JPH0213398A - 体液のエステル分解作用及び/又はタンパク質分解作用を有する内容物を比色定量するための、担体に結合した多成分検出系 - Google Patents
体液のエステル分解作用及び/又はタンパク質分解作用を有する内容物を比色定量するための、担体に結合した多成分検出系Info
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Abstract
め要約のデータは記録されません。
Description
質分解作用を有する内容物を比色定量する几めの、相体
結合の多成分検出系に関する。
を有する内容物の検出は極めて1要になっている。特に
腎及び泌尿生殖器路の疾患の診断にとって、尿中の白血
球に内在するエステル分解作用及び/又はタンパク質分
解作用に基づいて白血球を検出することはム要である。
臀利であることが明らかになつ九。それというのもこの
検出系を試験すべら液体試料中に短時間浸漬すればよく
、引続いて試験片倉試料から取り出しt後で試料1μ!
当シの白血球数の測定が例えば呈色に基づいて短時間内
に可能でらる刀1らであ′る。この=うにして、体液中
のその工うな内容物を検出する九めの清潔で簡単刀1つ
迅速な実施が、この九めに試料を用いて煩雑で、時間及
び経費のか刀)る操作おるいは試料のその工うな処理を
行なう必要もなく可能でおる。
及び/又はタンパク質分解作用の内容物を比色定量する
ための有利な検出系としては、技術水準からとυわけ所
謂多成分系が公知である。これは、数種の化学物質ニジ
成る工りな試薬系で、化学物質のうち少なくとも1種は
体液のエステル分解作用及び/又はタンパク質分解作用
の内容物にニジ変化して、反応生成物か検出系の1つの
成分と又は数種の他の成分との遂次反応において反応し
て着色物質が生成し、これを比色定量することができる
。形成され九着色物質の1が試料中のエステル分解作用
及び/又はタンパク質分解作用を有する内容物の量の尺
度でおる。
はタンパク質分解作用’klirする内容物の検出には
、初めにエステルが検出すべき内容物にニジ分解されか
つ生成したヒドロキシル基が他の反応性物置にLυ反応
して色素?形成する2成分系が特に好適である。例えは
、この原理による相体結合の多成分系はヨーロッパ特許
公開第0 039 880号明細書から公知である。
液中のエステル分解作用及び/又はタンパク質分解作用
を有する内容物を測定する九めの、担体結合の検出系に
関し、この系では前記の内容物に=夛分解可能なエステ
ルと、エステル分解にLり生成したヒドロキシ化合物の
ための反応成分としてのジアゾニウム塩とが一緒に同一
の試薬担体上に施されている。検出系の全成分が同一の
試薬担体上に一緒に存在することは、エステル分解作用
及び/又はタンパク質分解作用の内容物との反ff1K
ニジ生成し次物質r史尺反応さセで呈色最終生成物に変
換させることができる点を明らかに保証するので最適で
ある=うに思われる。
ペースである。前記の検出系の場合、尿中の白血球の検
出限界は約2分後の数値の読みホシの際に尿1μ7当シ
白血球約1,5〜25個である。しかしながら区名にと
っては更に敏感な検出剤上開示することが望ましい。
姻り、検出系によシ表示される数値を読み増るまでの待
ち時間が長いという欠点を伴なわずに、体液のエステル
分解作用及び/又はタンパク質分解作用を有する内容物
を比色定量するための、相体結合の多成分系検出系を数
字的診断の九めに開発するという課題に基づいている。
る別々の試梁相体中に存在すること1%徴とする、体液
のエステル分解作用及び/又はタンパク質分解作用kW
する内容物を比色定量する九めの、冒頭?こ定義した多
成分検出系が見出され九〇 その際、体液のエステル分解作用及び/又はタンパク質
分解作用を有する内容物を比色定量する九めの多成分検
出系としては、技術水準からこれについて公知の試薬系
が該尚する。エステル分解作用及び/又はタンパク質分
解作用によシ分解可能なエステルとジアゾニウム塩トに
合可する工うな多成分検出系が特に有利でおることが明
らかになつ九。そのエラな系はとシわけ尿中の白血球を
測定するのに好適であることが明らかになった。更にt
721.、鉄系と水浴液もしくは体液、例えば全血液、
血清、髄液、パンフレアーゼ分泌物又は水性の便浸出物
中のエラスターゼ、キモトリプシン又はトリプシンのよ
うなタンパク質分解m:IAt検出するのに利用するこ
とかできる。
げられている試薬糸を本発明によ)%#C有利に使用す
ることができる。このために、該文献に記載されている
種類の、エステル分服作用及び/又はタンパク質分解作
用にJ:υ分解可能なエステル少なくとも11及びジア
ゾニウム場少なくとも1柚を別々の試薬相体上に施す。
エステル及びジアゾニウム塩と共に、検出系は他の助剤
、例えば緩衝物質、湿潤剤、安定化剤及び/又は賦活剤
を含有していてもよい。このような助剤は、例えばヨー
ロッパ特許公開第0 039 880号明細書からも公
知である。しかしながら助剤は本発明による検出系の成
分を形成するものではない。
きるすべての材料、例えば吸収性か又は膨潤性の、多孔
性か又は非多孔性の材料あるいは被験液体とのa+触の
際にその中に溶けるような材料ケ使用することができる
。例えばセルロース、誰厭、合成繊維フリース、ガラス
繊維フリース、ポリビニルエステルフィルム、ポリアミ
ドフィルム又は例えばキサンタンプム製のフィルムが挙
げられる。
試薬担体中に包含する。検出反応にrI!接化学的に関
与する試薬は、被験液体との接触後に、初めて、少なく
とも部分的にその液体中に溶解することにLり相互に混
合する。その際に、別々の試薬担体は区分されているが
、担体間で液体交換が可能である=うに配置されている
。本発明vCよる相体結合の検出剤の優れた実施形では
、例えばエステル及びノアゾニウム塩のような検出系の
成分をそれぞれき有する試薬相体か上下に重ねられ、堆
積体として配置されている。この試粟指体堆積体ykニ
ジ増り扱い易くするために、この堆積体は例えば剛性シ
ートのようなプラスチック相体上に配置されていてよい
。プラスチック相体上への堆積体の固定は、例えはネッ
ト掛け、側部接着又は試薬相体をプラスチック相体上に
接清さセかつ他の試薬相体を先行の相体上に点接着する
ことに、c!7行なうことができる。被験液体上良好に
吸収さセるためには、そのLうな試薬担体堆積体の王国
例えば空フリース?!−訟けてもよい。
は、ポリエステルフィルム又はポリアミドフィルムの=
うなプラスチックフィルム6るいはセルロースフリース
の1うな吸収性材料が特に好適である。その上に設ける
試薬相体には、例えは織物、半透明の多孔性劇料、透明
のフィルムある鱒は被験液体で溶ける材料が特に有利で
ある。被験液体との接触、例えば七リークな相体結合の
検出剤中への浸漬に!D又は被#液体tに士量投与する
ことにエフ試薬担体中に包含されて釣る検出系成分が少
なくとも一部溶解し、全体的には清心過程で混合し、つ
い艮はエステル分解作用人び/又はタンパク負分解作用
を存する内容物の4仕では検出反応が開始する。
倍以上の感度を示し馬具的でめった。
定食することができる。試料1μ!当り白血球10個以
上の数だと担体結合の検出系で湿潤して1分後艮は既に
読み取りすることができる。
るものではない。
術水準による相体結合の検出糸(第1図): ペーパー7リース23 s L (8ch’1eich
er &8chii11社、西ドイツ国、Da8sel
在)を久の工うに助剤及び検出系の成分で含浸した:a
)水11中に磯酸65g及び水酸化す? IJウム21
9を含有し°刀葛つ1N塩酸で−8,0に肖節し友含浸
浴液で前含浸した。引続いて、含浸し九フリースkit
燥さセた。
ール11中に2−メトキシ−4−(N−モルホリノ)−
ペンゼンーゾアゾニウムーナトラクロロチンケート0.
35 F、3−(N−1ルエンー4′−スルホニル−L
−7ラニルオキシンーインドール0.78.9 、
リン酸トリモルホリド81.3&及びデカノール21.
7mzを官有する溶液で主要含浸を行ない、引続いて乾
燥さセた。
正方形に切断し、このLうに製造し72.試薬相体1【
長さ12.6m、幅6m及び厚さ1鵡のポリスチレン帯
材3上に糸の太さ60μmのナイロンネット2NY75
HO(Ziiricher Beutelfabrik
AG、スイス匡1、チューリッヒ在ンにニジ固定し九。
プラスチック帯材と部分的艮俗着した。
結合の検出系(第1図) ペーパーフリース238 L (8ohleicher
&5chii11社、西ドイツ国、Dasael在)
ヲ次のLうに検出系の助剤及び成分で含浸した:a)水
1ノ中に硼酸65g及び水酸化ナトリウム21.!ii
’?含有しかつ1N墳酸でp)18.0に調節し九含浸
溶液を前含浸した。引続いて、この含浸7リース金乾燥
させた。
エタノール11中に6−(N−トルエン−4′−スルホ
ニル−L−アラニルオキシ)−インドール0.7811
. リン酸トリモルホリド81.3.F及びデカノー
ル21.7dk含有する溶液で含浸し、引続いて乾燥さ
セた。
中に2−メトキシ−4−(N−モルホリノ〕−ペンゼン
ーンアゾニウムーテトラクロロチンケ−) 0.379
及び酒石酸0.229七官有する溶液で含浸し、引続い
て乾燥さセた。
様に第1図による相体結合の検出糸上製造し九〇 C)本発明による検出系(第2囚): ■)ペーパーフリース238Xr (8ch1oich
er& !9ohii11社、西rイッ国、Daase
l在)l−i7のように含浸しfc: a)水11中に硼酸659及び水酸化ナトリウム21g
を含有しかつ1N塩酸でp)i8.0に調節し几含浸溶
液で前含浸した。引続いて、含浸7リースを乾燥さセt
0 b) a)によυ製造した緩衝剤含浸7リースの主要含
浸を、エタノールll中に3−(N−トルエン−41−
スルホニル−L−アラニルオキシ)−インドール0.7
8.5’、 リン酸トリモルホリド81.3g及びデ
カノール21.7d’に官有する溶液で行ない、引続い
て乾燥さセた。
太す20μm ) (Zuricher Beutel
tuchfabrik AG社、スイスキJ、チニーリ
ッヒ在)を1水11中に2−メトキシ−4−(N−モル
ホリノ)−ベンゼンーンアデニウムーテトラクロロチン
ケート5.78g及び酒石1!g12.2511’に含
有する溶液で含浸し、引続いて乾燥さセた。
形に切断しかつ試薬相体1とし7j+> U)で製造し
九ナイロン織物も同じ大きさの正方形に切断しかつ試薬
相体4とした。試薬担体1及び4t−堆積体として、ナ
イロンネット2 NY75HO(糸の太さ60μm )
(Ziirioher Beutal−tuahfa
brik社、スイス国、チューリッヒa)を用いて長さ
12.6cII&、幅6鵬及び厚さ1wMのポリスチレ
ン帯材3上に固定した。ナイロンネットはプラスチック
帯材上で熱時疋約175℃で部分浴着さセ九〇 D)白血球を有沼液は、白血球を含まない尿に血液から
単離した白血球を児えることに工す製造した。検出系の
試験の九めに次の濃度を適用し友:尿1μj当り白血球
0.5,10.20及び40個。
含まない尿試料と白血球を含有する試料中に浸漬しかつ
2分後に色素形成上視覚的に読み取るか又はレミッショ
ン側元法に工す測定した。
果が得られた。
〃)ら2分後では白血球の検t11)限界は試料1μj
当フ白血球数約20−tibff、不発明による検出系
C)では読み試料1μj当υ白血球数5である。
当シ白血球t!1.5という濃度を視覚的にあるいはレ
ミッション?aIJ定に工υ検出することかで龜ho検
出系A)及びB)の場合、この短い時間では検出限界は
白血球数207μEエクも高い。
第2図は不発明に、よる検出系の酩示図である。 1.4・・・試薬m体、2・・・ナイロンネット、3・
・・ポリスチレン帯材。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、検出系の成分が、相互間で液体交換を可能にする別
々の試薬担体中に存在することを特徴とする、体液のエ
ステル分解作用及び/又はタンパク質分解作用を有する
内容物を比色定量するための、担体に結合した多成分検
出系。 2、成分としてエステル分解作用及び/又はタンパク質
分解作用により分解可能なエステル少なくとも1種及び
ジアゾニウム塩少なくとも1種が別々の試薬担体上に施
されている請求項1記載の検出系。
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