JPH03503160A - 薬剤組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 薬剤組成物 本発明は、薬物送達組成物（ｄｒｕｇ　　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　　ｃｏｍｐｏｓｉ ｔｉｏｎｓ）に関し、特に鼻穴内や膣等の粘膜を通じて活性薬物成分を吸収させ るために用いられる組成物に関するものである。

薬物の送達（ｄｅｌｉｖｅｒｙ）における大きな問題は、例えばプロティンやペ プチド等の高分子材料を生体膜を通じていかに効果的に吸収させるかといった問 題である。すなわち、これらの高分子は、消化管や口の中の粘膜、直腸の粘膜、 膣の粘膜、鼻の機構への投与した場合に体に吸収されにくいといた問題がある。

インシュリンにて行なわれた材料に関する最近の研究においては、このような混 合物の吸収は、いわゆる吸収増進剤（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｅｎｈａｎｃｅｒ ）と共に与えると増加すると論証しティる。これらの吸収増進材料は、胆汁酸塩 の各種誘導体と同様な非イオンタイプの表面特性を有するものである。これらの タイプの界面活性材料の存在下における膜の浸透性の増加は、予期されないもの では無かった。むしろ、胃腸病理学の分野における論文においては、このような 吸収増進剤が広く包含されている。（Ｄ　ａｖｉｓ　ｅｔ　ａｌ（ｅｄｉｔｏｒ ｓ）、　　Ｄ　ｅｌｉｖｅｒｙ　　Ｓ　ｙｓｔｅｍｓ　　ｆｏｒｐｅｐｔｉｄｅ 　Ｄｒｕｇ、　Ｐ　１ｅｎｕｉ　Ｐ　ｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９８７ ）しかしながら、このような材料は、膜に対する刺激の影響により医薬品として 長期にわたる使用には耐えられないであろう。

これは、非イオンタイプの表面活性剤ばかりでなく、胆汁塩やその誘導体もであ る（ｅ、ｇ、ｆｕｓｉｄｉｃ　ａｃｉｄ）。

ＥＰ−Ａ−０２３，３５９号およびＥＰ−Ａ−１２２，０２３号の明細書には、 鼻の粘膜へ投与される粉状の薬物組成物とその投与方法について記載されている 。この医薬混合物は、ポリペプチドおよびその誘導体を、鼻の粘膜を通じて効果 的に吸収させることができるものである。

同様にＵＳ−Ａ−４２５０１６３号明細書においても、粘膜接着特性が要求され る鼻の粘膜への薬の投与方法が記載されている。

ＥＰ−人−２３０，２６４号明細書には、ワクチンのための水性の黒用薬物送達 システムについて記載されている。このシステムには、高分子量の薬物、ゲル剤 （例えばヒドロキシエチルセルロース）、また一定の場合には、他の添加剤（表 面活性剤、グリセロール、ポリエチレングリコール）などが含まれている。

しかしながら、上述したこれらの明細書のなからには、鼻に投与するためのミク ロスフェア（ｉｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）を用いるという点については記載されて いない。

鼻に薬物を送達するためのミクロスフェアの調製法については、ＰＣＴ／ＧＢ８ ６１００７２１（Ｆｉｓｏｎｓ）に記載されている。これは、全身適用薬物送達 系（ｄｅｒｉｖｅｒｙ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏ ｎ）より、むしろ局部用のある特別な薬物（ｓｏｄｉｕｍ　ｃｒｏｍｏｇｌｙｃ ａｔｅ）について言及しているにすぎない（Ｊ　、　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｒ ｅｌｅａｓｅ、１゜１５−２２．１９８４）。重要なのは、イオン交換樹脂の機 能が、医薬を長期間粘膜表面に接触した状態を保たせ、かつ吸収量を増加させな いことである。

同様に、モリモトら（Ｊ、Ｐｈｒｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　　ｖｏｌ　３７ 　　ｐａｇｅｓ１３５−１３６　１９８５）は、ラットにおけるインシュリンお よびカルシトニンのためのデリバリシステムとして、鼻ゲル（ｎａｓａｌ　ｇｅ ｌ）を用いた（ｏｎｃｅ　ａｇａｉｎ　ｐｏｌｙａｃｒｙｌｉｃ　ａｃｉｄ）。

この場合、吸収効率の増加が示されると共に、重大な血漿中のグルコースレベル の低下が通常のものと比較して見られる。

現在において、鼻は、全身適用薬物送達のためのより好ましいルートとして推奨 されている。特に、ＤＮＡの組換え技術により作られるペプチド、プロティン、 またはこれらの類似物やこれらの破片等において注目されている。上述したその 他の医薬は、経口による吸収が乏しいか、胃腸内にて大量に代謝されるか、−回 肝臓を通過することにより代謝してしまう。

しかしながら、はとんどのポリペプチドの薬物は、鼻孔内に投与された場合には 、低いバイオアベイラビリティ（生体有効性：　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔ ｙ）　Ｌか示さない。

算用スプレーを用いて鼻を急激に洗浄することは、潜在的な吸収表面からの薬物 の損失に対して主な要因であると考えられる。さらに、ペプチドやプロティンの 場合における、薬物の酵素的分解と分子の大きさは、低いバイオアベイラビリテ ィを与える役割がある。

我々の以前に出願した審査中の明細書（ＰＣＴ／ＧＢ　８ｇ１００３９６）には 、増進剤（ｅｎｈａｎｃｅｒ）を含んだ鼻孔内のミクロスフェア形成体について 明らかにしている。我々は、６０００以下の分子量のペプチドの薬物において、 増進剤は要求されず、さらには望ましくないことを発見した。

従って、本発明においては、多数のミクロスフェアとそれぞれのミクロスフェア と会合する活性なペプチドとを含む粘膜透過用薬物送達組成物であり、この薬物 が、全身に送達される薬物であり、さらに、最大の分子量が６０００（望ましく は最小が１０００である）であり、さらにまた、増進剤が不要である粘膜透過用 薬物送達組成物を提供するものである。

「増進剤（ｅｎｈａｎｃｅｒ）　Ｊとは、粘膜を通じての吸収を増加させるすべ ての材料のことをいう。このような材料は、ミューカリティック剤（ｍｕｃｏｌ ｔｉｃ　　ａｇｅｎｔｓ）、酵素分解防止剤および粘膜の細胞膜の透水性を増加 させる混合物などが含まれる。特に、はんはつみえの混合物から除外される全て の増進剤は、ＰＣＴ／ＧＢ　８ｇ１００３９６において明らかにされている。与 えられた合成物が増進剤であるかどうかは、生体内もしくは良好なモデル内で、 増進剤を有するか有さず、かつ会合しておらず、薬物として極性の小さい分子を 含有する二つの処方を比較することにより決定することができ、薬物の生体内へ の取り込みが、臨床的に重大な量であるかいなかにより決定される。

薬物の語は、薬理学上活性な全てのペプチド（分子量の小さいものを含む）、ホ ルモン、ワクチンやこれらの成分を包含して用いられる。例えば、単離した抗原 か、抗原的部分かこれらの類似品である。

ミクロスフェアは、好ましくはフリーズドライにより形成されたパウダーとして 、スプレーもしくは生体密着特性により投与される。ミクロスフェアは１０〜１ ００μｍの大きさで、好ましくは（４０〜６０１．ｔＩＱであり（スウエリンッ グ後）、粘膜表面上でゲル化する生物学的適合材料にて調製される。通常は常に 固体のミクロスフェアが好ましい。

スターチからなるミクロスフェア（必要ならば架橋されたもの）は、より好まし い材料である。その他のミクロスフェアは、シェラチン、アルブミン、コラーゲ ン、デキストリン、デキストラン変性物等が含まれる。

これらのミクロスフェアシステムの調製については、製薬学の文献に記載されて いる（例えば、Ｄａｖｉｓ　　ｅｔ　ａｌ、　　（Ｅｄｓ）。

ｍ１ｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｔｈｅｒａｐｙ″、　　　Ｅｌ ｓｅｖｉｅｒ　ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＰｒｅｓｓ、　　１９８４．）。また、エ マルジョン法と相間分離法によるものも好ましい。

最終的にミクロスフェアは、化学的な架橋かもしくは熱処理により変性される。

活性剤を、ミクロスフェアの形成時もしくは１．形成後吸着させることによりミ クロスフェア内に混合することも可能である。このシステムの効力は、ミクロス フェアマトリクスの物理的な性質、例えば、架橋の程度等により制御することが できる。ミクロスフェアによる送達システムには、例えばインシュリンミクロス フェアのように活性ペプチドかもしくはプロティンそのものから作られるミクロ スフェアも含まれる。

有利な条件を附加するため、分子は、ミクロスフェアシステムに形成された変性 によりその特性がコントロールされる。例えば、架橋量をコントロールすること 、もしくは吸収される薬物の分散能力を変更した場合などである。ミクロスフェ アにより移動する薬物の全量は、ローディングキャパシティと称され、これは、 薬物分子の物理化学的性質、特に粒子マトリックスの親和性や分子のサイズによ り決定される。より高いローディングキャパシティを得るためには、ミクロスフ ェアの実際の製造プロセス中において、投与する薬物をミクロスフェア中に含有 させることにより実現される。治療掌上の影響を与えるための投与すべき薬物材 料の総量は、多くのペプチドやプロティンにおいて２〜３ｍｇかそれ以下のオー ダであることが知られている。

生体接着性を有し、さらに溶出性（ｒｅｌｅａｓｅ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）が コントロールされた同様の大きさのマイクロカプセルも同様に、投与される薬の バイオアベイラビリティの増加と変性に関して同じ利益が与えられることを期待 される。これらのマイクロカプセルは、さまざまな方法で製造される。カプセル の表面は、それ自・身と接着することができ、もしくはよく知られた熟練された 技術であるコーティング方法により変性されることができる。これらのコーティ ング材料としては、生体接着性のあるポリマー、例えば、ボリカーボフイル（ｐ ｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｉ　１）、力−ボボル（ｃａｒｂｏｐｏｌ）、ＤＥＡＥ− デキストリン（ＤＥＡＥ−ｄｅｘｔｒａｎ）、アルギナート（ａｌｇｉｎａｔｅ ｓ）などを選択することが好ましい。これらのマイクロカプセルは、この明細書 の目的からミクロスフェアであると考えられ、さらに直径が１０〜１００μｍで あることが好ましい。

ミクロスフェアと薬物とを組み合わせて用いる場合に、生体接着性ミクロスフェ アシステムは、それらが同時に投与された時に、極性を有する薬物のバイオアベ イラビリティを大幅に増加させる能力を有することが見出だされる。

この薬効を増加させる効力は、鼻孔内における送達システムの多大な保持力によ るものであると推定される。

このミクロスフェアの混合物は、酵素による薬効の減少に対して医薬の保護を与 えることもできる。

混合物は、以下のリストから選択された薬物とともに用いられる。なお、本発明 においてはこの薬物に限定されるものではない。

例えば、インシュリン、カルシトニン（例えば、ブタ、ヒト、サーモン、トリ、 ウナギ等）およびその人工変性品、ンケファリン（ｅｎｋｅｐｈａｌｉｎｓ）” 　、ＬＨＲＨ，およびその類似体（Ｎａｆａｒｅｌｉｎ、　Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ 、Ｚｏｌｉｄｅｘ）、ＧＨＲＨ（ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎ　ｒｅｌｅａｓｉ ｎｇｈｏｒｉｏｎ）”、ニフェディピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎ）、ＴＨＦ（ｔｈ ｙｍｉｃ　ｈｕｍｏｒａｌ　ｆａｃｔｏｒ）”、ＣＧＲＰ（ｃａｌｃｉｔｏｎｉ ｎ　ｇｅｎｅ　　ｒｅｌａｔｅ　　ｐｅｐｔｉｄｅ）”　、アトリアルナトリウ レリック　ペプチド（ａｔｒｉａｌ　ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ　　ｐｅｐｔｉｄ ｅ）’、アンチバイオティクス（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、メトクログラフイ ド（ｍｅｔｏｃｌｏｐｒａｍｉｄｅ）”、エルゴタミン（ｅｒｇｏｔａｍｉｎｅ ）”　、ビゾチジン（Ｐｉｚｏｔｉｚｉｎ）”　、ナーサルワクチン　［特に、 ＡＩＤＳワクチン、はしか（ｍｅａｓｌｅｓ）、ライノウィルスタイプ１３（ｒ ｈｉｎｏｖｉｒｕｓＴｙｐｅ　１３）、およびレスビレイトリインンシテイアル ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｃｉｔｉａｌ　ｖｉｒｕｓ）ド、およ びペンタミジン（ｐｅｎｔａａ＋１ｄｉｎｅ）などが挙げられる。

上記リスト中、星印（８）の薬剤は、本発明のミクロスフェアシステムに用いる のに好ましいものである。

欠」 ミクロスフェアは、鼻吸入器かもしくは圧縮噴霧器を用いて、鼻を通じて投与す ることができる。これらの例では、すでに鼻への使用を指定された粉状システム が実用化されている。

このように、この発明においてはさらに、人間もしくは他の動物に、上述した投 与方法にて、人間もしくは他の動物の粘膜表面、例えば膣、目、鼻等に処置する 方法を提供するものである。

本発明の実施例を、試験、および図面にて説明する。

第１図は、ヒツジにおける血漿内のグルコースのレベルを、インシュリンの鼻孔 内への投与において、他のプリ７（ソイ法および静脈からのものと共に示すグラ フである。

第２図は、羊における生体内のインシュリンのレベルを示すグラフである。

第３図は、スターチミクロスフェアと組み合わせたインシュリンを繰り返して投 薬した場合の羊における生体内のグルコースレベルを示すグラフである。

第４図は、羊における生体内のインシュリンの関係を示すグラフである。

第５図は、ヒト（ｎ−５）におけるスターチミクロスフェアと組み合わせたイン シュリン鼻孔から投与した際の血漿中のグルコースレベルを示すグラフである。

第６図は、スターチミクロスフェアのみを鼻孔から投与（コントロール）した場 合のグルコースレベルを示すグラフである。

第７図は、スターチミクロスフェアと組み合わせたインシュリンを、鼻孔内から 投与した際の被験者の一人における血漿内のグルコースレベルを示すグラフであ る。

第８図は、酵素分解に対するミクロスフェアと組み合わせたインシュリンの安定 性を示すグラフである。

ミクロスフェアは、容易に利用することができる。例えば、スターチのものは「 スフェレックス（Ｓ　ｐｈｅｒｅｘ）Ｊ　（Ｐ　ｈａｒｍａｃｉａ）、を同様の ものとして用いることができる。しかし、通常上述したディビス等により与えら れる方法により作られたものが用いられる。以下に実験例を示す。

アルブミン　ミクロスフェア ２５％　ＨＳＡ溶液　１０峠（ｐＨ＝　５　）を撹拌しつつ、３０％ＰＥＧ溶液 を、相分離が生じるまで添加する（約２　、５１１２）。このシステムは、１５ 分間撹拌された後、混合物を９０℃まで徐々に加熱して、アルブミン滴を固形化 する。そして、この温度で３０分間保つ。熱による架橋の代わりに、グルタルア ルデヒドにより、アルブミンを架橋する方法があるが、この方法は、熱による方 法と比較して、大きな粒子の塊を形成すると思われる。

５００　ｒｐａ＋の撹拌により、粒径が４３±６μｍの粒子が形成される。

スターチ　ミクロスフェア ５％のスターチ溶液（ｐＨ＝７）１５ｘＱは、７０℃に保たれている。この溶液 を撹拌（５００ｒｐｍ）Ｌ、つつ、相分離が生じるまで３０％のＰＥＧ溶液を加 える（約７１）。その後このシステムは、さらに１５分間撹拌し、次いで撹拌し つつ氷にて冷却する。

その後、ミクロスフェアは、フィルタにより分離され、フリーズドライされる。

５００　ｒｐｍの回転数において、粒径は３３±１０ａｍの大きさ１０％の牛の シェラチン（ｐＨ＝８．５）　３０ｘＱを、５０℃に保ち、そして撹拌（５００ ｒｐｍ）Ｌながらコアサルベージョン領域（ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ　　ｒｅ ｇｉｏｎ）まで達するまでＰＥＧを添加した（約２０ｉｆｆ）。このステップを コントロールするためには、ネフエロメータ（ｎｅｐｈｅｌｏｍｅｔｅｒ）を用 いることができる。混合物は、撹拌されつつ氷により冷却される。ミクロスフェ アは、濾過されフリーズドライされて分離される。

回転数５０　Ｏｒｐｍにより、粒子の径が６０±！Ｏμｍのものが製造された。

インシュリンを含むシェラチンミクロスフェア２．５％のＺｎ−インシュリン　 ＩＯ峠は、少量の０．１ＮＨＣ１により沈降し、その後撹拌され１０％のブタの シェラチンと３５℃の温度において混合される。混合物を混合中、３０％ＰＥＧ をコアサルベージョンが生じるまで添加される（約８１）。

システムは、その浸水により冷却され、そしてミクロスフェアは、濾過されフリ ーズドライされて分離される。

インシュリンを含有するアルブミンミクロスフェアこれらのミクロスフェアは、 コルサルベージョンにより準備される。

２０％（ｖ／ｖ）のヒトの血清アルブミン（ｐＨ＝５）５ｘＣへ、５００ｒｐｍ で撹拌しつつ、２．５％のＺｎ−インシュリン（ｐＨ＝　６　。

７）５１（２をゆっくり加え、そしてｐ）（の低いアルブミン溶液はインシュリ ンを沈殿させる。これに、粒子が形成されるまで、３０％のＰＥＧ　　４０００ の溶液が添加（約２１）される。これに、２５％のグルタルアルデヒドを１００ μｇ添加し、そしてこの混合物を３分間撹拌した後、アルブミンの粒子の集結を 防止するため蒸留水を１５１添加する。架橋は、計２０分継続しておこなわれる 。粒子は濾過により分離され、蒸留水（ｐＨ＝　５　）により蒸留された後、フ リーズドライされる。

スターチ−インシュリンシステムの準備は、フリーズドライされたスターチミク ロスフェアを、インシュリンを含有するリン酸緩衝溶液（ｐＨ＝７．３）に添加 することにより行なわれる。

その後、１時間撹拌され、軽い粉状となるまでフリーズドライされる。インシュ リンの代表的な濃度としては、ミクロスフェア中、ＩＩＵ／３１９である。ミク ロスフェアは、これより多量もしくは少量充填することができる。

からの送達の　究 以下は、動物（ヒツジ）における鼻からの送達についての研究である。さらにヒ トにおいても行なわれた。

インシュリン すべての動物の研究における、生体内のグルコースのレベルは、グルコース−オ キシダーゼ法が用いられた。生体内のインシュリンのレベルは、ラジオイムノア ッセイ法（ａ　ｒａｄｉｏｉｍＩＩｌｕｎｅ・ａｓｓａｙ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ｄ ｏｕｂｕｌｅ−ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｅｃｈｎｉｇｕｅ）を用いてヒツジの実験 により決定される。

実験例１　：　羊による実験 Ｚｎ−結晶化高純度セミシンセティックヒューマンインシュリン（Ｚｎ−ｃｒｙ ｓｔａｌｌｉｚｅｄ　ｈｉｇｈｌｙ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　５ｅｉｉｓｙｎｔｈｅ ｔｉｃ　ｈｕ＋＋＋ａｎｉｎｓｕｌｉｎ）が用いられ、純粋なプロティンそれぞ れ１　ｍｇに、２８１Ｕのインシュリンが相当する。インシュリンの溶液は、１ ７７５Ｍ　　リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．３）内に準備される。

１８匹の雑種のヒツジ（Ｓ　ｕｆｆｏｌｋ　ａｎｄ　Ｔ　ｅｘｅｌ）が、この研 究に用いられた。鼻孔内への溶液の投与のため、３５ＣＩ１１のブルーラインア ンビリカルカニユーレ（サイズ　６　　ＦＧ）は、羊の鼻孔内に予め１０ｃｍ挿 入した。その後、１１Ｉ２シリンジから溶液を送達した。粉状の場合の鼻からの 投与のために、６．５ｍａ＋のＢＯＣ気管内用チューブ（ＢＯＣｅｎｄｏｔｒａ ｃｈｅａｌ　ｔｕｂｅ：　ｒｅｄ　ｒｕｂｂｅｒ。

ｃｕｆｆｅｄ）は、粉状のものが充填されており、そして羊の外鼻孔内に予め６ ｃＩＩ挿入された後、鼻孔内に粉を吹き付ける。

羊の１ｋｇ当たりの必要な量（±Ｓ、Ｄ、）は、３５．９（上２゜７）である。

動物は、インシュリン投与前には断食しない。これは、これを達成するのが困難 であり、動物中にインシュリンに対する抵抗力が含まれる可能性があるからであ る。すなわち、そのような条件では、ヒツジの血液内のグルコースレベルは、イ ンシュリンの投与により容品に反応しないからである。

インシュリン溶液および粉状物の準備 インシュリンを有する溶液は、１／７５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．３）内に準 備される。その後、これらは静脈内用、もしくは鼻孔内用の液状として用いられ る、そして、フリーズドライされたミクロスフェアの準備も行なわれる。インシ ュリン溶液内のミクロスフェアの必要量は分散させられ、室温にて１時間撹拌さ せられる。そして、その後粉状物をえるために、フリーズドライされる。

インシュリン処方の投与 インシュリンは静脈経路より投与される場合は、０．１１Ｕ／ｋｇ、皮下経路に よる場合は、０　、２１０／　ｋｇ、そして、鼻を利用した場合は２１１１／ｋ ｇである。三匹のヒツジが、それぞれの実験に用いられた （１）静脈投与用として、インシュリン水溶液４１０／＠１２が調製された。

（２）インシュリンの鼻投与°用の水溶性液として、２００１０／ｍｅが調製さ れた。

（３）インシュリンの鼻投与用として、フリーズドライされたスターチミクロス フェア（２、５＠ｇ／　ｋｇ）と組み合わしたものが用意された。これらのもの を調製するために、５００％ｇのスフエレクス（Ｓ　ｐｈｅｒｅｘ）は、４００ １０のインシュリンを含有する１７７５Ｍリン酸緩衝液３０ｍＱ中分散され、１ 時間混合され、フリーズドライされる。

（４）インシュリンの鼻投与用として、スターチミクロスフェア（２，５ｍ９／ ｋｇ）との組み合わせたのものが調製された。羊には、二度投与された。準備は 上記（３）と同様である。

（５）インシュリンを含まない（コントロール）スターチミクロスフェア（２、 ５ｘｙ／　ｋｇ）の鼻投与用のものが調製された。準備のために、５００ｚ９の スフェレクス（Ｓ　ｐｈｅｒｅｘ）は、１／７５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ＝　７ ．３）３０ｘＱ内に分散され、１時間混合され、その後フリーズドライされた。

（６）インシュリンの皮下投与用として、４．２　ＩＵ／ｍ９の水溶液を準備し た。

５１１Ｑの血液のサンプルは、ヒツジの首の静脈からカニユーレにより採取し、 破水上に集められた。それぞれの血液のサンプルは、二つの部分に分割されてい る。インシュリンの分析のために、集められた血液（２，５１Ｑ）はヘパリン（ Ｌ　ｉ　Ｈｅｐａｒｉｎ）で凝結防止された５ｍ１２のチューブ内で、ゆるやか に混合される。

グルコースの分析のために、集められた血液は、５ｘＱのフッ素化オキサレート （ｆｌｕｏｒｉｄｅ　ｏｘａｌａｔｅ）のチューブ内で、ゆるやかに混合される 。回収した全ての血液のサンプルは、砕いた氷上に保持され、４℃、３０００ｒ ｐｍにて遠心分離が行なわれる。集められた血漿は、−２０℃にて保存され、イ ンシュリンおよびグルコースの分析が行なわれる［インシュリンは、ラジオイノ ムアツセイ法（ｒａｄｉｏｉ＋ａ＋ａｕｎｏ　ａｓｓａｙ）により分析される。

］。

第１図は、単なるインシュリンの溶液のもの、ブランクであるスターチミクロス フェアのもの、ミクロスフェアとインシュリンと組み合わせたものの鼻孔内への 投与のもの、およびインシュリンを静脈から投与したものの血漿中のグルコース のレベルを示すものである。第２図は、血漿中のインシュリンレベルの曲線を示 すものである。鼻孔内に投与される単なる溶液であるインシュリンは、血漿中の グルコースレベルに重大な影響を及ぼさないこと、およびこのルートにより吸収 されたインシュリンの総量は、極めて少量であることがわかる。図中の記号は１ ６ページに示す。

インシュリンとスターチミクロスフェアとの組み合わせによる投与は、単なる重 用インシュリン溶液と比較して血漿中のインシュリンのＡＣＵ内の増加は１８０ ％となる。同時にインシュリンのピーク値は、３５０％にまで増加する。静脈か らによるものでは、鋭いピークが、１５〜２０分の間に現れ、急激に減少する。

第３図は、スターチミクロスフェアとインシュリンとの組み合わせによるものを 二度投与した後の血漿中のグルコースレベルを示すものである。定常的な投与と 同様な効力が与えられ、−回目の投与から５０分後、および二回目の投与から５ ５分後に現れるグルコースレベルの最低値が現れる。二回目の投与および一回目 の投与からの反応間には干渉はないように思われる。

血漿内のインシュリンのレベル（第４図）は、二つの分離性の良い鋭いピークが 最初と二度目の投与からそれぞれ１５分、３５分後に得られる。

実験例２　：ヒトの研究−インシュリン健康で、さらにたばこを吸わない男女の 志願者（体重が５０〜７０ｋｇ）が、この研究のために志願した。

ａ）スターチミクロスフェア（１ｘｇ／　ｋｇ）と組み合わされたインシュリン （１１Ｕ／ｋｇ）、 ｂ）ミクロスフェアのみ 上記二つの処方は、−晩生の期間投与された。処方は、鼻吹き込みシステムを用 いて投与された。血液のグルコースのレベルは、手の背側の血管内にカミューラ を挿入して血液を採取して得られるサンプルを５分毎にモニタした。

Ｎａ−結晶化高純度半合成人インシュリン（Ｎａ　−ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅｄ ｈｉｇｈｌｙ　ｐｕｒＨｉｅｄ　ｓｅｍｉｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｈｕｍａｎ　１ ｎｓｕｌｉｎ）が用いられ、純度の高いプロティン１ａ＋ｇは、２８１０のイン シュリンに相当する。インシュリンのミクロスフェア体は、ヒツジにおける場合 と同様にして調製された。しかしながら、インシュリン溶液はリン酸緩衝液を用 いずに用意された。

第５図および第６図において、ミクロスフェアのみを投与した場合は血漿のグル コースレベルの低下は見られないが、ミクロスフェアとインシュリンとの組み合 わせたものを投与した場合は、血漿のグルコースレベルが大きく低下することを 示している。第７図は、スターチミクロスフェアと１　１０／ｋｇのインシュリ ンの投与の後、４　、５　ｇａｏｌ／　ｌから３．４１１皇ｏ１／１へと血漿の グルコースレベルが低下するというサブジェクトＤからのデ−タが示されている 。

１１硼影：安定性試験 例えば、インシュリンのようなペプチドやプロティンは、例えばアミノペプチタ ーゼのような粘膜の酵素による酵素的分解の影響を受けやすい。実験は、ミクロ スフェアシステム内にカプセル化されたペプチドやプロティンが、鼻孔内におい て、酵素的分解に対抗することができるかどうかの研究のために行なわれた。

０、ＩＭのトリスバッフｙ　−（Ｔｒｉｓ　ｂｕｆｆｅｒ　；　５．６１Ｕ＃ｆ ｆ）内のインシュリン、およびアルプミンミクロスフヱア（０，４１０／１（２ ）内に含有されたインシュリンは、１８０分までの間、０．０５％のトリプシン （ｔｒｉｐｓｉｎ）溶液　１ｘ（ｌと共に保温された。サンプルは、適当な時間 をおいて回収され、分解されずに残ったインシュリンの濃度を測定する。

第８図は、本発明のミクロスフェアシステム（この実施例においてはアルブミン によるものである）は、薬剤（この実施例においてはインシュリンを用いた）を 酵素的分解から防御することができるかを示したものである。これは、薬剤を投 与後の鼻孔内における分解に対し、ペプチドやプロティンを防御するという重要 性がある。

図中の記号 第１図 ○　　スターチミクロスフェア ・　　インシュリン溶液 △　　インシュリン＋スターチミクロスフエアム　　インシュリン（静脈による 場合）第２図 ○　　スターチミクロスフェア ・　　スターチ溶液 △　　インシュリン＋スターチミクロスフエＦｉσ、２ ご 時間（ｍｉｎ） Ｆｉｇ、　３ ｊ２Ｌ９内６ｙシ＞＋）ン　（ｍｌＵ／ｌ）グ）しユース（ｍｍｏｌ／ｌ） グ：ｂ）−Ｘ　（ｍｍｏｌ／１） り゛）−コース（ｍｍｏｌハ○ 「関　卑　１ｉｉｉ　　報　告 ｒ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　’＝’　”ｋ”−’−ＰＣＴ／Ｇ Ｂ　８８１００８３６　　　］国際調査報告　　　ＰＣｒ／ＧＢ　ａ８１００８ ３６

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. １．粘膜表面に接触するゲルおよび各々のミクロスフェアと会合した活性薬物に 適合した多数のミクロスフェアと薬物とからなり、上記薬物が、最大分子量が６ ０００であるペプチドで、かつ全身適用薬物送達系である薬物であり、増進剤の 制限を受けずに粘膜を介して薬物を送達することを特徴とする薬物送達組成物。
2. ２．ミクロスフェアが、スターチ、スターチ誘導体、ジェラチン、アルブミン、 コラーゲン、デキストリンおよびデキストリン誘導体から選ばれる１種類以上の 成分からなることを特徴とする請求項１記載の薬物送達組成物。
3. ３．ミクロスフェアがスターチからなり、その平均粒径が、１０〜１００μｍで あることを特徴とする請求項２記載の薬物送達組成物。
4. ４．ミクロスフェアを構成する成分が少なくとも部分的に架橋していることを特 徴とする請求項２または３記載の薬物送達組成物。
5. ５．ミクロスフェアが活性な薬物自身で構成されていることを特徴とする請求項 １記載の薬物送達組成物。
6. ６．ミクロスフェアが膣用に用いられることを特徴とする請求項１〜５の内のい ずれか一つの請求項記載の薬物送達組成物。
7. ７．ミクロスフェアが眼用に用いられることを特徴とする請求項１〜５の内のい ずれか一つの請求項記載の薬物送達組成物。
8. ８．ミクロスフェアが鼻の粘膜用に用いられることを特徴とする請求項１〜５の 内のいずれか一つの請求項記載の薬物送達組成物。
9. ９．薬物送達組成物がワクチンであることを特徴とする請求項１〜８の内のいず れか一つの請求項記載の薬物送達組成物。
10. １０．薬物が少なくとも１０００の分子量を有することを特徴とする請求項１〜 ９の内のいずれか一つの請求項記載の薬物送達組成物。
11. １１．ミクロスフェアの調製中にミクロスフェア内に薬物を組み込む工程を有す ることを特徴とする請求項１〜１０の内のいずれか一つの請求項に記載された薬 物送達組成物の製造方法。
12. １２．薬物がインシュリンまたはカルシトニンであることを特徴とする請求項１ １記載の薬物送達組成物の製造方法により製造された薬物送達組成物。
13. １３．（ｉ）ミクロスフェアを調製する工程、（ｉｉ）調製したミクロスフェア 内もしくはミクロスフェア上に薬物を吸着させる工程、 （ｉｉｉ）（ｉｉ）にて製造した製造物をフリーズドライする工程、を有するこ とを特徴とする請求項１１記載の薬物送達組成物の製造方法。