JPH03172197A - α―アミラーゼ活性測定用試薬及びα―アミラーゼ活性の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、新規なａ−アミラーゼ活性測定用試薬及びａ
−アミラーゼ活性の測定方法に関するものである。さら
に詳しくいえば、本発明は、基質としての非還元末端を
修飾したマルトオリゴシド誘導体とβ−アミラーゼをそ
の戊分の１つとする共役酵素とを組み合わせて成るσ−
アミラーゼ活性測定用試薬、及びこのものを用いてａ−
アミラーゼ含有試料のアミラーゼ活性を効率よく正確に
測定する方法に関するものである。

従来の技術 従来、血清、尿、膵液、唾液などの体液を対象とするσ
−アミラーゼ活性の測定は、臨床診断上極めて重要であ
り、特に急性や慢性の膵炎、膵臓がん、流行性耳下腺炎
などの鑑別診断においては必須の測定項目となっている
。

コノσ−アミラーゼ活性の測定方法としては、例えばマ
ルトベンタオース、マルトヘプタオースなどの構造が明
らかな一連のマルトオリゴ糖などを基質として用い、こ
れを被検試料中のσ−アミラーゼにより切断したのち、
共役酵素を作用させて、生戊するマルトース、グルコー
スを酵素化学的に定量する方法などが知られている。

しかしながら、この方法においては、あらかじめ試料中
のマルトース、グルコースなどの糖質を完全に消去する
ことが必要である上、酵素反応で生戊するグルコースを
グルコースオキシダーゼ、ベルオキシダーゼ、クロモゲ
ン系を用いて測定する場合に、試料中のグルコースの影
響を補正する必要があるとともに、多量のグルコースオ
キシダーゼを必要とし、さらに、試料中に存在するアス
コルビン酸、ビリルビンなどの還元物質の影響を免れな
いなどの欠点がある。

これに対し、近年、特に人工合或基質、例えば少なくと
も３個のグルコースから成るマルトオリゴ糖を骨格とし
、その非還元末端を保護基で修飾し、一方還元末端にα
一又はβ−グルコシド結合により、その結合が切断され
た際に光学的に検出可能な物質を結合させたマルトオリ
ゴシド誘導体などを用い、これを被検試料中のσ−アミ
ラーゼにより切断したのち、共役酵素を作用させて遊離
する物質を光学的に定量測定する方法が、好ましい方法
として広く用いられている。そして、この方法において
は、該共役酵素として従来、糖鎖を短くするためのａ−
グルコシダーゼやグルコアミラーゼ、還元末端に結合す
る光学的に検出可能な物質を遊離させるためのσ−グル
コシダーゼやβ−グルコシダーゼが使用されている。

しかしながら、この方法においては、前記の糖類を短く
するためにσ−グルコシダーゼを用いる場合、グルコー
ス単位３個以上を有する長鎖のマルトオリゴシド誘導体
に対する反応性が低くて、ラグタイムが長くなるため、
自動分析装置への適用に問題が生じるし、また、グルコ
アミラーゼを用いる場合、実用上σ−アミラーゼの混在
を避けられないため誤差を生じ、測定結果の正確度に問
題が生じる、などの欠点がある。

発明が解決しようとする課題 本発明は、このような従来のσ−アミラーゼ活性の測定
方法が有する問題を解決し、ａ−アミラーゼ活性を効率
よく、かつ正確に測定するための試薬及びσ−アミラー
ゼ活性の測定方法を提供することを目的としてなされｔ
こものである。

課題を解決するための手段 本発明者らは、前記の目的を達戊するために鋭意研究を
重ねた結果、β−アミラーゼがσ−アミラーゼ活性測定
用基質である非還元末端を修飾したマルトオリゴシド誘
導体には作用せず、σ−アミラーゼにより切断されて生
成するマルトオリゴシド誘導体のみに作用し、しかもａ
−アミラーゼ混入のおそれもなく、糖鎖を短くする共役
酵素として極めて好適であり、そして、このβ−アミラ
ーゼを単独又は他の共役酵素と組み合わせて用いること
により、反応のラグタイムを著しく短縮しうろことを見
い出し、この知見に基づいて本発明を完戒するに至った
。

すなわち、本発明は、非還元末端を保襲基で修飾し、か
つ還元末端にα−又はβ−グルコシド結合により、光学
的に検出可能な物質を結合させたマルトオリゴシド誘導
体を基質とし、これと共役酵素とを組み合わせたα−ア
ミラーゼ活性測定用試薬において、該共役酵素戊分の１
つとしてβーアミラーゼを用いることを特徴とするａ−
アミラーゼ活性測定用試薬、及びａ−アミラーゼ含有試
料に、前記マルトオリゴシド誘導体を基質として、β−
アミラーゼを共役酵素成分の１つとして添加し、酵素反
応を行わせ、遊離した光学的に検出可能な物質を定量す
ることにより、該試料のａ−アミラーゼ活性を測定する
方法を提供するものである。

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明におけるａ−アミラーゼ活性測定用基質としては
、少なくとも４個、好ましくは５〜７個のグルコース単
位から或るマルトオリゴ糖の非還元末端を保護基で修飾
し、かつ還元末端にａ一又はβ−グルコシド結合により
、その結合が切断された際に光学的に検出可能な物質を
結合させて戊るα−又はβ−アノマーのマルトオリゴシ
ド誘導体（以下、修飾マルトオリゴシド誘導体という）
が用いられる。

この修飾マルトオリゴシド誘導体の非還元末端を修飾す
る保護基については、共役酵索の作用を受けないもので
あればよく、特に制限はない。該保護基としては、例え
ば４“．６“一〇−アルキリデン基（例えばエチリデン
基、インプロビリデン基、３−ケトブチリデン基など）
、４＠，６”−０−アリーリデン基（例えばペンジリデ
ン基など）、６”−０−アルキル基（例えばメチル基、
エチル基など）、６“一〇−アリール基（例えばベンジ
ル基など）、４゜，６゜一〇−ジアルキル基（例えばジ
メチル基、ジエチル基など）、６゜−Ｏ−アリールスル
ホニル基（例えばＰ−トルエンスルホニル基、β−ナフ
タレンスルホニル基など）、２”−０−カルポキシアル
キル基（例えばカルボキシメチル基など）、３’−０−
カルポキシアルキル基（例えばカルボキシメチル基など
）、６“一〇−アルキルスルホニル基（例えばメタンス
ルホニル基など）、６”−０−ピラノシル基（例えばグ
ルコシル基など）、６゜−０−アルキルホスホリル基（
例えばメチルホスホリル基など）、４”一〇−ピラノシ
ル基（例えばβ−アセチルヘキソサミニル基など）など
が挙げられる。なお、ｎはグルコースの重合度を示す。

また、該修飾マルトオリゴシド誘導体の還元末端にａ一
又はβ−グルコンド結合により結合させる物質としては
、その結合が切断された際に光学的に検出可能なもので
あればよく、特に制限されず、通常用いられているもの
、例えば発色物質、蛍光物質、発光物質などが挙げられ
る。発色物質としては、例えばｐ−二トロフェノール、
０−ニトロフェノール、２−クロロ−４一二トロフェノ
ール、２．６−ジクロロー４一二トロ７エノール、２．
６−ジブロモ−４−二トロ７エノール、２−プロモー４
一二トロフェノール、２−ヒドロキシ−４一二トロ７エ
ノール、３−ヒドロキシ−４一二トロフェノールなどの
ニトロ７エノール誘導体、フェノールインド−３′−ク
ロロフェノール、レサズリンなどのインドフェノール誘
導体、蛍光物質としては、例えば４−メチルウンベリフ
エロンなどのクマリン誘導体などが挙げられ、発光物質
としては、例えばルシフエリンなどが挙げられる。

このａ一又はβ−アノマーの修飾マルトオリゴシド誘導
体の好ましいものとしては、例えば２一クロロ−４−ニ
トロフェニル＝４’，６’−０−ペンジリデンーβ一Ｄ
−マノレトベンタオシド、２−クロロ−４−二トロフエ
ニノレ−４ｙ．６ｔ−０−べ冫ジリデンーβ一Ｄ−マル
トヘプタオシド、４−ニトロフエニル−４１．６’−０
−エチリデンーａ−Ｄ−マルトヘプタオシド、４−ニト
ロフェニル−６ｓ−Ｏ−ベンジルーα−Ｄ−マノレトベ
ンタオシド、２−クロロ−４−ニトロフエニル−４’，
６’−０−インブロピリデンーβ−Ｄ−マルトペンタオ
シド、フェノールインド−３′−クロロフエニル−４７
．５Ｆ　＋　Ｑ−イソプロピリデンーβ−Ｄ−マルトヘ
ブタ才シドなどが挙げられる。

本発明において、共役酵素成分の１つとしてβ−アミラ
ーゼが用いられるが、このβ−アミラーゼに、通常用い
られている共役酵素、例えばａ−グルコシダーゼ、β−
グルコシダーゼなどを適宜組み合わせて用いることがで
きる。なお、常法によりグルコシド結合切断のために、
基質の修飾マルトオリゴシド誘導体がａ−アノマーの場
合にはａ−グルクシダーゼを、またβ−アノマーの場合
にはβ−グルコシダーゼを共役酵素の１つとして用いれ
ばよい。

このようなａ−アミラーゼ活性用測定系に、ａ　−アミ
ラーゼを作用させると、まず基質が切断されてマルトオ
リゴシド誘導体が生或するが、本発明は、この生戊マル
トオリゴシド誘導体が、糖鎖３個以上のものを含む場合
に適用すると特に効果的である。

本発明においては、α−アミラーゼ活性を測定する系と
して、β−アミラーゼを含有させる以外は、従来慣用さ
れている系を用いることができる。

その有利な系としては、例えば基質としての前記修飾マ
ルトオリゴシド誘導体０．５〜２０＋ｓＭを含有し、か
つ該基質がａ−アノマーの場合は、（イ）β−アミラー
ゼ１　０−１０．０００単位／重Ｑ及びσ−グルコシダ
ーゼｌＯ〜２００単位／ｍＱを含有する系、該基質がａ
−アノマーとβ−アノマーの混合物の場合は、（口）前
記（イ）にざらにβ−グルコシダーゼ０．５〜２０単位
／ＩＩＩＱを含有させた系、該基質がβ−アノマーの場
合は、前記（ロ）の系又は（ハ）β−アミラーゼｌＯ〜
１０．０００単位／ｗｒＱ及びβ−グルコシダーゼ０．
５〜２０単位／ｒａＱを含有する系などが挙げられる。

なお、各系のｐＨは対称とするａ−アミラーゼの作用ｐ
Ｈの範囲に調整される。

これらの系に用いられる緩衝液については、σ−アミラ
ーゼ活性の測定ｐＨ範囲に緩衝域をもつものであればよ
く、特に制限はない。このような緩衝液としては、例え
ばリン酸緩衝液、グッド緩衝液などが挙げられる。

本発明において用いられるβ−アミラーゼの種類につい
ては特に制限はなく、植物起源のものや微生物起源のも
のなど、いずれも用いることができるが、例えば細菌な
どに由来するものが好適である。また、ａ−グルコシダ
ーゼの種類についても特に制限はなく、動物、植物、微
生物など、いかなる起源のものも用いることができるが
、特に酵母起源のものもが好適である。さらに、β−グ
ルコシダーゼについても任意の起源のものを用いること
ができるが、例えばアーモンド種子から得られたものが
好ましい。

本発明においては、これらの系に前記戒分以外に、本発
明の目的をそこなわない範囲で、さらに必要に応じ、従
来慣用されている種々の戊分を添加することができる。

例えば溶解補助剤、安定化剤として、牛血清アルブミン
、α−又はβ−シクロデキストリン、界面活性剤などを
添加してもよいし、ａ−アミラーゼ活性剤としてＮａＣ
Ｑ，　ＭｇＣＱｚ、ＣａＣＱｘ　・２ｕｔｏなどの形で
Ｃａ−イオン、Ｃａ”＋イオン、Ｍ　ｇ　ｌ　４イオン
などを加えてもよい。これらの添加成分は１種用いても
よいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。また、
これらの添加成分の添加時期については特に制限はなく
、前記系の調製の任意の段階に加えてもよい。

本発明の試薬は、乾燥物あるいは溶解した形で用いても
よいし、薄膜状の担体、例えばシート、含漫性の紙など
に含浸させて用いてもよい。このような本発明の試薬を
用いることにより、各種の試料に含有されるσ−アミラ
ーゼの活性を、簡単な操作で正確に、かつ高感度で測定
することができる。

次に、本発明のａ−アミラーゼ活性の測定方法の好適ｆ
ｔ　ｌ例について説明すると、まず、緩衝液に、共役酵
素として前記した酵素と活性の組み合わせから適宜選択
したものを加え、同時又は順次に前記の量の基質として
の修飾マルトオリゴシド誘導体を加えたのち、σ−アミ
ラーゼを含有する被検試料を加え、温度１５〜４０℃、
ｐＨ６〜９の条件にて、■分間以上、好ましくは１〜５
分間酵素反応させ、次いで遊離生成する光学的に検出可
能な物質を、常法によりそのまま又は必要によりｐＨを
変化させたのち、あるいは縮合反応を行ったの゛ち、適
当な波長で連続的若しくは断続的に吸光度値を測定し、
あらかじめ測定したａ−アミラーゼ標品の吸光度値と対
比させるか、あるいは遊離する光学的に検出可能な物質
に固有の係数（分子吸光係数など）から、試料のａ−ア
ミラーゼ活性を算出する。

本発明に用いられるα−アミラーゼ含有試料については
、α−アミラーゼを含有するものであればよく、特に制
限はないが、具体的には血液、尿、膵液、唾液などの体
液、微生物の培養液、植物の抽出液、あるいは動物組織
やそれらの抽出液などを用いることができる。

σ−アミラーゼ含有試料が固体の場合には、いったん緩
衝液に溶解又は懸濁させるのがよい。この緩衝液として
は、例えばリン酸緩衝液、グッドバッファーなどが挙げ
られる。

発明の効果 本発明によると、ａ−アミラーゼ含有試料に、基質とし
ての修飾マルトオリゴシド誘導体と共役酵素とを添加し
て酵素反応を行わせ、遊離物質を光学的に定量して、試
料のａ−アミラーゼ活性を測定するに際し、該共役酵素
成分の１つとしてβ−アミラーゼを用いることにより、
反応のラグタイムを著しく短縮しうるので、自動分析装
置への適用性が大きく改善され、しかもアミラーゼ活性
を正確に測定することができる。

実施例 次に、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、
本発明は、これらの例によってなんら限定されるもので
はない。

実施例１　α−アミラーゼ活性の測定 （＋）試薬液の調製 ５０ｗ＋Ｍグッドバッファ一（ＰＩＰＥＳ１ｐＨ７．０
）に２一クロロ−４−ニトロ７エニル！，ｐ．６Ｉ−Ｑ
−ペンジリデンーβ一Ｄ−マルトペンタオシドを１　．
５ａＭ，市販の微生物由来のβ−アミラーゼを２００単
位／ｍａ、市販のアーモンド由来β−グルコシダーゼを
２単位／ｔａＱ、塩化ナトリウムを５０一Ｍ１塩化カル
シウムをｌｎＭとなるように加えて溶解し、試薬液を調
製した。

（２）σ−アミラーゼ標準液の調製 ヒト唾液由来ａ−アミラーゼを生理食塩液で希釈して、
０、５００、１０００、ｌ５００、２０００国際単位（
１０／Ｌ）のσ−アミラーゼ標準液を調製した。

（３）検量線の作或 （１）で調製した試薬液２ｌＩ２を試験管にとり、３７
℃で１分間加温したのち、（２）で調製したａ−アミラ
ーゼ標準液（０〜２０００１０／Ｌ）　０．１−を加え
、３７゜Ｃで反応させ、反応開始より２〜５分間までの
３分間の波長４００ｎ−の吸光度変化量を測定し、１分
間当りの吸光度変化量を求めた。その結果を検量線とし
て第１図に示す。第１図から明らかなように、ａ−アミ
ラーゼ濃度と吸光度変化量の間に比例関係が認められた
。

（４）試料液中のａ−アミラーゼ活性の測定試薬液２＋
１２を試験管にとり、３７℃で１分間加温したのち、試
料液Ｑ．ｌｍＩ２を加え、３７℃で反応させ、反応開始
より２〜５分間までの３分間の波長４００ｎｍの吸光度
変化量を測定し、１分間当りの吸光度増加量を求め、こ
の値と（３）で作皮した検量線から、試料中のａ−アミ
ラーゼ活性を求めることができる。

なお、前記（１）で用いた２−クロロー４−ニトロフエ
ニル＝４’，６’−０−ペンジリデンーβ一Ｄ−マルト
ペンタオシドは、文献未載の化合物であって、以下のよ
うにして製造したものである。

２１ロロー４−ニトロフエニル零β一Ｄ−マルトベンタ
オシドを無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し
、これにべ冫ズアルデヒドジメチルアセタールとトシル
酸とを加え、４０℃で４時間かきまぜながら反応させた
のち、これに炭酸水素ナトリウムを添加して中和し、次
いで、この混合液をジクロ口メタンで洗浄後、ＤＭＦと
水を留去させ、得られた残渣をＯＤＳカララムクロマト
グラフイーにより精製し、さらにイングロパノールー水
の混合溶剤から再結晶することにより、２−クロロ−４
一二トロフェニル−４’．６″一〇一ペンジリデンーβ
一Ｄ−マルトベンタオシドを得た。このものの融点は１
９６．０〜２００．０’Ｃ！であった。

実施例２ （１）試薬の調製 ５０−グッドバッ７アー（ＰＩＰＥＳ，　ｐＨ７．０）
に、以下の威分を以下の濃度で溶解することにより、試
薬Ａ及びＢを調製した。

試薬Ａ（本発明の試薬） ２−クロロ−４−ニトロフエニル÷４′．６″−〇一ペ
ンジリデンーβ−Ｄ−マルトペンタオシド　１．５ｓＭ
β−アミラーゼ　　　　　　　　　　　　２００単位７
’ａＱσ−グルコシダーゼ　　　　　　　　　　　４０
単位／ｍ１ｌβ−グルコシダーゼ　　　　　　　　　　
　２単位７’ａＱ塩化ナトリウム　　　　　　　　　　
　　　５０ｍＭ塩化カルシウム　　　　　　　　　　　
　　ｌｍＭ試薬Ｂ（対照の試薬） ２−クロロ−４・ニトロフェニル−４５，６’−０−ペ
ンジリデン・β−Ｄ−マルトベンタオシド　１．５ｍＭ
ａ−グルコシダーゼ　　　　　　　　　　　４０単位／
冒ａβ−グルコシダーゼ　　　　　　　　　　　２単位
／一塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　　５０ｍ
Ｍ塩化カルシウム　　　　　　　　　　　　　ｌｍＭな
お、各試薬の構戊戊分は、市販の酵母由来のａ−グルコ
シダーゼを用いた以外は、実施例１と同様のものを用い
た。

（２）ラグタイムの測定 試料Ａ２ｍ＋２を試験管にとり、３７℃で１分間加ｍ　
シｔ：　１７）　チ、実ｍ例１　（７）（２　’）−Ｃ
”ｌ１４製ＩＪ：．１０００１ｔｌ／Ｌのσ−アミラー
ゼ標準液Ｑ．ｌｍｌ２を加え、３７℃で反応開始直後か
ら３０秒間隔で、波長４００ｎａ＋の吸光度を日立２２
０型分光光度計にて、測定し、３０秒ごとの吸光度変化
量がほぼ一定となるまでに要する時間をラグタイムとし
た。また、試薬Ｂを用いて同様に測定してラグタイムを
求めた。その結果を次表に示す。

この表から、試薬Ａ（本発明の試薬）では、測定対象で
あるα−アミラーゼの作用により生じるマルトオリゴシ
ド誘導体がβ−アミラーゼの作用によって速やかに分解
され、Ｃ−アミラーゼ反応速度と吸光度変化量で表わさ
れる２−クロロ−４一二トロ７エノールの放出速度とが
ほぼ等しくなるために要する時間（ラグタイム）が、試
薬Ｂ（対照の試薬）に比べ著しく短縮していることが分
かる。これは、反応開始から測定終了までの時間が、数
分間に制限されている自動分析装置でも、本発明の試薬
の使用によって、より正確にσ−アミラ−ゼ活性を測定
できることを示す。

実施例３ （１）試薬の調製 実施例２（ｌ）の試薬Ａ％Ｂを使用した。

（２）検量線の作戒 試薬Ａ２ｍｌ２を試験管にとり、３７℃でｌ分間加温し
たのち、実施例ｌの（２）と同様のａ−アミラーゼ標準
液（　０　−２０００１Ｕ／　Ｌ）　０．１ｍｌ２を加
え、３７℃で反応させ、反応開始より２〜５分までの３
分間の吸光度変化量を測定し、１分間当りの吸光度変化
量を求めた。その結果を検量線として第２図に示す。ま
た、試薬Ｂを用い同様に測定した結果を、検量線として
第３図に示す。

第２図から明らかなようにσ−アミラーゼ活性と吸光度
変化量の間に比例関係が認められた。また、第２図、第
３図から明らかなように、実施例２で示した理由により
、試薬Ａ（本発明の試薬）では、反応開始後数分間後の
σ−アミラーゼ濃度に対する１分間当りの吸光度変化量
が、試薬Ｂ（対照の試薬）に比し大きく、ａ−アミラー
ゼ活性淘定の見掛けの感度が高い。

（３）試料液中のａ−アミラーゼ活性の測定試薬液２Ｉ
ＩＱを試験管にとり、３７℃で１分間加温したのち、試
料液０．１０を加え、３７℃で反応させ、反応開始より
２〜５分間までの３分間の吸光度変化量を測定し、１分
間当りの吸光度増力１を求め、この値と（２）で作成し
た第２図の検量線から、試料中のσ−アミラーゼ活性を
求めることができる。

実施例４ （１）試薬の調製 ５０＋ＩＪのグツドバツ７　ｙ　　　（ＰＩＰＥＳ，　
ｐＨ７．０）　Ｇこ、以下の威分を以下の濃度で溶解す
ることＣこより、試薬Ｃ及びＤを調製した。なお、酵素
１ま実施例２と同様のものを用いた。

試薬Ｃ（本発明の試薬） ４−ニトロフエニル均４’　＋６’　−０−　工’！　
リテン−α−Ｄ−マルトヘブタオシド　　　　　　　　
１．５＋ｅＭβ−アミラーゼ　　　　　　　　　　　　
２００単位／冨Ｑσ−グルコシダーゼ　　　　　　　　
　　　４０単位／ｗ．Ｑ塩化ナトリウム ５０ｍＭ 塩化カルシウム ｌｍＭ ａ−Ｄ−マルトヘプタオシド σ−グルコンダーゼ 塩化ナトリウム 塩化カルシウム １　．　５ｍＭ ４０単位／ＩＩ１２ ５０ｍＭ ｌ■Ｍ （２）検量線の作成 試薬Ａ，Ｂの代りに、試薬Ｃ，Ｄを用いた以外は、実施
例３と同様にして検量線を作威した。試薬Ｃの場合の検
量線を第４図に、試薬Ｄの場合の検量線を第５図に示す
。

第４図から明らかなようにａ−アミラーゼ活性と吸光度
変化量の間に比例関係が認められた。また、第４図、第
５図から明らかなように、実施例３と同様に実施例２で
示した理由により、試薬Ｃ（本発明の試薬）では、反応
開始後数分間後のαーアミラーゼ濃度に対するｌ分間当
りの吸光度変化量が、試薬Ｄ（対照の試薬）に比し大き
く、α−アミラーゼ活性測定の見掛けの感度が高い。

（３）試料液中のα−アミラーゼ活性の測定試薬Ａの代
りに試薬Ｃを用い、かつ第２図の検量線の代りに第４図
の検量線を用いること以外は、実施例３の（３）と同様
にして、試料液中のａ−アミラーゼ活性を求めることが
できる。

なお、前記（ｌ）で用いた４−ニトロフエニルー４’，
６’−０−エチリデンーα−Ｄ−マルトヘプタオシドは
以下のようにして調製したものである。

すなワチ、４−ニトロフェニルーａ−Ｄ−マルトヘプタ
オシドとトシル酸とをＤＭＦに溶解したのち、これにア
セトアルデヒドージメチルアセタールを加えて５００（
１！で、９時間反応させた。反応生成物をクロマトグラ
７イーにより精製することにより、４−ニトロフェニル
＝４’，５’−Ｑ　−　エチリデンーａ一Ｄ−マルトヘ
プタオシドを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図及び１４図は、本発明方法におけるａ−
アミラーゼ活性の測定に用いる検量線を示すグラフであ
り、第３図及び第５図は本発明方法に対する対照方法で
の検量線を示すグラフである。 一中唾ｅＢ氷蝕陽猷六一

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　非還元末端を保護基で修飾し、かつ還元末端にα−
   又はβ−グルコシド結合により、光学的に検出可能な物
   質を結合させたマルトオリゴシド誘導体を基質とし、こ
   れと共役酵素とを組み合わせたα−アミラーゼ活性測定
   用試薬において、該共役酵素成分の１つとしてβ−アミ
   ラーゼを用いることを特徴とするα−アミラーゼ活性測
   定用試薬。 ２　α−アミラーゼ含有試料に、非還元末端を保護基で
   修飾し、かつ還元末端にα−又はβ−グルコシド結合に
   より、光学的に検出可能な物質を結合させたマルトオリ
   ゴシド誘導体と共役酵素とを添加して酵素反応を行わせ
   、遊離した光学的に検出可能な物質を定量することによ
   り、α−アミラーゼ活性を測定するに当り、該共役酵素
   成分の１つとしてβ−アミラーゼを用いることを特徴と
   するα−アミラーゼ活性の測定方法