JPH03151400A - 化学修飾されたアレルゲン類およびそれらの調製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、化学的に修飾されたアレルゲン類およびそれ
らのＶＪ造方法に関するものである。更に特定的には、
本発明はアレルゲン性疾患の治療に有効な新規な型の化
学修飾されたアレルゲン類、ならびにそれらの製造方法
に関するものである。

多ぐの人々がアレルギー型の病気に悩まされていること
が既に知られており、最も一般的な症状は、ぜんそく、
枯草熱および結膜炎、じんましんである。このような病
気を起こす機構は、例えば花粉、ハウスダストダニ類、
菌類の胞子等の遍在性アレルゲンに対するＩａＥクラス
の抗体類の過剰産生に存するアレルギー性感作状態によ
ることが多い。ＩＱＥクラスの抗体類は、通常、他のク
ラスの抗体類によって及ぼされるような保護的役割を何
ら及ぼさず、しかしながら更に、それらに対づるアレル
ゲンに反応した場合にそれらは複雑なｍ胞反応を引き起
こし、それらが粘膜の肥満細胞の膜および好１ｎ基性白
血球に結合する１ｍ力を（ｉするのため、前記反応は、
［１１＋管作動性アミン類（例えばヒスタミン）および
アレルギー反応の実際の媒介物であり、またそれに応答
性の伯の化合物のＦｉり出を引き起こり。

アレルギー性の病状を軽減または除くために、長年、特
異的感受性減退療法が行なわれてきた。

これは、アレルギー患者に対して通常皮下的に、該患者
が感受性であるアレルゲンを次第に増加させた投与ｍで
）１田投与することからなり、このにうなアレルゲンは
、あらかじめｈＥにより同定してＪ３かれる。伝統的な
アレルゲン性抽出物は、中性に近いｐ１１値（ｐＨ７，
０−７゜４）および面清と同等の浸透圧を有している。

前記特異的感受性減退両方を介してアレルギー症状を低
減し、または解消するｍ構は、多様であり、それらのう
ち最も良く知られ、また実際に最も重要なものは、以下
のものである：アレルゲンの反復注射は、生物内に“阻
害抗体類″と称されるアレルゲン特異性のＩｏＧクラス
抗体を誘発し、これはアレルゲンと反応し、該アレルゲ
ンが、先に略述した病原性反応を起こずＩＯＥ類と反応
することを防止し得る。

前記特異的感受性減退療法が有効であるためには、注）
１寸べきアレルゲンの全投与量はかなりな垣が必要であ
る。

これは、その有効性のために一般に受は入れられている
が、前記特異的感受性減退療法は、アレルゲンの注射に
続いて起こり得る望ましくない反応によるある種の障害
を示す。事実、注射部位における局所反応（大きい赤斑
、赤化、かゆみ等）、または全身反応（鼻炎またはぜん
そく、およびアナフィラキシ−ショック）が起こり得る
。

このような望ましくない反応を低減し、特異的感受性減
退療法を安全なものとするために、貯蔵型のアレルゲン
抽出物、すなわち緩吸収アレルゲン抽出物が近年実現さ
れており、このアレルゲンの抽出物は、水酸化アルミニ
ウム、チロシンまたはリン酸カルシウムにより沈殿され
るか吸着されて生体への吸収が近く、従って反応性が低
減されでおり、このような型の抽出物によって、患者は
該抽出物の接種により良く耐抗でき、望ましからぬ反応
が減少する。

このような貯蔵型のアレルゲン抽出物は、改善を示すが
、しかしながらある割合の患者は、それらに対してｂ局
所的および全身的な望ましからぬ反応を示し、従ってそ
れらは、最適とは言えずまた問題の決定的解決では１．
【い。このような障害を回避する試みにおいて、それら
のアレルゲン反応を実質的に低減しくすなわら組織肥満
細胞に結合するＩｑＥとの反応性、および病原性反応を
生じる能力の低減）、一方においてそれらの免疫原とし
ての能力を保つくすなわら、ＩＯＧクラスの阻害抗体類
の形成を誘発する能力を保つ）等のアレルゲンの化学修
飾が試みられている。ある患者は、このような修飾され
たアレルゲン類を示すために“アレルゲン類″なる用語
を用いた。

部分的に所望の特徴を有する修飾アレルゲンを生成する
ために提案された方法は、８Ｍ尿素を用いる変性方法で
ある。実際、尿素の８Ｍ溶液の解離作用に対して、Ａｍ
ｂｒｏｓｉａ　ｅｌａｔｉｏｒの花粉（米国に生育する
極めて重要なアレルゲン性植物）の抗原Ｅを＋Ｓｔこと
により、このような抗原はＩＯＥに対する反応性をかな
り失い、しかしながらそれは治療のための注射後の感受
性減退能力を保つことが示された。しかしながら、マウ
スに対して行なわれたこのような実に奨励となる実験に
続いて、ヒト対象における試験は、対立する結果を与え
た。

更には、上述の方法は、８Ｍ尿素等の解離剤の変性作用
に対して特に敏感な２個のポリペプチドサブユニットが
非共有結合的に集まって形成されるＡｍｂｒｏｓｉａ　
ｅｌａｔｉｏｒの抗原Ｅに対してのみ採用可能であると
考えられる。

アレルゲン類の化学修飾を行なうための既に知られてい
る他の方法は、アルデヒド類による処理であり、これら
のうち最も多く使用されるものは、ホルムアルデヒドま
たはグルタルアルデヒドである。アルデヒド官能基と蛋
白質アミン基との間の反応は、例えばＲ，Ｅ、　Ｆｃｅ
ｎｙ　、　Ｇ、　ＢｌａｎｋｅｎｈｏｒｎおよびＩｌ、
　Ｂ、　ｒ、　Ｄｉｘｏｎの＾ｄｖ、　Ｐｒｏｔ、　Ｃ
ｈｃｎ＋、　　２９．１３５−２０３．１９７５に記述
されており、またほとんど全てのアレルゲン類は、化学
的に糖蛋白質分子から成り、蛋白質部分が免疫学的特異
性の特徴を与える関連部分であることに注意しなければ
ならない。

ＬＯｌｉＵＲＩ　ＤｅｒＱｎｎＯおよび八ｍｂｒｏｓｉ
ａのアレルゲンをホルムアルデヒドを用いて処理するこ
とにより、天然アレルゲンに比べて１００−１０．００
０倍アレルゲン活性が低下することが示されている。

該化学修飾のための条件は、Ｍａｒｓｈによって”　ｔ
ｈｅ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ”　ｍ巻、３１７頁、５ｅｌａ
　Ｈ，ｌ、ｉ。

八ｃａｄｃｉｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋに
記述されている。このようにして得られた生成物は、治
療目的でｉｔ　ＤＪ投与された場合に満足な免疫原性を
保っているが、イの反応性が患者毎に大きく異４にり、
従っである患者に最適であった投与ｔｄおよび投与方法
も他の思考に適するとは限らない。

グルタルアルデヒドは、二官能性アルデヒドであるため
、これを用いた反応は、種々の分子間を有する重合体の
混合物の形成を起こす（例えば、Ｒｏｐａｔｔｅｒｓｏ
ｎのＪ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１１０．１４１３．
１９７３参照。これにおいては、＾ｍｂｒｏｓｉａの抗
原Ｅがグルタルアルデヒドを用いた重合に付され、１０
−１００倍アレルゲン活性が低下した生成物が得られて
いる。あるいは、Ｄ、　Ｈ，Ｈｏｒａｎおよび＾、　）
１．　ＷｈｅｅｌｅｒのＩｎｔ、　Ａｒｃｈｓ、　Ａｌ
ｌｅｒｇｙ　ａｎｄＡＤＤｌｉｅｄ　１ＩＩｎＯＩＯＱ
Ｖ　、　５０．６９３．１９７６参照。これにおいては
、同様な方法がＰｈｌｅｕｍｐｒａｔｅｎｓｅのアレル
ゲンに適用されている）。しかしながら、グルタルアル
デヒドを用いた重合化は、２種の障害を示す： １）生物から巨大分子を除去するために用いた方法（２
Ｘ１０　　から２Ｘ１０’ドルトン）が困難であって、
このため毒性が高いものと思われる：２）反応を停止す
るための、グリシン、リジンまたは他のアミノ酸あるい
は少なくとも１個の７ミノ基を有する化合物の最終的な
添加は、グリシンとグルタルアルデヒドの間の合成生成
物を生じ、該生成物は、天然アレルゲンと何ら１３Ｑ連
がなく、治療効果には役に立たない新たなアレルゲン決
定基をもｌｃら寸ものと思われる。

アレルゲン修飾のための他の化学的方法は、英田特ｆ１
７１２８２１６３号の目的であって、これにはＧｒａｍ
ｉｎＱａＱ花粉アレルゲンの無機シアネートを用いた、
またはポリアルデヒドもしくはカルボジイミドを用いた
反応工程が記述されている。この方法の目的は、実質的
に不溶性であるか、部分的に水に可溶性である修飾アレ
ルゲンの調製にある。

アルカリ性シアネート法は、酸性媒体中、特にｐ１１５
において行なわれる。起こる反応は、アレルゲンのアミ
ノ基と、アレルゲン自体のカルボキシル基（シアン酸に
より無水物の形態で活性化されている）との綜合である
（Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　Ｆｎｚｙｍｏｌｏｇｙ２５．５
７９．１９７２）。いずれにせよ、英国特許第１，２８
２．１６３号に開示された方法によれば、アレルゲン物
質は、水または水溶液に不溶性となるまで重合される。

上述した先行技術の方法は、いずれの場合にもアレルゲ
ンの重合誘導体の形成を常に生じ、それらはＩａＥクラ
スの特異的抗体に関してより低い結合価をもって特徴付
けられる。

本発明の目的は、対応する天然アレルゲンに対するＩａ
Ｇクラスの特異的抗体類を誘発する能力を有すると共に
、高度に低減された反応性を有し、更には萌述したいわ
ゆる“７レルゴイド”の特徴である障害を何ら有してい
ない新規な型の化学修飾されたアレルゲンを提供するこ
とにある。

この限りにおいて、発明者等は天然アレルゲン分子に存
在するある化学基を選択に修飾し、これによって該アレ
ルゲン自体の重合を起こさずに細胞受容体に結合される
ＩｏＥ類との親和性を修飾する考えを有している。この
ことは、アレルゲン分子をその蛋白質部分の第一アミノ
基、特に末端アミノ基およびリジン残基のイプシロン−
アミノ基のカルバミル化（またはチオカルバミル化もし
くはグアニジン型の基の形成）に付すことによって得ら
れた。

蛋白質分子のカルバミル化反応は、それ自体当業名に公
知であるが、チロシンの水酸基、システィンのスルフィ
ドリル基、アスパラギン酸およびグルタミン酸のカルボ
キシル のイミダゾールＵ等の蛋白質鎖に存在する他の化学基に
おいても進行し得る（ＨＯｔｈＯｄＳ　ｉｎＥｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ　、　２　５、５７９、１９８２）、生理学
的ｐＨの条件においては、これらのすべての誘導体は不
安定であり、その一方、アルファーおよびイプシＬ１ン
ーアミノ基のカルバミル化反応生成物は、逆に極めて安
定である。

本発明により示唆されるアレルゲンのカルバミルおよび
チオカルバミル誘導体類は、グアニジン型誘導体も加え
て対応する天然抽出物に対するＩｏＧクラスの特異的抗
体類を誘発し得ることが示され、また、それらは以下の
開示からも明確となるように、天然抽出物に比べて顕著
に低い反応性を示した。

従って、本発明の特定の目的は、アレルゲン活性が該対
応する天然アレルゲン物質に比べて低減され、前記天然
アレルゲン物質に対する特異的抗体類を誘発し得るもの
であって、該天然アレルゲンの蛋白質分子の第一アミノ
基類の主要部が、次の構造、 式中、ＸはＯＳＳまたはＮＲ２を表わし、ここでＲ２は
１〜６個の炭素原子を右するアルキル基、フェニルもし
くはＣＮ基であり、およびＲ１は、Ｈ１１〜８個の炭素
原子を有するアルキル基、８個までの炭素原子を有する
アリールアルキル基もしくはフェニル基または複素環を
含むアルキル基を表わす、 を帯するように化学修飾され、かつ重合されておらず、
水性媒体に可溶性であり、ならびにトリプシンの作用に
抵抗性であることを特徴とする化学修飾されたアレルゲ
ン類にある。

修飾された第・−アミノ基の平均百分率は、７５％〜１
００％の間であるべきであり、好ましくは約９０％であ
るべきである。実際、一方において置換の程度が７５％
未満であると、化学修飾されたアレルゲン物質の反応性
が高ずぎ、他方において、化学的処理が激しい条件で行
なわれた場合にのみ、全部の置換を達成することが可能
である。

化学修飾に供せられるアレルゲン抽出物は、異種蛋白質
の混合物からなるため、修飾の程度は平均値にすぎず、
従って７５％未満の値であることは、ある種のアレルゲ
ン蛋白質が高いアレルゲン活性を保つ程度のわずかな修
飾を受けるのみであろうことを意味する。

本発明に基づいて修飾されたＸ＝０またはＳの場合のア
レルゲン類は、アルカリ性雰囲気におＵるアルカリ性シ
アネート（ＫＣＮＯまたはＮａＣＮ０）を用いた処理に
より、または有機性イソシアネート（Ｒ１−ＮＧＯ＞を
用いた処理により、または有機性イソチオシアネート（
Ｒ１ＮＣ８）を用いた処理により調製され得る。シアネ
ートによる処理の場合、非″ａ換カルバミル基により修
飾されたアミノ基が得られ、一方、伯の２種の試薬を用
いることによりそれぞれ置換カルバミル誘導体または置
換ヂオカルバミル誘導体が得られる。ｘ＝ＮＲ２である
本発明の生成物（置換グアニジノ誘導体）は、誘導体を
与え得る適当な式の化合物を処理することにより得るこ
とができる。

該反応は、７〜１１の間、好ましくは９〜９゜６の間の
範囲のｌ）Ｈ値であり、一方、アルカリ性シアネートに
よる処理の場合に、温度は室温〜５０℃の間、好ましく
は３５℃〜４０℃の間の範囲である状態で起こり、全反
応時間は、１２〜３６時間、好ましくは１６〜２４時間
の間で変化する。

ｈ機性イソシアネートまたはイソチオシアネートを用い
る化学修飾の場合には、両者ともにより＾い反応性を有
し、反応は室温またはそれ以下の温度、好ましくはＯ℃
〜５℃の間で行なうことが適当であり、−万全反応時間
は、３０分間〜８時間、好ましくは２〜４時間の間で変
化し得る。

置換グアニジン型構造を生じるために好適な試薬を用い
て行なわれる修飾の場合には、反応時間、温度および存
在し得る有機溶媒は、当業者によって最適な方法で選択
され得る。

本発明による方法に供されるアレルゲン物質は、花粉、
ダニ、ふけ、菌類、昆虫市等のアレルゲンを含む物質か
ら、通常は水媒体である適当な溶媒を用いて周知の方法
により物質自体を抽出することにより１譜られる。得ら
れたアレルゲン抽出物は、主として蛋白質類または糖蛋
白質類からなり、これは通常、遊離の炭水化物および色
素等の不純物と混合されており、該抽出物は、例えば透
析、沈殿またはゲルろ過等によりこれらから精製される
。

使用することができる他の抽出方法は、アレルゲンまた
はその水抽出物をフェノール溶液を用いて処理すること
からなり、該アレルゲンは、次いでフェノール相から回
収される。このような目的を達成するための利用可能な
技術の多（の記述が、Ｊ、　　Ｎ、　　ＮＯ！１１０＋
１の、ｊ、　　八ｌｌｃｒｇｙ１１　３　、１１７、１
９４２に見出せる。

得られたアレルゲン物質は、適当な手段で精製した後に
本発明の目的である方法により処理され得る。本願の知
見の対象である化学修飾は、全抽出物について、手帖製
もしくは純粋アレルゲンについて、混合物もしくは単一
に処理された状態で同等に行なうことができる。

これから誘導した化学ｒ１飾されたアレルゲン物質は、
どのみち非重合物質からなっている。

シアネートを用いた処理の場合、例えばアレルゲン抽出
物に固体ＫＣＮＯ（新たに再結晶されたもの）を、最終
濃度が０．１Ｍ〜１．５Ｍの間、好ましくは０．４〜０
．８Ｍの間になるように加えることができる。該溶液の
０１１は、ナトリウムテトラボレートを固体で加えてア
レルゲン抽出物を該塩について０．１Ｍとし、必要に応
じて１ＭＮａＯＨにより調節することにより所望の値に
保たれる。

有機性イソシアネートまたはイソチオシアネートによる
修飾の場合には、このような化合物は時には水性媒体に
易溶性ではないため、適合する有機溶媒を用いることも
できる。

反応終了少“には、化学修飾されたアレルゲン抽出物を
ゲルろ過にかけて過刺に存在する化学試薬を生じ得る分
解生成物と共に除去し、該抽出物を適当なｎ１溶液によ
って平衡化する。

得られた置換の程麿は、アレルゲン蛋白質１１ＦＩあた
りに存在するアミノ基を、修飾反応の前後でトリニトロ
ベンぜンスルホンＦｌ定の方法（ｌｌａｂａｅｂの八ｎ
ａ１．　　Ｂｉｏｅｈｃｍ、、　１−生、　３２８　、
１９６６に記載のとおり）にＪ：り測定し、あるいは更
に正確には（修飾がアルカリ性シアネートを用いて行な
われた場合には）、ｒｉ飾アレルゲンの蛋白質加水分解
物からのリジンの消滅、およびホモシトルリンの出現を
分析することにより決定される（Ｇ、　Ｒ，５ｔａｒｋ
およびり、　Ｇ、　Ｓｍ１ｔｈのＪ、　　Ｂｏ。

Ｃｈｅ＋＋、　２３８．２１４．１９６３）。

本発明の目的である化学修飾を受けた、例えば卵アルブ
ミン等のアレルゲン性を与えられた偏白質の、ドデシル
１ａ酸ナトリウムの存在下におけるポリアクリルアミド
ゲルによる電気泳動分析（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）は、天然
蛋白質に対応する分子ＩＮ（４５，０００ドルトン）を
有する単一の蛋白質バンドの存在を示し、アレルゲンの
重合が完全に回避されたことが示された。

上記方法により化学修飾されたアレルゲン抽出物は、水
性形態に調製され、非経口的、もしくは舌下的、らしく
は経外的、もしくは経口的経路によって、または適当な
吸入装置による気管支経路によって、あるいは再構成さ
れ、適当な水性形態として投与されるべき凍結乾燥物と
して、あるいはりボゾーム類もしくは他の“薬剤分配系
”中において経口、非経口もしくは吸入経路を通して投
与されるべき凍結乾燥物として、あるいは、例えばラク
トース等の不活性賦形型と組合せられ、適当な吸入装置
により経鼻的もしくは気管支的経路で投与されるべき粉
末として、あるいはラクトース等の不活性賦形型と組合
せられ、かつ適当な方法で腸内分泌物に対して抵抗性を
与えられ得る錠剤に調製された経口役幡のための粉末と
して調製され得る。

本発明により修飾されたアレルゲン抽出物は、別法とし
てＬ−チＬ］シン、水酸化アルミニウムもしくはリン酸
カルシウム等の化合物により、または他の徐放性担体に
吸むされるかもしくは共沈されて、注射部位からの活性
主剤の緩慢な放出がなされる非経口経路により投与され
る。

１″ｆ１記ｒ１ｖＤアレルゲン抽出物の調製は、油性懸
濁物、シロップ、または液剤の形態で、賦形剤または経
口投与に適した味覚を与える化合物を添加して行なうこ
ともできる。

本発明によるｒｉ飾アレルゲン抽出物の特徴的な単吊甲
位の性質は、同抽出物を非経口投与に対してのみならず
、紅の的、経口的、舌下的経路らしくは、活性主剤の粘
膜を通しての適当な吸収を与えるすべてのいかなる投与
経路に対しても、それらの効率を及ぼすために有用であ
る。実際に、高分子ｊｔＨＮ’（Ｐ／４えばホルムアル
デヒド、グルタルアルデヒド、ポリエチレングリコール
等によって重合されたアレルゲン抽出物）は１．Ｆ述し
た構造的解剖学的障壁に著しく妨げられるか、あるいは
横切ることができない。

本発明の目的である方法による修飾アレルゲンの経口投
与を与える治療は、特に効果的である。

実際に、アレルゲン抽出物を構成するアレルゲン蛋白質
は、膵臓分泌物に存在する蛋白質分解酵素により著しく
分解され不活性化されることが知られているが；本発明
の規定に従って修飾されたアレルゲン抽出物は、インビ
トロの実験に示されるように、対照的にトリプシン処理
に対して極めて抵抗性があることが分かった。従って、
それらは多分、重要な末梢リンパ系器官であるベイＶ−
（Ｐａｙｅｒ　）のプラークを通して、最適条件におい
て保護型の好ましい免疫的刺激を与えることが示され得
る。

上述した投与方法の各々によると、本発明の目的である
方法に従ってｒｉ飾された精製アレルゲンおよびアレル
ゲン混合物の両者を用いて、単独および混合物の両者に
おいて特異的感受性減退療法は予測し得る方法に基づく
ことが可能となる。

本発明は、以下の実験的試験と共に示される調製例にお
いて、限定を目的とするものではなく、例示のためにｒ
ｆｌ示されるであろう。

例１ Ｐｏａ　ｐｒａｔｅｎｓｉｓ　、　Ｐｈｌｅｕｍ　ｐｒ
ａｔｃｎｓｅ　、　１ｌｏｌｃｕｓＩａｎａｔｔｌＳの
花粉の混合物からの水性抽出物（５％重帛／体積）を、
凍結乾燥後に蒸留水に約１０〜蛋白質／　ｍ（１（ｔ、
０Ｗｒｙにより測定）で溶解させた。

次いで該溶液を５ｅｐｈａｄｃｘＲＧ　−２５；／Ｊ　
−ｙ　ム（ｐｈａｒｍａｃｉａ　）上でゲルろ過し、低
分子量化合物を除去すると共に例えば２０１１１８リン
酸ナトリウム緩衝液ＤＩ１６．８６等の適当なＭ画法に
平衡化さけた。こうして１すられた溶液に、次いで、ナ
］・リウム・テトラボレート・デカハイドレート（３，
８５ｇ／ｌ　００ｄ＞およびカリウム・シアネート（４
，１５９／１００ｄりを添加した。次いで、これらの塩
を撹拌して溶解させ、１ＭＮ　ａ　Ｏｌ−１を加えてｐ
Ｈ値を９．３に調整した。得られた溶液を、密封フラス
コ中にて４０℃の恒温槽内で２０時間、ゆるやかに撹拌
を続けた。該溶液のＩ）ＩＩ値を、第一の反応時間の間
、１Ｍリン酸の添加により一定に保った。反応終了後に
、得られた溶液を再度５ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−２５
カラム上でゲルろ過し、これによって使用した過剰層の
シアネー〔を除去すると共に、例えば１）８７．２のリ
ン酸緩衝゛食塩水（ＰＢＳ）等の適当なａ衝液に平衡化
した。

次いで、得られた調製物を０．２２ミクロン　メンブレ
ン（Ｈｉｌｌｉｐｏｒｃ　）上で無菌的にろ過し、滅菌
バイアル中に４℃にて貯蔵した。置換の百分率は、トリ
ニトロベンゼンスルホン酸法（ＴＮＢＳ）による測定で
８７％であることが分かった。

アレルゲン活性のインビボ試験 １８−２０ｇの体重の１５匹のＢａ１ｂ／　Ｃ？　ウス
（１群あたり５匹）を、天然抽出物またはシアネートに
より修飾された抽出物として、Ｇｒａｍｉｎｅａｅ混合
物の花粉抽出物１０ｇを含む０．２５１１１１！を１雌
のＡｌ（ＯＨ）３の存在下に腹腔的投与して免疫した。

動物の第３の群は、他の群について記述したプロトコー
ルに従って、０．２５／Ｉｔ１１７）Ｐ８Ｓ＋１Ｈｇの
Ａｌ（ＯＨ）３のみを与えた。２８日後に、第１回の免
疫と同じ物質を用いて追加免疫投与を各動物に施した。

１週間侵、動物を切開し、所属する群毎に血液を集め、
次いでマウス−ラット受動的皮膚過敏性（Ｏｖａｒｙ　
、ｔｎｔ、　ＡｒＣｈＳ。

＾１１ｃｒａｖ　Ａｐｐｌ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、旦、
２９３．１９５２）により特？４的ＩＱＥの存在につい
て試験した。

以下の第１表に示される結果は、ａｒａｍｉｎｅａｃ混
合物の化学修飾抽出物の特異的ＩＱＥ誘発能力が、その
：Ｊｔ　ｌ’Ｗ飾抽飾物出物いて示されるものに比べて
有意に低減される（０．０１未満のｐ）ことを明らかに
示している。

？Ａ１表 マウス−ラット受動的皮膚過敏性（１）ＣＡ）マウスの
感受　　　　　　　　　　　　　　　血清の希釈性を与
えるもの　ｆ／２　１／４　１／８　　ｔ／７６　１／
３２　１／６４　　Ｔ／１２８　１／２５６生狸的溶液 Ｇｒａｍｌｒｌ（！ａｏ　Ｑ 合物の花粉の 天然抽出物 ＧｒａｌｌｌｌｎＯａＯｎ 合物の花粉の 修飾された 抽出物 注：　生理的溶液＋１１Ａ１ｇのＡｌ（ＯＨ）３により
、または１０マイクロ９のＧｒａｍｉｎｅａｅ混合物の
花粉の天然抽出物＋１ｑのＡ１（ＯＨ）３により、また
は１０マイクｏｇのａｒａｍｉｎｅａｅ混合物の花粉の
修飾抽出物＋１１１１ｇのＡｌ（ＯＨ）３により処理さ
れたマウスの血清の、生理的溶液における１００マイク
ロ１の連続希釈物を、Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤｏｗｌＯＶラ
ットに皮肉的に注射した１４８時間後にこれらの動物に
、Ｇｒａｍｉｎｅａｅ混合物の天然抽出物１■およびＥ
ｖａｎ　Ｂｌｕｅ　５ｍｇを含む１ｍの生理的溶液をミ
静脈内注射した。１／２時間後に、該動物を切開し、そ
れらの背の皮膚を裏返して特徴的斑点の存在を評価した
。７Ｍの大きさの斑点を与え得る、血清の最終希釈度が
ＰＣＡ力価として考慮される。

アレルゲン活性のインビトロ試験（ＲＡＳＴ阻害ポリス
チレンビーズを活性化し、Ｇｒａｍｉｎｅａｅ混合物の
花粉天然抽出物を、適当な方法に基づいて固定化したく
西ドイツ特許、ＤＥ３３３８７５９Ｃ１）。

Ｇｒａｌｉｎｅａｅ花粉に対してアレルギー性の患者の
血Ｗ１２０マイクロｌを２０℃にて試験管中で３時間、
ｃｒａｍｔｎｃａｃ混合物の天然抽出物またはそのシア
ネートで修飾された抽出物の連続希釈物３０マイクロｌ
と共に前培養した。

次いで、ＧｒａｍｉｎＯａｅ混合物の抽出物により感受
性を与えたビーズを各試験管に加え、全部の試験２５ 管を室温で一夜培養し、適当な洗浄後、　　　Ｉ抗−１
ａ　Ｅ　（ＳｆｅｒｉｋｉｔｌＬｏｆａｒｍａ　Ａ１１
ｃｒＬＪｃｎｉ、旧ｆａｎ　、　Ｉｔａｌｙ　）の溶液
５０マイクロ１を加え、全部を更に１６時間培養した。

各試料は、３組調製した。

培養の終りにビーズの残留放射能をガン７４数器により
少なくとも１分間の３１数時間をもって測定した。相対
アレルゲン力は、正の血清貯留物のＲＡＳＴ応６の５０
％をもって阻害可能なアレルゲン抽出物の鉛により表わ
されている。

０〜１００％の阻害割合は、Ｌ、　Ｙｍａｎの式％式％ ）： ］ ／［（正対照のｃｐ■）−（負対照のＣ０ＩＩ）　］に
従って計算され、ここにおいて“負”および正”対照は
、それぞれ非特異的放射能（すなわら、各抽出物により
感受性を与えられたビーズの添加前の前培養に対して患
者血清に代えてリン酸緩動液を加えることによって得ら
れたＣｐｌの値）および最大放射能（ずなわち、阻害試
験すべき抽出物の希釈物に代えてリン酸緩衝液を使用し
て得た１ｉｒｊ）を意味する。

アルカリ性媒体中でシアネートにより修飾されたＧｒａ
ａ＋１ｎｅａｅ混合物のアレルゲン抽出物は、その非修
飾抽出物より有意に力が弱いことが分かった（０．０１
未満のｐ）、。

免疫原活性試験 ニューシーラント・ブラック・ラビット（Ｃｈａｒｌｅ
ｓ旧ｖｅｒ　、　Ｃａ１ｃｏ　、　Ｃｏｎｏ）を、Ｇｒ
ａｍｉｎｅａｃ混合物の天然または修飾抽出物３ｊｌｆ
ｆをフロインドアジュバント媒体中に含むエマルジョン
により免疫した。

２１日おきに６回の免疫を行ない、最後の免疫から１０
日後に採血をを行ない、Ｇｒａｍｉｎｅａｅ　Ｑ合物の
天然抽出物により処理されたか、またはＧｒａｍｉｎｃ
ａｃ混合物の修飾抽出物により処理されたラビットから
採取した血清を、ｃｉｒａｍｉｎｅａｅ　ｔｌ１合物の
天然抽出物の適当な希釈物に対して別々に免疫拡散基Ｍ
　（Ｏｃｔｃｈｅｒｌｏｎｙ　、　Ｐｒｏｏｒｃｓｓ　
ｉｎ＾ｌｌ０ｒ（ＩＶ　。

９巻、１−７８頁、にａｌｌａｓ、　Ｐ　、編、にａｒ
ｇｅｒ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９５８　）にて試験に付した。

参照パラメータとして、アガロースゲル中で沈殿帯を誘
発し得る血清の希釈物を考慮すると、試験した２種の試
料は、何ら差異を示さず、従って、アルカリ媒体中でシ
アネートによりｒ１飾されたＧｒａｍｉｎａ’ａｅ混合
物の抽出物は、その免疫原性（天然抽出物に存在する抗
原と交差反応するＩＱＧを誘発する能力）がほとんど変
化していないという事実が確認された。

毒性分析 準慢性毒性 ５ＤｒａＱｔｉＯ−ロｏｗ＋ｃｙ株の２０匹のラット（
１１０匹および雄１０匹）を、起こり得る毒性評価のた
めに、Ｇｒａｍｉｎｅａｅ混合物のシアネート−修飾抽
出物を用いて１２週間、皮下的経路により処理し、ここ
で投与量は臨床的に適切な投与量の１００倍以上であっ
た。

確認のための組織学的レベルにおいてさえも試験された
鼎官（卵巣、牌臓、肝臓、肺、腎臓、副腎、心臓、胸腺
、脳、リンパ節）には、何らの関連する病的事実は観察
されず、化学修飾が、毒性学的性質を示す誘導生成物を
生するような変化を招かないことが確認された。

ヒトにおける皮膚試験 Ｇｒａｍｉｎｅａｅ混合物の天然抽出物またはアルカリ
性媒体中でシアネートにより修飾された抽出物の溶液を
、適当な形態で希釈し、次いでＧｒａｍｉｎｅａｅ花粉
に対してアレルギー性の患者の前腕の手掌側に皮肉的に
投与した。

この実験の結果は、第２表中に示され、それらは、接種
後１５分に行なった紅斑の直径の測定を丞している。希
釈溶液を負対照（Ｃｏｃａ＋　０　、０３％ヒトアルブ
ミン）として使用した。

第２表 観察されるように、Ｇｒａｍｉｎｃａｃ混合物の修飾抽
出物の反応性は、その非修飾抽出物より有意に低いくす
べての８１度について０．０１未満のｐ〉。

例２ あらかじめエチルエーテルにより脂質を除去したＰａｒ
ｉｅｔａｒｉａ　ｊｕｄａｉｃａの花粉の水性抽出物を
、凍結乾燥後、蒸留水により潤度１０１＋１！Ｊ／Ｉｄ
（マイク口−ケルダール）として再度水添した。ＤＩ＋
６．８６の２０１１１８リン酸緩衝液で平衡化された５
ｅｐｈａｄｅｘＩｌＧ　−２５カラム上のゲルろ過後、
該蛋白質溶液を、ナトリウム・テトラボレート・デカハ
イドレート（３，８５ｇ／１００−）およびカリウム・
シアネート＜４．１５ｇ／１００ｄ）の添加により修飾
に付した。例１に示したように、ｐ＋＋値の調節後、密
封フラスコ中の該蛋白質溶液を恒温槽内で２０時間、ゆ
るやかな撹拌状態に保った。反応終了時に、得られた溶
液を、過剰なｒｉ飾試薬から精製アレルゲン抽出物を分
離するために再度５ｅｐｈａｄｅｘＲＧ　−２５カラム
上でのゲルろ過にかけた。選択したクロマトグラフィの
条件（ゲル体積／試料体積が５より大）は、前記目的の
ために適当であり、甲純なｃｏＣ１２試験、または例え
ばＩｔ４．Ｒ，ＦｅａｒｏｎのＢ１０Ｃｈ０１＋１．　
Ｊ、　　１７．８４．１９２３に報告されている他の試
験により明確に証明されるように、過剰のシアネートは
、蛋白質分画から全く離れて溶出される。

次いで、該調製物を０．２２ミクロンメンブレン（Ｈｉ
ｌｌｉｐｏｒｅ　）上で無菌的にろ過し、滅菌バイアル
中に４℃にて貯蔵した。Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ　ｊｕｄ
ａｉｃａ花粉の抽出物に存在する色素が、ＴＮＢＳ試験
を河しく妨害するため、置換百分率は、ホモシ（・ルソ
ンにも（づいても１０し、８５％であることが分かった
。

アレル゛ン　　のインビボ試験 体重１８−２０　ｇのＢａ１ｂ／ｃ株の１５匹のマウス
（１群あたり５匹）を、１ＲｇのΔｊ！（ＯＨ）３（Ｄ
？７右下テ、１０マイクロ９のＰａｒｉｃｔａｒｉａ花
粉の天然抽出物またはそのシアネートにより修飾された
抽出物を含む０．２５〆を用いて、腹腔内投与により免
疫した。第３群の動物は、他の２つの群について既に記
述したプロトコールに従って、０．２５ＩｄのＰ　Ｂ　
Ｓ　＋　１■のＡ１（ＯＨ）３のみを投与された。

２８日後に、第１回の免疫と同じ物質を用いて追加免疫
投与を各動物に施した。

１週問後に動物を切開し、それらの血液を属する８Ｔ毎
に東め、貯蔵し、各々の血清についてマウスーラット受
動的皮膚過敏性により特異的１ｇＥの存在を試験した。

以下の第３表に示される結果は、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ
のｒｉ飾抽出物の特異的１０Ｅ誘発能力が、Ｐａｒｉｅ
ｔａｒｉａの非修飾抽出物により示されるものに比べて
有意に低減されていることが示されている（０．０１未
満のｐ）。

第３表 マウス−ラット受動的皮膚過敏性（ＰＣＡ）マウスの感
受　　　　　　　血清の希釈　　　　　　　　　　力価
８性を与えるも（７）　　１／１　１１５　１／２５　
１／１２５　１／６２５　　　　　ＰＣ＾希釈剤 Ｐａｒｉｅｔａｒｉａの 花粉の天然 抽出物 ２５ ｐａｒｉｅｔａｒｉａの 花粉の修飾 抽ｌｊ物 注：　生理的溶液ト１ｆｎｇの△１（ＯＨ）３により、
または１０マイクロ９のＰａｒｉｅｔａｒｉａの花粉の
天然抽出物、または１０マイクロ９のＰａｒｉｅｔａｒ
ｉａの花粉の修飾抽出物により処理されたマウス血清の
ｉｌ：埋的溶液における１００マイク０１の連続希釈物
を、５ｐｒａＱＩＪＯ−ＤＯＷＩＯＶ株のラットに皮肉
的にｔｌｌｌ）１シた１４８時間後にこれらの初物に、
Ｐａｒｉｅｔａｒｉａの花粉の天然抽出物１ηおよび［
ＶａｎＢｌｕｅ　５■を含む１１ｄの生理的溶液を静脈
注射した。１／２時間後に、該動物を切開し、それらの
背の皮膚を裏返して特徴的斑点の存在を評価した。

７　ｍｍの大きさの斑点を与え得る血清の最終希釈度が
ＰＣＡ力価として考慮される。

アレルゲン活性のインビｉ−ロ試験 ボリスチレンビーズをグルウルアルデヒドにより活性化
し、Ｐａｒｉｅ　ｔａｒｉａ　ｊｕｄｉｃａの天然抽出
物を適当な方法（西ドイツ特許、ＤＥ３３３８７５９Ｃ
１＞により固定化した。Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ　ｊｕｄ
ｉｃａの花粉に対してアレルギー性の患者の血清２０マ
イクロｌを、２０℃にて試験管内で３時間、Ｐａｒｉｅ
ｔａｒｉａの天然抽出物またはそのアルカリ性媒体中で
シアネートにより修飾された抽出物の連続希釈物３０マ
イクロ１と共に前培養した。次いで例１に記載したよう
に感受性を与えたビーズを各試験管に加え、全部の試料
を室温にて一夜培養し２５ 適当な洗浄後、　　■−抗−１０Ｅの溶液５０マイクロ
ｌを加え、２０℃における培養を更に１６時間行なった
。

各試料についてビーズの残留放射能をガンマ計数器によ
り、少なくとも１分間の３４数時間をもって測定した。

相対アレルゲン力は、正の血清貯留物のＲＡＳＴ応答の
５０％をもって阻害可能なアレルゲン抽出物の量により
表わされている。

０〜１００％の阻害割合は、［、Ｙｍａｎ式％式％ ）： ［（正対照のｃ＋ｏｉ　）　−（試料のｃｐｍ）］ｘ１
００／［（正対照のｃｐｍ　）　−（負対照のＣ１）Ｉ
Ｉ　）　］に従って計算され、ここにおいて“負”およ
び“正″対照は、それぞれ非特異的放射能（各抽出物に
より感受性を与えられたビーズの添加前の前培養に対し
て患者血清に代えてリン酸緩衝液を加えることによって
得られた）ａ３よび最大敢）１能（阻害試験すべき抽出
物の希釈物に代えてＲΔＳＴ緩衝液を使用して１υた）
を意味する。

Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ花粉のｒｉ飾抽出物ｔま、天然形
態である場合の同抽出物より有意に力が弱いことが分か
った（０．０１未満のｐ）。

免疫１３λ性試験 ニューシーラント・ブラック・ラビット（Ｃｈａｒｌｅ
ｓ　Ｒｉｖｅｒ　、Ｃａ１ｃｏ　、　Ｃｏｍｏ）を、Ｐ
ａｒｉｃｔａｒｉａ花粉抽出物３句を含む１マルジ］ン
を用いて免疫し、前記抽出物はフロインドアジュバント
媒体中の天然またはシアネー１〜による修ｆｓ物であっ
た。

３週問おきに６回の免疫を行４ｒい、最後の免疫から１
０日後に採血を行ない、ＰａｒｉＱｔａｒｉａ花粉の天
然抽出物により処理されたか、またはシアネートにより
修飾された同抽出物により処理されたうビットから採取
した血清を、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ花粉の天然抽出物の
適当な希釈物に対して別々に０ｃｔｃｈｅｒｌｏｎｙの
方法に従って免疫拡散試験に供した。

参照パラメータとしてアガロースゲル中に沈殿帯を誘発
し得る血清の希釈物を考慮すると、試験された２種の試
料の間に何らの有意な差異が観察されず、従って、本発
明の目的である方法に従ってシアネートにより修飾され
たＰａｒｉｅｔａｒｉａ花粉の抽出物の免疫原性は、は
とんど変化されずに保たれているという事実が確認され
た。

毒性分析：準慢性方性 ｓｐｒａｇｕｅ−ｏｏｗｔｅｙ株の２０匹のラット（１
１１０匹および雄１０匹）を、シアネートにより修飾さ
れたＰａｒｉｅｔａｒｉａ花粉抽出物の２５０マイクロ
クに対応する投与間（臨床的使用のために設定される投
与間の１００倍以上の投与量に相当する）をもって１２
週間、皮下的経路により処理した。

処理の終りに各動物を切開し、その器官を起こり得る毒
性的損傷の有無を評価するために検査した。

考慮した器官（肝臓、紬、狩臓、心臓、腎臓、副腎、脳
、胸腺、卵巣、リンパ節）において、関連する何らの巨
視的および／または組織学的な病的所見も観察されず、
Ｐａｒｉｃｔａｒｉａ由来の花粉抽出物の化学修飾が、
誘導生成物に毒性効果をもたらすような変化を誘発しな
い事実が確認された。

ヒトにおける皮膚試験 天然型または例２に従ってシアネートにより修飾された
Ｐａｒｉｃｔａｒｉａ由来の花粉抽出物を、適当に希釈
し、次いでＰａｒｉｃｔａｒｉａ花粉に対してアレルギ
ー性の患者の前腕の手掌側に皮肉的に投与した。

結果は、第４表中に示され、それらは接種後１５分に行
なった紅斑の直径の測定を示している。

希釈溶液（ｃｏｃａ＋　０　、０３％ヒトアルブミン）
を負対照として使用した。

第４表 患者 香り 皮膚試験 天然抽出物　　修飾抽出物 濃度　　　　　濃度 （μ９／！Ｉ１１＞　　　（μｇ／ｄ）希釈 溶液 第４表を観察して導かれるように、アルカリ性媒体中で
シアネートにより修飾されたＰａｒｉＯｔａｒｉａ花粉
抽出物のアレルゲン反応性は、修飾されて０ない同抽出
物に比べて有意に低減されている＜０．０１未満のｐ）
。

例３ 皮癖婢亜目のダニ、Ｄｃｒｍａｔｏｐｈａｑｏｉｄｅｓ
ｌ）ｔ（！ｒＯｎＶｓｓｉｎｕｓ　（Ｄ　Ｐ　）の水性
抽出物（重量７休積′Ｃ−５％）を凍結乾燥により濃縮
し、次いで最小体積の２０１１８リン酸ナトリウム″ｍ
画液ｐＨ５，８６ニ取す、ｆｉｉｌ　Ｕ　’ｔｒｉ　Ｖ
ｉ　Ｗｉ　Ｔ：溶出すル５ｃｐｈａｄｃｘＲＧ　−２５
によるゲルろ過を行ない、排除されたピークを集めた。

１．９２９の犬トリウム・テ１−ラボレート・デカハイ
ドレートおよび２．０５９のカリウムシアネート（５０
％エタノールから５０℃以下の温度で新たに再結晶され
た）を、５０＃！ｉ！の溶液にした。添加した塩を溶解
させ、かつ１ＭＮａＯＨによりｐＨを９．３にＡ節した
後、該ゲルろ過信出物を恒温槽内で４０℃に２２時間保
った。

最初の１時間に１Ｍリン酸の添加によりｐＨを調節した
。こうして得られた調製物を、過剰の試薬を除くために
再度ゲルろ過にかｋＪ、０．２２２ミフロンＨｉｌｌｉ
ｐｏｒｅメンブレン無菌化し、滅菌バイアル中に分別し
て４℃にて貯蔵した。ＴＮＢＳ試験により評価したアミ
ノ基の置換百分率は、８４％であることが分かった。

アレルゲン活性のインビボ試験 体重１Ｂ−２０ｇのＢａ１ｂ／Ｃ株（７）１５匹（７）
マウス（１群あたり５匹）を、アジュバントとしての１
ＭｇのＡＩ　（ＯＨ）３の存在下で、１０マイクロクの
ＤＰの天然抽出物またはそのシアネートにより修飾され
た抽出物を含む０．２５ｄの生理的溶液を用いて、腹腔
的投与により免疫した。第３群の動物は、上述のプロト
コールに従って、０．２５ｍ！の生理的溶液＋１ｍｇの
Ａｌ（ＯＨ）３のみを投与された。

２８日後に、第１回目の免疫に用いたものと同じ物質を
用いて追加免疫を各動物に施した。

１週間後に動物を切開し、それらの血液試料を属する群
毎の貯留中に集め、各血清を受動的皮膚過敏性により特
異的Ｉ　Ｏ’Ｅの存在に関して試験した。

以下の第５表に示される結果は、アルカリ性媒体中でシ
アネートにより修飾されたＤＰ抽出物の特異的１ｏＥ誘
発能力が、非修飾ＤＰ抽出物により示されるものに比べ
て有意に低減されていることを示している（０゜ ０１未満の Ｏ） 酊 第５表 マウス−ラット受動的皮膚過敏性（Ｐ、Ｃ，Ａ、）血清
の希釈 １／１０　１／２０　１／４０　１／８０　１／１６０
１／３２０１／６４０力価 Ｐ　Ｃ１八。

希釈剤 天然ＤＰ 抽出物 ２０ 修飾１）Ｐ 抽出物　　十 ０ 注：　生理的溶液＋１１１１９の△ｊ！（０１−１）３
により、または１０マイクロクの天然ＤＰ抽出物＋１η
のＡｌ（ＯＨ）３もしくはｒｉ飾ＤＰ抽出物−ト１■の
Ａｌ２（０１−１）３により処理されたマウス血清の生
理的溶液にＪ３ける１００マイクロ１の連続希釈物を、
５ｐｒａ（］ｌＩ（！−ＤＯＷｌｅ■ラットに皮肉的に
注射した２４８時間後にこれらの動物に、天然ＤＰ抽出
物１ｎｇおよびＥＶａｎＳ　Ｂｌｕｅ　　５Ｒｇを含む
１ｄの生卵的溶液を静脈注射した。１／２時間後に該動
物を切開し、それらの背の皮膚を裏返して特徴的斑点の
存在を評価した。７ｍの大きさの斑点を与え得る血清の
最終希釈度がＰＣＡ力価として考慮される。

アレルゲン活性のインビトロ試験 ポリスチレンど−ズを活性化し、該天然ＤＰ抽出物をこ
れに適当な方法（西ドイツ特許、ＤＥ３３３８７５９Ｃ
１）により固定化した。

該ＤＰ抽出物に対してアレルギー性の患者の血清２０マ
イクロｌを、２０℃にて３時間、試験管内で、該天然Ｄ
Ｐ抽出物またはそのアルカリ性媒体中でシアネートによ
りｖｉ＠された抽出物の連続希釈物３０マイクロ１と共
に前培養した。

次いで、該ＯＰ抽出物により感受性を与えたビーズ（前
述のようにして）を各試験管に加えた。

全部の試料を室温にて一夜培養し、適当な洗浄後。

２５ ５０マイクロｌのヒト　　Ｉ−抗ＩＱＥを加え、全部の
試料を更に１６時間培養した。

各試料は３組毎調製した。培養の終了時にビーズの残留
放射能を、ガンマＨ１数器により１分間のＪＩ数時間を
６って測定した。試験した２種の抽出物の相対的生物学
的能力は、正の対照試料の応答を５０％阻害可能な抽出
物の早によって表され、以下のＹｍａｎの式： しく正対照のｃａｍ）　−（試料のＣＤＩＩＩ　）　Ｊ
　Ｘ　１００／［（正対照のｃｐｍ　）　−Ｎ１５Ｊ照
のＣＩ）ｍ　）　１に従って（；１られ、ここにＪ）い
て゛０パ対照および゛正″対照は、それぞれ非特責的放
射能（各抽出物が結合されたビーズの添加前の前培養段
階にＪ３いて患者の血清に代えてリン酸緩衝液を加える
ことによって得られた）および最大敢１１１）１能（阻
害試験すべき抽出物に代えて緩仲夏液を用いることによ
り得られた）を意味する。

アルカリ媒体中でシアネー１〜ににり修飾されたアレル
ゲン性ＯＰ抽出物は、同非修飾抽出物に比べて有意に力
が弱いことが分かった（０．０１未満のｐ）。

例４ ０．０５ｍｅのメチルイソシアネートを、０．２Ｍイミ
ダゾールを含むｐｌ＋９．３の０．１Ｍナトリウムテト
ラボレート緩衝液中の卵アルブミン溶液（１０１１＋ｆ
ｆ／ｄ）　５ｍｅに加え、ここで該溶液は水浴により０
−４℃に冷却されており、添加は、撹拌しつつ、０．５
’　　　１０’および１５′に行なった。６０分後、該
蛋白質溶液をｐＨ６，８６の２０ｍＭリン酸緩衝液によ
り平衡化された５（３ｐｈａｄＱＸ”Ｇ−２５カラムを
通してゲルろ過にかけ、過剰のメチルイソシアネートお
よび分解生成物を除去した。

ＴＮＢＳ試験により測定した置換程度は、８９％であっ
た。ＲＡＳＴ−阻害試験において、このように修飾され
た卵アルブミンは、非修飾卵アルブミンより有意に力が
弱いことが分かった。

例５ アセトニトリル中のメチルイソチオシアネートの１２％
（重醋／体積）溶液０．０５ｍ！を、撹拌しつつＯ′、
２０′、４０′および８０′に、水浴によりＯ−４℃に
冷却された０、２Ｍイミダゾール溶液を含むｐＨ９，３
の０．１Ｍナトリウムテトラボレート緩衝液中の卵アル
ブミン溶液（１０１！４Ｆ／ｄ）５ｍに添加した。３時
間後に該蛋白質溶液を、前述の例と同様にゲルろ過にか
けた。

ＴＮＢＳ試験により測定した置換程度は、８１％であっ
た。

ＲΔＳ　Ｔ　−ｔ！ｌｌ害試験にＩ３いて、修飾卵アル
ブミンは、非昨飾卵アルブミンより有意に力が弱いこと
が分かった。

本発明を、その好ましい実施態様について特定的に参照
して開示したが、そのｒ１飾および／または変更は、本
発明の精神および範囲を岨れることなく当業者により導
入され１ｒするものと理解されるべきである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）アレルゲン活性が該対応する天然アレルゲン物質
   に比べて低減され、前記天然アレルゲン物質に対する特
   異的抗体類を誘発し得るものであつて、該天然アレルゲ
   ンの蛋白質分子の第一アミノ基類の主要部が、次の構造
   、 ▲数式、化学式、表等があります▼（１） 式中、ＸはＯ、ＳまたはＮＲ＿２を表わし、ここでＲ＿
   ２は１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、フェニル
   もしくはＣＮ基であり、およびＲ＿１は、Ｈ、１〜８個
   の炭素原子を有するアルキル基、８個までの炭素原子を
   有するアリールアルキル基もしくはフェニル基または複
   素環を含むアルキル基を表わす、 を帯するように化学修飾され、かつ重合されておらず、
   水性媒体に可溶性であり、ならびにトリブシンの作用に
   抵抗性であることを特徴とする化学修飾されたアレルゲ
   ン類。 （２）該修飾された第一アミン基の平均百分率が、７５
   ％〜１００％の範囲である請求項１に記載のアレルゲン
   類。 （３）前記百分率が約９０％である請求項２に記載のア
   レルゲン類。 （４）アレルゲン活性が該対応する天然アレルゲン物質
   に比べて低減され、前記天然アレルゲン物質に対する特
   異的抗体類を誘発し得るものであつて、該対応する天然
   アレルゲン物質を、アルカリ性媒体中でアルカリ性シア
   ネート、有機性イソシアネートまたは有機性イソチオシ
   アネートにより処理することによって得ることができる
   ことを特徴とする化学修飾されたアレルゲン類。 （５）前記処理が７〜１１間のｐＨ、室温〜５０℃の間
   の温度、および１２〜３６時間の範囲の全期間において
   アルカリ性シアネートを用いて行なわれる請求項４に記
   載のアレルゲン類。 （６）前記処理の問のｐＨが、９〜９．６の間である請
   求項５に記載のアレルゲン類。 （７）前記処理の間の温度が、３５℃〜４０℃の間であ
   る請求項５に記載のアレルゲン類。 （８）前記処理の全時間が、１６〜２４時間の間である
   請求項５に記載のアレルゲン類。（９）前記処理が、７
   〜１１間のｐＨ、室温と同等またはそれ以下の温度、お
   よび３０分間〜３時間の間の全時間において有機性イソ
   シアネートまたは有機性イソチオシアネートを用いて行
   なわれる請求項４に記載のアレルゲン類。 （１０）前記処理の間のｐＨが、９〜９．６の間である
   請求項９に記載のアレルゲン類。（１１）前記処理の間
   の温度が、０℃〜５℃の間である請求項９に記載のアレ
   ルゲン類。（１２）前記処理の全時間が、２〜４時間の
   間である請求項９に記載のアレルゲン類。 （１３）対応する天然アレルゲン物質を、塩基性媒体中
   でアルカリ性シアネート、または有機性イソシアネート
   、または有機性イソチオシアネートを用いて処理するこ
   とを含んでなる、先行する請求項に記載の化学修飾され
   たアレルゲン類の製造方法。 （１４）前記処理が、９〜９．６の間のｐＨで行なわれ
   る請求項１３に記載の方法。 （１５）前記処理が、室温〜５０℃の間の温度、および
   １２〜３６時間の間の時間においてアルカリ性シアネー
   トを用いて行なわれる請求項１３または１４に記載の方
   法。 （１６）前記温度が、３５℃〜４０℃の間である請求項
   １５に記載の方法。 （１１）前記処理が、室温またはそれ以下の温度、およ
   び３０分間〜８時間の間の全時間において、有機性イソ
   シアネート、または有機性イソチオシアネートを用いて
   行なわれる請求項１３または１４に記載の方法。 （１８）前記温度が、０℃〜５℃の間である請求項１７
   に記載の方法。 （１９）請求項１〜１２に記載の化学修飾アレルゲン類
   を、生理学的に許容される担体または賦形剤と共に含有
   する医薬調製物。 （２０）実質的に上述された請求項１〜１９に記載の化
   学修飾されたアレルゲン類およびそれらの調製方法。