JPH03183474A - アルギニン高含有酵母 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、菌体内にＬ−アルギニンを著量蓄積する酵母
に関する。本発明の酵母菌体は、家畜の飼料としての利
用が期待される。

従来の技術 従来、トルラ酵母、ビール酵母などの酵母菌体は、家畜
の飼料として利用されている。

菌体内にＬ−アルギニンを著量蓄積する酵母としては、
菌体内に１．７％のＬ−アルギニンを蓄積するサツカロ
マイセス属に属するａｒｇＲ，ｃｐｏＯ調節変異株〔ヨ
ーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリイ　
（εｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、）　１２　　ｋｌ、　
４０〜４７　（１９７０）　）が知られている。

発明が解決しようとする課題 酵母菌体は家畜の飼料として広く利用されているが、家
畜によっては、酵母菌体だけでは不足するアミノ酸があ
る。例えば、ニワトリの場合、Ｌアルギニンが不足しが
ちである。不足するアミノ酸は、単品で補充添加してい
るが、これは経済的に有利な方法ではない。不足するア
ミノ酸を菌体内に著量蓄積する種々の酵母が提供されれ
ば、家畜の飼料として酵母菌体を広く利用することがで
きる。

課題を解決するための手段 本発明者は、従来飼料に単品で補充添加しているアミノ
酸を菌体内に著量蓄積するような酵母を種々検討し、Ｌ
−アルギニンを菌体内に著量Ｍ積する酵母として、クリ
ベロマイセス属に属するエチオニン耐性株を取得した。

この菌株は、遊離のＬ−アルギニンを菌体あたり５％（
乾燥菌体換算）以上含有するアルギニン高含有酵母であ
る。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明のアルギニン高含有酵母としては、クリベロマイ
セス・ポリスポラス（にｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｐｏ
ｌｙｓρｏｒｕｓ）に属し、エチオニンに耐性を有する
酵母であればいずれでもよい。このような性質を有する
酵母は、クリベロマイセス属に属する酵母を親株として
、通常の変異処理、例えば紫外線照射やＮ−メチル−Ｎ
′−二トローＮ−二トロングアニジンなどによる化学処
理を施し、エチオニンに対する耐性を獲得した変異株か
ら菌体内にＬ−アルギニンを５％（乾燥菌体換算）以上
蓄積する酵母を選択することにより得ることができる。

親株として使用する酵母としては、クリベロマイセス属
に属する酵母であればいずれでもよいが、具体的には、
クリベロマイセス・ポリスポラスＩＦＯ０９９６［イン
ターナショナル・ジャーナル・オブ・システマチック・
バタテリオロジイ（Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ。

Ｂａｃｔ、）、　３８　、８２２（１９８３）〕があげ
られる。

次に、本発明のアルギニン高含有酵母の取得方法を具体
的に説明する。

親株として、クリベロマイセス・ポリスポラスＩＦＯ０
９９６を用いた。親株の細胞を生理食塩水に１０ｓ個／
ｄになるように懸濁した。この懸濁液０．１−をエチオ
ニン１０００　ｕｇ／−を含有する最少寒天培地〔グル
コース２０ｇ／ｉ’、イーストナイトロジエンベース（
Ｄｉｆｃｏ社製）６．７ｇ／ｊ！、寒天２０ｇ／Ｌ　ｐ
Ｈ５〜６〕に塗抹した。この平板を紫外線光源（＋５１
１紫外線灯、波長２５３オングストローム）下３５ｃｍ
の位置に置き、２０秒間紫外線を照射した。

この紫外線照射寒天平板を、３０℃で２〜４日静置培養
した。エチオニンを含有した培地の表面には、エチオニ
ン耐性株が約２５０個のコロニーとして生育した。生育
したエチオニン耐性株２００株を釣菌し、後述の実施例
１の方法で培養を行い、菌体内のし一アルギニン含量が
５．０％以上の菌株をｌＯ数株選択した。このうちの１
株を、クリベロマイセス・ポリスポラスＥＴＡ８２−３
３と命名した。本菌株は、平成元年８月２２日付で工業
技術院微生物工業技術研究所に、ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２
５６０として寄託されている。

本発明のアルギニン高含有酵母を培養する培地としては
、炭素源、窒素源、無機塩類、生育因子などを含有する
栄養培地または合成培地が用いられる。

炭素源としては、ゲルコール、フラクトース、シューク
ロース、糖蜜、デンプン、デンプン加水分解物、果汁な
どの炭水化物、エタノール、メタノール、プロパツール
などのアルコール類などで、該酵母が利用できるもので
あればいずれも使用できる。

窒素源としては、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム
、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、酢酸アンモ
ニウム、尿素、アンモニア、アミン類、ペプトン、肉エ
キス、酵母エキス、コーン・スチーブ・リカー、カゼイ
ン加水分解物、各種発酵菌体およびその消化物などが使
用できる。

無機塩としては、リン酸−カリウム、リン酸二カリウム
、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリ
ウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、炭酸カルシウムなど
が使用できる。

栄養要求性を示す変異株を使用する場合には、生育因子
として栄養物を標品もしくはそれを含有する天然物とし
て添加する。例えば、リジン、グルタミン酸などのアミ
ノ酸、ビオチン、チアミンなどのビタミン類、プリン、
アデニンなどの核酸塩基類が用いられる。

培養は、通気攪拌などの好気的条件下で行う。

培養温度は２４〜３７℃、培養日数は２〜７日間である
。培養液のｐＨは４〜９の範囲に維持する。ｐＨの調整
には尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス、アンモニ
ア水、リン酸マグネシウム、炭酸アンモニウムなどが用
いられる。培養終了後、培養液から菌体を集菌乾燥する
ことにより、アルギニン高含有酵母を得ることができる
。集菌乾燥する方法としては、公知の方法、例えば、シ
ャープレス、スプレードライヤーを使用する方法などが
用いられる。

以下に実施例をあげて本発明を具体的に示す。

実施例１ 種菌としてクリベロマイセス・ポリスポラスＥＴＡ２−
３３を用いた。ＥＴＡ８２−３３をグルコース１ロ６０
）から成る種培地５−を含んだ試験管に接種し、３０℃
で２４時間振盪培養した。

この種培養液０．０５−を菌体培養培地〔グルコース５
０ｇ／Ｒ．コーン・スチープ・リカー３４ｇ／Ｌ（ＮＨ
４）　２ＳＯ４　　３．８　ｇ　／　ｊ！、ＭｇＳＯ４
・７Ｈ２０　　１ｇ／Ｊ！、ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／　Ｒ　
、　ＣａＣ０−　３０ｇ／　ｊ！　（ｐＨ６．５）１　
６　ｍ１２を含んだ試験管に接種し、３０℃で４８時間
振盪培養した。培養終了後、遠心分離により菌体を集菌
し、６７ｍＭＩＪン酸緩衝液（ｐｔ１６．　Ｏ＞で２回
洗浄した。その後乾燥菌体重量換算で０．１ｇの酵母菌
体を６７ｍＭ　！Ｊン酸緩衝液２−に懸濁し、　１００
℃で１０分間抽出摸作を行い、抽出液中の遊離のし一ア
ルギニンを定量したところ、乾燥菌体重量あたり８．０
％のＬ−アルギニンを蓄積していた。

対照として親株であるクリベロマイセス・ポリスポラス
ＩＦＯ　０９９６を前記と同様に培養したところ、Ｌ−
アルギニンの蓄積量は、乾燥菌体重量あたり０、２％で
あった。

実施例２ 種菌としてクリベロマイセス・ポリスポラスＥＴＡ２−
３３を用いた。ＢＴＡ８２−３３をグルコース１０ｇ／
ｌ、ペプトン５ｇ／Ｉ１．酵母エキス３ｇ／ｊ！（ｐＨ
６、０〉から成る種培地３０−を含んだ試験管に接種し
３０℃で２４時間振盪培養した。

この種培養液全量を菌体培養培地〔グルコース５０ｇ／
Ｃコーン・スチーブ・リカー３４ｇ／Ａ、（Ｎｌ（４）
２ＳＯ４　　３．８ｇ／ＬＭｇＳＯ＋・７Ｈ２０　　１
ｇ／ｊｌ！、ＫＨ．ＰＯ．　Ｉｇ／４２％ＣａＣ０，　
３０ｇ／ｊ！　　（ｐＨ６．５）］　１０００−を含ん
だ２１容発酵槽に接種し、アンモニア水でｐＨを５．５
に調節しながら、３０℃で４０時間攪拌培養した。培養
終了後、遠心分離により菌体を集菌し、６７ｍＭＩＪン
酸緩衝液（ｐ）１６．　０）で２回洗浄した。

その後乾燥菌体重量換算で０、１ｇの酵母菌体を６７ｍ
ＭＩＪン酸緩衝液２−に懸濁し、１００℃で１０分間抽
抽出性を行い、抽出液中の遊離のし一アルギニンを定量
したところ、乾燥菌体重量あたり１３．０％のし一アル
ギニンを蓄積していた。

対照として親株であるクリベロマイセス・ポリスポラス
ＩＦＯ　０９９６を前記と同様に培養したところ、Ｌ−
アルギニンの蓄積量は、乾燥菌体重量あたり０、２％で
あった。

発明の効果 本発明により、飼料用酵母として有用なし一アルギニン
高含有酵母を提供することができる。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）クリベロマイセス・ポリスポラス（Ｋｌｕｙｖｅ
   ｒｏｍｙｃｅｓｐｏｌｙｓｐｏｒｕｓ）に属し、エチオ
   ニンに耐性を有する酵母。
2. （２）該酵母が、遊離のＬ−アルギニンを菌体あたり５
   ％（乾燥菌体換算）以上含有するアルギニン高含有酵母
   である請求項１記載の酵母。
3. （３）該酵母が、クリベロマイセス・ポリスポラスＥＴ
   Ａ８２−３３（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２５６０）である請求
   項１または２記載の酵母。
4. （４）クリベロマイセス属に属し、エチオニンに耐性を
   有する酵母を培地で培養し、培養物より遊離のＬ−アル
   ギニンを菌体あたり５％（乾燥菌体換算）以上含有する
   アルギニン高含有酵母を採取することを特徴とするアル
   ギニン高含有酵母の製造法。