JPH04148685A - 環状プラスミド - Google Patents
環状プラスミドInfo
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Abstract
め要約のデータは記録されません。
Description
odococcus属に属する微生物に由来する新規な
環状プラスミドに関する。
類を水和して対応するアミド類を生産するための微生物
触媒として知られており、またRhodococeus
rhodochrous種に属する微生物が極めて高性
能のニトリル水和活性を有することが知られている。
ベクター系の開発が以前から期待されていた。しかしな
がら、Rhodococcus属に属する菌株について
はこれらの微生物を宿主とするに適したベクターの開発
は遅れており、Rhodococcus属においてプラ
スミドの見いだされた株はRhodococcus s
p、 HI3−^株(J、 Bacteriol、 1
70.683−645 (1988) )をはしめ僅
か数株にすぎない、そのため、さらに、Rhodoco
ccus属に属する菌株から工業的に利用し得る微生物
を育種、改良するための新しいベクターの開発が強く要
望される。
株を用いて工業的に有用な宿主−ベクター系を開発すべ
く鋭意研究を行った結果、該属に属する微生物から工業
的に有用な宿主−ベクター系におけるベクターとして利
用可能な新規な環状プラスミドを見い出し、本発明を完
成した。
限酵素切断部位数がSacI:2、BamHl:l、P
vuII:1、Sca I : 1,5phI:1およ
びXhol:1であることを特徴とする、Rhodoc
occus属に属する微生物由来の環状プラスミドであ
る。
dococcus rhodochrous ATCC
4276、ATCC14349およびATCC1434
8から得ることができ、いずれも、大きさが約2.6k
bで且つ下記第1表に示す制限酵素に対する分解特性を
有する新規な環状プラスミドである。以下これらのプラ
スミドを、それぞれ、pRcOOl、pRcOO2、p
RC003と称する。
TCC4276% ATCC14349およびATCC
1434Bを、それぞれ400m1のMY培地(ポリペ
プトン0.5χ、バクトイ−ストエキス0.3χ、マル
ツエキス0.3χ、グルコース1χ)ニテ培養を開始す
ル、 OD660=0.15〜0.2(7)頃にヘニ’
i !77 G 0.50/mlを加える。 0D66
0=1.0まで培養後、遠心により菌体を回収する。菌
体を40m1 T E S (10mM Tr
is−HCI(pH8)、 10mM NaC11+
eM EDTA>tSS液液洗浄後、11−1の50m
M Tris−HCI(pH8)/12.52 シェー
クロース/loomM NaC1/1mg/mlリゾチ
ームに懸濁し、37°Cにて3時間振盪する。
l の5M NaCl、4.41の4χ50S−0,7
M NaCl を順次加え、緩やかに混合し氷上で18
時間静置する。4°Cにて65.OOOxgで1時間遠
心し上清を得、これに50χポリエチレングリコール(
MW = 6.000)を4.61加える。氷上で3時
間静置し、1 、 OOOxgで5分遠心する。沈澱物
を51のTBS緩衝液に溶解し、CsC1を7.5g、
1.5 mg/ml 臭化エチジュウムーTBS緩衝液
を2−1加え混合した。この溶液を42時間130.
OOOxgの密度勾配遠心分離にかけた。
後、n−ブタノールで処理し臭化エチジュウムを除いた
。TEIl街液(40+mM Tris−HCI(pH
8)、1mM EDTA)に対して透析後、エタノール
沈澱により精製プラスミド画分を得た。これを0.7χ
アガロースゲル電気泳動に供し、ゲルを臭化エチジュウ
ムで染色することによりプラスミドの存在を確認した。
ロースゲル電気泳動に供した。この際、サイズマーカー
として大腸菌プラスミドpUc1B、pUcllB、p
BR322(各々2.69kb、 3.16kb、4.
36kb)を同時に泳動した。Rhodococcus
rhodochrous ATCC4276、ATCC
14349およびATCC14348から得られたプラ
スミドは、それぞれpRCool、pRcOO2および
pRcOO3と命名され、アガロースゲル電気泳動から
求められた大きさは、すべて約2.6kbであった。
と反応させ、反応終了後、反応液を0.7χアガロース
ゲル電気泳動および5χアクリルアミドゲル電気泳動に
より分析した。サイズマーカーとしてはラムダファージ
DNAのHindl[[消化物およびPstl消化物を
用い、プラスミドの各制限酵素断片のサイズを算出した
。pRcOOl、pRcOO2およびpRcOO3は第
2表に示すような同一の制限酵素切断特性を示した。
O2およびpRcOO3の制限酵素切断地図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、大きさが約2.6kbであり、制限酵素切断部位数
がSac I :2、BamH I :1、PvuII:1、S
ca I :1、Sph I :1およびXho I :1であ
ることを特徴とするRhodococcus属に属する
微生物由来の環状プラスミド。 2、微生物がRhodococcusrhodochr
ousATCC4276、ATCC14349およびA
TCC14348である請求項2記載の環状プラスミド
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EP91117212A EP0482426B1 (en) | 1990-10-11 | 1991-10-09 | Novel circular plasmids derived from the genus rhodococcus |
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0704530A2 (en) | 1994-08-04 | 1996-04-03 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | A kanamycin resistance gene derived from microorganisms of the genus rhodococcus |
WO2003004639A1 (fr) * | 2001-07-05 | 2003-01-16 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Fragments d'adn contenant un gene qui possede une fonction associee a la proliferation autonome d'un plasmide |
JP2005348674A (ja) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ロドコッカス属細菌由来トリメトプリム耐性ジヒドロ葉酸還元酵素及びその遺伝子 |
US7446187B2 (en) | 2003-10-31 | 2008-11-04 | Daiichi Fine Chemical Co., Ltd. | Plasmids and utilization thereof |
-
1990
- 1990-10-11 JP JP27037790A patent/JP2983602B2/ja not_active Expired - Lifetime
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US7557202B2 (en) | 2001-07-05 | 2009-07-07 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | DNA fragments containing gene having function relating to autonomous proliferation of plasmid |
JP4733298B2 (ja) * | 2001-07-05 | 2011-07-27 | 三菱レイヨン株式会社 | プラスミドの自律増殖に関する機能を有する遺伝子を含むdna断片 |
US7446187B2 (en) | 2003-10-31 | 2008-11-04 | Daiichi Fine Chemical Co., Ltd. | Plasmids and utilization thereof |
JP2005348674A (ja) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | ロドコッカス属細菌由来トリメトプリム耐性ジヒドロ葉酸還元酵素及びその遺伝子 |
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---|---|
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