JP7111833B2 - 組織チップの量産製造方法 - Google Patents
組織チップの量産製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7111833B2 JP7111833B2 JP2020560136A JP2020560136A JP7111833B2 JP 7111833 B2 JP7111833 B2 JP 7111833B2 JP 2020560136 A JP2020560136 A JP 2020560136A JP 2020560136 A JP2020560136 A JP 2020560136A JP 7111833 B2 JP7111833 B2 JP 7111833B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tissue
- paraffin
- tube
- particles
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 29
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims description 65
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 52
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 41
- 238000000465 moulding Methods 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 22
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 21
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 claims description 14
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 12
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000007711 solidification Methods 0.000 claims 3
- 230000008023 solidification Effects 0.000 claims 3
- -1 cells Substances 0.000 claims 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 17
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 5
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 5
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 4
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012309 immunohistochemistry technique Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/02—Devices for withdrawing samples
- G01N1/04—Devices for withdrawing samples in the solid state, e.g. by cutting
- G01N1/06—Devices for withdrawing samples in the solid state, e.g. by cutting providing a thin slice, e.g. microtome
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/36—Embedding or analogous mounting of samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/42—Low-temperature sample treatment, e.g. cryofixation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising
- G01N2001/2866—Grinding or homogeneising
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising
- G01N2001/2873—Cutting or cleaving
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/36—Embedding or analogous mounting of samples
- G01N2001/364—Embedding or analogous mounting of samples using resins, epoxy
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/36—Embedding or analogous mounting of samples
- G01N2001/368—Mounting multiple samples in one block, e.g. TMA [Tissue Microarrays]
Landscapes
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は組織チップ製造の量産方法に関し、超高生産量の組織チップ製造に用いられ、組織チップ技術分野に属する。
組織チップ技術は遺伝子チップ技術の発展と拡張であり、細胞チップ、プロテインチップ、抗体チップと同様に特別なバイオチップ技術に属する。組織チップ技術は数十個引いては数千個の様々な個体の臨床組織標本を、事前に設計された順序でスライドガラスに配列して、分析と研究を行うことができ、高スループットのマルチサンプル分析ツールである。組織チップ技術により研究者は同時に数百個引いては数千個の組織サンプルを同時に分析し、ある１つ又は複数の特定の遺伝子、又は関連する発現産物に関する研究を実施することができる。該技術は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質、抗体等の技術と組み合わせ、従来の病理技術、組織化学及び免疫組織化学技術と組み合わせることにより、遺伝子、遺伝子転写及び関連する発現産物の生物学的機能の３つのレベルにおいて研究することができる。これは、ヒトゲノミクスの研究と発展、特に遺伝子・タンパク質と疾患との関係の研究、疾患関連遺伝子の検証、新薬の開発とスクリーニング、新抗体の調製とスクリーニング、疾患の分子診断及び治療過程の追跡と予後等において実際の意味と幅広い将来性がある。
アメリカＣｌｏｎｔｅｃｈとＳｔｒａｔａｇｅｎｅ等のバイオテック会社はヒト及び動物の組織チップ製品の開発と販売を行っているが、数が少なく、価格が高く、種類が単一であり、医学研究や医薬品産業の研究開発のニーズを満たすことができない。２００１年４月、アメリカＬｉｆｅＳｐａｎバイオテック会社は正常組織と病変組織の遺伝子発現データベースを構築している。アメリカＴｉｓｓｕｅ ｌｎｆｏｒｍａｃｔｉｃｓ会社は動物組織チップ技術により薬物毒性スクリーニングを実施し、新薬の作用部位を探索している。また、日本、イギリス等の国はいずれも国立臨床組織病理学データベースを構築している。
中国では、組織チップ技術に関する研究が急速に進んでいる。２００１年１０月、中国科学技術省は組織チップ技術を、西部地域開発のための「第十次五カ年計画」の重要なプロジェクトとして挙げ、西安で正式に掲げられている。該プロジェクトは７つのサブプロジェクトに分けられ、組織チップ技術、組織チップバイオインフォマティクスデータベース、自動化組織チップインスツルメント、自動分析装置、組織チップ関連技術及び試薬、組織チップ実際応用技術を含み、中国と世界の関連技術の同期発展のために基盤を築いている。
１０年余りの開発を経て、現在、組織チップの製造は主に機械化されたチップ製造機器を使用して遂行している。製造機器は操作台、特別なパンチサンプリング装置及び位置決めシステムを含む。パンチサンプリング装置はドナー組織パラフィンブロックをサンプリングし、同時に受容体パラフィン型をパンチングすることもでき、その孔径はサンプリングの直径と同じであり、両者はいずれも正確に位置決めすることができる。製造機器の位置決め装置は穿刺針又は受容体パラフィン型を線形移動させることにより、孔径、孔間隔、孔深さが完全に同じである組織マイクロアレイパラフィンブロックを製造することができる。スライスアシストシステムによりシリコン化とゲル化されたスライドガラスに移動し、固定して組織チップを形成する。様々なサンプル直径（０．２～２．０ｍｍ）に応じて、１枚の４５ｍｍ×２５ｍｍのスライドガラスに４０～２０００個以上の組織標本を配列することができる。一般的にはサンプル数に応じて、組織チップを低密度チップ（＜２００スポット）、中密度チップ（２００～６００スポット）及び高密度チップ（＞６００スポット）に分けられる。一般的な組織チップに含まれている組織標本の数は５０～８００である。様々な研究目的に応じて、チップ種類を腫瘍組織チップ、正常組織チップ、単一又は複合、特定の病理学種類等の数十種類の組織チップに分けられる。
ところが、上記方法により製造された組織チップには以下の不備がある。第１に、従来の組織チップの製造コストが非常に高い。特別な機器や設備（数十万人民元）を除き、１つの組織チップの製造費用は１万人民元以上であり、各１枚のスライスの単価は５０～１００人民元である。第２に、既存のパラフィンブロックからのみサンプリングすることができ、組織源が制限されている。第３に、従来の設備と方法により製造されたチップは、元のパラフィンブロックからパンチサンプリングし、組織の厚さが限られており、組織の厚さが一致しないため、わずか約５０枚をスライスした後にチップスポットが失われ始める。第４に、高密度チップはスループットが大きいが、各１枚の組織のサイズが小さいため、組織構造に関する情報を提供することは困難である。第５に、パラフィン組織のみで組織チップを製造することができ、新鮮な組織と培養された細胞で組織チップを製造することができない。第６に、大規模な研究機関のみ、組織チップに関連する研究を行うための資金と条件があり、普及することは困難である。第７に、従来の組織チップの方法は量産できず、幅広い臨床的及び科学的研究のニーズを満たすことは困難である。
本発明の目的は簡単な組織チップの量産製造方法を開発し、低密度と中密度の組織チップを製造し、サンプルスループット、組織構造、新鮮な組織、ホルマリン又はアルコール等のその他の溶媒により固定された組織、パラフィン又はその他の支持剤で充填された組織及び培養された細胞等、特に組織チップの高生産量等の様々な要求を同時に考え、組織チップ技術の作用を十分に発揮させることである。
上記目的を達成するために、本発明の技術的解決手段は組織又は細胞チップの量産製造方法を提供する。該方法は、組織粒子、培養された細胞又は収集された剥離細胞（例えば、胸腹水剥離細胞）を成形装置で成形させることと、成形後の組織又は細胞を受容体パラフィン型に植え込み又は金属板に接着し、スライスすることにより、組織又は細胞チップを得ることと、を含み、前記組織粒子は、組織撹拌機で新鮮な組織、ホルマリン又はその他の溶媒（例えば、アルコール等）により固定された組織、又はパラフィン包埋された組織ブロックを粉砕することによって形成されることを特徴とする。
前記組織撹拌機で撹拌した後の組織粒子の形状は不規則であるが、組織構造が維持されている。
好ましくは、前記組織粒子のサイズは０．０１ｃｍ～０．３ｃｍである。
好ましくは、組織撹拌機でホルマリン又はその他の溶媒により固定された組織を粉砕して形成された組織粒子の成形方法は、組織撹拌機でホルマリン又はその他の溶媒により固定された組織を粉砕して形成された組織粒子を収集し、綿布で包み、番号を付けた後に脱水とパラフィン浸透を行うことと、組織チップ包埋装置を起動し、組織粒子を組織チップ包埋装置の加熱台に配置し、５０～７０℃でその上のパラフィンを溶融させ、成形対象の組織粒子となることと、成形管を組織チップ包埋装置の加熱台の凹溝内に入れることと、組織粒子を成形管内に詰め込み、溶融したパラフィンを加えて成形管内の組織粒子間の隙間を充填することと、組織粒子に満たされパラフィンで隙間が充填された成形管を加熱台から組織チップ包埋装置の冷却台に移動して重合し、成形後の組織コアが装着された成形管を取得し、番号を付けて保存し、使用する前に成形管を取り除き、成形後の組織コアを得ることと、を含む。
より好ましくは、前記成形管は長さ１～２ｃｍ、直径０．１～０．３ｃｍの円柱形プラスチック管であり、又は、前記成形管は長さ１～２ｃｍ、幅０．１～０．５ｃｍ、高さ０．１～０．５ｃｍの直方体形状の成形管である。
より好ましくは、前記成形管は長さ２ｃｍ、直径０．３ｃｍである。形状、サイズ及び内径が必要に応じて調整可能でもよい。
より好ましくは、前記組織コアの使用可能な長さは１ｃｍ～１ｍであり、好ましくは２ｃｍであり、連続的に２０００枚にスライスできると推定される。
好ましくは、前記成形後の組織又は細胞を受容体パラフィン型に植え込む方法は、受容体パラフィン型をガラス板に配置し、５０～７０℃の恒温槽に２０～４０分放置し、受容体パラフィン型を柔らかくし、位置決め板又は位置決め用紙に対応する位置の組織又は細胞の番号を記録し、ガイド針で受容体パラフィン型の対応する位置に穿孔し、成形後の組織又は細胞を１つずつ植え込み、植え込み完了後に植え込み面をガラス板に向け、５０～７０℃の恒温槽に置いて１～５時間重合させ、受容体パラフィン型とガラス板を同時に２～６℃の冷蔵庫に置き、ガラス板を取り出し、組織又は細胞が植え込まれた受容体パラフィン型を取得し、ガラス板に平行である方向に沿ってスライスして組織又は細胞チップを得ることを含む。
好ましくは、前記成形後の組織又は細胞を金属板上に接着させる方法は、位置決めポイントがマークされた金属板を冷蔵庫に置き、凍結成形後の組織又は細胞を取り出し、位置決め板に位置を記録し、成形後の組織又は細胞の一端に少量の包埋剤を塗布し、金属板の位置決めポイントに１つずつ接着させた後、包埋剤で成形後の組織又は細胞間の隙間を充填し、包埋剤と成形後の組織又は細胞とを一体に凍結し、凍結スライサーでスライスして、組織又は細胞チップを得ることを含む。
より好ましくは、必要に応じて様々に組み合わせした組織又は細胞を選択して受容体パラフィン型に植え込むことができる。
好ましくは、前記組織撹拌機でパラフィン包埋された組織ブロックを粉砕して形成された組織粒子の成形方法は、組織撹拌機でパラフィン包埋された組織ブロックを粉砕して形成された組織粒子を収集し、成形管を組織チップ包埋装置の加熱台の凹溝内に入れることと、組織粒子を成形管内に詰め込み、溶融したパラフィンを加えて成形管内の組織粒子間の隙間を充填することと、組織粒子に満たされパラフィンで隙間が充填された成形管を加熱台から組織チップ包埋装置の冷却台に移動して重合し、成形後の組織コアが装着された成形管を取得し、番号を付けて保存し、使用する前に成形管を取り除き、成形後の組織コアを得ることと、を含む。
好ましくは、前記組織撹拌機で新鮮な組織を粉砕して形成された組織粒子の成形方法は、組織粒子を凹溝付きの弾性プラスチック板である新鮮な組織粒子成形板に移動し、新鮮な組織粒子を凹溝に吸い込ませ、新鮮な組織粒子成形板を－１５～－２５℃の冷蔵庫に置き、新鮮な組織の凍結柱を形成し、番号を付け、予備用とすることを含む。
より好ましくは、前記凹溝は長さ２ｃｍ、幅０．２ｃｍ～０．５ｃｍ、高さ０．２ｃｍ～０．５ｃｍである。
好ましくは、培養された細胞又は収集された剥離細胞を前記成形装置で成形させる方法は、培養された細胞又は収集された剥離細胞に対して直接従来の方法を用いて固定、脱水及びパラフィン浸透を行い、成形管を組織チップ包埋装置の加熱台の凹溝内に入れ、パラフィン浸透後の細胞を成形管内に入れ、溶融したパラフィンを加えて隙間を充填することと、成形管を加熱台から組織チップ包埋装置の冷却台に移動して重合させ、成形後の細胞を取得し、番号を付けて保存することと、を含む。
好ましくは、前記成形管は異なる形状と仕様を有してもよく、前記組織チップ包埋装置の凹溝は異なるサイズを有してもよい。
好ましくは、前記受容体パラフィンブロックは方形、円形又はその他の形状である。
本発明は１つの組織を一定の組織構造が維持されていることを基本とする組織粒子に粉砕し、さらにパラフィンの溶解しやすく、重合しやすい特性を利用し、まず少量のパラフィンで組織粒子を接着させ、成形後に円柱体等の形状に形成させ、組織チップを製造する組織コアとして予備用とする。又は新鮮な組織粒子成形板で凍結して成形し、新鮮な組織チップを製造する組織コアとして予備用とする。
本発明は安価、便利、迅速、生産量の大幅な向上、材料多様化、パラフィン組織に加えて新鮮な組織及び培養又は剥離細胞に使用可能であるという利点を有し、各病理科及び関連研究機関に普及できる。製造された組織コアの形状は制限されず、長尺状、長方形、方形、円柱形、円筒形に成形でき、組織コアと組織チップのサイズは必要に応じて決定可能であり、５０ｍｍ×２５ｍｍの面積において２０～１００個の組織コアを配列することができ、研究のニーズを満たすことができる。免疫組織化学のポジティブコントロール用チップに組み合わせて製造することもでき、１～１０個の組織コアを配列することができる。組織チップの高さも必要に応じて決定可能であり、高さ５ｍｍ～２０ｍｍの組織チップにおいて５００～２０００枚をスライスでき、従来の組織チップを５０枚にスライスする生産量よりはるかに高く、約１０～４０倍である。従来の組織チップの製造方法はスライス過程において、組織コアが徐々に紛失する現象が発生するが、この方法により製造される組織チップは組織コアの長さが一致するため、後続のスライスが組織コアを紛失する状況が発生することない。２ｃｍ×２ｃｍ×０．２ｃｍの１枚の組織を例とする場合、従来の組織チップのサンプリング方法により、最大１０個のスポットを採取し、スポットごとに５０～２００枚のチップに切ることで計算すると、５００～２０００枚のチップを得ることができる。組織粒子に撹拌した後、２ｃｍ×０．３ｃｍ×０．３ｃｍの組織柱を５～１０本得ることができ、合計で該組織を含む組織チップを１～２万枚得ることができる。胎盤組織を例とする場合、組織量が十分であり、組織粒子に撹拌した後、１０００本の組織柱を迅速且つ便利に製造でき、胎盤組織を含む組織チップを２００万枚得ることができる。そのため、組織粒子の方法は組織チップの量産のボトルネックを突破し、高価な組織チップサンプリングマシンという設備を省き、そのコストは従来の製造方法よりはるかに低く、組織チップの普及及び応用のために便利な新しい方法を提供する。
本発明は安価、便利、迅速、量産、成形多様化の利点を有し、新鮮な組織、固定組織、パラフィン包埋組織、培養又は胸腹水等の剥離細胞に適用することができ、各病理科及び関連研究機関に普及できる。
以下、実施例に合わせて本発明の実施形態を明らか、完全に説明する。明らかに、下記実施例は本発明の一部の実施例を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を制限するものではない。実施例に具体的な条件が明記されていない場合、従来の条件又はメーカーが推奨する条件により行われる。製造業者が明記されていない試薬又は器具は市販の一般的な製品と見なされる。前述の本発明の好ましい実施例に過ぎず、本発明を制限するものではなく、本発明の精神及び原則から逸脱しない限り、行われる如何なる修正、同等置換及び改良等はいずれも本発明の保護範囲内に含まれるべきである。
実施例１
組織チップの量産製造方法であって、具体的なステップは以下のとおりである。
組織チップの量産製造方法であって、具体的なステップは以下のとおりである。
ステップ１：病理組織を採取する時に必要な組織を残し、ホルマリンで固定し、番号を付け、組織撹拌機で粉砕して組織粒子を形成し、組織粒子を収集し、綿布で包み、病理科での一般的な組織処理プロセスに従って、番号を付けた後に脱水とパラフィン浸透を行う。
ステップ２：組織チップ包埋装置を起動し、組織粒子を組織チップ包埋装置の加熱台に配置し、６０℃で組織粒子上のパラフィンを溶融させ、成形待ち組織粒子を取得し、成形管を組織チップ包埋装置の加熱台の凹溝内に入れる。前記成形管は長さ２ｃｍ、直径０．３ｃｍの円柱形プラスチック管であり、成形待ち組織粒子を成形管内に詰め込み、少量の溶融したパラフィンを加え、組織粒子間の隙間を充填し、組織量に応じて１回で少なくとも５本の組織チップを製造する。
ステップ３：組織粒子に満たされパラフィンで隙間が充填された成形管を加熱台から組織チップ包埋装置の冷却台に移動して重合し、成形後の組織コアが装着された成形管を取得し、番号を付けて保存し、使用する前に成形管を取り除き、成形後の組織コアを得る。
ステップ４：５０ｍｍ×２５ｍｍの受容体パラフィン型をガラス板に配置し、５０℃の恒温槽内に３０ｍｉｎ放置し、チップの植え込み面を上に向け、受容体パラフィン型を柔らかくする。位置決め板又は位置決め用紙に対応する位置の組織の番号を記録し、ガイド針で受容体パラフィン型の対応する位置に穿孔し、成形後の組織又は細胞を１つずつ植え込む。
ステップ５：植え込み完了後、受容体パラフィン型の植え込み面をガラス板に向け、５６℃の恒温槽に同時に入れて６０分重合し、重合後に受容体パラフィン型とガラス板を同時に４℃の冷蔵庫に入れ、ガラス板を取り出し、組織又は細胞が植え込まれた受容体パラフィン型を取得し、ガラス板に平行である方向に沿ってスライスして組織チップを得る。同じ症例の５本の組織コアを５個の組織チップの製造に利用することができる。それにより１万枚のチップを得ることができる。
実施例２
組織チップの量産製造方法であって、具体的なステップは以下のとおりである。
組織チップの量産製造方法であって、具体的なステップは以下のとおりである。
ステップ１：病理組織を採取する時に必要な新鮮な組織を残し、番号を付け、「組織撹拌機」で組織粒子になるように撹拌する。
ステップ２：組織粒子をピペットで凹溝付きの弾性プラスチック板である新鮮な組織粒子成形板の凹溝内に移動し、凹溝は長さ２ｃｍ、幅０．３ｃｍ、深さ０．３ｃｍであり、新鮮な組織粒子成形板を－２０℃の冷蔵庫に入れ、組織粒子を新鮮な組織の凍結柱に凍結して成形させる。
ステップ３：新鮮な組織粒子成形板の弾性を利用し、成形された新鮮な組織コアを緩め、ピンセットで取り出し、番号を付け、新鮮な組織コアを凍結し、予備用とする。
ステップ４：５０ｍｍ×２５ｍｍの位置決めポイントがマークされた金属板を－２０℃の冷蔵庫に入れ、新鮮な組織コアを取り出し、位置決め板に位置を記録し、新鮮な組織コアの一端に少量の包埋剤（ＯＣＴ包埋剤、Ｓａｋｕｒａ Ｆｉｎｅｔｅｋ Ｊａｐａｎ Ｃｏ，Ｌｔｄ，Ｔｏｋｙｏ、１３５－０００７）を塗布し、金属板の位置決めポイントに１つずつ接着させた後、包埋剤で新鮮な組織コア間の隙間を充填し、包埋剤と組織コアは完全な新鮮な組織チップに凍結され、凍結スライサーでスライスし、新鮮な組織チップを得る。同じ症例の２０本の組織コアを２０個の組織チップの製造に利用することができる。それにより４万枚のチップを得ることができる。
実施例３
組織チップの量産製造方法であって、具体的なステップは以下のとおりである。
ステップ１：遠心沈殿により胸水剥離細胞を取得し、直接従来の方法を用いてホルマリンで固定し、綿布で包み、病理科での一般的な組織処理プロセスに従って、脱水とパラフィン浸透を行う。
ステップ２：パラフィン浸透された剥離細胞を組織チップ包埋装置の加熱台に配置し、６２℃で組織粒子上のパラフィンを溶融させ、成形管を組織チップ包埋装置の加熱台の凹溝内に入れる。前記成形管は長さ２ｃｍ、幅０．２ｃｍ、高さ０．２ｃｍの直方体形状の成形管であり、パラフィン浸透後の細胞を成形管内に入れ、溶融したパラフィンを加えて隙間を充填し、細胞量に応じて１回で１０本の細胞チップを製造する。
ステップ３：成形管を加熱台から組織チップ包埋装置の冷却台に移動して重合し、成形後の細胞を取得し、番号を付けて保存する。
ステップ４：５０ｍｍ×２５ｍｍの受容体パラフィン型をガラス板に配置し、５２℃の恒温槽内に３０分放置し、チップ植え込み面を上に向け、受容体パラフィン型を柔らかくする。位置決め板又は位置決め用紙に対応する位置の細胞の番号を記録し、ガイド針で受容体パラフィン型の対応する位置に穿孔し、１本の成形後の細胞コア外層のプラスチック管を取り除き、異なる細胞コアを１つずつ受容体パラフィン型内に植え込む。
ステップ５：植え込み完了後、受容体パラフィン型の植え込み面をガラス板に向け、５６℃の恒温槽に同時に入れて６０分重合し、重合後に受容体パラフィン型とガラス板を同時に４℃の冷蔵庫に入れ、ガラス板を取り出し、細胞が植え込まれた受容体パラフィン型を取得し、ガラス板に平行である方向に沿ってスライスして細胞チップを得る。同じ症例の１０本の組織コアを１０個の細胞チップの製造に利用することができる。それにより２万枚のチップを得ることができる。
Claims (8)
- 組織粒子、細胞を成形管にいれ、前記成形管に溶融パラフィンを加え、成形管内の組織粒子間、細胞の隙間を充填し、成形管内で溶融パラフィンに組織粒子、細胞が浸った状態とする成形ステップと、
前記成形管を冷却することでパラフィンを固め、固めたパラフィンを前記成形管から取り出し、組織コアを作製する組織コア作製ステップと、
受容体パラフィン型を用意し、前記受容体パラフィン型に前記組織コアを植え込むための穿孔を形成し、前記穿孔に複数の組織コアを植え込む植え込みステップと、
植え込み面にガラス板をかぶせ、恒温槽で加熱し、前記受容体パラフィン型のパラフィンと前記組織コアのパラフィンとをなじませる加熱ステップと、
パラフィンを冷却し固め、前記受容体パラフィン型と前記組織コアとを一体化させ、複数の組織コアの植え込まれた受容体パラフィン型を取得する冷却凝固ステップと、
複数の組織コアの植え込まれた受容体パラフィン型を受容体パラフィン型の穿孔の開口が形成された面にかぶせられたガラス板と平行な方向に沿って、組織コアの植え込まれた受容体パラフィン型をスライスすることで、組織切片を得るスライスステップと、
を含み、
前記組織粒子は、粒状であり、組織撹拌機で新鮮な組織、ホルマリン又はその他の溶媒により固定された組織であり、前記細胞は、培養された細胞又は収集された剥離細胞である、
ことを特徴とする組織切片の量産製造方法。 - 前記組織粒子のサイズは０．０１ｃｍ～０．３ｃｍである、
ことを特徴とする請求項１に記載の組織切片の量産製造方法。 - 前記成形ステップにさらに、
前記組織粒子を収集し、綿布で包み、番号を付けた後に成形管に入れる工程と、
組織切片包埋装置を起動し、前記組織粒子を組織切片包埋装置の加熱台に配置し、５０℃～７０℃でパラフィンを溶融させる工程と、
成形管を組織切片包埋装置の加熱台の凹溝内に入れる工程と、
を含み、
前記冷却凝固ステップにさらに、
前記成形管を前記組織切片包埋装置の加熱台から前記組織切片包埋装置の冷却台に移動してパラフィンを冷却凝固する工程を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載の組織切片の量産製造方法。 - 前記植え込みステップにさらに、
前記受容体パラフィン型をガラス板に配置し、５０℃～７０℃の恒温槽に２０～４０分放置し、前記受容体パラフィン型を柔らかくし、位置決め板又は位置決め用紙に対応する位置の組織又は細胞の番号を記録し、ガイド針で前記受容体パラフィン型の対応する位置に穿孔し、前記成形ステップにおいて得られた組織粒子、細胞を１つずつ植え込む工程を含み、
前記加熱ステップにさらに、
５０℃～７０℃の恒温槽において１～３時間加熱する工程を含み、
前記冷却凝固ステップにさらに、
受容体パラフィン型とガラス板を同時に２～６℃の冷蔵庫に置く工程を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載の組織切片の量産製造方法。 - 前記成形ステップにさらに、
前記組織粒子を収集し、前記成形管を組織切片包埋装置の加熱台の凹溝内に入れる工程、を含み、
前記冷却凝固ステップにさらに、
前記成形管を前記組織切片包埋装置の加熱台から前記組織切片包埋装置の冷却台に移動してパラフィンを冷却凝固する工程を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載の組織切片の量産製造方法。 - 前記成形ステップにさらに、
前記組織粒子をピペットで凹溝付きの弾性プラスチック板である新鮮な組織粒子成形板に移動し、前記組織粒子を凹溝に吸い込ませる工程を含み、
前記組織コア作製ステップにさらに、
前記新鮮な組織粒子成形板を－１５～－２５℃の冷蔵庫に入れ、柱形の組織コアを形成する工程を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載の組織切片の量産製造方法。 - 前記成形ステップにさらに、
まず、位置決めポイントがマークされた金属板を冷蔵庫に入れ、位置決め板に位置を記録し、前記組織粒子、細胞の一端に少量の包埋剤を塗布し、金属板の位置決めポイントに１つずつ接着させる工程を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載の組織切片の量産製造方法。 - 前記成形管は長さ１～２ｃｍ、直径０．１～０．３ｃｍの円柱形プラスチック管であり、又は、前記成形管は長さ１～２ｃｍ、幅０．１～０．５ｃｍ、高さ０．１～０．５ｃｍの直方体形状の成形管である、
ことを特徴とする請求項３、又は５に記載の組織切片の量産製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810381966.2A CN108593380B (zh) | 2018-04-25 | 2018-04-25 | 一种组织芯片量产制作方法 |
| CN201810381966.2 | 2018-04-25 | ||
| PCT/CN2019/083579 WO2019206054A1 (zh) | 2018-04-25 | 2019-04-20 | 一种组织芯片量产制作方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2021518919A JP2021518919A (ja) | 2021-08-05 |
| JP7111833B2 true JP7111833B2 (ja) | 2022-08-02 |
Family
ID=63609982
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2020560136A Active JP7111833B2 (ja) | 2018-04-25 | 2019-04-20 | 組織チップの量産製造方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210041333A1 (ja) |
| JP (1) | JP7111833B2 (ja) |
| KR (1) | KR102458364B1 (ja) |
| CN (1) | CN108593380B (ja) |
| MY (1) | MY196704A (ja) |
| WO (1) | WO2019206054A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2920502T3 (es) * | 2017-12-06 | 2022-08-04 | Genentech Inc | Controles sintéticos para inmunohistoquímica |
| CN108593380B (zh) * | 2018-04-25 | 2021-05-18 | 复旦大学附属中山医院 | 一种组织芯片量产制作方法 |
| CN111088216A (zh) * | 2019-12-16 | 2020-05-01 | 齐妍 | 一种用于石蜡包埋组织分离检测细胞的方法 |
| CN113759143B (zh) * | 2021-09-01 | 2024-04-26 | 广州耐确医疗器械有限责任公司 | 一种新型全自动组织芯片仪 |
| CN114002030A (zh) * | 2021-10-15 | 2022-02-01 | 北京龙迈达斯科技开发有限公司 | 一种复合型组织芯片及其制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004538484A (ja) | 2001-08-13 | 2004-12-24 | ダコサイトメーション・デンマーク・アクティーゼルスカブ | 組織学研究のための組織サンプルを調製および提供するための方法および装置 |
| JP2005509870A (ja) | 2001-11-20 | 2005-04-14 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 細胞及び組織アレイ及びマイクロアレイと使用方法 |
| CN101694429A (zh) | 2009-10-15 | 2010-04-14 | 复旦大学附属中山医院 | 一种石蜡组织芯片包埋方法 |
| JP2012042414A (ja) | 2010-08-23 | 2012-03-01 | Kyushu Univ | 組織標本の凍結方法及び保存方法 |
| CN103091151A (zh) | 2013-01-04 | 2013-05-08 | 复旦大学附属中山医院 | 一种石蜡细胞芯片接种方法 |
| WO2017079763A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Ventana Medical Systems, Inc. | Representative diagnostics |
| CN108593380A (zh) | 2018-04-25 | 2018-09-28 | 复旦大学附属中山医院 | 一种组织芯片量产制作方法 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100451649C (zh) * | 2004-01-08 | 2009-01-14 | 中南大学湘雅医学院肿瘤研究所 | 一种细胞芯片制作方法及其器具 |
| US8911682B2 (en) * | 2007-06-08 | 2014-12-16 | Array Science, Llc | Method for producing tissue microarray blocks |
| JP2009002768A (ja) * | 2007-06-21 | 2009-01-08 | Japan Health Science Foundation | 組織マイクロアレイ作製方法 |
| CN201186924Y (zh) * | 2008-03-13 | 2009-01-28 | 陕西省人民医院 | 一种制备细胞芯片的装置 |
| CN101556224B (zh) * | 2009-05-18 | 2011-02-16 | 复旦大学附属中山医院 | 一种石蜡组织芯片制作方法 |
| CN102435725A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-05-02 | 复旦大学附属中山医院 | 一种简易石蜡组织芯片接种方法 |
| CN202471473U (zh) * | 2011-09-14 | 2012-10-03 | 饶莹 | 一种一次成型的组织芯片制作装置 |
| KR101434048B1 (ko) * | 2012-12-05 | 2014-08-25 | 삼성전기주식회사 | 세포 박편 표본의 제조 방법 |
| CN103869057B (zh) * | 2012-12-13 | 2017-01-18 | 泰州医药城博奥邦科生物科技有限公司 | 穿刺活检组织芯片 |
| CN103900864A (zh) * | 2012-12-25 | 2014-07-02 | 泰州医药城博奥邦科生物科技有限公司 | 脱落细胞芯片 |
| CN103439163B (zh) * | 2013-09-04 | 2015-07-15 | 中南大学湘雅三医院 | 活版式组织芯片制备方法及制备仪器 |
| CN104034570B (zh) * | 2014-04-29 | 2016-09-14 | 大连工业大学 | 一种海蜇石蜡切片制备方法 |
| CN105259001B (zh) * | 2015-11-13 | 2018-11-20 | 广州市金圻睿生物科技有限责任公司 | 一种用于组织活检的石蜡切片前处理方法 |
-
2018
- 2018-04-25 CN CN201810381966.2A patent/CN108593380B/zh active Active
-
2019
- 2019-04-20 KR KR1020207031934A patent/KR102458364B1/ko active IP Right Grant
- 2019-04-20 JP JP2020560136A patent/JP7111833B2/ja active Active
- 2019-04-20 WO PCT/CN2019/083579 patent/WO2019206054A1/zh active Application Filing
- 2019-04-20 MY MYPI2020005582A patent/MY196704A/en unknown
-
2020
- 2020-10-23 US US17/078,372 patent/US20210041333A1/en active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004538484A (ja) | 2001-08-13 | 2004-12-24 | ダコサイトメーション・デンマーク・アクティーゼルスカブ | 組織学研究のための組織サンプルを調製および提供するための方法および装置 |
| JP2005509870A (ja) | 2001-11-20 | 2005-04-14 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 細胞及び組織アレイ及びマイクロアレイと使用方法 |
| CN101694429A (zh) | 2009-10-15 | 2010-04-14 | 复旦大学附属中山医院 | 一种石蜡组织芯片包埋方法 |
| JP2012042414A (ja) | 2010-08-23 | 2012-03-01 | Kyushu Univ | 組織標本の凍結方法及び保存方法 |
| CN103091151A (zh) | 2013-01-04 | 2013-05-08 | 复旦大学附属中山医院 | 一种石蜡细胞芯片接种方法 |
| WO2017079763A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Ventana Medical Systems, Inc. | Representative diagnostics |
| CN108593380A (zh) | 2018-04-25 | 2018-09-28 | 复旦大学附属中山医院 | 一种组织芯片量产制作方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2021518919A (ja) | 2021-08-05 |
| US20210041333A1 (en) | 2021-02-11 |
| CN108593380B (zh) | 2021-05-18 |
| WO2019206054A1 (zh) | 2019-10-31 |
| CN108593380A (zh) | 2018-09-28 |
| KR102458364B1 (ko) | 2022-10-24 |
| MY196704A (en) | 2023-04-30 |
| KR20200142026A (ko) | 2020-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7111833B2 (ja) | 組織チップの量産製造方法 | |
| US4914022A (en) | Method for preparing multiple tissue samples for microscopic investigation and testing | |
| US11519908B2 (en) | Matrix for receiving tissue samples | |
| Wan et al. | A rapid and efficient method for testing immunohistochemical reactivity of monoclonal antibodies against multiple tissue samples simultaneously | |
| JP4374139B2 (ja) | 迅速な分子プロファイリングのための腫瘍組織マイクロアレイ | |
| JP2005530504A (ja) | 発明の名称：組織マイクロアレイ構築用手動セット | |
| US7029615B2 (en) | Method for production of material blocks with multiple test samples | |
| Eguiluz et al. | Multitissue array review: a chronological description of tissue array techniques, applications and procedures | |
| Vogel | Overview on techniques to construct tissue arrays with special emphasis on tissue microarrays | |
| WO2006039396A2 (en) | Non-embedded tissue microarray technology for protein and nucleic acid analyses | |
| JP2010511889A (ja) | レシピエントブロックのモルド及びその用途 | |
| CN101694429B (zh) | 一种石蜡组织芯片包埋方法 | |
| CN109312300B (zh) | 球体组织微阵列及制备方法 | |
| KR100458860B1 (ko) | 생검시료의 검사를 위한 보조기구 | |
| CN102998153A (zh) | 一种基于一次成型的组织芯片制作方法 | |
| CN101556224B (zh) | 一种石蜡组织芯片制作方法 | |
| CN202471473U (zh) | 一种一次成型的组织芯片制作装置 | |
| WO2022017482A1 (zh) | 组织切片方法以及用于组织切片的成型装置 | |
| Ştefan et al. | Tissue microarrays–brief history, techniques and clinical future | |
| US6900009B2 (en) | Method for creating a frozen tissue array | |
| CN102042922B (zh) | 一种制作一次成型组织芯片的方法及应用于该方法中的模具 | |
| Dimenstein | Sectionable cassette for embedding automation in surgical pathology | |
| CN219084544U (zh) | 类器官包埋模具 | |
| CN100392094C (zh) | 细胞及细胞核微阵列制作方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201111 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20211116 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211130 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220224 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220427 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220628 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220721 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7111833 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |