JPH02177883A - シュードモナス属細菌の培養法 - Google Patents
シュードモナス属細菌の培養法Info
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- JPH02177883A JPH02177883A JP63329333A JP32933388A JPH02177883A JP H02177883 A JPH02177883 A JP H02177883A JP 63329333 A JP63329333 A JP 63329333A JP 32933388 A JP32933388 A JP 32933388A JP H02177883 A JPH02177883 A JP H02177883A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ニトリルヒドラターゼ活性の高いシュードモ
ナス(Pseudomonas)属細菌を高収率且つ大
量に生産する方法に関するものである。
ナス(Pseudomonas)属細菌を高収率且つ大
量に生産する方法に関するものである。
近年、微生物、酵素またはそれらを固定化して種々の単
位化学反応や複合化学反応の触媒として利用しようとす
る動きが、盛んになってきてしする。
位化学反応や複合化学反応の触媒として利用しようとす
る動きが、盛んになってきてしする。
ニトリルヒドラターゼは、二l・リル頻を水和して相当
するアミド類を生成させる酵素として知られており(A
gric、 Biol、 Chem、 461165
(1982)参照〕、その具体的利用例として二1−
リルヒドラタゼを有する細菌を用いて炭素数2〜4の二
I・リルから対応するアミドを生成させることが提案さ
れている〔特公昭59−37951号公報、八gric
、 BiolChem、 461183 (1982)
参照)。また、ごれらの菌の培養方法として幾つかの方
法が提案されている〔特公昭61−43996、同61
−43997、同61−43998、同61−4399
9各号公報参照〕。
するアミド類を生成させる酵素として知られており(A
gric、 Biol、 Chem、 461165
(1982)参照〕、その具体的利用例として二1−
リルヒドラタゼを有する細菌を用いて炭素数2〜4の二
I・リルから対応するアミドを生成させることが提案さ
れている〔特公昭59−37951号公報、八gric
、 BiolChem、 461183 (1982)
参照)。また、ごれらの菌の培養方法として幾つかの方
法が提案されている〔特公昭61−43996、同61
−43997、同61−43998、同61−4399
9各号公報参照〕。
□間」1尤−
このような活性を有する細菌を工業的規模で利用するた
めには、細菌を大量に生産しなければならず、そのため
培養槽をビーカースケールのものから適宜スケールアッ
プをする必要がある。
めには、細菌を大量に生産しなければならず、そのため
培養槽をビーカースケールのものから適宜スケールアッ
プをする必要がある。
しかしながら、シュードモナス属に属しニトリルヒドラ
ターゼを産生ずる能力を有する木細菌は、菌体増殖およ
び活性発現のために通気攪拌等により好気的条件下(酸
素供給速度3.5kg−0□7m3・hr程度)で培養
をしなくてはならないが、その培養に容量の大きな培養
槽を使用したところ、所定培養時間での菌濃度、初期活
性が共に低下し、培養槽のスケールアップが満足に行え
ず、ニトリルヒドラターゼ活性の発現が不充分であった
。
ターゼを産生ずる能力を有する木細菌は、菌体増殖およ
び活性発現のために通気攪拌等により好気的条件下(酸
素供給速度3.5kg−0□7m3・hr程度)で培養
をしなくてはならないが、その培養に容量の大きな培養
槽を使用したところ、所定培養時間での菌濃度、初期活
性が共に低下し、培養槽のスケールアップが満足に行え
ず、ニトリルヒドラターゼ活性の発現が不充分であった
。
このような現象が何に起因するのかは定かではないが、
培養中上記酸素供給速度を維持するに際し、培養槽のス
ケールアンプに伴う攪拌翼による剪断力の増大が直接あ
るいは間接的に菌の生育に何らかの影響を与えているも
のと考えられる。
培養中上記酸素供給速度を維持するに際し、培養槽のス
ケールアンプに伴う攪拌翼による剪断力の増大が直接あ
るいは間接的に菌の生育に何らかの影響を与えているも
のと考えられる。
いずれにセよ、この点が解決されなければ本細菌の培養
を工業的に実施することはできない。
を工業的に実施することはできない。
能力を有する細菌を剪断力印加条件−「に培養してニト
リルヒドラターゼ酵素活性を有する細菌菌体を製造する
に際し、培地中に水溶性銅化合物を存在させることを特
徴とするシュードモナス属細菌の培養法である。
リルヒドラターゼ酵素活性を有する細菌菌体を製造する
に際し、培地中に水溶性銅化合物を存在させることを特
徴とするシュードモナス属細菌の培養法である。
羞□束
本発明においては、特に、攪拌翼による培養系の攪拌を
伴う容量の大きな培養槽、例えば500ρ以上の槽で本
細菌の培養を行うに際して、培地に銅イオンを存在さ−
Uると培養成績が著しく向上する。後記実施例に示すよ
うに、7002の培養槽を使用した例においては水溶性
銅化合物を添加する本発明は上記の点に解決を与えるこ
とを目的とし、培養槽の装置的な改造を伴わず、培地に
微量の水溶性銅化合物を添加するという極めて容易且つ
実用的な手段によって、この目的を達成しようとするも
のである。
伴う容量の大きな培養槽、例えば500ρ以上の槽で本
細菌の培養を行うに際して、培地に銅イオンを存在さ−
Uると培養成績が著しく向上する。後記実施例に示すよ
うに、7002の培養槽を使用した例においては水溶性
銅化合物を添加する本発明は上記の点に解決を与えるこ
とを目的とし、培養槽の装置的な改造を伴わず、培地に
微量の水溶性銅化合物を添加するという極めて容易且つ
実用的な手段によって、この目的を達成しようとするも
のである。
すなわち、本発明は、シュードモナス(Pseud。
monas)属に属しニトリルヒドラターゼを産生ずる
位培養液当りのニトリルヒドラターゼ活性は、驚くべき
ことに実に2,35倍に向上した。この水溶性銅化合物
添加による単位培養液当りのニトリルヒドラターゼ活性
の増大は菌体の濃度の増大および菌体自体の活性の増大
に因るものであが、このような水溶性銅化合物の添加効
果は、フラスコ振盪培養等のビーカースケールでの培養
結果からは全く予想し難い特異的なものである。
位培養液当りのニトリルヒドラターゼ活性は、驚くべき
ことに実に2,35倍に向上した。この水溶性銅化合物
添加による単位培養液当りのニトリルヒドラターゼ活性
の増大は菌体の濃度の増大および菌体自体の活性の増大
に因るものであが、このような水溶性銅化合物の添加効
果は、フラスコ振盪培養等のビーカースケールでの培養
結果からは全く予想し難い特異的なものである。
本発明において使用する細菌は、ニトリルヒドラターゼ
活性を有し、ニトリル、特にアクリロニトリルを水和し
て対応アミド、特にアクリルアミ51号公報に記載のシ
ュードモナス・クロロラフイスB23(Pseudom
onas chlororaphis B23) (
微工研条寄第187号およびソニートモナスsp、 P
si(Psaudomonas sp、 PSI)
(微工研条寄第188号〕などを挙げることができる。
活性を有し、ニトリル、特にアクリロニトリルを水和し
て対応アミド、特にアクリルアミ51号公報に記載のシ
ュードモナス・クロロラフイスB23(Pseudom
onas chlororaphis B23) (
微工研条寄第187号およびソニートモナスsp、 P
si(Psaudomonas sp、 PSI)
(微工研条寄第188号〕などを挙げることができる。
これら両画の詳細は同公報に記載されている。
一丞】11測」2制御□
本発明において使用する水溶性銅化合物としては、銅の
無機塩、有機酸塩、錯塩等が代表的なものであり、具体
的には、塩化銅、硫酸銅、硝酸銅、酢酸銅、酒石酸銅、
銅(IT)アセチルアセトナート、銅(II )EDT
^等が挙げられる。これらは単独Gこあるいは混合して
使用してもよく、培地中に銅換算で0,5〜5mg/j
2程度、好ましくは1〜3mg/ρ程度存在させればよ
い。
無機塩、有機酸塩、錯塩等が代表的なものであり、具体
的には、塩化銅、硫酸銅、硝酸銅、酢酸銅、酒石酸銅、
銅(IT)アセチルアセトナート、銅(II )EDT
^等が挙げられる。これらは単独Gこあるいは混合して
使用してもよく、培地中に銅換算で0,5〜5mg/j
2程度、好ましくは1〜3mg/ρ程度存在させればよ
い。
基1
本発明の培養は、通常5002以上の培養槽を用い、ニ
トリルヒドラターゼ活性を有するシュードモナス属細菌
をグルコース、フラグI・−ス、シュクロース、デキス
トリン、グリセリン、エタンラム、尿素などの窒素源、
酵母エキス、肉エキス、麦芽エキス、カゼイン分解物、
ペプトンなどの有機栄養源、リン酸塩、マグネシウム塩
、カリウム塩、鉄塩、その他の微量金属塩などの無機栄
養源、さらに酵素誘導剤としてアクリルアミド、メタク
リルアミド、クロトンアミド、n−ブチルアミド、プロ
ピオニトリル、イソブチロニ1−リル、プロピオンアミ
ドおよびイソブチルアミドなどを含有する培地に接種し
、水溶性銅化合物の存在下に好気的条件にて行う。
トリルヒドラターゼ活性を有するシュードモナス属細菌
をグルコース、フラグI・−ス、シュクロース、デキス
トリン、グリセリン、エタンラム、尿素などの窒素源、
酵母エキス、肉エキス、麦芽エキス、カゼイン分解物、
ペプトンなどの有機栄養源、リン酸塩、マグネシウム塩
、カリウム塩、鉄塩、その他の微量金属塩などの無機栄
養源、さらに酵素誘導剤としてアクリルアミド、メタク
リルアミド、クロトンアミド、n−ブチルアミド、プロ
ピオニトリル、イソブチロニ1−リル、プロピオンアミ
ドおよびイソブチルアミドなどを含有する培地に接種し
、水溶性銅化合物の存在下に好気的条件にて行う。
培地のp++は6〜9程度、好ましくは7〜8程度、培
養温度は20〜37°C程度、好ましくは25〜30°
C程度、通気条件は0.5〜1.Ovvm程度、培養時
間は1〜3日程度で充分である。
養温度は20〜37°C程度、好ましくは25〜30°
C程度、通気条件は0.5〜1.Ovvm程度、培養時
間は1〜3日程度で充分である。
なお、培養系に与えられる剪断力に関し、該剪断力は培
養槽の容量の増大、これに伴う攪拌翼径の増大により大
きくなるが、これは−船釣に攪拌翼先端の周速度を指標
として表すことができる。
養槽の容量の増大、これに伴う攪拌翼径の増大により大
きくなるが、これは−船釣に攪拌翼先端の周速度を指標
として表すことができる。
3.0m/sec、 、1000℃槽の場合、約3.0
〜4.0m/sec。
〜4.0m/sec。
である。本発明においては、攪拌翼先端の周速度が約2
.5m/sec、以上となるような系において特に有効
である。
.5m/sec、以上となるような系において特に有効
である。
培養終了後の菌体の回収ないし利用、あるいはニトリル
ヒドラターゼの回収ないし利用は、前記特公昭59−3
7951号公報の記載、あるいは後記実施例の記載に従
って行うことができる。
ヒドラターゼの回収ないし利用は、前記特公昭59−3
7951号公報の記載、あるいは後記実施例の記載に従
って行うことができる。
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洟」1グー
下記の前培養条件で生育させたシコ、−トモナス・クロ
ラフイスB−23(微工研条寄第187号〕菌の培養液
4.3リツトルを下記本培養条件で培養してニトリルヒ
ドラターゼ活性を調べた。
ラフイスB−23(微工研条寄第187号〕菌の培養液
4.3リツトルを下記本培養条件で培養してニトリルヒ
ドラターゼ活性を調べた。
(1)菌の培養
■前培養条件
培地組成:ペプトン5g/2、酵母エキス3g/ 1麦
芽工キス3g/ 12 、グルコース5g/ j2pH
7,2 培養温度 :25’C 通気、撹拌: Ivvm、200rpm培養時間 :2
4時間 培養槽容量 : 2ON (245φ×45OL)培養
仕込液量=13! 攪拌翼:6枚ディスクタービン付平型攪拌翼(115φ
)1段 へ ■本培養条件 培地組成:ンユークロス30g/ 1.、味液20g/
I!。
芽工キス3g/ 12 、グルコース5g/ j2pH
7,2 培養温度 :25’C 通気、撹拌: Ivvm、200rpm培養時間 :2
4時間 培養槽容量 : 2ON (245φ×45OL)培養
仕込液量=13! 攪拌翼:6枚ディスクタービン付平型攪拌翼(115φ
)1段 へ ■本培養条件 培地組成:ンユークロス30g/ 1.、味液20g/
I!。
メタアクリルアミド9.5g/β
MgSO4・711201g/iV、、Fe50..7
+1200.05g/ E 、K2HPO41g/ l
K1−12P0.1g/l Cu5Oz ・51120 5mg/ l1pl+7.
8 培養温度 :25°C 培養時間 =48時間 培養槽容量 ニア00ρ(800φx 1560L)培
養仕込液量:5ooz 攪拌翼二6枚ディスクタービン付平型攪拌翼(260φ
)2段 (2)ニトリルヒドラターゼ活性の測定培養液0.1
mlと1/20 Mリン酸緩衝液(pH7,7)4.9
0m1とを混合し、これにさらに5.0重量%のアクリ
ロニトリルを含む1/20Mリン酸緩衝液(pH7,7
)5 mlを加えて、10°Cで10分間反応させ、菌
体を濾別してからガスクロマトグラフィーで生成したア
クリルアミド(AA)を定量することにより行った。
+1200.05g/ E 、K2HPO41g/ l
K1−12P0.1g/l Cu5Oz ・51120 5mg/ l1pl+7.
8 培養温度 :25°C 培養時間 =48時間 培養槽容量 ニア00ρ(800φx 1560L)培
養仕込液量:5ooz 攪拌翼二6枚ディスクタービン付平型攪拌翼(260φ
)2段 (2)ニトリルヒドラターゼ活性の測定培養液0.1
mlと1/20 Mリン酸緩衝液(pH7,7)4.9
0m1とを混合し、これにさらに5.0重量%のアクリ
ロニトリルを含む1/20Mリン酸緩衝液(pH7,7
)5 mlを加えて、10°Cで10分間反応させ、菌
体を濾別してからガスクロマトグラフィーで生成したア
クリルアミド(AA)を定量することにより行った。
活性は、比活性(S、A、)および全活性(T、A、)
i、こついて調べた。これらは下記の通りに定義され
る。
i、こついて調べた。これらは下記の通りに定義され
る。
S、A、 :μモルAA/+ng菌体/分子、A、 :
μモルAA/mE培養液/分i笠貰 本培養培地にCu5Oa・511□0を添加しなかった
以外の条件は上記実施例と同一条件にて培養を行った。
μモルAA/mE培養液/分i笠貰 本培養培地にCu5Oa・511□0を添加しなかった
以外の条件は上記実施例と同一条件にて培養を行った。
培養時間48時間後の培養結果は表−1に示す通りであ
った。
った。
表−1
Claims (1)
- シュードモナス(Pseudomonas)属に属しニ
トリルヒドラターゼを産生する能力を有する細菌を剪断
力印加条件下に培養してニトリルヒドラターゼ酵素活性
を有する細菌菌体を製造するに際し、培地中に水溶性銅
化合物を存在させることを特徴とするシュードモナス属
細菌の培養法。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63329333A JPH0822221B2 (ja) | 1988-12-28 | 1988-12-28 | シュードモナス属細菌の培養法 |
AU47053/89A AU616331B2 (en) | 1988-12-28 | 1989-12-21 | Method for cultivation of bacteria of the genus pseudomonas |
DE3943176A DE3943176A1 (de) | 1988-12-28 | 1989-12-28 | Verfahren zur kultivierung von bakterien der gattung pseudomonas |
FR898917347A FR2640996B1 (ja) | 1988-12-28 | 1989-12-28 | |
US07/735,720 US5318908A (en) | 1988-12-28 | 1991-07-26 | Method for cultivation of nitrile hydratase-producing pseudomonas |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63329333A JPH0822221B2 (ja) | 1988-12-28 | 1988-12-28 | シュードモナス属細菌の培養法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02177883A true JPH02177883A (ja) | 1990-07-10 |
JPH0822221B2 JPH0822221B2 (ja) | 1996-03-06 |
Family
ID=18220279
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63329333A Expired - Lifetime JPH0822221B2 (ja) | 1988-12-28 | 1988-12-28 | シュードモナス属細菌の培養法 |
Country Status (5)
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---|---|
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JP (1) | JPH0822221B2 (ja) |
AU (1) | AU616331B2 (ja) |
DE (1) | DE3943176A1 (ja) |
FR (1) | FR2640996B1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009113654A1 (ja) * | 2008-03-14 | 2009-09-17 | ダイヤニトリックス株式会社 | アミド化合物の製造方法 |
US7749739B2 (en) | 2000-12-20 | 2010-07-06 | Dia-Nitrix Co., Ltd. | Process for producing amide compound using microbial catalyst |
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---|---|---|---|---|
KR100339723B1 (ko) * | 1994-02-01 | 2002-09-25 | 스미또모 가가꾸 고오교오 가부시끼가이샤 | 미생물을사용한아미드화합물의제조방법 |
US5552305A (en) * | 1995-03-30 | 1996-09-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Biocatalytic conversion of azobisnitriles to cyanoamides or diamides using Pseudomonas, Rhodococcus or Brevibacterium |
US5714375A (en) * | 1995-06-05 | 1998-02-03 | Nobl Laboratories, Inc. | Ileal symbiont intracellularis propagation in suspended host cells |
US5885823A (en) * | 1995-06-05 | 1999-03-23 | Nobl Laboratories, Inc. | Lawsonia intracellularis cultivation, anti-Lawsonia intracellularis vaccines and diagnostic agents |
DE60129547T2 (de) * | 2000-03-21 | 2008-04-17 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Verfahren zur kultivierung von mikroorganismen |
MD2342C2 (ro) * | 2001-07-31 | 2004-08-31 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Mediu nutritiv pentru cultivarea bacteriilor din genul Pseudomonas sp. 1 CNM-PsB-01 |
US8834891B2 (en) * | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
US8398994B2 (en) * | 2005-07-15 | 2013-03-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Lawsonia vaccine and methods of use thereof |
US8470336B2 (en) * | 2006-05-25 | 2013-06-25 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Vaccination of young animals against Lawsonia intracellularis infections |
EP2200643B1 (en) * | 2007-09-17 | 2013-09-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | A live lawsonia intracellularis vaccine administered in combination with an antibiotic for use in the treatment of lawsonia intracellularis infections in pigs |
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---|---|---|---|---|
JPS594987B2 (ja) * | 1980-09-30 | 1984-02-02 | 日東化学工業株式会社 | ニトリラ−ゼ活性の高い細菌菌体の製造法 |
JPS5937951B2 (ja) * | 1981-11-18 | 1984-09-12 | 秀明 山田 | アミドの生物学的製造法 |
JPS5991879A (ja) * | 1982-11-16 | 1984-05-26 | Hideaki Yamada | シユ−ドモナス属細菌の培養法 |
JPS59130182A (ja) * | 1983-01-10 | 1984-07-26 | Hideaki Yamada | シユ−ドモナス属細菌の培養方法 |
JPS6083580A (ja) * | 1983-10-13 | 1985-05-11 | Hideaki Yamada | シユ−ドモナス属細菌の培養方法 |
JPS6083581A (ja) * | 1983-10-13 | 1985-05-11 | Hideaki Yamada | シユ−ドモナス属細菌の培養法 |
US4629700A (en) * | 1983-11-30 | 1986-12-16 | Standard Oil Company (Indiana) | Selective conversion of cyano compounds to amides and carboxylic acids |
JPS60153798A (ja) * | 1984-01-20 | 1985-08-13 | Nitto Chem Ind Co Ltd | 微生物によるアクリルアミド水溶液の製造法 |
-
1988
- 1988-12-28 JP JP63329333A patent/JPH0822221B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-12-21 AU AU47053/89A patent/AU616331B2/en not_active Ceased
- 1989-12-28 FR FR898917347A patent/FR2640996B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1989-12-28 DE DE3943176A patent/DE3943176A1/de not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-07-26 US US07/735,720 patent/US5318908A/en not_active Expired - Fee Related
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7749739B2 (en) | 2000-12-20 | 2010-07-06 | Dia-Nitrix Co., Ltd. | Process for producing amide compound using microbial catalyst |
WO2009113654A1 (ja) * | 2008-03-14 | 2009-09-17 | ダイヤニトリックス株式会社 | アミド化合物の製造方法 |
US8889907B2 (en) | 2008-03-14 | 2014-11-18 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Process for production of amide compounds |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2640996A1 (ja) | 1990-06-29 |
AU4705389A (en) | 1990-07-05 |
US5318908A (en) | 1994-06-07 |
FR2640996B1 (ja) | 1994-09-09 |
DE3943176A1 (de) | 1990-07-19 |
AU616331B2 (en) | 1991-10-24 |
JPH0822221B2 (ja) | 1996-03-06 |
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