JPH03292302A - 新規生理活性物質ｈｓ―１４２―１およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はオーレオバンプイウム（＾ｕｒｅｏｂａｓｉｄ
ｉｕｍ）属に属する微生物により生産され、かつ本態性
高血圧およびうっ血性心不全等の病態に関与する心房性
ナトリウムペプチド（以下、ＡＮＰと略記する。）のレ
セプターに対して拮抗作用を有する新規生理活性物質お
よびその製造法に関する。

かかる作用を有する物質は低血圧症、多尿症等の治療に
用いられる。とくに糖尿病の早期に観察される多尿症に
関しては、ＡＮＰのレセプターに対し拮抗作用を有する
物質がこの症状の治療に関して有効であるとの報告があ
る（１１０８９１００４２８　）。

また本態性高血圧症、うっ血性心不全等におけるＡＮＰ
の病態生理学的役割の解明および健常人におけるＡＮＰ
の生理的役割の解明のための試薬としても有用である。

従来の技術 ＡＮＰは哺乳類の心房から主に分泌されるペプチドホル
モンであり、強力なナトリウム利尿作用および血圧降下
作用を有する。現在では上記の２種の作用のほかに、体
内の多数の器官に分布するＡＮＰのレセプターを介して
細胞外液量の調節を行う作用も有していると考えられて
いる。しかしながら、ＡＮＰの作、用機構および生理的
役割に関しては不明な点が数多く残されており、特異的
にＡＮＰレセプターに対して拮抗作用を有する物質の開
発が強く望まれている〔アニニアル・レビユー・オブ・
ファーマコＶシイ・アンド・トキシコロジイ（Ａｎｎｕ
、Ｒｅｖ、　Ｐｈａｒｍ、　ＴＯＸ、）２９．２３−５
４　（１９８９））。

ＡＮＰのレセプターに対して特異的に拮抗作用を有する
物質に関しては、ＡＮＰの誘導体中に、ＡＮＰによる血
管弛緩に対し拮抗作用を示すものが報告されている（特
開昭６３−２２５３９９）が、ＡＮＰの誘導体以外にＡ
ＮＰのレセプターに対し拮抗作用を有するものは知られ
ていない。

ＡＮＰの生理的および病態生理学的役割をＡＮＦの作用
を遮断することにより検討する方法としては、ＡＮＰに
対する抗体を用いる方法〔プロシーデインゲス・オブ・
ザ・ナショナル・アカデミイ・オブ・サイエンス（Ｐｒ
ｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、）８５゜３１
５５−３１９９（１９８８）　）およびＡＮＰにイオン
的に結合するヘパリンを用いる方法〔ハイバーテンショ
７　（ｆ（ｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）　　９．６０７−
６１０（１９８７）　）が知られているが、これらの方
法に用いる抗体およびヘパリンは、ＡＮＰのレセプター
に直接結合するものではないため、生理学的条件下で内
因性のＡＮＰの作用を解明するには限界がある。従って
、低血圧症、多床症等の治療およびＡＮＰの生理的、病
態生理学的役割を解明にするために、ＡＮＰのレセプタ
ーに直接結合し、ＡＮＰの作用を遮断することができる
物質が求められている。

発明が解決しようとする課題 本発明の目的はＡＮＰレセプターに対して優れた拮抗作
用を有する新規生理活性物質を提供することにある。

課題を解決するための手段 オーレオバシディウム（＾ｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）
属に属する微生物の培養物中にＡＮＰのレセプターへの
結合を阻害する活性を有する生理活性物質が生産される
事実が見いだされ、該培養物から該物質を単離、精製し
１．その理化学的性質を調べたところ新規物質であるこ
とが判明した。

以下、該物質をＨＳ−１４２−１と称する。

本発明は直鎖状にβ１→６結合したＤ−グルコースオリ
ゴマーのＤ−グルコースの任意の位置の水酸基とカプロ
ン酸のカルボキシル基とがエステル結合した構造を有す
る新規生理活性物質ＨＳ−１４２〜１に関する。

上記構造におけるＤ−グルコース残基の数は７〜４０で
あり、カプロン酸残基の数は２〜３０である。

本発明の生理活性物質ＭＳ−１４２−１としては、Ｄ−
グルコース残基の数が２８であり、かつカプロン酸残基
の数が１１である化合物、例えばＭＳ−１４２−１ａ、
Ｄ−グルコース残基の数が１７であり、かつカプロン酸
残基の数が１１である化合物、例えばＨＳ−１４２−１
ｂ、Ｄ−グルコース残基の数が１３であり、かつカプロ
ン酸残基の数が６である化合物、例えばＨＳ−１４２−
Ｉ　Ｃ等が包含される。

ＭＳ−１４２−１ａ、　ＭＳ−１４２−１ｂおよびＨＳ
−１４２−ＩＣの理化学的性質は以下の通りである。

ＨＳ−１４２−１ａ ■　性　状：白色粉末 ■融点：１７５〜１８５℃ ■　分子式：　Ｃ２３４Ｈ３９２０１５２％式％ ） （） 計算値　；　　Ｍ／Ｚ　　５６３７，３■　旋光度：　
〔α〕′；　　＝−２９，４°（Ｃ０，２４，水溶液）
■　赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）ｃｍ−’：
３４２０．　　２９３０．　　１？３０゜１６３５、　
　１４５５．　　１３８０．　　１２５０゜１１７０、
　　１０４５ ■　紫外部吸収スペクトル：　（水溶液）末端吸収を示
すのみ。

■　’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、Ｄ２０
中）：第１図に示す。

■　呈色反応ニアニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素による
呈色反応に陽性、ニンヒドリン、ジニトロフェニルヒド
ラジン、塩化第二鉄、ブロモクレゾールグリーン、ドラ
ーゲンドルフ反応に陰性。

Ｈ３−１４２−１ｂ ■　性　状：白色粉末 ■融点：１７５〜１８５℃ ■　分子式：　Ｃ１５０Ｈ２Ｓ２０！４■　マススペク
トル（ネガティブモード　ＦＡＢ−マススペクトル） 実測値　；　　Ｍ／Ｚ　　３５５７．９　（Ｍ−Ｈ）−
計算値　；　　Ｍ／Ｚ　　３５５８．５■　旋光度：　
〔α：］”；　　＝−２１，１°（ｃＯ，０６，水溶液
）■　赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）ｃｍ−’
：３４２５．　　２９２５．　　１７３０゜１６４５、
　　１４５５．　　１３７５．　　１２５０゜１１７０
、　　１０５０ ■　紫外部吸収スペクトル：　（水溶液）末端吸収を示
すのみ。

■　’　ｌ（−ＮＭＲスペクト”　（５００ＭＨｚ、Ｄ
２０中）：第２図に示す。

■　呈色反応ニアニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素による
呈色反応に陽性、ニンヒドリン、ジニトロフェニルヒド
ラジン、塩化第二鉄、ブロモクレゾールグリーン、ドラ
ーゲンドルフ反応に陰性。

Ｈ３−１４２−１ｃ ■　性　状：白色粉末 ■融点：Ｉ７５〜１８５℃ ■　分子式：　Ｃ＋　Ｉ　４　Ｈ＋　ｓ　２０７２■　
マススペクトル（ネガティブモード　ＦＡＢ−マススペ
クトル） 実測値　；　　Ｍ／Ｚ　　２７１３．３　（Ｍ−Ｈ）−
計算値　、　　Ｍ／２　２７３４．１ ■　旋光度：　〔α〕′コ　＝　−２６，２°（ＣＤ、
４．水溶液）■　赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法
）ｃｍ＝：３４００．　　２９３５．　　１７３５゜１
６５０、　　１４６０．　　１３８０．　　１２５５゜
１１６５、　　１０５０ ■　紫外部吸収スペクトル：　（水溶液）末端吸収を示
すのみ。

■　’　）Ｉ−ＮＭＲスペクト／’　（５［１［ＩＭＨ
ｚ、Ｄ２０中〉：第３図に示す。

■　呈色反応ニアニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素による
呈色反応に陽性、ニンヒドリン、ジニトロフェニルヒド
ラジン、塩化第二鉄、ブロモクレゾールグリーン、ドラ
ーゲンドルフ反応に陰性。

なお以上のデータは下記の機器により測定することがで
きる。

融点：柳本製作所　ミクロ融点測定装置旋光度二日本分
光 ＤＩＰ−３７０デジタル旋光計 赤外部吸収スペクトル：日本電子 ＪＩＲ−ＲＦＸ３０　　ＦＴＩＲ分光光度計紫外部吸収
スペクトル：日立製作所 ２００−２０型　ダブルビーム分光光度計マススペクト
ル二日本電子 ＪＭＳ−３Ｘ　１０２　　質量分析計 ’　）Ｉ−ＮＭＲスペクトルニブルツカ−社ＡＭ−５０
０核磁気共鳴装置 また、上記理化学的性質におけるマススペクトルの計算
値ハモ−スト・アバンダント・マススペクトル（＋ｎｏ
ｓｔ　ａｂｕｎｄａｎｔ　ＭＳ）法により算出した。

次にＨ３−１４２−１の製造法について説明する。

Ｈ３−１４２−１はオーレオバシディウム（＾ｕｒｅ。

ｂａｓｉｄｉｕｍ）属に（９）下記理化学的性質を有す
る微生物を培地に培養し、培養物中にＨ３−１４２−１
を生成蓄積させ、該培養物からＭＳ−１４２−１を採取
することにより製造される。

Ｈ３−１４２−１生産能を有する微生物としてはオーレ
オバシディウム（Ａｕｒｅｏｂａｓ　ｉｄ　ｉｕｍ）属
に属し、ＨＳ−１４２−１生産能を有するものであれば
いずれの微生物でもよい。具体的に好適な例としては、
山口系において採集されたアカマツの落葉より純粋分離
されたオーレオバシディウム・プルランスＱバラエティ
ーψメラニゲナム（Ａｕｒｅｏｂａｓ　ｉｄ　ｉｕｍｐ
ｕｌｌｕｌａｎｓ　　ｖａｒ、　ｍｅｌａｎｉｇｅｎｕ
ｍ）　ＫＡＣ−２３８３株（以下、ＫＡＣ−２３８３と
称する。）があげられる。

ＫＡＣ−２３８３の菌学的性質は以下の通りである。

麦芽エキス寒天培地を用いて、２０℃で培養したとき、
本菌株の集落の直径は培養１８日目方３６〜ｂ 褐色を呈する。本菌株の至適生育温度は２０〜３０℃で
あり、２５〜２７℃で最も良好に生育する。

生育しうるｐＨは２〜８で、至適生育ｐＨは３〜５であ
る。本菌株の菌糸は隔壁を有し、分岐する。菌糸は平滑
で、最初は無色であるが、培養の経過に伴い暗褐色の菌
糸が混在するようになる。菌糸の幅は２〜１０μｍであ
る。分生子形成細胞は未分化で、分生子は菌糸から直接
同調的に形成される。

分生子の個体発生様式は出芽型である。菌糸から形成さ
れた分生子は、酵母様出芽によりさらに増殖する。分生
子は平滑で、楕円形を呈し、１細胞性である。分生子の
大きさは変化に富むが、多くは長さ６．５〜１５．５　
μｍで、幅は２．５〜４μｍである。本菌株は、上述し
たアナモルフのみ観察され、テレオモルフは観察されな
い。

以上の菌学的性質より、本菌株は、オウレオバシデイウ
ム・プルランス（ド・パリ）　・アルノー・バラエティ
−・メラニゲナム・ヘルマニデスーニヂオフ〔＾ｕｒｅ
ｏｂａｓｉｄｉｕｍ　ｐｕｌｌｕｌａｎｓ（ｄｅ　Ｂａ
ｒｙ）Ａｒｎａｕｄ　ｖａｒ、　ｍｅｌａｎｉｇｅｎｕ
ｍ　Ｈｅｒｍａｎｉｄｅｓ−Ｎｉｊｈｏｆ　：］と同定
された。

本発明者らは、本菌株をオウレオバシデイウム・プルラ
ンス・バラエティ−・メラニゲナム（＾ｕｒｅｏｂａｓ
ｉｄｉｕｍ　ｐｕｌｌｕｌａｎｓ　ｖａｒｏｍｅｌａｎ
ｉｇｅｎｕｍ）ＫＡＣ−２３８３と命名した。本菌株は
、平成元年５月１日付けで、微工研条寄第２４０７号と
して、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されてい
る。なお、オウレオバシデイウム・プルランス・バラエ
ティ−・メラニゲナムについての菌学的性質は、スタビ
ロース・イン・マイコロシイ（Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　
Ｍｙｃｏｌｏｇｙ）　（Ｂａａｒｎ）　　１５巻、１４
１〜１７７頁、１９７７年に掲載されているイー・ジェ
イ・ヘルマニデスーニヂオフ（Ｅ、Ｊ、Ｈｅｒｍａｎｌ
ｄｅｓ−Ｎｉｊｏｈｆ　）著のオウレオバシデイウム・
アンド・アライド・ジェネラ（＾ｕｒｅｏｂａｓｉｄｉ
ｕｍ　ａｎｄ　ａｌｌｉｅｄｇｅｎｅｒａ）に詳しく記
載されている。

微生物の培養に際しては、菌類の培養にもちいられる通
常の培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化
しろる炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培
地であれば天然培地、合成培地のいずれでも用いられる
。

炭素源としてはグルコース、フラクトース、シュクロー
ス、ラクトース、スタビロース、澱粉、デキストリン、
マンノース、マルトース、糖蜜、マッンユポテトの素な
どの炭水化物、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸
などの有機酸、メタノール、エタノールなどのアルコー
ル、メタン、エタン、ｎ−パラフィンなどの炭化水素、
グルタミン酸などのアミノ酸あるいはグリセローノペ綿
実油などが用いられる。

窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
リン酸アンモニウムなどのアンモニウム塩、アスパラギ
ン酸、グルタミン、シスチン、アラニンなどのアミノ酸
、尿素、麦芽エキス、ペプトン、肉エキス、酵母エキス
、乾燥酵母、コーン・スチーブ・リカー、大豆粉、綿実
粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメディア、ソ
ルブル・ベジタブル・プロティン、野菜・果実のジニー
スなどが用いられる。

無機物としてはリン酸−水素カリウム、リン酸二水素カ
リウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸マグネンウム、
硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、硫酸コバルト、硫
酸亜鉛、パントテン酸カルシウム、モリブデン酸アンモ
ニウム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸バリウム、炭
酸カルシウム、塩化コバルト、塩化ナトリウム等が用い
られる。

その他必要に応じて培地にビタミンなど菌体の増殖ある
いはＨＳ−１４２−１の生産を促進する物質を加えるこ
とができる。

用いられる微生物が生育のために特定の物質を要求する
場合は、生育に必要なものを加えることが必要である。

培養は振盪培養法、通気攪拌培養法などにより１５〜２
５℃の温度で中性付近のｐＨで行われる。

３〜６日の培養によってＨＳ−１４２−１の蓄積が最大
に達し、培養は完了する。

培養物中に生成蓄積したＨＳ−１４２−１を単離精製す
るに際しては、通常の生理活性物質を培養物から単離精
製する方法が適用される。即ち、アセトン、メタノール
などの溶剤による菌体成分の抽出、沖過、遠心分離など
による菌体除去、適当な溶媒系による分配、吸着樹脂、
シリカゲル、修飾シリカゲル、アルミナ、セルロース、
珪藻土、珪酸マグネシウム、ゲルｐ過剤などを用いるカ
ラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィ
ーによる活性物質の吸脱着処理などによってＨＳ−１４
２−１を単離精製することができる。

培養物からＭＳ−１４２−１を単離精製する一例は次の
通りである。

培養物をｐ過または遠心分離することにより菌体を除去
する。得られた沢液または上清液を吸着樹脂、例えばダ
イヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社製）に通塔して樹脂
にＨＳ−１４２−１を吸着させる。

次いでメタノールなどの適当な溶剤を用いて溶出し、溶
出液を減圧下で濃縮した後、シリカゲルクロマトグラフ
ィーを繰り返し行うことによりＨＳ−１４２−１の粗粉
末を得る。この粗粉末を少量の７０％メタノールに溶解
し、ダイヤイオンＨＰ−２０ＳＳ（三菱化成社製）に吸
着させ、７０％メタノールで洗浄後、１００％メタノー
ルで溶出する。溶出液を減圧下で濃縮乾固すると、黄白
色の粉末を得る。この粉末をセファデックスＬＨ−２０
（ファルマシア社製）およびバイオゲルＰ４（バイオラ
ッド社製）を用いたゲルＥ過を順次行って精製すること
により無色粉末のＨＳ−１４２−１を得ることができる
。

上記精製工程中のＨＳ−１４２−１の検出は、シリカゲ
ル薄層クロマトグラフィー、ついで５０％硫酸を噴霧後
、加熱するか、または、紫外部の末端吸収を紫外部吸収
検出器により検出することにより行う。

以下に実施例を示す。

実施例１゜ 種菌としてオーレオバシディウム・プルランス働バラエ
ティー〇メラニゲナム（＾ｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍｐ
ｕｌｌｕｌａｎｓ　　ｖａｒ、　ｍ＋４ａｎｉｇｅｎｕ
ｍ　）　ＫＡＣ−２３８３を用いた。該菌株をグルコー
ス１．Ｏｇ／Ｊ、ペプトン（極東製薬工業社製）０．５
ｇ／Ｊ、乾燥酵母エビオス（朝日麦酒社製）　０．５　
ｇ／ｌｕｔ、　Ｖ　−８野菜ジユース（キャンベル社製
）０．２ｄｌ／Ｊ、炭酸カルシウム０．３ｇ／ａの組成
を有する培地（ｐＨ６，０）１５−に植菌した。ついで
、２５℃で菌が充分生育するまで振盪培養した。このよ
うにして得られた種培養液５−を５０ｄの上記組成の種
培地に植菌し、２５℃で２日間振盪培養した。このよう
にして得られた種培養液２５０−を２．５１の上記組成
の種培地を含む５１ジャーファーメンタ−に植菌した。

培養は２５℃で１日間、通気攪拌方式（回転数２５０ｒ
ｐ、ｍ、通気量２．５１／分）により行った。このよう
にして得られた種培養液５βを下記組成の生産培地１０
０１を含む２００βジャーファーメンタ−に植菌した。

生産培地ニゲルコース　３ｇ／ａ、スターチＩｇ／濯、
ファーマメディア　１５ｇ／＃、硫酸マグネシウム・７
水塩　０．１ｇ／Ｊ、塩化ナトリウム　０．３ｇ／Ｊ、
リン酸水素二カリウム　０．１ｇ／ｄ１、塩化コバルト
・６水塩　６爬／ｄＩｌ、硫酸第一鉄・７水塩　１０■
／〃、硫酸銅・５水塩１０ｍｇ／ａ、、硫酸亜鉛・７水
塩　２ｍｇ／＃、炭酸カルシウム　０．５ｇ／ｄ１（ｐ
Ｈ７，０）培養は２５℃で５日間、通気攪拌方式（回転
数３５０ｒｐｍ、通気量１００４！／分）により行った
。培養終了後、菌体を遠心して除去し、上清１００１を
１０１のダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社製）を充
填したカラムに通塔し、ＨＳ−１４２−１を吸着させた
後、３０１の５０％〈Ｖ／Ｖ）メタノールで洗浄し、３
０ｊ！のメタノールで溶出した。メタノール溶出画分を
減圧下で濃縮乾固すると、５１．８　ｇの褐色粉末が得
られた。この粉末をクロロホルム−メタノール（８：　
２　；ｖ　／　ｖ　）を用いて充填した５１のシリカゲ
ル６０（メルク社製、６３〜２００μｍ）の上端に供給
し、同じ組成の混合溶媒１５Ｊで洗浄後、クロロホルム
−メタノール（４：　６　；　ｖ／ｖ）で溶出した。溶
出液を減圧下で濃縮乾固すると、黄色粉末のＨ３−１４
２−１の粗精製物が４０．３　ｇ得られた。

このようにして得られた粗精製物４ｇをクロロホルム−
メタノール−水（７：３：０．５；ｖ／ｖ）を用いて充
填した４　００ｒｎｌのシリカゲル６０　（メルク社製
、４０〜６３μｍ）の上端に供給し、同じ組成の混合溶
媒１２００ｒｎ１で洗浄した後、クロロホルム−メタノ
ール−水（６：４　：０．７　；ｖ／ｖ）１２００−で
溶出した。溶出液を１５献ずつ分取するとＭＳ−１４２
−１は両分番号２２〜５３に主に溶出された。Ｈ３−１
４２−１を含む両分を減圧下で濃縮乾固し、少量の５０
％（Ｖ／Ｖ）メタノールに溶解した。この溶液を同じ組
成の混合溶媒を用いて平衡化した１８０艷のＨＰ　−２
０ＳＳ（三菱化成社製）（φ２８Ｘ４５０ｍｍ＞の上端
に供給し、同じ組成の混合溶媒６００−１７０％（Ｖ／
Ｖ）メタノール６００ｄで順次洗浄し、メタノールを用
いて溶出した。Ｈ３−１４２−１を含む溶出画分を濃縮
乾固すると４１３■の粗粉末が得られた。これを３ｍｌ
！のメタノールに溶解し、メタノールを用いて平衡化し
た１　００　（ｌｒｎｌのセファデックス　ＬＨ−２０
（ファルマシア社製）の上端に供給し、メタノールを用
いて展開した。展開液を１ｔ）ｔｌ！ずつ分取し、Ｈ３
−１４２−１を含む画分番号３７から４４を集めて濃縮
乾固すると、３０４■の無色粉末が得られた。この無色
粉末９０■を２ｍｌの水に溶解し、水を用いて平衡化し
たバイオゲル（ＢｉｏＧｅｌ）　　Ｐ　４　　（バイオ
ラッド社製、２００〜４００メツシュ；φ３８Ｘ４５０
ｍｍ）のカラムの上端に供給し、水を用いて展開した。

展開液を１２ｒｎ！！ずつ分取すると両分番号１６から
２６にＨ３−１４２−１が溶出された。各溶出画分を凍
結乾燥すると、Ｈ３−１４２−１の無色粉末が合計６７
．９■得られた。この画分のうちＨ３−１４２１ａは画
分番号１８に、Ｈ３−１４２−１ｂは画分番号２２に、
Ｈ３−１４２−１ｃは画分番号２５にそれぞれ含まれて
いた。

次にＨ３−１４２−１のＡＮＰレセプターに対する拮抗
作用を実験例１〜４により説明する。

実験例１゜ ウサギ腎皮質ＡＮＰレセプターへのＡＮＰの結合に対す
る阻害作用 （１）方法 ウサギ腎皮質ＡＮＰレセプターへのＡＮＰの結合に対す
るＨ３−１４２−１の試験管内での阻害作用をエム・ニ
ー・ナピア（Ｍ、＾、　１ｉａｐｉｅｒ）らの方法〔プ
ロシーデインゲス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミイ
・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、Ｓｃｉ、）　８１．５９４６−５
９５０（１９８４））に準じて、ウサギ腎皮質の破砕物
を用いて測定した。

（２）結果 ウサギ腎皮質への（３−Ｃ１２Ｊ）ヨードチロシル２８
）ラットＡＮＰの結合をＨ３−１４２−ＩａＳＭＳ−１
４２−１ｂ、　Ｈ３−１４２１Ｃはｌｘ／ｒｎｌでそれ
ぞれ６８％、７６％、７０％阻害した。また、実施例に
示したバイオゲルＰ４の溶出画分に含まれるＨ３−１４
２−１のうちＨ３−１４２−１ａ、、Ｈ３−１４２−１
ｂ。

ＭＳ−１４２−ＩＣ以外のＨＳ−１４２−１にも同等の
活性が認められた。

実験例２゜ ＬＬＣ−ＰＫＩ細胞のＡＮＰによるｃＧＭＰレベル上昇
に対する拮抗作用 （１）　　方法 １０％ＭのＡＮＰによるＬＬＣ−ＰＫＩ細胞のｃＧＭＰ
レベル上昇に対するＨ３−１４２−１の作用をエフ・ム
ラド（Ｆ９Ｍｕｒａｄ）　　らの方法〔ジャーナル・オ
ブ・バイオロジカル・ケミストリイ（Ｊ、　　Ｂｉｏｌ
、Ｃｈｅｍ、）　　２６３　、３７２０−３７２８（１
９８８））に準じで測定した。

（２）結果 １０％ＭのＡＮＰによるＬＬＣ−ＰＫＩ細胞のｃ　ＧＭ
Ｐ　レベルの上昇をＭＳ−１４２−１１゜ＭＳ−１４２
−１ｂ、ＨＳ−１４２−Ｉ　Ｃは１０ｔｔｘ　／　ｒｄ
でそれぞれ６０％、６１％、４１％阻害した。

実験例３゜ ウサギ胸部大動脈標本におけるＡＮＰの血管弛緩反応に
対する拮抗作用 （１）方法 雄性日本白色ウサギの胸部大動脈を摘出後、輻約３＋ｍ
ｍのラセン状条片標本を作成し、クレブス−ヘンスライ
ド１液（組成：塩化ナトリウム１１８ｍＭ、塩化カリウ
ム４．７５ｍＭ、塩化カルシウム２．５４ｒｎＭ、硫酸
マグネシウム１１９ｍＭ、炭酸水素ナトリウム１２．５
ｍＭ、　リン酸二水素カリウム１．１９１１１Ｍ、グル
コース１０．０＋ｎＭ）を満たしたマグヌス管に２ｇの
負荷で懸垂した。マグヌス管内は３７℃に保ち、混合ガ
ス（９５％０゜＋５％Ｃ０２）を通気した。発生張力は
アイソメトリックトランスデニーサーを用いて等尺性に
測定し、インク式ペンレコーダー上に記録した。

標本は６０分以上安定させた後、試験化合物を添加し、
フェニレフリンで収縮させ、ＡＮＰ３Ｘ１０−’Ｍの添
加により引き起こされる血管弛緩反応を測定した。

（２）結果 結果を第１表に示す。ＭＳ−１４２−１ａは、ＡＮＰに
よる血管弛緩作用に対して明らかな抑制作用を示した。

ＪＲ１表 実験例４゜ 麻酔下ラットにおけるＡＮＰによる利尿作用に対する拮
抗作用 （１）方法 実験動物としてスブラング・ダウリー系雄性ラットを使
用した。ベンドパルビタールを腹腔内投与して麻酔した
後、腹部を一部切開して膀胱を露出させ尿採取用カテー
テルを挿入した。

大腿静脈には試験化合物の投与および生理食塩水の負荷
のためにカニ二−レを挿入した。

実験は、生理食塩水を一定流量で負荷してしばらく安定
させたのち開始した。一定時間採尿を行なって尿排泄量
を確かめた後、試験化合物または溶媒を静脈内投与し、
さらにＡＮＰを静脈内投与して採尿を行なうことで、Ａ
ＮＰにより引き起こされる利尿作用に対する試験化合物
の効果を検討した。

（２）結果 Ｈ３−１４２−１ａは、ＡＮＰ投与により引き起こされ
る尿量の増加に対して、１■／ｋｇで９３．０％抑制し
た。

以上の実験例１〜４よりＭＳ−１４２−１はＡＮＰのレ
セプターへの結合を阻害することにより、試験管内及び
生体中でＡＮＰの作用に対して拮抗することが示された
。

発明の効果 本発明によりＡＮＰレセプターに対して拮抗作用を有す
る新規生理活性物質Ｈ３−１４２−１が提供される。

【図面の簡単な説明】

第１図はＨ８−１４２−１８の’　ＨＮ　Ｍ　Ｒｘ　ベ
クトルを示す。 第２図はＨ３−１４２−１ｂの’）Ｉ−ＮＭＲスペクト
ルを示す。 第３図はＨ３−１４２−Ｉ　Ｃの’Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルを示す。

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. （１）直鎖状にβ１→６結合したＤ−グルコースオリゴ
   マーのＤ−グルコースの任意の位置の水酸基とカプロン
   酸のカルボキシル基とがエステル結合した構造を有する
   新規生理活性物質ＨＳ−１４２−１。
2. （２）Ｄ−グルコース残基の数が７〜４０の整数である
   請求項１記載の生理活性物質ＨＳ−１４２−１。
3. （３）カプロン酸残基の数が２〜３０の整数である請求
   項１または２記載の生理活性物質ＨＳ−１４２−１。
4. （４）Ｄ−グルコース残基の数が２８であり、かつカプ
   ロン酸の残基の数が１１である請求項１記載の生理活性
   物質ＨＳ−１４２−１。
5. （５）Ｄ−グルコース残基の数が１７であり、かつカプ
   ロン酸残基の数が１１である請求項１記載の生理活性物
   質ＨＳ−１４２−１。
6. （６）Ｄ−グルコース残基の数が１３であり、かつカプ
   ロン酸残基の数が６である請求項１記載の生理活性物質
   ＨＳ−１４２−１。
7. （７）下記理化学的性質を有する請求項４記載の生理活
   性物質ＨＳ−１４２−１ａ。 ［１］性状：白色粉末 ［２］融点：１７５〜１８５℃ ［３］分子式：Ｃ＿２＿３＿４Ｈ＿３＿９＿２Ｏ＿１＿
   ５＿２［４］マススペクトル（ネガティブモードＦＡＢ
   −マススペクトル） 実測値；Ｍ／Ｚ５５３６．５（Ｍ−Ｈ）＾−計算値；Ｍ
   ／Ｚ５６３７．３ ［５］旋光度：〔α〕■＝−２９．４°（ｃ０．２４、
   水溶液）［６］赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）
   ｃｍ＾−１：３４２０、２９３０、１７３０、１６３５
   、１４５５、１３８０、１２５０、１１７０、１０４５ ［７］紫外部吸収スペクトル；（水溶液） 末端吸収を示すのみ。 ［８］＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、Ｄ＿
   ２Ｏ中）：第１図に示す。 ［９］呈色反応：アニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素によ
   る呈色反応に陽性、ニンヒドリン、ジニトロフェニルヒ
   ドラジン、塩化第二鉄、ブロモクレゾールグリーン、ド
   ラーゲンドルフ反応に陰性。
8. （８）下記理化学的性質を有する請求項５記載の生理活
   性物質ＨＳ−１４２−１ｂ。 ［１］性状：白色粉末 ［２］融点：１７５〜１８５℃ ［３］分子式：Ｃ＿１＿５＿０Ｈ＿２＿５＿２Ｏ＿９＿
   ４［４］マススペクトル（ネガティブモードＦＡＢ−マ
   ススペクトル） 実測値；Ｍ／Ｚ３５５７．９（Ｍ−Ｈ）＾−計算値；Ｍ
   ／Ｚ３５５８．５ ［５］旋光度；〔α〕■＝−２１．１°（ｃ０．０６、
   水溶液）［６］赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）
   ｃｍ＾−＾１：３４２５、２９２５、１７３０、１６４
   ５、１４５５、１３７５、１２５０、１１７０、１０５
   ０ ［７］紫外部吸収スペクトル：（水溶液） 末端吸収を示すのみ。 ［８］＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、Ｄ＿
   ２Ｏ中）：第２図に示す。 ［９］呈色反応：アニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素によ
   る呈色反応に陽性、ニンヒドリン、 ジニトロフェニルヒドラジン、塩化第二鉄、ブロモクレ
   ゾールグリーン、ドラーゲンド ルフ反応に陰性。
9. （９）下記理化学的性質を有する請求項６記載の生理活
   性物質ＨＳ−１４２−１ｃ。 ［１］性状：白色粉末 ［２］融点：１７５〜１８５℃ ［３］分子式：Ｃ＿１＿１＿４Ｈ＿１＿９＿２Ｏ＿７＿
   ２［４］マススペクトル（ネガティブモードＦＡＢ−マ
   ススペクトル） 実測値；Ｍ／Ｚ２７１３．３（Ｍ−Ｈ）＾−計算値；Ｍ
   ／Ｚ２７３４．１ ［５］旋光度：〔α〕■＝−２６．２°（ｃ０．４、水
   溶液）［６］赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤法）ｃ
   ｍ＾−＾１：３４００、２９３５、１７３５、１６５０
   、１４６０、１３８０、１２５５、１１６５、１０５０ ［７］紫外部吸収スペクトル：（水溶液） 末端吸収を示すのみ。 ［８］＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ、Ｄ＿
   ２Ｏ中）：第３図に示す。 ［９］呈色反応：アニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素によ
   る呈色反応に陽性、ニンヒドリン、ジニトロフェニルヒ
   ドラジン、塩化第二鉄、ブロモクレゾールグリーン、ド
   ラーゲンドルフ反応に陰性。
10. （１０）オーレオバシディウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄ
    ｉｕｍ）属に属しＨＳ−１４２−１生産能を有する微生
    物を培地中に培養し、培養物中にＨＳ−１４２−１を生
    成蓄積させ、該培養物からＨＳ−１４２−１を採取する
    ことを特徴とするＨＳ−１４２−１の製造法。
11. （１１）該微生物がオーレオバシディウム・プルランス
    ・バラエティー・メラニゲナム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄ
    ｉｕｍｐｕｌｌｕｌａｎｓｖａｒ．ｍｅｌａｎｉｇｅｎ
    ｕｍ）に属する微生物である請求項１０記載の製造法。
12. （１２）該微生物がオーレオバシディウム・プルランス
    ・バラエティー・メラニゲナム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄ
    ｉｕｍｐｕｌｌｕｌａｎｓｖａｒ．ｍｅｌａｎｉｇｅｎ
    ｕｍ）ＫＡＣ−２３８３（微工研条寄第２４０７号）で
    ある請求項１０記載の製造法。