JPH03500286A - 安定なインターフェロン複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ′　ｔイン　−フエロン　人 本発明は、α−インターフェロンを投与するための注入可能な徐放性剤形として 有用な不溶性亜鉛−プロタミン−α−インターフェロン複合体に関する。

当分野では、注入可能な薬学的配合物は公知である。レミングトンの薬剤学（Ｒ ｅ＋＋＋ｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｖａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ） 、〔マック出版社（Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ）、イー ストン、ＰＡ。

１６版、１９８０年〕を参照されたい。通常、このような配合物は、コロイド、 乳剤および懸濁側のような分散剤の形である。より最近では、ポリマーからなる 徐放性の注入可能な配合物が用いあり、配合物中に活性成分を長く保持すること ができない、それは、分散が破壊されるか、分散体が周囲の体液（例えば、血液 またはリンパ液）中に溶解しすぎるからである。

有用な水性基質の徐放性懸濁液の例は、プロタミン−亜鉛−インシュリン懸濁液 である。米国薬局方（ＵＳＰ）収載の懸濁液は、ｐＨ７，１〜７．４”ｉ？プロ タミ７（１〜１．５ｍｇプロタミ７／　１００ＵＳＰイｙシユリン単位）および 亜鉛（０，１５〜０．２５■亜鉛／１００ＵＳＰインシ水素ナトリワムによって 維持されており、配合物は、１．４〜１．８ｗ／ｖχグリセリンおよび０．１８ 〜０　、２２ｗ／ｖＸクレゾールまたは０．２２〜０．２ｈ／νχフエノールも 含む、インシュリン濃度と患者の応答によるが、１回の注射は３日までインシュ リンを放出する。

インターフェロンはある種のウィルスに対する抗ウィルス活性およびある種の癌 に対する抗癌活性を示す一群のタンパク質である。インターフェロンは天然また は組換えα（白血球）、β（線維芽細胞）およびＴ（免疫性）インターフェロン を含むが、本発明の組成物の使用にはα−インターフェロンが好適である。ヒト α−インターフェロンは天然に生産するα１インターフエロンおよびα２インタ ーフエロンと呼ばれるものを含む少なくとも１１種の成分の混合物であり、本発 明においてはα２インターフエロンがより好適である。天然に生産するαインタ ーフェロンに類似する生物学的性質を示すヒトαインターフェロンは組換え法に よって生産することができる。ルーベンシュフィン（Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ）　 ％　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、＋　６９５巻、５−１６ 頁（１９８２）　、ナガタら、Ｎａｔｕｒｅ、２８４巻、３１６−３２０頁（１ ９８０頁）；欧州特許第３２．１３４号；およびＵＳ特許第４．２８９．６９０ 号は、α２インターフエロンの製造方法を開示している。２以上の天然型αイン ターフェロンフラグメントが連結された、いわゆるαハイブリッドインターフェ ロンも本発明の範囲に包含される（例えば、欧州特許第５１　、８７３号を参照 ）、α２インターフエロンの非経口投与は、カポシ肉腫、基底細胞癌、多発性骨 肉腫およびウィルス性いぼに有効であることが報告されている。

αインターフェロンの有効投与量は当分野の熟練者によって容易に決定され得る 。

本発明は、複合体成分として、亜鉛、プロタミンおよびαインターフェロンとグ リシンおよびヒト血清アルブミン（Ｏ５＾）から成る不溶性複合体に関する。知 られている亜鉛−プロタミン−インシュリン複合体は、不溶化をこれらの３種成 分によるが、り質ＨＳＡも含み、そして驚くべきことに過剰モルのグリシン、亜 鉛キレート化剤までも含みうる０本発明の不溶性複合体の好適な製造方法は、最 小量の溶解性タンパク質を上滑に残し、そして不溶性複合体が容易に沈殿する大 きなコロイド凝集体よりも長時間分散している微細なコロイド粒子として存在す るようにするために亜鉛より先に、プロタミンを溶液に添加することからなる。

別の好適な方法は、プロタミンと亜鉛の添加を同時に行うことからなる。

下記の表１は、種々の成分を省いた結果と０．０２Ｍリン酸塩緩衝液（ロ）中１ ■）ＩｓＡ／ｄ、　０．１■αインターフエロン（ＩＦＮ）／Ｉｆおよび２０■ グリシン（Ｇ）／ｄからなる組成物への亜鉛とプロタミンの添加の順番の効果を 示す。第１欄は添加の順番の効果；最初に亜鉛を添加することは、５％溶解性タ ンパク質をもたらし、一方、最初にプロタミンを添加することは、１％以下の溶 解性タンパク質をもたらす、第３．４および５１ｉ！はそれぞれ緩衝液不合、緩 衝液とグリシン不含、そしてＩＳＡ不含の場合には、各組合せは少なくとも５％ 溶解性タンパク質となり、最大量の複合体は形成されない、一方、第２Ｂは最高 の不溶性を有する複合体の形成には、グリシンの存在は必須でないことを示して おり、第１欄は、プロタミンが亜鉛より先に添加される限り、亜鉛のキレート形 成特性にも拘らずグリシンは複合体形成に不利益ではないことを示している。

表１ 組成物における溶解性タンパク質測定量および亜鉛／プロタミン添加順の依存性 本発明の組成物を調製するのに好適に使用される凍結乾燥インターフェロン中に 存在する結果として、グリシンは本発明において０〜５０■／ｄで存在する。Ｕ 、Ｓ、特許第４．４９６，５３７号を参照されたい、この特許において、緩衝液 、グリシンおよびＩＳＡは、生物学的安定性を確保するために凍結乾燥前にイン ターフェロン溶液に添加される。

不溶性複合体の生成は平衡現象であり、そして表１に示したように、徐放を最大 限にするためにほぼ完全な不溶化（即ち、９９％）が達成される。しかし、ある 溶解性成分はすぐに放出されるのが望ましければ、組成比を変更するかｐＨを調 整してもよい。不溶性複合体の最大生成は、インターフェロン溶液がｐＨ８，０ 〜８．４、好適にはｐＨ８，２に調整されたときに達成されるが、ｐＨを７．５ 〜８．５に調整することは、αインターフェロンをすぐに放出するための溶解性 種の生成を可能にする。下記表２は、ｐ）Ｉ変化による複合体生成の変動を示す 。

表２ ２．’６４　’　８．０ ２．６４　’−’８．３ ’　２．４４　８．４ ｊ、８０　８．６ 複合体からのαインターフェロンの放出は、希釈によって溶解するのではなく、 むしろ血清アルブミン同様生理学的キレート他剤の排除（ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅ ｎｔ）によるので、ｉｎ　ｖｉ’ｔｒｏでは測定できない、　ｉｎ　ｖｉｖｏで の放出速度は、放射性ヨー素化αインターフェロンを用い、注射部位の放鼾能の 消失と血清および尿中の放射能の存在をモニターすることによって測定できる。

ラットでこのような試験を行ったところ、２週間以上の徐放が観察された。

本発明の配合物中のαインターフェロン量は、複合体１！Ｉｄｌあたり２Ｘ１０ ’〜２００Ｘ１０６国際単位で１．υ、）であり、好適には２×１０’　１．Ｕ 、／ｄである。

亜鉛は、亜鉛塩１〜２０■／ｍ１で用いられる。ここで亜鉛塩は酢酸亜鉛、塩化 亜鉛または硫酸亜鉛から選ばれるが、酢酸亜鉛が好適である。

プロタミンは、０．２５〜５■、好ましくは２．５■プロタミン／ｄである。こ こでプロタミンはプロタミン遊離塩基、塩化プロタミン、リン酸プロクミンまた は硫酸プロタミンから選ばれる■／雌である。

化学的および薬学的に適合する任意の緩衝液をインターフェロン溶液の調製に使 用することができるが、リン酸塩緩衝液が好適である。インターフェロン溶液は ｐＨ６，５〜８．０、好ましくはｐ）１７．０〜７．４　ｒ最大溶解度を示す（ Ｕ、Ｓ、特許第４．４９６，５３７号を参照）。水酸化ナトリウムは複合体生成 前にインターフェロン溶液のｐｉ（を７．５〜８．５に調整するのに好適である 。緩衝剤は亜鉛に対して高い親和性を持っているものであってはならない。

高い親和性を持っていると、複合体から亜鉛を取り出す傾向があるからである。

グリシンは亜鉛キレート化剤なので、グリシンが存在しない場合、亜鉛と親和性 がないことは特に重要である。グリシンがない場合、緩衝液による亜鉛との親和 力は許容される。亜鉛（例えばクエン酸塩または酢酸塩）とある程度親和力を有 する緩衝液は、インターフェロンの即座の放出のために溶解性部分を増加するの に使用されうる。

本発明の不溶性複合体を調製する好適な方法は、Ｕ、Ｓ、特許第４．４９６．５ ３７号に記載されているようにして調製された凍結乾燥αインターフェロンを、 所望のｐ）Ｉ酢酸亜鉛と硫酸プロタミンからなる溶液で再調製することである。

凍結乾燥αインターフェロンの調製と複合体調製の実施例を一１Ｊ１１Ｌ− ′・・αイン　−フェロン ””　！レタ１− α−２インターフェロン　２　Ｘ１０’１．Ｕ。

無水リン酸水素ナトリウム、試薬級　２．２７リン酸二水素ナトリウム、　ＵＳ Ｐ　０．５５グリシ゛ン、ＵＳＰ　２０．０ ヒトアルブミン、　ＵＳＰ　１．０ 注射用水、　ｏｓｐ　適量　全量　１．〇−注射用水（ＵＳＰ）の一部を、攪拌 器つきの適当な容器に入れた。

無水リン酸水素ナトリウム（試薬級）；リン酸二水素ナトリウム（ＵＳＰ）　； ヒトアルブミン（ＵＳＰ）　；およびα−２インターフエロンを入れ、攪拌しな がら溶解した。バッチを注射用水（ＵＳＰ）で最終容量にした。

無菌領域で、溶液を洗浄され完全性が試験された無菌の０．２μフイルターを通 過させ無菌容器にろ過した。ろ過後、フィルターの完全性を試験した。

無菌バイアルに溶液を無菌的に充填し、充填したバイアルを無菌的凍結乾燥機に 入れ、溶液を凍結乾燥した。無菌的に栓をし、バイアルをタリンプシールした。

−１Ｊｌ（Ｌ− αイン　−　エロン　ム 一壓／虱− 凍結乾燥α、インターフェロンバイアル（実施例１参照）酢酸亜鉛　４．０ 硫酸プロタミン　２．５ 水酸化ナトリウム　０．６ 注射用水　適量　全量　ＩＩｄ 注射用水の一部に凍結乾燥α２インターフエロンを溶解した。

水酸化ナトリウムでｐＨ８，２に調整した。硫酸プロタミンを加え、攪拌した； 酢酸亜鉛を加え、攪拌した。残りの注射用水で最終容量にした。水酸化ナトリウ ム、硫酸プロタミンおよび酢酸亜鉛は、製水性溶液（例えば、プロタミンの場合 、２５■／−水性溶液１００μりとして加えるのが好ましい。

バルクのαインターフェロン溶液（即ち、非凍結乾燥）または他の適当なαイン ターフェロン試料を本発明の複合体を生成するのに使用することができる。上記 のような成分の添加順番、即ち、リン酸緩衝液、ＩＳＡおよびグリシンを水性α インターフェロンに加え、ｐＨを調整し、プロタミンを加え、亜鉛を加え、そし て溶液を最終溶液に調整することが望ましい。

手続補正書 軸；４．４．Ｉげ酊

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．不溶性亜鉛−プロタミン−αインターフェロン複合体。
2. ２．非経口的に受容しうる請求の範囲第１項記載の不溶性亜鉛−プロタミン−α インターフェロン複合体からなる徐放性医薬組成物。
3. ３．αインターフェロン２×１０６〜２００×１０６国際単位／ｍｌ（ｐＨ７． ５〜８．５の適合した緩衝液）；亜鉛塩１〜２０ｍｇ／ｍｌ；プロタミン遊離塩 基または薬学的に受容しうるその塩０．２５〜５ｍｇ／ｍｌ；グリシン０〜５０ ｍｇ／ｍｌ；ヒト血清アルブミン０〜１０ｍｇ／ｍｌからなる請求の範囲第２項 記載の組成物。
4. ４．亜鉛塩が酢酸亜鉛である、請求の範囲第２または３項記載の組成物。
5. ５．プロタミン成分が硫酸プロタミンである、請求の範囲第２〜４項記載のいず れか１項記載の組成物。
6. ６．緩衝液のｐＨが８．０〜８．４である、請求の範囲第２〜５項のいずれか１ 項記載の組成物。
7. ７．溶液１ｍｌあたり、酢酸亜鉛４．０ｍｇ、硫酸プロタミン２．５ｍｇ、水酸 化ナトリウム０．６ｍｇ、ヒト血清アルブミン１ｍｇおよびグリシン２０ｍｇか らなり、緩衝液がリン酸塩緩衝液である、請求の範囲第２〜６項のいずれか１項 記載の組成物。
8. ８．α２インターフェロン２×１０７国際単位からなる、請求の範囲第２〜７項 のいずれか１項記載の組成物。
9. ９．緩衝液のｐＨが８．２である、請求の範囲第２〜８項のいずれか１項記載の 組成物。
10. １０．ｐＨ．５〜８．５の適合した緩衝液中でαインターフェロン溶液を反応さ せることからなり、前記緩衝液が任意にヒト血清アルブミンおよび／またはグリ シンを含み、プロタミン遊離塩基または薬学的に受容されるその塩および亜鉛塩 を含む、請求の範囲第１〜９項のいずれか１項記載の亜鉛−プロタミン−αイン ターフェロン複合体の製造方法。
11. １１．前記プロタミン遊離塩基またはプロタミン塩を、亜鉛塩より先にまたは同 時に、前記αインターフェロン緩衝液と反応させる、請求の範囲第１０項記載の 方法。
12. １２．ａ）ｐＨ７．５〜８．５、好ましくはｐＨ８．２を有し、任意にヒト血清 アルブミンおよび／またはグリシンを含むαインターフェロンの緩衝液を用意し ； ｂ）前記αインターフェロン緩衝液をプロタミン遊離塩基または薬学的に受容さ れるその塩および亜鉛塩と反応させる工程からなり、前記亜鉛塩は前記プロタミ ン遊離塩基または薬学的に受容されるその塩の添加と同時にまたは添加後に添加 される； 工程からなる請求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載の亜鉛−プロタミン− αインターフェロン複合体の製造方法。