JPH0343079A - 酵素剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、マコモ（２ｉｚａｎｉａ　１ａｔｉｆｏｌｉ
ａ　Ｏ，５ｔａｐｆ）及びその近縁類を培地とし、Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ属の細菌を培養して得た酵素を含む酵素剤
を用いた、化粧品、頭髪用化粧品、医薬品、医薬部外品
、入浴剤ベット用化粧品、洗浄剤、洗剤等に関する。

［従来技術］ 一般に、入浴剤は無機塩や香料を用いた物が主であるが
、本来の温泉の様な強い効果を得られる物は極めて少な
かった。

近年、タンパク質分解酵素を添加した物が肌つやを向上
させる目的で配合されているが、充分な効果が得られて
いないのが現状である。

シャンプー、台所用洗剤、ペット用シャンプー住居用洗
浄剤、洗濯用洗剤等は、洗浄成分自体の有害性の為、手
荒れ、湿疹、皮膚炎、経皮吸収による内臓疾患を引起こ
す原因となっている。この緩和の為、マイルド剤や植物
エキスの配合などの対策がとられているが不充分であり
、また、メチルタウリン系やアミノ酸系などのマイルド
な洗浄剤では、充分な洗浄力が得られないのが現状であ
る 化粧品類は、基本的に、肌にとって異物であり肌荒れ、
湿疹等のトラブルの原因となっている。

近年は、より肌の構成成分に近い物を用いる方法や消炎
剤、消炎酵素剤などの配合により緩和がなされているが
、まだ不充分なのが現状である。

近年、外用医薬品、医薬部外品等の治療剤の発展はめざ
ましいものがあるが、合成医薬品が大半であり種々の副
作用が問題になっているのが現状である。

これらの解決に消炎酵素剤が用いられ、高い成績を示す
こともあるが、不安定である為、経時変化により製品中
の力価が低下し、充分な効果が得られないことや、耐熱
性がない為、加熱加工や加熱殺菌ができない欠点がある
。洗浄剤では、同様の理由で高温洗浄の業務用クリーニ
ングには適さないなどの問題があるのが現状である。

［発明が解決しようとする問題点］ 従来の入浴剤は、角質層の妨害の為、有効成分の経皮吸
収不足やイオン効果が充分得られないなど効果が出にく
いという問題があった。

従って、本発明の目的は、角質層の妨害を低減させ、あ
らゆる入浴剤の効果を高めると共に、従来にない有効成
分を含む酵素剤を提供することである。

従来のシャンプーや台所用洗剤、住居用洗浄剤等は、洗
浄成分の刺激性、経皮吸収毒性の為、皮膚障害が絶えな
いという問題と、マイルドな洗浄剤では充分な洗浄力が
得られないという問題かあ。

た。

従って、本発明の目的は、皮膚障害が少なく、かつ充分
な洗浄力を持つ酵素剤を提供することである。

従来の化粧品類は、植物性、鉱油性を問わず乳化剤、防
腐剤、基剤等の皮膚刺激の為、皮膚障害が絶えないのが
通常であり、また消炎剤等を配合した物であっても、充
分な低刺激性の製品が得られないという問題があった。

従って、本発明の目的は、皮膚障害が少なく、かつ充分
な保湿力を持つ酵素剤を提供することである。

従来の外用医薬品で、心臓病薬や消炎鎮痛剤を各種膏体
に配合した物の場合は、経皮吸収不充分であったり、持
続性に欠ける問題があり、傷創治療薬の内、消炎酵素剤
の場合、不活化を起こしゃすく、経時変化の為、効果の
低下をきたすという問題があった。

従って、本発明の目的は、経皮吸収が良好で、持続性の
ある酵素剤を提供することである。

［問題点を解決する為の手段１ かかる問題を解決する為、本発明は、マコモ（Ｚｉｚａ
ｎｉａ　１ａｔｉｆｏｌｉａ　Ｏ，５ｔａｐｆ）及びそ
の近縁類を培地とし、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の細菌を培養
して得た酵素を含有することを特徴とする酵素剤を提案
するものである。

本発明による酵素剤は、７１モ（ＺｉＺａｎｉａ　１ａ
ｔｌ−ｆｏｌｉａ　Ｏ，５ｔａｐｆ）及びその近縁類を
培地とし、［３ａＣ−ｉｌｌｕｓ属の細菌を培養して得
た酵素を含有することが必須である。

本発明に用いるマ＝＋Ｅ（Ｚｉｚａｎｉａ　Ｉａｔｉｆ
ｏｌｉａ　００Ｓｔａｐｆ）及びその近縁類を培地とし
、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の細菌を培養して得た酵素には、
イネ科の植物マコモ（Ｚｉｚａｎｉａ　Ｉａｔｉｆｏｌ
ｉａ　Ｏ，５ｔａｐｆ）及びその近縁類に、Ｂａｃｉ　
ｌ　Ｉｕｓ属の細菌を作用させ、５０〜９５°Ｃの比較
的高温で培養した物を、適当な大きざに細断した物や微
粉末にした物を用いる。必要に応じて、水製エキス、水
と有機溶媒の混合溶媒抽出エキスやエキスから、膜モジ
ュールによる分子量分画精製法あるいはゲルパーミッシ
ョン精製法、塩析精製法などにより酵素分画を得るが、
単離精製してもよい。酵素は、単離するより粗精製物の
分画エキスの方が、効果、コスト等の点で有利である。

含有する酵素は、プロテアーゼ、ポリガラクチュロナー
ゼ、リパーゼ、ペクチナーゼ、β−１，３−グルカナー
ゼ、アミラーゼなどである。

本発明に用いるＢａｃｉｌｌｕｓ属の細菌は、内生芽胞
をつくる桿菌及び球菌で、Ｂａｃ　ｉ　Ｉ　Ｉａｃｅａ
ｅ科の物であれば有用な物が多いが、特に、Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　５ｕｂｔ−ｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕ
ｂｔｉｌｉｓ　０Ｎ−１（工業技術院微生物技術研究所
寄託、　ＦＥＲ）ｌ−ＰＮｏ４６０８）　、Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｃｅｒｅｕｓｌＢａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅ
ｒｉｕｍ　ＸＢａｃｉｌｌｕｓ　ｐｏｌｙ−ｍｙｘａｌ
Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎ
ｓなどが好ましい。

本発明の酵素剤を製造する場合、抽出温度を水の場合６
０℃程度に上げても不活化することがないので、加温抽
出が可能であり、液体粗エキスや乾燥粗エキス、あるい
は酵素分画物を用いてもよい。

入浴剤、洗浄剤、化粧品、外用医薬品のいずれの場合も
、ｐＨは４．５〜９．５の範囲とすることにより長期間
の保存が可能で、活性を維持できる。

タンニン、タンパク質凝固剤、重金属など酵素を不活化
する成分を含有しなければ、本発明の酵素剤は気分効果
を発揮することができる。

配合する濃度は目的により異なるが、０，２２μ汎フイ
ルターの透過液で分子量５００以下を除去した酵素粗分
画の場合、０．１〜２０％程度が好ましい。

［作用・効果］ 本発明の酵素剤は、６０℃以上でも活性を発揮しアルカ
リプロテアーゼにおいては、９５℃でも活性を持ってい
る。ｐＨも４．０〜１１．５と広範囲にわたる保存安定
性も、ｐＨ９，０の場合、水溶液中で２５℃、６か月で
活性の半減期を示すなど従来の酵素の１０倍以上の安定
性を示す。

実施例１（入浴剤〉 無水硫酸ナトリウム　　　　　２０９ 炭酸水素ナトリウム　　　　　５ｇ 炭酸カルシウム　　　　　　　１ｇ ホウ砂　　　　　　　　　　　５ｇ ローマカミツレオイル　　　ｏ、　ｉ　ｇ以上を混合し
た物に、マコモ乾燥物２００ｇとＢ−ａｃｉｌｌｕｓ　
５ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ
　、　Ｂａｃｉｌｌｕ−３Ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃ
ｉｅｎｓを用い８０℃で培養した物を水１ｆＪで抽出し
、その液を０．２２μの膜モジユールフィルターでろ過
し、そのろ液をポリスルフォン膜を用いて分子＝１ｏｏ
ｏ以下の物質を除去した物仝量（カゼイン−フォーリン
法で測定した酵素単価として約２０万単位を含む。本分
画には生菌は含有されない）を加えた物。

比較例１ 無水硫酸ナトリウム　　　　　２０ｇ 炭酸水素ナトリウム　　　　　５９ 炭酸カルシウム　　　　　　　１ｇ ホウ砂　　　　　　　　　　　５９ ０−マ力ミツレオイル　　　０．１９ 以上を混合した物に、市販入浴剤用Ｂａｃｉｌｌｕｓ属
産生プロテアーゼ酵素力価２０万単位を加えた物。

実施例２（入浴剤） マ］モ乾燥物２００　ｇとＢａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔ
ｉｌｉｓ　、　Ｂａｃｉ　Ｉ　ｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ、
　Ｂａｃｉ　ｌ　Ｉｕｓ　Ａｍｙｌｏｌ　１ｑｕｅｆａ
ｃｉｅｎｓを用い８０℃で培養した物を水１１で抽出し
、その液を０．２２μの膜モジユールフィルターでろ過
し、そのろ液をポリスルフォン膜を用いて分子１１ｏｏ
ｏ以下の物質を除去した物全量（カビイン−フォーワン
法で測定した酵素単価として約２０万単位を含む本分画
には生菌は含有されない）。

比較例２ 市販の炭酸水素ナトリウム系の酵素入浴剤５０ｇ（規定
量の約２倍）。

実験例１（入浴剤） 上記実施例及び比較例で得られた各入浴剤を、４１℃、
２００　Ｎの浴湯に溶かし、３人のパネラ−が２０分間
入浴し、皮膚のすべすべ感、発汗量、保温効果（室温２
５℃において、手のひらの表面温度が５℃低下するまで
の時間を、サーモグラフィーにより入浴２分後から測定
した）を評価した。

その結果は、以下の第−表に示す通りである。

第−表 保温効果については体温降下時間（分）で表した。

以上のように、本発明の実施例の入浴剤は、皮膚のすべ
すべ感も良好で、皮膚表面の不要な角質を取除いたこと
がうかがえ美肌効果に優れている。

また発汗量は、比較例１の市販の酵素に比し数倍認めら
れ、新陳代謝が促進されたことがわかる。

更に、保温効果においても比較例の数倍持続することが
わかった。

実施例２の酵素分画のみよりも、無機塩と組合わせた実
施例１の方が更に効果があることもわかる。

実施例１，２は、２週間湯のつぎたしだけで、交換を必
要としない経済効果も認められた。

これらの結果より、本発明の酵素剤が極めて効果の高い
物であることが証明された。

実施例３（シャンプー及び台所用洗剤）ラウリルエーテ
ル硫酸ナトリウム　　３００ｇラウリン酸ジェタノール
アマイド　　　５０ｇクエン酸　　　　　　　　　　　
　　　　１ｇ以上を混合した物に、マコモ乾燥物２００
９と８−ａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ１Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　、　Ｂａｃｉｌｌｕ−Ｓ　Ａ
ＩＩＩｙ＋０１ｉｑＬＩｅｆａＣｉｅｎＳを用い８０℃
で培養した物を水１．１！で抽出し、その液を０．２２
μの膜モジユールフィルターでろ過し、そのろ液をポリ
スルフォン膜を用いて分子＝　１ｏｏｏ以下の物質を除
去した吻合量（カゼイン−フォーリン法で測定した酵素
単価として約２０万単位を含む。本分画には生菌は含有
されない）と精製水を加え混合溶解して、全量を１００
０ＩｎＩｌとした物。

比較例３ ラウリルエーテル硫酸ナトリウム　　３００９ラウリン
酸ジエタノールアマイド　　　５０ｇクエン酸　　　　
　　　　　　　　　　　　１ｇ以上を混合した物を、精
製水で全量１０００Ｉｎｉとした物。

実施例４（シャンプー及び台所用洗剤）２−ラウリル−
Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾ
リニウムベタイン　　３００　ｇヤシ脂肪酸ジェタノー
ルアマイド　　　５９クエン酸　　　　　　　　　　　
　　　　５ｇステアリン酸ジエチルアミンエチルアミド
ｇ 以上を混合した物に、マコモ乾燥物２００９とＢ−ａｃ
ｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
ｃｅｒｅｕｓ　、　Ｂａｃｉｌｌｕ−３Ａ１１ｙＩＯ１
ｉｑｕｅｆａＣｉｅｎＳを用い８０℃で培養した物を水
１．１！で抽出し、その液を０．２２μの膜モジユール
フィルターでろ過し、そのろ液をポリスルフォン膜を用
いて分子量１ｏｏｏ以下の物質を除去した吻合Ｎ（カゼ
イン−フォーリン法で測定した酵素単価として約２０万
単位を含む。本分画には生菌は含有されない）と精製水
を加え混合溶解して、全量を１０００ｒＩ１１とした物
。

比較例４ ２−ラウリル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシ
エチルイミダゾリニウムベタイン　　３００９ヤシ脂肪
酸ジエタノールアマイド　　　５ｇクエン酸　　　　　
　　　　　　　　　　５ｇステアリン酸ジエヂルアミノ
エチルアミドｇ 以上を混合した物を、精製水で仝量１０００７とした物
。

実施例５（住居用洗浄剤） ポリオキシエチレン（１０モル）ラウリルエーテル　　
　　　　３００ｄ ブチルジエチレングリ」−ルエーテル ５ｒｎ１ リモネン　　　１７！ 以上を混合した物に、マコモ乾燥物２００　ｇとＢ−ａ
ｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉＳ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ
　ＣｅｒｅｔＪＳ　、　Ｂａｃｉｌｌｕ−３ＡｍｙＩｏ
ｌ　１ＱＬＩｅｆａｃｉｅｎｓを用い８０’Ｃで培養し
た物を水１ｆＪで抽出し、その液を０．２２μの膜モジ
ユールフィルターでろ過し、そのろ液をポリスルフォン
膜を用いて分子１ｔｏｏｏ以下の物質を除去した物量量
（カゼイン−フォーリン法で測定した酵素単価として約
２０万単位を含む。本分画には生菌は含有されない）と
精製水を加え混合溶解して、全量を１０００ｍとした物
。

比較例５ ポリオキシエチレン（１０モル）ラウリルエーテル　　
　　　　　３０（７ ブチルジエチレングリコールエーテル ５ｍｌ１ リモネン　　　１７ 以上を混合した物を、精製水で全ｆｆ１ｌｏ００Ｉｒ１
１とした物。

実施例６（クレンジングクリーム） 固形パラフィン　　　　　　　５０ｇ セタノール　　　　　　　　　３０ｇ ワセリン　　　　　　　　　２００ｇ 流動パラフィン　　　　　　３００３ セチル硫酸ナト１ノウム　　　　３０９ポリオキシエチ
レン（１６モル）ソルビタンモノラウリン酸エステル　
　　　　　４０ｇ１．３−ブチレングリコール　　　６
０ｔｊ香料　　　　　　　　　　　　　５ｇ ブチルパラベン　　　　　　　１５９ 以上を混合した物に、マコモ乾燥物２００９と８−ａｃ
ｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
ｃｅｒｅｕｓ　、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ａｍｙｌｏｌｉ
ｑｕｅｆａｃｉｅｎｓを用い８０℃で培養した物を水１
１て抽出し、その液を０．２２μの膜モジユールフィル
ターでろ過し、そのろ液をポリスルフォン膜を用いて分
子量１ｏｏｏ以下の物質を除去した物量量（カゼイン−
フォーリン法で測定した酵素単価として約２０万単位を
含む。本分画には生菌は含有されない）と精製水を加え
混合溶解して、全量を１０００ｇとした物。

比較例６ 固形パラフィン　　　　　　　５０ｇ セタノール　　　　　　　　　３０ｇ ワセリン　　　　　　　　　２００ｇ 流動パラフィン　　　　　　３００　Ｌｊセチル硫酸ナ
トリウム　　　　３０ｇ ポリオキシエチレン（１６モル〉ソルビタンモノラウリ
ン酸エステル　　　　　　４０９１．３−ブチレングリ
コール　　　６０９香料　　　　　　　　　　　　５９ ブチルパラベン　　　　　　　１５ｇ 以上を混合した物を、精製水で仝量１０００９とした物
。

実施例７（洗）Ｒ用洗剤〉 米ぬか脂肪酸ナトリウム　　　　°　　３００　’ｊヤ
シ脂肪酸ナトリウム　　　　　　　２５０ｇラウリン酸
ジェタノールアマイド　　　５０９パルミチル硫酸ナト
リウム　　　　　１００ｇ炭酸ナトリウム　　　　　　
　　　　　２３０ｇメタケイ酸ナトリウム　　　　　　
　　５０９以上を混合した物に、マコモ乾燥物２００　
ｇとＢ−ａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　、　Ｂａｃｉｌｌｕ−ｓ　
Ａｍｙｌｏｌ　１ｑｕｅｆａｃｉｅｎｓを用い８０℃で
培養した物を水１ｆＪで抽出し、その液を０．２２μの
膜モジユールフィルターでろ過し、そのろ液をポリスル
フォン膜を用いて分子量１ｏｏｏ以下の物質を除去した
物量量（カゼイン−フォーリン法で測定した酵素単価と
して約２０万単位を含む。本分画には生菌は含有されな
い）を乾燥した物２０ｇ以上を加え、均一に混合した物
。

比較例７ 米ぬか脂肪酸ナトリウム　　　　　　３００９Ｘ７シ脂
肪酸ナトリウム　　　　　　　　２５０３ラウリン酸ジ
ェタノールアマイド　　　５０ｇパルミチル硫酸ナトリ
ウム　　　　　１００ｇ炭酸ナトリウム　　　　　　　
　　　　２５０９メタケイ酸ナトリウム　　　　　　　
　５０ｇ以上を均一に混合した物。

比較例８ 米ぬか脂肪酸ナトリウム　　　　　　３００　（ｊヤシ
脂肪酸ナトリウム　　　　　　　２５０ｇラウリン酸ジ
ェタノールアマイド　　　５０ｇパルミチル硫酸ナトリ
ウム　・　　　　ｉｏｏｇ炭酸ナトリウム　　　　　　
　　”　　　１７０ｇメタケイ酸ナトリウム　　　　　
　　　５０ｇ以上を混合した物に、市販洗濯用酵素プロ
テアーゼ２０９、アミラーゼ２０９、リパーゼ２０ｇ、
セルラーゼ２０９を加え、均一に混合した物。

実施例８（住居用洗浄剤） ポリオキシエチレン（１０モル）ラウリルエーテル　　
　　　　　３００ｄ ブチルジエチレングリコールエーテル ５ｒｎｉ リモネン　　　１ｒＩＩＩ１ 以上を混合した物に、マ」モ乾燥物２００９と８−ａｃ
ｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
ｃｅｒｅｕｓ　１Ｂａｃｉｌｌｕ−ｓ　Ａｍｙｌｏｌｉ
ｑｕｅｒａｃｉｅｎｓを用い８０℃で培養した物を水１
１て抽出した液を、ポリスルフォンと酢酸セルロース複
合膜モジュールを用いて分子量５０００以下の分画ろ液
とし、これを１００−に濃縮した吻合品（本分画には酵
素は含有されない）を加え、精製水で全量をｉ　ｏｏｏ
−とした物。

実験例２（洗浄剤） 上記実施例及び比較例で得られた各洗剤を、５人のパネ
ラ−が１５日間使用し、肌荒れを５段階に評価した。洗
浄力は、人工汚染布法による皿の洗浄枚数、人工汚染布
法による洗浄効率で表示した。

なお汚染器は、牛脂８０部、大豆油２０部、５ｎｄａｎ
　［１０，２部からなる汚垢１ｇをφ６ｃｍの時計器に
塗布した物である。人工汚染布法はＪＩＳに準じ、洗剤
１９／Ｉで使用し、３０℃時と８５℃時の２種類の温度
で洗浄した。

その結果は以下の第二衣の通りである。

第二衣 肌荒れ感：◎・・・全員が手荒れを感じない０・・・１
人が手荒れを感じた Δ・・・２人が手荒れを感じた− ■・・・３人が手荒れを感じた Ｘ・・・４Å以上が手荒れを感じた 以上の結果から、手荒れの起こりゃすい洗浄剤を著しく
マイルド化する作用が認められ、洗浄かも向上すること
を認めた。マイルド化は、酵素を含まない分画にも認め
られる。市販の洗剤用酵素よりも強い洗浄力増強効果が
認められ、特に、８５℃の高温時でも洗浄力増強効果が
あることは優れた特徴である。マイルドでかつ洗浄力が
強く、高温下でも高い洗浄力があるなど相反する要素が
高いレベルで一致できていることが証明された。

実施例９（化粧水） グリセリン　　　　　　　５０ｇ オレイルアルコール　　　　　２ｇ ポリオキシエチレン（３０モル〉オレイルエーテル　　
　　　　　　　　　　　　３０ｇエヂルアルコール　　
　　１５０ｇ 香料　　　　　　　　　　　１９ パラベンプロピル　　　　　０．５９ パラベンブチル　　　　　０．５ｇ エデト酸ナトリウム　　　０．２ｇ 、以上を混合した物に、マコモ乾燥物２００９と８−ａ
ｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌ＋ｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ
　ｃｅｒｅｕｓ　、　Ｂａｃｉｌｌｕ−ｓ　Ａｍｙｌｏ
ｌｉｑｕｅｆ’ａｃｉｅｎｓを用い８０℃で培養した物
を水１０で抽出し、その液を０．２２μの膜上ジュール
フィルターでろ過し、そのろ液をポリスルフォン膜を用
いて分子量１０００以下の物質を除去した物（カゼイン
−７４−リン法で測定した酵素単価として約２０万単位
を含む。本分画には生菌は含有されない〉の１７１０を
加え、精製水で金星を１０００−とした物。

比較例９ グリセリン　　　　　　　５０９ オレイルアルコール　　　　　２ｇ ポリオキシエチレン（３０モル）オレイルエーテル　　
　　　　　　　　　　　３０ｇエチルアルコール　　　
　　１５０９ 香料　　　　　　　　　　　１９ パラベンプロピル　　　　　０．５ｇ パラベンブチル　　　　　０．５９ エデト酸す１〜リウム　　　　０．２９以上を混合した
物を、精製水で全１１０００−とじた物。

実施例１０（クリーム） ミツロウ　　　　　　　　　　　　２０ｇステアリン酸
　　　　　　　　　１５０ｇオレイルアルコール　　　
　　　　５０ｇスクワラン　　　　　　　　　　　５０
ｇポリオキシエチレン（２０モル）セチルニーアル　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４０９グリセ
リン　　　　　　　　　　１５０ｇトリエタノールアミ
ン　　　　　　　７ｇ香料　　　　　　　　　　　　　
　　３ｇブチルヒドロキシアニソール　　　５ｇパラベ
ンブチル　　　　　　　　　１０ｇ以上を混合した物に
、マコモ乾燥物２００９と８−ａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂ
ｔｉｌｉｓ１Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　、　Ｂ
ａｃｉｌｌｕ−ｓ　Ａｍｙｌｏｌ　１Ｑｕｅｆａｃｉｅ
ｎｓを用イ８０℃で培養した物を水１．Ｑで抽出した液
を、ポリスルフォンと酢酸セルロース複合膜を用いて分
子量５０００以下の分画ろ液とし、これを１００　ｄに
濃縮した物（本分画には酵素は含有されない〉の１７５
を加え、精製水で金星を１０００−とした物。

比較例１０ ミツロウ　　　　　　　　　　　　２０ｇステアリン酸
　　　　　　　　　１５０ｇオレイルアルコール　　　
　　　　５０９スクワラン　　　　　　　　　　　５０
９ポリオキシエチレン（２０モル〉セチルエーテル　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４ｏｇグリヒ
リン　　　　　　　　　　　　１５０ｇトリエタノール
アミン　　　　　　　７ｇ香料　　　　　　　　　　　
　　　　３９ブヂルヒドロキシアニソール　　　５３パ
ラベンブチル　　　　　　　　　１０９以上を混合した
物を、精製水で全ｒｉｌｏ００ｒｒ１１と−した物。

実施例１１（口紅） 二酸化チタン　　　　　　　　　５８ｇ赤色２２３号　
　　　　　　　　８ｇ だいだい２０３号　　　　　　　　３９ミツロウ　　　
　　　　　　　２００９カルナバロウ　　　　　　　　
　８０ｇヒマシ油　　　　　　　　　　　５００９イソ
プロピルミリスデル酸工ステル ００ｇ ブチルヒドロキシ１〜ルエン　　　１ｇ以上を混合した
物に、マコモ乾燥物２００９と８−ａｃｉｌｌｕｓ　５
ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　
、　Ｂａｃ＋ＩＩｕ−ｓ　ＡｍｙｌｏｌｉＱｕｅｆａｃ
ｉｅｎｓを用い８０℃で培養した物を水１Ｄで抽出した
液を、ポリスルフォンと酢酸セルロース複合膜を用いて
分子量５０００以下の分画ろ液とし、これを乾固した物
（本分画には酵素は含有されない）をｈ［ｌえ、加温し
ながら均一に混合し型に入れて冷ＦＪＩ　Ｌだ物。

比較例１１ 二酸化チタン　　　　　　　　　５８ｇ赤色２２３号　
　　　　　　　　８３ だいだい２０３号　　　　　　　３ｇ ミツロウ　　　　　　　　　　　２００ｇカルナバロウ
　　　　　　　　　８０９ヒマシ油　　　　　　　　　
　　５００ｇイソプロピルミリスチル酸エステル ５０ｇ ブチルヒドロキシトルエン　　　１ｇ 以上を、加温しながら均一に混合し、型に入れて冷却し
た物。

実施例１２（除毛剤〉 チオグリコール酸カルシウム　　　３０ｇステアリルア
ルコール　　　　　　４０ｇセチルアルコール　　　　
　　　　４０ｇミツロウ　　　　　　　　　　　１００
９ヒマシ油　　　　　　　　　　　　１５０ｒｒ１１ポ
リオキシエチレン（１５モル）ミリスチルエーテル　　
　　　　　　　　　　　　　５０９バニリン　　　　　
　　　　　　０．１９以上を混合した物に、マコモ乾燥
物２００９と８−ａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ１
Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　、　Ｂａｃｉｌｌｕ
−Ｓ　Ａｍｙ＋０１１ｑｕｅｆａｃｉｅｎｓを用い８０
℃で培養した物を水１．ｉ！で抽出した液を、ポリスル
フォンと酢酸セルロース複合膜を用いて分子ｆｉ５００
０以下の分画ろ液とし、これを１００−に濃縮した吻合
量（本分画には酵素は含有されない）を加え、精製水で
全量を１０００ｒＩ１１とした物。

比較例１２ チオグリコール酸カルシウム　　　３０ｇステアリルア
ルコール　　　　　　４０ｇセチルアルコール　　　　
　　　　４０９ミツロウ　　　　　　　　　　　　１０
０ｇヒマシ油　　　　　　　　　　　　１５０ｒｎＩｌ
ポリオキシエチレン（１５モル）ミリスチルエーテル　
　　　　　　　　　　　　　　　５０９バニリン　　　
　　　　　　　　０・１ｇ以上を混合した物を、精製水
で仝量１ｏｏｏ−とじた物。

実験例３（化粧品〉 上記実施例及び比較例で得られた化粧品を、１０人のパ
ネラ−に１か月間（除毛剤は５回）使用し、肌（口唇）
の荒れ、湿疹を７段階に、しっとり感を５段階に評価し
た。

その結果は、以下の第三表に示す通りである。

第三表 肌（口唇）の荒れ： ◎・・・全員が感じない　　　Ｏ・・・１人が感じたＯ
・・・２人が感じた　　　　Δ・・・４人が感じたＸ・
・・８Å以上が感じた　　ＸＸ・・・発赤ＸＸＸ・・・
湿疹、かゆみ等のトラブルがあるしっとり感：◎・・・
充分みずみずしい○・・・みずみずしい ■・・・一般化粧品並み Δ・・・やや乾燥 Ｘ・・・カサカサする 以上のように、本弁明の化粧品は、しっとり感が強く保
湿作用が強いこと、また肌や口唇の荒れを防止する能力
が高いことが証明された。

実施例１３（プラスター剤） イソプレンゴム　　　　　　　　　１００９０ジン　　
　　　　　　　　　　１ｏｏ９日本薬局方流動パラフィ
ン　　　５００９ソルビタンモノオレート　　　　　５
０９ポリオキシエチレン（１５−Ｅル）オレイルエーデ
ル　　　　　　　　　　　　　　　　５０９以上を混合
した物と、マ］Ｌ乾燥物２００９と８−ａｃｉｌｌｕｓ
　５ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕ
ｓ　、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ａｍｙｌｏｌ　１ｑｕｅｆ
ａｃｉｅｎｓを用い８０’Ｃで培養した物を水１Ｂで抽
出し、その液を１０μ汎の膜上ジュールでろ過し、その
ろ液をポリスルフォン膜を用いて分子量１０００以下の
物質を除去した物仝量（カゼイン−フォーリン法で測定
した酵素単価として約２０万単位を含む。本分画には生
菌も含有される〉とを７０’Ｃに／Ｊ［ｌ熱しながら混
和し、更に水２００９を加え強く乳化させる。これを温
時、不織イ５に１０μ汎の厚さに塗布し、離型紙を上か
ら被せた物。

実施例１４ イソプレンゴム　　　　　　　　１００ｇロジン　　　
　　　　　　　　　１００ｇ日本薬日本論動パラフィン
　　　３４０ｇソルビタンモノオレート　　　　　５０
ｇポリオキシエチレン（１５モル）オレイルエーテル　
　　　　　　　　　　　　　　　５０９１−メントール
　　　　　　　　　　　　５０ｇｄ−カンファー　　　
　　　　　　　　５０９リ−リチル酸メチル　　　　　
　　　１００ｇ旧−α−１へコフエロール　　　　　１
０ｇ以上を混合した物と、マコモ乾燥物２００９とＢ−
ａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ　ｃｅｒｅｕｓ　、　Ｂａｃ＋１ｌｕ−ｓ　Ａｍｙｌ
ｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓを用い８０℃で培養した物
を水１ｆＪで抽出し、その液を１０μ仇の膜モジュール
でろ過し、そのろ液をポリスルフォン膜を用いて分子Ｈ
１ｏｏｏ以下の物質を除去した吻合量（カゼイン−フォ
ーリン法で測定した酵素単価として約２０万単位を含む
。本分画には生菌は含有される）とを７０°Ｃに加熱し
ながら混和し、更に水２００９を加え強く乳化させる。

これを温時、不織布に１０μ汎の厚さに塗布し、離型紙
を上から被せた物。

比較例１３ イソプレンゴム　　　　　　　　　１００ｇロジン　　
　　　　　　　　　　１００５７日本薬局日本初パラフ
ィン　　　３４０　ｇソルビタンモノオレート　　　　
　５０ｇポリオキシエチレン（１５モル〉オレイルエー
テル　　　　　　　　　　　　　　　　５０９１−メン
トール　　　　　　　　　　　５０９ｄ−カンファー　
　　　　　　　　　５０ｇサリチル酸メチル　　　　　
　　１００９ｄ１−α−トコフェロール　　　　　１０
９以上を７０℃に加熱しながら混和し、更に水２００９
を加え強く乳化させる。これを温時、不織布に１０μ汎
の厚さに塗布し、離型紙を上から被せた物。

実験例４（外用剤） ラットの皮膚に８０番のサンドペーパーですり傷をつく
り、皮下にカラゲニンを注入した後、上記実施例及び比
較例で得られた各軟汽（プラスター剤〉を０．１９／ｃ
ｆｆｌ（φ２．５ｃｍ＞の（Ｘで塗布し、２４時間放置
後、浮腫の東署を求めた。

その結果は、以下の第四表に示す通りである。

（以下余白） 第四表 実験例５ 滲出液のあるヒト湿疹に対して、上記実施例及び比較例
で得られた各軟膏（プラスター剤）を、０．１９／ｃｆ
ｆｌ（φ２．５ｃｍ＞の量で塗布（貼布）し、１日２回
交換して１週間後、その状態を観察した。

その結果は、以下の第五表に示す通りである。

第五表 本発明の外用剤は、上記実験から明らかなように優れた
抗炎症作用と経皮吸収促進効果を示し、かつ副作用ない
し毒性の低いものであり、外用剤として極めて優れたも
のである。

実験例６ マコモ乾燥物２００　ｇとＢａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔ
ｉｌｉｓ　、　Ｂ−ａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ、　
Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｌ’ａｃｉｅ
ｎｓを用い８０℃で培養した物を水１１で抽出し、その
液を０．２２μの膜モジユールフィルターでろ過し、そ
のろ液をポリスルフォン膜を用いて分子量１０００以下
の物質を除去して得た酵素分画のプロテアーゼ特性は、
以下のグラフの実線で示す通りである。

また、市販ａａｃｒｒｌｕｓ属のプロテアーゼ特性を、
グラフに破線で示した。なお、分析方法はカゼイン−フ
ォーリン法によった。

（以下余白〉 ｃ％） ０ １ ２ （ｐＨ） （％） （保＃ｗ４闇 ａｔ２ｓ’″Ｃ１ ｐＨ９，０） ０ 鉛 ω ｉＯ ０ ０ ０ ９０（°ｃ） 以上の結果から、ｐＨ特性、保存性、温度特性のいずれ
においても、従来のＢａＣ１１ｌｔｌＳ属産生酵素より
著しく優れていることが証明された。

これらの実験例から、本発明の酵素剤は、応用範囲が極
めて広く、酵素の特性も極めて優秀であることが証明さ
れた。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）マコモ（ＺｉｚａｎｉａｌａｔｉｆｏｌｉａＯ．
   Ｓｔａｐｆ）及びその近縁類を培地とし、Ｂａｃｉｌｌ
   ｕｓ属の細菌を培養して得た酵素を含有する酵素剤。
2. （２）マコモ（ＺｉｚａｎｉａｌａｔｉｆｏｌｉａＯ．
   Ｓｔａｐｆ）及びその近縁類を培地とし、Ｂａｃｉｌｌ
   ｕｓ属の細菌を培養して得た酵素を単離した酵素剤。
3. （３）酵素が、プロテアーゼ、ポリガラクチュロナーゼ
   、ペクチナーゼ、β−１，３−グルカナーゼ、リパーゼ
   、アミラーゼの内、一種類以上を含む特許請求の範囲第
   （１）項に記載の酵素剤。
4. （４）酵素が、プロテアーゼ、ポリガラクチュロナーゼ
   、ペクチナーゼ、β−１，３−グルカナーゼ、リパーゼ
   、アミラーゼの内、一種類以上を含む特許請求の範囲第
   （２）項に記載の酵素剤。
5. （５）無機塩、無機酸、有機酸、精油、動植物エキス、
   油脂の内、一種類以上と混合して成る特許請求の範囲第
   （１）項から第（４）項に記載の酵素剤。
6. （６）界面活性剤、包接ホスト化合物、無機塩、キレー
   ト剤、アルカリ剤、酸性剤、有機溶剤の内一種類以上と
   混合して成る特許請求の範囲第（１）項から第（４）項
   に記載の酵素剤。
7. （７）界面活性剤、ビタミン、ホルモン、ミネラル、塩
   類、キレート剤、酸化防止剤、ペプタイドプロテイン、
   香料、精油、油脂類、ｐＨ調製剤、色素、顔料、有機溶
   剤、ムコ多糖体、グリコール類糖類、防腐剤の内、一種
   類以上と混合して成る特許請求の範囲第（１）項から第
   （４）項に記載の酵素剤。
8. （８）軟膏剤、湿布剤、プラスター剤、ローション剤、
   液剤、クリーム剤の基剤に混合して成る特許請求の範囲
   第（１）項から第（４）項に記載の酵素剤。
9. （９）Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の細菌が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ
   ｓｕｂｔｉｌｉｓＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＯ
   Ｎ−１（工業技術院微生物技術研究所寄託、ＦＥＲＭ−
   ＰＮｏ４６０８）、ＢａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓＢａ
   ｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ
   ｐｏｌｙｍｙｘａ、Ｂ−ａｃｉｌｌｕｓＡｍｙｌｏｌｉ
   ｑｕｅｆａｃｉｅｎｓの中から選ばれた物の内、一種類
   以上を含む物である特許請求の範囲第（１）項から第（
   ８）項に記載の酵素剤。