JPH01311080A - リパーゼおよびエステラーゼによるエステル化およびエステル開裂方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 不飽和糖は例えば糖複合体、二糖、オリゴ糖、２−デオ
キシ糖、アミノ糖、トロンボキサン類並びにコンパクチ
ンのラクトン部分の製造のような化学合成におけるビル
ディングブロックとして広く使用されている。

これらの合成に必要とされる不飽和糖の位置選択性変換
および修飾はしばしば有機化学において問題を投げかけ
そして困難または複雑な反応順序を必要とする。多数の
ヒドロキシル基の位置選択性的の化学反応によるアシル
化はアシル基の導入に時間がかかりかつその後に特定の
保護基の除去を必要とする。

位置選択性エステル化およびエステル開裂が選択された
リパーゼを用いて単純な飽和糖の第１ヒドロキシル基に
おいて遂行されうろことは知られているＩ：Ｔｈｅｒｉ
ｓｏｄ　Ｍ、、　Ｋ１１ｂｏｎｏｖ　Ａ、　Ｍ、。

Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　１０８．５６３
８　（１９８６）、　Ｋｌｏｏｓ−ｔｅｒｍａｎ　Ｍ、
　ｅｔ　ａｌ、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅ
ｒｓ　２８゜２９８９（１９８７）参照）　６　Ｔｈｅ
ｒｉｓｏｄ氏およびＫｌｌｂａｎｏｖ氏により記載の諸
反応は大過剰の酵素および少なくとも２日間の反応時間
を必要とし、しかも転化率は通常５０％以下である。

Ｓｗｅｅｒｓ氏およびＷ２Ｏ３氏は２．３．４．６−テ
トラ−０−アシルーＤ−ヘキソピラノシドから６−ＯＨ
誘導体を得る位置選択性酵素開裂について記載している
。しかしながら、それらのアシル基は長鎖エステルであ
る。

ＫｌｏｏｓＬｅｒｍａｎｎ氏はメチル２．３．４．６−
チトラーＯ−アセチルーａ−Ｄ−グルコピラノシドの位
置選択的脱アセチル化について記載している。

単糖類ペンタアセテートの酵素エステル開裂は種々の位
置異性体の複合混合物をもたらす。

すなわち５ｈａｖ氏およびＫｌｌｂａｎｏｖ氏（Ｂｉｏ
ｔｅｃｈ。

Ｂｉｏｅｎｇ、　２９．６４８（１９８７））はダラム
量のグルコース２，３，４．６−チトラアセテート、グ
ルコーストリアセテート特に２，４．６−および３．４
．６−　トリアセテートの混合物並びにグルコース４．
６−ジアセテートを得ている。

本発明によれば不飽和糖がリパーゼおよびエステラーゼ
によって位置特異的または位置選択的にエステル化され
うるか、または条件によってはエステル結合もまた開裂
されうるということが見出された。これは酵素が特定の
基質とのみ反応するということが知られているので特に
予想外である。

不飽和糖はリパーゼに対する新しい基質を意味する。該
糖は飽和糖よりも感受性でありそして相異なる空間的構
造およびさらに付加された官能基を有する。このために
これらの反応が行われるかどうかは全く予言され得なか
ったし、そして該反応がこのような経済的方法で実施さ
れうるとは事実予想され得なかっＩ；。

従って、本発明はリパーゼおよびエステラーゼによるエ
ステル化およびエステル開裂の方法に関する。該方法は
下記の一般式Ｉ 〔式中、 ａ）　　Ｒ’、　Ｒ”およびＲ３は（Ｃｒ　〜Ｃｒ　ｏ
　）−アシルオキシ（それらの炭素原子はハロゲンおよ
び／またはアミノおよび／またはメトキシおよび／また
はフェニルおよび／またはフェノキシで置換されうる）
および／またはベンゾイルオキシ（それらの炭素原子は
ニトロおよび／またはハロゲンおよび／または（Ｃ＋お
よびＣ２）−アルコキシで置換されうる）であり、 ｂ）　　Ｒ’、Ｒ”およびＲ１はヒドロキシルであり、
ｃ）　　Ｒ’は保護されたヒドロキシルでありそしてＲ
２およびＲ１は（Ｃ＋〜Ｃ３゜）−アシルオキシおよび
／またはベンゾイルオキシであり、 ｄ）　　Ｒ’およびＲ３は（Ｃ＋〜Ｃ１゜）−アシルオ
キシおよび／またはベンゾイルオキシであり、そしてＲ
２は保護されたヒドロキシルであり、ｅ）　　Ｒ’は保
護されＩ；ヒドロキシルでありモシテＲ２およびＲ３は
ヒドロキシルであり、ｆ）　　Ｒ’およびＲ３はヒドロ
キシルでありそしてＲ２は保護されたヒドロキシルであ
り、 ｇ）　　Ｒ’およびＲ２はヒドロキシルでありそしてＲ
３は（０１〜Ｃ１゜）−アシルオキシ、ベンゾイルオキ
シまたは保護されたヒドロキシルでありそして ｈ）　　Ｒ’およびＲ２はアシルオキシおよび／または
ベンゾイルオキシでありそしてＲ３は保護されたヒドロ
キシルであり、 アシルオキシおよびベンゾイルオキシの各々は前記ａ）
に定義のように置換されることができる〕 で表される不飽和糖化合物を使用することからなる。本
発明はまた一般式Ｉにおいて ｉ）　　Ｒ’がヒドロキシルでありモしてＲ２およびＲ
３が（ＣＩ−Ｃｒ。）−アシルレオキンおよび／まｔ二
はベンゾイルオキシであり、 」）Ｒ１およびＲ３が（ＣＩ−Ｃ＋。）−アシルオキシ
および／またはベンゾイルオキシでありモしてＲ２がヒ
ドロキシルであり、 ｋ）　　Ｒ’およびＲ１がヒドロキシルでありモしてＲ
３が（Ｃ＋〜Ｃ１゜）−アシルオキシまたはベンゾイル
オキシであり、 上記アシルオキシおよびベンゾイルオキシの各々は前記
ａ）に定義のように置換されうろことができる化合物並
びにその誘導体にも関する。

本発明はまた中間体としてのこれらの化合物の使用にも
関する。

以下に本発明を特にその好ましい態様について詳記する
。

一般式Ｉの不飽和化合物は購入することができる（グル
カールおよびガラクタール並びにそれらのトリアセチル
化合物：　３．４．６−　トリー〇−アセチルー１．５
−アンヒドロ−２−デオキシ−アラビノ−ヘキセ−１−
エニトールまたは３．４．６−トリー〇−アセチルー１
．５−アンヒドロ−２−デオキシ−リキソ−ヘキセ＝ｌ
−エニトール）かまたは化学合成によって容易に得るこ
とができる（Ｒｏｔｈ　Ｗ、、　Ｐｉｇｍａｎ　Ｗ、、
　　ＭｅｔｈｏｄｓＣａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｃｈｅｍ、
　Ｌ、　４０５（１９６３）参照〕。

一般式Ｉの不飽和糖化合物の保護された誘導体は本質的
にはａ）アセタール好ましくは例えばテトラヒドロピラ
ニルエーテル（ＴＨＰエーテル）、メトキンメチルエー
テル（ＭＯＭエーテル）、メチルチオメチルエーテル（
ＭＴＭエーテル）、２−メトキシエトキシメチルエーテ
ル（ＭＥＭエーテル）、２−　（）リメチルシリル）エ
トキシメチルエーテル（ＳＥＭエーテル）およびｌ−エ
トキシエチルエーテルまたはｂ）エーテル好ましくは例
えばメチルエーテル、ベンジルエーテル、トリメチルシ
リルエーテル、第三ブチルジメチルシリルエーテル、第
三ブチルジフェニルシリルエーテルおよびアリルエーテ
ル並びにＣ）エステル好ましくは例えばアセテート、ク
ロロアセテート、トリフルオロアセテート、ベンゾエー
ト、ピバレート、トリフルオロメタンスルホネート、メ
タンスルホネートおよびトルエンスルホネートである。

アシルオキシは１−１０個好ましくは１〜５個の炭素原
子を有する基であると理解されたい。

これらの炭素原子はハロゲン、アミノ、メトキシ、フェ
ニルおよび／またはフェノキシで置換されうる。ベンゾ
イルオキシはニトロ、ハロゲンおよび／または（Ｃ，お
よびＣＺ）−アルコキシで置換されうる。

本発明では好ましくは微生物からまたは動物の膵臓もし
くは肝臓から得られるリパーゼおよびエステラーゼを使
用することができる。特に好ましいのはプソイドモナス
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ）、ケカビ（Ｍｕｃｏｒ）、リゾプス（Ｒｈ１ｚｏｐ
ｕｓ）、ペニンリウム（Ｐｅｎ　ｉｃ　ｉ　ｌ　］　ｉ
ｕｍ）およびアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
）から並びにブタの肝臓およびブタの膵臓からのリパー
ゼおよびエステラーゼである。これらの酵素は購入する
ことができるかまたは適当な微生物からまたは肝臓もし
くは膵臓から知られた方法で抽出されうる。該反応はま
たその反応に必要な酵素を含有する限り前記微生物の全
細胞を用いて実施されうる。次にある条件下では酵素が
より容易に基質に到達することができるように該細胞を
それ自体知られた方法で浸透性にするのが有利である。

以下に最良の酵素エステル化法を示す。前記化合物１ｂ
、ｅ、ｆまたはｇを溶媒例えば酢酸エチル、ジメトキシ
エタン、テトラヒドロ７ラン、第三ブチルメチルエーテ
ルまたはメチルエチルケトン中に溶解しついでベンゾイ
ルまたはアシル供与体例えばカルボン酸エステル好まし
くはビニルエステル例えばビニルアセテート、ビニルベ
ンゾエート、ビニルクロロアセテート、ビニルメトキシ
アセテート、ビニルフェノキシアセテート、ビニルフェ
ニルアセテート、アミノ酸ビニルエステル（例えば２−
グリシンビニルエステル）もしくはインプロペニルアセ
テートまたはカルボン酸エステルの代りに無水カルボン
酸例えば無水ピバリン酸、無水酢酸および無水安息香酸
を加える。しかしながら、溶媒としてベンゾイルまたは
アシル供与体を同時に使用することもできる。リパーゼ
またはエステラーゼは遊離または固定化形態で加えられ
そしてインキュベーンヨンは０〜８０℃好ましくは１０
〜５０’Ｃ！で実施される。

文献（Ｗ、　Ｈａｒｔｍｅｉｅｒ、　Ｔｒｅｎｄｓ　ｉ
ｎ　Ｂｉｏｒｅｃｈｎｏ−１ｏｇｙ　３　＊　１４９（
１９８５）　；　Ａ、　Ｒｏｓｅｖａｅｒ、　Ｊ、　Ｃ
ｈｅｍ。

Ｔｅｃｈ、　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、　３４Ｂ　、　１
２７（１９８４））に記載の常套法すべてがこれらの酵
素を固定化させるのに適当である。また固定化酵素およ
び遊離酵素はカラム法において使用されうる。

反応時間は不飽和糖の構造および溶解度、温度並びに濃
度比率特に酵素の量に左右される。

該反応時間は０．５時間〜３日であることができるが、
しかし通常は５〜２４時間である。

これらの反応は通常遊離または固定化酵素を例えば炉別
することによって分離し、溶媒および／またはアシル供
与体を真空中で留去しそして必要に応じ結晶化、クロマ
トグラフィーまたは抽出によって生成物を精製すること
で後処理される。

酵素加水分解の場合には前記化合物１ａ、ｃ。

ｄｌ　ｆまたはｈを純粋もしくは溶解された形態で綴衝
水溶液に加えついで所望の酵素を加える。

約４〜８のｐｕ範囲において、一定のＩ）Ｈおよび１）
Ｈ調整なしの両状態で操作することができる。反応の完
了後所望生成物は抽出によって得られるかまたは例えば
濾過もしくはクロマトグラフィーによって酵素および付
随塩を凍結乾燥しついで分離させた後に得られる。

個々の反応は特に最高の反応率および収量を達成しうる
特定の酵素を用いて行うのが有利である。Ｒ’、　Ｒ２
およびＲ３がアシルオキシおよび／またはベンゾイルオ
キシを示す式Ｉａの化合物のエステル開裂はプソイドモ
ナスからのリパーゼまたはエステラーゼで行うのが好ま
しい。反応生成物はＲ１がヒドロキシルを示しモしてＲ
２およびＲ３がアシルオキシおよび／またはベンゾイル
オキシを示す式Ｉｉの化合物である。次にエステル化は
プソイドモナスまたはカンジダのリパーゼまたはエステ
ラーゼを用いて行うのが有利であるか、しかし主要な最
終生成物は相異なる。Ｒ１％Ｒ２およびＲ３がヒドロキ
シルを示す弐ｌｂの化合物をプソドモナスがらの酵素と
ともにインキュベートするとＲ１およびＲ３がアシルオ
キ・ンおよび／まｔ二はベンゾイルオキシを示しモして
Ｒ２がヒドロキシルを示す式Ｉｊの化合物が得られる。

しかしながら、ベンゾイル基のＲ１への転換はおそらく
立体反応のためと思われるが、アシル基の転換よりも遅
いのでプソイドモナスリパーゼを使用しても６−０−モ
ノベンゾエートを生成させうる。Ｒ′およびＲ２がヒド
ロキシルを示し、モしてＲ３がアシルオキシまたはベン
ゾイルオキシである式１にの化合物はカンジダリパーゼ
を用いて得られる。

得られた化合物１ｉ、ｊおよびｋはそれ自体知られた方
法によって前記保護基（Ｔ、　Ｗ、　Ｇｒｅｅ−ｎｅ、
　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇ
ａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。

Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　１９８１参照
）で化学的に誘導体化されついで各有機化学反応におい
ておよび／またはリパーゼおよびエステラーゼによる新
たなエステル化もしくはエステル開裂においてかのいず
れかで使用されうる。すなわち、例えばＲ１が保護され
たヒドロキシル基を示しモしてＲ２およびＲ３がアシル
オキシ基を示す式Ｉの化合物は化学的に製造されついで
該アシル基はリパーゼおよびエステラーゼによってＲ３
かも除去されてＲ３はヒドロキシルを示すようになる。

これらの反応ではカンジダ、プソイドモナス、ケカビお
よび膵臓のリパーゼまたはエステラーゼを使用するのが
好ましい。

化合物１ｊの場合には同様にＲ２に保護基を導入するこ
とが可能である。次にこの型の化合物を好ましくはプソ
イドモナスまたはカンジダからの酵素で処理すると２種
の相異なる生成物が得られる。前者の場合にはＲ１がヒ
ドロキシルであり　Ｒ２が保護されたヒドロキシル基で
ありそしてＲ３がアシルオキシである式Ｉの化合物が得
られ、後者のカンジダリパーゼの場合にはＲ１がアシル
オキシを示し、Ｒ２が保護ヒドロキシル基を示しモして
Ｒ３がヒドロキシル基を示す式■の化合物が得られる。

前記観察から、プソイドモナスリパーゼまたはエステラ
ーゼが式Ｉの化合物中の第２官能基Ｒ皿を優先的に攻撃
するのに対してカンジダリパーゼまたはエステラーゼは
第１官能基Ｒ″を優先的に攻撃するという驚くべき結論
が演鐸される。

酵素エステル化の場合にはまたプソイドモナスリパーゼ
またはエステラーゼの代わりに所望によりケカビ、リゾ
プスおよびペニシリウム種からのリパーゼまたはエステ
ラーゼを使用して式Ｉｂ、ｆ、ｇおよびｉの各化合物中
のＲ１への攻撃に触媒作用をすることができる。式Ｉａ
、ｄ、ｈおよびｊの各化合物中のＲ１における加水分解
についてもそれぞれまた前記とは別のブタ膵臓からのリ
パーゼを使用することができる。

本発明方法の利点はより高い位置選択性を有する予想外
の位置配位にありそしてそれに関連した生成物の均一性
、高い反応率並びに高い収率および容易な後処理にある
。

以下に本発明を実施例によって詳記する。特記しない限
り、％は重量を基準とする。

実施例　１ ６−０−アセチルグルカールの製造 グルカール１．０２２ｇ（７ミリモル）を酢酸エチル２
Ｉ＋ＩＱおよび酢酸ビニル３０ｍ１２中に取り入れ、カ
ンジダシリンドラセ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒ
ａｃｅａ）リパーゼＯＦ（６糖産業社製）をカロえ、そ
の混合物を室温で一夜撹拌した。再使用可能な酵素を分
離しついでクロマトグラフィーまたは結晶化処理を行っ
た後に６−〇−アセチルグルカール１．１２〜１．２５
９（８５〜９５％収率）を得た。

実施例　２ ６−０−アセチル−３−０−ｔｅｒＬ、−ブチルジメチ
ルシリル−グルカールの製造 ３−Ｏ−ｔｅｒｔ、−ブチルジメチルシリル−グルカー
ル１．０９ｇ（５ミリモル）を酢酸エチル約ｌＯｍＱお
よび酢酸ビニル５０〜７ＯｍＱ中に取り入れ、カンジダ
シリンドラセ（シグマ）からのリパーゼ１ｇを加える。

室温で約２０〜２４時間撹拌後、再使用可能な酵素を枦
去した。真空中で濃縮しついでシリカゲルカラム（ヘキ
サンまたはエーテル／ヘキサン　ｖ：ｖ中で）で単純濾
過して所望の６−０−アセチル−３−０−ｔｅｒｔ、−
ブチルジメチルシリル−グルカール１．０〜１．２ｇ（
８０〜９０％収率）を得た。

実施例　３ ６−０−アセチル−４−０−ｔｅｒｔ、−ブチルジメチ
ルシリル−グルカールの製造 ４−Ｏ−Ｌｅｒｔ、−ブチルジメチルシリル−グルカー
ル１．０９９（５ミリモル）を酢酸エチルｌＯ〜２０ｍ
Ｑおよび酢酸ビニル５註〜８０ カンジダシリンドラセ（シグマ）からのリパーゼ１．０
ｇを加える。室温で２０〜２４時間撹拌後、再使用可能
な酵素を枦去しそして溶液を真空中で濃縮した。ついで
エーテル／ヘキサン（約ｌ：ｌｖ：ｖ）中においてシリ
カゲルカラムで単純濾過して６−０−アセチル−４−０
−ｔｅｒｔ、　−ブチルジメチルシリル−グルカール１
．１〜１．２ｇ（８０〜９０％収率）を得た。

実施例　４ ６−０−アセチルガラクタールの製造 ガラクタール１．０９（６，８５ミリモル）を水約１　
ｍＱ中に溶解しそして粉砕したモレキュラーシーブｌ〜
４ｇ、酢酸ビニル２５〜７５ｍＱおよびカンジダシリン
ドラセ（シグマ）からのリパーゼ８０ｋを加えた。この
混合物を室温で約４５分間撹拌した。

乾燥し、濾過し、真空中で濃縮しついでシリカゲル上で
クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン　ｌ：１）
にかけるかまたは結晶化（酢酸エチル／ヘキサンから）
させて所望の６−Ｏ−アセチルガラクタール１．０９０
〜１．１６０ｇ（８５〜９５％）を得た。

実施例　５ ４．６−ジーＯ−アセチルグルカールの製造０．２５Ｍ
燐酸塩緩衝液（ｐＨ−７）　７ＯｒｒｒＱ中に入れたト
リー〇−アセチルグルカール７．０９（３０ミリモル）
をプソイドモナス種からのリパーゼ（リパーゼＰ、大野
製薬会社（名古屋）製）（遊離形態または５ｉ０２上に
固定化された形態）７９とともに室温で撹拌した。反応
完了後（約５〜７時間後）再使用可能な酵素を分離した
。所望の４．６−ジー０−アセチルグルカールは水溶液
をＣＨＯｆｆ　。

もしくは酢酸エチルで抽出することによって得られるか
あるいは凍結乾燥しついで例えば酢酸エチルのような有
機溶媒中に取り入れそして不溶性付随物を枦去した後に
得られた。約９０％収率で得られた４、６−ジーＯ〜ア
セチルグルカールはそれ以上精製しないで次の各反応に
使用されうる。

実施例　６ ３．６−ジー０−アセチルグルカールの製造グルカール
７．３ｇ（５０ミリモル）を酢酸エチル５０Ｉｌｌａお
よび酢酸ビニル１５０Ｉｌｌａ中に取り入れついでプソ
イドモナス種からのリパーゼ（リパーゼＰ、天野製薬社
製）２ｇとともに室温で撹拌した。

反応の完了（ＴＬＣで調査、約４８時間）後、再使用可
能な酵素を枦去しそして溶媒を蒸発させた。

９０％以上の収率で得られた３、６−ジー０−アセチル
グルカールはそれ以上精製しないで合成用に使用されう
る。

実施例　７ ３．６−ジーＯ−アセチルガラクタールの製造ガラクタ
ール１．０９（６，８５ミリモル）を水約１ｍＱ中に溶
解し、粉砕したモレキュラーシーブｌ〜４ｇ、酢酸ビニ
ル２５ルフ５ｍｆ２プソイドモナス種からのリパーゼ（
天野製薬社製）　１．Ｏｙを加え、その混合物を室温で
一夜撹拌した。乾燥し、が過しついでシリカゲルでのク
ロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン　２：３．ｖ
：ｖ）処理を行って３．６−ジー０−アセチルガラクタ
ール１．１−１．２６９（７０〜８０％）を得た。

実施例　８ ３．６−ジーＯ−アセチルグルカールの製造グルカール
１．０２ｇ（７ミリモル）　、Ｈ，ＯＯ，５〜０．７ｍ
Ｑおよび粉砕したモレキュラーシーブ約２ｇを酢酸イソ
プロペニル２５〜５０ｍＱ中に取り入れ、プソイドモナ
ス種からのリパーゼ１ｇを加えそしてその混合物を室温
で２５〜３０時間撹拌した。

濾過しついで真空中で濃縮し、次にシリカゲルでのクロ
マトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン　２：３．ｖ：
ｖ）処理を行って３，６−ジー０−アセチルグルカール
０．９７〜１．０５ｇ（６０〜６５％）を得た。

実施例　９ ３−０−アセチル−６−０−ｔｅｒｔ、−ブチルジメチ
ルシリル−グルカールの製造 酢酸ビニル５−１０＋ｍ（＋中に入れた５　−０−ｔｅ
ｒｔ−ブチルジメチルシリルーグルカール１．０９　（
４ミリモル）をプソイドモナス種からのリパーゼ１．０
ｇとともに室温で３〜４時間撹拌しＩ；。濾過し、濃縮
しついでクロマトグラフィー（ＳｉＯｚ、エーテル／ヘ
キサン　１：３）処理を行って所望の３−〇−アセチル
ー６−０−ｊｅｒｋ、−ブチルジメチルシリル−グルカ
ールを約８５％収率（０，９８〜１．０ｇ）で得た。

実施例　１０ ４−〇−アセチルー６−０−ｔｅｒｔ、−ブチルジメチ
ルシリル−グルカールの製造 ０．１Ｍ燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝　７　）１０ｍＱ
中に入れｆ二３．４−ジーＯ−アセチル−５−０−ｔｅ
ｒｔ。

−ブチルジメチルシリル−グルカール１．０３ｇ（３ミ
リモル）をＳｉＯ□上に固定化されたリパーゼＰまたは
リパーゼＦｐ（天野製薬社製）０．５〜１．ｈとともに
室温で撹拌した。反応完了（５〜８時間）後、固定化さ
れた再使用可能な酵素を分離した。

所望の４−〇−アセチルー５−０−ｊｅｒｔ、−ブチル
ジメチルシリル−グルカールは、その水溶液をクロロホ
ルムまたは酢酸エチルで抽出することによってまたは凍
結乾燥しついでシリカゲル上でクロマトグラフィー（エ
ーテル／ヘキサン　ｌ：２）処理を行った後に８２％収
率で得られｊこ。

実施例　１１ ３−０−アセチル−６−０−ベンゾイルグルカールの製
造 ６−０−ベンゾイルグルカール１．０９　（４ミリモル
）を酢酸ビニルｌＯ〜２０１１１１２中に取り入れつい
でリパーゼ（プソイドモナス種）１ｇとともに室温で５
時間撹拌した。酵素を枦去し、そして結晶化させるかま
たはシリカゲル上でクロマトグラフィー（酢酸エチル／
ヘキサン　ｌ：１）処理を行って３−０−アセチル−６
−０−ベンゾイルグルカールを８８〜９４％収率（１，
０３〜１．１０ｇ）で得　ｌこ　。

実施例　１２ ３−０−アセチル−６−０−ベンゾイルグルカ−ルの製
造 ６−０−　ヘンゾイルガラクタール１．０９　（４ミリ
モル）をジメトキシエタン（ＤＭＥ）　１０〜１５＋＋
＋＋２８よび酢酸ビニル２０〜２ＳｍＱ中に取り入れ、
リパーゼＰ　　１ｇとともに室温で８時間撹拌した。酵
素を枦去しついで結晶化させるかまたはシリカゲル上で
クロマトグラフィー（エーテル／ヘキサン　１：１）処
理を行って３−０−アセチル−６−Ｏ−ペンゾイルガラ
クタールを８０〜８５％収率で得た。

実施例　１３ ６〜Ｏ−アセチル−３−０−クロロアセチル−グルカー
ルの製造 ６−０−アセチルグルカール１．０３ｇ（５，５ミリモ
ル）をジメトキシエタン約２〜５ｉＱおよびクロロ酢酸
ビニル１０ｍ＋２中に取り入れついでリパーゼＰ（天野
製薬社製）１９とともに室温で約２〜３時間撹拌した。

酵素を枦去し、溶液を濃縮しそしてシリカゲル上でクロ
マトグラフィー（エーテル／ヘキサン　ｌ：２）処理を
行って６−〇−アセチル−３−〇−クロロアセチル−グ
ルカ−ル 実施例　１４ ６−０−アセチル−３−０−クロロアセチルーガラクタ
ールの製造 ６−０−アセチルグルカール１．０３ｇ（５．５ミリモ
ル）をＤＭＥ　１０〜１５１１Ｎ１２およびクロロ酢酸
ビニル２０〜２５ｍａ中に取り入れついでリパーゼＰ（
７’ソイトモナス種）１９とともに室温で５〜６時間撹
拌した。再使用可能な酵素を枦去し、溶液を濃縮しつい
でクロマＩ・グラフィー（Ｓｔｏｗ、工一チル／ヘキサ
ンｌ：２）処理を行って６−０−アセチル−３−０−ク
ロロアセチルガラクタールを８０％収率で得た。

実施例　１５ ６−０−ベンゾイル−３−０−クロロアセチル−グルカ
ールの製造 ６−０−ベンゾイルグルカール１．０ｇ（４ミリモル）
をジメトキシエタン２〜５ｍ１２およびクロロ酢酸ビニ
ル１０〜１５ｍ１２中に溶解しついでリパーゼＰ（天野
製薬社製）１ｇとともに１〜２時間撹拌した。酵素を枦
去し、シリカゲルでのクロマトグラフィー（エーテル／
ヘキサン　ｌ：１）Ｍ理によって６−〇−ベンゾイルー
３−０−クロロアセチル−グルカールを８２〜８７％収
率で得た。

実施例　１６ ６−ｏ−ベンゾイル−３−ｏ−クロロアセチルーガラク
タールの製造 ６−０−ベンゾイルガラクタール１．０９　（４ミリモ
ル）をＤＭＥ約２０〜２５１およびクロロ酢酸ビニル１
Ｏ−１５ＩＩＩＱ中に取り入れついでプソイドモナス種
からのリパーゼ（リパーゼＰ１天野製薬社製）１９とと
もに室温で約５〜７時間撹拌した。再使用可能な酵素を
炉去し、溶液を真空中で濃縮しついでシリカゲル上でク
ロマトグラフィー（エーテル／ヘキサン　ｌ：１）処理
するか結晶化させて６−０−ベンゾイル−３−０−クロ
ロアセチルーガラクタールを８０％収率（１０５１０５
Ｏで得た。

実施例　１７ ６−０−ベンゾイルグルカールの製造 グルカール１．０ｇ（６，８５ミリモル）をテトラヒド
ロ７ラン１．５〜２．０ｍ１２および安息香酸ビニル３
〜５ｍＱ中に取り入れついでカンジダシリンドラセから
のリパーゼ（アマノＡＶ−２０）　ｌ　９とトモに室温
で６時間撹拌した。酵素を枦去し、溶液を真空中で濃縮
し、残留物を酢酸エチル中に取り入れそしてそれを１Ｊ
ａＨｃＯｓ水溶液で抽出し、引き統いてシリカゲル上で
クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン　１：１）
処理して所望の６−〇−ベンゾイルグルカール１．２０
９（７０％）を得ｔこ。

実施例　１８ ６−０−ベンゾイルガラクタールの製造ガラクタール１
．０９（６，８５ミリモル）をＨ，ＯＯ，５〜１．５ｍ
ｒｌ中に取り入れ、粉砕したモレキュラーシーブ８ｇを
加えついでその混合物を安息香酸ビニルｉｏ＝　１５ｍ
Ｑ中においてカンジダリパーゼＡＹ−２０（６糖産業社
製）１ｇまたはリパーゼＰ（天野製薬社製）１ｇととも
に室温で８〜１０時間撹拌した。酵素を枦去し、溶液を
真空中で濃縮し、残留物を酢酸エチル中に取り入れ、そ
れをＮａＨＣＯｓ水溶液で抽出しついでシリカゲルでの
クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン　ｌ：ｌ：
ｌａ理を行って所望の６−０−ベンゾイルガラクタール
６５〜６８％（約１１３０ｍｇ）を得た。

実施例　１９ ６−〇−アセチルー３−０−メトキシアセチルグルカー
ルの製造 ６−０−アセチルグルカール３２５１１１９（１，７３
ミリモル）をジメトキシエタン１１１１２中に溶解し、
メトキシ酢酸ビニルｌ＋ｍｆｆおよびリパーゼＦｐ（プ
ソイドモナスフルオレセンス、天野製薬社製）３２５１
１１ｇを加えそして混合物を室温で５１八時間撹拌した
。酵素を枦去しついでシリカゲルでのフラッシュクロマ
トグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン　ｌ：２）Ｊａ理
を行って所望の３−０−メトキシアセチル−６−０−ア
セチルグルカール４２２ｍｇ（１，６２ミリモル、９３
．８％収率）を得た。

実施例　２０ ５−Ｑ−＜７ゾイＪ″−３−０−／）キ′アセチ　　　
１ルグルカールの製造 ジメトキシエタン１ｍＱ中に入れた６−０−ベンゾイル
グルカール２００ｍｇ（０，８ミリモル）をメトキシ酢
酸ビニル１ｍｆｆおよびプソイドモナスフルオレセンス
（Ｐｓｅｕｄ、　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）からのリパ
ーゼＦｐ　２００＋ｎ９とともに室温で３時間撹拌した
。

酵素を枦去しついでシリカゲル上でのフラッシュクロマ
トグラフィー（ヘキサンおよびエーテル／ヘキサン　ｌ
　：　１）処理を行って所望の６−〇−ベンゾイルー３
−〇−メトキシアセチルグルカール２３２ｍ９（０，７
２ミリモル、９０％収率）を得ｌこ　。

実施例　２１ ６−０−アセチル−３Ｑ−フェノキシアセチルグルカー
ルの製造 ジメトキシエタン１ｍｆｆ中に入れた６−０−アセチル
グルカール３１８ｍｇ（１，６９ミリモル）をフェノキ
シ酢酸ビニル１　ｍｍおよびリパーゼＦ１）　３２０ｍ
ｇとともに室温で７時間撹拌した。酵素を枦去しついで
シリカゲルでの７ラツシユクロマトグラフイー（酢酸エ
チル／ヘキサン　ｌ：２）処理を行って６−０−アセチ
ル−３−０−フェノキシアセチルグルカール４７８１１
１９（１，４８ミリモル、８７．８％収率）を得た。

実施例　２２ ６−０−ベンゾイル−３−〇−フェノキシアセチルグル
カールの製造 ６−０−ベンゾイルグルカール２２６１１１ｇ（０，９
０ミリモル）をジメトキシエタン１ｒＲ１２中に溶解し
ついでフェノキシ酢酸ビニルｌＩ＋ＩＱおよびリパーゼ
Ｆｐ２２０＋＋＋９とともに室温で３時間撹拌した。濾
過しついでフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル
；ヘキサンおよびエーテル／ヘキサン１：１）３２Ｌ理
を行って６−〇−ベンゾイルー３−０−フェノキシアセ
チルグルカールヲ８８％収率（３０４，５ｍｇ、０．７
９ミリモル）で得た。

実施例　２３ ６−〇−ベンゾイルー３−０−７エナセチルグルカール
の製造 ６−０−ベンゾイルグルカール２００ｍｇ（０，８０ミ
リモル）をジメトキシエタンｌ　ｍｍ中に溶解し、つい
でフェニル酢酸ビニル１ｍＱおよびプソイドモナスフル
オレセンスからのリパーゼＦｐ　２００ｍｙとともに室
温で一夜（＜２０時間）撹拌した。酵素を枦去し、５ｉ
０２上でのクロマトグラフィー（ヘキサンおよびエーテ
ル／ヘキサン　１：１）により精製して６−０−ベンゾ
イル−３−〇−フェナセチルグルカールを７５〜８５％
収率（２００〜２５０所９）で得た。

実施例　２４ ６−０−アセチル−３−０−７エナセチルグルカールの
製造 ６−０−アセチルグルカール２１４ｍｇ（１−１４ミリ
モル）をジメトキシエタン１ｍＱ中に溶解し、フェニル
酢酸ビニル’１ｍＱおよびリパーゼＦｐ２００＋ｍｇを
加え、そして混合物を約２０°Ｃで４８時間撹拌した。

濾過しついでクロマトグラフィー処理を行って６−０−
アセチル−３−０−フェナセチルグルカールを８０〜８
５％収率（２８０〜２９７ｍｅ、０．９１〜０．９７ミ
リモル）で得た。

特許出願人　　ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト代
　理　人　　弁理士　高　　木　　千　　嘉外２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）下記の一般式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ I 〔式中、 ａ）Ｒ＾１、Ｒ＾２およびＲ＾３は（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿
   ０）−アシルオキシおよび／またはベンゾイルオキシで
   あり、 ｂ）Ｒ＾１、Ｒ＾２およびＲ＾３はヒドロキシルであり
   、ｃ）Ｒ＾１は保護されたヒドロキシルでありそしてＲ
   ＾２およびＲ＾３は（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０）−アシルオ
   キシおよび／またはベンゾイルオキシであり、 ｄ）Ｒ＾１およびＲ＾３は（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０）−ア
   シルオキシおよび／またはベンゾイルオキシでありそ してＲ＾２は保護されたヒドロキシルであり、ｅ）Ｒ＾
   １は保護されたヒドロキシルでありそしてＲ＾２および
   Ｒ＾３はヒドロキシルであり、ｆ）Ｒ＾１およびＲ＾３
   はヒドロキシルでありそしてＲ＾２は保護されたヒドロ
   キシルであり、 ｇ）Ｒ＾１およびＲ＾２はヒドロキシルでありそしてＲ
   ＾３は（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０）−アシルオキシまたはベ
   ンゾイルオキシまたは保護されたヒドロキシ ルでありそして ｈ）Ｒ＾１およびＲ＾２はアシルオキシおよび／または
   ベンゾイルオキシでありそしてＲ＾３は保護されたヒド
   ロキシルであり、 前記アシルオキシ基の炭素原子はハロゲン および／またはアミノおよび／またはメトキシおよび／
   またはフェニルおよび／またはフェノキシで置換されそ
   して前記ベンゾイルオキシ基の炭素原子はニトロおよび
   ／またはハロゲンおよび／または（Ｃ＿１およびＣ＿２
   ）−アルコキシで置換されることができる〕で表される
   不飽和糖化合物を使用することからなるリパーゼおよび
   エステラーゼによる酵素エステル化およびエステル開裂
   の方法。 ２）アシルオキシ基がＣ＿１〜Ｃ＿５の鎖長を有する請
   求項１記載の方法。 ３）ヒドロキシル基がエステルもしくはエーテル結合に
   よって保護されるかまたはアセタールに変換される請求
   項１または２記載の方法。 ４）微生物からの、または動物の膵臓もしくは肝臓から
   のリパーゼおよびエステラーゼを使用する請求項１〜３
   のいずれかに記載の方法。 ５）プソイドモナス、カンジダ、ケカビ、リゾプス、ペ
   ニシリウムおよびアスペルギルスからのリパーゼおよび
   エステラーゼ並びにブタの肝臓およびブタの膵臓からの
   それらを使用する請求項４記載の方法。 ６）カンジダからのリパーゼまたはエステラーゼを一般
   式 I の化合物の第１官能基との反応のために使用しそ
   してプソイドモナスからのリパーゼまたはエステラーゼ
   を該化合物の第２官能基との反応のために使用する請求
   項１記載の方法。 ７）下記の一般式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ I 〔式中、 ｉ）Ｒ＾１はヒドロキシルでありそしてＲ＾２およびＲ
   ＾３は（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０）−アシルオキシおよび／
   またはベンゾイルオキシであり、 ｊ）Ｒ＾１およびＲ＾３は（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０）−ア
   シルオキシおよび／またはベンゾイルオキシでありそし
   てＲ＾２はヒドロキシルであり、 ｋ）Ｒ＾１およびＲ＾２はヒドロキシルでありそしてＲ
   ＾３は（Ｃ＿１〜Ｃ＿１＿０）−アシルオキシまたはベ
   ンゾイルオキシであり、 前記アシルオキシ基の炭素原子はハロゲン および／またはアミノおよび／またはメトキシおよび／
   またはフェニルおよび／またはフェノキシで置換されそ
   して前記ベンゾイルオキシ基の炭素原子はニトロおよび
   ／またはハロゲンおよび／または（Ｃ＿１およびＣ＿２
   ）−アルコキシで置換されることができる〕で表される
   化合物およびそのヒドロキシル保護された誘導体。 ８）中間体としての請求項７記載の化合物の使用。