方法において、前記モル比が、１：１．　５から１：
   ４までであるアミカシン前駆体の製造方法。
7. 【請求項７】　　請求項５に従うアミカシン前駆体の製
   造方法において、前記モル比が、１：２から１：３まで
   であるアミカシン前駆体の製造方法。
8. 【請求項８】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の製
   造方法において、前記工程（ｂ）において、式アシル−
   ＯＨ（ここでアシルはベンジルオキシカルボニルである
   ）で表される酸の反応性誘導体が使用されるアミカシン
   前駆体の製造方法。
9. 【請求項９】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の製
   造方法において、前記過程（ｂ）において、式アシル−
   ＯＨで表される酸の反応性誘導体として、その反応性誘
   導体とＮ−ヒドロキシコハク酸イミドとのエステルが使
   用されるアミカシン前駆体の製造方法。
10. 【請求項１０】　　請求項１，８または９のいずれかに
    従うアミカシン前駆体の製造方法において、前記式アシ
    ル−ＯＨで表される酸の反応性誘導体が、Ｎ−ベンジル
    オキシカルボニルコハク酸イミドであるアミカシン前駆
    体の製造方法。
11. 【請求項１１】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｃ）におけるプロトン供
    与体として、カルボン酸の単量体、二量体または重合体
    が用いられるアミカシン前駆体の製造方法。
12. 【請求項１２】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｃ）におけるプロトン供
    与体として酢酸またはプロピオン酸が用いられるアミカ
    シン前駆体の製造方法。
13. 【請求項１３】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｃ）におけるプロトン供
    与体として強酸が用いられるアミカシン前駆体の製造方
    法。
14. 【請求項１４】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｃ）におけるプロトン供
    与体として硫酸が用いられるアミカシン前駆体の製造方
    法。
15. 【請求項１５】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｃ）におけるプロトン供
    与体としてメタンスルホン酸またはｐートルエンスルホ
    ン酸が用いられるアミカシン前駆体の製造方法。
16. 【請求項１６】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｃ）のプロトン化反応の
    終了時には、その反応系のｐＨが６であるアミカシン前
    駆体の製造方法。
17. 【請求項１７】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｃ）において、３、６’
    −ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡのアルミニウム錯体
    が水酸化アンモニウム中で分解され、前記プロトン供与
    体との反応前に、３、６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイ
    シンＡが単離されるアミカシン前駆体の製造方法。
18. 【請求項１８】　　請求項１７に従うアミカシン前駆体
    の製造方法において、前記分解はｐＨ９から１１までの
    範囲において行なわれるアミカシン前駆体の製造方法。
19. 【請求項１９】　　請求項１８に従うアミカシン前駆体
    の製造方法において、前記分解時のｐＨが９．　５から
    １０．　５までの範囲であるアミカシン前駆体の製造方
    法。
20. 【請求項２０】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記過程（ｃ）における、前記プロ
    トン供与体を用いた処理が、３、６’−ジ−Ｎ−アシル
    −カナマイシンＡのアルミニウム錯体を含有する反応混
    合物に対してなされるアミカシン前駆体の製造方法。
21. 【請求項２１】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｃ）の終了時に、プロト
    ン化された、３、６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシン
    Ａが単離されるアミカシン前駆体の製造方法。
22. 【請求項２２】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｄ）の１−Ｎ−アシル化
    反応の終了時に、塩基の添加により、前記ｐＨが４より
    大きい値に保持されるアミカシン前駆体の製造方法。
23. 【請求項２３】　　請求項１に従うアミカシン前駆体の
    製造方法において、前記工程（ｄ）の１−Ｎ−アシル化
    反応の終了時に、塩基を添加してｐＨを６．　５から７
    ．　０までとし、かつ化１（Ｉ）の１−Ｎ−アシル化生
    成物を単離するアミカシン前駆体の製造方法。
24. 【請求項２４】　　請求項１ないし９のいずれかに従う
    アミカシン前駆体の製造方法において、３、６’−ジ−
    Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカナマイシンＡおよびＬ
    −（−）−４−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−
    ヒドロキシ酪酸のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステ
    ルが、３、６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡとし
    て、およびＮの保護されたＬ−（−）−４−アミノ−２
    −ヒドロキシ酪酸の反応性誘導体として用いられるアミ
    カシン前駆体の製造方法。
25. 【請求項２５】　　化４（ＶＩ） 【化４】 （ここでアシル基はアシル化されているＮ−保護基であ
    り、二塩の形態において、アシル基に関連したアニオン
    が有機プロトン供与体もしくは鉱酸の残基である）で表
    されるプロトン化された３、６’−ジ−Ｎ−アシル−カ
    ナマイシンＡ。
26. 【請求項２６】　　請求項２５に従う化合物において、
    前記アシル基に関連したアニオンが、モノカルボン酸の
    残基および硫酸の残基よりなる群から選ばれたものであ
    るプロトン化された３、６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマ
    イシンＡ。
27. 【請求項２７】　　請求項２５に従う化合物において、
    前記関連したアニオンが、酢酸エステルアニオン、プロ
    ピオン酸エステルアニオン、メシラートアニオン、およ
    びトシラートアニオンよりなる群から選ばれたものであ
    り、その選ばれたアニオンに対応する塩が、ジ酢酸エス
    テル、ジプロピオン酸エステル、ジメシラート、および
    ジトシラートであるプロトン化された３、６’−ジ−Ｎ
    −アシル−カナマイシンＡ。
28. 【請求項２８】　　請求項２５に従う化合物において、
    単離された３、６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡ
    を出発物質として得られたものであるプロトン化された
    ３、６’−ジ−Ｎ−アシル−カナマイシンＡ。