JPH03130231A - 医薬製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アミノ酸配列の点で異なる２つのプラスミノ
ーゲンアクチベーターの組合せからなる医薬製剤および
血液凝固疾患の予防または治療に対するこれら組成物の
使用に関する。

〔従来技術〕 凝血は発達しな世界におけるヒトの病気および死亡の主
な原因の一つである。血液凝固の網目は酵素トロンビン
の作用により可溶性前駆体フィブリノーゲンから形成さ
れるフィブリンからなる。

酵素および他の物質の序列は、血液の損失を防止するこ
とが必要な時および場所においてのみ凝血が正常に作ら
れることを確保する。

哺乳動物血漿は血液凝固物を溶解しうる酵素システム、
すなわち線維素溶解システムを含む。線維素溶解システ
ムの一成分はプラスミノーゲンアクチベーターと名付け
られた一群の酵素であり、これはプラスミノーゲン（プ
ラスミンの不活性プロ酵素形）をタンパク質分解酵素プ
ラスミンへ転化する０次いでプラスミンが凝血の網目状
フィブリンを分解して可溶性生成物を形成する。身体の
トロンビン溶解能が静脈内血栓を除去するのに不十分な
場合、たとえば血栓塞栓症または術後合併症にかかった
患者において体外的にトロンビン溶解剤を投与すること
が必要不可欠である。

２つの型のプラスミノーゲンアクチベーター（以後、“
ＰＡｓ”と称する）はヒトの体液または細胞から単離さ
れうる：ウロキナーゼまたはウロキナーゼ型プラスミノ
ーゲンアクチベーター（以後、“ｕＰＡ”と称する）、
たとえば尿素および腎細胞中に表われるセリンプロテア
ーゼ、および組織型プラスミノーゲンアクチベーター（
以後、”ｔＰＡ“と称する）であって、内皮細胞により
作られそして多数の内分泌組織中に見出されるものであ
る。

ｔＰＡとｕＰＡの両方とも２つの分子形で存在する。

−本Ｍ（ｓｃ）またはプロ酵素形は血液凝固物の一成分
たとえばフィブリンと特異的に結合し、次いでプラスミ
ンの作用により成熟二本１１（ｔｃ）形へ分裂する。処
理されたｔｃＰ＾において、非触媒性アミノ基末端ＡＭ
はＳ−８橋を介して触媒性カルボキシル基末端Ｂ鎖に結
合する。

最終的にプラスミノーゲン分子において同じペプチド結
合を開裂するとはいえ、ｔＰＡ、　ｓｃｕＰＡおよびｔ
ｃｕＰＡは特異的性質、すなわちこの反応の速度および
特異性に大きく影響する性質を示す、免疫学的に非類似
であり異なった活性化機構を有するとはいえ、ｔＰＡお
よびｓｃｕＰＡの両方とも高いフィブリン親和性を示し
、したがって主にフィブリン結合プラスミノーゲンを活
性化する。遊離血漿プラスミノーゲンはｔＰＡおよびｓ
ｃｕＰＡによりわずかに影響されるだけである。他方、
ｔｅｕＰＡは凝血特異性の欠除のために、フィブリン結
合および血漿プラスミノーゲンの両方を同程度に活性化
し、その結果線維素溶解システムの全身体活性化が生じ
る。しかしながらｔｃｕＰＡの触媒速度率はｔＰＡのも
のより非常に高い。

最近、多数のハイブリッドＰＡｓが遺伝子工学技術によ
り構成された。これらのハイブリッドにおいて、ｔｐ八
へ子の一部およびｕＰＡ分子の一部をコードする配列は
組換えられて一つのキメラ分子となった。

簡単なハイブリッドは１つのＰ＾の非触媒ＡＭが他のＰ
＾の触媒Ｂ鎖と結合してなるものである（たとえば、ヨ
ーロッパ特許出願筒１５５３８７号および同第２７７３
１３号）、より複雑なハイブリッドは、ｔＰＡのＡ鎖（
“フィンガー′°、“増殖因子パおよび２つの゛クリン
グル”領域を含む）またはｕＰＡのＡ鎖（“増殖°°お
よび１つの“クリングル°′領域を含む）の別々の領域
をコードするＤＮＡ配列をｔＰＡまたはｕＰＡのＢ鎖を
コードする配列で組換えることにより構築された（たと
えば、ヨーロッパ特許出願筒２３１８８３号および同第
２７７３１３号、またはＰＣＴ出願Ｎ１８８１５８２２
号）、ｔＰＡおよびｕＰＡのＡ！ｉ複数クリングル構造
における“ポリクリングル″Ｐ＾結合はヨーロッパ特許
出願筒２１３７９４号に記載されている。

ｔＰＡ、ｕＰＡ（特に、その高フィブリン特異性を有す
るｓｃｕＰＡ）およびハイブリ・ンドＰＡｓの幾つかの
治療価値は血液凝固疾患たとえば血栓の治療に非常に重
要である。しかしながら、しばしば血栓溶解作用はそれ
ほど迅速ではなくその結果心筋梗塞の場合心拍停止を起
こすかまたは開いた血管の非常に迅速な再閉塞が不完全
となる。

ヨーロッパ特許出願筒２２３１９２号に記載されている
ようなｔＰＡとｓｃｕＰＡまたはｔＰＡと　ｔｃｕＰＡ
の同時投与は２つの成分の相乗効果、すなわちより高い
インビボ線維素溶解活性を得ることになる。

ｔＰＡとｓｃｕＰＡの間、ならびにｔＰ八とｔｃｕＰＡ
の間の重要な共働作業はまたコーレン（Ｃｏｌｌｅｎ）
とその協力者達により、血栓溶解の定量的動物モデル系
（＋２％Ｊ−標識化フイブリン凝血したウサギ頚静脈；
たとえばコーレンら（Ｉ９８６）　Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉ
ｏｎ　７４゜８３８−８４２　：コーレンら（Ｉ９８７
）Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　ａｎｄＨａｅｍｏｓｔａｓｉ
ｓ　５８．９４３−９４６）においておよび急性心筋梗
塞にかかった患者〔コーレンおよびファンデ　ヴエルフ
Ｖａｎ　ｄｅ　Ｗｅ＋（（Ｉ９８７）＾ｔａｅｒ、　Ｊ
、　ｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ　６０．４３１−４３４
　；コーレン（Ｉ９８Ｂ）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　７
７、７３１−７３５〕においてもまたインビボで示され
る。

インビトロデータは他の研究者によっても提出されてお
り（ダレウィッチおよびパンネルＧｕｒｅｕ＋１ｃｈａ
ｎｄ　Ｐａｎｎｅｌｌ　（Ｉ９８６）　Ｔｈｒｏｍｂｏ
ｓｉｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　４４゜２１７−２２８　、
パンネルら（Ｉ９８８）　Ｊ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓ
ｔ。

８１、８５３−８５９）　、これは少量のｔＰＡがｓｃ
ｕＰＡの特徴である遅滞期を弱めることによりｓｃｕＰ
Ａによる凝血溶解を増強し溶解の迅速期へより早い変化
を起こさせることを示している。

プラスミノーゲン活性化の異なった機構のなめに、ｔＰ
Ａと５ｃｕＰ八間の作用の強力な相乗的または相補的態
様は、これらの高価な薬剤の必要とされる量を減少させ
、ただし毒性副作用（たとえばアレルギー反応、アナフ
ィラキシ−ショック、頭蓋内出血または発熱作用）は追
加されず、全身的線維素溶解活性が排除されつるので重
要な臨床的効果を有するものである。投与されるＰＡｓ
の全濃度の低下が前掲の参考文献に記載されたものと等
価の血栓溶解性を維持しながら達成されるとはいえ、施
用量特にｕＰＡについての施用量は、まずい副作用たと
えば出血合併症の可能性を確実に排除するにはまだ高過
ぎる。

ここにおいて通常の血栓溶解治療で生ずる副作用の問題
を克服する臨床的必要性が明らかにある。

比較的低投与量で有効でありしたがって可能性のある副
作用を最小限としならびに治療上の出費を抑える優れた
線維素溶解剤が要求される。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明の目的は、血液凝固疾患たとえば血栓症の治療な
らびに予防に対し優れた線維素溶解剤を提供するもので
ある。この目的はアミノ酸配列が異なる２つのプラスミ
ノーゲンアクチベーターの組合せからなる新規医薬製剤
を準備することにより達成されうる。驚くべきことに前
記２つのプラスミノーゲンアクチベーターの組合せ投与
が低投与量でさえ線維素溶解活性のかなりの増強を導び
きそして前記２つのプラスミノーゲンアクチベーターが
１つのＰ＾が他のＰ＾の活性を強化する（作用の相補的
態様）ように−緒に作用することが見出された。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は、成分ＡとしてｔＰＡ　Ｂ鎖からなるプラスミ
ノーゲンアクチベーターと成分ＢとしてｕＰＡＢ鎖から
なる一重鎖プラスミノーゲンアクチベーターとを含み、
成分Ａは成分Ｂが５ｃｕＰ八である場合ｔｐ八とはなり
得ない組合せ医薬製剤に関する。

さらに詳しくは、本発明は、成分Ａとして次式８式％） （式中、Ｘ、は直接結合またはヒトｔＰＡの全部もしく
は別々のＡ鎖領域および／もしくはヒトｕＰΔの全部も
しくは別々のＡＭ鎖領域らなるアミノ酸配列であり、Ｌ
ｌは直接結合またはＸｌをＹｌへ結合するアミノ酸配列
であり、Ｙ、はヒトｔＰＡの触媒領域である。）で表わ
されるプラスミノーゲンアクチベーターど、成分Ｂとし
て次式；％式％（） （式中、Ｘ２は直接結合またはヒトｔＰＡの全部もしく
は別々のＡｔＩ領域もしくはヒトｔＰＡとヒトｕＰＡの
別々のＡ鎖領域もしくはヒトｕＰＡの全部もしくは別々
のＡＭ鎖領域らなるアミノ酸配列であり、Ｌ２は直接結
合またはＸ２をＹ２へ結合するアミノ酸配列を表わし、
Ｙ２はヒトｕＰＡの触媒領域である。）で表わされる一
重鎖プラスミノーゲンアクチベーターを薬剤上許容され
うる担体とともに含み、その際成分Ａは成分Ｂが５ｃｕ
Ｐ八である場合ｔＰＡとはなり得ない組合せ医薬製剤に
関する。

タンパク質領域は全タンパク質の構造全体内で構造的お
よび／または機能的存在である。ｔＰＡおよびｕＰＡの
両方ともこれらの成熟形においてそれぞれ連続して一列
に並んだ４個および３個の別々の領域からなる非触媒性
Ａ鎖と、位置３２２　、３７１と４７８（ｔＰＡ）およ
び２０４　、２５５と３５６　（ｕＰＡ）にアミノ酸残
基旧Ｓ、へｓｐとＳｅｒをそれぞれ含み実質的に酵素活
性である活性中心を有する触媒Ｂ鎖（触媒領域）とから
なる０個々の領域は遺伝子レベルで非コード接合範囲、
いわゆるイントロンにより分かれこれらの境界でエクソ
ン−イントロン接合へ導びく。

−重鎖ｔＰＡは次の式により表わされる：（式中、Ｔは
アミノ酸１〜５からなるＮ−末端部分を表わし、Ｆはア
ミノ酸６〜４３からなるフィンガー領域であり、Ｇはア
ミノ酸５１〜８４からなる増殖因子領域であり、Ｋ＋は
アミノ酸９２〜１７３からなるクリングル１領域であり
、Ｋ２はアミノ酸１８０〜２６２からなるクリングル２
領域であり、ＴＰＡ８はアミノ酸２７６〜５２７からな
る触媒セリンプロテア−上領域（Ｂ−鎖）であり、Ｊ、
（アミノ酸４４〜５０）、Ｊ２（アミノ酸８５〜９１）
、Ｊ、（アミノ酸１７４〜１７９）およびＪ４（アミノ
酸２６３〜２７５）は領域セグメントを結合する接合領
域である。） 一本鎖ｕＰＡは次式で表わされる； （式中、Ｔ′はアミノ酸１〜１２からなるＮ−末端部分
であり、Ｕはアミノ酸１３〜４２からなる増殖因子領域
であり、Ｋはアミノ酸５０〜１３１からなるクリングル
領域であり、υＰＡ”はアミノ酸１５９〜４１１からな
る触媒セリンプロテアーゼ領域（Ｂ、鎖）であり、ＪＳ
（アミノ酸４３〜４９）とＪＳ（アミノ酸１３２〜１５
８）は領域セグメントを結合する接合配列である。）プ
ロセッシング部位は、それぞれアミノ酸２７５と２７６
（ｔＰＡ）および１５８と１５９（ｕＰＡ）の間に位置
する。

これまでのＮ−末端システィン残基は触媒（Ｂ−鎖）領
域に対し硫黄−硫黄橋に含まれる。

成分Ａとしての使用に適するプラスミノーゲンアクチベ
ーターは式（Ｉ）中Ｘ＋、Ｌ、およびＹｌが次の意味を
有するものである： Ｘｌは、たとえばヒトｔＰＡの別々のＡ鎖領域またはヒ
トｔＰＡの全Ａ鎖領域およびヒトｕＰＡのクリングル領
域、ヒトｔＰＡのフィンガー、クリングル１およびクリ
ングル２領域およびヒトｕＰＡの増殖因子わよび／また
はクリングル領域またはヒトｔＰＡのクリングル２領域
およびヒトｕＰＡの増殖因子および／またはクリングル
領域から実質的になるアミノ酸配列であり、 Ｌｌは、たとえばＹｌのＮ−末端アミノ酸残基と結合す
るとプラスミンプロセッシング部位を生じそして少なく
とも１のＣｙｓ残基を含むアミノ酸配列であり、 ＹｌはヒトｔＰＡのアミノ酸２７６〜５２７からなるヒ
）　ｔＰＡの触媒領域または触媒活性を保持するそのフ
ラグメントである。

用語は実質的に本明細書中で挙げたアミノ酸配列が本質
的ではなくそして酵素活性に何らの影響も有しない別の
配列をさらに含んでもよいことを示すことが意図される
。非本質的配列はそれぞれのプラスミノーゲンアクチベ
ーターの合成の間に本質的配列と融合されうる他のポリ
ペプチドから誘導される配列を含む。非−本質的配列は
たとえば成熟酸ホスファターゼ（ＰＨ０５）のアミノ酸
１〜１２である。

本発明の好ましい実施態様において、Ｘｌは直接結合ま
たはヒトｔＰＡのＡ鎖領域全部またはヒトｔＰＡのクリ
ングル２領域およびヒトｕＰＡの増殖因子領域から本質
的になるものであり；特にＸｌは直接結合またはヒトｔ
ＰＡのアミノ酸１〜２６２からなるアミノ酸配列または
ヒトｔＰＡのアミノ酸１７６〜２６２と連続して結合し
たヒトｕＰＡのアミノ酸１〜４４からなるアミノ酸配列
である。

また好ましくは、式（Ｉ）中Ｌ１がｔＰＡおよび／また
はｕＰＡから誘導されるアミノ酸１１〜４０からなるア
ミノ酸配列および／またはたとえば成熟酸ホスファター
ゼ（ＰＨ０５）のような他のポリペプチドからなりそし
て少なくとも１つのＣｙｓ残基を含むアミノ酸配列を表
わすプラスミノーゲンアクチベーターである。特に、Ｌ
ｌはＣｙｓ残基がＹｌのＮ−末端アミノ酸残基からアミ
ノ酸１１〜１２個隔てたところにあるアミノ酸配列を表
わす。

最も好ましい見地において、Ｌ、はヒトｔＰＡのアミノ
酸２６３〜２７５、ヒトｕＰＡのアミノ酸１４７〜１５
８およびヒトｔＰＡのアミノ酸２５６〜２７５と連続し
て結合した成熟酸ホスファターゼ（ＰＨ０５）のアミノ
酸１〜１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を表
わす。

好ましいプラスミノーゲンアクチベーターは、式（Ｉ）
中Ｘｌが直接結合またはヒトｔＰＡのアミノ酸１〜２６
２およびヒト　ｔＰＡのアミノ酸１７６〜２６２と連続
して結合したヒトｕＰＡのアミノ酸１〜４４からなる群
から選択されるアミノ酸配列であり、ＬがヒトｔＰＡの
アミノ酸２６３〜２７５からなるアミノ酸配列を表わし
、ＹｌがヒトｔＰＡのアミノ酸２７６〜５２７からなる
ヒトｔＰＡの触媒領域であるものである。

成分Ａとしての使用に最も好ましいプラスミノーゲンア
クチベーターは、ｔＰＡまたは式（Ｉ）中Ｘ、が直接結
合であり、し、がヒトｔＰＡのアミノＭ２６３〜２７５
からなるアミノ酸配列を表わし、ＹｌがヒトｔＰＡのア
ミノ酸２７６〜５２７からなるヒト　ｔＰＡの触媒領域
であるもの（ｔＰＡ　Ｂ鎖、延長型と称する）、または
式（Ｉ）中Ｘ１がヒトｔＰＡのアミノ酸１７６〜２６２
に連続して結合したヒトｕＰＡのアミノ酸１〜４４から
なるアミノ酸配列であり、ＬｌおよびＹ、が上述の定義
したものであるもの（ｕＫｚｔＰＡと称する）、または
式＜１）中ＸＩが直接結合であり、Ｌ、がヒトｔＰＡの
アミノ酸２５６〜２７５に連続して結合した成熟酸ホス
ファターゼ（ＰＨ０５）のアミノ酸１〜１２からなるア
ミノ酸配列を表わし、Ｙｌが上記定義のものであるプラ
スミノーゲンアクチベータ−（ｔＰＡ　Ｂ鎖、融合型と
称する）である。

成分Ｂとして使用される適当なプラスミノーゲンアクチ
ベーターは、式（ＩＩ）中Ｘ２．Ｌ２およびＹ２が次の
意味を有するものである： Ｘ、は、たとえばヒトｔＰＡのフィンガーおよび／また
はクリングル２領域、またはヒトｔＰＡのフィンガー、
増殖因子およびクリングル２領域５またはヒトｔＰＡの
増殖因子、クリングル１およびクリングル２領域または
ヒトｕＰＡの増殖因子および／もしくはクリングル領域
およびヒトｔＰＡのクリングル２領域から実質的になる
アミノ酸配列であり、 Ｌｌは、たとえば、Ｙ２のＮ末端アミノ酸残基と結合し
た場合プラスミンプロセッシング部位を生じそして１つ
のＣｙｓ残基を含むアミノ酸配列であり； Ｙ２はヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜４１１からなるヒ
）　ｕＰＡの触媒領域または触媒活性を保持するそのフ
ラグメントである。

本発明の好ましい実施態様において、Ｘ２はヒ）　ｔＰ
Ａのフィンガーおよびクリングル２領域またはヒトｔＰ
Ａのクリングル２領域がら実質的になるアミノ酸配列で
ある。特に、Ｘ２は直接結合またはヒトｔＰＡのアミノ
酸１〜４９と１７６〜２６２またはアミノ酸１〜３と１
７６〜２６２からなるアミノ酸配列である。

また好ましくは、式（［）中Ｌ２はアミノ酸１１〜２８
からなり１つのＣｙｓ残基を含むアミノ酸配列を表わし
、特にＬｌはＣｙｓ残基がＹ２のＮ末端アミノ酸残基か
らアミノ酸１１または１２個離れた位置にあるアミノ酸
配列を表わすプラスミノーゲンアクチベーターである。

最も好ましい見地において、ＬｌはヒトｔＰＡのアミノ
酸２６３〜２７５、ヒトｕＰＡのアミノ酸１４７〜１５
８およびヒトｕＰＡのアミノ酸１４４〜１５８からなる
群から選択されるアミノ酸配列を表わす。

好ましい一本鎖プラスミノーゲンアクチベーターは、式
（ＩＩ）中Ｘ２が直接結合またはヒトｔＰＡのアミノ酸
１〜４９と１７６〜２６２もしくはアミノ酸１〜３と１
７６〜２６２からなるアミノ酸配列であり、Ｌｌがヒト
　ｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５、ヒトｕＰＡのアミ
ノ酸１４７〜１５８およびヒトｕＰＡのアミノ酸１４４
〜１５８からなる群から選択されるアミノ酸配列を表わ
し、Ｙ２がヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜４１１からな
るヒトｕＰＡの触媒領域であるプラスミノーゲンアクチ
ベーターである。

成分Ｂとして使用するのに最も好ましい一本鎖プラスミ
ノーゲンアクチベーターは、式（ＩＩ）中Ｘ２がヒトｔ
ＰＡのアミノ酸１〜４９と１７６〜２６２からなるアミ
ノ酸配列であり、ＬｌがヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜
２７５からなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ２がヒトｕＰ
Ａのアミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒
領域であるもの（ＦＫ２ｔｕＰΔと称する）、または式
（ＩＩ）中Ｘ２がヒトｔＰＡのアミノ酸１〜３と１７６
〜２６２からなるアミノ酸配列であり、ＬｌおよびＹ２
は前記定義したもの（Ｋ、ｔｕＰＡと称する）であるプ
ラスミノーゲンアクチベーターである。

好ましい医薬製剤は成分Ａとして、式（Ｉ）中Ｘ、が直
接結合であり、Ｌ、がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２
７５からなるアミノ酸配列を表わし、ＹがヒトｔＰＡの
アミノ酸２７６〜５２７からなるヒト　ｔＰＡの触媒領
域であるプラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ　Ｂ
鎖、延長型と称する）および成分ＢとしてｓｃｕＰＡま
たは式（ＩＩ）中Ｘ２がヒトｔＰＡのアミノ酸１〜４９
および１７６〜２６２からなるアミノ酸配列であり、Ｌ
ｌがヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるアミ
ノ酸配列を表わし、Ｙ２がヒトｕＰＡのアミノ酸１５９
〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域であるプラスミ
ノーゲンアクチベーター（ＦＫ２ｔｕＰＡと称する）ま
たは成分Ｂとして式（Ｉ［）中Ｘ２がヒトｔＰＡのアミ
ノ酸１〜３と１７６〜２６２からなるアミノ酸配列であ
り、Ｌ２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からな
るアミノ酸配列を表わし、そしてＹ２がヒトｕＰＡのア
ミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域で
あるプラスミノーゲンアクチベータ−（Ｋ、ｔｕＰＡと
称する）を含むものである。

別の好ましい医薬製剤は、成分ＡとしてｔＰＡを含み、
成分Ｂとして式（ＩＩ）中ｘ２がヒトｔＰＡのアミノ酸
１〜４９と１７６〜２６２からなるアミノ酸配列であり
、Ｌ２がヒト　ｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からな
るアミノ酸配列を表わし、そしてＹ２がヒトｕＰＡのア
ミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域で
あるプラスミノーゲンアクチベーター（ＦＫ２ｔｕＰＡ
と称する）または成分Ｂとして式（ＩＩ）中ｘ２がヒト
　ｔＰＡのアミノ酸１〜３と１７６〜２６２からなるア
ミノ酸配列であり、Ｌ２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３
〜２７５からなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ２がヒｈ　
ｕＰＡのアミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの
触媒領域であるプラスミノーゲンアクチベーター（Ｋ、
ｔｕＰＡと称する）を含むものである。

特に好ましくは、成分Ａとして、式（Ｉ）中Ｘ。

がヒトｔＰＡのアミノ酸１７６〜２６２と連続して結合
したヒトｕＰＡのアミノ酸１〜４４からなるアミノ酸配
列であり、ＬｌがヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５
からなるアミノ酸配列を表わし、ＹｌがヒトｔＰＡのア
ミノ酸２７６〜５２フからなるヒトｔＰＡの触媒領域で
あるプラスミノーゲンアクチベーター（ｕＫ２ｔＰＡと
称する）を含み、成分ＢとしてｓｃｕＰＡまたは式（Ｉ
Ｉ）中Ｘ２がヒト　ｔＰＡのアミノ酸１〜４９と　１７
６〜２６２からなるアミノ酸配列であり、Ｌ２がヒトｔ
ＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるアミノ酸配列を
表わし、Ｙ２がヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜４１１か
らなるヒトｕＰＡの触媒領域であるプラスミノーゲンア
クチベーター（ＦＫ、ｔｕＰＡと称する）または成分Ｂ
として式（ＩＩ）中Ｘ２がヒトｔＰＡのアミノＭｌ〜３
と１７６〜２６２からなるアミノ酸配列であり、Ｌ２が
ヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるアミノ酸
配列を表わし、Ｙ２がヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜４
１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域であるプラスミノー
ゲンアクチベーター（Ｋ２ｔｕＰＡと称する）を含む医
薬製剤である。

さらに好ましい医薬製剤は、成分Ａとして、式（Ｉ）中
Ｘ１が直接結合であり、ＬｌがヒトｔＰＡのアミノ酸２
５６〜２７５に連続して連結した成熟酸ホスファターゼ
（ＰＨ０５）のアミノ酸１〜１２からなるアミノ酸配列
であり、ＹｌがヒトｔＰＡのアミノ酸２７６〜５２７か
らなるヒトｔＰＡの触媒領域であるプラスミノーゲンア
クチベーター（ｔＰＡ　Ｂ鎖、融合型と称する）、成分
ＢとしてｓｃｕＰＡまたは式（ＩＩ）中Ｘ２がヒト　ｔ
ＰＡのアミノ酸１〜４９と１７６〜２６２からなるアミ
ノ酸配列であり、Ｌ２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜
２７５からなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ２がヒトｕＰ
Ａのアミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒
領域であるプラスミノーゲンアクチベーター（ＦＫ２ｔ
ｕＰＡと称する）を含むかまたは成分Ｂとして式（ＩＩ
）中Ｘ２がヒトｔＰＡのアミノ酸１〜３と１７６〜２６
２からなるアミノ酸配列であり、Ｌ２がヒトｔＰＡのア
ミノ酸２６３〜２７５からなるアミノ酸配列を表わし、
Ｙ、がヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜４１１からなるヒ
トｕＰＡの触媒領域であるプラスミノーゲンアクチベー
ター（Ｋ２ｔｕＰＡと称する）を含有するものである。

組合せ医薬製剤中に含まれるプラスミノーゲンアクチベ
ーターは公知化合物であるかまたは当該技術でよく知ら
れた方法により調製される。特に好ましくは、ＥＰ　２
７７３１３　、　ＥＰ　２３１８８５　、　ＥＰ　２７
５８５６゜阿０８８／８４５１　、　ＥＰ　２７５６０
６　、　ＥＰ　２７３７７４　、　ＥＰ２１３７９４　
、　Ｈｏ　８８１５８２２　、　ＥＰ　１４３０８１　
、　ＥＰ　２２５２８６゜ＥＰ　２８８４３５およびリ
ジネンら（Ｌｉｊｎｅｎ　ｅｔａ鎖、）（Ｊ。

Ｂｉｏ鎖、Ｃｈｅｍ　２Ｂ３．５５９４−５５９８　（
Ｉ９８８））に記載のようにＤＮＡ組換体技術により調
製されたＰへＳである。

本発明による新規組合せ製剤は、たとえば血栓症、動脈
硬化、心筋梗塞および脳梗塞、静脈血栓症、血栓塞栓症
、術後塞栓症、血栓静脈炎等により起こされる血栓また
は疾患の予防または治療のためにヒトに使用されうる。

本発明による医薬製剤は、これらをたとえば静脈内のよ
うな腸管外投与すると上述したものの治療に使用される
。

組合せ製剤は、これらを同時にそして同じルートで投与
する必要性のある方法で成分ＡとＢを含むかまたは成分
ＡとＢを別々に含み（製品キット）異なった時間および
／または異なったルートで投与されるようにしてもよい
。

適当な注入または注射溶液好ましくは水性等張溶液また
は懸濁液があり、これは使用前に、単独または製剤上許
容されうるキャリヤーたとえばマンニトール、ラクトー
ス、デキストロース、ヒト血清アルブミン等とともに有
効成分を含む凍結乾燥製剤から調製されうる。医薬製剤
は滅菌され、そして所望により助剤たとえば保存剤、安
定剤、乳化剤、溶解剤、Ｍ漬液および／または等強性を
調節するための塩（たとえば０．９％塩化ナトリウム）
とともに混合される。滅菌は小孔径（直径０．４５μｍ
またはそれ以下）のフィルターを通して滅菌沢過するこ
とにより達成しその後所望により組成物を凍結乾燥して
もよい、滅菌を維持する助けのために抗生物質を添加し
てもよい、たとえば、Ｐ＾３投与のために発展した標準
配合技術（すなわち、ヨーロッパ特許出願第９３６１９
号、同第４１７６６号、同第１１２９４０号その他）ま
たは低ｐＨ［衝培地中でＰ＾に対し十分な溶解性を付与
する新規組成物（たとえば、ヨーロッパ特許出願第２１
１５９２号、西ドイツ国公開特許出願第３，６１７，７
５２号、同第３６１７７５３号、同第３６４２９６０号
）が使用されうる。安定性の理由のために、５％デキス
トロースまたは５％マンニトールまたは０．９％塩化ナ
トリウム等中に凍結乾燥したサンプルを再度溶解するこ
とが勧められる。

患者の疾患および年齢ならびに症状のタイプに応じて、
約７０ｋｇの患者の治療に対し一度に投与される日用量
は、成分Ａが５〜１００ｍ鎖、特に１０〜４０ｍｇの範
囲内であり、成分Ｂが５〜１００ｍ鎖、特に１０〜４０
ｍｇの範囲内である。したがって、組成物における成分
Ａと成分Ｂの重量比は一般に１＝１〜１：２０の間で変
化する。１：２〜１：１０の重量比を使用するのが好ま
しい。

本発明による医薬製剤は、アンプル中に薬剤上許容され
うるキャリヤーとともに成分ＡとＢの両方ともの治療有
効量を含むか、または好ましくは二本のアンプル中に薬
剤上許容されうるキャリヤーとともに別々に成分ＡとＢ
の治療有効量を含む単位投与形で施与される。

本発明医薬製剤は、通常の凍結乾燥法または溶解法を用
いながらそれ自体公知の方法で、たとえば成分ＡとＢと
場合により薬剤上許容されうるキャリヤーとを混合し、
凍結乾燥物調製のために、得られた水溶液を凍結乾燥す
る。組成物は有効成分的０．１％〜２０％、特に約１％
〜１０％であり、凍結乾燥の場合には有効成分１００％
までである。

本発明はまたヒト身体の予防および治療処置に対し、特
に上述の臨床的症状に対し、特にヒト身体において血栓
により起こされる血栓症または疾患の予防および治療に
対し本発明による組合せ製剤の使用に間する。

本発明の別の目的は、成分ＡとＢの組合せ投与が線維素
溶解活性の増強を導びくという驚くべき観察において見
出される。したがって、本発明は成分ＡとＢの線維素溶
解性有効量からなる組合せ医薬製剤を前記ヒトへ投与す
ることからなるヒトにおける血栓により起こされる血栓
症または疾患の予防または治療に対する方法に関する。

図面の簡単な説明 図１〜７はプラスミノーゲンアクチベーターの異なった
組合せの血液凝固活性を示す図である。

第１図はｔｐ八とに２ｔｕＰＡの相補的作用形式を表わ
し、 第２図はｔｐ八とＦＫ２ｔｕＰＡの相補的作用形式を表
わし、 第３図はｕＫｚｔＰＡとｓｃｕＰＡの相補的作用形式を
表わし、 第４図はｕＫ２ｔＰＡとに２ｔｕＰＡの相補的作用形式
を表わし、 第５図はｔＰＡ　Ｂｉ（縮合型）と５ｃｕＰΔの相補的
作用形式を表わし、 第６図はｔＰＡとｕＫ２ｔＰＡの付加的作用形式を表わ
し、 第７図はＫ２ｔｕＰＡとＦＫ２　ｔｕＰＡの付加的作用
形式を表わす。

〔実施例〕

次の実施例により本発明を説明するがこれに限定される
ものではない。

例１ｔＰＡＢ鎖（融合）をコードする酵母発現プラスミ
ドの構築 ｔＰＡ　Ｂ鎖（Ｉｌｅ　２７Ｂ−Ｐｒｏ　５２７）をコ
ードするヌクレオチド配列をプラスミドｐ３１／Ｐ■０
５−ＴＰ＾１８から単離する（ヨーロッパ特許出願第１
４３０８１号）、これは成熟ｔＰＡの完全コード配列を
含む、　ｐ３１／ＰＨ０５−ＴＰＡ１８は、ＰＨ０５プ
ロモーター、ＰＨ０５シグナル配列、ｔＰＡのコード配
列およびＰＨ０５転写終結シグナルを時計と反対口わり
の方向で備えたＢａｍＨｒ　／旧ｎｄｌ［Ｉ挿入部を有
するｐＢＲ３２２由来プラスミドである。

ｐ３１／　ＰＨ０５−ＴＰＡ１８をＳｃａ　Ｉと旧ｎｄ
Ｉ［ｒで消化し、得られたｌｋｂフラグメントはｔＰＡ
のアミノ酸Ｃｙｓ２５６〜Ｐｒｏ５２７をコードする。

プラスミドｐ２９（ハーゲナウアーーツアビスＨａｇｕ
ｅｎａｕｅｒ−Ｔｓａｐｉｓら（Ｉ９８４）、　Ｍｏ１
．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ。

４、２６６８−２６７５）は３．９ｋｂ　ＢａｍＨＩ　
−Ｈｐａ　Ｉフラグメントにて縦一列で抑制および構成
酸ホスファターゼ（ＰＨ０５およびＰＨ０３）に対する
酵母遺伝子を含む（バジュワＢａｊｗａら、（Ｉ９８４
）、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ　
１２．７７２１−７７３９）、　ＤＮＡフラグメントを
プラスミドｐ３０から単離しくヨーロッパ特許出願第１
４３０８１号、ＤＳＭ　４２９７として寄託）、時計回
わりでＢａｍＨＩおよびＰｖｕ　ＩＩの間にｐＢＲ３２
２をクローンし、その結果プラスミドｐ２９を得る。Ａ
ＣＣＩ制限消化、フレノウＤＮＡポリメラーゼとのはめ
込み反応およびＢａ＋ｅＨｒ制限消化によりＰＨ０５プ
ロモーター、シグナル配列および成熟ＰＨ０５のコード
配列へ伸長する３４ヌクレオチドを含む６２６　ｂｐフ
ラグメントを得る。

ｐ３１／ＰＨ０５−ＴＰＡ１８の１　ｋｂ　Ｓｃａ　Ｉ
　／Ｈｉｎｄｌ［［フラグメントとｐ２９の６２６　ｂ
ｐフラグメントをこれらのプラント末端を介して連結し
、酵母ベタクーｐＪＤＢ２０７ヘクローンしくベッグス
Ｂｅｇｇｓ　（Ｉ９８１）、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒＧｅ
ｎｅｔｉｃｓ　ｉｎ　ＹｅａｓＬ＾１ｆｒｅｄ　Ｂｅｎ
ｚｏｎ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ。

Ｍｕｎｋｓｇａａｒｄ、　ｖｏｎ　Ｗｅｔｔｓｔｅｉｎ
　ｅｔａ鎖、（編）、　Ｖｏ鎖、１６゜３８３　３９０
）　、　ＢａｍＨＩと旧ｎｄｌ［で切断する。

得られた酵母発現プラスミドｐＪＤＢ２０７／　ＰＨ０
５・ＴＰＡ　Ｂは、次のように成熟酸ホスファターゼの
アミノ酸１〜１２がｔＰＡのＣｙｓ２５６ヘフレーム融
合したものである： ＤＮＡ融合点 ＧＧＴ　ＡＣＣＡＴＴ　ＣＣＣＴＴＡ　ＧＧＣ＾＾＾Ｃ
ＴＡ　ＧＣＣＧＡＴ　ＧＴＣＧＡＣＴＧＴ　ＧＡＴＧＴ
Ｇ　ＣＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＣＯＴＧＣＧＧＣＣＴ
Ｇ　ＡＧ＾Ｖａｔ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　
Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　ＡｒｇｔＰＡ＾ ＣＡＧ　ＴＡＣＡＧＣＣＡＧ　ＣＣＴ Ｇｌｎ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｐｒ。

ＧＡＧ　ＴＴＴ　ＣＧＣＡＴＣ＾＾＾　、、、　　、、
、　　、、、　ＣＣＧＧｌｎ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ
　Ｌｙｓ　、、、　、、、　　、、、　Ｐｒ。

ｐ＝プロセッシング部位 担当するタンパク質はｔＰＡ　Ｂ鎖（融合）と指名され
る。

例２　　ｐＪＤＢ２０７／ＰＨ０５−ＴＰＡ　Ｂを用い
たサツ力ロミセスセレヴイシｘ　−Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ菌株ＨＴ２４６の形質
転換 サツカロミセス　セレヴイシェー菌株ＨＴ２４６　（ａ
。

１ｅｕ２−３．１ｅｕ２−１１２．　ｐｒｂ　；　ＤＳ
Ｍ　４０８４）を、ヒンネンら（Ｈｉｎｎｅｎ　ｅｔ　
ａ鎖、）により記載された形質転換プロトコールを用い
てプラスミドｐＪＤＢ２０７／　ＰＨ０５−ＴＰＡ　Ｂ
で形質転換する（Ｐｒｏｅ、　Ｎａｔ鎖、＾ｃａｄ、　
Ｓｃｉ。

υＳ＾７５．１９２９　（Ｉ９７８））、形質転換酵母
細胞をロイシン欠除した最小限酵母培地皿上で選択され
る。

１個の形質転換酵母コロニーを単離し、サツカロミセス
　セレヴイシェーＨＴ２４６／ｐＪＤＢ２０７／ＰＨ０
５−ＴＰＡ　Ｂとする。

実施例３：サツカロミセス　セレヴイシェーＨＴ２４６
／ｐＪＤＢ２０７／Ｐ１１０５−ＴＰＡ　Ｂの発酵サツ
カロミセス　セレヴイシェ−■Ｔ２４Ｂ／　ｐＪＤＢ２
０７／ｐＨ０５−ＴＰＡ　Ｂは完全な長さのＰＨ０５プ
ロモーターを備えたプラスミドを含有し、ｔＰＡ　Ｂ鎖
の発現のためのプロモーターの活動化を必要とする。サ
ツカロミセス　セレヴイシエーＨＴ２４６形質転換体の
細胞を、５−７Ｘ１０’細胞個／社の密度を達成するま
で２４時間３０℃にて振とうしながらエルレンマイヤー
　フラスコ５０社中の酵母最少培地（アミノ酸を有せず
２％グルコースおよび２０ｍｇ／　Ｉ　　Ｌ　−ヒスチ
ジンを加えたデイフコ酵母窒素塩基）１０社中で増殖す
る。次いで予備培養物の細胞を０．９％ＮａＣ１で洗い
、次いで予備培養物細胞の２０％を用いて、デイフコ酵
母窒素塩基培地（アミノ酸なし）のレシピにしたがって
調製され、しかしながら０．０３ｇ／ｌにＨ２ＰＯ４、
（ＮＨ４）２ＳＯ，の代わりに１０ｇ／Ｉ　　Ｌ　−ア
スパラギン、２０ｇ／ｌグルコースおよび１ｇ／ＩＬ−
ヒスチジンを含む低Ｐｉ最少培地５０ｍ１へ接種する。

培養物を３０℃にて４８時間まで１８０回転／分にて撹
拌する。最終密度５Ｘ１０’細胞／ｌｌｌ１（’！　Ｏ
Ｄｉ。。＝４−５）が得られる。

例４ｔＰＡＢ鎖（融合）の酵母培養物上清からの回収 酵母組換体ｔＰＡ　Ｂｇ（融合）を、低ホスフェート培
地中菌株ＨＴ２４６／ｐＪＤＢ２０７／ＰＨ０５−ＴＰ
Ａ　Ｂの３０１発酵物から調製される。

発酵６０時間後３ＯＮ上清液へＤＥ−３セフアロースビ
ーズ（ＥＰ　１１２１２２）を加え懸濁液を４℃にて１
時間撹拌する０次いでビーズをカラムへ移し、ＩＭＮａ
Ｃ鎖、１０−リン酸ナトリウム、ｐＨ７，０，０，１％
トウイーン８０で洗浄する。カラムからのｔＰＡＢｇ（
融合）の溶出は、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７，
０および０．０５％トウイーン８０からなるＭ街液中の
１．６Ｍ　　ＮＨ，ＳＣＮを用いて達成される。

ＤＥ−３中での２回連続クロマトグラフィサイクル後の
酵母組換体ｔＰＡ　Ｂ鎖（融合）の純度はＳＤＳゲル電
気泳動により評価されるように９０％以上である０分子
は明らかな分子量＞１２０ＫＤで移行し、これはエンド
グリコシダーゼＨ（トリンブルＴｒｉｍｂｌｅら（Ｉ９
８４）＾ｎａ１．Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１４１．５１５−
５２２）で処理すると約３３ＫＤまで減少する。これは
分泌された酵母組換体ｔＰＡ　Ｂ鎖（融合）が高度にグ
リコジル化されることを示す、グリコジル化は全分子量
の７５％に寄与する。

酵母組換体ｔＰＡ　Ｂ鎖（融合）の活性は螢光光度計分
析で測定される（ツインマーマンＺｉｍｍｅｒｍａｎｎ
ら、（Ｉ９７８）　　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔ鎖、　　＾
ｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳ＾　７５．　７５０）。

ｔＰＡ　Ｂ鎖（融合）の特異的活性は１５０　、０ＯＯ
ＦＬＩ　／　ｍｇタンパク質である（比較：　ＥＰ　１
００５６１に記載されたように酵母組換体ｔＰＡの活性
は１２５，０ＯＯＦＵ／　ｍｇである）。

例５　サツカロミセス　セレヴイシェーからのｓｃｕＰ
Ａの回収 酵母組換体５ｃｕＰＡはヨーロッパ特許出願第２８８　
、４３５号に記載されているように発現される。サツカ
ロミセス　セレヴイシェー菌株ＨＴ２４６／　ｐＪＤＢ
２０７／ＧＡＰＤＬ−Ｉ−ＵＰ＾は次のような複合培地
で増殖する（ｇ／ｆ）：ペプトン５、酵母抽出物１０、
グルコース２０、サッカロース４０、（ＮＨ４）２Ｓｏ
、　３、ＫＨ，ＰＯ，２、Ｍｇ５Ｏ＜　０．５、ＮａＣ
１０，１、ＣａＣｌ２０．１、ビオチン１０μｇ／ｌ。

はぼ１×１０ｇ細胞／ＩＩ＋１（会００．。。４Ｏ−４
５）が３０℃にて２００回転／分で４８時間インキュベ
ーション後に得られる。

培養物を遠心分離し、細胞を、６６ｍＭリン酸カリウム
ｐＨ７，４，４−ツヴイッターゲント　（カルビオケム
）からなる溶解緩衝液中に再懸濁させ、ダイノーミル（
ブラウンーメルサンゲン）中で破壊する。

破壊細胞懸濁液の上清を２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ７
，４，０，５％トウィーン８０で５００ｎｊ！まで調整
する。

予備膨潤した陰イオン交換体ＤＥ５２５０ｇ　（ワット
マン、スプリングフィールド、英国）を加え、懸濁液を
４℃で３０分分間上うする。ブフナーロートを用いてビ
ーズを溶液から分離し、溶液をｌＮｌｌＣｌでｐＨ４ま
で調整する。伝導率は理想的には１Ｏ−１１ａＳ（ミリ
シーメンス）である。陽イオン交換体ｓ　−セファロー
ス　ファスト　フロー（ファルマシア、アップサラ、ス
ウェーデン）５０ｇ（湿式重量）を加え、懸濁液を４℃
で１時間振とうする。洗浄後、ビーズを直径１０ｍｍの
カラムへ移し、５ｃｕＰΔを１０Ｏｎ＋Ｍ　トリス−Ｈ
ＣｌｐＨ８，５，０，０５％トウィーン８０で溶出する
。　　ｓｃｕＰＡ含有フラクシヨンを直ちに抗−ウロキ
ナーゼＩｇＧ−セファロース４Ｂカラム〔ヒト尿ウロキ
ナーゼに対し生ずる精製されたポリクローナルウサギ抗
体（ＩｇＧフラクション）〕を施こし、同じ緩衝液２容
量で洗浄し、次いで０．５Ｍ　ＮａＣ１，０，２Ｍグリ
シン−ＨＣ鎖、　ｐｎ　２．５で溶出する。酵母中に生
じなｓｃｕＰＡはＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳
動により判定されたように精製形で溶出する。酵母ｓｃ
ｕＰＡは還元条件下で約５４−５５　ＫＤ分子のシング
ルバンドとして移行する。

例６　　ＣＨＯ細胞培養物上清からのハイブリッドプラ
スミノーゲンアクチベーターの回収ハイブリッドプラス
ミノーゲンアクチベーターはヨーロッパ特許出願第２７
７３１３号に記載されたようにＣＨＯ細胞に発現する。

　ＥＰ　２フ７３１３においテＵＫ、ＴＰＡ’　（ＢＣ
）、Ｋ２ＵＰＡＢ（ＢＣ）オＪ：ヒＦＫ２ＵＰＡ＠（Ｂ
Ｃ）ト指名されたハイブリッドプラスミノーゲンアクチ
ベーターはそれぞれハイブリッドｕＫ、ｔＰＡ、Ｋ２ｔ
ｕＰＡおよびＰＫ、ｔｕＰＡと同一である。

それぞれｕＫ２ｔＰＡ、　ＦＫ２ｔｕＰＡまたはに２ｔ
ｕＰＡを含む培地を、ミクロフィルター（クロスフロー
ＫｒｏｓＦｌ。

■、ミクロゲンＭｉｃｒｏｇｅｎからの０．２μ蹟中空
繊維モジユール、カリフォルニア）により採取する。

細胞を含まない培地を接線方向流れ限外濾過（ペリコン
　Ｐｅ１ｌｉｃｏｎカセツト型　ＰＬＧＣ１０’０ＯＯ
Ｎ１４ＷＬミリボア）により２０〜５０倍に濃縮する。

この粗生成物をそれぞれの場合アフィニティクロマトグ
ラフィにより精製する。

６　ａ　：　ｕＫ１ｔＰＡ 臭化シアン活性化セファロース（ファルマシア）と結合
したＤＥ−３中でｕＫ２ｔＰＡをクロマトグラフィで精
製する。　ＤＥ−３はエリトリナラティシマ（Ｅｒｙｔ
ｈｒｉｎａｌａｔｉｓｓｉｓ＋ａ）からのトリプシン阻
害剤である（チエ。

ハラセンＣｈ、　Ｈｅｕｓｓｅｎ、ユニバシティ　オブ
　ケープタウン、Ｔｈｅｓｉｓ　１９８２）、　ＤＥ−
３セフｙＯ−スをｕＫ２ｔＰＡを含む濃縮培地へ加え、
懸濁液を４℃にて４５分間撹拌する０次いでビーズをカ
ラムへ移し、Ｉ　Ｍ　ＮａＣ１，１０−リン酸ナトリウ
ムｐＨ７，０，０，１％トウィーン８０で洗浄する。酵
素の溶出は、１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７，０と０
．０５％トウィーン８０からなるＭ街液中１．６Ｍ　Ｎ
Ｈ４ＳＣＮを用いて達成される。

ＤＥ−３カラムからの溶出液をＧ７５培地カラム（ファ
ルマシア）へ施こし、１０ＩＩＩＭトリス／ＨＣｌｐＨ
８，５，０，０５％トウィーン８０で平衡化し、平衡緩
衝液で展開する。ｕＫｚｔＰＡ含有フラクションをプー
ルし、モノ（Ｎｏｎｏ）Ｑカラム（Ｉｍｌｌ床置量ファ
ルマシア）へ施こし、１０−トリス／ＨＣＩ　ｐＨ８，
５，０，０５％トウィーン８０で平衡化する。平衡緩衝
液で洗浄後、ｕＫｚ　ｔＰ八を平衡ＭＷＩ液およびＩ　
Ｍ　ＮａＣ１，１０−トリス／ＨＣｌｐＨ８，５，０，
０５％トウィーン８０からなる緩衝液Ｂの直線状勾配液
で溶出する。

この方法で作られなｕＫ２ｔＰＡは、非還元条件下でＳ
ＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動にてそれぞれ４４
ＫＤと４２にＤ分子量の二重バンドとして移行し、低分
子量形で全タンパク質の約７０％である　１２５Ｊ−コ
ンカナバリンＡを用いた標識実験により高分子量形はＢ
鎖ばかりでなく　“クリングル”領域でもグリコジル化
されることがわかる。

６　ｂ　：　ＦＫ２ｔｕＰＡとに２　ｔｕＰＡそれぞれ
ＦＫ２ｔｕＰＡまたはに２ｔｕＰＡを含む濃縮培地へ、
抗つロキナーゼＩｇＧ−セファロースを加え〔ヒト尿ウ
ロキナーゼに対して生ずる精製ポリクローナルウサギ抗
体（ＩｇＧ−フラクション）〕そして懸濁液を４℃にて
４５分間撹拌する。次いでビーズをカラムへ移し、Ｉ　
Ｍ　Ｍａｃ鎖、１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７，０，
０，０５％トウィーン８０で洗浄する。各々のＰ＾を１
５０＋＋＋Ｎε−アミノカプロン酸、５０ｍＭグリシン
ｐＨ２，２，０，０５％トウィーン８０で溶出する。タ
ンパク質含有フラクションをＩ　Ｎ　Ｎａ０Ｈｒ　ｐＨ
５まで調整する。抗体カラムからの溶出液を、５０ｍＭ
リン酸ナトリウムｐＨ５，０，０，０５％トウィーン８
０で平衡化されたモノ−Ｓカラム（Ｉｒａｌ床容量；フ
ァルマシア）へ施こす、　ｐＨ８，０で平衡緩衝液を含
む緩衝液Ａで洗浄後、ＷＬ衝漬液と５００ｍＭ　ＮａＣ
４’、５０ｍＭリン酸ナトリウムｐ１（７，０，０，０
５％トウィーン８０からなる緩衝液Ｂの直線状勾配液で
Ｐ＾を溶出する。この方法により、ＦＫ、　ｔｕＰＡは
それぞれ３５％Ｂ、４５％Ｂおよび５５％Ｂの３つのピ
ークで溶出し、５５％Ｂピークが主なものである（ＦＫ
２ｔｕＰＡの全量の約６０−７０％）。この第三のピー
クが予期されたＮ−末端配列である　＋２ＳＪ−コンカ
ナバリンＡでの標識化実験はＦＫ２ＬｕＰＡのＢ鎖にお
ける炭水化物が存在し他方クリングル領域には炭水化物
が検出されないことを示す、この方法で作られたＦＫ２
ｔｕＰＡは非還元条件下でＳＤＳポリアクリルアミドゲ
ル中約４２ＫＤ分子量の一重バンドとして移行する。得
られたＦＫ２ｔｕＰＡは還元条件下でＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動およびＲＰ−ＨＰＬＣ分析で判定
されるように約９５％以上の純度である。最終製剤にお
ける二本鎖形のフラクションは直接アミド溶解分析で判
定されるようにｔｏ−ｉｓ％である。

同じ方法で作られるＫ２ｔｕＰＡは非還元条件下でＳＤ
Ｓポリアクリルアミドゲルにおいて約４０ＫＤ分子量の
拡散バンドとして移行する　　＋２５Ｊ−コンカナバリ
ンＡを用いた標識実験により酵素のＢＭにのみ炭水化物
が示される。得られたに２ｔｕＰＡはＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動およびＲＰ−ＨＰＬＣ分析で判定
されるように約９５％以上の純度である。最終製剤にお
ける二本鎖形のフラクションは直接アミド溶解分析で判
定されるように１〇−１５％である。

例７　ヒト血漿における体外凝血溶解 ヒト血液を３．８％クエン酸ナトリウム溶液へ直接回収
する（血液／クエン酸溶液比　９：・１）、混合物を１
０分間１，０００ｒ、ｐ、ｍ、で遠心分離するとクエン
酸化血漿が得られる。

クエン酸化ヒト血漿１社へ、Ｉ　Ｍ　ＣａＣｌ２水溶液
２０μｉ鎖、＋２ｓＪヒトフイブリノーゲン（アマ−ジ
ャム＾ｍｅｒｓｈａｍ、約３００．０００ｃｐｍ）１０
μｍおよびヒトトロンビン（ベーリンガーマンハイム）
１０μＺ（会０．４Ｕ　）を加える。この混合物を、カ
ミソリ刃でチップを切った１社使い捨て注射器へ素早く
注入する。混合物を２０分間凝血させ、次いで注射器か
ら押出し、５０ｏ＋Ｍリン酸緩衝液中で４０分間加齢す
る。血漿１ｍｊ２から得られる蛎虫状の凝血を４等分に
切断し、各月を１０社の試験管へ入れ新鮮な非凝集クエ
ン酸化血漿２−を加える。

凝血溶解反応を、１つのプラスミノーゲンアクチベータ
ー単独または２つのプラスミノーゲンアクチベーターの
組合せのいずれかを添加することにより開始する。

対照ｔＰＡはアメリカンディアグノスティカ＾ｍｅｒｉ
ｃａｎ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ、ニューヨークがら入
手されるか、またはヨーロッパ特許出願第１１２１２２
号に記載されているようにヒト黒色腫細胞系から単離さ
れる。酵母組換体５ｃｕＰＡはアメリカンディアグノス
ティカから入手されるかまたは例５に記載されるように
調製される。ｔＰＡ　Ｂ鎖（融合）およびハイブリッド
プラスミノーゲンアクチベーターｕＫ２　ｔＰＡ、　Ｋ
２ｔｕＰＡならびにＦＫ２ｔｕＰＡは、例４および６に
示される方法にしたがってそれぞれ精製する。

実験を異なった血液投与者からの血液を用いて実施する
。特定割合の溶解を達成するのに必要なＰ＾（または２
つの異なっなＰＡｓの組合せ）の標準量はしたがって２
〜２．５の因子により変化しうる（図１〜７参照）。

それぞれＰ＾またはＰ＾−組合せを添加後、試験管を３
７℃で軽く回転し、血漿の１００μ！サンプルを異なっ
た間隔で採取する。凝血から溶解の間に放出されるサン
プルにおける放射能をγ−カウンターで測定しそしてプ
ラスミノータンアクチベーターを有しない対照物と比較
して溶解％として表わす。

結果を図１−７に示す。

７　ａ：　Ｋ２ｔｕＰＡとｔＰＡの組合せ７０ｎｇ／ｒ
ａ１ｔＰＡまたは２８０ｎｇ／ｍＩＫ２ｔｕＰＡを単独
でまたは組合せて凝集した血漿へ加える。結果を図１に
示す、相補的であり単なる加法的でない作用形態は、ｔ
ＰＡかに２ｔｕＰＡ仲介溶解の初期に遅滞期を短かくす
る初期の時点で最も著しく見られる。

７ｂ：ｔＰＡとｓｃｕＰＡとの組合せ ３５ｎｇ／ｍ１ｔＰＡまたは１４０ｎＨ／社ＦＫ２ｔｕ
ＰＡを単独でまたは組合せて凝固血漿へ加える。結果を
図２に示す。

７　ｃ　：　ｕＫ２ｔＰＡとｓｃｕＰＡとの組合せ１４
０ｎｇ／　ｔａｌ　ｕＫ、ｔＰＡまたは２８０ｎｇ／　
ｍ１ｓｃｕＰＡを単独または組合せて凝固血漿へ加える
。結果を図３に示す。

７　ｄ　：　ｕＫｚｔＰＡとに２ｔｕＰＡとの組合せ７
０ｎｇ／　ｔａｌ　ｕＫ２ｔＰΔまたは７０ｎＢ／　ｍ
ｌ　Ｋ２ｔｕＰＡを単独または組合せて凝固血漿へ加え
る。結果を図４に示す。

７　ｅ　：　ｔＰＡ　ＢＭ（融合）と５ｃｕＰ八との組
合せ７０ｎｇ／ｍｌ　ｔＰＡ　Ｂ鎖（融合）または２８
０ｎｇ／　ｍ１ｓｃｕＰＡを単独または組合せて凝固血
漿へ加える。結果を図５に示す。

驚くべきことに、図３．４および５に示すように、ｔＰ
ＡはｓｃｕＰＡまたはその置換物の１つと組合せてｕＫ
２ｔＰＡまたはｔＰＡ　Ｂ鎖（Ｉ１合）により置換され
ると同じ効果が得られる。

７　ｆ　：　ｔＰＡとｕＫｚｔＰＡとの組合せ７０ｎｇ
／１ａ１ｔＰＡまたは７０ｎｇ／ｍ１ｕＫｚｔＰ八を単
独または組合せて凝固血漿へ加える。結果を図６に示す
。

７　ｇ　：　Ｋ２ｔｕＰＡとＦＫ２ｔｕＰＡとの組合せ
７０ｎｇ／　ｍｌ　Ｋ２ｔｕＰＡまたは１４０ｎｇ／ｍ
１ＦＫ２ｔｕＰＡを単独または組合せて凝固血漿へ加え
る。結果を図７に示す。

図６および７に示すように、ｔＰＡとＵに２ｔＰＡまた
はに２ｔｕＰＡとＦＫ２ｔｕＰＡの組合せのいずれでも
凝血溶解の相補的刺激が見られない０両方とも溶解は単
に加法的なだけである。

例８　経腸投与用医薬製剤 組合せ医薬製剤は、成分Ａとして凍結乾燥ｔＰＡ５■と
デキストロース３００ｍｇを各々含む６本のガラスぴん
と成分ＢとしてＦＫ２　ｔｕＰＡ２０ｎ＋ｇとデキスト
ロース３０１ｇを各々含む６本のガラスびんとからなる
。

ｔＰＡまたはＦに、ｔｕＰＡの経腸投与用溶液は、酢酸
でｐｔｔ　４．０に調節した１００ｍＭ酢酸アンモニウ
ム緩衝液含有でピロゲン不含有滅菌溶媒の１０ｍ１アン
プル１本に６本のガラスびんの各々の内容を溶解するこ
とにより調製される。

ｔＰＡとＦＫ２ｔｕＰＡを用いる代わりに、成分Ａおよ
びＢとして別のＰＡｓの等量を使用することもでき、タ
トえば成分ＡとしテｔＰＡ　Ｂｇ（融合）、ＬＰＡＢＭ
（延長）またはｕＫｚｔＰＡおよび成分Ｂとしてに２ｔ
ｕＰＡである。

微生物の寄託 次の微生物が西ドイツ国、Ｄ−３３００ブラウンシユバ
イヒ、マツシェローダー　ベツグ　１ｂのドイツチエ　
ザム　ラング　フォノ　ミクロオルガニムゼン（ＤＳＭ
）に寄託された。

微生物　　　　　　　　寄託臼　　　寄託番号サツカロ
ミセス　　　１９８７年４月１５日　ＤＳＭ　４０８４
セレヴイシエー〇７２４Ｂ 大腸菌ＨＢＩＯＩ／ｐ３０　　１９８７年１０月２３日
　ＤＳＭ　４２９７大腸菌ＨＢ１０１／ｐ３１／円（０
５ −ＴＰ＾１８　　　　１９８８年１２月１９日　ＤＳＭ
　５１１８

【図面の簡単な説明】

第１図はｔＰＡとＫｔｔｕＰＡの相補的作用形式を表わ
すグラフであり、 第２図はｔＰＡとＦＫ２ｔｕＰＡの相補的作用形式を表
わすグラフであり、 第３図はｕＫ、ｔＰＡとｓｃｕＰＡの相補的作用形式を
表わすグラフであり、 第４図はｕＫ２ｔＰＡとに２ｔｕＰＡの相補的作用形式
を表わすグラフであり、 第５図はｔＰＡ　Ｂｇ（縮合型）とｓｃｕＰＡの相補的
作用形式を表わすグラフであり、 第６図はｔＰＡとｕＫ２ｔＰＡの付加的作用形式を表わ
すグラフであり、 第７図はに２ｔｕＰＡとＦＫ２ｔｕＰＡの付加的作用形
式を表わすグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、成分ＡとしてｔＰＡＢ鎖からなるプラスミノーゲン
   アクチベーターと成分ＢとしてｕＰＡＢ鎖からなる一本
   鎖プラスミノーゲンアクチベーターとを含み、その際成
   分ＢがｓｃｕＰＡである場合成分ＡはｔＰＡとはなり得
   ない組合せ医薬製剤。 ２、成分Ａとして、次式： ＮＨ＿２−Ｘ＿１−Ｌ＿１−Ｙ＿１−ＣＯＯＨ（ I ）
   （式中、Ｘ＿１は直接結合またはヒトｔＰＡの全部もし
   くは別々のＡ鎖領域および／もしくはヒトｕＰＡの全部
   もしくは別々のＡ鎖領域からなるアミノ酸配列であり、
   Ｌ＿１は直接結合またはＸ＿１をＹ＿１に接続させるア
   ミノ酸配列を表わし、Ｙ＿１はヒトｔＰＡの触媒領域で
   ある。）で表わされるプラスミノーゲンアクチベーター
   と、成分Ｂとして次式：ＮＨ＿２−Ｘ＿２−Ｌ＿２−Ｙ
   ＿２−ＣＯＯＨ（II）（式中、Ｘ＿２は直接結合または
   ヒトｔＰＡの全部もしくは別々のＡ鎖領域もしくはヒト
   ｔＰＡおよびヒトｕＰＡの別々のＡ鎖領域もしくはヒト
   ｕＰＡの全部もしくは別々のＡ鎖領域からなるアミノ酸
   配列であり、Ｌ＿２は直接結合またはＸ＿２をＹ＿２に
   結合させるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿２はヒトｕＰＡ
   の触媒領域である。）で表わされる一本鎖プラスミノー
   ゲンアクチベーターと、薬剤上許容されうる担体とを含
   み、その際成分ＢがｓｃｕＰＡである場合成分ＡはｔＰ
   Ａとはなり得ない請求項１に記載の組合せ医薬製剤。 ３、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１がヒトｔＰＡの
   別々のＡ鎖領域またはヒトｔＰＡの全部のＡ鎖領域およ
   びヒトｔＰＡのクリングル領域またはヒトｕＰＡのフィ
   ンガー、クリングル１およびクリングル２領域およびヒ
   トｕＰＡの増殖因子および／またはクリングル領域また
   はヒトｔＰＡのクリングル２領域ならびにヒトｕＰＡの
   増殖因子および／またはクリングル領域から実質的にな
   るアミノ酸配列であるプラスミノーゲンアクチベーター
   を含む請求項２に記載の医薬製剤。 ４、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１がヒトｔＰＡの
   全部もしくは別々のＡ鎖領域またはヒトｔＰＡのクリン
   グル２領域およびヒトｕＰＡの増殖因子領域とから実質
   的になるアミノ酸配列であるプラスミノーゲンアクチベ
   ーターを含む請求項２に記載の医薬製剤。 ５、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１が直接結合また
   はヒトｔＰＡのアミノ酸１〜２６２またはヒトｔＰＡの
   アミノ酸１７６〜２６２と連続して結合したヒトｕＰＡ
   のアミノ酸１〜４４からなるアミノ酸配列であるプラス
   ミノーゲンアクチベーターを含む請求項２に記載の医薬
   製剤。 ６、成分Ａとして、式（ I ）中Ｌ＿１がＹ＿１のＮ末
   端アミノ酸残基と結合したときプラスミンプロセッシン
   グ部位を発生しそして少なくとも１個のＣｙｓ残基を含
   むアミノ酸配列を表わすプラスミノーゲンアクチベータ
   ーを含む請求項２に記載の医薬製剤。 ７、Ｌ＿１がアミノ酸１１〜４０からなるアミノ酸配列
   を表わす請求項６に記載の医薬製剤。 ８、Ｃｙｓ残基がＹ＿１のＮ末端アミノ酸残基からアミ
   ノ酸１１または１２個離れている請求項６に記載の医薬
   製剤。 ９、Ｌ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５、ヒ
   トｕＰＡのアミノ酸１４７〜１５８およびヒトｔＰＡの
   アミノ酸２５６〜２７５に連続して結合した成熟酸ホス
   ファターゼ（ＰＨ０５）のアミノ酸１〜１２とからなる
   群から選択されるアミノ酸配列を表わす請求項６に記載
   の医薬製剤。 １０、成分Ａとして、式（ I ）中Ｙ＿１がヒトｔＰＡ
   のアミノ酸２７６〜５２７からなるヒトｔＰＡの触媒領
   域または触媒活性を保持するそのフラグメントであるプ
   ラスミノーゲンアクチベーターを含む請求項２に記載の
   医薬製剤。 １１、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１が直接結合ま
   たはヒトｔＰＡのアミノ酸１〜２６２およびヒトｔＰＡ
   のアミノ酸１７６〜２６２と連続して結合したヒトｕＰ
   Ａのアミノ酸１〜４４からなる群から選択されるアミノ
   酸配列であり、Ｌ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜
   ２７５またはヒトｔＰＡのアミノ酸２５６〜２７５に連
   続して結合した成熟酸ホスファターゼ（ＰＨ０５）のア
   ミノ酸１〜１２からなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿１
   がヒトｔＰＡのアミノ酸２７６〜５２７からなるヒトｔ
   ＰＡの触媒領域であるプラスミノーゲンアクチベーター
   を含む請求項２に記載の医薬製剤。 １２、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１が直接結合で
   あり、Ｌ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５か
   らなるアミノ酸配列であり、Ｙ＿１がヒトｔＰＡのアミ
   ノ酸２７６〜５２７からなるヒトｔＰＡの触媒領域であ
   るプラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ　Ｂ鎖、延
   長型）を含む請求項２に記載の医薬製剤。 １３、成分ＡとしてｔＰＡを含む請求項２に記載の医薬
   製剤。 １４、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１がヒトｔＰＡ
   のアミノ酸１７６〜２６２に連続して結合したヒトｕＰ
   Ａのアミノ酸１〜４４からなるアミノ酸配列であり、Ｌ
   ＿１はヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるア
   ミノ酸配列を表わし、Ｙ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２
   ７６〜５２７からなるヒトｔＰＡの触媒領域であるプラ
   スミノーゲンアクチベーター（ｕＫ＿２ｔＰＡ）を含む
   請求項２に記載の医薬製剤。 １５、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１が直接結合で
   あり、Ｌ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２５６〜２７５と
   連続して結合した成熟酸ホスファターゼ（ＰＨ０５）の
   アミノ酸１〜１２からなるアミノ酸配列であり、Ｙ＿１
   がヒトｔＰＡのアミノ酸２７６〜５２７からなるヒトｔ
   ＰＡの触媒領域であるプラスミノーゲンアクチベーター
   （ｔＰＡＢ鎖、融合型）を含む請求項２に記載の医薬製
   剤。 １６、成分Ｂとして、式（II）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡの
   フィンガーおよび／またはクリングル２領域またはヒト
   ｔＰＡのフィンガー、増殖因子およびクリングル２領域
   またはヒトｔＰＡの増殖因子、クリングル１およびクリ
   ングル２領域、またはヒトｕＰＡの増殖因子および／も
   しくはクリングル領域およびヒトｔＰＡのクリングル２
   領域とから実質的になるアミノ酸配列であるプラスミノ
   ーゲンアクチベーターを含む請求項２に記載の医薬製剤
   。 １７、成分Ｂとして、式（II）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡの
   フィンガーおよびクリングル２領域またはヒトｔＰＡの
   クリングル２領域から実質的になるアミノ酸配列である
   プラスミノーゲンアクチベーターを含む請求項２に記載
   の医薬製剤。 １８、成分Ｂとして、式（II）中Ｘ＿２が直接結合また
   はヒトｔＰＡのアミノ酸１〜４９と１７６〜２６２また
   はアミノ酸１〜３と１７６〜２６２からなるアミノ酸配
   列であるプラスミノーゲンアクチベーターを含む請求項
   ２に記載の医薬製剤。 １９、成分Ｂとして、式（II）中Ｌ＿２がＹ＿２のＮ末
   端アミノ酸残基と結合したときプラスミンプロセッシン
   グ部位を生じそして１つのＣｙｓ残基を含むアミノ酸配
   列を表わすプラスミノーゲンアクチベーターを含む請求
   項２に記載の医薬製剤。 ２０、Ｌ＿２がアミノ酸１１〜２８からなるアミノ酸配
   列を表わす請求項１９に記載の医薬製剤。 ２１、Ｃｙｓ残基がＹ＿２のＮ−末端アミノ酸残基から
   アミノ酸１１または１２個離れた距離にある請求項１９
   に記載の医薬製剤。 ２２、Ｌ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５、
   ヒトｕＰＡのアミノ酸１４７〜１５８およびヒトｕＰＡ
   のアミノ酸１４４〜１５８からなる群から選択されるア
   ミノ酸配列を表わす請求項１９に記載の医薬製剤。 ２３、成分Ｂとして、式（II）中Ｙ＿２がヒトｕＰＡの
   アミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域
   または触媒活性を保持するそのフラグメントであるプラ
   スミノーゲンアクチベーターを含む請求項２に記載の医
   薬製剤。 ２４、成分Ｂとして、式（II）中Ｘ＿２が直接結合また
   はヒトｔＰＡのアミノ酸１〜４９と１７６〜２６２もし
   くはアミノ酸１〜３と１７６〜２６２からなるアミノ酸
   配列であり、Ｌ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２
   ７５、ヒトｕＰＡのアミノ酸１４７〜１５８およびヒト
   ｕＰＡのアミノ酸１４４〜１５８からなる群から選択さ
   れるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿２がヒトｕＰＡのアミ
   ノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域であ
   るプラスミノーゲンアクチベーターを含む請求項２に記
   載の医薬製剤。 ２５、成分Ｂとして、式（II）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡの
   アミノ酸１〜４９と１７６〜２６２からなるアミノ酸配
   列であり、Ｌ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７
   ５からなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿２がヒトｕＰＡ
   のアミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領
   域であるプラスミノーゲンアクチベーター（ＦＫ＿２ｔ
   ｕＰＡ）を含む請求項２に記載の医薬製剤。 ２６、成分Ｂとして、式（II）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡの
   アミノ酸１〜３と１７６〜２６２からなるアミノ酸配列
   であり、Ｌ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５
   からなるアミノ酸配列を表わし、そしてＹ＿２がヒトｕ
   ＰＡのアミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触
   媒領域であるプラスミノーゲンアクチベーター（Ｋ＿２
   ｔｕＰＡ）を含む請求項２に記載の医薬製剤。 ２７、成分ＢとしてｓｃｕＰＡを含む請求項２に記載の
   医薬製剤。 ２８、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１が直接結合で
   あり、Ｌ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５か
   らなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿１がヒトｔＰＡのア
   ミノ酸２７６〜５２７からなるヒトｔＰＡの触媒領域で
   あるプラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ　Ｂ鎖、
   延長型）を含み、成分ＢとしてｓｃｕＰＡまたは式（I
   I）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸１〜４９および１
   ７６〜２６２からなるアミノ酸配列であり、Ｌ＿２がヒ
   トｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるアミノ酸配
   列を表わし、Ｙ＿２がヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜４
   １１からなるヒトｕＰＡの触媒領域であるプラスミノー
   ゲンアクチベーター（ＦＫ＿２ｔｕＰＡ）または成分Ｂ
   として式（II）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸１〜３
   と１７６〜２６２からなるアミノ酸配列であり、Ｌ＿２
   がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるアミノ
   酸配列を表わし、そしてＹ＿２がヒトｕＰＡのアミノ酸
   １５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域であるプ
   ラスミノーゲンアクチベーター（Ｋ＿２ｔｕＰＡ）を含
   むことからなる請求項２に記載の医薬製剤。 ２９、成分ＡとしてｔＰＡを含み、成分Ｂとして式（I
   I）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸１〜４９と１７６
   〜２６２からなるアミノ酸配列であり、Ｌ＿２がヒトｔ
   ＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるアミノ酸配列を
   表わし、そしてＹ＿２がヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜
   ４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域であるプラスミノ
   ーゲンアクチベーター（ＦＫ＿２ｔｕＰＡ）または成分
   Ｂとして式（II）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸１〜
   ３と１７６〜２６２からなるアミノ酸配列であり、Ｌ＿
   ２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるアミ
   ノ酸配列を表わし、Ｙ＿２がヒトｕＰＡのアミノ酸１５
   ９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域であるプラス
   ミノーゲンアクチベーター（Ｋ＿２ｔｕＰＡ）を含む請
   求項２に記載の医薬製剤。 ３０、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１がヒトｔＰＡ
   のアミノ酸１７６〜２６２と連続して結合したヒトｕＰ
   Ａのアミノ酸１〜４４からなるアミノ酸配列であり、Ｌ
   ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５からなるア
   ミノ酸配列を表わし、Ｙ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２
   ７６〜５２７からなるヒトｔＰＡの触媒領域であるプラ
   スミノーゲンアクチベーター（ｕＫ＿２ｔＰＡ）を含み
   、成分ＢとしてｓｃｕＰＡまたは式（II）中Ｘ＿２がヒ
   トｔＰＡのアミノ酸１〜４９と１７６〜２６２からなる
   アミノ酸配列であり、Ｌ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸２
   ６３〜２７５からなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿２が
   ヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰ
   Ａの触媒領域であるプラスミノーゲンアクチベーター（
   ＦＫ＿２ｔｕＰＡ）または成分Ｂとして式（II）中Ｘ＿
   ２がヒトｔＰＡのアミノ酸１〜３と１７６〜２６２から
   なるアミノ酸配列であり、Ｌ＿２がヒトｔＰＡのアミノ
   酸２６３〜２７５からなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿
   ２がヒトｕＰＡのアミノ酸１５９〜４１１からなるヒト
   ｕＰＡの触媒領域であるプラスミノーゲンアクチベータ
   ー（Ｋ＿２ｔｕＰＡ）を含む請求項２に記載の医薬製剤
   。 ３１、成分Ａとして、式（ I ）中Ｘ＿１が直接結合で
   あり、Ｌ＿１がヒトｔＰＡのアミノ酸２５６〜２７５に
   連続して結合した成熟酸ホスファターゼ（ＰＨ０５）の
   アミノ酸１〜１２からなるアミノ酸配列であり、Ｙ＿１
   がヒトｔＰＡのアミノ酸２７６〜５２７からなるヒトｔ
   ＰＡの触媒領域であるプラスミノーゲンアクチベーター
   （ｔＰＡ　Ｂ鎖、融合型）を含み、および成分Ｂとして
   ｓｃｕＰＡまたは式（II）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡのアミ
   ノ酸１〜４９と１７６〜２６２からなるアミノ酸配列で
   あり、Ｌ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７５か
   らなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿２がヒトｕＰＡのア
   ミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領域で
   あるプラスミノーゲンアクチベーター（ＦＫ＿２ｔｕＰ
   Ａ）または成分Ｂとして式（II）中Ｘ＿２がヒトｔＰＡ
   のアミノ酸１〜３と１７６〜２６２からなるアミノ酸配
   列であり、Ｌ＿２がヒトｔＰＡのアミノ酸２６３〜２７
   ５からなるアミノ酸配列を表わし、Ｙ＿２がヒトｕＰＡ
   のアミノ酸１５９〜４１１からなるヒトｕＰＡの触媒領
   域であるプラスミノーゲンアクチベーター（Ｋ＿２ｔｕ
   ＰＡ）を含む請求項２に記載の医薬製剤。 ３２、成分Ａ対成分Ｂの重量比が１：１〜１：２０であ
   る請求項１に記載の医薬製剤。 ３３、成分Ａ対成分Ｂの重量比が１：２〜１：１０であ
   る請求項１に記載の医薬製剤。