JP7206222B2 - Ｐｄ－１のアンタゴニストとして作用する免疫調節剤 - Google Patents

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Description

（関連出願の相互参照）
本願は、２０１７年６月２３日付け出願の米国仮特許出願ＵＳＳＮ６２／５２３,９０３の優先権を主張するものであり、その内容をそのまま本明細書に組み込むものとする。
本開示は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＣＤ８０／ＰＤ－Ｌ１のタンパク質／タンパク質相互作用を阻害し、かくしてがんおよび感染性疾患を含む種々の疾患の改善に有用である、大環状ペプチドを提供する。
プログラムされたデス１（Programmed Death 1）（ＰＤ－１）のタンパク質は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含む、ＣＤ２８ファミリーの受容体の阻害メンバーである。ＰＤ－１は活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞および骨髄性細胞上で発現される（Agataら、上掲；Okazakiら、Curr. Opin. Immunol., 14：779-782（2002）；Bennettら、J. Immunol., 170：711-718（2003））。
ＰＤ－１タンパク質は、Ｉｇ遺伝子スーパーファミリーの構成員である、５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である（Agataら、Int. Immunol., 8：765-772 (1996)）。ＰＤ－１は膜近位性免疫受容体チロシン抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）および膜遠位性チロシン依存性スイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を有する（Thomas, M.L.、J. Exp. Med., 181：1953-1956 (1995)；Vivier, E.ら、Immunol. Today, 18：286-291 (1997)）。ＰＤ－１は、構造上はＣＴＬＡ－４と類似するが、ＣＤ８０ ＣＤ８６（Ｂ７－２）の結合に重要な、MYPPYモチーフを欠く。ＰＤ－１に対して２つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）およびＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）が同定された。ＰＤ－１を発現するＴ細胞の活性化は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２を発現する細胞との相互作用により、ダウンレギュレートされることが分かった（Freemanら、J. Exp. Med., 192：1027-1034 (2000)；Latchmanら、Nat. Immunol., 2：261-268 (2001)；Carterら、Eur. J. Immunol., 32：634-643 (2002)）。ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２は両方とも、ＰＤ－１と結合するが、他のＣＤ２８ファミリーのメンバーと結合しない、Ｂ７タンパク質ファミリーのメンバーである。ＰＤ－Ｌ１リガンドは種々のヒトがんにて豊富に存在する（Dongら、Nat. Med., 8：787-789 (2002)）。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１とが相互に作用することで、腫瘍にて浸潤するリンパ球が減少し、Ｔ細胞受容体が介在する増殖が減少し、がん細胞による免疫の回避がもたらされる（Dongら、J. Mol. Med., 81：281-287 (2003)；Blankら、Cancer Immunol. Immunother., 54：307-314 (2005)；Konishiら、Clin. Cancer Res., 10：5094-5100 (2004)）。免疫抑制作用は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１との局所的相互作用を阻害することにより、解除され、その上、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２との相互作用が遮断されると、その効果は相加的となり得る（Iwaiら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99：12293-12297 (2002)；Brownら、J. Immunol., 170：1257-1266 (2003)）。
ＰＤ－Ｌ１はＣＤ８０と相互作用することも分かっている（Butte MJら、Immunity；27：111-122 (2007)）。ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ８０の相互作用は、免疫細胞の発現について、阻害的であることが分かった。この相互作用を遮断することでこの阻害的作用が無効とされることが分かった（Paterson AMら、J Immunol., 187：1097-1105 (2011)；Yang Jら、J Immunol. Aug 1；187(3)：1113-9 (2011)）。
ＰＤ－１を発現するＴ細胞がそのリガンドを発現する細胞と接触すると、抗原刺激に応答して機能的活性が、増殖、サイトカイン分泌、細胞傷害を含め、減少する。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の相互作用は、感染または腫瘍の治癒の間に、または自己免疫寛容の発達の間に、免疫応答をダウンレギュレートする（Keir, M.E.ら、Annu. Rev. Immunol., 26：Epub (2008)）。慢性抗原刺激、例えば、腫瘍または慢性感染の罹患の間に起こる刺激は、ＰＤ－１を高レベルで発現し、慢性抗原に対する活性については機能障害を起こす、Ｔ細胞を生じさせる（Kimら、Curr. Opin. Imm. (2010)を参照のこと）。これは「Ｔ細胞疲弊」と称される。Ｂ細胞もＰＤ－１／ＰＤ－リガンド抑制および「疲弊」を示す。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の連結の、ＰＤ－Ｌ１に拮抗する抗体を用いての遮断は、多数の系においてＴ細胞の活性化を回復かつ増大させることが知られている。進行がんの患者は、ＰＤ－Ｌ１に拮抗するモノクローナル抗体を用いた療法より利益を受ける（Brahmerら、New Engl. J. Med. (2012)）。腫瘍および慢性感染の前臨床性動物実験において、モノクローナル抗体によるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の遮断が、免疫応答を強化し、腫瘍拒絶反応または感染の制御をもたらし得ることが分かった。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断を介する抗腫瘍免疫療法は、多くの組織学的に異なる腫瘍に対して治療的免疫応答を増大させ得る（Dong, H.ら、「Ｂ７－Ｈ１経路、および腫瘍免疫性の回避におけるその役割（B7-H1 pathway and its role in the evasion of tumor immunity）」, J. Mol. Med., 81(5)：281-287 (2003)；Dong, H.ら、「腫瘍関連のＢ７－Ｈ１は、Ｔ細胞アポトーシス：可能性のある免疫回避機構を促進する（Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion）」, Nat. Med., 8(8)：793-800 (2002)）。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用を干渉することで、慢性感染した系においてＴ細胞活性の強化が引き起こされる。ＰＤ－Ｌ１の遮断は、リンパ球性脈路髄膜炎ウイルス感染のマウスにおいて、ウイルスクリアランスの改善および免疫力の回復を惹起した（Barber, D.L.ら、「慢性ウイルス感染の間に疲弊したＣＤ８ Ｔ細胞の機能の回復（Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection）」, Nature, 439 (7077)：682-687 (2006)）。ＨＩＶ－１に感染したヒト化マウスは、ウイルス血症に対する保護の強化、およびＣＤ４＋ Ｔ細胞のウイルス枯渇を示す（Palmerら、J. Immunol. (2013)）。ＰＤ－Ｌ１に対するモノクローナル抗体を通してＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を遮断することにより、インビトロにおいて、ＨＩＶ患者から由来のＴ細胞にて抗原特異的機能性を回復させることができ（Day, Nature (2006)；Petrovas、J. Exp. Med. (2006)；Trautman、Nature Med. (2006)；D’Souza、J. Immunol. (2007)；Zhang、Blood (2007)；Kaufmann、Nature Imm. (2007)；Kasu、J. Immunol. (2010)；Porichis、Blood (2011)）、ＨＣＶ患者から由来のＴ細胞にて（Golden-Mason、J. Virol. (2007)；Jeung、J. Leuk. Biol. (2007)；Urbani、J. Hepatol. (2008)；Nakamoto、PLoS Path. (2009)；Nakamoto、Gastroenterology (2008)）、そしてＨＢＶ患者から由来のＴ細胞にて抗原特異的機能性を回復させることができる（Boni、J. Virol. (2007)；Fisicaro、Gastro. (2010)；Fisicaroら、Gastroenterology (2012)；Boniら、Gastro. (2012)；Pennaら、J. Hep. (2012)；Raziorrough、Hepatology (2009)；Liang、World J. Gastro. (2010)；Zhang、Gastro. (2008)）。
ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ８０相互作用の遮断も免疫力を刺激することが分かった（Yang J.ら、J Immunol. Aug 1；187(3)：1113-9 (2011)）。ＰＤ－Ｌ１／ＣＤ８０相互作用を遮断することで得られる免疫刺激は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２相互作用のさらなる遮断と合わさって強化されることが分かった。
免疫細胞の表現型の変化が敗血性ショックにおける重要な因子であると仮定される（Hotchkissら、Nat Rev Immunol (2013)）。これらの変化はＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１のレベルが高くなることを包含する（Guignantら、Crit. Care (2011)）。ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１のレベルが上がった敗血性ショックの患者から由来の細胞は、高レベルのＴ細胞アポトーシスを示す。ＰＤ－Ｌ１を指向する抗体は、免疫細胞アポトーシスのレベルを減少させ得る（Zhangら、Crit. Care (2011)）。さらには、ＰＤ－１発現を欠くマウスは、野生型マウスより敗血性ショック症候に対する耐性が強い（Yang J.ら、J Immunol. Aug 1；187(3)：1113-9 (2011)）。実験は、ＰＤ－Ｌ１の、抗体を用いる相互作用の遮断が、不適切な免疫応答を抑制し、疾患の兆候を改善し得ることを示した。
慢性抗原に対する免疫応答の強化に加えて、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の遮断も、慢性感染との関連でワクチン接種（治療としてのワクチン接種を含む）に対する応答を強化することが分かった（Ha, S.J.ら、「慢性感染の間にＰＤ－１介在性阻害シグナルを遮断することによる治療としてのワクチン接種の強化（Enhancing therapeutic vaccination by blocking PD-1-mediated inhibitory signals during chronic infection）」, J. Exp. Med., 205(3)：543-555 (2008)；Finnefrock, A.C.ら、「アカゲザルでのＰＤ－１遮断：慢性感染に対する影響および予防としてのワクチン接種（PD-1 blockade in rhesus macaques: impact on chronic infection and prophylactic vaccination）」, J. Immunol., 182(2)：980-987 (2009)；Song, M.-Y.ら、「可溶性ＰＤ－１によるワクチン誘発の一次および記憶ＣＤ８＋ ｔ－細胞応答の強化（Enhancement of vaccine-induced primary and memory CD8+ t-cell responses by soluble PD-1）」, J. Immunother., 34(3)：297-306 (2011)）。
本明細書に記載の分子は、生化学および細胞を基礎とする両方の実験系にて、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１との相互作用を遮断する能力を示した。これらの結果は、がんおよび慢性感染における免疫力を強化するために、治療ワクチンを含め、治療的投与の可能性と矛盾するものではない。
本明細書に記載の大環状化合物は、ＰＤ－Ｌ１と、ＰＤ－１との、およびＣＤ８０との相互作用を阻害する能力を有する。これらの化合物は、ＰＤ－Ｌ１と非常に効率的な結合を、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１またはＣＤ８０のいずれかとの相互作用の遮断を、そしてＴ細胞機能活性の強化を促進する能力を示し、かくしてそれらは非経口、経口、経肺、経鼻、口腔、および徐放性処方のための候補体となる。
第１の態様において、本開示は、式（Ｉ）：
Figure 0007206222000001
 ［式中：
Ａは
Figure 0007206222000002
 より選択され；
ここで：
Figure 0007206222000003
 はカルボニル基との結合点を示し、
Figure 0007206222000004
 は窒素原子との結合点を示し；
ｎは０または１であり；
ｍは１または２であり；
ｍ’は０または１であり；
ｗは０、１または２であり；
Ｒｘは水素、アミノ、ヒドロキシ、およびメチルより選択され；
Ｒ１４およびＲ１５は、水素およびメチルより独立して選択され；
Ｒ１６ａは水素およびＣ１－Ｃ６アルキルより選択され；
Ｒ１６は
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）２）２－Ｘ－Ｒ３０、
－Ｃ（Ｒ１７ａ）２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、
－Ｃ（Ｒ１７ａ）２［Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２］ｗ’－Ｘ－Ｒ３１、
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｎ’－Ｈ、および
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈより選択され；
ここで：
ｗ’は２または３であり；
ｎ’は１－６であり；
ｍ’は０－５であり；
Ｘは１～１７２個の原子の鎖であり、ここで該原子は酸素および炭素より選択され、該鎖はその中に埋め込まれた－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－より選択される１、２、３または４個の基を含有してもよく；該鎖は－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－（ＣＨ２）ＣＯ２Ｈより独立して選択される１～６個の基で所望により置換されてもよく；
Ｘ’は１～１７２個の原子の鎖であり、ここで該原子は酸素および炭素より選択され、該鎖はその中に埋め込まれた－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－より選択される１、２、３または４個の基を含有してもよく；該鎖は－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈより独立して選択される１～６個の基で所望により置換されてもよい：ただし、Ｘ’は置換されていないＰＥＧ以外の基であるものとし；
Ｒ３０は－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｗＲｘ、および－ＣＨ３より選択され、ここでＲｗおよびＲｘは、水素およびＣ１－Ｃ６アルキルより独立して選択される：ただし、Ｘのすべてが炭素である場合、Ｒ３０は－ＣＨ３以外の基であるものとし；
Ｒ３１は－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｗＲｘ、－ＣＨ３、アレキサ－５－ＳＤＰ、およびビオチンであり；
各Ｒ１７ａは水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、－（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈより独立して選択され；
各Ｒ１７は水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、－（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、および－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５より独立して選択され、ここでｚは１－６であり、Ｒ３５は－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｗＲｘ、ＣＨ３、ビオチン、－２－フルオロピリジン、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ビタミンＥ、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ビタミンＥ、および
Figure 0007206222000005
 より選択される：ただし、Ｒ１７のうち少なくとも一つは水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外の基であるものとし；
Ｒｃ、Ｒｆ、Ｒｈ、Ｒｉ、Ｒｍ、およびＲｎは水素であり；
ＲａおよびＲｊは、各々、水素およびメチルより独立して選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１２、およびＲ１３は、天然アミノ酸側鎖および非天然アミノ酸側鎖より独立して選択されるか、あるいは下記されるように隣接する対応のＲ基と一緒になって環を形成し；
Ｒ１０はインドリルＣ１－Ｃ３アルキルであり、ここで該インドリル部分はＣ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、シアノ、ハロＣ１－Ｃ３アルコキシ、ハロＣ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、－ＮＲｐＲｑ、（ＮＲｐＲｑ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびテトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキルより選択される１個の基で、あるいはＣ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキル、（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、カルボキシ、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、シアノ、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ハロ、ハロＣ１－Ｃ３アルコキシ、ハロＣ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヒドロキシ、－ＮＲｐＲｑ、（ＮＲｐＲｑ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、テトラゾリル、テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、およびフェニルより選択される２個の基で所望により置換されてもよく、ここで該フェニルはＣ１－Ｃ３アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびハロより独立して選択される１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよいか；
Ｒ１０はアザインドリルＣ１－Ｃ３アルキルであり、ここで該アザインドリルＣ１－Ｃ３アルキルのアザインドリル部分はＣ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキル、（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、カルボキシ、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、シアノ、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ハロ、ハロＣ１－Ｃ３アルコキシ、ハロＣ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヒドロキシ、－ＮＲｐＲｑ、（ＮＲｐＲｑ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、テトラゾリル、テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、およびフェニルより独立して選択される１または２個の別の基で置換され、ここで該フェニルはＣ１－Ｃ３アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびハロより独立して選択される１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよいか；
Ｒ１０は－（ＣＨ２）ｎＱ’であり、ここでｎは１－３であり、Ｑ’は１、２、３または４個の窒素原子を含有する５,６員の縮合した飽和または不飽和環系であり、ここで該環系はＣ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキル、（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、カルボキシ、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、シアノ、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ハロ、ハロＣ１－Ｃ３アルコキシ、ハロＣ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヒドロキシ、－ＮＲｐＲｑ、（ＮＲｐＲｑ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、テトラゾリル、テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、およびフェニルより選択される１、２または３個の基で所望により置換されてもよく、ここで該フェニルはＣ１－Ｃ３アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびハロより独立して選択される１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよい：ただし、Ｑ’はアザインドリルまたはインドリル以外の基であるか；あるいは
Ｒ１０は－（ＣＨ２）ｎＺ’であり、ここでｎは１－３であり、Ｚ’は１、２、３または４個の窒素原子を含有する６,６員の縮合した飽和または不飽和環系であり、ここで該環系は、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキル、（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、アリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、カルボキシ、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、シアノ、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ハロ、ハロＣ１－Ｃ３アルコキシ、ハロＣ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヘテロアリールＣ１－Ｃ３アルキルＳ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、ヒドロキシ、－ＮＲｐＲｑ、（ＮＲｐＲｑ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、テトラゾリル、テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、およびフェニルより選択される１、２または３個の基で所望により置換されてもよく、ここで該フェニルはＣ１－Ｃ３アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびハロより独立して選択される１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよく；
Ｒｂはメチルであるか、またはＲｂおよびＲ２は、それらが結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成し、ここで各環はアミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１～４個の基で所望により置換されてもよく；
Ｒｄは水素またはメチルであるか、あるいはＲｄおよびＲ４は、それらが結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成することができ、ここで各環はアミノ、シアノ、メチル、ハロ、ヒドロキシ、およびフェニルより独立して選択される１～４個の基で所望により置換されてもよく；
Ｒｅは水素またはメチルであるか、あるいはＲｅおよびＲ５は、それらが結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成することができ、ここで各環はアミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１～４個の基で所望により置換されてもよく；
Ｒｇは水素またはメチルであるか、あるいはＲｇおよびＲ７は、それらが結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成することができ、ここで各環はアミノ、ハロ基で所望により置換されてもよいベンジル、ベンジルオキシ、シアノ、シクロヘキシル、メチル、ハロ、ヒドロキシ、メトキシ基で所望により置換されてもよいイソキノリニルオキシ、ハロ基で所望により置換されてもよいキノリニルオキシ、およびテトラゾリルより独立して選択される１～４個の基で所望により置換されてもよく、ここで該ピロリジンおよびピペリジン環はシクロヘキシル、フェニル、またはインドール基と所望により縮合してもよく；
Ｒｋは水素またはメチルであるか、あるいはＲｋおよびＲ１１は、それらが結合する原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、およびテトラヒドロチアゾールより選択される環を形成することができ、ここで各環はアミノ、シアノ、メチル、ハロ、およびヒドロキシより独立して選択される１～４個の基で所望により置換されてもよく；および
Ｒｌはメチルであるか、あるいはＲｌおよびＲ１２は、それらが結合する原子と一緒になって、アゼチジンおよびピロリジンより選択される環を形成し、ここで各環はアミノ、シアノより独立して選択される１～４個の基で所望により置換されてもよい］
で示される化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
第１の態様の第１の実施態様において、本開示は、Ａが
Figure 0007206222000006
 である、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
第１の態様の第２の実施態様において、
ｍは１であり；
ｗは０であり；
Ｒ１６ａは水素であり；および
Ｒ１６は
－Ｃ（Ｒ１７ａ）２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１、および
－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈ
より選択される。
第１の態様の第３の実施態様において、
Ｒｂはメチルであり；
ＲｇおよびＲ７は、それらが結合する原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し、ここで該環は１個のヒドロキシ基で所望により置換されてもよく；および
Ｒｋはメチルである。
第１の態様の第４の実施態様において、
Ｒａ、ＲｅおよびＲｊは水素であり；
ＲＬはメチルであり；
Ｒｎは水素であり；
Ｒ１はフェニルメチルであり、ここで該フェニルは１個のヒドロキシ基で所望により置換されてもよく；
Ｒ２はメチルであり；
Ｒ３は－ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり；
Ｒ４は水素であるか、あるいはＲ４およびＲｄは、それらが結合する原子と一緒になって、ピロリジン環を形成し；
Ｒ５は－ＣＨ２ＮＨ２であり；
Ｒ６は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり；
Ｒ８は－ＣＨ２（インドリル）であり；
Ｒ９は－（ＣＨ２）２ＮＨ２であり；
Ｒ１１およびＲ１２は－（ＣＨ２）３ＣＨ３であり；および
Ｒ１３は－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である。
第１の態様の第５の実施態様において、Ｒ１０は
Figure 0007206222000007
 より選択される。
第２の態様において、本開示は、下記の必要とする対象において、免疫応答を強化、刺激、および／または亢進する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその治療的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。第２の態様の第１の実施態様において、該方法は、式（Ｉ）の化合物またはその治療的に許容される塩の前に、の後に、またはと同時に、さらなる薬剤をさらに投与することを含む。第２の態様の第２の実施態様において、さらなる薬剤は、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性剤、および／または免疫応答調整剤である。第２の態様の第３の実施態様において、そのさらなる薬剤はＨＤＡＣ阻害剤である。第２の態様の第４の実施態様において、そのさらなる薬剤はＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８アゴニストである。
第３の態様において、本開示は、下記の必要とする対象において、がん細胞の成長、増殖、または転移を阻害する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその治療的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。第３の態様の第１の実施態様において、がんは、黒色腫、腎細胞がん、扁平非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平ＮＳＣＬＣ、結腸直腸がん、去勢抵抗性前立腺がん、卵巣がん、胃がん、肝細胞がん、膵臓がん、頭頸部扁平上皮がん、食道、消化器および乳房のがん腫、および血液悪性腫瘍より選択される。
第４の態様において、本開示は、下記の必要とする対象において、感染病を治療する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその治療的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。第４の態様の第１の実施態様において、感染病はウイルスにより引き起こされる。第４の態様の第２の実施態様において、ウイルスはＨＩＶ、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、およびインフルエンザウイルスより選択される。
第５の態様において、本開示は、下記の必要とする対象において、敗血性ショックを治療する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその治療的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
第６の態様において、本開示は、対象においてＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１および／またはＣＤ８０との相互作用を遮断する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の式（Ｉ）の化合物またはその治療的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
Ｒ側鎖がメチルで置換される環の一部である式（Ｉ）の化合物において、そのメチル基は、大環状の親構造の一部である炭素を含め、環内の置換可能ないずれの炭素原子上にあってもよいことが理解される。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ１側鎖は、フェニルアラニン、チロシン、３－チエン－２－イル、４－メチルフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、３－メトキシフェニルアラニン、イソトリプトファン、３－メチルフェニルアラニン、１－ナフチルアラニン、３,４－ジフルオロフェニルアラニン、４－フルオロフェニルアラニン、３,４－ジメトキシフェニルアラニン、３,４－ジクロロフェニルアラニン、４－ジフルオロメチルフェニルアラニン、２－メチルフェニルアラニン、２－ナフチルアラニン、トリプトファン、４－ピリジニル、４－ブロモフェニルアラニン、３－ピリジニル、４－トリフルオロメチルフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、４－メトキシフェニルアラニン、ビフェニルアラニン、および３－クロロフェニルアラニン；ならびに２,４－ジアミノブタンである。
Ｒ２が環の一部でない式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ２側鎖は、アラニン、セリン、およびグリシンである。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ３側鎖は、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、セリン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、スレオニン、ロイシン、アラニン、２,３－ジアミノプロパン、および２,４－ジアミノブタンである。
Ｒ４が環の一部でない式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ４側鎖は、バリン、アラニン、イソロイシン、およびグリシンである。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ５側鎖は、アミノメタン、グルタミン酸、ヒスチジン、アスパラギン、２,３－ジアミノプロパン、セリン、グリシン、２,４－ジアミノブタン、スレオニン、アラニン、リジン、アスパラギン酸、アラニン、および３－チアゾリルアラニンである。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ６側鎖は、ロイシン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、セリン、リジン、３－シクロヘキサン、スレオニン、オルニチン、２,４－ジアミノブタン、アラニン、アルギニン、およびオルニチン（ＣＯＣＨ３）である。
Ｒ７が環の一部でない式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ７側鎖は、グリシン、２,４－ジアミノブタン、セリン、リジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン、アスパラギン、グルタミン、アラニン、および２,４－ジアミノブタン（Ｃ（Ｏ）シクロブタン）である。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ８側鎖は、トリプトファン、および１,２－ベンズイソチアゾリニルアラニンである。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ９側鎖は、セリン、アミノエタン、ヒスチジン、リジン、オルニチン、２,４－ジブチルアミン、スレオニン、グリシン、グルタミン酸、バリン、２,３－ジアミノプロパン、アルギニン、アスパラギン酸、およびチロシンである。
式（Ｉ）の化合物において、Ｒ１０にあるヘテロシクリル基は、環にある置換可能ないずれの炭素または窒素原子でメチレンリンカーに結合され得る。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ１１側鎖は、ノルロイシン、ロイシン、アスパラギン、フェニルアラニン、メチオニン、エトキシメタン、アラニン、トリプトファン、イソロイシン、フェニルプロパン、グルタミン酸、ヘキサン、およびヘプタンである。
Ｒ１２が環の一部でない式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ１２側鎖は、ノルロイシン、アラニン、エトキシメタン、メチオニン、セリン、フェニルアラニン、メトキシエタン、ロイシン、トリプトファン、イソロイシン、グルタミン酸、ヘキサン、ヘプタン、およびグリシンである。
式（Ｉ）の化合物において、好ましいＲ１３側鎖は、アルギニン、オルニチン、アラニン、２,４－ジアミノブタン、２,３－ジアミノプロパン、ロイシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、リジン、スレオニン、シクロプロピルメタン、グリシン、バリン、イソロイシン、ヒスチジン、および２－アミノブタンである。
本開示によれば、本発明者らは、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ１と、ＰＤ－１およびＣＤ８０との相互作用を阻害する能力を有するペプチドを見出した。これらの大環状ペプチドは、インビトロにおいて免疫調節剤としての効能を示し、それ故に該ペプチドはがんおよび感染病を含む種々の疾患の治療のための候補治療剤となる。
「特異的結合」または「特異的に結合する」なる語は、タンパク質と、化合物またはリガンドなどの結合分子との間の相互作用をいう。その相互作用は結合分子により認識されるタンパク質の特定の構造（すなわち、酵素結合部位、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存する。例えば、化合物がタンパク質結合部位「Ａ」と特異的に結合するならば、該化合物が、結合部位Ａを含むタンパク質と、タンパク質結合部位Ａに特異的に結合する標識されたペプチドとを含む反応において存在することは、標識されたペプチドの、タンパク質との結合量を減らすであろう。対照的に、化合物と該タンパク質との非特異的結合は、標識されたペプチドの該タンパク質での濃度依存的置換を生じさせない。
本開示は本化合物に存する原子のあらゆる同位体を包含するものとする。同位体は原子番号が同じであるが、質量数の異なるそれらの原子を包含する。一般例であって、限定されるものではないが、水素の同位体は、重水素および三重水素を包含する。炭素の同位体は１３Ｃおよび１４Ｃを包含する。本発明の同位体で標識された化合物は、一般に、当業者に公知の慣用的技法により、または別のやり方で利用される非標識の試薬の代わりに同位体で適切に標識された試薬を用い、本明細書に記載の方法と類似する方法により調製され得る。かかる化合物は、例えば、生物学的活性を測定する際の標体および試薬として、種々の使用の可能性がある。同位体が安定している場合には、かかる化合物は、生物学的、薬理学的、または薬物動態学的特性を修飾することが望ましい可能性もある。
本明細書に記載の事項のさらなる態様は、開示のペプチドを、リガンド結合アッセイの開発のために、あるいはインビボにおける吸着、代謝作用、分布、受容体の結合または占有、または化合物の配置をモニター観察するために放射性標識されたリガンドとして用いることである。例えば、本明細書に記載の大環状ペプチドは、放射活性な同位体、１２５Ｉを用いて製造し、得られる放射性標識されたペプチドを用いて結合アッセイを開発してもよく、あるいは代謝作用の研究のために使用されてもよい。あるいはまた、同じ目的のために、本明細書に記載の大環状ペプチドは、当業者に公知の方法を用いて、触媒性トリチウム化により放射性標識された形態に変換されてもよい。
本開示の大環状ペプチドはまた、当業者に知られた方法を用いて、放射性トレーサーを添加することによりＰＥＴ造影剤としても使用され得る。
好ましいペプチドとして、本明細書にて提供される少なくとも１つの大環状ペプチドが挙げられ、これらのペプチドは医薬組成物および組み合わせに配合されてもよい。
本明細書にて供される定義は、限定されるものではなく、特定の場合に別段の限定がない限り、本明細書を通して使用される用語に適用される。
アミノ酸およびペプチド化学の分野における当業者であれば、アミノ酸が一般構造式：
Figure 0007206222000008
 ［式中、ＲおよびＲ’は本明細書中に記載されるとおりである］
で示される化合物を包含することが分かる。
別段の指示のない限り、本明細書にて単独で、または他の基の一部として利用されるような「アミノ酸」なる語は、限定されないが、「α」炭素と称される同じ炭素に連結する、アミノ基とカルボキシル基とを含み、ここでＲおよび／またはＲ’は、水素を含む、天然または非天然の側鎖とすることができる。「α」炭素での「Ｓ」絶対配置は、通常、「Ｌ」または「天然」配置と称される。「Ｒ」および「Ｒ’」の両方の（プライム）置換基が水素である場合には、該アミノ酸はグリシンであり、キラルではない。
本明細書にて使用されるような「天然アミノ酸側鎖」および「天然に存在するアミノ酸側鎖」なる語は、通常、Ｓ－配置にある、天然に存在するいずれかのアミノ酸（すなわち、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）（すなわち、Ｌ－アミノ酸）の側鎖をいう。
本明細書で使用されるような「非天然アミノ酸側鎖」および「天然に存在しないアミノ酸側鎖」なる語は、通常、Ｒ－配置にある、天然に存在するいずれかのアミノ酸（すなわち、Ｄ－アミノ酸）の側鎖をいうか、あるいはＲ－またはＳ－配置にある天然に存在する下記のアミノ酸（すなわち、各々、Ｄ－またはＬ－アミノ酸）の側鎖以外の基をいう：
Ｃ２－Ｃ７アルケニル、Ｃ１－Ｃ３アルコキシＣ１－Ｃ３アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル、Ｃ１－Ｃ７アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキルスルファニルＣ１－Ｃ３アルキル、アミドＣ１－Ｃ３アルキル、アミノＣ１－Ｃ３アルキル、ベンゾチアゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、ベンゾチエニルＣ１－Ｃ３アルキル、ベンジルオキシＣ１－Ｃ３アルキル、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、Ｃ３－Ｃ１４シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキル、ジフェニルメチル、フラニルＣ１－Ｃ３アルキル、イミダゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、ナフチルＣ１－Ｃ３アルキル、ピリジニルＣ１－Ｃ３アルキル、チアゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、チエニルＣ１－Ｃ３アルキル；
アザインドリルＣ１－Ｃ３アルキル（ここで、アザインドリルＣ１－Ｃ３アルキルのアザインドリル部は、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、カルボキシ、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、テトラゾリル、テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、およびフェニルより独立して選択される、１または２個の置換基で所望により置換されてもよく、該フェニルは、Ｃ１－Ｃ３アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびハロより独立して選択される、１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよい）；
ビフェニルＣ１－Ｃ３アルキル（ここで、該ビフェニルはメチル基で所望により置換されてもよい）；
－（ＣＨ２）ｎＱ’（ここで、ｎは１～３であり、Ｑ’は２、３または４個の窒素原子を含有する、５員、６員の縮合した飽和または不飽和環系であり、該環系は、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、（Ｃ１－６アルキル）スルファミジルＣ１－Ｃ３アルキル、カルボキシ、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、テトラゾリル、テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、およびフェニルより選択される、１、２または３個の置換基で所望により置換されてもよく、該フェニルは、Ｃ１－Ｃ３アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびハロより独立して選択される、１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよい；ただし、Ｑ’はアザインドリルまたはインドリル以外の基である）；または
－（ＣＨ２）ｎＺ’（ここで、ｎは１～３であり、Ｚ’は１、２、３または４個の窒素原子を含有する、６,６－縮合の飽和または不飽和環系であり、該環系は、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルキル、（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、カルボキシ、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、テトラゾリル、テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、およびフェニルより選択される、１、２または３個の置換基で所望により置換されてもよく、該フェニルは、Ｃ１－Ｃ３アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびハロより独立して選択される、１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよい）；
ヘテロシクリル（Ｃ１－Ｃ４アルコキシ、Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキルスルホニルアミノ、アミド、アミノ、アミノＣ１－Ｃ３アルキル、アミノスルホニル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロＣ１－Ｃ３アルキル、ヒドロキシ、－ＮＣ（ＮＨ２）２、ニトロ、および－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２より独立して選択される１、２、３、４または５個の基で所望により置換されてもよい）；
インドリルＣ１－Ｃ３アルキル（ここで、該インドリル部は、（Ｃ１－６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、カルボキシ、カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、テトラゾリル、テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル、およびフェニルより選択される１または２個の基で所望により置換されてもよく、該フェニルはＣ１－Ｃ３アルコキシ、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびハロより独立して選択される１、２または３個の基で所望によりさらに置換されてもよい）；
フェニル（Ｃ１－Ｃ４アルコキシ、Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキルスルホニルアミノ、アミド、アミノ、アミノＣ１－Ｃ３アルキル、アミノスルホニル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロＣ１－Ｃ３アルキル、ヒドロキシ、－ＮＣ（ＮＨ２）２、ニトロ、および－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２より独立して選択される１、２、３、４または５個の基で所望により置換されてもよい）；
ＮＲａＲｂ（Ｃ１－Ｃ７アルキル）（ここで、ＲａおよびＲｂは、水素、Ｃ２－Ｃ４アルケニルオキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ３アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキルカルボニル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルカルボニル、フラニルカルボニル、およびフェニルカルボニルより独立して選択される）（アルキルリンカーの炭素が１個より多い場合、さらなるＮＲａＲｂ基が鎖上に存することができる）；
ＮＲｃＲｄカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル（ここで、ＲｃおよびＲｄは、水素、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびトリフェニルメチルより独立して選択される）；
フェニルＣ１－Ｃ３アルキル（ここで、該フェニル部分は、Ｃ１－Ｃ４アルコキシ、Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ１－Ｃ３アルキルスルホニルアミノ、アミド、アミノ、アミノＣ１－Ｃ３アルキル、アミノスルホニル、カルボキシ、シアノ、ハロ、ハロＣ１－Ｃ３アルキル、ヒドロキシ、－ＮＣ（ＮＨ２）２、ニトロ、および－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２より独立して選択される１、２、３、４、または５個の基で所望により置換されてもよい）；および
フェノキシＣ１－Ｃ３アルキル（ここで、該フェニルは、Ｃ１－Ｃ３アルキル基で所望により置換されてもよい）。
本明細書にて使用されるような「Ｃ２－Ｃ４アルケニル」なる語は、少なくとも１個の炭素－炭素の二重結合を含有する２～４個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ２－Ｃ７アルケニル」なる語は、少なくとも１個の炭素－炭素の二重結合を含有する２～７個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ２－Ｃ４アルケニルオキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したＣ２－Ｃ４アルケニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ３アルコキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ３アルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ４アルコキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ４アルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ６アルコキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ６アルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ３アルコキシＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ３アルコキシ基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ６アルコキシ基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ６アルコキシカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ６アルコキシカルボニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ３アルキル」なる語は、１～３個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素より誘導される基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ４アルキル」なる語は、１～４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素より誘導される基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ６アルキル」なる語は、１～６個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素より誘導される基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ３アルキルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ３アルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「（Ｃ１－Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）２ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ１－Ｃ３アルキル」なる語は、
Figure 0007206222000009
 をいい、ここでＲはＣ１－Ｃ６アルキル基であり、Ｒ＊はＣ１－Ｃ３アルキル基であり、
Figure 0007206222000010
 は親分子の部分との結合点を示す。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ３アルキルスルファニル」なる語は、硫黄原子を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ３アルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ３アルキルスルファニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ３アルキルスルファニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ３アルキルスルホニル」なる語は、スルホニル基を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ３アルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ１－Ｃ３アルキルスルホニルアミノ」なる語は、アミノ基を通して親分子の部分に結合したＣ１－Ｃ３アルキルスルホニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「アミド」なる語は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２をいう。
本明細書にて使用されるような「アミドＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したアミド基をいう。
本明細書にて使用されるような「アミノ」なる語は－ＮＨ２をいう。
本明細書にて使用されるような「アミノＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したアミノ基をいう。
本明細書にて使用されるような「アミノスルホニル」なる語は、スルホニル基を通して親分子の部分に結合したアミノ基をいう。
本明細書にて使用されるような「アザインドリルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したアザインドリル基をいう。そのアザインドリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「ベンゾチアゾリルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したベンゾチアゾリル基をいう。そのベンゾチアゾリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「ベンゾチエニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したベンゾチエニル基をいう。そのベンゾチエニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「ベンジルオキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したベンジル基をいう。
本明細書にて使用されるような「ベンジルオキシＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したベンジルオキシ基をいう。
本明細書にて使用されるような「ビフェニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したビフェニル基をいう。そのビフェニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「カルボニル」なる語は、－Ｃ（Ｏ）－をいう。
本明細書にて使用されるような「カルボキシ」なる語は、－ＣＯ２Ｈをいう。
本明細書にて使用されるような「カルボキシＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したカルボキシ基をいう。
本明細書にて使用されるような「シアノ」なる語は、－ＣＮをいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ３－Ｃ１４シクロアルキル」なる語は、３～１４個の炭素原子を有し、ヘテロ原子を含まない、単環、二環または三環式の飽和炭化水素環系をいう。二環および三環式環は縮合、スピロ環化、または架橋されてもよい。シクロアルキル基の代表例として、限定されないが、シクロプロピル、シクロペンチル、ビシクロ［３.１.１］ヘプチル、およびアダマンチルが挙げられる。
本明細書にて使用されるような「Ｃ３－Ｃ１４シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ３－Ｃ１４シクロアルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ３－Ｃ１４シクロアルキルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＣ３－Ｃ１４シクロアルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ３－Ｃ６シクロアルキル」なる語は、３ないし６個の炭素原子を含み、ヘテロ原子が不含の飽和単環式炭化水素環系をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＣ３－Ｃ６シクロアルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＣ３－Ｃ６シクロアルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「フラニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したフラニル基をいう。そのフラニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「フラニルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したフラニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「ハロ」および「ハロゲン」なる語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩをいう。
本明細書にて使用されるような「ハロＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、１、２、または３個のハロゲン原子で置換されるＣ１－Ｃ３アルキル基をいう。
本明細書にて使用されるような「ハロメチル」なる語は、１、２、または３個のハロゲン原子で置換されるメチル基をいう。
本明細書にて使用されるような「ヘテロシクリル」なる語は、窒素、酸素および硫黄より独立して選択される１、２、または３個のヘテロ原子を含有する、５、６、または７員の環をいう。５員環は０～２個の二重結合を有し、６および７員環は０～３個の二重結合を有する。「ヘテロシクリル」なる語はまた、ヘテロシクリル環が４～６員の芳香族または非芳香族炭素環式環、あるいはもう一つ別の単環式ヘテロシクリル基と縮合している二環式基を包含する。本開示のヘテロシクリル基は、その基中の炭素原子を通して親分子に結合と結合する。ヘテロシクリル基の例として、限定されないが、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、モルホリニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、チアゾリル、チエニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。
本明細書にて使用されるような「ヒドロキシ」なる語は、－ＯＨをいう。
本明細書にて使用されるような「イミダゾリルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したイミダゾリル基をいう。そのイミダゾリル基は、その基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「インドリルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したインドリル基をいう。そのインドリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「ナフチルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したナフチル基をいう。そのナフチル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「ニトロ」なる語は、－ＮＯ２をいう。
本明細書にて使用されるような「ＮＲａＲｂ」なる語は、２個の基、ＲａおよびＲｂが窒素原子を通して親分子に結合している基をいう。ＲａおよびＲｂは、水素、Ｃ２－Ｃ４アルケニルオキシカルボニル、Ｃ１－Ｃ３アルキルカルボニル、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルカルボニル、フラニルカルボニル、およびフェニルカルボニルより独立して選択される。
本明細書にて使用されるような「ＮＲａＲｂ（Ｃ１－Ｃ３）アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＮＲａＲｂ基をいう。
本明細書にて使用されるような「ＮＲｃＲｄ」なる語は、窒素原子を通して親分子に結合している２個の基、ＲｃおよびＲｄをいう。ＲｃおよびＲｄは、水素、Ｃ１－Ｃ３アルキル、およびトリフェニルメチルより独立して選択される。
本明細書にて使用されるような「ＮＲｃＲｄカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したＮＲｃＲｄ基をいう。
本明細書にて使用されるような「ＮＲｃＲｄカルボニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したＮＲｃＲｄカルボニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「フェノキシ」なる語は、酸素原子を通して親分子の部分に結合したフェニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「フェノキシＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したフェノキシ基をいう。
本明細書にて使用されるような「フェニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したフェニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「フェニルカルボニル」なる語は、カルボニル基を通して親分子の部分に結合したフェニル基をいう。
本明細書にて使用されるような「ピリジニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したピリジニル基をいう。そのピリジニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「スルファニル」なる語は、－Ｓ－をいう。
本明細書にて使用されるような「スルホニル」なる語は、－ＳＯ２－をいう。
本明細書にて使用されるような「テトラゾリルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したテトラゾリル基をいう。そのテトラゾリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「チアゾリルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したチアゾリル基をいう。そのチアゾリル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
本明細書にて使用されるような「チエニルＣ１－Ｃ３アルキル」なる語は、Ｃ１－Ｃ３アルキル基を通して親分子の部分に結合したチエニル基をいう。そのチエニル基はその基中のいずれか置換可能な原子を通してアルキル部分と結合しうる。
「治療する」なる語は、（ｉ）疾患、障害、および／または症状に罹患しやすい可能性があるが、まだ罹患していないと診断される患者において、該疾患、障害、または症状を発症することを防止すること；（ｉｉ）該疾患、障害、または症状を阻害すること、すなわちその進行を阻むこと；および（ｉｉｉ）該疾患、障害、または症状を緩和すること、すなわち、該疾患、障害、および／または症状、および／または該疾患、障害、および／または症状に付随する徴候の退行を生じさせることをいう。
大環状ペプチドの、ＰＤ－Ｌ１との結合は、例えば、均一性時間分解蛍光測定法（ＨＴＲＦ）、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）、等温滴定型熱量測定法（ＩＴＣ）、核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）等などの方法により測定され得る。さらには、大環状ペプチドの、細胞表面にて発現されるＰＤ－Ｌ１との結合は、細胞結合アッセイにおいて、本明細書に記載されるように測定され得る。
本明細書に記載の治療剤の投与は、限定されることなく、治療的に効果的な量の治療剤の投与を包含する。本明細書にて使用されるような「治療的に効果的な量」なる語は、限定されることなく、本明細書に記載のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合阻害剤の組成物を投与することで治療できる症状を治療または防止するための治療剤の量をいう。その量は検出できる治療または予防または改善効果を示すのに十分な量である。その効果は、例えば、限定されるものではなく、本明細書に列挙した症状の治療または予防を包含しうる。対象に対する正確な有効量は、その対象の大きさおよび健康状態、治療される症状の特性および程度、治療する医師の助言、投与するのに選択される治療剤または治療剤の組み合わせに依存するであろう。かくして、正確な有効量を前以て特定することは有用ではない。
もう一つ別の態様において、本開示は、本発明の大環状ペプチドを用いて対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法に関する。本明細書において明らかにされるように、本開示の大環状ペプチドは、ＰＤ－Ｌ１と結合し、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との相互作用に干渉し、ＰＤ－Ｌ１の、ＰＤ－１との相互作用を遮断することが分かっている抗ＰＤ－１モノクローナル抗体との結合と競合し、ＣＭＶ特異的Ｔ細胞ＩＦＮγ分泌を強化し、ＨＩＶ特異的Ｔ細胞ＩＦＮｇ分泌を強化する能力を有する。結果として、本開示の大環状ペプチドは、免疫応答を修飾し、がんまたは感染病などの疾患を治療し、保護的自己免疫応答を刺激し、あるいは（例えば、ＰＤ－Ｌ１遮断ペプチドと目的とする抗原とを共投与することにより）抗原特異的免疫応答を刺激するのに有用である。
本開示がさらに容易に理解され得るように、特定の用語をまず定義する。さらなる定義は詳細な説明を通して示される。
「プログラムされたデスリガンド１（Programmed Death Ligand 1）」、「プログラムされた細胞死リガンド１」、「タンパク質ＰＤ－Ｌ１」、「ＰＤ－Ｌ１」、「ＰＤＬ１」、「ＰＤＣＤＬ１」、「ｈＰＤ－Ｌ１」、「ｈＰＤ－ＬＩ」、「ＣＤ２７４」および「Ｂ７－Ｈ１」は互換的に使用され、ヒトＰＤ－Ｌ１の変異体、イソフォーム、種相同体、およびＰＤ－Ｌ１と共通する少なくとも１つのエピトープを有するアナログを包含する。ＰＤ－Ｌ１の完全な配列は、GENBANK（登録商標）Accession No.NP_054862の下で知ることができる。
「プログラムされたデス１」、「プログラムされた細胞死１」、「タンパク質ＰＤ－１」、「ＰＤ－１」、「ＰＤ１」、「ＰＤＣＤ１」、「ｈＰＤ－１」および「ｈＰＤ－Ｉ」は互換的に用いられ、ヒトＰＤ－１の変異体、イソフォーム、種相同体、およびＰＤ－１と共通する少なくとも１つのエピトープを有するアナログを包含する。ＰＤ－１の完全な配列は、GENBANK（登録商標）Accession No.NP U64863の下で知ることができる。
「細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４」、「ＣＴＬＡ－４」、「ＣＴＬＡ４」、「ＣＴＬＡ－４抗原」および「ＣＤ１５２」（例えば、Murata、Am. J. Pathol., 155：453-460（1999）を参照のこと）なる語は互換的に用いられ、ヒトＣＴＬＡ－４の変異体、イソフォーム、種相同体、およびＣＴＬＡ－４と共通する少なくとも１つのエピトープを有するアナログを包含する（例えば、Balzano、Int. J. Cancer Suppl., 7：28-32 (1992) を参照のこと）。ＣＴＬＡ－４の完全な核酸配列は、GENBANK（登録商標）Accession No. L15006の下で知ることができる。
「免疫応答」なる語は、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、および上記した細胞または肝臓により産生される可溶性巨大分子（大環状ペプチド、サイトカイン、および補体を含む）の作用であって、侵入病原体、病原体に感染した細胞または組織、がん細胞、あるいは自己免疫性または病理学的炎症の場合、正常なヒト細胞または組織の、選択的損傷、破壊、または人体からの除去をもたらす、作用をいう。
本明細書にて使用されるような「有害事象」（ＡＥ）は、好ましくない、一般には意図しない、まさに望ましくない、医学的治療の実施に付随する兆候（実験室での異常な知見を含む）、症状、または疾患である。例えば、有害事象は、治療に応答して、免疫系が活性化すること、または免疫系細胞（例えば、Ｔ細胞）が拡張することと関連付けることができる。薬物治療は１または複数のＡＥを伴う可能性があり、ＡＥは、各々、同じまたは異なるレベルの重篤性を有してもよい。「有害事象を改変しうる」方法についての言及は、異なる治療計画を用いることに伴う１または複数のＡＥの発生率および／または重篤度を減少させる治療計画を意味する。
本明細書にて使用されるような「過剰増殖性疾患」は、細胞増殖が正常なレベルよりも大きい症状をいう。例えば、過剰増殖性疾患または障害として、悪性疾患（例、食道がん、大腸がん、胆がん）および非悪性疾患（例、アテローム性動脈硬化症、良性過形成、および良性前立腺肥大）が挙げられる。
本明細書にて使用されるような「約」または「本質的に含む」は、特定の数値がどのように測定または決定されるかに幾分依存するであろう、すなわち、測定システムの限界を示す、当業者により決定されるような数値に対して許容される誤差の範囲内にあることを意味する。例えば、「約」または「本質的に含む」は、当該分野における実施当たりで１またはそれ以上の標準偏差の範囲内にあることを意味しうる。あるいはまた、「約」または「本質的に含む」は２０％までの範囲を意味しうる。さらには、特に生体系または生体内作用に関して、該用語は数値が最大で１桁違う、または５倍までを意味しうる。特定の数値が本願明細書および特許請求の範囲にて供される場合、特記されない限り、「約」または「本質的に含む」の意味は、その特定の数値について許容される誤記の範囲内にあると想定されるべきである。
本明細書にて記載されるようないずれの濃度範囲、パーセント範囲、割合の範囲または整数の範囲も、列挙された範囲内にあるいずれの整数の数値、必要とあれば、特段の指示のない限り、その分数（整数の１０分の一および１００分の一など）も含むものと理解されるべきである。
競合アッセイ
本開示はまた、対照となる抗－ＰＤ－Ｌ１抗体（ＭＤＸ－１１０５）の結合と、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、および少なくとも約１００％の競合能を有する大環状ペプチドを対象とする。かかる大環状ペプチドは、本明細書に開示の１または複数の大環状ペプチド（変異体、保存的置換、機能的置換、および欠失形態を含む；ただし、該ペプチドはＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する）と構造的相同性を共有し得る。例えば、大環状ペプチドが、実質的に、ＰＤ－Ｌ１の、対照となる抗－ＰＤ－Ｌ１抗体と同じ領域に結合するならば、その大環状ペプチドは、抗－ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体が結合するＰＤ－Ｌ１エピトープと少なくとも重複する、ＰＤ－Ｌ１のエピトープと結合するはずである。その重複する領域は１個のアミノ酸残基から数百個のアミノ酸残基の範囲とすることができる。該大環状ペプチドは、次に、抗－ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体と競合し、および／またはそのＰＤ－Ｌ１との結合を遮断し、それにより抗－ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体とＰＤ－Ｌ１との結合は減少し、好ましくは競合アッセイにて少なくとも約５０％は減少するはずである。
競合アッセイのための対照となる抗体を目的として使用され得る抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は当該分野において知られている。例えば、以下の代表的な抗－ＰＤ－Ｌ１抗体：ＭＤＸ－１１０５（BMS）；Ｌ０１Ｘ－Ｃ（Serono）、Ｌ１Ｘ３（Serono）、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（Serono）、およびＰＤ－Ｌ１Ｐｒｏｂｏｄｙ（CytomX）、および共同出願のＷＯ ２００７／００５８７４において開示されるＰＤ－Ｌ１抗体を用いてもよい。
競合アッセイのための対照となる抗体を目的として使用され得る抗－ＰＤ－Ｌ１抗体は当該分野において知られている。例えば、以下の代表的な抗－ＰＤ－Ｌ１抗体：ニボルマブ（nivolumab）（BMS）；１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、４Ａ１１、７Ｄ３および５Ｆ４（各々、共有の米国特許第８,００８,４４９号（BMS）に開示される）、ＭＫ－３４７５（Merck、米国特許第８,１６８,７５７号に開示される）、および米国特許第７,４８８,８０２号に開示される抗体を用いてもよい。
医薬組成物
もう一つ別の態様において、本開示は、組成物、例えば、本開示の１の大環状ペプチドまたはその組み合わせを含有し、医薬的に許容される担体と一緒に処方した、医薬組成物を提供する。かかる組成物は、本開示の１または組み合わせた（例、２種以上の異なる）大環状ペプチド、あるいは免疫抱合体または二重特異性分子を含んでもよい。例えば、本開示の医薬組成物は、標的とする抗原上にある異なるエピトープと結合するか、または補体活性を有する、大環状ペプチド（あるいは免疫抱合体または二重特異性体）の組み合わせを含み得る。
本開示の医薬組成物はまた、併用療法にて、すなわち他の薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、併用療法は、大環状ペプチドを、少なくとも１つの他の抗炎症剤または免疫抑制剤と組み合わせて包含しうる。併用療法にて使用され得る治療剤の例が、下記の本開示の大環状ペプチドの使用でのセクションにおいてより詳細に記載される。
本明細書において使用されるような「医薬的に許容される担体」は、ありとあらゆる、生理学的に適合しうる、溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌および抗真菌剤、等張剤、および吸収遅延化剤等を包含する。好ましくは、該担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例、注射または注入による投与）に適する。投与経路に応じて、活性な化合物、すなわち、大環状ペプチド、免疫抱合体、または二重特異性分子は、該化合物が酸の作用から、該化合物を不活性化する他の天然条件から保護されるように、材料で被覆されてもよい。
本開示の医薬としての化合物は１または複数の医薬的に許容される塩を包含しうる。「医薬的に許容される塩」または「治療的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、望ましくないいずれの毒性効果も付与しない塩をいう（例えば、Berge, S.M.ら、J. Pharm. Sci., 66：1-19（1977）を参照のこと）。かかる塩の例として、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩は、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等などの非毒性の無機酸、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換のアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族酸、および芳香族スルホン酸等などの非毒性の有機酸より誘導される塩を包含する。塩基付加塩は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等などのアルカリまたはアルカリ土類金属より、ならびにＮ,Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等より誘導される塩を包含する。
本開示の医薬組成物はまた、医薬的に許容される抗酸化剤を含んでもよい。医薬的に許容される抗酸化剤の例として：（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等などの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロール等などの油溶性抗酸化剤；および（３）クエン酸、エチレンジアミン四作酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等などの金属キレート化剤が挙げられる。
本開示の医薬組成物に利用され得る適切な水性および非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等など）、および適切なその混合液、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を用いることで、分散液の場合には必要とされる粒度を維持することで、および界面活性剤を用いることで維持され得る。
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントを含有してもよい。微生物の存在の防止は、上記の滅菌操作に供すること、および種々の抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等を配合することの両方を行うことにより保証され得る。糖類、塩化ナトリウム等などの等張剤を組成物に含めることも望ましい。さらに、注入可能な製剤形態の長期にわたる吸収作用はモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収作用を遅らせる物質を配合することによりもたらされてもよい。
医薬的に許容される担体は、滅菌水溶液または分散液、および注入可能な滅菌溶液または分散液をその場で調製するための滅菌粉末を包含する。そのような媒体および薬剤を医薬的に活性な物質に用いることは当該分野にて公知である。任意の従来の媒体または薬剤が該活性化合物と不適合である場合を除き、それらを本開示の医薬組成物中にて用いることを考慮する。補助的な活性化合物も該組成物に配合され得る。
治療用組成物は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で、滅菌性を保持し、かつ安定していなければならない。該組成物は、溶液、ミクロエマルジョン、リポソーム、または薬物高濃度に適する他の規則構造体として処方され得る。担体は、溶媒、または、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等）、およびそれらの適切な混合物を含有する分散媒体であり得る。適当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤を用いることで、分散液の場合には必要とされる粒度を維持することで、および界面活性剤を用いることで維持され得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物に配合することが好ましい。注入可能な組成物の長期にわたる吸収作用は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを配合することによりもたらされ得る。
注入可能な滅菌溶液は、活性な化合物を必要とされる量で、必要とあれば、上記の１の成分またはその組み合わせと一緒に適切な溶媒に配合し、つづいてミクロ濾過の滅菌処理に付すことにより調製され得る。一般に、分散液は、活性な化合物を、基剤となる分散媒体および上記したそれらの成分から必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルに入れることにより調製される。滅菌注入可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合には、その好ましい調製方法は、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）であり、それにより活性成分の粉末に、その前に滅菌濾過に付した溶液から由来のさらに所望の成分を付加して生成する。
単一剤形を生成するのに担体材料と組み合わせることのできる活性成分の量は、治療されるべき対象、および個々の投与方法に応じて変化するであろう。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることのできる活性成分の量は、一般に、治療効果を生じさせる組成物の量であろう。一般に、この量は、１００％の中から、約０.０１％～約９９％の範囲の活性成分、好ましくは約０.１％～約７０％、最も好ましくは約１％～約３０％の範囲の活性成分であり、医薬的に許容される担体と組み合わされる。
投与計画は最適な所望とする応答（例えば、治療的応答）を供するように調整される。例えば、単一のボーラスを投与してもよく、数個の細分割した用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に減少または増加させてもよい。投与を容易に、および用量を均一にするために非経口用組成物を単位剤形にて処方するのが特に有利である。本明細書にて使用されるような単位剤形は、治療すべき対象の単位投与量として適した物理的に分離した単位をいい；各単位は必要とされる医薬担体と関連して所望の治療効果を生成するように計算された所定量の活性化合物を含有する。本開示の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特な特性、および達成されるべき特定の治療効果、および（ｂ）個体での感度を治療するためにかかる活性化合物を合成する分野にて固有の制限によって決定され、それに直接依存する。
大環状ペプチドを投与する場合、その用量は宿主の体重１ｋｇに付き約０.０００１～１００ｍｇ、より一般的には０.０１～５ｍｇである。例えば、用量は０.３ｍｇ／体重ｋｇ、１ｍｇ／体重ｋｇ、３ｍｇ／体重ｋｇ、５ｍｇ／体重ｋｇ、または１０ｍｇ／体重ｋｇ、あるいは１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができる。典型的な治療計画では、１日に１回、１日に２回、週に２回、週に３回、毎週、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、月に１回、３月毎に１回、または３月ないし６月毎に１回の投与が必要となる。本開示の大環状ペプチドについての好ましい投与計画は、１ｍｇ／体重ｋｇまたは３ｍｇ／体重ｋｇを静脈内に投与することであり、その大員環は次の投薬スケジュールの一つで投与される：（ｉ）４週間毎に６回投与され、次に３月毎に投与される；（ｉｉ）３週間毎に投与される；（ｉｉｉ）３ｍｇ／体重ｋｇで１回投与され、つづいて１ｍｇ／体重ｋｇで３週間毎に投与される。
ある種の方法では、結合特異性の異なる２種以上の大環状ペプチドを同時に投与し、その場合、投与される各化合物の投与量は示唆される範囲内にある。化合物は、通常、何度も投与される。単回投与間の間隔は、例えば、毎週、毎月、３月毎、または毎年とすることができる。間隔は、患者における標的抗原に対する大環状ペプチドの血中レベルを測定することにより、示唆されるように不規則とすることもできる。ある種の方法では、約１～１０００ｍｕｇ／ｍｌの、またある方法では約２５～３００ｍｕｇ／ｍｌの血漿中濃度が達成されるように用量を調整する。
あるいはまた、大環状ペプチドは、徐放性製剤として投与することができ、その場合にはそれほど頻繁に投与する必要がない。投与の用量および頻度は、処置が予防的であるか、または治療的であるかに応じて変化し得る。予防的適用においては、相対的に低用量で長期にわたり相対的に頻繁ではない間隔で投与される。ある患者はこれからずっと続けて処置を受ける。治療的適用においては、疾患の進行が縮小または止むまで、好ましくは、患者が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、時に、相対的に短期間で相対的に高用量が必要とされる。その後、患者は予防的投与計画にて投与され得る。
本開示の医薬組成物中の活性成分の実際の用量レベルは、特定の患者、組成物、および投与方法に対して所望の治療的応答を達成するのに効果的であり、該患者に対して毒性でない、活性成分の量が得られるように変化させてもよい。選択される用量レベルは、利用される本開示の特定の組成物の活性、またはそのエステル、塩もしくはアミド、投与経路、投与期間、利用される特定の化合物の排泄速度、治療期間、利用される特定の組成物と併用して使用される他の薬物、化合物および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態および病歴、および医療分野にて周知の同様の因子を含む、種々の薬物動態学的因子に依存するであろう。
本開示の大環状ペプチドの「治療的に効果的な用量」は、好ましくは、疾患の徴候の重篤度の低下、疾患の徴候のない期間の頻度およびその持続期間の増加、または疾患の苦痛に起因する損傷または障害の予防をもたらす。例えば、腫瘍を治療する場合、「治療的に効果的な用量」は、未処理の対象と比べて、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、その上さらにより好ましくは少なくとも約８０％までの細胞増殖または腫瘍増殖を阻害する。化合物の腫瘍増殖および／またはＨＩＶを阻害する能力は、ヒト腫瘍における効能またはウイルス効能を予測する動物実験システムにて評価され得る。あるいはまた、組成物のこの特性は、当業者に公知のアッセイにより、化合物のインビトロにおけるそのような阻害能を試験することによって評価され得る。治療用化合物は、治療的に効果的な量で、腫瘍の大きさを減少させるか、ウイルス負荷を減らすか、あるいはまた対象おける症状を改善することができる。当業者は、対象の大きさ、対象の症状の重篤度、および選択される特定の組成物および投与経路などの要因に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。
もう一つ別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるような、大環状ペプチドおよびもう一つ別の免疫調整剤を含む部材の薬理学キットを提供する。該キットはまたさらに、過剰増殖性疾患（本明細書に記載されるようながんなど）および／または抗ウイルス疾患の治療にて用いるための取扱説明書を含んでもよい。
本開示の組成物は、当該分野にて既知の１または複数の種々の方法を用い、１または複数の投与経路を介して投与され得る。当業者にとって明らかであるように、投与経路および／または方法は所望する結果に応じて変化するであろう。本開示の大環状ペプチドについて好ましい投与経路は、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路、例えば、注射または注入による投与を包含する。本明細書にて使用されるような「非経口投与」なる語は、腸内および局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心内膜、皮内、腹腔内、経皮、皮下、表皮下、関節内、皮膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、および胸骨下の注射および注入を包含する。
あるいはまた、本開示の大環状ペプチドは、局所、表皮、または粘膜性投与経路などの非経口以外の経路、例えば、経鼻的、経口的、膣的、経直腸的、舌下的または局所的に通して投与され得る。
活性な化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化輸送系を含む、放出調整製剤などで、化合物を迅速な放出から保護するであろう担体を用いて調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解可能な生体適合性ポリマーを用いることができる。かかる製剤の調製方法が多数特許されており、当業者に周知である。例えば、Robinson, J.R.らSustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, Marcel Dekker, Inc., New York (1978)を参照のこと。
治療用組成物は当該分野にて公知の医療装置を用いて投与され得る。例えば、好ましい実施態様において、本開示の治療用組成物は、米国特許第５,３９９,１６３号、第５,３８３,８５１号、第５,３１２,３３５号、第５,０６４,４１３号、第４,９４１,８８０号、第４,７９０,８２４号、または第４,５９６,５５６号において開示される装置などの、無針皮下注射器を用いて投与され得る。本開示にて有用な周知のインプラントおよびモジュールの例として、米国特許第４,４８７,６０３号（制御された速度で医薬を分配するためのインプラント可能なマイクロ注入ポンプを開示する）；米国特許第４,４８６,１９４号（皮膚を通して医薬を投与するための治療装置を開示する）；米国特許第４,４４７,２３３号（正確な分配速度で医薬を送達するための医薬品注入ポンプを開示する）；米国特許第４,４４７,２２４号（連続的な薬物送達のための可変流速性インプラント式注入装置を開示する）；米国特許第４,４３９,１９６号（マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧性薬物送達系を開示する）；および米国特許第４,４７５,１９６号（浸透圧性薬物送達系を開示する）が挙げられる。これらの特許は出典明示により本明細書に組み込まれる。かかる他のインプラント、送達系、およびモジュールの多くは、当業者に知られている。
ある実施態様において、本開示の大環状ペプチドはインビボにて適切な分布を確かにするために処方され得る。例えば、血液－脳関門（ＢＢＢ）は多数の高親水性化合物を排除する。本開示の治療用化合物を確実にＢＢＢを通過させるために、（必要ならば、）該化合物を、例えば、リポソームに処方することができる。リポソームを製造する方法については、例えば、米国特許第４,５２２,８１１号、第５,３７４,５４８号、および第５,３９９,３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞または器官に選択的に移され、そうして標的とされる薬物の送達を強化する、１または複数の部分を含んでもよい（例えば、Ranade. V.V.、J. Clin. Pharmacol., 29：685（1989）を参照のこと）。代表的な標的となる部分として、フォラートまたはビオチン（例えば、米国特許第５,４１６,０１６号（Lowら）を参照のこと）；マンノシド（Umezawaら、Biochem. Biophys. Res. Commun., 153：1038（1988））；大環状ペプチド（Bloeman, P.G.ら、FEBS Lett., 357：140（1995）；Owais, M. ら、Antimicrob. Agents Chemother, 39: 180（1995））；界面活性タンパク質Ａ受容体（Briscoeら、Am. J. Physiol., 1233：134（1995））；ｐ１２０（Schreierら、J. Biol. Chem., 269：9090（1994））；Keinanen, K.ら、FEBS Lett., 346：123（1994）も参照のこと；Killion, J.J.ら、Immunomethods 4：273（1994）が挙げられる。
本開示の使用および方法
本開示の大環状ペプチド、組成物および方法は、例えば、ＰＤ－Ｌ１の検出、またはＰＤ－Ｌ１の遮断による免疫応答の強化を含め、インビトロおよびインビボにて多数の有用性を有する。例えば、これらの分子は、インビトロまたはエクスビボにて培養細胞に、あるいは例えば、インビボにてヒト対象に投与され、種々の状態にある免疫性を強化することができる。従って、１の態様において、本開示は、対象における免疫応答を修飾する方法であって、該対象における免疫応答が修飾されるように、本開示の大環状ペプチドを該対象に投与することを含む方法を提供する。該応答が強化されるか、刺激されるか、アップレギュレートされるのが好ましい。他の点では、該大環状ペプチドは、抗イヌ、抗マウス、および／または抗ウッドチャック結合特性、および治療活性を有してもよい。
本明細書において使用されるように、「対象」なる語は、ヒトおよびヒト以外の動物を含むものとする。ヒト以外の動物は、あらゆる脊椎動物、例えば、哺乳類、およびヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、トリ、ウッドチャック、両生類、は虫類などの非哺乳類を含むが、ヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシおよびウマなどの哺乳類が好ましい。好ましい対象として、免疫応答の強化を必要とするヒト患者が挙げられる。該方法は、Ｔ細胞介在の免疫応答を増大させることによって治療され得る障害を有するヒト患者を治療するのに特に適している。特定の実施態様において、該方法はインビボにてがん細胞の処置に特に適している。免疫性の抗原特異的強化を達成するのに、大環状ペプチドが関心のある抗原と一緒に投与され得る。ＰＤ－Ｌ１と結合する大環状ペプチドがもう一つ別の薬剤と一緒に投与される場合、その２つは順番を決めて、または同時に投与するかのいずれかで投与され得る。
該開示は、さらに、サンプル中のヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ－Ｌ１抗原の存在を検出する方法、またはヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ－Ｌ１抗原の量を測定する方法であって、サンプル、および対照のサンプルを、大員環と、ヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ－Ｌ１との間で複合体の形成を可能とする条件下、ヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する対照の大環状ペプチドと接触させることを含む、方法を提供する。次に複合体の形成を検出し、ここで対照のサンプルと比べて、そのサンプルとの間で異なる複合体が形成されることはサンプル中にヒト、ウッドチャック、イヌ、および／またはマウスＰＤ－Ｌ１抗原が存在することを示唆するものである。
開示の大環状ペプチドが、ＣＤ２８、ＩＣＯＳおよびＣＴＬＡ－４と比べて、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合するならば、該開示の大環状ペプチドは細胞表面上でのＰＤ－Ｌ１発現を特異的に検出するのに用いることができ、その上に、免疫親和性精製を介してＰＤ－Ｌ１を精製するのに用いることができる。
がん
ＰＤ－１の、大環状ペプチドによる遮断は、患者におけるがん細胞への免疫応答を強化しうる。ＰＤ－１のリガンドである、ＰＤ－Ｌ１は、正常なヒト細胞では発現されないが、種々のヒトがんにて豊富に存在する（Dongら、Nat. Med., 8：787-789（2002））。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１とが相互に作用することで、腫瘍浸潤性リンパ球の減少、Ｔ－細胞受容体介在性増殖の低下、がん細胞による免疫の回避がもたらされる（Dongら、J. Mol. Med., 81：281-287（2003）；Blankら、Cancer Immunol. Immunother., 54：307-314（2005）；Konishiら、Clin. Cancer Res., 10：5094-5100（2004））。免疫抑制は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１との局所的相互作用を阻害することにより、無効とされ、その上、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２との相互作用が遮断されると、その作用は相加的となり得る（Iwaiら、Proc. Natl. Acad. Sci., 99：12293-12297（2002）；Brownら、J. Immunol., 170：1257-1266（2003））。従来の研究によれば、Ｔ細胞の増殖が、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１との相互作用を阻害することによって、復元され得ることが示されたが、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を遮断することによるインビボでのがん腫瘍の成長に対する直接的な効果について報告はなされていない。一の態様において、本開示はがん腫瘍の成長が抑制されるように大環状ペプチドを用いてインビボにて対象を治療することに関する。大環状ペプチドは単独で使用されてがん腫瘍の成長を阻害してもよい。あるいはまた、大環状ペプチドは他の免疫原性剤、標準的ながん治療剤、または下記に示される他の大環状ペプチドと共に使用されてもよい。
従って、一の実施態様において、該開示は対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、該対象に治療的に効果的な量の大環状ペプチドを投与することを含む、方法を提供する。
その増殖が本開示の大環状ペプチドを用いて阻害され得る好ましいがんとして、典型的には免疫療法に応答するがんが挙げられる。治療するのに好ましいがんの例として、限定されるものではないが、黒色腫（例、転移性悪性黒色腫）、腎細胞がん（例、明細胞がん）、前立腺がん（例、ホルモン不応性前立腺がんおよび去勢抵抗性前立腺がん）、乳がん、結腸直腸がんおよび肺がん（例、扁平および非扁平非小細胞肺がん）が挙げられる。さらには、本開示は難治性または再発性悪性腫瘍であって、その増殖が該開示の大環状ペプチドを用いて阻害され得る腫瘍を包含する。
本開示の方法を用いて治療され得る他のがんの例として、骨肉腫、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、子宮がん、卵管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、慢性または急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病を含む）、小児期に見られる充実性腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓または尿管がん、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、Ｔ－細胞リンパ腫、環境誘発性がん（アスベストにより誘発されるがんを含む）、および当該がんの組み合わせが挙げられる。本開示は、転移がん、特にＰＤ－Ｌ１を発現する転移がんの治療にも有用である（Iwaiら、Int. Immunol., 17：133-144（2005））。
所望により、ＰＤ－Ｌ１と結合する大環状ペプチドは、がん細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド、および炭水化物分子を含む）、細胞、および免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞などの免疫原性物質と組み合わせることができる（Heら、J. Immunol., 173：4919-4928（2004））。使用可能な腫瘍ワクチンの例として、限定されるものではないが、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼのペプチドなどの黒色腫抗原のペプチド、またはサイトカインＧＭ－ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞（以下にさらに記載）が挙げられる。
ヒトにおいて、黒色腫などのある種の腫瘍は免疫原性であることが分かった。ＰＤ－Ｌ１を遮断することによってＴ細胞活性化の閾値を上げることで、宿主における腫瘍応答の活性化が期待されうると予想される。
ＰＤ－Ｌ１遮断はワクチン接種のプロトコルと組み合わせた時が最も効果的であるようである。腫瘍に対するワクチン接種について多くの実験的な戦略方法が提案されている（Rosenberg, S.、Development of Cancer Vaccines、ASCO Educational Book Spring：60-62（2000）；Logothetis, C.、ASCO Educational Book Spring：300-302（2000）；Khayat, D.、ASCO Educational Book Spring：414-428（2000）；Foon, K.、ASCO Educational Book Spring：730-738（2000）を参照のこと；Restifo, N.ら、Cancer Vaccines, Chapter 61, pp.3023-3043, DeVita, V.ら編、Cancer：Principles and Practice of Oncology、Fifth Edition（1997）も参照のこと）。これらの戦略の１つでは、自己または同種の腫瘍細胞を用いてワクチンを調製する。これらの細胞ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ－ＣＳＦを発現するように形質導入される場合に、最も効果的であることが分かった。ＧＭ－ＣＳＦは腫瘍ワクチン接種のための抗原提示の強力なアクチベーターであることがわかった（Dranoffら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90：3539-3543（1993））。
様々な腫瘍における遺伝子発現およびラージスケールな遺伝子発現パターンを研究することで、いわゆる腫瘍特異的抗原が特定されるに至った（Rosenberg, S.A.、Immunity, 10：281-287（1999））。多くの場合、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍にて、および腫瘍が発生した細胞にて発現した分化抗原、例えば、メラニン細胞抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、およびＴｒｐ－２である。より重要なことは、これらの抗原の多くが、宿主にて見られる腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であると示し得ることである。ＰＤ－Ｌ１遮断を、これらのタンパク質に対して免疫応答を生じさせるために、腫瘍にて発現される組換えタンパク質および／またはペプチドの収集体と併合して使用してもよい。これらのタンパク質は、免疫系によって、通常は、自己抗原とみなされ、従ってそれらに対して耐性である。腫瘍抗原はまた、染色体のテロメアの合成に必要とされ、ヒトがんの８５％以上で、限られた数の体組織のみで発現される、タンパク質テロメラーゼを含んでもよい（Kim, Nら、Science, 266：2011-2013（1994））。（これらの体組織は様々な手段で免疫攻撃から保護され得る）。腫瘍抗原はがん細胞で発現される「ネオ抗原」であってもよく、というのも体組織の変異がタンパク質配列を改変させるか、または２つの関連しない配列間で融合タンパク質（すなわち、フィラデルフィア染色体でのｂｃｒ－ａｂｌ）またはＢ細胞腫瘍より由来のイデオタイプを生成するからである。
他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶおよびＨＣＶ）およびカポジ型ヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）などのヒトがんに関与するウイルスからのタンパク質を含んでもよい。ＰＤ－Ｌ１遮断と関連して使用されてもよい他の形態の腫瘍特異的抗原は、腫瘍組織それ自体から単離されたヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）の精製物である。これらのヒートショックタンパク質は腫瘍細胞から由来のタンパク質のフラグメントを含有し、これらのＨＳＰは、抗原提示細胞への送達において、腫瘍免疫を誘発するのに極めて効果的である（Suot, R.ら、Science, 269：1585-1588（1995）；Tamura, Y.ら、Science, 278：117-120（1997））。
樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答をプライミングするのに使用され得る、強力な抗原提示細胞である。ＤＣはエクスビボにて産生され、種々のタンパク質およびペプチド抗原、ならびに腫瘍細胞抽出物をロードし得る（Nestle, F.ら、Nat. Med., 4：328-332（1998））。これらの腫瘍抗原を発現するために、遺伝的手段によりＤＣが形質導入されてもよい。ＤＣはまた、免疫化を目的として腫瘍細胞と直に融合してもよい（Kugler, A.ら、Nat. Med., 6：332-336（2000））。ワクチン接種の方法として、ＤＣ免疫付与をＰＤ－Ｌ１遮断と効果的に組み合わせ、より強力な抗腫瘍応答を活性化してもよい。
ＰＤ－Ｌ１遮断は標準的ながん治療と組み合わされてもよい。ＰＤ－Ｌ１遮断は、効果的には、化学療法と組み合わされてもよい。これらの場合には、投与される化学療法の薬剤量は減らすことが可能である（Mokyr, M.ら、Cancer Res., 58：5301-5304（1998））。そのような組み合わせの一例が、黒色腫を治療するための、大環状ペプチドと、ダカルバジン（decarbazine）との組み合わせである。そのような組み合わせのもう一つ別の例が、黒色腫を治療するための、大環状ペプチドと、インターロイキン－２（ＩＬ－２）との組み合わせである。ＰＤ－Ｌ１遮断および化学療法の併用の背後にある科学的根拠は、大抵の化学療法用化合物の細胞傷害作用の結果としての、細胞死が、抗原提示経路にて腫瘍抗原のレベルの向上をもたらすはずである、というものである。細胞死を通してＰＤ－Ｌ１遮断と相乗作用をもたらす可能性のある他の併用療法が、放射線療法、手術、およびホルモン欠乏療法である。これらのプロトコルは、各々、宿主にて腫瘍抗原の供給源を生み出す。血管形成阻害剤をＰＤ－Ｌ１遮断と組み合わせてもよい。血管形成は腫瘍抗原を宿主抗原提示経路に送り込むことができ、その阻害は腫瘍細胞死をもたらす。
ＰＤ－Ｌ１を遮断する大環状ペプチドはまた、ＦｃアルファまたはＦｃガンマ受容体発現のエフェクター細胞ないし腫瘍細胞を標的とする、二重特異性大環状ペプチドと組み合わせて使用され得る（例えば、米国特許第５,９２２,８４５号および第５,８３７,２４３号を参照のこと）。二重特異性大環状ペプチドを用いて２種の別個の抗原を標的とすることができる。例えば、抗Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原（例、Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ）の二重特異性大環状ペプチドが、マクロファージないし腫瘍部位を標的とするのに使用された。この標的設定は、腫瘍特異的応答をより効率的に活性化しうる。これらの応答のＴ細胞アームは、ＰＤ－Ｌ１遮断を使用することによって増強される。あるいは、腫瘍抗原および樹状細胞特異的細胞表面マーカーに結合する二重特異性大環状ペプチドを使用することによって、抗原がＤＣに直接送達されてもよい。
腫瘍は多種多様な機構により宿主免疫の監視を回避する。これらの機構の多くは、腫瘍により発現され、免疫抑制的である、タンパク質を不活化することで克服され得る。これらは、とりわけ、ＴＧＦ－ベータ（Kehrl, J.ら、J. Exp. Med., 163：1037-1050（1986））、ＩＬ－１０（Howard, M.ら、Immunology Today, 13：198-200（1992））、およびＦａｓリガンド（Hahne, M.ら、Science, 274：1363-1365（1996））を包含する。これらの各化学物質に対して大環状ペプチドを抗－ＰＤ－Ｌ１と組み合わせて用い、免疫抑制剤の効果を相殺し、宿主による腫瘍免疫応答を有利にすることができる。
宿主免疫応答性を活性化するのに使用され得る他の大環状ペプチドは、抗－ＰＤ－Ｌ１と組み合わせて使用され得る。これらはＤＣ機能および抗原提示を活性化する樹状細胞の表面にある分子を包含する。抗－ＣＤ４０大環状ペプチドは効果的にＴ細胞ヘルパー活性と置換され得（Ridge, J.ら、Nature, 393：474-478（1998））、ＰＤ－１抗体と一緒に使用され得る（Ito, N.ら、Immunobiology, 201（5）：527-540（2000））。大環状ペプチドを、ＣＴＬＡ－４（例えば、米国特許第５,８１１,０９７号）、ＯＸ－４０（Weinberg, A.ら、Immunol., 164：2160-2169（2000））、４－１ＢＢ（Melero, I.ら、Nat. Med., 3：682-685（1997）、およびＩＣＯＳ（Hutloff, A.ら、Nature, 397：262-266（1999））などのＴ細胞共刺激性分子に対して活性にすることはまた、Ｔ細胞の活性化のレベルを高めるかもしれない。
骨髄移植は、現在、造血起源の種々の腫瘍を治療するのに使用されている。対宿主移植片疾患はこの治療の結果であるが、治療的利益は移植片対腫瘍応答より得ることができる。ＰＤ－Ｌ１遮断を用いてドナーの移植腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を増大させることができる。
また、腫瘍に拮抗する抗原特異的Ｔ細胞を付与するために、抗原特異的Ｔ細胞をエクスビボにて活性化および増加させ、これらの細胞を受容者に養子免疫伝達することを含む実験的治療プロトコルもいくつか存在する（Greenberg, R.ら、Science, 285：546-551（1999））。これらの方法を用いてＣＭＶなどの感染物質に対するＴ細胞応答を活性化することもできる。大環状ペプチドの存在下でのエクスビボにおける活性化は、養子免疫伝達されたＴ細胞の頻度および活性を増大させると期待され得る。
感染疾患
本開示の他の方法は、特定の毒素または病原体に曝された患者を治療するのに使用される。従って、本開示のもう一つ別の態様は、対象における感染疾患を治療する方法であって、該対象が感染疾患について治療されるように、該対象に本開示の大環状ペプチドを投与することを含む、方法を提供する。
上記される腫瘍に対するその適用と同様に、ＰＤ－Ｌ１遮断は、単独で、またはアジュバントとして、ワクチンと組み合わせて使用され、病原体、毒素、または自己抗原に対する免疫応答を刺激することができる。この治療方法が特に有用である可能性のある病原体の例として、現在のところ効果的なワクチンのない病原体、または従来のワクチンが決して完全には効果的でない病原体が挙げられる。これらは、以下に限定されないが、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ、およびＣ型）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア（Butler, N.S.ら、Nature Immunology 13, 188-195（2012）；Hafalla, J.C.R.ら、PLOS Pathogens；February 2, 2012）、リーシュマニア、黄色ブドウ球菌、緑膿菌を包含する。ＰＤ－Ｌ１遮断は、感染の間に抗原の改変を示す、ＨＩＶなどの物質によって確立された感染に対して特に有用である。これらの新規なエピトープは抗－ヒトＰＤ－Ｌ１投与の時点で異物として認識され、かくしてＰＤ－Ｌ１を介する負のシグナルによって減衰されない強力なＴ細胞応答を誘発する。
本開示の方法により治療可能な感染を引き起こす病原性ウイルスのいくつかの例として、ＨＩＶ、肝炎ウイルス（Ａ、Ｂ、またはＣ）、ヘルペスウイルス（例、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ、およびＣＭＶ、エプスタイン・バーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルル、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デング熱ウイルス、パピローマウイルス、軟属腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルスおよびアルボウイルス脳炎ウイルスが挙げられる。
本開示の方法により治療可能な感染を引き起こす病原性細菌のいくつかの例として、クラミジア、リケッチア菌、ミコバクテリア、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌（conococci）が、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、バチルス、コレラ、破傷風、ボツリヌス菌中毒、炭疽、腺ペスト、レプトスピラ症、およびライム病の細菌が挙げられる。
本開示の方法により治療可能な感染を引き起こす病原性真菌のいくつかの例として、カンジダ（アルビカンス、クルセイ、グラブラタ、トロピカリス等）、クリプトコッカス・ネオフォーム、アスペルギルス（フミガーツス、ニガー等）、ケカビ属（ケカビ、アブジディア、クモノスカビ）、スポロトリックス・シェンキィ、ブラストミセス・デルマチチジス、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、コクシジオイデス・イミティスおよびヒストプラスマ・カプスラーツムが挙げられる。
本開示の方法により治療可能な感染を引き起こす病原性寄生体のいくつかの例として、赤痢アメーバ、大腸バランチジウム、ネグレリア・フォーレリ、アカントアメーバ・スピーシズ、ジアルジア・ランブリア、クリプトスポリジウム・スピーシズ、ニューモシスティス・カリニ、プラスモディウム・ビバックス、バベシア・ミクロチ、トリパノソーマ・ブルーセイ、トリパノソーマ・クルーズ、リーシュマニア・ドノバン、トキソプラズマ・ゴンジイ、およびブラジル鉤虫が挙げられる。
上記したいずれの方法においても、ＰＤ－Ｌ１遮断は、腫瘍抗原の提示の強化を提供する、サイトカイン治療（例、インターフェロン、ＶＥＧＦ活性を標的とする物質またはＶＥＧＦ－受容体、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－２）、または二重特異性抗体療法などの他の形態の免疫療法と組み合わせることができる（例えば、Holliger、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90：6444-6448（1993）；Poljak、Structure, 2：1121-1123（1994）を参照のこと）。
自己免疫反応
大環状ペプチドは自己免疫応答を誘発および増幅しうる。実際、腫瘍細胞およびペプチドワクチンを用いて抗腫瘍応答が誘発されることで、多くの抗腫瘍応答が、抗自己反応性（抗－ＣＴＬＡ－４＋ＧＭ－ＣＳＦ－修飾のＢ１６黒色腫にて観察される脱色素（van Elsasら、前掲）；Ｔｒｐ－２ワクチン接種したマウスにおける脱色素（Overwijk, W.ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96：2982-2987（1999））；ＴＲＡＭＰ腫瘍細胞ワクチンにより惹起される自己免疫前立腺炎（Hurwitz, A.、supra（2000））、黒色腫ペプチド抗原ワクチン接種およびヒト臨床実験において観察される白斑（Rosenberg, S.A.ら、J. Immunother. Emphasis Tumor Immunol., 19（1）：81-84（1996）））と関連していることが明らかにされた。
従って、疾患の治療用のこれらの自己タンパク質に対する免疫応答を効果的に生じさせるワクチン接種プロトコルを考案するために、抗－ＰＤ－Ｌ１遮断を種々の自己タンパク質と併用することを考慮することが可能である。例えば、アルツハイマー病は、脳内に沈着したアミロイドのベータペプチドが不当に蓄積していることが関与しており、アミロイドに対する抗体反応でこれらのアミロイド沈着を除去することができる（Schenkら、Nature, 400：173-177（1999））。
他の自己タンパク質も、アレルギーおよび喘息を治療するためのＩｇＥ、および関節リウマチ用のＴＮＦアルファなどの標的として使用されてもよい。最後に、種々のホルモンに対する抗体応答が本明細書に開示の大員環の使用によって誘発されてもよい。生殖ホルモンに対する中和抗体応答が避妊に使用されてもよい。特定の腫瘍の成長に必要とされるホルモンおよび他の可溶性因子に対する中和抗体応答を、可能性のあるワクチン接種の標的として考えてもよい。
抗－ＰＤ－Ｌ１大員環を使用する上記と類似する方法は、治療的自己免疫応答を誘発し、アルツハイマー病におけるＡベータを含むアミロイド沈着物、ＴＮＦアルファおよびＩｇＥなどのサイトカインのような他の自己抗原が不適切に蓄積した患者を治療するのに使用され得る。
ワクチン
大環状ペプチドは、抗－ＰＤ－１大員環を関心のある抗原（例、ワクチン）と一緒に共投与することにより抗原特異的免疫応答を刺激するのに使用されてもよい。従って、もう一つ別の態様において、本開示は、対象での抗原に対する免疫応答を強化する方法であって、該対象に、（ｉ）抗原；および（ｉｉ）対象にて抗原に対する免疫応答を強化するような抗－ＰＤ－１大員環、を投与することを含む、方法を提供する。抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または病原体から由来の抗原とすることができる。限定されるものではないが、かかる抗原の例として、上記される腫瘍抗原（または腫瘍ワクチン）、または上記のウイルス、細菌または他の病原体から由来の抗原などの、上記のセクションにて記載される抗原が挙げられる。
本開示の組成物（例、大環状ペプチド、多重特異的または二重特異性分子、および免疫抱合体）をインビボおよびインビトロにて投与する適切な経路は当該分野にて周知であり、当業者により選択され得る。例えば、組成物は注射（例、静脈内または皮下注射）により投与され得る。使用される分子の適切な用量は、対象の年齢および体重、および組成物の濃度および／または処方に依存するであろう。
上記されるように、本開示の大環状ペプチドは、１または複数の他の治療剤、例えば、細胞毒性剤、放射毒性剤、または免疫抑制剤と共投与され得る。該ペプチドは該薬剤と（免疫複合体として）リンクさせることができ、または薬剤と別個に投与することができる。後者の場合（別個の投与の場合）には、ペプチドは、薬剤の前に、後に、または同時に投与することができ、あるいは他の既知の療法、例、抗癌療法、例、放射線療法と共投与することができる。かかる治療剤として、とりわけ、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シスプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、デカルバジンおよびシクロホスファミドヒドロキシ尿素などの抗新生物剤を挙げることができ、それ自体は患者に対して毒性または亜毒性にあるレベルで効果があるにすぎない。シスプラチンは、４週間毎に１回、１００ｍｇ／用量として静脈内投与され、アドリアマイシンは、２１日毎に１回、６０～７５ｍｇ／ｍｌの用量として静脈内投与される。本開示の大環状ペプチドの、化学療法剤との共投与は、異なる作用機序を介して作用し、ヒト腫瘍細胞に対して細胞毒性作用を生じさせる、２種の抗がん剤を提供する。かかる共投与は、薬物に対する耐性の発達による、または腫瘍細胞を該ペプチドと非反応性とするであろうその抗原性の変化による、問題を解決しうる。
本開示の範囲内には、本開示の組成物（例、大環状ペプチド、二重特異性または多重特異性分子、あるいは免疫抱合体）および使用説明書を含むキットもある。該キットは、少なくとも１個のさらなる試薬、あるいは１または複数の本開示のさらなる大環状ペプチド（例、該大員環とは異なる、ＰＤ－Ｌ１抗原でのエピトープと結合する相補的活性を有するヒト抗体）をさらに含有しうる。キットは、典型的には、キットの中身の意図した使用を示すラベルを含む。ラベルなる語は、該キットにて、または一緒に供給されるか、さもなければ該キットに添付して供給される、いずれの筆記または記録材料をも包含する。
併用療法
本開示の大環状ペプチドと、もう一つ別のＰＤ－Ｌ１アンタゴニストおよび／または他の免疫調節剤との組み合わせは、過剰増殖性疾患に対して免疫応答を強化するのに有用である。例えば、これらの分子は、インビトロまたはエクスビボにて、培養中の細胞に、あるいは、例えばインビボにて、ヒト対象に投与され、種々の状況での免疫性を強化することができる。従って、１の態様にて、該開示は、対象において免疫応答を修飾する方法であって、該対象における免疫応答が修飾されるように、該対象に本開示の大環状ペプチドを投与することを含む、方法を提供する。該応答は強化、刺激、またはアップレギュレートされるのが好ましい。もう一つ別の実施態様において、本開示は、過剰増殖性疾患の免疫刺激治療剤での治療に付随する有害事象を改変する方法であって、本開示の大環状ペプチドおよび治療用量以下のもう一つ別の免疫調節剤を対象に投与することを含む、方法を提供する。
ＰＤ－Ｌ１の大環状ペプチドによる遮断は、患者でのがん細胞に対する免疫応答を強化しうる。その増殖が本開示の大環状ペプチドを用いて阻害され得るがんは、典型的には、免疫療法に応答するがんを包含する。本開示の併用療法で治療するのに代表的ながんの例として、黒色腫（例、転移性悪性黒色腫）、腎臓がん、前立腺がん、乳がん、大腸がんおよび肺がんが挙げられる。本開示の方法を用いて治療され得る他のがんの例として、骨肉腫、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、結腸がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、子宮がん、卵管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、慢性または急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病を含む）、小児期に見られる充実性腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱がん、腎臓または尿管がん、腎盂がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、Ｔ－細胞リンパ腫、環境誘発性がん（アスベストにより誘発されるがんを含む）、および当該がんの組み合わせが挙げられる。本開示はまた、転移性がんの治療にも有用である。
特定の実施態様において、本明細書に記載の少なくとも１つの大環状ペプチドを含有する治療剤の組み合わせは、医薬的に許容される担体中に単一の組成物として同時に、または各治療剤が連続して投与され得る別個の組成物として同時に投与されてもよい。例えば、第２免疫調節剤および本開示の大環状ペプチドは、第２免疫調節剤を最初に投与し、大環状ペプチドを次に投与するか、あるいは大環状ペプチドを最初に投与し、第２免疫調節剤を次に投与するように、連続して投与され得る。さらには、併用療法が複数回にわたって連続して投与される場合、逐次投与の順序は、投与の各時点で、逆にすることも、あるいは同じ順番を保持すこともでき、逐次投与が同時投与と組み合わされてもよく、あるいはそのいずれの組み合わせであってもよい。例えば、第２免疫調節剤および大環状ペプチドの第１投与は同時であってもよく、第２投与は第２免疫調節剤が最初で、大環状ペプチドが次で逐次的であってもよく、第３投与は大環状ペプチドが最初で、免疫調節剤が次で逐次的であってもよい等である。もう一つ別の代表的な投与計画は、大環状ペプチドを最初に、第２免疫調節剤を次に連続して投与する第１投与を含んでもよく、その後の投与が同時であってもよい。
所望により、大環状ペプチドと、第２免疫調節剤との組み合わせは、がん細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド、および炭水化物分子を含む）、細胞、および遺伝子をコード化する免疫刺激サイトカインでトランスフェクトされた細胞などの免疫原性剤とさらに組み合わせることができる（Heら、J. Immunol., 173：4919-4928（2004））。限定されないが、使用できる腫瘍ワクチンの例として、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼのペプチド、あるいはチロシンＧＭ－ＣＳＦを発現するためにトランスフェクトされた腫瘍細胞（下記にさらに記載される）が挙げられる。
ＰＤ－Ｌ１大環状ペプチドおよび第２免疫調節剤の組み合わせは、さらに、ワクチン接種のプロトコルと組み合わせることができる。腫瘍に拮抗する多くの実験的方法が創作された（Rosenberg, S.、Development of Cancer Vaccines、ASCO Educational Book Spring：60-62（2000）；Logothetis, C.、ASCO Educational Book Spring：300-302（2000）；Khayat, D.、ASCO Educational Book Spring：414-428（2000）；Foon, K.、ASCO Educational Book Spring：730-738（2000）を参照のこと；またRestifoら、Cancer Vaccines, Chapter 61, pp. 3023-3043, DeVitaら編、Cancer：Principles and Practice of Oncology, Fifth Edition（1997））。これらのうちの１つの方法では、自己または同種の腫瘍細胞を用いてワクチンが調製される。これらの細胞ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ－ＣＳＦを発現するように形質導入される時に、最も効果的であると示されている。ＧＭ－ＣＳＦは腫瘍ワクチン接種における抗原提示の強力な活性化剤であると示されている（Dranoffら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90：3539-3543（1993））。
様々な腫瘍における遺伝子発現およびラージスケールな遺伝子発現パターンを研究することで、いわゆる腫瘍特異的抗原を明確にするに至った（Rosenberg、Immunity, 10：281-287（1999））。多くの場合、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍にて、および腫瘍が発生した細胞にて発現した分化抗原、例えば、メラニン細胞抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、およびＴｒｐ－２である。より重要なことは、これらの抗原の多くは宿主にて見られる腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であると示されうることである。特定の実施態様において、ＰＤ－Ｌ１の大環状ペプチドと、第２免疫調節剤とを組み合わせ、これらのタンパク質に対する免疫応答を生じさせるために、腫瘍にて発現される組換えタンパク質および／またはペプチドの収集体と併合して使用されてもよい。これらのタンパク質は、免疫系によって、通常は、自己抗原として観察され、従ってそれらに対して耐性がある。腫瘍抗原はまた、染色体のテロメアの合成に必要とされ、ヒトがんの８５％以上で、限られた数の体組織のみで発現される、タンパク質テロメラーゼを含んでもよい（Kimら、Science, 266：2011-2013（1994））。（これらの体組織は様々な手段で免疫攻撃から保護され得る）。腫瘍抗原はがん細胞で発現される「ネオ抗原」であってもよく、というのも体組織の変異がタンパク質配列を改変させるか、または２つの関連しない配列間で融合タンパク質（すなわち、フィラデルフィア染色体でのｂｃｒ－ａｂｌ）またはＢ細胞腫瘍より由来のイデオタイプを生成するからである。
他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶおよびＨＣＶ）およびカポジ型ヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）などのヒトがんに関与するウイルスからのタンパク質を含んでもよい。ＰＤ－Ｌ１大環状ペプチドの遮断と関連して使用されてもよい他の形態の腫瘍特異的抗原は、腫瘍組織それ自体から単離されたヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）の精製物である。これらのヒートショックタンパク質は腫瘍細胞から由来のタンパク質のフラグメントを含有し、これらのＨＳＰは、抗原提示細胞への送達において、腫瘍免疫を誘発するのに極めて効果的である（Suotら、Science, 269：1585-1588（1995）；Tamura Y.ら、Science, 278：117-120（1997））。
樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答をプライミングするのに使用され得る、強力な抗原提示細胞である。ＤＣはエクスビボにて産生され、種々のタンパク質およびペプチド抗原、ならびに腫瘍細胞抽出物でロードされ得る（Nestleら、Nat. Med., 4：328-332（1998））。また、これらの腫瘍抗原を発現するために、遺伝的手段によりＤＣが形質導入されてもよい。ＤＣはまた、免疫化を目的として腫瘍細胞に直に融合されてもよい（Kuglerら、Nat. Med., 6：332-336（2000））。ワクチン接種の方法として、ＤＣ免疫化は抗－ＰＤ－Ｌ１の大環状ペプチドおよび第２免疫調節剤の組み合わせと効果的にさらに組み合わされ、より強力な抗腫瘍応答を活性化してもよい。
抗－ＰＤ－Ｌ１大環状ペプチドと、さらなる免疫調節剤との組み合わせもまた、標準的ながん治療とさらに組み合わされてもよい。例えば、大環状ペプチドと、第２免疫調節剤との組み合わせは、化学療法計画と効果的に組み合わされてもよい。これらの場合には、大環状ペプチドと、第２免疫調節剤との組み合わせで観察されるように、本開示の組み合わせと一緒に投与される他の化学療法試剤の用量を減らすことが可能である（Mokyrら、Cancer Res., 58：5301-5304（1998））。かかる組み合わせの例は、大環状ペプチドと、第２免疫調節剤に、さらにデカルバジンを合わせた、黒色腫の治療用の組み合わせである。もう一つ別の例が、大環状ペプチドと、第２免疫調節剤に、さらにインターフェロン－２（ＩＬ－２）を合わせた、黒色腫の治療用の組み合わせである。ＰＤ－Ｌ１大環状ペプチドおよびもう一つ別の免疫調節剤と、化学療法との併用の背後にある科学的根拠は、化学療法の化合物の多くが細胞毒性作用を有する結果として、細胞死が抗原提示経路において腫瘍抗原のレベルの上昇をもたらすはず、というものである。抗－ＰＤ－Ｌ１大環状ペプチドとさらなる免疫調節剤との組み合わせが細胞死を通して相乗作用をもたらす可能性のある他の併用療法として、放射線、手術、またはホルモン除去療法が挙げられる。これらのプロトコルは、各々、宿主にて腫瘍抗原の供給源をクリエートする。血管形成阻害剤もまたＰＤ－Ｌ１と第２免疫調節剤との併用と組み合わされてもよい。血管形成は腫瘍抗原を宿主抗原提示経路に送り込む供給源でもあり、その阻害は腫瘍細胞死をもたらす。
ＰＤ－Ｌ１と、もう一つ別の免疫調節剤との組み合わせはまた、ＦｃアルファまたはＦｃガンマ受容体を発現するエフェクター細胞から腫瘍細胞を標的とする、二重特異性大環状ペプチドと組み合わせて使用され得る（例えば、米国特許第５,９２２,８４５号および第５,８３７,２４３号を参照のこと）。二重特異性大環状ペプチドは２つの別個の抗原を標的とするのに使用され得る。例えば、抗－Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原（例、Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ）の二重特異性大環状ペプチドを用いてマクロファージから腫瘍の部位を標的とした。この標的化は腫瘍特異的応答をより効果的に活性化させるかもしれない。これらの応答のＴ細胞アームはＰＤ－Ｌ１と第２の免疫調節剤との組み合わせを用いることによって増強されるであろう。あるいはまた、腫瘍抗原と樹状細胞特異的細胞表面マーカーとに結合する、二重特異性大環状ペプチドを用いることで、抗原をＤＣに直接送達してもよい。
もう一つ別の例において、大環状ペプチドと、第２免疫調節剤との組み合わせを、RITUXAN（登録商標）（リツキシマブ）、HERCEPTIN（登録商標）（トラスツズマブ）、BEXXAR（登録商標）（トシツモマブ）、ZEVALIN（登録商標）（イブリツモマブ）、CAMPATH（登録商標）（アレムツズマブ）、リムホシド（Lymphocide）（エプラツズマブ（eprtuzumab））、AVASTIN（登録商標）（ベバシズマブ）、およびTARCEVA（登録商標）（エルロチニブ）等などの抗腫瘍性大環状薬剤と合わせて使用しうる。例示であって、理論により拘束されるものではなく、抗がん抗体または毒素とコンジュゲートした抗がん抗体での治療は、第２免疫調節剤標的またはＰＤ－Ｌ１によって媒介される免疫応答を増強させるであろう、がん細胞死（例、腫瘍細胞死）をもたらしうる。例示的な実施態様において、過剰増殖性疾患（例、がん腫瘍）の治療は、宿主によって抗腫瘍免疫応答が強化される可能性のある、抗がん抗体と、大環状ペプチドおよび第２免疫調節剤とを同時にまたは連続して、あるいはそのいずれかで併用して組み合わせることを包含しうる。
腫瘍は多種多様な作用機構によって宿主免疫監視を逃れている。これらの作用機構の多くは、腫瘍により発現され、免疫抑制的である、タンパク質を不活化することにより克服され得る。これらは、とりわけ、ＴＧＦ－ベータ（Kehrl, J.ら、J. Exp. Med., 163：1037-1050（1986））、ＩＬ－１０（Howard, M.ら、Immunology Today, 13：198-200（1992））、およびＦａｓリガンド（Hahne, M.ら、Science, 274：1363-1365（1996））を包含する。もう一つ別の例において、これらの各実体に対する抗体をさらに、大環状ペプチド、およびもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせて免疫抑制剤の作用を弱め、宿主による抗腫瘍免疫応答に有利に働くものとさせてもよい。
宿主免疫応答性を活性化するのに使用され得る他の薬剤が、本開示の大環状ペプチドと組み合わされてさらに使用され得る。これらは、ＤＣ機能および抗原提示を活性化する樹状細胞の表面にある分子を包含する。抗ＣＤ４０大環状ペプチドは、Ｔ細胞ヘルパー活性と効果的に置き換えることができ（Ridge, J.ら、Nature, 393：474-478（1998））、本開示の大環状ペプチドと、単独で、または抗－ＣＴＬＡ－４の組み合わせとの併用のいずれかで合わせて使用され得る（Ito, N.ら、Immunobiology, 201（5）：527-540（2000））。大環状ペプチドをＯＸ－４０（Weinberg, A.ら、Immunol., 164：2160-2169（2000））、４－１ＢＢ（Melero, I.ら、Nat. Med., 3：682-685（1997）、およびＩＣＯＳ（Hutloff, A.ら、Nature, 397：262-266（1999））などのＴ細胞共刺激分子に対して活性にすることはまた、Ｔ細胞の活性化のレベルを増加させるかもしれない。
造血起源の種々の腫瘍を治療するのに、現在では、骨髄移植が使用されている。対宿主移植片疾患がこの治療の結果であるが、対腫瘍移植片応答から治療的利益を得ることができるかもしれない。本開示の大環状ペプチドは、単独で、またはもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせて使用され、ドナー移植の腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を増大させることができる。
また、腫瘍に拮抗する抗原特異的Ｔ細胞を得るために、抗原特異的Ｔ細胞をエクスビボにて活性化および増大させ、これらの細胞を受容者に養子免疫伝達することを含む、実験的治療プロトコルもいくつか報告されている（Greenberg, R.ら、Science, 285：546-551（1999））。これらの方法を用いてＣＭＶなどの感染物質に対するＴ細胞応答を活性化することもできる。本開示の大環状ペプチドの存在下でのエクスビボにおける活性化は、単独で、またはもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせるかのいずれかで、養子免疫伝達されたＴ細胞の頻度および活性を増大させると期待され得る。
特定の実施態様において、本開示は、過剰増殖性疾患の免疫刺激剤での治療に付随する有害事象を改変する方法であって、本開示の大環状ペプチドを治療用量以下のもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせて対象に投与することを含む、方法を提供する。例えば、本開示の方法は、非吸収性ステロイドを患者に投与することによって、免疫刺激性治療抗体誘発の大腸炎または下痢の発生率を下げる方法を提供する。免疫刺激性治療抗体を受けるであろう患者はいずれも、そのような治療によって誘発される大腸炎または下痢を発症する危険があるため、このすべての患者集団は本開示の方法による治療に適する。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療し、ＩＢＤの増悪を防止するためにステロイドが投与されるが、ＩＢＤと診断されていない患者においてＩＢＤを防止するのに（ＩＢＤの発生を減らすのに）ステロイドが使用されたことはなかった。非吸収性ステロイドであっても、ステロイドに伴う有意な副作用がその予防的使用を妨げた。
さらなる実施態様において、本開示の大環状ペプチドは、単独で、またはもう一つ別の免疫調節剤と組み合わせて、いずれかの非吸収性ステロイドの使用とさらに組み合わせることができる。本明細書にて使用される「非吸収性ステロイド」は、肝臓にて代謝した後に、ステロイドの生物学的利用能が低く、すなわち約２０％未満であるような、広範囲に及ぶ初回通過代謝作用を示すグルココルチコイドである。本開示の１の実施態様において、非吸収性ステロイドはブデソニドである。ブデソニドは局所的に作用するグルココルチコステロイドであり、それは経口投与した後に、主に肝臓で広く代謝される。エントコート（ENTOCORT（登録商標））ＥＣ（Astra-Zeneca）は、薬物を回腸に、結腸のあらゆる箇所に送達することを最適化するように開発されたブデソニドのｐＨ－および時間－依存性経口製剤である。エントコート（登録商標）ＥＣは、回腸および／または上行結腸にて作用する軽度から中程度のクローン病の治療用に米国にて承認された。エントコート（登録商標）ＥＣのクローン病の治療における通常の経口用量は６～９ｍｇ／日である。エントコート（登録商標）ＥＣは腸内で放出され、その後で腸粘膜にて吸収および保持される。エントコート（登録商標）ＥＣは胃粘膜を通り標的組織に入ると、肝臓にてシトクロムＰ４５０系によってグルココルチコイド活性がわずかにしかない代謝産物に広く代謝される。従って、生物学的利用能は低い（約１０％）。ブデソニドの低生物学的利用能は、あまり広くない初回通過代謝の他のグルココルチコイドと比べて、治療可能比の改善をもたらす。ブデソニドは、全身作用性のコルチコステロイドよりも、視床下部－下垂体の抑制が小さいことを含め、副作用が少ない。しかしながら、エントコート（登録商標）ＥＣの慢性投与は、副腎皮質機能亢進症および副腎抑制などの全身性グルココルチコイド作用をもたらしうる。Physicians’ Desk Reference Supplement, 第58版, 608-610（2004）を参照のこと。
その上さらなる実施態様において、ＰＤ－Ｌ１およびもう一つ別の免疫調節剤の組み合わせを非吸収性ステロイドと一緒にし、サリチラートとさらに合わせることができる。サリチラートは、例えば：スルファサラジン（AZULFIDINE（登録商標）、Pharmacia & Upjohn）；オルサラジン（DIPENTUM（登録商標）、Pharmacia & UpJohn）；バラサラジド（COLAZAL（登録商標）、Salix Pharmaceuticals, Inc.）；およびメサラミン（ASACOL（登録商標）、Procter & Gamble Pharmaceuticals；PENTASA（登録商標）、Shire US；CANASA（登録商標）、Axcan Scandipharm, Inc.；ROEASA（登録商標）、Solvay）などの５－ＡＳＡ薬剤を包含する。
投与量および製剤
式Ｉの適切なペプチド、より具体的には本明細書に記載の大環状ペプチドは、化合物として単独で、および／または許容される担体と混合して医薬製剤の形態にて、糖尿病、および他の関連する疾患を治療するために患者に投与され得る。糖尿病を治療する分野の当業者は、該化合物をかかる治療を必要とするヒトを含む哺乳動物に投与する量および経路を容易に決定し得る。投与経路は、限定されないが、経口、口内、経直腸、経皮、バッカル、経鼻、経肺、皮下、筋肉内、皮内、舌下、結腸内、眼内、静脈内、または腸内投与を包含しうる。該化合物は、許容される薬局実務を基礎とし、投与経路に従って、処方される（Finglら、in The Pharmacological Basis of Therapeutics、第1章、1頁（1075）；Remington’s Pharmaceutical Sciences、第18版、Mack Publishing Co.、Easton、PA（1990））。
本明細書に記載の医薬的に許容されるペプチドの組成物は、錠剤、カプセル（その各々が徐放性製剤または時間放出製剤を包含する）、ピル、散剤、顆粒、エリキシル、インサイチュゲル、ミクロスフェア、結晶複合体、リポソーム、ミクロエマルジョン、チンキ、懸濁液、シロップ、エアロゾルスプレー、およびエマルジョンなどの複数の剤形にて投与され得る。本明細書に記載の組成物はまた、経口、静脈内（ボーラスまたは点滴）、腹腔内、皮下、経皮または筋肉内形態にて投与され得、そのすべてが製薬の分野における当業者に周知の剤形を用いる。該組成物は単独で投与されてもよいが、一般に、選択される投与経路および標準的薬務を基礎として選択される医薬担体と一緒に投与されるであろう。
本明細書に記載の組成物の投与計画は、もちろん、個々の薬剤の薬理学的特性およびその投与方法および経路；受容者の種類、年齢、性別、健康、病状および体重；症状の特性および程度；併用治療の種類；治療頻度；投与の経路、患者の腎臓および肝機能、および所望する効果などの既知の因子に応じて変化するであろう。医師または獣医師は、病態を防止、反撃、またはその進行を阻むのに必要とされる薬物の効果的な量を決定および処方することができる。
一般的指針によれば、活性成分の一日の経口用量は、指示される効果を得るのに使用されるとすれば、約０.００１～１０００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１～１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、および最も好ましくは約０.６～２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であろう。静脈内投与では、活性成分の一日の用量は、指示される効果を得るのに使用されるとすれば、一定の速度で注入する間で０.００１ｎｇ～１００.０ｎｇ／分／体重ｋｇの範囲であろう。かかる一定の静脈内注入は、好ましくは、０.０１ｎｇ～５０ｎｇ／分／体重ｋｇの速度で、最も好ましくは、０.０１ｎｇ～１０.０ｍｇ／分／体重ｋｇの速度で投与され得る。本明細書に記載の組成物は、一回の日用量にて投与されてもよく、あるいは全体の日用量を一日に２回、３回、または４回に分割した用量にて投与されてもよい。本明細書に記載の組成物はまた、必要とあれば数日／数週間／数ヶ月の期間にわたって薬物の持続放出を可能とするであろう、デポー製剤によって投与されてもよい。
本明細書に記載の組成物は、適切な鼻腔内ベヒクルの局所的使用を介するか、または経皮パッチを用いる経皮経路を介して、鼻腔内形態にて投与され得る。経皮デリバリーシステムの形態にて投与される場合、その用量投与は、もちろん、投与計画を通じて間欠的であるよりもむしろ連続的であろう。
組成物は、典型的には、意図する投与形態、すなわち、経口用錠剤、カプセル、エリキシル、噴射剤と共にまたは無しで生成されるエアロゾルスプレー、およびシロップについて適宜選択される、適切な医薬希釈剤、賦形剤、または担体（本明細書にて包括的に医薬担体と称される）との混合物にて、従来の薬務と一致して投与される。
例えば、錠剤またはカプセルの形態にて経口投与する場合、活性な薬物成分は、限定されないが、ラクトース、澱粉、シュークロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、およびソルビトールなどの経口で非毒性の医薬的に許容される不活性な担体と組み合わされてもよく；液体形態にて経口投与される場合、経口用薬物成分は、限定されないが、エタノール、グリセロール、および水などの経口で非毒性の医薬的に許容される不活性ないずれの担体と組み合わせることもできる。その上、望ましいか、必要とあれば、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤も該混合物に配合することができる。適切な結合剤として、限定されないが、澱粉、ゼラチン、限定されないが、グルコースまたはベータ－ラクトースなどの天然糖、コーン甘味剤、アカシア、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウムなどの天然および合成ガム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、およびワックスが挙げられる。これらの剤形にて使用される滑沢剤として、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および塩化ナトリウムが挙げられる。崩壊剤は、限定されないが、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、およびキサンタンガムを包含する。
本明細書に記載の組成物はまた、小型単層ベシクル、大型単層ベシクル、および多層ベシクルなどの混合ミセルまたはリポソーム送達系の形態にて投与されてもよい。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質より形成され得る。透過促進剤を加えて薬物吸収を強化してもよい。
プロドラッグは医薬の望ましい多くの特性（すなわち、溶解性、生物学的利用能、製造性等）を強化することが知られているため、本明細書に記載の化合物はプロドラッグの形態にて送達されてもよい。かくして、本明細書に記載の主題は、この特許請求の範囲に記載の化合物、その送達方法、および該化合物を含有する組成物に及ぶものとする。
本明細書に記載の組成物はまた、標的可能な薬物担体として可溶性ポリマーとカップリングさせてもよい。かかるポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピル－メタクリルアミド－フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド－ポリリジンを包含し得る。さらには、本明細書に記載の組成物は、薬物の制御放出を達成するのに有用な一連の生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリ－ε－カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアシラート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーと組み合わされてもよい。
投与に適する剤形（医薬組成物）は、投与単位に付き約０.０１ｍｇ～約５００ｍｇの活性成分を含有してもよい。活性成分は、通常、これらの医薬組成物中に、組成物の総重量に基づき約０.５－９５重量％の量で配合されるであろう。
ゼラチンカプセルは、活性成分、およびラクトース、澱粉、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸などの粉末の担体を含有してもよい。同様の希釈剤を用いて圧縮錠剤を製造することができる。錠剤およびカプセルは共に徐放性の生成物として製造され、数時間にわたって医薬の持続的放出を提供することができる。圧縮錠剤は、糖衣錠とし、またはフィルムコーティングに付され、いずれの不快な味もマスクすること、および該錠剤を環境から保護することができ、あるいは消化管において選択的に崩壊するように腸溶コーティングされ得る。
経口投与用の液体剤形は、着色剤およびフレーバー剤を含有し、患者の支持を高めることができる。
一般に、水、適切な油、セイライン、水性デキストロース（グルコース）および関連する糖の溶液、ならびにプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが、非経口用溶液の適切な担体である。非経口投与用溶液は、好ましくは、活性成分の水可溶性の塩、適切な安定化剤、必要であれば、緩衝物質を含有する。亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、またはアスコルビン酸などの酸化防止剤は、単独で、または組み合わせて、適切な安定化剤である。クエン酸およびその塩ならびにＥＤＴＡナトリウムも使用される。さらには、非経口用溶液は、塩化ベンズアルコニウム、メチルまたはプロピルパラベン、およびクロロブタノールなどの保存剤を含有しうる。
適切な医薬担体は、当該分野における標準的な参考書である、Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, Mack Publishing Company（1995）に記載される。
本明細書に記載の化合物を投与するのに有用な代表的医薬剤形は次のように説明され得る：
カプセル
標準的な２ピースのハードゼラチンカプセルに、１００ｍｇの粉末の活性成分、１５０ｍｇのラクトース、５０ｍｇのセルロース、および６ｍｇのステアリン酸マグネシウムを充填することによって、多数の単位カプセルが調製され得る。
ソフトゼラチンカプセル
活性成分の、大豆油、綿実油、またはオリーブ油などの可消化油中混合物を調製し、容積式ポンプを用いて、ゼラチン中に注入し、１００ｍｇの活性成分を含有するソフトゼラチンカプセルを形成することができる。該カプセルは洗浄かつ乾燥させる必要がある。
錠剤
錠剤は、投与単位が、例えば、１００ｍｇの活性成分、０.２ｍｇのコロイド状二酸化ケイ素、５ｍｇのステアリン酸マグネシウム、２７５ｍｇの微結晶セルロース、１１ｍｇの澱粉、および９８.８ｍｇのラクトースを含有するように、慣用的操作によって調製されてもよい。適切なコーティングを施し、口当たりを良くし、吸収を遅延させてもよい。
注入可能な製剤
本明細書に記載のペプチドを含む組成物の注入可能な製剤は、賦形剤、例えば、取締機関により承認されている賦形剤の使用を必要とするし、また必要ともしない。これらの賦形剤は、限定されないが、溶媒および共溶媒、可溶化、乳化または増粘剤、キレート化剤、酸化防止剤、還元剤、抗菌性保存剤、緩衝およびｐＨ調整剤、増量剤、防止剤、等張化調整剤、および特別な添加剤を包含する。注入可能な製剤は、滅菌状態の発熱物質フリーでなければならず、溶液の場合には、粒子材料が不含でなければならない。
注入による投与に適する非経口用組成物は、例えば、１.５重量％の活性成分を、共溶媒または他の賦形剤を含有しても、しなくてもよい医薬的に許容される緩衝液中で攪拌することによって調製されてもよい。その溶液は、塩化ナトリウムで等張にされ、滅菌処理に供されるべきである。
懸濁液
経口および／または非経口投与用の水性懸濁液は、例えば、各５ｍＬで、１００ｍｇの細分割された活性成分、２０ｍｇのナトリウムカルボキシメチルセルロース、５ｍｇの安息香酸ナトリウム、１.０ｇのソルビトール溶液（U.S.P.）、および０.０２５ｍＬのバニリンまたは他の口当たりのよいフレーバー剤が含まれるように、調製され得る。
生分解性微粒子
注入による投与に適する徐放性非経口用組成物は、例えば、適切な生分解性ポリマーを溶媒に溶かし、そのポリマー溶液に配合される活性剤を添加し、溶媒をそのマトリックスから取り除き、それによって活性剤がマトリックス全体に分散されている、ポリマーマトリックスを形成することによって調製されてもよい。
本願において、特に下記の例示としての実施例において使用される略語は当業者に周知である。使用される略語のいくつかは次のとおりである：ＤＣＭはジクロロメタンについて；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸について；ＲＴは室温または保持時間（文脈から決定されるであろう）について；ｈまたはｈｒまたはｈｒｓは時間について；ＥＤＣは１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドについて；ＤＭＡＰは４－（Ｎ,Ｎ－ジメチルアミノ）ピリジンについて；ＭｅＯＨはメタノールについて；ＥｔＯＡｃは酢酸エチルについて；ＤＭＦはＮ,Ｎ－ジメチルホルムアミドについて；Ｅｔはエチルについて；ＤＢＵは１,８－ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ－７－エンについて；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドについて；およびＴＨＦはテトラヒドロフランについての略語である。
ペプチド合成
本開示の大環状ペプチドの化学合成は、段階的固相合成、ペプチドフラグメントの立体的にアシストされた再ライゲーションによる半合成、クローン化または合成ペプチドセグメントの酵素的ライゲーション、および化学ライゲーションを含む、種々の該分野にて認識されている方法を用いて実施され得る。本明細書に記載の大環状ペプチドおよびそのアナログを合成する好ましい方法は、Chan, W.C.ら編、Fmoc Solid Phase Synthesis, Oxford University Press, Oxford（2000）；Barany, G.ら、The Peptides：Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 2：「ペプチド合成での特別な方法、パートＡ（Special Methods in Peptide Synthesis, Part A）」, pp. 3-284, Gross, E.ら編、Academic Press, New York（1980）；およびStewart, J.M.ら、Solid-Phase Peptide Synthesis, 2nd Edition, Pierce Chemical Co., Rockford, IL（1984）に記載の方法などの種々の固相技法を用いる化学合成法である。好ましい方法は、Ｆｍｏｃ（９－フルオレニルメチル メチル－オキシカルボニル）基を用いてα－アミノ基を一時的に保護し、tert-ブチル基と組み合わせてアミノ酸側鎖を一時的に保護することを基礎とする（例えば、Atherton, E.ら、The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 9における「フルオレニルメトキシカルボニルアミノ保護基（The Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Protecting Group）」：「ペプチド合成での特別な方法、パートＣ（Special Methods in Peptide Synthesis、Part C）」, pp. 1-38, Undenfriend, S.ら編, Academic Press, San Diego（1987）を参照のこと）。
該ペプチドは、不溶性ポリマー支持体（「樹脂」とも言う）で、ペプチドのＣ－末端から段階的に開始して合成され得る。ペプチドのＣ－末端のアミノ酸をアミドまたはエステル結合の形成を介して樹脂に付加する（appending）ことにより合成を始める。これにより、各々、Ｃ－末端アミドまたはカルボン酸として得られるペプチドの最終的な切り離しが可能となる。
合成にて使用されるＣ－末端アミノ酸および他のすべてのアミノ酸は、そのα位にアミノ基を有する必要があり、側鎖官能基は（あるとすれば）α－アミノ保護基が合成の間に選択的に除去され得るように別個に保護される。アミノ酸のカップリングは、そのカルボキシル基を活性エステルとして活性化し、それを樹脂に付加されたＮ－末端アミノ酸の遮断されていないα－アミノ基と反応させることにより行われる。α－アミノ基の脱保護およびカップリングのシーケンスをペプチドの完全なシーケンスが組み立てられるまで繰り返す。次に、通常は副反応を限定するために適切なスカベンジャーの存在下で、側鎖官能基を同時に脱保護して、ペプチドを樹脂から切り離す。最後は、得られた化合物を逆相ＨＰＬＣによって精製する。
最終ペプチドの前駆体として必要とされるペプチジル－樹脂の合成は、商業的に入手可能な架橋したポリスチレンポリマー樹脂を利用する（Novabiochem, San Diego, CA；Applied Biosystems, Foster City, CA）。好ましい固形支持体は：４－（２’,４’－ジメトキシフェニル－Ｆｍｏｃ－アミノメチル）－フェノキシアセチル－ｐ－メチルベンズヒドリルアミン樹脂（リンク（Rink）アミドMBHA樹脂）；９－Ｆｍｏｃ－アミノ－キサンテン－３－イルオキシ－メリフィールド（Merrifield）樹脂（シーバー（Sieber）アミド樹脂）；４－（９－Ｆｍｏｃ）アミノメチル－３,５－ジメトキシフェノキシ）バレリル－アミノメチル－メリフィールド樹脂（PAL樹脂）（Ｃ－末端カルボキシアミドの場合）である。最初の、そしてその後のアミノ酸のカップリングは、各々、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰより、あるいはＤＩＣ／６－Ｃｌ－ＨＯＢｔ、ＨＣＴＵ、ＤＩＣ／ＨＯＡｔまたはＨＡＴＵより生成されるＨＯＢｔ、６－Ｃｌ－ＨＯＢｔまたはＨＯＡｔ活性エステルを用いて達成され得る。好ましい固形支持体は：２－クロロトリチルクロリド樹脂および９－Ｆｍｏｃ－アミノ－キサンテン－３－イルオキシ－メリフィールド樹脂（シーバーアミド樹脂）（保護されたペプチドのフラグメントの場合）である。第１のアミノ酸の、２－クロロトリチルクロリド樹脂へのローディングを達成する最良の方法は、Ｆｍｏｃ－保護のアミノ酸を樹脂とジクロロメタンおよびＤＩＥＡ中で反応させることである。必要ならば、少量のＤＭＦを添加し、アミノ酸の溶解を促進させてもよい。
本明細書に記載のペプチド類の合成は、ＣＥＭリバティー・マイクロウェーブ社（CEM Liberty Microwave）の合成装置、またはProtein Technologies, Inc.社のプレリュード（Prelude）（６チャネル）、またはシンフォニー（Symphony）（１２チャネル）合成装置などの単チャンネルまたは多チャンネルペプチド合成装置を用いて実施され得る。
その各々のペプチドのペプチジル－樹脂先駆体は、どのような標準的操作を用いて切断および脱保護されてもよい（例えば、King, D.S.ら、Int. J. Peptide Protein Res., 36：255-266 (1990) を参照のこと）。水およびスカベンジャーとしてのＴＩＳの存在下でＴＦＡを用いる方法が望ましい。典型的には、ペプチジル－樹脂をＴＦＡ／水／ＴＩＳ（９４：３：３、ｖ：ｖ：ｖ；１ｍＬ／１００ｍｇのペプチジル樹脂）中に室温で２～６時間攪拌する。次に使用済みの樹脂を濾去し、そのＴＦＡ溶液を減圧下で濃縮するか、乾燥させる。得られた粗ペプチドは、Ｅｔ２Ｏで沈殿させて洗浄するか、分取性ＨＰＬＣで精製するのに、ＤＭＳＯまたは５０％水性酢酸に直に再溶解させるかのいずれかである。
分析データ：
質量分析：「ＥＳＩ－ＭＳ（＋）」は陽イオンモードで行われた電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ－ＭＳ（－）」は陰イオンモードで行われた電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋）」は陽イオンモードで行われた高分解能電子噴射イオン化質量分析を意味し；「ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（－）」は陰イオンモードで行われた高分解能電子噴射イオン化質量分析を意味する。検出された質量を「ｍ／ｚ」単位記号の後に報告する。正確な質量が１０００よりも大きい化合物は、しばしば、二重荷電イオンまたは三重荷電イオンとして検出された。
一般的操作：
シンフォニーＸ（Symphony X）方法Ａ：
すべての操作はシンフォニーＸペプチド合成装置（Protein Technologies）での自動化の下で行われた。操作はすべて、底部フリットで取り付けられた１０ｍＬのポリプロピレン製の管において行われた。該管の底部と上部の両方を通して、該管をシンフォニーＸペプチド合成装置に接続する。ＤＭＦおよびＤＣＭは該管の上部から加えることができ、それにより該管の側面が等しく洗い流される。残りの試薬は該管の底部から加えられ、下からフリットを通って樹脂と接触する。溶液はすべて該管の底部から取り出される。「周期的なかき混ぜ」はＮ２ガスを短いパルスで底部フリットに通すことをいい；パルスは約５秒間続き、それが３０秒毎に発生する。塩化クロロアセチルのＤＭＦ中溶液は製造から２４時間以内に使用された。アミノ酸溶液は、一般に、製造から３週間を越えては使用されなかった。ＨＡＴＵ溶液は製造から５日以内に使用された。ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＨＡＴＵ＝１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１,２,３－トリアゾロ［４,５－ｂ］ピリジニウム ３－オキシド・ヘキサフルオロホスフェート；ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン；Ｒｉｎｋ＝（２,４－ジメトキシフェニル）（４－アルコキシフェニル）メタナミンであり、ここで「４－アルコキシ」はポリスチレン樹脂と結合する位置および型をいう。使用される樹脂は、リンク（Rink）リンカー（窒素にてＦｍｏｃ－保護されている）を用いた、１００－２００メッシュ、１％ＤＶＢ、０.５６ミリモル／ｇ負荷のメリフィールド（Merrifield）ポリマー（ポリスチレン）である。使用されるコモンアミノ酸（common amino acid）を、側鎖保護基を括弧内に示して、下記に列挙する。Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｂｚｔ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｄａｂ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｄａｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｈｙｐ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｎｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｍｅｔ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－［Ｎ－Ｍｅ］Ａｌａ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－［Ｎ－Ｍｅ］Ｎｌｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓａｒ－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ；Ｆｍｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ
「シンフォニーＸ方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているリンクリンカーの量で決定されるものとする。このスケールは上記のリンク－メリフィールド樹脂の約１７８ｍｇに相当する。すべての操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えてスケールアップすることができる。アミノ酸をカップリングさせる前に、下記の「樹脂－膨潤操作」にて示されるように、樹脂－膨潤操作をもってすべてのペプチドの合成シーケンスを始めた。アミノ酸と第一アミンのＮ－末端とのカップリングは下記の「単一カップリング操作」を用いた。アミノ酸の、第二アミンのＮ－末端とのカップリングは、下記の「二重カップリング」を用いた。塩化クロロアセチルの、ペプチドのＮ－末端とのカップリングは、下記の「塩化クロロアセチルカップリング操作」で記載される。
樹脂－膨潤操作Ａ：
１０ｍＬのポリプロピレン製固相反応容器に、メリフィールド：リンク樹脂（１７８ｍｇ、０.１００ミリモル）を添加した。その樹脂を以下のように３回洗浄した（膨潤させた）：反応容器にＤＭＦ（２.０ｍＬ）を添加し、その際に該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出（drain）させた。
単一カップリング操作：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.４Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、４当量）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に無水酢酸（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、次に溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。
二重カップリング操作Ａ：
上記工程から由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.４Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、４当量）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部を通して加え、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.４Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、４当量）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように２回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に無水酢酸（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を１０分間周期的にかき混ぜ、ついで溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を次の工程にそのまま用いた。
シンフォニーアミノ酸Ｎ－末端停止操作：
１０ｍＬのポリプロピレン製固相反応容器に、メリーフィールド：リンク樹脂（１７８ｍｇ、０.１００ミリモル）を添加した。その樹脂を以下のように３回洗浄した（膨潤させた）：反応容器にＤＭＦ（２.０ｍＬ）を添加し、その際に該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、その後で溶媒をフリットを通して排出させた。上記工程から由来のリンク樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、アミノ酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.４Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、４当量）を添加した。該混合物を周期的に１５分間かき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に無水酢酸（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を周期的に１０分間かき混ぜ、次に溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して５回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＣＭ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を窒素の流れの下に１５分間置いた。
クロロ酢酸カップリング操作Ａ：
上記工程より由来の樹脂含有の反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。反応容器に、ピペリジン：ＤＭＦ（２０：８０ ｖ／ｖ、２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を３分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して６回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を３０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該反応容器に、クロロ酢酸（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ）を、ついでＨＡＴＵ（０.２Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、２当量）を、最後にＤＩＰＥＡ（０.４Ｍ／ＤＭＦ、１.０ｍＬ、４当量）を添加した。混合物を１５分間にわたって周期的にかき混ぜ、次に該反応溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して３回洗浄した：各洗浄では、ＤＭＦ（２.０ｍＬ）を容器の上部から添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。該樹脂を次のように連続して４回洗浄した：各洗浄では、ＣＨ２Ｃｌ２（２.０ｍＬ）を容器の上部に添加し、得られた混合物を９０秒間にわたって周期的にかき混ぜ、その後で該溶液をフリットを通して排出させた。得られた樹脂を１５分間にわたってＮ２流下に置いた。
グローバル脱保護方法Ａ：
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「グローバル脱保護方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは樹脂と結合しているリンクリンカーの量で決定されるものとする。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えてスケールアップすることができる。「脱保護溶液」は、４０ｍＬガラスバイアルにて、トリフルオロ酢酸（２２ｍＬ）、フェノール（１.３２５ｇ）、水（１.２５ｍＬ）およびトリイソプロピルシラン（０.５ｍＬ）を合わせることで調製された。樹脂を反応容器から取り出し、４ｍＬのガラスバイアルに移した。該バイアルに、「脱保護溶液」（２.０ｍＬ）を添加した。該混合物を振盪器で激しく混合した（１０００ＲＰＭで１分間、次に５００ＲＰＭで９０分間）。底部フリットを取り付けた１０ｍＬのポリプロピレン製管を通して該混合物を濾過し、ジエチルエーテル（１５ｍＬ）を含有する２４ｍＬの試験管に滴下して加え、白色の沈殿物が得られるようにした。該管にある固体（樹脂）を「脱保護溶液」（１.０ｍＬ）で１回抽出し、エーテルに滴下して加えさせた。その混合物を７分間遠心分離に付し、次に溶液を固体からデカントし、廃棄した。該固体をＥｔ２Ｏ（２０ｍＬ）に懸濁させ；次に該混合物を５分間遠心分離に付し；該溶液を固体からデカントし、廃棄した。最後にもう一度、該固体をＥｔ２Ｏ（２０ｍＬ）に懸濁させ；該混合物を５分間遠心分離に付し；該溶液を固体からデカントして廃棄し、白色ないし灰白色の固体として粗ペプチドを得た。
環化方法Ａ
すべての操作は、特に断りのない限り、手動でなされた。「環化方法Ａ」の操作は、０.１００ミリモルのスケールでなされる実験を記載し、そのスケールは、ペプチドを生成するのに使用された樹脂と結合しているリンクリンカーの量で決定されるものとする。このスケールはその操作にて使用されるペプチドの量を直接測定することをベースとするものではない。操作は記載の容量をスケールの倍数で調整することにより０.１００ミリモルを越えてスケールアップすることができる。粗ペプチドの固体をメタノール（１０ｍＬ）に溶かし、次に該溶液のｐＨをＮ,Ｎ－ジイソプロピルアミンを用いて注意して９.０～１１に調整した。ついで、該溶液を１８～２４時間撹拌させた。反応溶液を濃縮し、次にその残渣をＭｅＯＨに溶かした。この溶液を逆相ＨＰＬＣ精製に供し、所望の環状ペプチドを得た。
分析ＬＣＭＳ条件Ａ：
カラム：ＢＥＨ Ｃ１８、２.１ｘ５０ ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：水＋０.０５％ＴＦＡ；移動相Ｂ：アセトニトリル＋０.０５％ＴＦＡ；温度：５０℃；勾配：２分間にわたって２％Ｂから９８％Ｂとし、次に９８％Ｂで０.５分間保持する；流速：０.８ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ
分析ＬＣＭＳ条件Ｂ：
カラム：ＢＥＨ Ｃ１８、２.１ｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.０５％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９５：５アセトニトリル：水＋０.０５％ＴＦＡ；温度：５０℃；勾配：３分間にわたって０－１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで０.７５分間保持する；流速：１.１１ｍＬ／分
分析条件Ｃ：
カラム：エックス－ブリッジ（X-Bridge）Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、３.５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：４０℃；勾配：０％Ｂ、８分間にわたって０－１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで１.０分間保持する；流速：０.８ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ
分析条件Ｄ：
カラム：エックス－ブリッジ Ｃ１８、２.０ｘ５０ｍｍ、３.５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：４０℃；勾配：０％Ｂ、４分間にわたって０－１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで１.０分間保持する；流速：０.８ｍＬ／分；検出：２２０ｎｍでのＵＶ
分析条件Ｅ：
カラム：ウォーターズ・エックスブリッジ（Waters XBridge）Ｃ１８、２.１ｍｍｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；温度：７０℃；勾配：３分間にわたって０％Ｂを１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで２分間保持する；流速：０.７５ｍＬ／分；検出：ＭＳおよびＵＶ（２２０ｎｍ）
分析条件Ｆ：
カラム：ウォーターズ（Waters）ＣＳＨ Ｃ１８、２.１ｍｍｘ５０ｍｍ、１.７μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１ ％トリフルオロ酢酸；温度：７０℃；勾配：３分間にわたって０％Ｂを１００％Ｂとし、次に１００％Ｂで２分間保持する；流速：０.７５ｍＬ／分；検出：ＭＳおよびＵＶ（２２０ｎｍ）
修飾クロロトリチル樹脂１
Figure 0007206222000011
修飾クロロトリチル樹脂２
Figure 0007206222000012
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（メチルスルホンアミド）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸の製造
Figure 0007206222000013
工程１：
ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした（Ｓ）－ベンジル ２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパノエート（１.２ｇ、２.２ミリモル）の溶液に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を添加した。該反応物を室温で１時間撹拌した。反応性揮発物を蒸発させ、高真空下に一夜置き、生成物の（Ｓ）－２－（３－（３－（ベンジルオキシ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－オキソプロピル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酢酸（１.０ｇ、２.１ミリモル、収率９３％）を得た。分析条件Ａ：保持時間＝１.２５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ５０９.２ （Ｍ＋Ｎａ）
工程２：
乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶かした（Ｓ）－２－（３－（３－（ベンジルオキシ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－オキソプロピル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酢酸（１.０１ｇ、２.０７６ミリモル）の溶液に、メタンスルホンアミド（０.１９７ｇ、２.０７６ミリモル）、ＥＤＣ（０.４３８ｇ、２.２８４ミリモル）、およびＤＭＡＰ（０.２７９ｇ、２.２８４ミリモル）を添加した。反応物を室温で４日間撹拌した。その溶液を水性ＨＣｌ（１Ｍ）で、つづいてブラインで洗浄し、集め、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させ、粗材料の（Ｓ）－ベンジル ２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（メチルスルホンアミド）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパノエート（９００ｍｇ、１.６ミリモル、収率７７％）を得た。分析条件Ａ：保持時間＝１.７９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ５８６.１ （Ｍ＋Ｎａ）
工程３：
（Ｓ）－ベンジル ２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（メチルスルホンアミド）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパノエート（８９６ｍｇ、１.５９０ミリモル）およびＰｄ－Ｃ（１６９ｍｇ、０.１５９ミリモル）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に５分間にわたってＨ２を吹き込んだ。次に反応物をＨ２の陽圧の下で２時間放置した。該反応物にＮ２を吹き込み、次にナイロン製フリットフィルターを通して濾過した。揮発物を減圧下で蒸発させ、生成物の（Ｓ）－２－アミノ－３－（１－（２－（メチルスルホンアミド）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（４２４ｍｇ、１.２５ミリモル、収率７９％）を粘着性のある油として得た。分析条件Ａ：保持時間＝０.８７分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ３４０（Ｍ＋Ｈ）
工程４：
（Ｓ）－２－アミノ－３－（１－（２－（メチルスルホンアミド）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（４２４ｍｇ、１.２４９ミリモル）および炭酸水素ナトリウム（５２５ｍｇ、６.２５ミリモル）のアセトン（８.００ｍＬ）および水（８ｍＬ）中溶液に、（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２,５－ジオキソピロリジン－１－イル）カルボネート（４２１ｍｇ、１.２４９ミリモル）を添加した。反応物を１８時間撹拌した。激しく撹拌しながら、水性ＨＣｌ（１Ｍ）で該反応物をゆっくりとｐＨ５の酸性にした。ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）を用いて水相を分離した。有機層を水で、つづいてブラインで洗浄した。有機層を集め、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、揮発物を減圧下で蒸発させた。粗材料を逆相クロマトグラフィー（移動相Ａ：５％アセトニトリル、９５％水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５％アセトニトリル、５％水、１０ｍＭ酢酸アンモニウム；２０倍のカラム容量で１０％Ｂ－５０％Ｂとする）に付して精製し、生成物の（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（メチルスルホンアミド）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（３３０ｍｇ、０.５９ミリモル、収率４７％）をオフホワイトの固体として得た。分析条件Ｂ：保持時間＝１.１４分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ５６１.９（Ｍ＋Ｈ）
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸の製造
スキーム：
Figure 0007206222000014
工程１：
１Ｈ－インドール－３－カルバルデヒド（３ｇ、２０.５３ミリモル）および炭酸セシウム（７.３６ｇ、２２.５８ミリモル）のＤＭＦ（８２ｍｌ）中の０℃溶液に、２－ブロモ酢酸tert－ブチル（３.２９ｍｌ、２２.５８ミリモル）を加え、氷浴を取り除くことで室温までの加温に付した。反応物を２時間攪拌した。反応物を水（５００ｍＬ）中に注ぎ、Ｅｔ２Ｏ（２００ｍＬ）を添加した。生成物をＥｔ２Ｏ層に抽出させた。層を分離し、水相をＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で二度抽出した。Ｅｔ２Ｏ層を合わせ、水で２ｘ、ついでブラインで洗浄した。有機層を集め、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。その粗材料をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーに付し、０－３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いて精製した。生成物のフラクションを集め、溶媒を真空下で除去し、２－（３－ホルミル－１Ｈ－インドール－１－イル）酢酸tert－ブチル（５.２３ｇ（９８％））を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ２０５.１（Ｍ＋１－ｔＢｕ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ １０.２８（ｓ，１Ｈ）、８.３５（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.５６ － ７.４９ （ｍ，１Ｈ）、７.４５－７.３６（ｍ，２Ｈ）、５.１８（ｓ，２Ｈ）、１.４８（ｓ，９Ｈ）
工程２：
（±）－２－ベンジルオキシカルボニルアミノ－２－（ジメトキシホスフィニル）酢酸メチル（７.３２ｇ、２２.１０ミリモル）をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）に溶かし、窒素下で攪拌した。この溶液に、ＤＢＵ（３.３３ｍＬ、２２.１０ミリモル）を加え、該混合物を１０分間攪拌し、つづいて２－（３－ホルミル－１Ｈ－インドール－１－イル）酢酸tert－ブチル（５.２３ｇ、２０.０９ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中溶液を１５－２０分間にわたって滴下して加えた。攪拌を室温で１６時間続けた。反応混合物を真空下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、５％クエン酸水溶液、ついでブラインで洗浄し、次に無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。その粗材料をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーに付し、０－５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いて精製した。生成物のフラクションを集め、溶媒を真空下で除去し、（Ｅ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）アクリル酸メチル（７.４ｇ（７９％））を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ４６６.０（Ｍ＋１）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ９.２１（ｓ，１Ｈ）、７.８２（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.５２－７.２３（ｍ，８Ｈ）、６.９０（ｓ，１Ｈ）、５.２３（ｓ，２Ｈ）、５.０８（ｓ，２Ｈ）、３.８６（ｓ，３Ｈ）、１.４４（ｓ，９Ｈ）
工程３：
（Ｚ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）アクリル酸メチル（７.４ｇ、１５.９０ミリモル）を、Parrボトル中、ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）およびベンゼン（８０ｍＬ）に溶かした。Ｎ２気体を該溶液に１５分間にわたって通し、つづいて（＋）－１,２－ビス（（２Ｓ,５Ｓ）－２,５－ジエチルホスホラノ）ベンゼン（シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）・トリフルオロメタンスルホン酸塩（０.１１５ｇ、０.１５９ミリモル）を添加し、水素雰囲気（６０ｐｓｉ）下に３日間置いた。反応物を珪藻土（セライト（Celite（登録商標）））を通して濾過し、真空下で濃縮した。その粗材料をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーに付し、０－５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いて精製した。生成物のフラクションを集め、溶媒を真空下で除去し、（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸メチル（７.４３ｇ、（１００％））を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ４６８.０（Ｍ＋１）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ７.６４（ｄ，Ｊ＝８.１Ｈｚ，１Ｈ）、７.４４－７.２６（ｍ，７Ｈ）、７.１５ （ｔ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，１Ｈ）、５.８７（ｄ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，１Ｈ）、５.１３（ｓ，２Ｈ）、４.９９（ｓ，２Ｈ）、４.９０－４.８０（ｍ，１Ｈ）、３.６６（ｓ，３Ｈ）、３.６３－３.５５（ｍ，１Ｈ）、３.４６ （ｄｄ，Ｊ＝１４.８、４.８Ｈｚ，１Ｈ）、１.４２（ｓ，９Ｈ）
工程４：
水酸化リチウム（１.１４２ｇ、４７.７ミリモル）の水（３９.７ｍｌ）中溶液を、（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸メチル（７.４３ｇ、１５.８９ミリモル）のＴＨＦ（３９.７ｍｌ）中溶液に添加した。反応物を室温で３０分間攪拌した。ＥｔＯＡｃを該反応物に添加し、１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨを酸性にした。有機相を集め、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮させた。その粗材料をフラッシュクロマトグラフィーに付し、０－１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ ｗ／０.１％ＡｃＯＨを用いて精製した。生成物のフラクションを集め、溶媒を真空下で除去し、（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（３.９ｇ（５４％））を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ４５４.０（Ｍ＋１）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １２.７３ （ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７.７７（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.５６－７.５０（ｍ，２Ｈ）、７.４０－７.２４（ｍ，５Ｈ）、７.１４－７.０８（ｍ，１Ｈ）、５.１５（ｓ，２Ｈ）、５.００－４.８９（ｍ，２Ｈ）、４.４２（ｔｄ，Ｊ＝８.６、５.１Ｈｚ，１Ｈ）、３.３９－３.２４（ｍ，２Ｈ）、１.３７（ｓ，９Ｈ）
工程５：
（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（３.８８ｇ、８.５６ミリモル）をＭｅＯＨ（８０ｍｌ）／ベンゼン（２０ｍＬ）に溶かし、Ｎ２雰囲気下に置いた。Ｐｄ－Ｃ（０.４５５ｇ、０.４２８ミリモル）を激しく攪拌しながら該溶液に添加した。反応物をＨ２気体の雰囲気下に置き、１６時間攪拌した。反応物を珪藻土（セライト（登録商標））を通して濾過し、真空下で濃縮して（Ｓ）－２－アミノ－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（２.７４ｇ（１００％））を得、それを工程６にてそのまま用いた。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ３２０.１（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７.７８（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.５４（ｄ，Ｊ＝８.５Ｈｚ，１Ｈ）、７.３８（ｄｄｄ，Ｊ＝８.３、７.０、１.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.１３（ｔ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，１Ｈ）、５.２３－５.１０（ｍ，２Ｈ）、３.５８（ｄｄ，Ｊ＝９.０、４.０Ｈｚ，１Ｈ）、３.４９（ｄｄ，Ｊ＝１５.６、４.０Ｈｚ，１Ｈ）、３.２８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）、３.１７（ｄｄ，Ｊ＝１５.７、８.９Ｈｚ，１Ｈ）、１.４１（ｓ，９Ｈ）
工程６：
（Ｓ）－２－アミノ－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（２.７４ｇ、８.５８ミリモル）をＴＨＦ（３４.３ｍｌ）に溶かし、つづいて水（３４.３ｍｌ）を添加した。次に炭酸水素ナトリウム（１.４４２ｇ、１７.１６ミリモル）を加え、つづいて（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２,５－ジオキソピロリジン－１－イル）カルボナート（２.８９ｇ、８.５８ミリモル）を添加した。反応物を２時間攪拌した。ＴＨＦの大部分が真空下で除去され、次にＥｔＯＡｃを添加した。混合物を１Ｎ ＨＣｌでｐＨ７の酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を集め、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮し、（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（４.９ｇ、１０５％）を得、それをそのまま用いた。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ５４２.１（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７.８７（ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，２Ｈ）、７.８２（ｄ，Ｊ＝８.０Ｈｚ，１Ｈ）、７.７０（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.６４（ｔ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，２Ｈ）、７.５２（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.４３－７.３４（ｍ，３Ｈ）、７.３２－７.２３（ｍ，２Ｈ）、７.１０（ｔ，Ｊ＝７.４Ｈｚ，１Ｈ）、５.１５（ｓ，２Ｈ）、４.４２（ｔｄ，Ｊ＝８.８、５.０Ｈｚ，１Ｈ）、４.２０－４.１１（ｍ，３Ｈ）、３.４２－３.２５（ｍ，２Ｈ）、１.３６（ｓ，９Ｈ）
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－ピロロ［３,２－ｂ］ピリジン－３－イル）プロパン酸の製造
Figure 0007206222000015
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－ピロロ［３,２－ｂ］ピリジン－３－イル）プロパン酸は、（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸と同じ方法で、次の修飾を加えて調製された：工程１において、１Ｈ－インドール－３－カルバルデヒドの代わりに１Ｈ－ピロロ［３,２－ｂ］ピリジン－３－カルバルデヒドを出発物質として用いた。工程４におけるメチルエステルの加水分解は、室温で３０分間行う代わりに０℃で２０分間にてなされた。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ５４２.２（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８.３４（ｄｄ，Ｊ＝４.８、１.３Ｈｚ，１Ｈ）、８.２３（ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，１Ｈ）、７.８９（ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，２Ｈ）、７.８１（ｄｄ，Ｊ＝８.５、１.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.６５（ｔ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.４６（ｓ，１Ｈ）、７.４４－７.３７（ｍ，２Ｈ）、７.２９（ｄｔｄ，Ｊ＝１０.９、７.４、０.９Ｈｚ，２Ｈ）、７.１９（ｄｄ，Ｊ＝８.３、４.５Ｈｚ，１Ｈ）、５.０６－４.９２（ｍ，２Ｈ）、４.３７－４.３０（ｍ，１Ｈ）、４.２３－４.１４（ｍ，３Ｈ）、３.２８（ｄｄ，Ｊ＝１４.７、４.１Ｈｚ，１Ｈ）、３.０９（ｄｄ，Ｊ＝１４.６、９.０Ｈｚ，１Ｈ）、１.３８（ｓ，９Ｈ）
２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（３－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インダゾール－１－イル）プロパン酸の製造
Figure 0007206222000016
工程１：
tert－ブチル ２－（５－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）アセテート（５００ｍｇ、１.６ミリモル）およびベンジル ２－｛ビス［（tert－ブトキシ）カルボニル］アミノ｝プロパ－２－エノエート（６４０ｍｇ、１.７ミリモル）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中溶液に、炭酸カリウム（１.３ｇ、９.６ミリモル）を添加した。反応物を室温で１８時間撹拌した。該反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄した。有機層をブラインで洗浄し、集め、ＭｇＳＯ４で乾燥させて濾過し、揮発物を蒸発させて粗生成物を得た。該粗生成物を逆相クロマトグラフィー（５５ｇカラム、５－１００％ＣＨ３ＣＮ：水＋０１.％ＴＦＡ）に付して精製し、ベンジル ２－（ビス（（（２－メチル－２－プロパニル）オキシ）カルボニル）アミノ）－３－（５－ブロモ－３－（２－（（２－メチル－２－プロパニル）オキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インダゾール－１－イル）プロパノエート（１.１２ｇ、１.６２６ミリモル、収率１０１％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４） δ ７.９８－７.９０（ｍ，１Ｈ）、７.４９（ｄｄ，Ｊ＝８.９、１.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.４３－７.３３（ｍ，６Ｈ）、５.４９（ｔ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，１Ｈ）、５.２６（ｄ，Ｊ＝２.７Ｈｚ，２Ｈ）、５.０４（ｄ，Ｊ＝７.１Ｈｚ，２Ｈ）、３.９３－３.８２（ｍ，２Ｈ）、１.４８－１.４５（ｍ，９Ｈ）、１.３１－１.２７（ｍ，１８Ｈ）；分析条件Ａ：保持時間＝１.８４分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ７１２.２ （Ｍ＋Ｎａ）
工程２：
ベンジル ２－（ビス（（（２－メチル－２－プロパニル）オキシ）カルボニル）アミノ）－３－（５－ブロモ－３－（２－（（２－メチル－２－プロパニル）オキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インダゾール－１－イル）プロパノエート（１.０ｇ、１.５ミリモル）およびＰｄ－Ｃ（０.１６ｇ、０.１５ミリモル）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液にＨ２を５分間にわたって吹き込んだ。次に該反応物を撹拌しながら２時間にわたってＨ２の陽圧下で放置した。該反応物にＮ２を吹き込み、ついでそのスラリーをナイロン製フリットのフィルターを通して濾過した。揮発物を減圧下で蒸発させて２－（ビス（（（２－メチル－２－プロパニル）オキシ）カルボニル）アミノ）－３－（３－（２－（（２－メチル－２－プロパニル）オキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インダゾール－１－イル）プロパン酸（０.７６ｇ、１.５ミリモル、収率１００％）を粘着性のある油として得た。分析条件Ａ：保持時間＝１.６３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ５４２.２ （Ｍ＋Ｎａ）
工程３：
ジオキサン中ＨＣｌ（５.０ｍＬ、４.０Ｍ）を２－（ビス（（（２－メチル－２－プロパニル）オキシ）カルボニル）アミノ）－３－（３－（２－（（２－メチル－２－プロパニル）オキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インダゾール－１－イル）プロパン酸（７８１ｍｇ、１.５０３ミリモル）に加え、０℃で３０分間撹拌し、次に室温までの加温に供し、３０分間撹拌した。その反応性揮発物を加熱することなく減圧下で蒸発させ、２－アミノ－３－（３－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インダゾール－１－イル）プロパン酸のＨＣｌ塩（５４０ｍｇ、１.５ミリモル、収率１００％）を白色の固体として得た。分析条件Ａ：保持時間＝１.１８分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ３２０（Ｍ＋Ｈ）
工程４：
２－アミノ－３－（３－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インダゾール－１－イル）プロパン酸のＨＣｌ塩（５４０ｍｇ、１.５ミリモル）および炭酸水素ナトリウム（６３０ｍｇ、７.５ミリモル）のアセトン（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中溶液に、（９Ｈ－フルオレン－９－イル） メチル （２,５－ジオキソピロリジン－１－イル）カルボネート（５１０ｍｇ、１.５ミリモル）を添加した。
反応物を１８時間撹拌した。激しく撹拌しながら、水性ＨＣｌ（１.０Ｍ）で該反応物をゆっくりとｐＨ５の酸性にした。ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）を用いて水相を分離した。有機層を水で、つづいてブラインで洗浄した。有機層を集め、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、揮発物を減圧下で蒸発させて粗生成物を得た。該粗材料を分取性ＨＰＬＣ（１０－１００％ＣＨ３ＣＮ：水＋０.１％ＴＦＡ）に付して精製し、純粋な生成物の２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（３－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－インダゾール－１－イル）プロパン酸（１３１ｍｇ、０.２４２ミリモル、収率１６.１％）をオフホワイトの固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール－ｄ４） δ ７.７９（ｄ，Ｊ＝７.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.７１（ｄ，Ｊ＝８.２Ｈｚ，１Ｈ）、７.５８－７.５０（ｍ，３Ｈ）、７.４１－７.３４（ｍ，３Ｈ）、７.２６（ｑ，Ｊ＝７.４Ｈｚ，２Ｈ）、７.１３（ｔ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，１Ｈ）、４.８５－４.８１（ｍ，２Ｈ）、４.７９－４.６８（ｍ，１Ｈ）、４.１７（ｄｄ，Ｊ＝７.３、１.７Ｈｚ，２Ｈ）、４.０８（ｄ，Ｊ＝７.３Ｈｚ，１Ｈ）、３.９２（ｓ，２Ｈ）、１.４６－１.３９（ｍ，９Ｈ）；分析条件Ａ：保持時間＝１.７５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ５４２.１（Ｍ＋Ｈ）
（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸の製造
スキーム：
Figure 0007206222000017
工程１：
５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－カルバルデヒド（１.５ｇ、８.５６ミリモル）および炭酸セシウム（３.０７ｇ、９.４２ミリモル）のＤＭＦ（３４.２ｍｌ）中の０℃の溶液に、２－ブロモ酢酸tert－ブチル（１.３７３ｍｌ、９.４２ミリモル）を添加し、氷浴を取り除くことで室温までの加温に付した。反応物を２時間攪拌した。反応物を水に注ぎ、Ｅｔ２Ｏを添加した。生成物をＥｔ２Ｏ層に抽出させた。その層を分離し、水相をＥｔ２Ｏで二度抽出した。Ｅｔ２Ｏ層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮し、２－（３－ホルミル－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－１－イル）酢酸tert－ブチル（２.１ｇ（８５％））を得、それをそのまま次の工程に用いた。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ２９０.１（Ｍ＋Ｈ）
工程２：
２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－２－（ジメトキシホスホリル）酢酸ベンジル（１.５５ｇ、（３.８ミリモル）をＤＣＭ（１１.５２ｍＬ）に溶かし、窒素下で攪拌した。この溶液にＤＢＵ（０.５７３ｍＬ、３.８０ミリモル）を加え、該混合物を１０分間攪拌し、つづいて２－（３－ホルミル－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－１－イル）酢酸tert－ブチル（１.０ｇ、３.４６ミリモル）のＤＣＭ（１１.５２ｍＬ）中溶液を１５－２０分間にわたって滴下して加えた。攪拌を室温で１６時間続けた。反応混合物を真空下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、５％クエン酸水溶液で、次にブラインで洗浄し、ついで無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。その粗材料をフラッシュクロマトグラフィーに付し、２０－７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配を用いて精製した。生成物のフラクションを集め、溶媒を真空下で除去し、（Ｅ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）アクリル酸ベンジル（１.６ｇ、８０％）を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ５７１.２（Ｍ＋Ｈ）
工程３：
（Ｚ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）アクリル酸ベンジル（７００ｍｇ、１.２２７ミリモル）をＭｅＯＨ（１２ｍｌ）に溶かし、（＋）－１,２－ビス（（２Ｓ,５Ｓ）－２,５－ジエチルホスホラノ）ベンゼン（シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）・トリフルオロメタンスルホン酸塩（８.８６ｍｇ、０.０１２ミリモル）で処理し、水素雰囲気（６０ｐｓｉ）下に３日間置いた。反応物を珪藻土（セライト（登録商標））を通して濾過し、真空下で濃縮して（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸ベンジル（７０２ｍｇ（１００％））を得、それをそのまま次の工程に用いた。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ５７３.２（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７.８７（ｄ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.３８－７.１３（ｍ，１１Ｈ）、７.１０－７.０２（ｍ，２Ｈ）、６.７７（ｄｄ，Ｊ＝８.８、２.３Ｈｚ，１Ｈ）、５.１３－５.０４（ｍ，２Ｈ）、５.０４－４.９４（ｍ，２Ｈ）、４.８６（ｓ，２Ｈ）、４.３２（ｔｄ，Ｊ＝８.３、５.８Ｈｚ，１Ｈ）、３.７２（ｓ，３Ｈ）、１.３９（ｓ，９Ｈ）
工程４：
（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸ベンジル（７００ｍｇ、１.２２２ミリモル）をＭｅＯＨ（１２ｍｌ）に溶かし、Ｎ２雰囲気下に置いた。Ｐｄ－Ｃ（６５.０ｍｇ、０.０６１ミリモル）を該溶液に激しく攪拌しながら添加した。該反応物をＨ２の雰囲気下に置き、１６時間攪拌した。反応物を珪藻土（セライト（Celite（登録商標）））を通して濾過し、真空下で濃縮して（Ｓ）－２－アミノ－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（４２６ｍｇ（１００％））を得、それを工程５にてそのまま用いた。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ３４９.１（Ｍ＋Ｈ）
工程５：
（Ｓ）－２－アミノ－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－５－メトキシ－１Ｈ－インドール－３－イル）プロパン酸（４２６ｍｇ、１.２２３ミリモル）をＴＨＦ（５ｍｌ）に溶かし、つづいて水（５.００ｍｌ）を添加した。次に炭酸水素ナトリウム（２０５ｍｇ、２.４４６ミリモル）を加え、つづいて（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル （２,５－ジオキソピロリジン－１－イル）カルボナート（４１２ｍｇ、１.２２３ミリモル）を添加した。反応物を２時間攪拌した。ＴＨＦの大部分を真空下で取り除き、次にＥｔ２Ｏを添加した。有機層を捨て、水層を再びＥｔ２Ｏで洗浄した。水相を集め、１Ｎ ＨＣｌで酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を集め、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して粗生成物を得、それをさらに精製しなかった。ＬＣ／ＭＳおよびＮＭＲを用いて確認した。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ５７１.１（Ｍ＋Ｈ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １２.７１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）、７.８８（ｄ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，２Ｈ）、７.７２（ｄ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，１Ｈ）、７.６６（ｔ，Ｊ＝８.３Ｈｚ，２Ｈ）、７.４０（ｔｄ，Ｊ＝７.１、４.１Ｈｚ，２Ｈ）、７.３３－７.２３（ｍ，２Ｈ）、７.１７（ｄ，Ｊ＝８.８Ｈｚ，１Ｈ）、７.１３－７.０８（ｍ，２Ｈ）、６.７６（ｄｄ，Ｊ＝８.８、２.３Ｈｚ，１Ｈ）、４.８５（ｓ，２Ｈ）、４.２４－４.１４（ｍ，３Ｈ）、３.７６（ｓ，３Ｈ）、３.１４（ｄｄ，Ｊ＝１４.４、４.４Ｈｚ，１Ｈ）、２.９９（ｄｄ，Ｊ＝１４.８、９.８Ｈｚ，１Ｈ）、１.３８（ｓ，９Ｈ）
２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－ピロロ［２,３－ｂ］ピリジン－３－イル）プロパン酸の製造
スキーム：
Figure 0007206222000018
工程１：
１Ｈ－ピロロ［２,３－ｂ］ピリジン－３－カルバルデヒド（１.５ｇ、１０.２６ミリモル）および炭酸セシウム（３.６８ｇ、１１.２９ミリモル）のＤＭＦ（４１.１ｍｌ）中の０℃での溶液に、２－ブロモ酢酸tert－ブチル（１.６４６ｍｌ、１１.２９ミリモル）を加え、氷浴を取り除くことで室温までの加温に付した。反応物を２時間攪拌した。該反応物を水に注ぎ、Ｅｔ２Ｏを添加した。生成物をＥｔ２Ｏ層に抽出させた。層を分離し、水相をＥｔ２Ｏで二度抽出した。Ｅｔ２Ｏ層を合わせ、水で２ｘ、次にブラインで洗浄した。有機層を集め、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮し、２－（３－ホルミル－１Ｈ－ピロロ［２,３－ｂ］ピリジン－１－イル）酢酸tert－ブチル（２.３ｇ（８６％））を得、それをそのまま次の工程に用いた。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）ｍ／ｚ ２０５.１（Ｍ＋１－ｔＢｕ）；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ １０.０２（ｓ，１Ｈ）、８.５８（ｄｄ，Ｊ＝７.８、１.５Ｈｚ，１Ｈ）、８.４２（ｄｄ，Ｊ＝４.８、１.５Ｈｚ，１Ｈ）、７.９５（ｓ，１Ｈ）、７.３１－７.２８（ｍ，１Ｈ）、５.０５（ｓ，２Ｈ）、１.４９（ｓ，９Ｈ）
工程２：
２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－２－（ジメトキシホスホリル）酢酸ベンジル（２.３４８ｇ、５.７６ミリモル）をＤＣＭ（１２ｍＬ）に溶かし、窒素下で攪拌した。この溶液に、ＤＢＵ（０.６３７ｍｌ、４.２３ミリモル）を加え、該混合物を１０分間攪拌し、つづいて２－（３－ホルミル－１Ｈ－ピロロ［２,３－ｂ］ピリジン－１－イル）酢酸tert－ブチル（１ｇ、３.８４ミリモル）のＤＣＭ（１２ｍＬ）中溶液を滴下して加えた。攪拌を室温で１６時間続けた。反応混合物を真空下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、５％クエン酸水溶液、およびブラインで洗浄し、次に無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して蒸発させた。その粗材料をフラッシュクロマトグラフィーに付し、０－１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配を用いて精製した。生成物のフラクションを集め、溶媒を真空下で除去し、（Ｅ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）－３－（１－（２－（tert－ブトキシ）－２－オキソエチル）－１Ｈ－ピロロ［２,３－ｂ］ピリジン－３－イル）アクリル酸ベンジル（１.５４ｇ（７４％））を得た。
実施例１の製造
Figure 0007206222000019
実施例１は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１０－７０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１４ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９５.３％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｃ：保持時間＝４.０８１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３５４.９８（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３５４.２０９９（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３５４.２０６３（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２の製造
Figure 0007206222000020
実施例２は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１０－７０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１６ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９６.６％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｃ：保持時間＝４.０８１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３４１.９８（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３４１.２０２１（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３４１.１９８２（Ｍ＋２Ｈ）
実施例３の製造
Figure 0007206222000021
実施例３は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１０－７０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９５.９％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｃ：保持時間＝４.４１６分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １２９７.４９（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１２９６.６９６４（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１２９６.６９３４（Ｍ＋２Ｈ）
実施例４の製造
Figure 0007206222000022
実施例４は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１０－７０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９２.１％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｃ：保持時間＝４.３７１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １２８１.５０（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１２８３.６８８６（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１２８３.６８５５（Ｍ＋２Ｈ）
実施例５の製造
Figure 0007206222000023
実施例５は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は２３.１ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.５６分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３１７.０６（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０３.２０２９（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０３.１９７３（Ｍ＋２Ｈ）
実施例６の製造
Figure 0007206222000024
実施例６は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１８.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.５５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３０４.１０（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０３.２０２９（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０３.１９７３（Ｍ＋２Ｈ）
実施例７の製造
Figure 0007206222000025
実施例７は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は６.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９７％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.５３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３１７.０５（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３１６.２１０８（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３１６.２０５０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例８の製造
Figure 0007206222000026
実施例８は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は９.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.４３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３０３.９９（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０３.２０２９（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０３.１９６８（Ｍ＋２Ｈ）
実施例９の製造
Figure 0007206222000027
実施例９は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１９.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９６％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.８２分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３２３.６０（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３２２.７２１０（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３２２.７１４５（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１０の製造
Figure 0007206222000028
実施例１０は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１２.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９５％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.８１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３１０.５５（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０９.７１３１（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０９.７０８１（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１１の製造
Figure 0007206222000029
実施例１１は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１１.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.５１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３１７.０９（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３１６.２１０８（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３１６.２０５０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１２の製造
Figure 0007206222000030
実施例１２は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１５－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１９.３ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.４９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３３１.６９（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３３０.７１８９（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３３０.７１６０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１３の製造
Figure 0007206222000031
実施例１３は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１５－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は９.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９６％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.４８分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３１７.１７（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３１６.２１０８（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３１６.２１００（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１４の製造
Figure 0007206222000032
実施例１４は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂１がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１５－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１０.３ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９５％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.５４分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３１７.１９（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３１６.２１０８（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３１６.２１００（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１５の製造
Figure 0007206222000033
実施例１５は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂２がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は２８.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.３１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３４１.１４（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３４０.１９４３（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３４０.１９３０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１６の製造
Figure 0007206222000034
実施例１６は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂２がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は ７.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.６５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３０９.７１（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０８.７０５３（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０８.７０５０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１７の製造
Figure 0007206222000035
実施例１７は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂２がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって２０－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は３２.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９６％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.３９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３０３.１０（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０２.１９５１（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０２.１９４０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１８の製造
Figure 0007206222000036
実施例１８は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂２がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１５－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１５.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９７％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.３５分間；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３０３.０９（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０２.１９５１（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０２.１９４０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例１９の製造
Figure 0007206222000037
実施例１９は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂２がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１０－６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は ５.７０ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９６％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.３４分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３０３.１５（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０２.１９５１（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０２.１９４０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２０の製造
Figure 0007206222000038
実施例２０は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂２がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１０－６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は５.７０ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９６％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.３５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３０３.１５（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３０２.１９５１（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３０２.１９４０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２１の製造
Figure 0007206222000039
実施例２１は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂２がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＳｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｐｒｅｐ Ｃ１８、５μｍ ＯＢＤ、３０ｍｍ ｘ ２５０ｍｍ；移動相Ａ：１０：９０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；移動相Ｂ：９０：１０ アセトニトリル：水＋０.１％ＴＦＡ；勾配：２５分間にわたって１５－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：４０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は２５.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９４％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｄ：保持時間＝２.３５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １３１７.７３（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１３１６.７０２８（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１３１６.７０２０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２２の製造
Figure 0007206222000040
実施例２２は、一般的操作 ：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウムｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって２５－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで４分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。該材料を次の条件で分取性ＬＣ／ＭＳに付してさらに精製した：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＣＳＨ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって２５－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで４分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は２５.２ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９１％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.８５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４６２.１（Ｍ＋２Ｈ）；分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：保持時間＝１.９８分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４６２.４（Ｍ＋２Ｈ）；ＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１４６１.７９７９（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１４６１.７９５０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２３の製造
Figure 0007206222000041
実施例２３は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２０分間にわたって２８－６８％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１１.１ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：保持時間＝２.２３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４９７.２（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１４９６.８１５８（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１４９６.８１７０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２４の製造
Figure 0007206222000042
実施例２４は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって２０－６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで６分間保持した；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。該材料を次の条件で分取性ＬＣ／ＭＳに付してさらに精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２５分間にわたって２６－６６％Ｂとし、次に１００％Ｂで６分間保持した；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は２２.０ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９４％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.８６分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４７５.３（Ｍ＋２Ｈ）；分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：保持時間＝１.９９分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４７５.３（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１４７６.３０２５（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１４７６.３０２０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２５の製造
Figure 0007206222000043
実施例２５は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２６分間にわたって１２－６５％Ｂとし、次に１００％Ｂで４分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は３０.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は１００％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：保持時間＝１.９８分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ ９７５.２５（Ｍ＋３Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１４６１.７９４９（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１４６１.７９３０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２６の製造
Figure 0007206222000044
実施例２６は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２０分間にわたって１５－５５％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。該材料を次の条件で分取性ＬＣ／ＭＳに付してさらに精製した：カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＣＳＨ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２２分間にわたって２２－６２％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は７.５ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.７８分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４７５.３（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１４６１.７９４９（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１４６１.７９５０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２７の製造
Figure 0007206222000045
実施例２７は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。 該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２０分間にわたって２７－６７％Ｂとし、次に１００％Ｂで８分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は２７.１ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９５％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.９４分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １５０４.２（Ｍ＋２Ｈ）；分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：保持時間＝１.９１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４０４.０（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１５０４.８１３３（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１５０４.８０７０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２８の製造
Figure 0007206222000046
実施例２８は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２０分間にわたって２３－６３％Ｂとし、次に１００％Ｂで６分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は２１.７ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９６％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｆ： 保持時間＝１.８６分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４８９.８（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１４９０.３０５６（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１４９０.３０００（Ｍ＋２Ｈ）
実施例２９の製造
Figure 0007206222000047
実施例２９は、一般的操作「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。 該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋０.１％トリフルオロ酢酸；勾配：２０分間にわたって２７－６２％Ｂとし、次に１００％Ｂで５分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は３２.９ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９８％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.９０分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４８９.４（Ｍ＋２Ｈ）；分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：保持時間＝１.９５分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４９０.０（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１４９０.３０５６（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１４９０.２９９０（Ｍ＋２Ｈ）
実施例３０の製造
Figure 0007206222000048
実施例３０は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。 該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって２０－６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで６分間保持する；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は２３.１ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は９０％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｅ：保持時間＝１.８０分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １０１９.１（Ｍ＋３Ｈ）；分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：保持時間＝１.９３分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １０１９.１（Ｍ＋３Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１５２８.３０４７（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１５２８.３０００（Ｍ＋２Ｈ）
実施例３１の製造
Figure 0007206222000049
実施例３１は、一般的操作：「シンフォニー方法Ａ：樹脂－膨潤操作」、「シンフォニー方法Ａ：標準－カップリング操作」、「シンフォニー方法Ａ：第２アミン－カップリング操作Ａ」、「カスタムアミノ酸－カップリング操作」、「クロロ酢酸カップリング操作」、「グローバル脱保護方法Ａ」、および「環化方法Ａ」に従って製造された。修飾されたクロロトリチル樹脂３がこの合成にて使用された。 該粗材料を次の条件を用いて分取性ＬＣ／ＭＳを介して精製した：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｘ２００ｍｍ、５μｍ粒子；移動相Ａ：５：９５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；移動相Ｂ：９５：５ アセトニトリル：水＋１０ｍＭ酢酸アンモニウム；勾配：２５分間にわたって２０－６０％Ｂとし、次に１００％Ｂで６分間保持した；流速：２０ｍＬ／分。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、遠心分離による蒸発を通して乾燥させた。生成物の収量は１６.８ｍｇであり、ＬＣＭＳ分析によるその推定純度は１００％であった。分析ＬＣＭＳ条件Ｆ：保持時間＝１.９１分；ＥＳＩ－ＭＳ（＋） ｍ／ｚ １４９１.１（Ｍ＋２Ｈ）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ（＋） ｍ／ｚ：計算値：１４９０.３０５６（Ｍ＋２Ｈ）；測定値：１４９０.２９９０（Ｍ＋２Ｈ）
均一性時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）結合アッセイを用いて、大環状ペプチドの、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１との結合について、競合する能力を試験する方法
本開示の大環状ペプチドのＰＤ－Ｌ１との結合能を、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の均一性時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）結合アッセイを用いて測定した。
方法
可溶性ＰＤ－１の可溶性ＰＤ－Ｌ１との結合の均一性時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）アッセイ：可溶性ＰＤ－１および可溶性ＰＤ－Ｌ１は、膜貫通領域を除去し、異種配列と、具体的にはヒト免疫グロブリンＧ配列（Ｉｇ）のＦｃ部またはヘキサヒスチジンエピトープタグ（Ｈｉｓ）と融合する、カルボキシル末端が切断されたタンパク質をいう。結合実験はすべて、０.１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンおよび０.０５％（ｖ／ｖ）ツィーン－２０を補足したｄＰＢＳからなるＨＴＲＦアッセイ緩衝液中でなされた。ＰＤ－１－Ｉｇ／ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓの結合アッセイの場合、阻害剤を、アッセイ緩衝液（４μｌ）中、ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ（最終１０ｎＭ）と一緒に１５分間予めインキュベートし、つづいてアッセイ緩衝液（１μｌ）中のＰＤ－１－Ｉｇ（最終２０ｎＭ）を添加し、さらに１５分間インキュベートした。ヒト、カニクイザル、マウスまたは他の種のいずれかより由来のＰＤ－Ｌ１融合タンパク質を用いた。ＨＴＲＦ検出は、ユーロピウムクリプタート標識の抗モノクローナル抗体（最終１ｎＭ）およびアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識の抗Ｈｉｓモノクローナル抗体（最終２０ｎＭ）を用いて達成された。抗体をＨＴＲＦ検出緩衝液で希釈し、５μｌを結合反応の上部に分注した。反応を３０分間にわたって平衡にさせ、シグナル（６６５ｎｍ／６２０ｎｍの割合）をEn Vision蛍光光度計を用いて得た。さらなる結合アッセイが、ＰＤ－１－Ｉｇ／ＰＤ－Ｌ２－Ｈｉｓ（各々、２０および５ｎＭ）、ＣＤ８０－Ｈｉｓ／ＰＤ－Ｌ１－Ｉｇ（各々、１００および１０ｎＭ）およびＣＤ８０－Ｈｉｓ／ＣＴＬＡ４－Ｉｇ（各々、１０および５ｎＭ）の間で達成された。ビオチニル化された化合物番号７１と、ヒトＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓとの間の結合／競合実験が次のようになされた。大環状ペプチドの阻害剤を、アッセイ緩衝液（４μｌ）中、ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ（最終１０ｎＭ）と一緒に６０分間予めインキュベートし、つづいてアッセイ緩衝液（１μｌ）中のビオチニル化された化合物番号７１（最終０.５ｎＭ）を添加した。結合を３０分間にわたって平衡にさせ、つづいてユーロピウムクリプタート標識のストレプトアビジン（最終２.５ｐＭ）およびＡＰＣ標識の抗－Ｈｉｓ（最終２０ｎＭ）／ＨＴＲＦ（５μｌ）緩衝液を添加した。反応を３０分間にわたって平衡にさせ、シグナル（６６５ｎｍ／６２０ｎｍの割合）をEn Vision蛍光光度計を用いて得た。
組換えタンパク質：カルボキシル末端切断したヒトＰＤ－１（アミノ酸２５－１６７）をＣ－末端ヒトＩｇエピトープタグ［ｈＰＤ－１（２５－６７）－３Ｓ－ＩＧ］と共に、ヒトＰＤ－Ｌ１（アミノ酸１８－２３９）をＣ－末端Ｈｉｓエピトープタグ［ｈＰＤ－Ｌ１（１９－２３９）－タバコベインモトリングウイルス・プロテアーゼ切断部位（ＴＶＭＶ）－Ｈｉｓ］と一緒にＨＥＫ２９３Ｔ細胞にて発現させ、組換えタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーによって連続的に精製した。ヒトＰＤ－Ｌ２－Ｈｉｓ（Sino Biologicals）、ＣＤ８０－Ｈｉｓ（Sino Biologicals）、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ（RnD Systems）はすべて商業的供給源を通して得られた。
組換えヒトＰＤ－１－Ｉｇの配列
Figure 0007206222000050
 （配列番号：１）
組換えヒトＰＤ－Ｌ１－ＴＶＭＶ－Ｈｉｓ（ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ）
Figure 0007206222000051
 （配列番号：２）
結果を表１に示す。ご覧のとおり、本開示の大環状ペプチドはＰＤ－１－ＩｇのＰＤ－Ｌ１－ＴＶＭＶ－Ｈｉｓ（ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ）との結合活性を強く阻害することが証明された。範囲は次のとおりである：Ａ＝０.０１０－０.０６０μＭ；Ｂ＝０.００１１－０.００９μＭ；Ｃ＝０.０００３－０.００１０μＭ
表１
Figure 0007206222000052
本開示が上記の例示としての実施例に限定されないこと、および本開示が、その本質的な特性を逸脱することなく、他の特定の形態にて具現化されうることは当業者に明らかであろう。従って、実施例はあらゆる点で例示であり、制限するものではないとして考えられるのが望ましく、上記した実施例よりもむしろ添付した特許請求の範囲について言及するものであって、かくして特許請求の範囲の意義の範囲内にあり、均等の範囲内にある変形はすべて本開示に含まれるものとする。

Claims (8)

  1. 式（Ｉ）：
    Figure 0007206222000053
     ［式中：
    Ａは
    Figure 0007206222000054
     であり；
    ここで：
    Figure 0007206222000055
     はカルボニル基との結合点を示し、
    Figure 0007206222000056
     は窒素原子との結合点を示し；
    ｍは１であり；
    ｗは０であり；
    Ｒ１４およびＲ１５は水素およびメチルより独立して選択され；
    Ｒ１６ａ は水素であり；
    Ｒ１６ は、－Ｃ（Ｒ１７ａ）２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６ａ）Ｃ（Ｒ１７ａ）２－Ｘ’－Ｒ３１ および－（Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１６ａ）ｍ’－Ｃ（Ｒ１７ａ）（Ｒ１７）－ＣＯ２Ｈより選択され；
    ここで：
    ｍ’は０－５であり；
    Ｘ’は１～１７２個の原子の鎖であり、ここで該原子は酸素および炭素より選択され、該鎖はその中に埋め込まれた－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、および－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－より選択される１、２、３または４個の基を含有してもよく、該鎖は－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、および－ＣＨ２ＣＯ２Ｈより独立して選択される１～６個の基で所望により置換されてもよい：ただし、Ｘ’は置換されていないＰＥＧ以外の基であるものとし；
    Ｒ ３１は、－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｗＲｘ、－ＣＨ３、アレキサ－５－ＳＤＰ、およびビオチンであり；
    各Ｒ１７ａは、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、－（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈより独立して選択され；
    各Ｒ１７は、水素、－ＣＨ３、（ＣＨ２）ｚＮ３、－（ＣＨ２）ｚＮＨ２、－Ｘ－Ｒ３１、－（ＣＨ２）ｚＣＯ２Ｈ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、および－（ＣＨ２）ｚ－トリアゾリル－Ｘ－Ｒ３５より独立して選択され、ここでｚは１～６であり、Ｒ３５は－ＣＯ２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲｗＲｘ、ＣＨ３、ビオチン、２－フルオロピリジン、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ビタミンＥおよび－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ビタミンＥより選択される：ただし、Ｒ１７のうち少なくとも一つは水素、－ＣＨ３、または－ＣＨ２ＯＨ以外の基であるものとし；
    Ｒ ｗ およびＲ ｘ は、水素およびＣ １ －Ｃ ６ アルキルより独立して選択され；
    Ｒｃ、Ｒｆ、Ｒｈ、Ｒｉ、Ｒｍ、およびＲｎは水素であり；
    Ｒａ 、Ｒ ｅ およびＲｊは、各々、水素であり；
    Ｒ １ は、フェニルメチルであり、ここで該フェニルは１個のヒドロキシ基で置換されてもよく；
    Ｒ ２ はメチルであり；
    Ｒ ３ は、－ＣＨ ２ Ｃ（Ｏ）ＮＨ ２ であり；
    Ｒ ４ は水素であり、Ｒ ｄ は水素またはメチルであるか、あるいはＲ ４ およびＲ ｄ が、それらが結合する原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており；
    Ｒ ５ は、－ＣＨ ２ ＮＨ ２ であり；
    Ｒ ６ は、－ＣＨ ２ ＣＨ（ＣＨ ３ ） ２ であり；
    Ｒ ８ は、－ＣＨ ２ （インドリル）であり；
    Ｒ ９ は、－（ＣＨ ２ ） ２ ＮＨ ２ であり；
    Ｒ １１ およびＲ １２ は、－（ＣＨ ２ ） ３ ＣＨ ３ であり；および
    Ｒ １３ は、－ＣＨ ２ ＣＨ（ＣＨ ３ ） ２ であり；
    Ｒ １０ は、
    Figure 0007206222000057
    より選択され；
    Ｒｂはメチルであり；
    Ｒ ｇおよびＲ７は、それらが結合する原子と一緒になって、ピロリジン環を形成しており、ここで該環は、１つのヒドロキシ基で所望により置換されてもよく；
    Ｒｋは、メチルであり；および
    Ｒｌは、メチルである］
    で示される化合物、またはその医薬的に許容される塩。
  2. 免疫応答の強化、刺激および／または亢進のための、請求項１の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。
  3. がん細胞の成長、増殖または転移の阻害のための、請求項１の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。
  4. がんが、黒色腫、腎細胞がん、扁平非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平ＮＳＣＬＣ、結腸直腸がん、去勢抵抗性前立腺がん、卵巣がん、胃がん、肝細胞がん、膵臓がん、頭頸部扁平上皮がん、食道、消化器および乳房のがん腫、および血液悪性腫瘍より選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
  5. 感染病を治療するための、請求項１の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。
  6. 感染病がウイルスにより引き起こされる、請求項５に記載の医薬組成物。
  7. 敗血性ショックを治療するための、請求項１の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。
  8. ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１および／またはＣＤ８０との相互作用を遮断するための、請求項１の化合物またはその治療的に許容される塩を含む、医薬組成物。
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