JPH02174681A - 組換え体遺伝子対 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、単核細胞に抗体型の特異性を賦与するように
改作されている岨換え体ＤＮＡの遺伝子対に関する。種
々の型の細胞、例えばキラーＴａｌ胞、ヘルパーＴＭ胞
、サプレッサーＴ細胞、リンフ才力イン−活性化細胞及
びナチュラルキラー細胞のようなリンパ球がこれに適し
ている。

遺伝子対は、細胞レセプターの恒常領域をコーシしてい
るエキソン群を含むデノム切片からなる１つの遺伝子と
、特定の抗体のＨ鎖とＬ鎖をコーｖしているリーダー再
配置変化領域及び結合部のエキソンを含む遺伝子断片を
含むもうひとつの遺伝子からなっている。

ターに関する。該細胞は、該遺伝子対を持った単一ベク
ターで形質転換されることもあれば、それぞれ該遺伝子
対の１つを持っている２つの異なるベクターで形質転換
されることもある。

本発明は、さらにそれらの発現が得られるように該遺伝
子対を導入した上記の定義による型の細胞及びこのよう
な細胞の効果的な址を含む予防的並に治療的組成物にも
関する。

一般的に述べると、本発明はＴｉ胞レしゾタ−（Ｔ（Ｒ
）のキメラ遺伝子を含む１また２この発現ベクターで形
質転換したリンパ細胞の生成のための工程に関するもの
である。以下く詳述する如く、形質転換に用いられ、機
能的にキラーＴａ胞において発現されたベクターを含む
モデル系を構築した。

抗原に加えて、自己主要組織適合抗原系（ＭＨりが同時
に認識されることによって被る諸制約のために、ＴＱＲ
遺伝子を移植することによって新しい特異性を獲得する
ことは、ｉｎ　ｖｉｔｒｏまた１ｎｆｉＶ。

における近親交配系の組合せにおける実験に限られてい
る。このような（移植）操作は、遠縁交配系集団では、
事実上不可能である。

発明の背景 抗体と異なり、Ｔ細胞は、主要組織適合抗原系（ＭＨＯ
）の産物との関連においてのみ、抗原を認識する。この
ような二重認識は、ＴＣＲを構成するα及びβ鎖の両方
の変化領域の組み合せによって媒介される。最近、Ｔ細
胞にα及びβＴＣＲ鎖をコーげするりａ−ニングを行っ
た遺伝子のＤＮＡ媒介による伝達によって、Ｔ細胞に選
択性を与えることが可能とｔｃつた。−船釣に、Ｖβが
ＭＨＯ特異性に対する原因となっているものと意味づけ
されてはいるけれども、定義された特異性を示すためＫ
は、与えられｙ、ｚ’ｒｃＲのα及びβ鎖の２量体とし
ての発現が必要であった。（ＳａｉｔＯら、Ｎａｔｕｒ
ｅ　３２９発明の要約 上に述べた制約を克服するために、そしてあらかじめ設
定した望ましい特異性を持ったＴ細胞を意のま＼に設計
することが出来るために、抗体型特異性をもったＴ細胞
が構築された。ここに詳述するように、発明はさまざま
な細胞の種類に広く適用される。

抗体と７０１分子の間の構造と組織についての広範な類
似性に基いて、ＴＣＲの変化領域を抗体の変化領域で、
結果として機能的キメ−）　ＴｃＲが生ずるような仕方
で置きかえることが可能であろうと仮定した。本発明に
よれば、ＭＨＯによって制約を受けない形で抗原を認識
するキメラＴＣＲを構築、発現し、Ｔ細胞活性化のため
の、膜を貫いてシグナルを効果的に伝達することが可能
である。

本発明にしたがって、Ｔ細胞レセプタ−（Ｔ（！Ｒ）の
α鎖とβ鎖の恒常領域エキソンと抗−ＴＮＰ抗体のＶＨ
とＶＬの遺伝子切片を用いて組み換えを行うことによっ
て、Ｔ細胞のキメラレセプター遺伝子が構築された。細
胞傷害性ハイプリＶ−マへと形質転換した後、新しいＴ
細胞レセプターの発現が検知されＴこ。キメラレセプタ
ーは、イディオタイプに対重／る抗体を示し、Ｔ細胞に
ＭＨＯで制約を受けないＴａ胞抗ＴＮＰ反応性を与えた
。このモデル系は、抗体様結合部位を持ったキメラＴｃ
Ｒを設計することができ、種々のＴ細胞中に機能的に発
現され得ることを示している。この操作は、このような
特異性がモノクローナル抗体によってアラかじめ定義で
きることを条件とすれば、どのような望ましい特異性を
持ったＴａ胞も思いのままに設計するための、新規の方
法を提する。

本発明の種々の姿には、あるベクターにおける導入と、
発現のための適切な遺伝子対、細胞（上記定義にしたが
ってＴ細胞その他）をあらかじめ設定した抗原に対する
特異性で強化するために、形質転換するのに、このよう
なベクターを用いることがある。本発明は、さらに特定
の疾病の予防と治癒のための医薬組成物に関するもので
ある。

その他の面は、以後の記述の中で明らかとなる。

上述のように、本発明は、キラーＴ細胞、ヘルパーＴ細
胞、サプレッサーＴＭ胞、リン７オカインー活性比細胞
、ナチュラルキ？　−１ａ胞及びそれに類する細胞の集
団から成るリンパ球に関する。

上述のように、本発明は抗体型特異性を単核細胞に付与
するよう工夫されに組換え体遺伝子対に関する。但し、
該遺伝子は、ａ及びｂである。丁ｒ〔わち、 ａ、　　？細胞レセプター（α、βｌ　　１．δ鎖）の
恒常領域をコーｐするエキンンを含むゲノム切片、ｂ、
　　＃！ｆ異的抗体のＨ鎖及びＬ鎖をコーｐしているリ
ーダーと再配列変化領域と結合部のエキンンを含む遺伝
子切片、そして、該単核細胞は、キ？−Ｔ＃胞、ヘルパ
ーＴ、ｌｆＢ胞、サプレッサーＴ細胞、りンフオ力イン
活性化細胞３ナチュラルキラー細胞、及びそれに類する
細胞の集団からなるリンパ球である。

より好ましい姿にしたがうと、本発明は、その各々が抗
体のＨ鎖またはＬ鎖の再配列変化領域遺伝子につなげら
れにαまたはβ鎖の恒常領域をコードする遺伝子断片を
もった遺伝子対に関する。

Ｔ細胞レセプターは、同じ種の由来でも、異なる種の由
来でもよいことは明らかである。より好ましくは、再配
列された遺伝子切片は、同じ動物種のＴ細胞レセプター
遺伝子ｉｋは別の動物種のＴ細胞レセプター遺伝子のい
ずれかからの抗体分子の結合部位をコードする。その場
合、再配列遺伝子切片は、腫瘍特異性抗原、腫瘍関連抗
原、ウィルス抗原、改変自己抗原、寄生虫抗原、バクテ
リア抗原、糸状菌抗原、自己免疫疾惣型抗原あるいはそ
の他の外来抗原に対して特異的な抗体をコーρする。

さらに、本発明の１つの態様によれば、再配置した遺伝
子切片ト工、ｊ重Ｓ、ｉＭＩ砲の定義された型と反応す
るモノクローナル抗体をコードする。さらに、本発明は
、細胞型の効果的な形質転換のための、上述の組換え体
遺伝子対を含む発現ベクターに関する。このようなベク
ターは、プロモーター、ポリアデニル化部位及び選択マ
ーカーを含むシラスミｈ９構造であってもよい。本発明
によれば、プラスミド？は、Ｐプラスミドが、ｐＲＳＶ
２やＰプラスミドが、ｐＲＳＶ３であることがより好ま
しい。より好ましくは１対の発現ベクターが使用され、
その１つはＴ細胞レセプターのα−またはβ鎖の恒常領
域をコーシしている遺伝子切片ととも忙抗体のＬ鎖の変
化領域なコーｖしている再配列遺伝子切片がクローニン
グされている１つの選択１−カー〔（ｆＩｌえばｎθ０
ハネオマイシン耐性）〕をもった７°２スミρを含み、
最初のベクター中に使用されている鎖に対して補足的な
Ｔ細胞のレセプター鎖（βまたα）の恒常領域の遺伝子
断片とともに、抗体のＨ鎖の変Ｃヒ領域をコードしてい
る再配置遺伝子がクローンされている２番目のベクター
は、別の選択マーカー〔狗えばｇｐｔ　（グルタミン酸
ピルビン酸トランスアミナーゼ〕〕を含んでいる。

本発明は、さらに上に定義したように、１対のキメ２遺
伝子を含む単核細胞に関る。

さらに、本発明のもう１つの姿は、患者から採取され、
ｉｎ　Ｖｉｔｒｏで増殖させ、上述のような遺伝子対、
また上に定義したようなベクターで形質転換させたリン
パ球を活性成分として含む、必要なとき患者を治療する
組成物に関する。

さらに、もう１つの姿は、本発明にしたがっ゛Ｃ発現ベ
クターを生産する工程、及び望ましい抗原に対するモノ
クローナル抗体を産生するハイプリＰ−マを選択するこ
とを含む、再配置したＶＬとＶＨエキソンを含む制限酵
素分解ＤＮＡ断片からゲノムライブラリーを構築し、全
長にわたって再配置したＶＬとＶＨエキンンを持ってい
るクローンを単離し、それからリーダーエキンンと再配
置したＶＤ軸とＶＪＬエキソンを含むＤＮＡ切片を単離
し、それらの各々をｎｅＯＲまたはｇｐｔ選択マーカー
を含む発現ベクターにサブクローモングを行い、同じベ
クターのそれぞれに、■Ｄ□ま７Ｃ４ＪＬの３′に恒常
領域エキソンのすべてを含むゲノム断片のいずれか１つ
を、そして５′の隣に胎児ＤＮＡライブラリ−から単離
されたＴ細胞レセプターのα及びβ鎖の非翻訳領域を挿
入することを含む、遺伝子対形成を行い、その結果、そ
の各々かＨｅｏ　　　ｉ　７Ｌはｐｇｔ選択マーカーの
いずれかを含む発現ベクターの１つにクローンさｔｌｙ
ｒｃ　ＶＨＣα、　ＶＬＣβ、　Ｖγ、Ｃａ　。

ＶＨＯβからなる１組のキメラ遺伝子を得ることに関す
るものである。

発明の１つの姿は、１つのプラスミドはＬ鎖の変化領域
と他のαまたはβの恒常領域、そしてもう１方のプラス
ミｙｈｓ、、ａ鎖の変化領域とαまたはβの恒常領域の
他方を含む２つのシラスミｒの組合せを、Ｔ細胞の形質
転換に用いることに関する。

以下は、上記の一般的原理が実行可能であることと、そ
の適用範囲が広いことを示すモデル実験の記述である。

本発明は、この特定の態様によって、なんら制約を受け
るものではない。

キメラ状のＴＣＲ遺伝子を構築する定め、我々は、それ
ぞれ１つが、Ｓｐ６抗ＴＮＰ抗体のＨ鎖かＬ鎖の再記［
１，Ｖ、とり−ダーのエキソンを含むデノム切片を（０
ｃｈｉら、　ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　８
ｃｉ、　ｒ１８Ａ　。

８０　６３５１−６３５５（１９８３））ＴＯＲのα鎖
か、β鎖のいずれかの恒常領域のエキンンと連結させた
。そのキメラ遺伝子を２ウスデルコーマのゾロモーター
及びＮ８ＯＲかｇｐｔ薬剤耐性抵抗性遺伝子のいずれか
を含むｐプラスミドが、ｐＲＳＶ発現ベクター中に挿入
した。デａトゾラスト融合により、我々は、それぞれの
ベクターをＨ−２Ｄ　細胞により、ＩＬ−２産生及び標
的細胞の特異的殺傷の両方について刺戟−することがで
きる１種のＢＡＬＢ／ｃ由来のＣＴＬハイプリげ一マで
あるＭＤ、４５に導入して形質転換しｙ、、　。（Ｋａ
ｕｆｍａｎｎら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　
ａｃｔ。

ｔｒｓＡ７８　２５。（１２）−２５０７（１９８１）
）薬剤耐性形質転換体から、我々は、キメラ遺伝子（Ｖ
ＨとＶＬプローブを使って〕を転写したバイブＩＪ　）
、Ｉ−マを選択した。１つの鎖を高濃度に産生するクロ
ーンで、それと相補的な鎖と他方の薬剤マーカーを含む
構築物を再び形質転換した。

ミコフェノール酸と０．４１８の両方の存在で成育した
２重形質転換体を、両キメラ遺伝子の転写についてはノ
ナン法で、ま１こＦ３ｐ６イデイオタイプ（２０，５ｍ
Ａｂを用いて）の発現については、イムノプロッティン
グとイムノ沈澱法により確認を行った。キメラ状のレセ
プターの機能的発現は、細胞が、種種の起源のＴＮＰ　
（ヒ細胞及び単独もしくは他の細胞によって提示された
ＴＮＰたん白質抗原に対して、工Ｌ−２産生によって応
答する能力によって評価された。

ＶＬＣａ十ＶＨＣβまたはＶＬＣβ＋Ｖ　［（Ｃａのい
ずれかの組み合せのキメラ状遺伝子のＤＮＡをＭＤ。４
５０ＴＬ　ハイプリｒ−マに移入した後、形質変換体の
ほとんど丁べては、ＶＬＣＣｔ″！たはβ鎖の１．８　
Ｋｂの相補性鎖及びｖ［（Ｃ（：ｔまたはβ鎖の１．９
　Ｋｂの相補性の鎖両方を転写した。［Ｇｒｏｓｅら、
投稿中（１９８８））キメラ状のポリペプチド？の発現
は、細胞溶解物の抗Ｂｐ６イデオタイゾｍＡｂ　２Ｑ、
５を用いたイムノプロット法、または２０．５　！ｔｌ
Ａ１）及び抗ＴＣＲβ８．３サブグループ？　２３．１
　ｍＡｂ　（図１）を用いたイムノ沈＃法によって分析
した。非還元的条件では、抗ｉｄ　ト抗１５’ＴＯＲｋ
”！　８３　Ｋｄ　ドア　７　Ｋｄ　ノ２ツＦ）　ハｙ
　ｖからなる見かけ上の分子量８０　Ｋｄの巾広いバン
ゾと反応した。ある形質転換体では、４２−４５１（ｄ
のパンｒも認められた。しかし、還元後は、イムノプロ
ット中で２０．５　ｍＡｂ　ｖｃより認識されたイディ
オタイプの決定基は破壊され、８０　Ｋｄ複合体は４２
　Ｋｌｉのポリベゾチｒに解離しに０興味あることに、
ＶＨＯｃｔまたはＶＨ　Ｏβの一方のみを受けた形質転
換体も、２０．５イデイオタイプをもっている４２Ｋｄ
＠も８３　Ｋｄ複合体も発現し１こ。

Ｍｄ、４５のハイデリー−マが、そのαβ２着体（Ｂｅ
ａｋｅｒら、　Ｎａｔｕｒｅ　３１６　６０６−６１９
（ｉ９８５））と融合相手であるＢＷ５１４７のβ鎖の
み発現し、（ＬｕｓｔｇａｒｔａｎとＢ８ｈｈａｒ　、
未発表のデータ）そして２０．５イデイオタイプが（抗
ＴＮＰ結合位と同様に）　ＶＨＢｐ６上でだけ発現され
、還元条件下での変性に対して敏感であるという事実を
ともに考慮に入れると、我々は、ＶＨＣｃｔもしくはＶ
□Ｃβ遺伝子を受取った形質転換体においては、キメラ
状の鎖は、自己由来の相補性αまたはβのＴＯＲ鎖と機
能的な２を体を形成することができるところのキメラ鎖
として発現すると結論することができる。２ｉ一体の一
部における鎖は、ジスルフィド結合でつながっておらず
、　５ＤＳ−ＰＡＧＫ中で単独類として移動する。２重
形質転換体が、ＶＬＣａ−ｖ□Ｃβ（または、ＶＬＯｐ
−ＶＦ！Ｏａ）キメラレセプター２量体の外に、キメ２
鎖と相補性の自己由来α及びβ鎖と諸種の対形成結合の
結果生ずるヘテロダイマーも、それらの表面に発現する
可能性が高い。これらの結果、抗−１ｄまたは抗−ＴＣ
Ｒによるメイムノ沈＃ＶＣおいてヨーｒ染色により観察
（れた巾広いパンｒを生じた（図２）。

キメラレセプターが抗体の抗ＴＮＰ特異性及びＴ細胞の
活性化についての膜を貫くシグナルの伝達能力を保持し
ているかどうかを研究する１こめに、我々は、ＴＩＰ比
しであるか、さもなければ、種々撃つ のＴＮＯＰ　−１，ニーん白質抗原の存在下でいろ〆な
刺戟細胞とともに形質転換体をインキュベートした。

図１にはｖＴＪＣβ＋ＶＨＣｃｔキメラ鎖を受取りに形
質転換体の１つであるＧ・２による工Ｌ−２産生の度合
が示されている。Ｇ・２はその表面に、ＢＬ　−４刺戟
細胞に対するその反応性（もとのＭＤ・４５ハイプリＶ
−マのように）によって証明されるように自己由来のＴ
ＣＲもともに発現し７．−、ＭＤ・４５と異なり０．２
ではＡ　−２０（ＢＡＬＢ／ｃＢリンパ＠）または（７
０・２９（ヒトＢリンパ芽球様細胞）と共有結合で結ば
れ７．：ＴＮＰによってＩＬ−２生成の引き金が引かれ
た。その上、ＴＩＰ化たん白質（ＴＮＰ−ＢＩ９Ａ　、
　ＴＮｐ−ＫＬＨ及びその他のような）は可溶形におい
て、Ｇ−２によって工Ｌ−２の産生を刺戟することがで
きに０そして、良い抗原提示細胞であることが知られて
いるＢＡＬＢ／　Ｑ牌細胞、またはＡ・２０細胞の存在
下において、この刺戟はさらに強かった。興味あること
に、ＶＨＣａまたはＶＨＣβキメラ遺伝子のみを受け、
８ｐ６のイディオタイプを発現した形質転換体もＴＩＰ
に応答することができ、８ｐ６のＶＨには、ＴＩＰ結合
部位を構築するのに必要な丁べての情報が含まれている
ことが示された。

まとめて考慮すると、我々の結果は、抗体特異性を表す
キメラＴ細胞遺伝子を用いて形質転換体を構築し、その
機能的発現を行うことが可能であることを明らかに証明
している。この新規の方法は、どのような起原のＴ細胞
に対しても、与えられたーまとめの遺伝子が移入され得
る方法で、ＭＨＯによって制限を受けないやり方で、思
いのままにＴ細胞の特異性を技術操作できるよう拡張す
べきである。このようなＴ細Ｆ＠は、次にそれらの供与
者に戻され、獲得された特異性を発揮することが可能で
ある。このような操作の後、細胞は、ゝ抗体型′丁なわ
ち、自己ＭＭＣ分子によって制約されない新しい特異性
を獲得する。

得られた結果は、同様な方法で、特異的モノクローナル
抗体によって、あらかじめ明確にされている諸種の標的
抗原に向けられる広い範囲の株類の違うキメラ遺伝子を
調製することが可能であることを示している。このよう
な抗原は、ある腫瘍からの腫瘍細胞に見出される抗原、
ウィルス抗原、改変自己抗原、バクテリア、寄生虫、糸
状菌の抗原及び細胞性免疫応答をふり向けることが、患
者にとって有益であり得る他のいかなる抗原であっても
よい。

本発明が、患者自身の細胞を採取し、その増殖を１ｎ　
ｖｔｔｒｏで行い（必要ならば〕あるエフェクター亜集
団（キラー、ヘルパーマタはサプレッサー細胞）を選び
出し、それらに遺伝子工学的に作ったキメラ遺伝子対を
導入することによって、望ましい特異性を賦与すること
を可能にしていることが、本発明の利点の１つである。

このような細胞は、患者に再移殖すると、キメラ遺伝子
によって指示されるように、標的遺伝子に対して機能す
る。

【図面の簡単な説明】

第１図はｖＩ、Ｃβ＋Ｖ□Ｏａで形質転換した細胞系（
０，２）によるＩＴ、−２産生な示すグラフである。 Ｈｒ　−２の産生はｖｘ、−４刺戟体細胞により促進サ
レタ。：Ａ、２０ネズミリンパ腫細胞（Ａ　、　２０）
；トリニトロフェニル化Ａ、２０細胞（Ａ　、　２　［
ｌ　ＴＩＰ化）　：　ＴＮＰ化ウシ血清アルブミンの存
在下のＡ、２Ｄ細胞（Ａ　、　２０　、　ＴＮＰＢ８Ａ
）：　ＴＮＰ化Ｋｅｙｈｏ１θ１１ｍｐθｔ（カサガイ
の一種）シアニンの存在下のＡ、２０細胞（Ａ　、　２
０　ＴＮＰ、ＫＬＨ）　：ネズミ牌細胞単独（牌臓）　
：　ＴＮＰ化牌細胞（牌臓ＴＮＰ化）　：　ＴＮＰ化Ｂ
８Ａの存在下の牌細胞（牌臓ＴＮＰ−Ｂｉ’？Ａ）　：
そしてＴＮＰ化ヒトＢリンパ芽球様細胞（ｔｏｏ　、　
２９　ＴＮＰ化）。 第２図は電気泳動を行ったＴＣＲの抗−１ｄ　（イディ
オタイプ）と抗ＴＣＲ抗体によるイムノ−／”ａットを
示す図である。

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. （１）キラーＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレツサーＴ
   細胞、リンフオカイン活性化細胞及びナチユラルキラー
   細胞の集団からなるリンパ球から選ばれた単核細胞に抗
   体型の特異性を付与するように改作された組換え体遺伝
   子対であつて、その場合の遺伝子が （ａ）Ｔ細胞レセプター（α、β、γ、δ）の恒常領域
   をコードするエキソンを含むゲノム切片。 （ｂ）特異的抗体のＨ鎖とＬ鎖をコードするリーダー、
   再配置された変化領域と接合部のエキソンを含む遺伝子
   切片である、上記組換え体遺伝子対。
2. （２）１つが抗体のＨ鎖またはＬ鎖の再配置変化領域の
   遺伝子断片の一方とつなげられており、２番目がその他
   方の鎖とつなげられているαまたはβ鎖の恒常領域をコ
   ードしている遺伝子切片をもつた、特許請求の範囲第１
   項による遺伝子対。
3. （３）Ｔ細胞レセプターが、同じ種のものである特許請
   求範囲第１項または第２項による遺伝子対。
4. （４）Ｔ細胞レセプターが、異なる種のものである特許
   請求の範囲第１項または第２項による遺伝子対。
5. （５）再配置遺伝子切片が、Ｔ細胞レセプター遺伝子と
   同じ種から、または別の種からの抗体分子の結合部位を
   コードする特許請求の範囲第１項から第４項迄のいずれ
   かによる遺伝子対。
6. （６）再配置した遺伝子切片が、腫瘍特異抗原、腫瘍関
   連抗原、ウィルス抗原、改変自己抗原、寄生虫抗原、細
   菌抗原、糸状菌抗原、自己免疫疾患型抗原、もしくは他
   の外来抗原に対して、特異性がある抗体をコードする特
   許請求の範囲第１項から４項迄のいずれかによる遺伝子
   対。
7. （７）再配置遺伝子切片が、定められた型の癌細胞と反
   応するモノクローナル抗体をコードする特許請求の範囲
   第６項による遺伝子対。
8. （８）特許請求の範囲第１項において、記述の通り、実
   質的に定義される組換え体遺伝子対。
9. （９）特許請求の範囲第１項から第８項のいずれかにお
   いて請求されている、組換え体遺伝子対を含む、細胞型
   の効率的な形質転換のための発現ベクター。
10. （１０）プロモーター、ポリアデニル化部位及び薬物選
    択マーカーを含むプラスミド構造である、特許請求の範
    囲第９項によるベクター。
11. （１１）プラスミドが、ｐＲＳＶ２またはｐＢＳＶ３で
    ある特許請求の範囲第１０項によるベクター。
12. （１２）１つのベクターが、Ｔ細胞レセプターのαまた
    はβ鎖をコードしている遺伝子切片とともに、抗体のＬ
    鎖の変化領域をコードしている再配置遺伝子切片がクロ
    ーンされている一つの選択マーカーをもつた（例えばｎ
    ｅｏ＾Ｒ）プラスミドから成り、２番目のベクターが上
    述の如く最初のベクター中で用いられたＴ細胞レセプタ
    ー鎖に対して補足的であるＴ細胞レセプター（βまたは
    α鎖）の恒常領域の遺伝子切片とともに、抗体のＨ鎖の
    変化領域をコードしている再配置遺伝子切片がクローン
    されている別の選択マーカー（例えばｇｐｔ）を含む特
    許請求の範囲第９項と第１０項による望ましい細胞型へ
    の効率的な形質転換のための１対の発現ベクター。
13. （１３）特許請求の範囲第１項から第１２項迄のいずれ
    かによるキメラ遺伝子対を含む単核細胞。
14. （１４）特許請求の範囲第１項によるリンパ球集団から
    なる特許請求の範囲第１項から第１２項迄のいずれかに
    よる１対のキメラ遺伝子を含む単核細胞。
15. （１５）改変リンパ球で処置される患者から得られ、こ
    の患者に再接種される 特許請求の範囲第１４項による単核細胞。
16. （１６）改変リンパ球で処置される患者から得られ、患
    者に再適用される特許請求の範囲第１１項のリンパ球。
17. （１７）抗体の特異的標的抗原のみを認識し、自己主要
    組織適合抗原系複合体分子によつて制約を受けないＴ細
    胞キメラレセプターをもつているリンパ球。
18. （１８）患者から採取され、￥ｉｎ￥　￥ｖｉｔｒｏ￥
    で増殖させ、特許請求の範囲第１項から第８項迄のいず
    れかによる遺伝子で、または特許請求の範囲第９項から
    第１２項のいずれかにおいて請求されているベクターで
    形質転換されたリンパ球の有効量を活性成分として含有
    する患者を治療するための医薬組成物。
19. （１９）特許請求の範囲第９項から第１２項のいずれか
    による発現ベクターの製造方法および同第１〜８項の遺
    伝子対の構築方法であつて、望ましい抗原に対するモノ
    クローナル抗体を産生するハイブリドーマを選ぶこと、
    Ｖ＿Ｌ及びＶ＿Ｈの再配置エキソンを含む制限酵素によ
    るＤＮＡ断片からゲノムライブラリーを構築し、再配置
    Ｖ＿ＬとＶ＿Ｈエキソンの全長をもつているクローンを
    単離し、それらからリーダーエキソンと再配置したＶＤ
    Ｊ＿ＨとＶＪ＿Ｌエキソンを含むＤＮＡ切片を単離し、
    そして、それらの各各をｎｅｏ＾Ｒまたはｇｐｔ選択マ
    ーカーを含む発現ベクターにサブクローンし、同じベク
    ターのそれぞれに、ＶＤＪ＿ＨかＶＪ＿Ｌに対し３′の
    位置に恒常領域のエキソンのすべてを含むゲノム断片の
    いずれか１つ、そして胎児ＤＮＡライブラリーから単離
    したＴ−細胞のαとβ鎖の非翻訳領域を、隣接して５′
    に挿入することからなり、その結果、その各々がｎｅｏ
    ＾Ｒまたはｇｐｔ選択マーカーのいずれかを含む発現ベ
    クターの１つにクローンされているＶ＿ＨＣ＿α、Ｖ＿
    ＬＣ＿β、Ｖ＿ＬＣ＿α、Ｖ＿ＨＣ＿βから成るキメラ
    遺伝子の一組を得る、上記方法。
20. （２０）１方のプラスミドは、Ｌ鎖の変化域及びαまた
    はβの恒常域のいずれかを含み、他方のプラスミドは、
    Ｈ鎖の変化域とβまたはαの恒常域のいずれかを含む２
    つのプラスミドの組合せがＴ細胞の形質転換に用いられ
    る特許請求の範囲第１９項の方法。