JPH03223288A - 免疫抑制剤及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野） 本発明は、免疫抑制剤及びその製造方法に関する。

【従来の技術ｌ 免疫抑制剤は、主に臓器移植の際に起こる拒絶反応を抑
えるために必要不可欠なものである。　１９８０年以前
には真に免疫抑制剤と呼べるものが存在せず、最も容易
と考えられる膵臓移植でさえ成功率は７％以下であった
。１９８０年に至りサイクロスポリンＡが出現し、臓器
移植の成功率が飛躍的に向上し、真の臓器移植の時代が
始まった。 しかし、サイクロスポリンＡは腎臓に対する毒性が非常
に強く、現在では、他の薬と併用して、サイクロスポリ
ンＡの使用員を少しでも減らす工夫がなされている。　
１９８４年に、放線菌よりＦＫ−５０６が発見された。 この化合物はサイクロスポリンＡの１０倍から１００倍
の免疫抑制効果があると言われ、当初は腎毒性などの副
作用もあまりないと考えられていた（サイエンス、　１
月号。 ６２、１９８９年）が、最近に至りこのＦＫ−５０６は
腎毒性はサイクロスポリンＡより強く、さらに肝毒性も
強いことが明らかになり、これらの化合物に代わる低毒
性で、免疫抑制活性の強い薬剤が求められている。 また、−収約に、薬物の投与方法としては、医師の立ち
会いの必要がなく、自宅においても手軽に投与できる点
で経口投与が最も優れているが、サイクロスポリンＡは
経口剤としての活性が不十分である。 一方、モルヒネなどの鎮痛薬の作用機構の研究を通じて
、脳を始めとする各種臓器にはこれらの物質が特異的に
結合する部位、すなわち、オピオイド受容体が存在する
ことが知られている。そして、この受容体に結合して鎮
痛作用などの薬理作用を発現する化合物はアゴニストと
呼ばれている。 また、上記オピオイド受容体に親和性を有するが、それ
自体はオピオイド作用を有せず、オピオイド物質の作用
と拮抗する物質はオピオイドアンタゴニストと呼ばれる
。このようなオピオイドアンタゴニストとしては、従来
、ナロキソン、ナルトレキソンが知られており、モルヒ
ネなどのアゴニストの鎮痛作用の解明や１モルヒネなど
の麻薬の投与により生ずる副作用である呼吸抑制の治療
に利用されている。 最近、このオピオイド受容体に、μ、に、δの３つのサ
ブタイプが存在することが発見され、それぞれのサブタ
イプの作用を研究するため、それぞれの受容体サブタイ
プに特異的に結合するリガンド、すなわち、アゴニスト
、アンタゴニストが求められている。実際、これらのサ
ブタイプのうち、μ受容体に比較的選択性を示すモルヒ
ネの副作用の中でも、重篤な耽溺性、呼吸抑制などはμ
受容体より生ずることが明確になった。この研究により
、オピオイド系の鎮痛剤の重篤な劇作用である耽溺性、
呼吸抑制などのない理想的な鎮痛薬を合成するには、少
なくともμ受容体を避け、に又はδ受容体に選択性の高
い化合物をめさせばよいことが示唆される。このように
、オピオイド受容体のサブタイプに選択性の高いアンタ
ゴニストは、鎮痛薬の作用機序の研究ばかりでなく理想
的な鎮痛薬の開発に必要である。 さらに、最近、オピオイド受容体が、免疫系に関係して
いることが発見され、特に、そのうちのμ受容体に作用
するモルヒネに代表されるアゴニストは免疫抑制作用を
示し、エンケファリンに代表されるδ受容体のアゴニス
トは免疫増強作用を示すことが報告された（　Ｐｌｏｔ
ｎｉｋｏｆｆ著、Ｅｎｋｅｐｈａｌｉｎｓ　ａｎｄ　Ｅ
ｎｄｏｒｐｈｉｎｓ、ｓｔｒｅｇｇ　ａｎｄ　ｉｍｍｕ
ｎｅ　５ｙｓｔｅ（Ｐｌｅｎｕｓ　Ｐｒｅｓｓ、　１９
８６年）、そして、現在、モルヒネに代表されるμ受容
体のアゴニストの免疫抑制作用についての報告は多く存
在する。 （発明が解決しようとする課題］ しかしながら、モルヒネに代表されるμ受容体のアゴニ
ストは耽溺性、呼吸抑制などの重篤な副作用を有し、免
疫抑制剤として開発することは困難である。 本発明は、毒性が低く、経口剤としても十分な免疫抑制
活性を有する新規で理想的な免疫抑制剤を提供すること
を目的とする。 また、本発明は、煩雑な後処理を必要とせず、高収率に
本発明の免疫抑制剤を製造することができる方法を提供
することを目的とする。 【課題を解決するための手段】 本願発明者は上述した目的を達成するため、鋭意研究し
た結果、サイクロスポリンＡやＦＫ−５０６と全く作用
機序の異なる免疫抑制剤及びその高収率な製造方法を発
見するに至り本発明を完成させた。 すなわち、本発明は、δ−オピオイドアンタゴニスト又
はその薬理学的に許容される塩を有効成分とする免疫抑
制剤を提供する。 さらに、本発明は、ナルトレキソン又はその塩とフェニ
ルヒドラジン誘導体を溶媒中メタンスルホン酸存在下反
応させることを特徴とする下記式［式中、　Ｒ７は水素
、塩素、臭素、フッ素、メチル、メトキシ又はニトロを
表す］ で示されるナルドルインドール誘導体の製造方法を提供
するものである。 上述のように２本発明の免疫抑制剤はδ−オピオイドア
ンタゴニスト又はその薬理学的に許容される塩を有効成
分とする。 ここでいうδ−オピオイドアンタゴニストとは、電気刺
激によるＭＶＤ標本の収縮をＤＡＤＬＥまたはＤＰＤＰ
Ｅが抑制するのを阻害する化合物群であり、好ましくは
その効力がＫｅ値で５０以下の化合物群をさす（）１．
Ｗ、Ｋｏｓｔｅｒｌｉｔｚら、Ｂｒ、Ｊ、Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌ、Ｖｏｌ、４６．　７６４．　１９７２、Ｐ、Ｓ
、Ｐｏｒｔｏｇｈｅｓｅら、　　Ｅｕｒ、Ｊ、Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ、、　Ｖｏｌ、Ｉ４６、　＋８５、　　＋９
８８）。 Ｋｅ値は１式Ｋｅ＝　［アンタゴニスト］／（ＩＣ６゜
比−１）で表される。 ここで、　ＩＣ６゜比は、アンタゴニスト存在下で測定
されたアゴニストのＩＣ，。を、アンタゴニストが存在
しない状態で測定したＩＣ，。値で割った値を示す、　
また、　Ｋｅ値は、　ＩＣ６゜比にアンタゴニストの濃
度を考慮に入れるため導入された値である。従って、Ｋ
ｅ値が小さいほどアンタゴニスト活性が強いことになる
。 δ−オピオイドアンタゴニストとして好ましいものとし
て、下記一般式［１］で示されるものを挙げることがで
きる。 一般式［１Ｆで表される化合物のうち、特に好ましいも
のは、Ｒｏは炭素数１〜５のアルキル、炭素数３〜６の
シクロアルキルアルキル、炭素数５〜７のシクロアルケ
ニルアルキル、炭素数７〜１０のアラルキル、炭素数４
〜５のトランスアルケニル、アリル又はフラン−２−イ
ルアルキルであり、　Ｒ２は水素又はヒドロキシであり
、Ｒ，は水素であり、　Ｒ２は水素、　フッ素、メチル
、メトキシ又はニトロであり、Ｒ６は水素、Ｘは酸素又
はＮＲ６（ここで、Ｒ６は水素又は炭素数１〜５のアル
キル）のちのである。 これらのうち、 特に好ましいものは下記式 ［ ］ ［ ］ ％式％ 尚、式［３］の化合物は、ナルトレキソンにインドール
を縮環したものであることによりナルドルインドール（
ＮＴ＋）と命名されており（Ｐ、ＳＰｏｒｔｏｇｈｅｓ
ｅら著、　　Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、、　第３１巻、　
Ｎｏ２．１９８８年）、式［５］の化合物はそれにちな
んでナルドルインドール（Ｎｌｌ）と命名した。また１
式［４］の化合物はナルドルベンゾフラン（Ｎ　Ｔ　Ｂ
　）と命名される。 また、好ましいδ−オピオイドアンタゴニストとして下
記式［２］で示される化合物も挙げられる。 本発明の一般式［１］乃至［５］で示される化金物の薬
理学的に許容される塩とは、好ましくは塩酸塩、硫酸塩
、臭化水素塩、リン酸塩などの無機酸塩、またはメタン
スルホン酸、酢酸、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、
フタール酸、グルタル酸、フマール酸、酒石酸、クエン
酸、乳酸、　リンゴ酸、　トルエンスルホン酸などの有
機酸塩が挙げられるが、これらに限定されるものではな
い。 一般式［１］で示される化合物は、公知の方法により製
造することができる（　Ｐ、Ｓ、　Ｐｏｒｔｏｇｈｅｓ
ｅら著、　Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅ＋ｉ、、　第３１巻、　
Ｎｏ、２．　２８２、　１９８８年）。 特に、一般式［１］に示される化合物のうち、Ｒ４がア
リル基、　Ｒ２が水酸基、　Ｒ３、Ｒ６が水素、Ｒ１が
前記定義に同じの化合物は、具体的には以下のような方
法で得られる。すなわち、ナロキソン塩酸塩をフェニル
ヒドラジンまたは置換フェニルヒドラジンとともに溶媒
に溶解し、メタンスルホン酸を加え、撹拌しながらさら
に反応を続けた後。 反応混合物を室温まで冷却し、析出した沈澱をろ過する
ことにより、一部メタンスルホン酸塩として得られる。 残りは母液を炭酸水素ナトリウム中で中和した後、溶媒
で抽出することにより得られる。ｉ２換フェニルヒドラ
ジン誘導体としては、　２−フルオロフェニルヒドラジ
ン、４−フルオロフェニルヒドラジン、　２−メチルフ
ェニルヒドラジン、　４−メチルフェニルヒドラジン、
　４−メトキシフェニルヒドラジン、４−ニトロフェニ
ルヒドラジン等のハロゲン、メチル２　メトキシまたは
ニトロで置換されたフェニルヒドラジンを挙げることが
できるが、もちろんこれに限定されるものではない、ヒ
ドラジン誘導体は、　１〜１０当量の範囲で用いること
ができ、実用上は１〜２当量で十分満足する結果が得ら
れる。溶媒としては、アルコール系の溶媒が好ましく、
中でもエタノールが最も好ましく用いられる６反応温度
は０〜１５０Ｃの範囲で実行可能であるが、中でも２０
〜９０°Ｃが好ましく、特に、８０°Ｃ前後が好ましい また、式［６］で示される化合物はナルトレキソン又は
その塩とフェニルヒドラジン誘導体を溶媒中メタンスル
ホン酸存在下反応させることにより製造することができ
、好ましくは以下に示すような条件に従って製造される
。即ち、ナルトレキソン塩酸塩又はフリーのナルトレキ
ソンをフェニルヒドラジン誘導体とともに溶媒に溶解し
、メタンスルホン酸を加え、撹拌しながらさらに反応を
続けた後、反応混合物を室温まで冷却し、析出した沈澱
をろ過することにより、純粋なメタンスルホン酸塩とし
て得られる。フェニルヒドラジン誘導体は、　１−１０
当量の範囲で用いることができ、実行上は１〜２当量で
十分満足する結果が得られる。溶媒としては、アルコー
ル系のものが好ましく、中でもエタノールが最も好まし
く用いられる。 反応温度は０−１５０°Ｃの範囲で実行可能であるが、
中でも２０〜９０″Ｃが好ましく、特に７５〜８５゛Ｃ
が好ましい、メタンスルホン酸は、１〜２０当量が用い
られ２　特に８〜１２当量が好ましい、フェニルヒドラ
ジン誘導体としては、　２−フルオロフェニルヒドラジ
ン、　４−フルオロフェニルヒドラジン、　２−クロロ
フェニルヒドラジン、４−クロロフェニルヒドラジン、
　２−メチルフェニルヒドラジン、４−メチルフェニル
ヒドラジン、　４−メトキシフェニルヒドラジン、　４
−ニトロフェニルヒドラジン等を挙げることができるが
、もちろんこれに限定されるものではない。 メタンスルホン酸塩以外の塩は、生成したナルドルイン
ドールのメタンスルホン酸塩を有機溶媒に懸濁し、塩基
の水溶液で中和した後、有機溶媒で抽出することにより
得られるフリーのナルドルインドールを再び溶媒に溶か
し、相当する酸を加えることにより得られる。 また、本発明の一般式［２］に示されるδアンタゴニス
トは１国際公開ＷＯ３９１００９９５号に開示される公
知の方法により製造することができ　る。 本発明の免疫抑制剤を臨床において投与する場合、その
副型としては、注射剤、カプセル剤、座剤、経口剤など
種々の形態が用いられる。なかでも注射剤、経口剤が好
ましく用いられる。 また、本発明の免疫抑制剤は、上記δ−アンタゴニスト
それ自体でもよく、また、安定剤、緩衝剤、希釈剤、等
張網、防腐剤などの賦形剤を適宜混合してもよい。 本発明の免疫抑制剤は、上記有効成分を１〜９０１］ｊ
１％、より好ましくは３０〜７０重量％含有することが
望ましい。 また、本発明の免疫抑制剤の投与量は、投与対象、投与
方法、症状に応じて適宜選択されるが、有効成分で注射
剤の場合は０．００１−１ｇ／日の範囲で、経口の場合
は０．０１−１０ｇ／日の範囲で投与される。 【発明の効果１ 本発明の免疫抑制剤は、従来のサイクロスポリンＡやＦ
Ｋ−５０６の欠点であった毒性を大幅に改善しつつ、非
経口投与のみならず、経口投与によっても優れた免疫抑
制活性を示す、従って、本発明の免疫抑制剤は臓響移植
の際に起こる拒絶反応を抑えるために用いることができ
る。 また１本発明の免疫抑制剤の製造方法によれば簡単な操
作で高収率に免疫抑制剤を製造することが可能になり、
工業的に大量生産を行うことが可能になる。 〔実施例１ 以下、本発明の実施例について説明するが１本発明はこ
れに限定されるものではない。 実施例！　ナロキシインドール（ＮＬＩ）メタンスルホ
ン酸塩及び塩酸塩の合成 ナロキソン塩酸塩１ｇとフェニルヒドラジン０゜３ｍｌ
を２０ｍ１のエタノールに溶かし、加熱。 還流している中へメタンスルホン酸２．６ｍｌを加え、
撹拌しながら、さらに１．　５時間還流した。 反応混合物を室温まで冷却し、析出した結晶をろ過する
と、０．２５ｇのナロキシインドールメタンスルホン酸
塩が得られた。 母液を炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液で中和後、エタ
ノール、　クロロホルムを加えて撹拌した後、スーパー
セルでろ過し、ろ液をクロロホルムで抽出し、有機層を
合わせて硫酸ナトリウムで乾燥した。この有機層を濃縮
後、セファデックスカラム（ＬＨ−２０、ＭｅＯＨ）で
精製すると残りのナロキシインドールが得られた。得ら
れた化合物を酢酸エチルに溶かし、水冷下、塩酸飽和の
酢酸エチル溶液を滴下すると、ナルドルインドール塩酸
塩０．８７ｇが得られた。ここで得られたＮＬｌのメタ
ンスルホン酸塩及び塩酸塩の元素分析値は、以下の如く
計算値と一致した。 ナロキシインドールメタンスルホン酸塩（針状晶、分解
点２２５３〜２５７°Ｃ１再結晶溶媒：エタノール・ク
ロロホルム）の元素分析Ｉｌｌ　：　Ｇ　２５）（，４
Ｎ２０．・Ｍ　ｅ　Ｓ　０３Ｈ−Ｈ２Ｏとして、ＣＨＮ
　　　　　Ｓ 計算値　６０．６８　　５，８８　　　５，４４　　６
．２３実測値　６０．５５　　５，７５　　　５．３２
　　６．１４ＮＬＩ塩酸塩の元素分析値”２５Ｈ２４Ｎ
２０５０．５８２０−ＭＣｌとして 計算値 実測値 ６７．３３ ６７．００ ５．８８ ５．９２ ６．２８ ６．０２ １ ７．９５ ７．６０ 実施例２　ナロキシインドールの合成 実施例１で得られたナロキシインドールの塩酸塩０．７
８ｇをクロロホルムに懸濁し、炭酸水素ナトリウムの飽
和水溶液を加え、　１時間室温で撹拌した。この混合物
にクロロホルムを加え、３回抽出した後、有機層を合わ
せて飽和食塩水で洗浄し、乾燥、ａ縮すると０．６ｇの
純粋なナロキシインドールが得られた。 得られた化合物の分析結果は以下のとうりであった。 ＋　　Ｒ（Ｋ　Ｂ　　ｒ　　）　　ｃ　　ｍ−’　：　
　３３９２，２９３４，２８４０，１６３８．１６２０
．１５０４．１４５８　９２８ Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤ　ＣＩ　　り　　：　　１．７８（Ｉ
ＩＩ、ｄ、Ｊ＝１２．７１］ｚ）、２２０−　２．４５
（２１］’、ｃｏｍｐｌｅｘ　　ｐａｔｔｅｒｎ）、２
．６２４２１］．ｄ、ｊＪ５゜６）１ｚ）、２．７５〜
〜２．９０（２１］，ｃｏｍｐｌｅｘ）、３．１０〜３
．２５（４ｔｌ。 ｃｏＩＩＩｐｌｅｘ）、５．１５−５．３０（２Ｈ，ｌ
１］）、５．７０（ＩＩＩ、ｓ＞、５．９０（ＩＩＩ。 ｍ）、６．５１（Ｉｆ−１，ｄ、ｊ＝８．３１］ｚ）、
６．５７（Ｉｆ（、ｄ、ｊＪ、３１］ｚ）、７．０２（
ＩＨ，ｖａ）、　７．１４（ｌ）Ｉ、ｍ）、７．２６（
１Ｂ、ｍ）、７．４０（ＩＨ，ｄ、ｊ＝７゜８Ｈｚ）、
８．１９（ＩＨ，ｓ） ＭＡＳＳ　　（ＦＡＢ）　　：３９９　　（Ｍ中−１）
また、以上の操作において、フェニルヒドラジンの代わ
りに、２−フルオロヒドラジンを用いれば、　７′−フ
ルオロナロキシインドールが得られ、４−フルオロヒド
ラジンを用いれば、５°−フルオロナロキシインドール
が得られ、　２−メチルフェニルヒドラジンを用いれば
、７゛　−メチルナロキシインドールが得られ、４−メ
チルフェニルヒドラジンを用いれば、５°−メチルナロ
キシインドールが得られ、　４−ニトロフェニルヒドラ
ジンを用いれば、５′−二トロナロキシインドールが得
られる。 実施例３　ナルドルインドールメタンスルホン酸塩の合
成 ナルトレキソン塩酸塩１ｇとフェニルヒドラジン０．３
ｍｌを２０ｍ１のエタノールに溶かし、加熱、還流して
いる中ヘメタンスルホン酸２．６ｍｌを加え、撹拌しな
がら、さらに、　１．　５時間還流した０反応混合物を
室温まで冷却し、析出した結晶をろ過すると、　１．１
ｇのナルドルインドールメタンスルホン酸塩が得られた
。この塩をエタノールより再結晶すると、　０．９３ｇ
のナルドルインドールメタンスルホン酸塩（分解点〉３
００°Ｃ）が得られた。 ここで得られたナルドルインドールメタンスルホン酸塩
は、乾燥すると以下に示されるような満足すべき元素分
析値を示した。 元素分析値 Ｃ２６Ｈ２６Ｎ２ｏ　３　・　Ｈ２Ｃ・Ｈ３Ｓ ０、Ｈとして 計算値 実測値 ６１．３５ ６１．６１ ６．１０ ６．０４ ５．３０ ５．２８ ６．０７ ５．７７ 実施例４　ナルドルインドールの合成 実施例３で得られたナルドルインドールメタンスルホン
酸塩０．９ｇを１０ｍ１のクロロホルムに懸濁し、炭酸
水素ナトリウムの飽和水溶液を加え、室温で１時間撹拌
後、さらにクロロホルムを加えて３回抽出した。有機層
を合わせて飽和食塩水で洗浄し、乾燥濃縮すると純粋な
ナルドルインドール０．７ｇが得られた。 得られた化合物の分析結果は以下のとうりであった。 Ｉ　　Ｒ（Ｋ　　Ｂ　　ｒ　　）　　ｃ　　ｍ−’　：
　　３３９２，２９２６，２８３８．１６３８＋６２２
．１５０４．１４５８ Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤ　Ｃｌ　　ｓ）　　：　　０．０７（
２Ｈ，ｍ）、０．５８（２Ｈ，ｍ）。 ０．８８（Ｉ）１．ｍ）、１．８０（１）１．ｍ）、２
．２０〜２．６０（ｃｏｍｐｌｅｘ　　ｐａｔｔｅｒｎ
）、２．６３（ＩＨ，ｄ、ｊ＝１５３Ｈｚ）、２．９０
（ＩＨ，ｄ、ｊ＝１５．３）１ｚ）。 ３．１４（１８，ｄ、ｊＪ８．５１（ｚ）、５．７０（
ｌ）ｌ、ｓ）、６．５９（２８，＋１］）、７゜０３（
ｌ）Ｉ、ｍ）、７．１８（１Ｂ、＠）、７．２９（ＩＨ
，ｄ、ｊ−８，３Ｈｚ）、７．４１（ＩＨ，ｄ、Ｃ８，
３Ｈｚ） ＭＡＳＳ　　（ＦＡＢ）　　：４１３（Ｍ−１）、４１
５（Ｍ＋１）実施例５ 実施例１又は３でそれぞれ得られたナロキシインドール
塩酸塩及びナルドルインドールメタンスルボン酸塩を用
いて、以下の方法でアンタゴニスト活性を測定した。 すなわち、モルモットの回腸（μ、　に受容体を含む）
及びマウスの輸精管（μ、δ受容体を含む）を用い、そ
れぞれの臓器の摘出標本の電気刺激による収縮をモルヒ
ネ（μ）、ＥＫＣ（に）、ＤＡＤＬＥ（δ）のそれぞれ
のアゴニストが抑制するのを阻害する能力を測定した。 結果を表１に示した。 表１の結果より、ＮＴＩとＮＬＩを比べると、δ受容体
に対する親和性は、ＮＬＩはわずかにＮＴｌに劣ってい
るが、μ、　に受容体に対するδ受容体の選択性に関し
ては、ＮＴＩがそれぞれ約１００倍なのに比較して、Ｎ
ＬＩはそれぞれ約２５０倍と４００倍であり、非常に優
れている。 次に、ＮＬｒ、ＮＴＩの濃度が各受容体の拮抗作用に対
して影響があるかを第１図及び第２図に示した。 第１図及び第２図に示されるように、ＮＴＩの３つの受
容体に対する拮抗作用はそれぞれ濃度依存的に増加して
いる。一方、ＮＬＩに関してはδ受容体のみ依存性を示
し、μ、に受容体に関しては依存性を示さない、この事
実は、ＮＬＩは濃度を高くすればするほどμ、　に受容
体に対するδ受容体選択性が増加することを示しており
、優れた理想的なδ選択的アンタゴニストと言える。 実施例６　マイトジェン反応の抑制 マウスの牌細胞をコンカナバリンＡ（以下、ＣｏｎＡと
略す）の存在下で試験管培養すると細胞が分裂、増殖し
てくる（マイトジェン反応）、この系に、本発明に係る
免疫抑制剤及び比較例としてサイクロスポリンＡを添加
し、マイトジェン反応に対する作用を調べた。 具体的には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを殺して肺臓を摘出
し、　１０％ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩＩ６４０培養液
（以下、ＲＰＭ１］６４０と略す）を用いて、牌細胞浮
遊液（５ｘ　１０６個／ｍ１）を調製した。この浮遊液
１００μｍを９６ウエル平底マイクロプレートのウェル
に入れ、　さら（二　ＣｏｎＡ含有（４μｇ／ｍｌ）Ｒ
ＰＭ＋　１６４０培養液５０μｌ、及び表−２に示され
る濃度の被検化合物含有ＲＰＭ１］６４０培殖液５０μ
ｍを添加し、４８時間培養した（３７°Ｃ１５％Ｃｏ２
）。 対照群にはＲＰＭ１］６４０培養液５０μｍを添加した
。そして、培養終了８時間前に、　［３Ｈ］チミジン２
μＣｉを添加した。培養終了後、セルハーベスタ−にて
牌細胞をろ紙上に回収した。ろ紙は乾燥後、　トルエン
系シンチレータ−を入れたバイアルに入れ、液体シンチ
レーションカウンターにて放射能を測定した。 マイ トジェン反応抑制率は次式に よ す 算出した。 マイトジェン反応抑制率 （％） 結果を表２ に示 した。 表２に示されるように、本発明に係る免疫抑制剤はコン
カナバリンＡにより細胞が増殖するのを抑制することが
明らかになった。 また、　コンカナバリンＡ刺激によるｉｎ　ｖｉｌｒｏ
実験の際、サイクロスポリンＡは１　ｇ　／　ｍ　ｌで
すでに細胞毒性が見られるのに対し１本発明に係る免疫
抑制剤は同量で毒性が全く見られない、このように、本
発明の化合物はサイクロスポリンＡと同等の活性を示し
、毒性は低いという免疫抑制剤として理想的な性質を有
することが明らかになった。 実施例７ＭＬＲ反応の抑制 遺伝的に異なる２系統のマウスの牌細胞を混合して試験
管内培養すると、牌細胞が相手を認識して分裂、増殖を
起こす（ＭＬＲ反応）。 この系にＮＴＩ、ＮＴＢ及びＮＬＩ塩酸塩並びに比較例
としてサイクロスポリンＡを添加し、ＭＬ　Ｒ反応に対
する作用を調べた。 まず、　Ｂ　ａ　ｌ　ｂ　／　ｃマウスを殺して婢臓を
摘出し、ＲＰＭ１］６４０を用いて牌細胞浮遊液（ＩＸ
１０７個／ｍ１）を調製した。　この牌細胞に対して、
マイトマイシンＣ含有ＲＰＭ１］６４０中で３０分間培
ＩＩ（３７°　Ｃ）することにより、マイトマイシン処
理を行った。　また、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを殺して肺
臓を摘出し、ＲＰＭΣ１６４０を用いて牌細胞浮遊液（
ＩＸ１０６個／　ｍ　ｌ　）を調製した。 次に、Ｃ５７ＢＬ／６マウス牌細胞浮遊液１００μｍ、
マイトマイシン処理Ｂａ１ｂ／ｃマウス牌細胞浮遊液５
０μ！及び被検化合物含有ＲＰＭ１］６４０培養液５０
μｌを９６ウエル平底マイクロプレートのウェルに入れ
、７２時間培養（３７°Ｃ１５％Ｃｏ２）した、対照群
にはＲＰＭ１］６４０培養液５０μｌを添加した。培養
終了前８時間においてし３Ｈ］チミジン２μＣ１を添加
した。 培養終了後、セルハーベスタ−にて牌細胞をろ紙上に回
収した。ろ紙は乾燥後、　トルエン系シンチレータ−に
入れたバイアルに入れ、液体シンチレーションカウンタ
ーにて放射能を測定した。 ＭＬＲ反応抑制率は次式により算出した。 Ｍ　Ｌ　Ｒ反応抑制下 （％　） 結果を表３に示した。 表 表３に示されるようにＮＴ１．ＮＴＢ及びＮＬＩ塩酸塩
によりＭＬＲ反応が抑制されることが明かになった。 実施例８　移植片対宿主反応の抑制 Ｆｌマウスに親糸のマウスの牌細胞を移植すると、移植
片対宿主反応が起こることが知られている。この系にお
いて、ＮＴＩ、ＮＴＢ及びサイクロスポリンＡをＦｌマ
ウスに投与し、移植片対宿主反応に対する作用を調べた
。 まず、　　Ｃ５７ＢＬ／６マウスを殺して、肝臓を摘出
し、　リン酸緩衝生理食塩水を用いて牌細胞浮遊液（２
Ｘ］０δ個／　ｍ　Ｉ　）を調製した０次に、この牌細
胞浮遊液５０μｌをＢＤＦ　１マウスの左側後肢足底皮
下に投与した。同じ日から被検化合物投与を１日１回５
日間続けた。投与量は１００ｍｇ／ｋｇとし、　０．５
％カルボキシメチルセルロース（以下、ＣＭＣと略す）
液に懸濁して経口投与した。対照群には０．　５％ＣＭ
Ｃのみを同様に投与した。腓細胞を投与した日から７日
目にマウスを殺し、左右の後肢膝淳リンパ節を摘出し、
その重量を測定した。左右のリンパ節重量の差を計算し
、移植片対宿主反応の指標とした。得られた結果は、ス
チューデントのｔ検定により対照群に対して、危険率ｐ
＜０．０２あるいはｐ＜０．０５で、有意のものには＊
＊印あるいは＊印を付した。 移植片対宿主反応抑制率は次式により算出した。 結果を表４に示した。 表外 表４に示されるように、ＮＴ１．ＮＴＢにより移植片対
宿主反応は抑制された。特に、本実施例においては、被
検化合物の投与は経口で行ったものであるが、サイクロ
スポリンＡより強い活性を示した。さらに、この移植片
対宿主反応の実験は臓器移植のモデル実験として有名な
もので、この実験でサイクロスポリンＡより強い活性を
示したことは免疫抑制剤として使用できることを意味す
るものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の免疫抑制剤であるナルドルインドール
（ＮＬＩ）の濃度変化による拮抗作用を示す図、第２図
はナルドルインドール（ＮＴＩ）の濃度変化による拮抗
作用を示す図である。 １、事件 平成 の表示 ２年　特許願 第３２７４５３号 ２゜ 発明の名称 免疫抑制剤及びその製造方法 ３゜ 補正をする者 事件との関係　　　特　許　出　願　人件　所　　東京
都中央区日本橋室町２丁目２番１号願書に最初に添付し
た図面（第１図、第２図）書・別紙のとおり（内容に変
更なし） の浄

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、δ−オピオイドアンタゴニスト又はその薬理学的に
   許容される塩を有効成分とする免疫抑制剤。 ２、前記δ−オピオイドアンタゴニストは一般式［１］ ▲数式、化学式、表等があります▼［１］ ［式中、Ｒ＿１は炭素数１〜５のアルキル、炭素数３〜
   ６のシクロアルキルアルキル、炭素数５〜７のシクロア
   ルケニルアルキル、アリール、アラルキル、炭素数４〜
   ５のトランスアルケニル、アリル又はフラン−２−イル
   アルキルを表し、Ｒ＿２は水素、ヒドロキシ又は炭素数
   １〜５のアルカノイルオキシを表し、Ｒ＿３は水素、炭
   素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜５のアルカノイル
   を表し、Ｘは酸素、硫黄又はＹが結合した窒素を表し、
   Ｙは水素又は炭素数１〜５のアルキル基を表し、Ｒ＿４
   とＲ＿５は別個に水素、フッ素、塩素、臭素、アミノ、
   ニトロ、炭素数１〜５のアルキル、炭素数１〜５のアル
   コキシ又はＲ＿４、Ｒ＿５を結合してベンゾを表す］で
   示される請求項１記載の免疫抑制剤。 ３、前記δ−オピオイドアンタゴニストは一般式［２］ ▲数式、化学式、表等があります▼［２］ （式中、Ｒ＿１は炭素数１〜５のアルキル、炭素数３〜
   ６のシクロアルキルアルキル、炭素数５〜７のシクロア
   ルケニルアルキル、アリール、アラルキル、炭素数４〜
   ５のトランスアルケニル、アリル又はフラン−２−イル
   アルキルを表し、Ｒ＿２は水素、ヒドロキシ又は炭素数
   １〜５のアルカノイルオキシを表し、Ｒ＿３は水素、炭
   素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜５のアルカノイル
   を表し、Ｍは窒素又はメチンを表し、Ｒ＿４とＲ＿５は
   別個に水素、フッ素、塩素、臭素、アミノ、ニトロ、炭
   素数１〜５のアルキル、炭素数１〜５のアルコキシ又は
   Ｒ＿４、Ｒ＿５を結合してベンゾを表す］ で示される請求項１記載の免疫抑制剤。 ４、一般式［１］において、Ｒ＿１は炭素数１〜５のア
   ルキル、炭素数３〜６のシクロアルキルアルキル、炭素
   数５〜７のシクロアルケニルアルキル、炭素数７〜１０
   のアラルキル、炭素数４〜５のトランスアルケニル、ア
   リル又はフラン−２−イソアルキルであり、Ｒ＿２は水
   素又はヒドロキシであり、Ｒ＿３は水素であり、Ｒ＿４
   は水素、フッ素、メチル、メトキシ又はニトロであり、
   Ｒ＿５は水素、Ｘは酸素又はＮＲ＿６（ここで、Ｒ＿６
   は水素又は炭素数１〜５のアルキル）である請求項２記
   載の免疫抑制剤。 ５、前記一般式［１］で示されるδ−オピオイドアンタ
   ゴニストは下記式［３］で表される請求項４記載の免疫
   抑制剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼［３］ ６、前記一般式［１］で表されるδ−オピオイドアンタ
   ゴニストは下記式［４］で表される請求項４記載の免疫
   抑制剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼［４］ ７、前記一般式［１］で表されるδ−オピオイドアンタ
   ゴニストは下記式［５］で表される請求項４記載の免疫
   抑制剤。 ▲数式、化学式、表等があります▼［５］ ８、ナルトレキソン又はその塩とフェニルヒドラジン誘
   導体を溶媒中メタンスルホン酸存在下反応させることを
   特徴とする下記式［６］ ▲数式、化学式、表等があります▼［６］ ［式中、Ｒ＿７は水素、塩素、臭素、フッ素、メチル、
   メトキシ又はニトロを表す］ で示されるナルトルインドール誘導体の製造方法。