JPH03261717A - 口腔用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は口腔内細筒の歯牙および歯周組織への付着を抑
制する効果を有し、かつ、う触および歯周病の予防、治
療効果を有するロ腔用ＩＩｉ膚物Ｊ二関する。

従来の技術および課題 う触や歯周病は、ある種の口腔肉細曹が原因で発症する
ことが明らかであり、例えば、バクテロイデス・ジンジ
バリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉ
ｓ）等の歯周病原性曹は歯牙や歯周組織に付着、定着し
、それらの曹の産生ずる酵素や内毒素等にょう歯周組織
を破壊し、歯周病を引き起こす。

そのため、歯周病の発症を防止する目的でバクテロイデ
ス・ジンジバリスの付着を抑制する方法が検討され、例
えば、アミノ酸の一種であるアルギニ７やリジンが訣細
曹の頬粘膜上皮細胞への付着を抑制する等の報告がある
（口腔衛生学会誌３８：５９０〜５９１，１９８８）。

しかしながら、これらは対象とする細胞が歯周組織由来
のものでなかったり、また、その効果が弱いという問題
がある。

このような事情に艦み、本発明者らは、う触および歯周
病の予防、治療に有効な薬剤について種々、検討したと
ころ、意外にも、特定のペプチドが適していることを見
出し、本発明を完膚するに至った。

課題を解決するための手段 本発明は、分子内に塩基性アミノ酸が２つ以上連続して
結合したペプチド部分をｌケ所以上有する合計３〜３４
傭のアミノ酸からなるペプチドを配合してなる口腔用組
成物を提供するものである。

該ペプチドはバクテロイデス・ジンジバリス等の歯牙や
歯周組織への付着を効果的に抑制するので、本発明の口
腔用組成物はう蝕や歯周病の予防、治療用の歯磨剤や医
薬品として有用である。なお、本明細書で用いるペプチ
ドの構成アミノ酸およびその保護基等についての略号は
ペプチドの分野で通常用いられるものである。例えば、
Ｇｌｙはグリシン、Ｈｉｓはヒスチジン、Ｌｙｓはリジ
ン、Ａｒｇはアルギニン、Ｐｒｏはプロリン、Ｃ１ｕは
グルタミン酸、Ｇｉｎはグルタミン、Ｓｅｒはセリン、
Ａｓｎはアスパラギン、Ｖａｌはバリン、Ｉｌｅはイソ
ロイシン、Ｌｅｕはロイシン、Ｔｙｒはチロシン、Ｂｏ
ａはｔ−ブトキシカルボニルを表す。

用いるペプチドは、分子内に塩基性アミノ酸、好ましく
は、アルギニン、リジン、ヒスチジンが２つ以上、好ま
しくは２〜４つ連続して結合したペプチド部分を１ケ所
以上有する合計３〜３４個のアミノ酸、好ましくは４〜
２４個のアミノ酸からなるものである。かかるペプチド
は、例えば、後記の参考例に示すように、公知の方法に
よって容易に合成できる。代表的なものとしては、Ｇｌ
ｙ−Ｈｉｓ−ＬｙｓＳＧｌｙ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ
、Ａ　ｒｇ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ
−ＧｌｕＳＬｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−
Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ％Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇ
　Ｉｎ−Ｈ１ｓ−Ｐ　ｒｏ−Ｇ　ｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ
−Ｃｙｓ。

Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ−Ａｒｇ−Ａ
ｌａ−Ｔｈｒ−５ｅｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−５ｅ
ｒ、Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｂ＋−Ｈｉｓ
−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−
Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐ
ｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ、Ａｌ
ａ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ｇｌｕ−１１ｅ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅ
ｕ−Ｍｅｔ−Ｈ１ｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｙ−Ｌｙ
ｓ−ＨｉｓＬｅｕ−Ａｌａ−３ｅｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
Ａｒｇ−Ｍｅｔ−Ｇｌｎ−Ｔ　ｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−
Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ、　Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−
Ｔｙｒ、　Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−５ｅｒ−Ｈｉｓ−
Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ、　Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−
Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｈ１ｓ−Ｇ　１ｕ−Ｌｙｓ−
Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔ
ｙｒ、Ａｓｐ−５ｅｒ−Ｈ１ｓ−Ａ　１ａ−Ｌ　ｙｓ−
Ａ　ｒｇ−Ｈ１ｓ−Ｈ１ｓ−Ｇ　１ｙＴｙｒ−Ｌ　ｙｓ
−Ａ　ｒｇ−Ｌ　ｙｓ−Ｐ　ｈｅ−Ｈ１ｓ−Ｇ　１ｕ−
Ｌ　ｙｓ−Ｈ１ｓ−Ｈｉｓ−５ｅｒ−Ｈｉｓ５−５ｅｒ
−Ｈｉｓ−Ａｒおよびこれらの−ＣＯＯＨＭよび−ＮＨ
２における製剤上許容される塩が挙げられる。

本発明の口腔用組成物においては、これらペプチドは単
独で、あるいは２種以上組合せて用いることができ、組
成物中の該ペプチド配合量は０．００１〜５重量％、特
に０．０１〜０．５重１％が好ましい。

本発明の口控用１ｍ成物は常法に従って、練歯磨、粉歯
磨、液状歯磨、マウスウォッシュ、チュウインガム、う
がい液、トローチ、パスタ、クリーム、軟膏剤、貼付剤
、錠剤のごとき歯磨類や医薬品とすることができる。他
の配合成分は特に限定するものではなく、通常、この種
の組成物に用いられる成分を配合できる。例えば、練歯
磨であれば研磨剤、粘結剤、湿潤剤、甘味剤、香料、防
腐剤、他の薬効剤等が適宜配合される。

医薬品の場合、内服の場合は、成人１日当たり、ペプチ
ド量として５〜５０ｍｇ、外用の場合、ペプチド量とし
て１回にｌ〜数ｌｏｎｇの用量で、有害な副作用なしに
う蝕や歯周病の予防、治療に用いることかでき、歯磨類
の場合は、これらの用量を勘案して常法に従って使用す
る。

４里 以下、実験により本発明に用いるペプチドの作用を具゛
体的に示す。

（実験ｌ） 歯肉上皮細胞へのバクテロイデス・ジンジバリス３８１
株の付、ｉｉｊこ及ぼす影響 嫌気条件下で、４８時間培養したバクテロイデス・ジン
ジバリス３８１株を０．１５Ｍ　ＮａＣｌを含む１０＋
ａＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，０、ＰＢＳ）にてよく洗
浄した後、ＰＢＳに懸濁した。一方、ヒト歯肉上皮細胞
を歯周炎の認められない成人より採取し、よく洗浄した
後、ＰＢＳに懸濁した。

該８Ｍ懸濁液（ＩＸ１０’ｔ１体／ｍｆｆ）ト上皮細胞
懸ｌＩ液（ＩＸＩＯ“細胞７社）をｌ−ずつ混合し、３
７℃で３０分間、振盪しながらインキユベートシ、バク
テロイデス・ジンジバリス３８１株の入歯向上皮細胞へ
の付着反応を行わせた。反応終了後、上皮細胞を穴径１
２μ閣のメンブレンフィルターにて集めた。集めた上皮
細胞をＰＢＳに懸濁し、ガラススライドに塗抹し、自然
乾燥させた後、火炎固定してゲンチアナバイオレットで
染色した。上皮細胞に付着した筒体数を、光学顕微鏡下
（倍率１０Ｘ４０）で無作為に３０個の上皮細胞を選び
、上皮細胞１個当たりの付着筒数で算定した。また、陰
性対照として、上皮細胞をＰＢＳのみと反応させ、上皮
細胞に初めから付着していｔ；細筒数を求めて陰性対照
値とし、バクテロイデス・ジンジバリスの上皮細胞への
付着数として、前記算定値から陰性対照値を差し引いた
値を用いた。バクテロイデス・ジンジバリスの上皮細胞
への付着に及ぼすペプチドの影響はバクテロイデス・ジ
ンジバリスを予め室温にて１５分間、これらの物質と反
応させた後、前記と同様の方法で調べた。結果を以下の
第１表に示す。

第１表に示すごとく、比較例のペプチドでは抑制は認め
られなかったが、本発明に用いるペプチドは細胞の上皮
細胞への付着を著しく抑制した。

（実験２） 唾液゛被覆ヒドロキシアパタイト（ＨＡＰ）ビーズ上へ
のバクテロイデス・ジンジバリス３８１株の付着に及ぼ
す影響 ２０ｍｇｆ）ＨＡｐビーズをヒトの唾液（血液型Ｏ）０
．５ｍｌとともに室温にて１時間インキュベートした。

該ビーズを０．０５Ｍ　ＫＣＩ、Ｉ　ｍＭ　Ｋ　Ｈｚ−
ＰＯ６，１ｍＭ　ＣａＣ１，およびｌ　ｖｓＭ　ＭｇＣ
１１からなるｐＨ６，０の緩衝液（この鰻衝液は、唾液
無機成分のモデルである）　１　ｍ（ｔで２回洗浄した
。ついで、室温にて、骸ビーズをｐＨ７，０の試料溶液
０゜５−ａとともに１時間インキュベートし、前記緩衝
液ｌ−で２回洗浄した。

つぎに、前記緩衝液０．５社中に［３Ｈ］チミジンＩｉ
臓バクテリア（バクテロイデス・ジンジバリス）を５．
０ＸｌＯ’ｌｆ含む懸濁液を該ビーズに添加し、室温に
て１時間インキュベートした。前記緩衝液１−で３回洗
浄し、ビーズをバイアルに移し、液体シンチュレーショ
ンカウンターを用いて放射能を計測した。一方、既知の
［”Ｈ］標識細胞の割合を同じ方法で計数し、バクテリ
ア数の検量線を作成した。結果を以下の第２表に示す。

第２表に示すごとく、本発明に用いるペプチドにより細
筒の唾液被覆ＨＡＰへの付着が著しく抑制された。

（実ｔｉ３） バクテロイデス・ジンジバリスの付着阻害におけるペプ
チドの濃度依存性 種々の濃度を有するペプチド用い、実験ｌの方法と同様
にペプチドによるバクテロイデス・ジンジバリスの歯肉
上皮細胞への付着阻害効果を調べた。結果を以下の第３
表に示す。

第３表に示すごとく、温度０．００１ｍＭにおいてもペ
プチドの付着阻害効果が認められた。

（実験４） ペプチドによるハムスター歯周局所へのバクテロイデス
・ジンジバリスの定着阻害効果５週令の無菌ハムスター
６匹を２群に分け、実験開始日、第１群のハムスターの
下顎臼歯に綿棒でＯ、ｌ　ｍＭ薬液を塗布し、第２群に
は対照としてＰＢＳを塗布した。引き続き、対象の臼歯
に結紮糸を施し、約ｌＯ＠／−に調製したバクテロイデ
ス・ジンジバリスＥＳＯ１３２株生曹液を投与した。

その後、薬液およびＰＢＳ溶液の塗布は１日１回で、毎
日行い、曹液の投与は１週間に２回の調合で６週間にわ
たって行った。

最終曹液投与後、１週間後に被験部位の歯肉の炎症の程
度を観察すると鍔に、結紮糸をはずした後、その部位の
プラークをキュレットで採取し、嫌気的に保持したリン
ガ−液に懸濁し、このサンプル中のバクテロイデス　ジ
ンジバリス数を培養法により計数した。結果を以下の第
４表に示す。

第４表に示すごとく、薬液処理群では、対照群に比べて
歯周局所へのバタテロイデス・ジンジバリスの定着が著
しく抑制されると共に、歯肉の炎症の程度も軽かった。

！０量 つぎに参考例および実施例を挙げて本発明をさらに詳し
く説明する。実施例中、「％」はいずれも重量％である
。

参考例 用いたペプチドはＢｏｃ−アミノ酸無水物法を採用して
いるＡＢＩペプチドシンセサイザー４３ＯＡを用いて固
相法により合皮した。側鎖を保護しｆ：Ｂｏｃ−アミノ
誘導体はＡ　ｓｐ（○ｃ　Ｈｅｘ）、５ｅｒ（Ｂｚｌ）
、Ｈｉｓ（ｒ−Ｂｏ＋ａ）、Ｌｙｓ（１−ｚ）、Ａｒｇ
（Ｔｏｓ）、Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）およびＧ　１ｕ（Ｏｃ
Ｈａｘ）であり、合成の出発物質としてＢｏａ−Ｔｙｒ
（Ｂ　ｒ−Ｚ　）−Ｐ　ＡＭ＊脂を用いたベグチド鎖の
組み立てが終了した後、ペプチドが結合した樹脂を１０
％アニソールを含む無水ＨＦで、０℃にて７５分処理し
た。ＨＦを蒸発させた後、遊離したペプチドを５％酢酸
で抽出し、凍結乾燥した。粗ペプチドはＯＤＳカラムで
精製し、凍結乾燥した。ついで、得られたペプチドを塩
酸で１１０℃にて２４時間加水分解し、各々、アミノ酸
含量を測定した。代表的なペプチドのアミノ酸含量を以
下に示す。

ペプチド（Ｉ）　　　ペプチド（ｎ） Ｓｅｒｆ　、Ｏ５ｅｒｆ　、０ Ｇｌｙｌ−Ｉ　　　　　Ｇｌｕｌ、２ Ｔｒｙ１．ＯＧｌｙ２．３ Ｈ４ｓ２−９　　　　　Ｔｙｒ２．０ Ｌｙｓ１．ＯＰｈｅｌ、Ｏ Ａｒｇｌ、ＯＨｉｓ４．０ Ｌｙｓ２．９ Ａｒｇ２．０ ペプチド（ＤＩ） Ａｓｐｌ、２ Ｓａｒ２．０ Ｇｌｕｌ、２ Ｇｌｙ２．４ Ａｌａｌ、２ Ｔｙｒ２．Ｉ Ｐｈｅｌ、０ Ｈｉｓ６．９ Ｌｙｓ３．９ Ａｒｇ３−０ ペプチド（ＩＶ） Ｈｉｓｌ、Ｏ Ａｒｇｌ、０ Ｇｌｙｌ、１ Ｔｙｒｌ、０ 実施例１（線型ＩＩＦ） つぎの処方により、常法に従って練歯磨を製造しｔこ。

戊　　　分　　　　　　　　配合量（重量％）第ニリン
酸カルシウム　　　　　　４５．０カルボキシメチル Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−５ａｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−０
、５Ｇｌｙ−Ｔｙｒ Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｈ
ｉｓ−０、５Ｃ１ｕ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−５ｅｒ
−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｇ　１ｙ−Ｔｙｒ セルロースナトリウム　　　　　　　０．５グリセリン
　　　　　　　　　　２０．０ラウリル硫酸ナトリウム
　　　　　　１．５サツカリンナトリウム　　　　　　
　０．１蒸留水　　　　　　　　　　　１００％に調製
実施例２（練歯磨） つぎの処方により、常法に従って練歯磨を製造しｔ；。

成　　　分　　　　　　　　配合量（重量％）炭酸カル
シウム　　　　　　　　　４５．ＯＧｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌ
ｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−１、０Ｇｌｕ
−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｓａｒ−Ｈｉｓ＾ｒｇ−Ｇ
ｌｙ−Ｔｙｒ セルロースナトリウム　　　　　　　　１．０グリセリ
ン　　　　　　　　　　２０．０ラウリル硫酸ナトリウ
ム　　　　　　１．５サツカリンナトリウム　　　　　
　　　０．１香料　　　　　　　　　　　　　　　１．
２蒸留水　　　　　　　　　　　１００％に調製実施例
３（マウスウォッシュ） つぎの処方により、常法に従ってマウスウォッシュを製
造した。

成　　　分　　　　　　　　配合量（重量％）エタノー
ル　　　　　　　　　　　　ｌＯｌｏｏＯＬｙｓ−Ｈｉ
ｓ−Ｈｉｓ−５ｅｒ−Ｈｉｓ−Ａｒ　　　　　　０　、
１Ｇｌｙ−Ｔｙｒ ポリオキシエチレン（６０ＥＯ）　　　　０．５硬化ヒ
マシ油 モノオレイン酸ポリオキシエチレン　０．５（２０Ｅ　
Ｏ）ソルビタン サッカリンナトリウム　　　　　　　　０．２防腐剤お
よび香料　　　　　　　　　０．８蒸留水　　　　　　
　　　　　１００％に調製実施例４（マウスウォッシュ
） つぎの処方により、常法に従ってマウスウォッシュを製
造した。

成　　　分　　　　　　　　配合量（重量％）エタノー
ル　　　　　　　　　　　　１５グリセリン　　　　　
　　　　　１５ ポリオキシエチレン（６０ＥＯ）　　　　１硬化ヒマシ
油 Ａｓｐ−５ｅｒ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｈ
ｉｓ−０、０５Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｒ
ｇ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ
−Ｈｉｓ−５ｅｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ 塩化セチルピリジニウム　　　　　０．０５サツカリン
ナトリウム　　　　　　０．１香料　　　　　　　　　
　　　　　０．５蒸留水　　　　　　　　　　　１００
％に調製実施例５（口腔用パスタ） つぎの処方により、常法に従って口腔用ノくスタを製造
した。

成　　　分　　　　　　　　配合量（重量％）白色ワセ
リン　　　　　　　　　　　１Ｏ００ステアリンアルコ
ール　　　　　　　８．０プロピレングリコール　　　
　　　　５．６ラウリル硫酸ナトリウム　　　　　　０
．６パラオキシ安息香酸エチル　　　　　０．０１蒸留
水　　　　　　　　　　　　　１６．ＯＬｙｓ−Ｈｉｓ
−Ｈｉｓ−３ｅｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−２、０Ｇｌｙ−Ｔ
ｙｒ カルボキシメチルセルロース　１００％に調製ナトリウ
ム 発明の効果 本発明によれば、う触および歯周病の予防、治療に有用
な口控用組虞物が得られる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）分子内に塩基性アミノ酸が２つ以上連続して結合
   したペプチド部分を１ケ所以上有する合計３〜３４個の
   アミノ酸からなるペプチドを配合してなることを特徴と
   する口腔用組成物。