KR102458364B1 - 조직 칩 양산 제작 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 조직 또는 세포 칩 양산 제작 방법을 제공하며, 여기에는 조직 입자, 배양된 세포 또는 수집된 탈락 세포(예를 들어 흉수 및 복수 탈락 세포)를 성형 장치로 성형하고, 조직 입자는 조직 교반기를 이용해 신선 조직, 포르말린 또는 기타 용매(예를 들어 알코올 등)가 고정된 조직, 또는 파라핀이 포매된 조직 블록을 교반 및 분쇄하고, 성형된 조직 또는 세포를 수용체 왁스 몰드에 이식하거나 금속 플레이트 상에 부착하고, 슬라이싱하여 조직 또는 세포 칩을 획득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다. 상기 제작 방법은 비용이 저렴하고 편리하며 신속하고 대량 생산 가능하며 다양한 형태로 성형할 수 있는 장점을 가지고 있으며, 신선 조직, 고정된 조직, 파라핀 포매 조직, 배양 또는 흉복수 등 탈락 세포에 사용할 수 있고, 모든 병리학 및 관련 연구기관에서 활용하도록 대중화시킬 수 있다.
Description
본 발명은 조직 칩 기술 분야에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 초고수율 양산의 조직 칩 제작에 사용되는 조직 칩 제작의 양산 방법에 관한 것이다.
조직 칩 기술은 유전자 칩 기술이 발전 및 확장된 것으로, 세포 칩, 단백질 칩, 항체 칩과 마찬가지로 특수한 바이오칩 기술에 속한다. 조직 칩 기술은 분석 및 연구를 위해 유리 슬라이드 위에 미리 설계된 순서에 따라 수십 또는 수천 개의 서로 다른 개체의 임상 조직 표본을 배열할 수 있으며, 처리량이 많은 다중 시료 분석 도구이다. 조직 칩 기술은 연구원이 수백 또는 수천 개의 조직 샘플을 동시에 분석하고 하나 이상의 특정 유전자 또는 관련 발현 산물에 대한 연구를 수행할 수 있게 해 준다. 상기 기술은 DNA, RNA, 단백질, 항체 등 기술과 결합하여 종래의 병리학 기술, 조직화학 및 면역조직화학 기술과 결합할 수 있으며, 유전자, 유전자 전사 및 관련 발현 산물의 생물학적 기능의 세 가지 수준에서 연구를 수행할 수 있다. 이는 인간 유전체학의 연구와 발전, 특히 유전자 및 단백질과 질병과의 관계에 대한 연구, 질병 관련 유전자의 검증, 신약의 개발과 스크리닝, 새로운 항체의 제조와 스크리닝, 질병의 분자 진단, 치료 과정 추적과 예후 등 측면에서 실질적인 의의와 광범위한 시장 전망을 가지고 있다.
미국의 Clontech 및 Stratagene 등과 같은 바이오 기술 기업은 인간 및 동물의 조직 칩 제품 개발 및 판매를 이미 시작했으나, 수량이 적고 가격이 높으며 품종이 단일해 의료 과학 연구 및 제약 산업 연구 개발의 수요를 충족시킬 수 없다. 2001년 4월 미국의 LifeSpan 생명과학회사는 정상 및 질병 조직 유전자 발현 데이터베이스를 구축했다. 미국 Tissue lnformactics 회사는 동물 조직 칩 기술을 사용하여 약물 독성학적 스크리닝을 수행하고 새로운 약물 작용 부위를 찾는다. 또한 일본, 영국 및 국가에서는 국가 임상 조직 병리학 데이터베이스를 구축했다.
중국은 조직 칩 기술에 대한 연구에서 빠른 진전을 이루었다. 2001년 10월, 중국 과학기술부는 조직 칩 기술을 “10차 5개년 계획”의 국가 과학 기술 서부 개발 중대 프로젝트로 지정했으며, 프로젝트는 시안(西安)에 공식적으로 수립되었다. 상기 프로젝트는 조직 칩 기술, 조직 칩 생체 정보 데이터베이스, 조직 칩 자동화 기기, 자동 분석 장치, 조직 칩 관련 기술 및 시약, 조직 칩 실제 응용 기술 등 7개의 하위 프로젝트로 나뉘어 중국과 세계의 관련 기술 동시 개발을 위한 기반을 마련했다.
10여 년에 걸친 개발 끝에 현재 조직 칩의 제조는 주로 기계화된 칩 제조 기기에 의해 수행된다. 제조 기기에는 운영 플랫폼, 특수 천공 샘플링 장치 및 위치 결정 시스템이 포함된다. 천공 샘플링 장치는 공여체 조직 왁스 블록을 샘플링하고 동시에 수용체 왁스 몰드를 천공할 수도 있다. 그 공경은 샘플링 직경과 동일하며 둘 다 정확하게 위치를 결정할 수 있다. 제조 기기의 위치 결정 장치는 천자침 또는 수용체 왁스 몰드를 선형으로 이동시킬 수 있어 공경, 구멍 거리, 구멍 깊이가 완전히 동일한 조직 마이크로어레이 왁스 블록을 제조한다. 슬라이싱 보조 시스템을 통해 이를 실리콘화 및 겔화된 유리 슬라이드 상으로 옮겨 고정하여 조직 칩을 만든다. 샘플 직경(0.2 내지 2.0mm)에 따라 40 내지 2000개 이상의 조직 표본을 45mm×25mm의 유리 슬라이드 상에 배열할 수 있다. 일반적으로 샘플 수에 따라 조직 칩을 저밀도 칩(<200포인트), 중밀도 칩(200 내지 600포인트) 및 고밀도 칩(>600포인트)으로 구분한다. 일반적으로 사용되는 조직 칩에는 조직 표본의 수가 50 내지 800개이다. 다양한 연구 목적에 따라 칩 유형은 종양 조직 칩, 정상 조직 칩, 단일 또는 복합, 특정 병리학적 유형 등 10가지 조직 칩으로 나눌 수 있다.
그러나 상기 방법에 따른 조직 칩 제조는 다음과 같은 단점이 있다. 첫째, 종래의 조직 칩 제작은 비용이 매우 높다. 특수한 기구 및 장비(수십만 위안)를 제외하고, 하나의 조직 칩을 제작하는 데 1만 위안 이상이 소요되며, 각 슬라이스의 단가는 50 내지 100위안이다. 둘째, 기존의 왁스 블록에서만 샘플링을 수행할 수 있어 조직 소스가 제한적이다. 셋째, 종래의 장비 및 방법에 따라 제조된 칩은 슬라이스의 양이 약 50개가 되면 칩 포인트가 유실되기 시작하는데, 이는 원래의 왁스 블록 상에서 샘플링을 수행하기 때문에 조직 두께가 제한되고 조직 두께가 일치하지도 않기 때문이다. 넷째, 고밀도 칩은 처리량이 많지만 각 조직의 크기가 작아 조직 구조에 대한 정보를 제공하기 어렵다. 다섯째, 파라핀 조직을 사용해야만 조직 칩을 제조할 수 있으며, 신선 조직과 배양된 세포로는 조직 칩을 제조할 수 없다. 여섯째, 대규모 연구기관에서만 조직 칩의 관련 연구를 수행할 자금과 조건을 마련할 수 있기 때문에 널리 보급하기 어렵다. 일곱째, 종래의 조직 칩 방식으로는 양산이 불가능하여 다양한 임상 및 과학 연구의 수요를 충족시키기 어렵다.
본 발명의 목적은 간편한 조직 칩 양산 제작 방법을 개발함으로써, 저밀도와 중밀도 조직 칩을 제조하고, 샘플 처리량, 조직 구조, 신선 조직, 포르말린 또는 알코올 등 기타 용매가 고정된 조직, 파라핀 또는 기타 지지제가 보충된 조직 및 배양된 세포 등, 특히 조직 칩의 높은 수율 등 다방면의 수요를 고려하여, 조직 칩 기술의 역할이 충분히 발휘되도록 만드는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명의 기술적 해결책은 조직 또는 세포 칩 양산 제작 방법을 제공하며, 여기에는 조직 입자, 배양된 세포 또는 수집된 탈락 세포(예를 들어 흉수 및 복수 탈락 세포)를 성형 장치로 성형하고, 상기 조직 입자는 조직 교반기를 이용해 신선 조직, 포르말린 또는 기타 용매(예를 들어 알코올 등)가 고정된 조직, 또는 파라핀이 포매된 조직 블록을 교반하여 분쇄하고, 성형된 조직 또는 세포를 수용체 왁스 몰드에 이식하거나 금속 플레이트 상에 부착하고, 슬라이싱하여 조직 또는 세포 칩을 획득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
상기 조직 교반기로 교반한 후의 조직 입자는 형상이 불규칙하지만 조직 구조는 남아있다.
바람직하게는, 상기 조직 입자의 크기는 0.01cm 내지 0.3cm이다.
바람직하게는, 조직 교반기를 이용해 포르말린으로 고정된 조직을 교반 및 분쇄하여 형성한 조직 입자의 성형 방법에는, 조직 교반기를 이용해 포르말린으로 고정된 조직을 교반 및 분쇄하여 형성한 조직 입자를 수집하고, 면포에 싸서 일련번호를 매긴 후 탈수하여 왁스에 담그는 단계; 조직 칩 포매기를 열고 조직 입자를 조직 칩 포매기의 아이어닝 테이블(ironing table) 상에 놓고, 50 내지 70℃에서 그 위의 파라핀을 녹여 성형할 조직 입자를 만드는 단계; 성형 튜브를 조직 칩 포매기 아이어닝 테이블 상의 오목홈에 넣는 단계; 조직 입자를 성형 튜브 내에 채워 넣고, 용융된 파라핀을 첨가하여 성형 튜브 내 조직 입자 사이 틈새를 메우는 단계; 조직 입자와 파라핀으로 틈새가 메워진 성형 튜브를 아이어닝 테이블로부터 조직 칩 포매기의 동결 테이블로 옮겨 응집시켜, 성형된 조직 코어가 담긴 성형 튜브를 획득하고, 일련번호를 매기고 보관하며, 사용하기 전에 성형 튜브를 벗겨내어 성형된 조직 코어를 획득하는 단계가 포함된다.
보다 바람직하게는, 상기 성형 튜브는 길이가 1 내지 2cm이고, 직경이 0.1 내지 0.3cm인 원기둥형 플라스틱 튜브이거나, 상기 성형 튜브는 길이가 1 내지 2cm이고, 폭이 0.1 내지 0.5cm이고, 높이가 0.1 내지 0.5cm인 직사각형 플라스틱 성형 튜브이다.
보다 바람직하게는, 상기 성형 튜브는 길이가 2cm이고, 직경이 0.3cm이다. 형상, 크기 및 내경도 필요에 따라 조정할 수 있다.
보다 바람직하게는, 상기 조직 칩의 사용 가능한 길이는 1cm 내지 1m이고, 바람직하게는 2cm이며, 2000개 슬라이스를 연속적으로 절단할 수 있을 것으로 예상된다.
바람직하게는, 상기 성형된 조직 또는 세포를 수용체 왁스 몰드에 이식하는 방법은, 수용체 왁스 몰드를 유리 슬라이드 상에 놓고, 50 내지 70℃ 항온 오븐에 20 내지 40분 동안 두어, 수용체 왁스 몰드를 부드럽게 만들고, 위치 고정 플레이트 또는 위치 고정 종이 상에 상응하는 위치의 조직 또는 세포 일련번호를 기록하고, 안내핀을 이용하여 수용체 왁스 몰드의 상응하는 위치에 구멍을 뚫고, 성형된 조직 또는 세포를 하나씩 이식하여 이식을 완료한 후, 이식면을 유리 슬라이드를 향하도록 놓고, 50 내지 70℃의 항온 오븐에서 1 내지 5시간 동안 응집시키고, 수용체 왁스 몰드와 유리 슬라이드를 동시에 2 내지 6℃의 냉장실에 넣고, 유리 슬라이드를 제거하여 조직 또는 세포가 접종된 수용체 왁스 몰드를 획득하며, 유리 슬라이드에 평행한 방향을 따라 슬라이싱하여 조직 또는 세포 칩을 획득하는 단계를 포함한다.
바람직하게는, 상기 성형된 조직 또는 세포를 금속 플레이트 상에 부착하는 방법은, 금속 플레이트를 냉장실에 넣고, 금속 플레이트 상에 위치 고정 포인트를 표시하고, 동결 성형된 조직 또는 세포를 꺼내고, 위치 고정 플레이트 상의 위치를 기록하고, 성형된 조직 또는 세포의 일단에 소량의 포매제를 바르고, 금속 플레이트의 위치 고정 포인트 상에 하나씩 부착한 다음, 포매제를 사용해 성형된 조직 또는 세포 사이의 틈새를 채우고, 포매제와 성형된 조직 또는 세포를 함께 동결시키며, 동결조직절편기(cryostat microtome)을 이용해 슬라이싱하여 조직 또는 세포 칩을 획득하는 단계를 포함한다.
보다 바람직하게는, 필요에 따라 상이한 조합의 조직 또는 세포를 수용체 왁스 몰드에 이식되도록 선택할 수 있다.
바람직하게는, 상기 조직 교반기를 이용해 파라핀이 포매된 조직 블록을 교반 및 분쇄하여 형성된 조직 입자의 성형 방법에는, 조직 교반기를 이용하여 파라핀이 포매된 조직 블록을 교반 및 분쇄하여 형성된 조직 입자를 수집하고, 성형 튜브를 조직 칩 포매기 아이어닝 테이블 상의 오목홈 내에 넣고; 조직 입자를 성형 튜브 내에 채우고, 용융된 파라핀을 첨가하여 성형 튜브 내 조직 입자 사이의 틈새를 채우고; 조직 입자와 파라핀으로 틈새가 채워진 성형 튜브를 아이어닝 테이블로부터 조직 칩 포매기의 동결 테이블로 옮겨 응집시키고, 성형된 조직 코어가 담긴 성형 튜브를 획득하고, 일련번호를 매기고 보관하며, 사용하기 전에 성형 튜브를 벗겨내어 성형된 조직 코어를 획득하는 단계가 포함된다.
바람직하게는, 상기 조직 교반기를 이용하여 신선 조직을 교반 및 분쇄하여 형성한 조직 입자를 성형하는 방법에는, 조직 입자를 신선 조직 입자 성형 플레이트 상으로 옮기고, 신선 조직 입자 성형 플레이트는 탄성이 있는 플라스틱 플레이트이고, 플라스틱 플레이트 상에 오목홈이 있고, 신선 조직 입자를 오목홈으로 흡입시키고, 신선 조직 입자 성형 플레이트를 -15 내지 -25℃의 냉장실에 넣어, 신선 조직 냉동 보존 칼럼을 형성하며 일련번호를 매기고 이후 사용을 위해 준비하는 단계가 포함된다.
보다 바람직하게는, 상기 오목홈의 길이는 2cm이고, 폭은 0.2 내지 0.5cm이고, 높이는 0.2 내지 0.5cm이다.
바람직하게는, 상기 배양된 세포 또는 수집된 탈락 세포를 성형 장치로 성형하는 방법에는, 배양된 세포 또는 수집된 탈락 세포를 곧바로 통상적인 방법으로 고정하고, 탈수하고, 왁스에 담그고, 성형 튜브를 조직 칩 포매기 아이어닝 테이블 상의 오목홈에 넣고, 왁스에 침지시킨 세포를 성형 튜브 내에 넣고, 용융된 파라핀을 첨가하여 틈새를 채우고; 성형 튜브를 아이어닝 테이블로부터 조직 칩 포매기의 동결 테이블로 옮겨 응집시켜, 성형된 세포를 획득하며, 일련번호를 매기고 보관하는 단계가 포함된다.
바람직하게는, 상기 성형 튜브는 상이한 형상 및 규격을 가질 수 있고, 상기 조직 칩 포매기의 오목홈은 상이한 크기를 가질 수 있다.
바람직하게는, 상기 수용체 왁스 블록은 정사각형, 원형 또는 다른 모양이다.
본 발명은 한 블록의 조직을 조직 입자로 교반 및 분쇄하고, 조직 입자가 여전히 일정한 조직 구조를 유지하는 것을 기반으로, 파라핀의 용해되기 쉽고 응집되기 쉬운 특성을 이용하여, 먼저 소량의 파라핀으로 조직 입자를 함께 부착하고, 성형한 후 원기둥체 등의 형상으로 만들며, 이를 조직 칩 제조를 위한 조직 코어로 사용한다. 또는 신선 조직 입자 성형 플레이트를 이용해 동결 성형하여 이를 신선 조직 칩 제조를 위한 조직 코어로 사용한다.
본 발명은 비용이 저렴하고 편리하며 신속하고 생산량이 현저히 향상되며 다양한 샘플링이 가능하고 파라핀 조직, 신선 조직 및 배양 또는 탈락 세포에 사용할 수 있는 장점이 있으며, 모든 병리학 및 관련 연구기관에서 활용하도록 대중화시킬 수 있다. 제작된 조직 코어의 형상은 제한되지 않으며, 띠 모양, 직사각형, 정사각형, 원기둥형, 원통형 형태로 만들 수 있다. 조직 코어와 조직 칩의 크기는 필요에 따라 결정할 수 있으며, 50mm×25mm의 면적 상에서 20 내지 100개의 조직 코어를 배열할 수 있으므로 연구 수요를 충족시킬 수 있다. 또한 면역조직화학의 양성 대조 칩으로 조합하여 1 내지 10개 조직 코어로 배열하여 제조할 수도 있다. 조직 칩의 높이도 필요에 따라 결정할 수 있으며, 5 내지 20mm 높이의 조직 칩 상에서 500 내지 2000개의 슬라이스를 절단할 수 있는데, 이는 종래의 조직 칩으로 50개 슬라이스를 절단할 수 있는 생산량보다 약 10 내지 40배 많다. 종래의 조직 칩 제조 방법은 슬라이싱 과정에서 점차적으로 조직 코어가 유실되는 현상이 일어나지만, 이 방법으로 제조된 조직 칩은 조직 코어 길이가 일치하기 때문에 후속 슬라이싱에서 조직 코어가 유실되는 상황이 발생하지 않는다. 2cm×2cm×0.2cm의 조직을 예로 들면, 종래의 조직 칩 샘플링 방식에서는 최대 10포인트를 취하며, 각 포인트를 50 내지 200개의 칩으로 절단한다고 계산하면 500 내지 2000개의 칩을 획득할 수 있고, 조직 입자로 교반된 후에는 5 내지 10개의 2cm×0.3cm×0.3cm의 조직 칼럼을 획득할 수 있고, 총 1 내지 2만개의 조직이 함유된 조직 칩을 획득할 수 있다. 태반 조직을 예로 들면, 조직의 양이 충분하며, 조직 입자로 교반한 후 편리하고 신속하게 1,000개의 조직 칼럼을 제작할 수 있고, 200만 개의 태반 조직이 함유된 조직 칩을 획득할 수 있다. 따라서 조직 입자의 방법은 조직 칩 양산의 병목 현상을 해소하였으며, 고가의 조직 칩 샘플링 기기와 같은 장비가 줄어들어 제조 비용이 종래의 방법보다 훨씬 저렴하고, 조직 칩의 대중화 및 적용을 위한 편리하고 새로운 방법을 개척하였다.
본 발명은 저렴하고 편리하며 신속하고 대량 생산이 가능하며 다양한 형태로 성형할 수 있는 장점을 가지고 있으며, 신선 조직, 고정 조직, 파라핀 포매 조직, 배양, 흉수와 복수 등의 탈락 세포에 사용할 수 있고, 모든 병리학 및 관련 연구기관에서 활용하도록 대중화시킬 수 있다.
이하에서는 실시예를 참고하여 본 발명을 명확하고 완전하게 설명한다. 설명된 실시예는 본 발명의 일부 실시예에 불과하며 이는 본 발명의 범위를 제한하지 않는다는 점에 유의한다. 실시예에서 구체적인 조건이 명시되지 않은 경우, 통상적인 조건 또는 제조업체가 권장하는 조건에 따라 수행해야 한다. 사용되는 시약 또는 기기에 제조사가 명시되어 있지 않은 경우, 시중에서 구입할 수 있는 통상적인 제품으로 간주할 수 있다. 상기 내용은 본 발명의 비교적 바람직한 실시예일 뿐이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니며, 본 발명의 정신과 원칙 내에서 이루어진 모든 수정, 동등한 대체, 개선 등은 본 발명의 보호 범위 내에 포함되어야 한다.
실시예 1
조직 칩의 양산 제작 방법은 구체적으로 다음 단계를 포함한다.
단계 1: 병리학 재료 수집 시 필요한 조직을 취하고, 포르말린으로 고정하고, 일련번호를 매기고, 조직 교반기로 교반 및 분쇄하여 조직 입자를 형성하고, 조직 입자를 수집하고, 면포로 감싸고, 통상의 병리학적 조직 처리 절차에 따라 일련번호를 매긴 후 탈수하여 왁스에 담근다.
단계 2: 조직 칩 포매기를 열고, 조직 입자를 조직 칩 포매기의 아이어닝 테이블 상에 놓고, 60℃에서 조직 입자 상의 파라핀을 용융시켜 성형할 조직 입자를 만들고, 성형 튜브를 조직 칩 포매기 아이어닝 테이블 상의 오목홈에 넣고, 상기 성형 튜브는 길이가 2cm이고, 직경이 0.3cm인 원기둥형 플라스틱 튜브이고, 성형할 조직 입자를 성형 튜브 내에 채우고, 소량의 용융된 파라핀을 첨가하여 조직 입자 사이의 틈새를 채우고, 조직의 양에 따라 한 번에 적어도 5개의 조직 칩을 제조한다.
단계 3: 조직 입자와 파라핀으로 틈새가 채워진 성형 튜브를 아이어닝 테이블로부터 조직 칩 포매기의 동결 테이블에 옮겨 응집시키고, 성형된 조직 코어가 담긴 성형 튜브를 획득한 후, 일련번호를 매기고 보관하며, 사용하기 전에 성형 튜브를 벗겨 성형된 조직 코어를 획득한다.
단계 4: 50mm×25mm의 수용체 왁스 몰드를 유리 슬라이드 상에 놓고, 50℃ 항온 오븐에 30분 동안 놓고, 칩 이식면이 위로 향하게 하여 수용체 왁스 몰드를 부드럽게 만든다. 위치 고정 플레이트 또는 위치 고정 종이 위에 상응하는 위치의 조직 일련번호를 기록하고, 안내핀으로 수용체 왁스 몰드의 상응하는 위치에 구멍을 뚫고, 성형된 조직 또는 세포를 하나씩 이식한다.
단계 5: 이식이 완료되면 수용체 왁스 몰드 이식면이 유리 슬라이드를 향하도록 놓고, 함께 56℃ 항온 오븐에 60분 동안 넣고 응집시킨 후, 수용체 왁스 몰드와 유리 슬라이드를 동시에 4℃ 냉장실에 넣고, 유리 슬라이드를 꺼내며, 조직 또는 세포가 접종된 수용체 왁스 몰드를 획득하고, 유리 슬라이드에 평행한 방향을 따라 슬라이싱하여 조직 칩을 획득한다. 동일한 병례의 5개 조직 코어는 5개의 조직 칩 제조에 사용될 수 있다. 따라서 1만 개의 칩을 획득할 수 있다.
실시예 2
조직 칩의 양산 제작 방법은 구체적으로 다음 단계를 포함한다.
단계 1: 병리학 재료 수집 시 필요한 신선 조직을 취하고, 일련번호를 매기고, “조직 교반기”로 교반 및 분쇄하여 조직 입자를 형성한다.
단계 2: 조직 입자를 흡입 튜브를 이용해 신선 조직 입자 성형 플레이트의 오목홈 내로 이식하고, 신선 조직 입자 성형 플레이트는 탄성이 있는 플라스틱 플레이트이고, 플라스틱 플레이트 상에는 오목홈이 있고, 오목홈은 길이가 2cm이고 폭이 0.3cm이고 깊이가 0.3cm이고, 신선 조직 입자 성형 플레이트를 -20℃ 냉장실에 넣고, 조직 입자를 동결 성형하여 신선 조직 동결 칼럼으로 만든다.
단계 3: 신선 조직 입자 성형 플레이트의 탄성을 이용하여, 이미 성형된 신선 조직 코어를 느슨하게 하여, 포셉으로 꺼내고, 일련번호를 매겨 신선 조직 칩을 동결하여 이후 단계에 사용할 수 있도록 준비한다.
단계 4: 50mm×25mm의 금속 플레이트를 -20℃ 냉장실에 넣고, 금속 플레이트 상에 위치 고정 포인트를 표시하고, 신선 조직 코어를 꺼내고, 위치 고정 플레이트 상에 위치를 기록하고, 신선 조직 코어의 일단에 소량의 포매제(OCT 포매제, Sakura Finetek Japan Co, Ltd, Tokyo, 135-0007)를 바르고, 하나씩 금속 플레이트의 위치 고정 포인트 상에 부착한 후, 포매제로 신선 조직 코어 사이의 틈새를 채우고, 포매제와 조직 칩을 완전한 신선 조직 칩으로 동결시키고, 동결조직절편기를 이용하여 슬라이싱하여 신선 조직 칩을 획득한다. 동일한 병례의 20개 조직 코어는 20개의 조직 칩 제조에 사용될 수 있다. 따라서 4만 개의 칩을 획득할 수 있다.
실시예 3
조직 칩의 양산 제작 방법은 구체적으로 다음 단계를 포함한다.
단계 1: 원심 분리 및 침전을 통해 흉수 탈락 세포를 획득하고, 곧바로 통상적인 방법을 이용해 포르마린으로 고정하며, 면포로 감싼 후 통상적인 병리학적 조직 처리 절차에 따라 탈수하고 왁스에 침지시킨다.
단계 2: 왁스에 담근 탈락 세포를 조직 칩 포매기의 아이어닝 테이블 상에 놓고, 62℃에서 조직 입자 상의 파라핀을 용융시키고, 성형 튜브를 조직 칩 포매기 아이어닝 테이블 상의 오목홈에 넣고, 상기 성형 튜브는 길이가 2cm이고 폭이 0.2cm이고 높이가 0.2cm인 직사각형 성형 튜브이고, 왁스에 담근 세포를 성형 튜브 내에 넣고, 용융된 파라핀을 첨가하여 틈새를 채우고, 세포의 양에 따라 한 번에 10개의 세포 칩을 제조한다.
단계 3: 성형 튜브를 아이어닝 테이블로부터 조직 칩 포매기의 동결 테이블로 옮겨 응집시켜, 성형된 세포를 획득하고, 일련번호를 매기고 보관한다.
단계 4: 50mm×25mm의 수용체 왁스 몰드를 유리 슬라이드 상에 놓고, 52℃ 항온 오븐에 30분간 넣고, 칩 이식면이 위를 향하게 하여 수용체 왁스 몰드를 부드럽게 만든다. 위치 고정 플레이트 또는 위치 고정 종이 상에 상응하는 위치의 세포 일련번호를 기록하고, 안내핀으로 수용체 왁스 몰드의 상응하는 위치에 구멍을 뚫고, 1개의 성형된 세포 코어 외층의 플라스틱 튜브를 벗기고, 상이한 세포 코어를 하나씩 수용체 왁스 몰드에 이식한다.
단계 5: 이식 완료 후, 수용체 왁스 몰드 이식면이 유리 슬라이드를 향하도록 놓고, 함께 56℃ 항온 오븐에 60분 동안 넣고 응집시킨 후, 수용체 왁스 몰드와 유리 슬라이드를 동시에 4℃ 냉장실에 넣고, 유리 슬라이드를 꺼내며, 세포가 접종된 수용체 왁스 몰드를 획득하고, 유리 슬라이드에 평행한 방향을 따라 슬라이싱하여 세포 칩을 획득한다. 동일한 병례의 10개 조직 코어는 10개의 조직 칩 제조에 사용될 수 있다. 따라서 2만 개의 칩을 획득할 수 있다.
Claims (10)
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- 신선 조직을 취하고, 일련번호를 매기고, 조직 교반기로 교반 및 분쇄하여 조직 입자를 형성하는 단계;
조직 입자를 흡입 튜브를 이용하여 플라스틱 재질의 신선 조직 입자 성형 플레이트의 오목홈 내에 이식하는 단계;
신선 조직 입자 성형 플레이트를 -15 내지 -25℃의 냉장실에 넣어, 신선 조직 입자를 동결 성형하여 신선 조직 동결 칼럼으로 만드는 단계;
신선 조직 입자 성형 플레이트의 탄성을 이용하여, 이미 성형된 신선 조직 코어를 느슨하게 하여, 포셉으로 꺼내고, 일련번호를 매겨 신선 조직 칩을 동결하는 단계;
금속 플레이트를 냉장실에 넣고, 금속 플레이트 상에 위치 고정 포인트를 표시하고, 신선 조직 코어를 꺼내고, 위치 고정 플레이트 상의 위치를 기록하고, 신선 조직 코어의 일단에 소량의 포매제를 바르고, 금속 플레이트의 위치 고정 포인트 상에 하나씩 부착한 다음, 포매제를 사용해 신선 조직 코어 사이의 틈새를 채우고, 포매제와 신선 조직 코어를 함께 동결시키며, 동결조직절편기(cryostat microtome)를 이용해 슬라이싱하여 신선 조직 칩을 획득하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 조직 칩 양산 제작 방법. - 삭제
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