JP6923115B2 - 高グリコシル化ヒト血液凝固第viii因子の融合タンパク質、その調製方法、および使用 - Google Patents
高グリコシル化ヒト血液凝固第viii因子の融合タンパク質、その調製方法、および使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6923115B2 JP6923115B2 JP2019530527A JP2019530527A JP6923115B2 JP 6923115 B2 JP6923115 B2 JP 6923115B2 JP 2019530527 A JP2019530527 A JP 2019530527A JP 2019530527 A JP2019530527 A JP 2019530527A JP 6923115 B2 JP6923115 B2 JP 6923115B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fusion protein
- human
- protein according
- fviii
- ctp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims description 184
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims description 182
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 title claims description 85
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 title claims description 84
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 16
- 101800005309 Carboxy-terminal peptide Proteins 0.000 claims description 83
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 69
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 63
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 46
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 32
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 31
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 31
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 30
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 claims description 29
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 claims description 29
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 claims description 29
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 26
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 24
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 24
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims description 19
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims description 18
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims description 18
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 18
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims description 15
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 claims description 15
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 claims description 15
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims description 14
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 12
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 12
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 102220315697 rs1553622313 Human genes 0.000 claims description 11
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 8
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 8
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 102100029880 Glycodelin Human genes 0.000 claims description 5
- 101000585553 Homo sapiens Glycodelin Proteins 0.000 claims description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 102200124454 rs80356507 Human genes 0.000 claims description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 claims description 3
- 102200072304 rs1057519530 Human genes 0.000 claims description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 3
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 claims description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 32
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 16
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 description 12
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 11
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 10
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 9
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 9
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 9
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 229940036647 xyntha Drugs 0.000 description 9
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 8
- 108700019309 factor VIII-Fc fusion Proteins 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 7
- 230000009827 complement-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 7
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 7
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 7
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 5
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 4
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 4
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 3
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010019949 BAX 855 Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000004576 lipid-binding Effects 0.000 description 2
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 2
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- -1 more specifically Proteins 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010048049 Factor IXa Proteins 0.000 description 1
- 108010061932 Factor VIIIa Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- ABSPRNADVQNDOU-UHFFFAOYSA-N Menaquinone 1 Natural products C1=CC=C2C(=O)C(CC=C(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 ABSPRNADVQNDOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000966481 Mus musculus Dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 208000026552 Severe hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 101710128947 Tricarboxylate transport protein, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 108700029631 X-Linked Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910001413 alkali metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003990 capacitor Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000010523 cascade reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 229940105778 coagulation factor viii Drugs 0.000 description 1
- 208000014763 coagulation protein disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000007849 functional defect Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012145 high-salt buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBWXNTAXLNYFJB-NKFFZRIASA-N phylloquinone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C/C=C(C)/CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)=C(C)C(=O)C2=C1 MBWXNTAXLNYFJB-NKFFZRIASA-N 0.000 description 1
- 235000019175 phylloquinone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011772 phylloquinone Substances 0.000 description 1
- 229960001898 phytomenadione Drugs 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 108010025139 recombinant factor VIII SQ Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 210000003765 sex chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 239000001393 triammonium citrate Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- A61K38/37—Factors VIII
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0381—Animal model for diseases of the hematopoietic system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
- C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
Description
(i)L1:GSGGGSGGGGSGGGGS配列(配列番号2に示す)、
(ii)L2:GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS配列(配列番号3に示す)、
(iii)L3:GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS配列(配列番号4に示す)、
(iv)L4:GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS配列(配列番号5に示す)、
(v)L5:GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS配列(配列番号6に示す)を含む。
(i)CTP1:PRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ(配列番号7に示す)、
(ii)CTP2:SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ(配列番号8に示す)、
(iii)CTP3:SSSSKAPPPS(配列番号9に示す)、
(iv)CTP4:SRLPGPSDTPILPQ(配列番号10に示す)
という配列を含む。
(i)vFcγ1:Leu234Val、Leu235Ala、およびPro331Ser突然変異を含むヒトIgG1ヒンジ領域、CH2およびCH3領域(配列番号11に示すアミノ酸配列)、
(ii)vFcγ2−1:Pro331Ser突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域(配列番号12に示すアミノ酸配列)、
(iii)vFcγ2−2:Thr250GlnおよびMet428Leu突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域(配列番号13に示すアミノ酸配列)、
(iv)vFcγ2−3:Pro331Ser、Thr250Gln、およびMet428Leu突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域(配列番号14に示すアミノ酸配列)、
(v)vFcγ4:Ser228ProおよびLeu235Ala突然変異を含むヒトIgG4ヒンジ領域、CH2およびCH3領域(配列番号15に示すアミノ酸配列)
のグループから選ばれても良い。
(a)前記DNAをCHO細胞に導入し、CHO由来の細胞系を生成するステップと、
(b)ステップ(a)においてその増殖培地中で24時間ごとの発現が1IU/106個の細胞を超えた高収率細胞株をスクリーニングするステップと、
(c)ステップ(b)でスクリーニングされた細胞株を培養し、融合タンパク質を発現させるステップと、
(d)ステップ(c)で得られた発酵液を回収し、融合タンパク質を分離して精製するステップと、
を含むCHO由来の細胞系等の哺乳動物細胞系から前記融合タンパク質を調製または生産する方法を提供する。
CTPはヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)のβ−サブユニットカルボキシ末端に由来する短いペプチドである。生殖に関連する4種類のポリペプチドホルモン卵胞刺激ホルモン(FSH)、黄体形成ホルモン(LH)、甲状腺刺激ホルモン(TSH)、およびヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)は、同じα−サブユニットおよびそれぞれ特異なβ−サブユニットを含む。他の3種類のホルモンと比べ、hCGの体内半減期が明らかに延長され、これは主にβ−サブユニットにおける特有のカルボキシ末端ペプチド(CTP)に由来する(Fares FAら、Proc Natl Acad Sci USA、1992、89(10):4304〜4308)。天然のCTPには37個のアミノ酸残基が含まれ、4つのO−グリコシル化部位を有し、末端がシアル酸残基である。負に帯電した高シアル化されたCTPは、腎臓のそれに対する消去作用と抵抗して、タンパク質の体内での半減期を延長することができる(FaresFAら、Proc Natl Acad Sci USA、1992、89(10):4304〜4308)。しかし、本発明者は創造的に少なくとも1つのCTPポリペプチドと適当な長さの可撓性C−ペプチドとを連結し、それら共にC−ペプチドとしてFVIIIと半減期延長部分とを連結するために使用する(例えば、免疫グロブリンFc断片)。
非開裂性Fc変異体
Fc素子は免疫グロブリンIgGの定常ドメインFc断片に由来し、病原体を撲滅する免疫防御では重要な作用を果たす。Fcにより媒介されるIgGのエフェクター機能は、(1)細胞表面のFc受容体(FcγRs)と結合し、ファゴサイトーシス、または分解作用、またはキラー細胞が抗体依存性細胞傷害性(ADCC)経路によって病原体を消化するか、あるいは(2)第1の補体成分C1のC1qと結合し、補体依存性細胞傷害性(CDC)経路を誘発し、病原体を分解するという2種類のメカニズムにより発揮する。4種類のヒトIgGサブクラスのうち、IgG1およびIgG3はFcγRsと効果的に結合することができ、IgG4とFcγRsとの結合親和性が相対的に低く、IgG2とFcγRsとの結合は低くて測定しにくいため、ヒトIgG2はほとんどADCC効果がない。また、ヒトIgG1およびIgG3はさらにC1qと効果的に結合して補体カスケード反応を活性化することができる。ヒトIgG2とC1qとの結合は相対的に弱く、IgG4はC1qと結合しない(JefferisRら、Immunol Rev、1998、163:59〜76)ため、ヒトIgG2のCDC効果も相対的に弱い。明らかに、FVIII−Fc融合タンパク質の構築に非常に適合する天然IgGサブクラスが存在しない。エフェクター機能を有しない非開裂性Fcを得るために、最も有効な方法は、Fc断片における補体、受容体結合ドメインを突然変異して改造し、Fcと関連する受容体との結合親和性を調節し、ADCCおよびCDC効果を低減または除去し、機能タンパク質の生物学的活性およびFcセグメントの長期有効な体内半減期のみを保留するが、細胞傷害性を生じないことである。より多くの非開裂性Fc変異体に含まれる変異部位は、ShieldsRLら、JBiolChem、2001、276(9):6591〜604、または中国発明専利CN201280031137.2を参照することができる。
IgGの血漿半減期は、それとFcRnとの結合に依存し、一般的にpH6.0である場合に結合し、pH7.4(血漿pH)である場合に解離する。両者の結合部位に対する研究により、IgGにおけるFcRnと結合する部位を改造し、pH6.0である場合に結合能力を増加させる。FcRnの結合に重要なヒトFcγドメインの一部の残基の突然変異は血清半減期を増加できることが既に証明されている。T250、M252、S254、T256、V308、E380、M428およびN434における突然変異は、FcRn結合親和性を増加または低減することができると報告されている(Roopenianら、Nat.RviewImmunology7:715〜725、2007)。韓国特許番号KR10−1027427は、増加されたFcRn結合親和性を有するトラスツズマブ(ハーセプチン、Genentech)変異体を開示し、且つ、これらの変異体は、257C、257M、257L、257N、257Y、279Q、279Y、308Fおよび308Yから選ばれる1つまたはより多くのアミノ酸修飾を含む。韓国特許公開番号KR2010−0099179はベバシズマブ(アバスチン、Genentech)変異体を提供し、且つ、これらの変異体は、N434S、M252Y/M428L、M252Y/N434SおよびM428L/N434Sに含まれるアミノ酸修飾により、増加された体内半減期を示す。また、Hintonらは、T250QおよびM428Lとの2つの変異体が、FcRnとの結合をそれぞれ3倍、7倍増加させることも発見した。2つの部位を同時に突然変異すると、結合は28倍増加する。アカゲザルの体内で、M428LまたはT250QM/428L変異体は、血漿半減期が2倍増加したことを示す(PaulR.Hintonら、JImmunol、2006、176:346〜356)。より多くの新生児受容体(FcRn)との結合親和性が強化されたFc変異体に含まれる変異部位は、中国発明専利CN201280066663.2を参照することができる。また、研究によれば、5種類のヒト源化抗体のFcセグメントに対してT250Q/M428L突然変異を行うことは、FcとFcRnとの相互作用を改善するだけでなく、その後の体内薬物動態試験において、皮下注射で投与し、Fc突然変異抗体は野生型抗体と比べ、薬物動態パラメータが改善され、例えば、体内暴露量が増加され、浄化率が低下し、皮下生物利用度が向上したことが発見した(Datta−MannanAら.MAbs.Taylor&Francis、2012、4(2):267〜273.)。
本発明の融合タンパク質遺伝子は、コドンが最適化された人工合成方法で調製されたものである。本発明に係るヌクレオチド配列によれば、当業者は簡単に様々な既知の方法で本発明のコード核酸を製造することができる。これらの方法は、人工合成または従来のサブクローン等に限定されず、具体的な方法はJoseph Sambrook、「Molecular Cloning:A Laboratory Manual」を参照することができる。本発明の1つの実施形態として、ヌクレオチド配列を段階的に合成してからサブクローンを行う方法により、本発明のコード核酸配列を構築する。
2)1)の核酸配列を適当な発現ベクターに挿入し、組換え発現ベクターを得る。
3)2)の組換え発現ベクターを適当な宿主細胞に導入する。
4)発現に適する条件で宿主細胞を培養してトランスフェクトする。
5)上清を収集し、融合タンパク質の産物を精製する。
本発明は、有効用量の(好ましくは約2〜10μg/kgである)の本発明の融合タンパク質、および医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物をさらに提供する。通常、有効量の本発明の融合タンパク質を無毒、不活性、医薬的に許容できる水性担体媒体に調製することができ、ここで、pHが通常約5〜8であり、好ましくは、pHが約6〜8である。「有効量」または「有効用量」という用語は、ヒトおよび/または動物に機能または活性を与え、或いはヒトおよび/または動物に受け入れられる量を意味する。「医薬的に許容できる」成分は、ヒトおよび/または哺乳動物に適用し、過度の好ましくない副反応(例えば、毒性、刺激およびアレルギー)がない、すなわち、合理的な利益/リスク比を有する物質である。「医薬的に許容できる担体」という用語は、各種の賦形剤および希釈剤を含む治療剤の投与に用いられる担体を意味する。
FVIIIリーダーペプチド、成熟タンパク質、可撓性ペプチドリンカー、CTP剛性単位、およびヒトIgG vFc変異体をコードする遺伝子配列は、全て手動で最適化されたCHO細胞によって好まれるコドンであり、人工合成により取得された。合成された融合タンパク質の全長DNA断片の5′端および3′端にそれぞれ1つの制限エンドヌクレアーゼの酵素切断部位を有し、それぞれSpeIおよびBamHIであり、全長DNA断片がpUC57転移ベクターの対応する酵素切断部位の間に挿入され、DNA配列決定によって配列を検証した。
実施例1で得られた8種の発現プラスミドを、30mlのフラスコにおいてDNAFect LT試薬TM(ATGCell社)を用いて3×107CHO−K1細胞にトランスフェクトし、トランスフェクトされた細胞は1000ng/mlのビタミンK1を含む無血清増殖培地中で5日間増殖させ、上清内の融合タンパク質の濃度を測定し、且つ、実施例6または7で説明した方法でその活性を測定した。ELISAの結果により、8種のプラスミドの該条件での一過性発現量は類似するが、それらの血液凝固活性は大きな差を示すことが示された。
上記FP−A、FP−B、FP−C、FP−DおよびFP−Eの発現プラスミドを哺乳動物の宿主細胞系にトランスフェクトし、FVIII融合タンパク質を発現した。安定した高レベルの発現を維持するために、好ましい宿主細胞はDHFR欠乏型のCHO細胞である(米国特許NO.4818679)。1つの好ましいトランスフェクト方法はエレクトロポレーションであり、リン酸カルシム共沈法、リポフェクション、およびマイクロインジェクション等を含む他の方法を使用してもよい。エレクトロポレーション方法は、300V電圧および1050μFdコンデンサに設置するGene Pulser Electroporator(Bio−RadLaboratories社)を使用し、キュベット内に配置された2〜3×107個の細胞に50μgのPvuIで線形化された発現プラスミドを添加し、エレクトロポレーション後の細胞を30mlの増殖培地を含むフラスコに転移した。2日間トランスフェクトした後、培地を0.6mg/mLのG418を含む増殖培地に変え、細胞を一定の濃度で96穴培養用プレートに植え付け、大きな離散細胞クローンが現れるまで10〜12日間培養した。抗ヒトIgG FcのELISA分析方法で、使用される医薬に耐性を有するトランスフェクタントをスクリーニングし、抗FVIIIのELISA分析方法で融合タンパク質発現の定量測定を行い、その後、限界希釈法によってサブクローンが高レベルの発現融合タンパク質の穴を生じてもよい。
実施例3で好ましく得られた高収率の細胞株を、まず、培養皿で無血清馴化培養を行い、その後、フラスコに移して浮遊馴化培養を行った。細胞がこれらの培養条件に適応した後、300mlのフラスコに供給流加培養を行い、または毎日培地を交換する方法により灌流培養を模擬した。実施例3でスクリーニングされた融合タンパク質FP−Bを生産するCHO由来の細胞株を、300ml体積のフラスコに14日間供給流加培養し、発現した組換え融合タンパク質の累積収量は200mg/Lに達し、生存細胞の密度は最大で15×106個/mLに達することができる。より多くの融合タンパク質を得るために、1000mlのフラスコを選択して培養してもよい。他の培養方法は、上記CHO由来の細胞株を100ml体積のフラスコに毎日培地を交換し、発現した組換え融合タンパク質の毎日の累積収量は約20mg/Lであり、フラスコにおける生存細胞の密度は最大で30×106個/mLに達することができる。以上の2種類の方法で生産された組換え融合タンパク質の測定された生物学的活性は相当である。
本発明は主に4ステップのクロマトグラフィーを採用して融合タンパク質FP−Bを精製した。それぞれがアフィニティークロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、および分子篩クロマトグラフィーである(本実施例に採用されるタンパク質精製装置は、米国GE社のAKTA pure 25Mである。本実施例に採用される試薬は、全て国薬集団化学試薬有限公司から購入され、純度は全て分析グレードである)。
FVIII融合タンパク質の活性は発色基質法で測定できる。本実施例はChromogenix Coatest SPFVIIIキット(Chromogenix、Ref.K824086)を用いて測定し、その検出原理は以下の通りである。トロンビンにより活性化されると、FVIIIaはリン脂質およびカルシウムイオンの存在下で、FIXaと結合して酵素複合体を形成し、続いて因子Xを活性化してその活性化形式Xaに変えることができる。活性化により形成された因子Xaはさらに、その特異的な発色基質(S−2765)を分解させ、発色団pNAを放出することができる。405nmで生成されたpNAの量を測定すると、その量に直接比例するFXaの活性の大きさを知ることができ、体系において因子IXaおよび因子Xの含有量が一定で過剰であるため、FXaの活性はFVIIIaの含有量のみに直接関連する。本法で測定されたFVIII融合タンパク質の比活性は約6000〜10000IU/mgであった。
凝固法でFVIIIの生物学的活性を測定することは、FVIII因子の血漿欠乏による凝固時間の延長する能力を訂正することにより取得される。ドイツのSiemens社のCoagulation Factor VIII Deficient Plasma(Cat.No.OTXW17)キットを用いてFVIII活性を検出する方法は以下の通りである。まず、力価が知られている中国食品薬品検定研究院のFVIII活性標準品を、5%のFVIII欠乏血漿で10IU/mlに希釈し、その後、それぞれ10倍、20倍、40倍および80倍希釈した。全自動血液凝固分析装置(CA500、SYSMEX社)で活性化部分トロンボプラスチン時間(APTT)を測定した。FVIII活性標準品溶液の力価(IU/ml)の対数がその対応する凝固時間(s)の対数に対応することで線形回帰し、FVIII標準品で検量線を作成した。その後、測定待ちのサンプルを適度に希釈した後、FVIII欠乏基質血漿と混合し、APTT測定を行った。検量線方程式に代入すると、測定待ちのサンプルFVIIIの力価を算出することができ、これにより、測定待ちのサンプルFVIIIの比活性の大きさを求めることができ、単位がIU/mgであった。本法で測定されたでFVIII融合タンパク質の比活性は約6000〜10000IU/mgであった。
VIII因子の遺伝子からホモを除去したHemAマウスの尾切断出血モデル(tailclip bleeding model)で、実施例5で調製された融合タンパク質FP−BのHemAマウス体内における止血活性を評価した。8〜12週齢の雄HemAマウス(上海南方模式生物責任有限公司から購入)を選択し、1週間馴化した後、マウスを体重に従ってランダムに6グループに分け、さらに1グループのHemAマウス陰性対照グループおよび1グループの正常C57マウスの対照グループを設置し、それぞれ1回尾静脈注射して異なる活性用量の融合タンパク質FP−Bまたは対象医薬である注射用組換えヒト血液凝固第VIII因子(Xyntha、ファイザー株式会社)を投与した。動物のグループ分け状況を表2に示す。
本発明の態様は以下も含む。
<1> N端からC端まで、ヒト血液凝固第VIII因子、可撓性ペプチドリンカー、少なくとも1つのヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットのカルボキシ末端ペプチド剛性単位、および半減期延長部分をこの順に含むヒト血液凝固第VIII因子の融合タンパク質であって、
該半減期延長部分は、ヒト免疫グロブリンFc断片、アルブミン、トランスフェリンまたはPEGから選ばれる、前記融合タンパク質。
<2> 前記融合タンパク質はグリコシル化されたものである、<1>に記載の融合タンパク質。
<3> 前記融合タンパク質は、哺乳動物細胞で発現されることによりグリコシル化される、<2>に記載の融合タンパク質。
<4> 前記融合タンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣細胞で発現されることによりグリコシル化される、<3>に記載の融合タンパク質。
<5> 前記ヒト血液凝固第VIII因子は、配列番号1に示すアミノ酸配列を含み、または前記ヒト血液凝固第VIII因子のアミノ酸配列は、配列番号1に示すアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有する、<1>に記載の融合タンパク質。
<6> 前記可撓性ペプチドリンカーは、2つまたは複数のG、S、AおよびT残基から選ばれるアミノ酸を含む、<1>に記載の融合タンパク質。
<7> 前記可撓性ペプチドリンカーは、(GS) a (GGS) b (GGGS) c (GGGGS) d 繰り返し単位を組み合わせて形成されたアミノ酸配列の一般式を有し、a、b、cおよびdは0以上の整数であり、且つa+b+c+d≧1である、<6>に記載の融合タンパク質。
<8> 好ましくは、前記可撓性ペプチドリンカーは、
(i)GSGGGSGGGGSGGGGSグループ、
(ii)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSグループ、
(iii)GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSグループ、
(iv)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSグループ、
(v)GGGSGGGSGGGSGGGSGGGSグループ
から選ばれる、<7>に記載の融合タンパク質。
<9> 前記ヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットのカルボキシ末端ペプチド剛性単位は、配列番号7に示すアミノ酸配列またはその短縮配列を含み、前記短縮配列は、少なくとも2つのグリコシル化部位を含む、<1>に記載の融合タンパク質。
<10> 前記ヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットのカルボキシ末端ペプチド剛性単位は、
(i)PRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ、
(ii)SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ、
(iii)SSSSKAPPPS、
(iv)SRLPGPSDTPILPQ
というアミノ酸配列を含む、<9>に記載の融合タンパク質。
<11> 前記ヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットのカルボキシ末端ペプチド剛性単位は、<9>または<10>に記載の剛性単位のアミノ酸配列と少なくとも70%、80%、90%または95%の同一性を有する、<1>に記載の融合タンパク質。
<12> 前記融合タンパク質は1つ、2つ、3つ、4つまたは5つのヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットのカルボキシ末端ペプチド剛性単位を含む、<1>に記載の融合タンパク質。
<13> 前記融合タンパク質の半減期延長部分は、ヒト免疫グロブリンFc変異体である、<1>に記載の融合タンパク質。
<14> 前記ヒト免疫グロブリンFc変異体は、低下したADCC効果および/またはCDC効果を有し、および/またはFcRn受容体との結合親和性が強化されている、<1>に記載の融合タンパク質。
<15> 前記Fc変異体は、
(i)Leu234Val、Leu235Ala、およびPro331Ser突然変異を含むヒトIgG1ヒンジ領域、CH2およびCH3領域、
(ii)Pro331Ser突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域、
(iii)Thr250GlnおよびMet428Leu突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域、
(iv)Pro331Ser、Thr250Gln、およびMet428Leu突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域、
(v)Ser228ProおよびLeu235Ala突然変異を含むヒトIgG4ヒンジ領域、CH2およびCH3領域
から選ばれる、<14>に記載の融合タンパク質。
<16> 前記融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号16に示すとおりである、<1>に記載の融合タンパク質。
<17> 前記融合タンパク質の活性が>6000IU/mgである、<1>〜<16>のいずれか1つに記載の融合タンパク質。
<18> <1>〜<17>のいずれか1つに記載の融合タンパク質をコードするDNA分子。
<19> 配列番号17に示す配列を含む、<18>に記載のDNA分子。
<20> <18>または<19>に記載のDNA分子を含む、ベクター。
<21> <20>に記載のベクターを含む、または<20>に記載のベクターがトランスフェクトされた、宿主細胞。
<22> 医薬的に許容できる担体、賦形剤または希釈剤、および有効用量の<1>〜<17>のいずれか1つに記載の融合タンパク質を含む、医薬組成物。
<23> (a)<18>または<19>に記載の融合タンパク質をコードするDNA配列をCHO細胞に導入し、CHO由来の細胞系を生成するステップと、
(b)ステップ(a)においてその増殖培地中で24時間ごとの発現が1IU/10 6 (百万)個の細胞を超えた高収率細胞株をスクリーニングするステップと、
(c)ステップ(b)でスクリーニングされた細胞株を培養し、融合タンパク質を発現させるステップと、
(d)ステップ(c)で得られた発酵液を回収し、融合タンパク質を分離して精製するステップと、
を含む、<1>〜<17>のいずれか1つに記載の融合タンパク質の調製方法。
<24> 前記ステップ(d)における融合タンパク質の精製プロセスは、アフィニティークロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、および分子篩クロマトグラフィーを含む、<23>に記載の方法。
<25> <1>〜<17>のいずれか1つに記載の融合タンパク質の、出血性疾患を予防または治療するための医薬の調製における使用。
<26> FVIII先天性または後天性欠乏症患者の出血性疾患の予防または治療、血友病A患者の自発的または手術出血の予防または治療のための医薬の調製における使用を含む、<25>に記載の使用。
Claims (21)
- N端からC端まで、ヒト血液凝固第VIII因子、可撓性ペプチドリンカー、少なくとも1つのヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットのカルボキシ末端ペプチド剛性単位、および半減期延長部分をこの順に含むヒト血液凝固第VIII因子の融合タンパク質であって、
該半減期延長部分は、ヒト免疫グロブリンFc断片、アルブミン、トランスフェリンまたはPEGから選ばれ、
前記可撓性ペプチドリンカーは、(GS) a (GGS) b (GGGS) c (GGGGS) d 繰り返し単位を組み合わせて形成されたアミノ酸配列の一般式を有し、a、b、cおよびdは0以上の整数であり、且つa+b+c+d≧1であり、
前記ヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットのカルボキシ末端ペプチド剛性単位は、下記(i)〜(iv)のいずれか1つのアミノ酸配列から選ばれる、融合タンパク質。
(i)PRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ
(ii)SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ
(iii)SSSSKAPPPS
(iv)SRLPGPSDTPILPQ - 前記融合タンパク質はグリコシル化されたものである、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、哺乳動物細胞で発現されることによりグリコシル化される、請求項2に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣細胞で発現されることによりグリコシル化される、請求項3に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒト血液凝固第VIII因子は、配列番号1に示すアミノ酸配列を含み、または前記ヒト血液凝固第VIII因子のアミノ酸配列は、配列番号1に示すアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有する、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記可撓性ペプチドリンカーは、
(i)GSGGGSGGGGSGGGGSグループ、
(ii)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSグループ、
(iii)GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSグループ、
(iv)GSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSグループ、
(v)GGGSGGGSGGGSGGGSGGGSグループ
から選ばれる、請求項1に記載の融合タンパク質。 - 前記融合タンパク質は1つ、2つ、3つ、4つまたは5つのヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットのカルボキシ末端ペプチド剛性単位を含む、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質の半減期延長部分は、ヒト免疫グロブリンFc変異体である、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記ヒト免疫グロブリンFc断片はヒト免疫グロブリンFc変異体であって、該ヒト免疫グロブリンFc変異体は、低下したADCC効果および/またはCDC効果を有し、および/またはFcRn受容体との結合親和性が強化されている、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記Fc変異体は、
(i)Leu234Val、Leu235Ala、およびPro331Ser突然変異を含むヒトIgG1ヒンジ領域、CH2およびCH3領域、
(ii)Pro331Ser突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域、
(iii)Thr250GlnおよびMet428Leu突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域、
(iv)Pro331Ser、Thr250Gln、およびMet428Leu突然変異を含むヒトIgG2ヒンジ領域、CH2およびCH3領域、
(v)Ser228ProおよびLeu235Ala突然変異を含むヒトIgG4ヒンジ領域、CH2およびCH3領域
から選ばれる、請求項9に記載の融合タンパク質。 - 前記融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号16に示すとおりである、請求項1に記載の融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質の活性が>6000IU/mgである、請求項1〜11のいずれか1項に記載の融合タンパク質。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載の融合タンパク質をコードするDNA分子。
- 配列番号17に示す配列を含む、請求項13に記載のDNA分子。
- 請求項13または14に記載のDNA分子を含む、ベクター。
- 請求項15に記載のベクターを含む、または請求項15に記載のベクターがトランスフェクトされた、宿主細胞。
- 医薬的に許容できる担体、賦形剤または希釈剤、および有効用量の請求項1〜12のいずれか1項に記載の融合タンパク質を含む、医薬組成物。
- (a)請求項13または14に記載の融合タンパク質をコードするDNA配列をCHO細胞に導入し、CHO由来の細胞系を生成するステップと、
(b)ステップ(a)においてその増殖培地中で24時間ごとの発現が1IU/106(百万)個の細胞を超えた高収率細胞株をスクリーニングするステップと、
(c)ステップ(b)でスクリーニングされた細胞株を培養し、融合タンパク質を発現させるステップと、
(d)ステップ(c)で得られた発酵液を回収し、融合タンパク質を分離して精製するステップと、
を含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の融合タンパク質の調製方法。 - 前記ステップ(d)における融合タンパク質の精製プロセスは、アフィニティークロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、および分子篩クロマトグラフィーを含む、請求項18に記載の方法。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載の融合タンパク質の、出血性疾患を予防または治療するための医薬の調製における使用。
- FVIII先天性または後天性欠乏症患者の出血性疾患の予防または治療、血友病A患者の自発的または手術出血の予防または治療のための医薬の調製における使用を含む、請求項20に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610692838.0 | 2016-08-19 | ||
CN201610692838.0A CN106279437B (zh) | 2016-08-19 | 2016-08-19 | 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途 |
PCT/CN2016/106010 WO2018032637A1 (zh) | 2016-08-19 | 2016-11-16 | 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019531087A JP2019531087A (ja) | 2019-10-31 |
JP6923115B2 true JP6923115B2 (ja) | 2021-08-18 |
Family
ID=57660580
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019530527A Active JP6923115B2 (ja) | 2016-08-19 | 2016-11-16 | 高グリコシル化ヒト血液凝固第viii因子の融合タンパク質、その調製方法、および使用 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11471513B2 (ja) |
JP (1) | JP6923115B2 (ja) |
KR (1) | KR102276157B1 (ja) |
CN (1) | CN106279437B (ja) |
BR (1) | BR112019003302A2 (ja) |
GB (1) | GB2568624B (ja) |
MX (1) | MX2019001925A (ja) |
RU (1) | RU2722374C1 (ja) |
WO (1) | WO2018032637A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106279437B (zh) | 2016-08-19 | 2017-10-31 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途 |
CN107759696A (zh) * | 2016-08-19 | 2018-03-06 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 人白介素7融合蛋白及其制备方法 |
US11123438B2 (en) | 2016-08-19 | 2021-09-21 | Ampsource Biopharma Shanghai Inc. | Linker peptide for constructing fusion protein |
CN106256835A (zh) * | 2016-08-19 | 2016-12-28 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 高糖基化人生长激素融合蛋白及其制备方法与用途 |
CN107337727A (zh) * | 2017-08-03 | 2017-11-10 | 国药集团武汉血液制品有限公司 | 一种血源性人凝血因子ⅷ制备方法 |
CN108191971B (zh) * | 2018-01-02 | 2022-02-22 | 汇海(苏州)生物技术有限公司 | 重组人金属硫蛋白Ⅲα片段纯品的制备方法 |
KR102575788B1 (ko) * | 2018-05-18 | 2023-09-08 | 정저우 젠사이언시스 인코포레이티드 | 개선된 fviii 융합 단백질 및 이의 용도 |
WO2019219048A1 (zh) * | 2018-05-18 | 2019-11-21 | 北京辅仁瑞辉生物医药研究院有限公司 | 具有延长半衰期的融合多肽缀合物 |
CN113105562B (zh) * | 2018-09-26 | 2023-12-01 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 突变型单链人凝血因子viii在制备融合蛋白中的应用 |
CN112138149A (zh) * | 2019-06-28 | 2020-12-29 | 北京基科晟斯医药科技有限公司 | 重组凝血因子viii制剂 |
CN113461827A (zh) * | 2020-03-31 | 2021-10-01 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 高效分离纯化重组人凝血因子VIII Fc融合蛋白的方法 |
WO2023227015A1 (zh) * | 2022-05-25 | 2023-11-30 | 江苏晟斯生物制药有限公司 | 具有延长的半衰期的fviii融合蛋白缀合物及其应用 |
CN116036244B (zh) * | 2023-02-24 | 2023-09-19 | 北京基科晟斯医药科技有限公司 | 培重组人凝血因子VIII-Fc融合蛋白用于治疗含抑制物的血友病A的用途 |
Family Cites Families (99)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4399216A (en) | 1980-02-25 | 1983-08-16 | The Trustees Of Columbia University | Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials |
US4818679A (en) | 1985-02-19 | 1989-04-04 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for recovering mutant cells |
US6225449B1 (en) | 1991-10-04 | 2001-05-01 | Washington University | Hormone analogs with multiple CTP extensions |
US6103501A (en) * | 1997-11-17 | 2000-08-15 | Washington University | Single chain glycoprotein hormones comprising two β and one α subunits and recombinant production thereof |
US6660843B1 (en) | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
WO2001032678A1 (en) | 1999-11-05 | 2001-05-10 | Smithkline Beecham Corporation | sbgFGF-19a |
US20040259780A1 (en) | 2001-07-30 | 2004-12-23 | Glasebrook Andrew Lawrence | Method for treating diabetes and obesity |
EP1329227A1 (en) | 2002-01-22 | 2003-07-23 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Diagnostic conjugate useful for intercellular imaging and for differentiating between tumor- and non-tumor cells |
US7081446B2 (en) | 2002-01-31 | 2006-07-25 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Long-acting follicle stimulating hormone analogues and uses thereof |
US20050176108A1 (en) | 2003-03-13 | 2005-08-11 | Young-Min Kim | Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life |
DK2298347T3 (en) | 2003-05-06 | 2016-01-11 | Biogen Hemophilia Inc | COAGULATION FACTOR CHEMICAL PROTEINS FOR TREATING A HEMOSTATIC DISORDER |
ES2298785T3 (es) | 2003-06-12 | 2008-05-16 | Eli Lilly And Company | Proteinas de fusion. |
SI1641823T1 (sl) | 2003-06-12 | 2011-12-30 | Lilly Co Eli | Fuzijski proteini analogni glp-1 |
CN1889937B (zh) | 2003-12-03 | 2011-02-09 | 诺和诺德公司 | 糖基聚乙二醇化的因子ⅸ肽 |
US20050250185A1 (en) | 2003-12-12 | 2005-11-10 | Murphy Andrew J | OGH fusion polypeptides and therapeutic uses thereof |
WO2005058953A2 (en) | 2003-12-12 | 2005-06-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Ogh fusion polypeptides and therapeutic uses thereof |
CA2557782A1 (en) | 2004-03-17 | 2005-10-06 | Eli Lilly And Company | Glycol linked fgf-21 compounds |
SI1751184T1 (sl) | 2004-05-13 | 2010-01-29 | Lilly Co Eli | Fgf-21 fuzijski proteini |
DE602005016946D1 (de) | 2004-09-02 | 2009-11-12 | Lilly Co Eli | Muteine des fibroblasten-wachstumsfaktors 21 |
EP1789443A1 (en) | 2004-09-02 | 2007-05-30 | Eli Lilly And Company | Muteins of fibroblast growth factor 21 |
US20090043080A1 (en) | 2004-09-29 | 2009-02-12 | Novo Nordisk Healthcare A/G | Purification of a Bulk of a Factor VII Polypeptide by Fractionated Elution from an Anion-Exchange Material |
WO2006050247A2 (en) | 2004-10-29 | 2006-05-11 | Neose Technologies, Inc. | Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf) |
DK1817340T3 (da) | 2004-11-12 | 2012-08-13 | Xencor Inc | Fc-varianter med ændret binding til fcrn |
EP1811930B1 (en) | 2004-11-19 | 2011-07-20 | Pod I.P. Pty Ltd | Movable joint having up to six degrees of freedom |
WO2006065582A2 (en) | 2004-12-14 | 2006-06-22 | Eli Lilly And Company | Muteins of fibroblast growth factor 21 |
EP1874928A1 (en) | 2005-04-13 | 2008-01-09 | AstraZeneca AB | A host cell comprising a vector for production of proteins requiring gamma-carboxylation |
ES2398574T3 (es) | 2005-07-22 | 2013-03-20 | Bayer Healthcare Llc | Activación en solución de factor VII |
US8304386B2 (en) | 2006-02-03 | 2012-11-06 | Prolor Biotech, Inc. | Long-acting growth hormone and methods of producing same |
US8048849B2 (en) | 2006-02-03 | 2011-11-01 | Modigene, Inc. | Long-acting polypeptides and methods of producing same |
US8476234B2 (en) * | 2006-02-03 | 2013-07-02 | Prolor Biotech Inc. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
EP1816201A1 (en) | 2006-02-06 | 2007-08-08 | CSL Behring GmbH | Modified coagulation factor VIIa with extended half-life |
KR101476472B1 (ko) | 2007-03-30 | 2015-01-05 | 암브룩스, 인코포레이티드 | 변형된 fgf-21 폴리펩티드 및 그 용도 |
ES2532461T3 (es) | 2007-12-26 | 2015-03-27 | Xencor, Inc. | Variantes de FC con enlazamiento alterado a FCRN |
US8420088B2 (en) | 2008-01-28 | 2013-04-16 | Novartis Ag | Methods and compositions using FGF23 fusion polypeptides |
JOP20190083A1 (ar) | 2008-06-04 | 2017-06-16 | Amgen Inc | بولي ببتيدات اندماجية طافرة لـfgf21 واستخداماتها |
US9279013B2 (en) | 2008-10-10 | 2016-03-08 | Amgen Inc. | FGF-21 mutants comprising polyethylene glycol and uses thereof |
US9480753B2 (en) | 2009-01-23 | 2016-11-01 | Novo Nordisk A/S | FGF21 derivatives with albumin binder A-B-C-D-E- and their use |
CN107188950B (zh) | 2009-05-05 | 2021-09-28 | 安姆根有限公司 | Fgf21突变体及其用途 |
US20120052069A1 (en) | 2009-05-05 | 2012-03-01 | Amgen Inc | Fgf21 mutants and uses thereof |
CN102802657A (zh) | 2009-06-11 | 2012-11-28 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 用于治疗2型糖尿病的glp-1和fgf21组合 |
WO2011069164A2 (en) * | 2009-12-06 | 2011-06-09 | Biogen Idec Ma Inc. | Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof |
UA109888C2 (uk) | 2009-12-07 | 2015-10-26 | ІЗОЛЬОВАНЕ АНТИТІЛО АБО ЙОГО ФРАГМЕНТ, ЩО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З β-КЛОТО, РЕЦЕПТОРАМИ FGF І ЇХНІМИ КОМПЛЕКСАМИ | |
CN105153313A (zh) * | 2010-02-16 | 2015-12-16 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | 因子viii融合蛋白 |
EP2558497A2 (en) | 2010-04-15 | 2013-02-20 | Amgen Inc. | Human fgf receptor and beta-klotho binding proteins |
EP2591006B1 (en) * | 2010-07-09 | 2019-04-24 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Processable single chain molecules and polypeptides made using same |
EP3508573A1 (en) * | 2010-07-09 | 2019-07-10 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Systems for factor viii processing and methods thereof |
KR20230156435A (ko) | 2010-07-09 | 2023-11-14 | 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. | 인자 ix 폴리펩티드 및 이들의 사용 방법 |
WO2012010553A1 (en) | 2010-07-20 | 2012-01-26 | Novo Nordisk A/S | N-terminal modified fgf21 compounds |
US9023791B2 (en) | 2010-11-19 | 2015-05-05 | Novartis Ag | Fibroblast growth factor 21 mutations |
AR090017A1 (es) | 2011-05-16 | 2014-10-15 | Genentech Inc | Agonistas de fgfr1 y sus metodos de uso |
US9574002B2 (en) | 2011-06-06 | 2017-02-21 | Amgen Inc. | Human antigen binding proteins that bind to a complex comprising β-Klotho and an FGF receptor |
WO2012170969A2 (en) * | 2011-06-10 | 2012-12-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Pro-coagulant compounds and methods of use thereof |
EP2537864B1 (en) | 2011-06-24 | 2019-08-07 | Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies | Fc variants with reduced effector functions |
SG10201806648TA (en) | 2011-07-01 | 2018-09-27 | Ngm Biopharmaceuticals Inc | Compositions, uses and methods for treatment of metabolic disorders and diseases |
MY180714A (en) * | 2011-07-08 | 2020-12-07 | Bioverativ Therapeutics Inc | Factor viii chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof |
EA028914B1 (ru) * | 2011-07-25 | 2018-01-31 | Байоджен Хемофилия Инк. | Исследования для мониторинга нарушений свертываемости крови |
UY34346A (es) | 2011-09-26 | 2013-04-30 | Novartis Ag | Proteínas de fusión para tratar trastornos metabólicos |
TW201315742A (zh) | 2011-09-26 | 2013-04-16 | Novartis Ag | 治療代謝病症之雙功能蛋白質 |
CN104114183A (zh) | 2011-12-20 | 2014-10-22 | 印第安纳大学研究及科技有限公司 | 用于治疗糖尿病的基于ctp的胰岛素类似物 |
KR102041412B1 (ko) | 2011-12-30 | 2019-11-11 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 Fc 단편 유도체 |
CA2863329C (en) * | 2012-01-12 | 2023-01-03 | Biogen Idec Ma Inc. | Methods of reducing immunogenicity against factor viii in individuals undergoing factor viii therapy |
KR102310704B1 (ko) | 2012-02-14 | 2021-10-08 | 옵코 바이오로직스 리미티드 | 장기 작용 응고 인자들 및 이를 생산하는 방법들 |
KR20190094480A (ko) * | 2012-02-15 | 2019-08-13 | 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. | 재조합 인자 viii 단백질 |
WO2013152351A2 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Fusion polypeptides and methods of use thereof |
AU2013270683A1 (en) * | 2012-06-08 | 2014-12-11 | Biogen Ma Inc. | Chimeric clotting factors |
EP2858659B1 (en) | 2012-06-08 | 2019-12-25 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Procoagulant compounds |
TWI513705B (zh) | 2012-06-11 | 2015-12-21 | Lilly Co Eli | 纖維母細胞生長因子21蛋白質 |
EP3404105A1 (en) * | 2012-07-06 | 2018-11-21 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Cell line expressing single chain factor viii polypeptides and uses thereof |
PT2882450T (pt) * | 2012-07-11 | 2020-02-19 | Bioverativ Therapeutics Inc | Complexo de fator viii com xten e a proteína fator de von willebrand, e utilizações do mesmo |
EP3970738A1 (en) * | 2012-07-25 | 2022-03-23 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Blood factor monitoring assay and uses thereof |
EP2882457A1 (en) | 2012-08-13 | 2015-06-17 | Novo Nordisk A/S | Liquid factor viii formulations |
SG11201500682WA (en) | 2012-09-07 | 2015-02-27 | Sanofi Sa | Fusion proteins for treating a metabolic syndrome |
TWI810729B (zh) | 2012-09-25 | 2023-08-01 | 美商百歐維拉提夫治療公司 | Fix多肽的應用 |
AU2013331000B2 (en) * | 2012-10-18 | 2018-04-19 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Methods of using a fixed dose of a clotting factor |
BR122020018510B1 (pt) * | 2012-11-20 | 2023-03-14 | Opko Biologics Ltd | Método para aumentar incrementalmente o tamanho hidrodinâmico de um fator de coagulação ativado viia |
EP2938637A2 (en) | 2012-12-28 | 2015-11-04 | AbbVie Inc. | Multivalent binding protein compositions |
HUE047933T2 (hu) * | 2013-03-15 | 2020-05-28 | Bioverativ Therapeutics Inc | Faktor VIII polipeptid készítmények |
TW201536811A (zh) | 2013-05-31 | 2015-10-01 | Biogen Idec Inc | 嵌合fvii-xten分子及其用途 |
EP4108254A1 (en) * | 2013-08-14 | 2022-12-28 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Recombinant factor viii proteins |
CN103397009B (zh) | 2013-08-16 | 2015-06-03 | 安源生物科技(上海)有限公司 | 改良型人凝血因子FVII-Fc融合蛋白及其制备方法与用途 |
CN103539869B (zh) | 2013-10-11 | 2015-11-18 | 浙江凯胜畜产品加工有限公司 | 一种提高粗肝素钠提取工艺酶解效率的方法 |
CN103539861B (zh) | 2013-11-01 | 2015-02-18 | 广州联康生物科技有限公司 | 长效重组人促卵泡激素融合蛋白 |
CN103539860B (zh) | 2013-11-01 | 2014-12-03 | 广州优联康医药科技有限公司 | 一种长效重组人促卵泡激素融合蛋白 |
CN103539868B (zh) | 2013-11-01 | 2016-05-04 | 上海春露生物化学有限公司 | 一种制备羧甲基壳聚糖的方法 |
CN103539862B (zh) | 2013-11-01 | 2015-04-01 | 广州联康生物科技有限公司 | 一种长效重组促卵泡激素及其应用 |
CN103897064B (zh) | 2013-11-29 | 2016-05-11 | 广州优联康医药科技有限公司 | 长效重组人绒促性素融合蛋白 |
CN104693270B (zh) * | 2013-12-10 | 2018-10-16 | 清华大学 | 一种用于融合蛋白的连接肽 |
CA2956412A1 (en) * | 2014-08-04 | 2016-02-11 | Csl Limited | Factor viii formulation |
CN104292341B (zh) * | 2014-10-11 | 2018-08-10 | 上海兴迪金生物技术有限公司 | 一种凝血八因子融合蛋白及其制备方法和用途 |
CN105753945B (zh) | 2014-12-15 | 2019-04-09 | 清华大学无锡应用技术研究院 | 一种连接肽及其应用 |
KR20160088656A (ko) | 2015-01-16 | 2016-07-26 | 주식회사유한양행 | 지속형 fgf21 융합 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
KR20170049320A (ko) | 2015-10-28 | 2017-05-10 | 주식회사유한양행 | 이중 작용 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
CN107759696A (zh) | 2016-08-19 | 2018-03-06 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 人白介素7融合蛋白及其制备方法 |
CN106256835A (zh) | 2016-08-19 | 2016-12-28 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 高糖基化人生长激素融合蛋白及其制备方法与用途 |
CN106279437B (zh) | 2016-08-19 | 2017-10-31 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途 |
US11123438B2 (en) | 2016-08-19 | 2021-09-21 | Ampsource Biopharma Shanghai Inc. | Linker peptide for constructing fusion protein |
CN106279436B (zh) | 2016-08-19 | 2017-10-31 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 活化的人凝血因子vii融合蛋白及其制备方法与用途 |
CN106117370B (zh) | 2016-08-19 | 2017-05-17 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 高糖基化Exendin‑4及其类似物的融合蛋白、其制备方法和用途 |
CN110028587B (zh) | 2018-01-11 | 2021-10-08 | 安源医药科技(上海)有限公司 | 用于调节血糖和脂质的增效型双功能蛋白 |
-
2016
- 2016-08-19 CN CN201610692838.0A patent/CN106279437B/zh active Active
- 2016-11-16 GB GB1903581.5A patent/GB2568624B/en active Active
- 2016-11-16 RU RU2019106765A patent/RU2722374C1/ru active
- 2016-11-16 US US16/479,494 patent/US11471513B2/en active Active
- 2016-11-16 MX MX2019001925A patent/MX2019001925A/es unknown
- 2016-11-16 BR BR112019003302A patent/BR112019003302A2/pt active Search and Examination
- 2016-11-16 JP JP2019530527A patent/JP6923115B2/ja active Active
- 2016-11-16 KR KR1020197007918A patent/KR102276157B1/ko active IP Right Grant
- 2016-11-16 WO PCT/CN2016/106010 patent/WO2018032637A1/zh active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20190042629A (ko) | 2019-04-24 |
BR112019003302A2 (pt) | 2019-10-15 |
US11471513B2 (en) | 2022-10-18 |
US20190365867A1 (en) | 2019-12-05 |
MX2019001925A (es) | 2019-10-02 |
JP2019531087A (ja) | 2019-10-31 |
CN106279437B (zh) | 2017-10-31 |
GB201903581D0 (en) | 2019-05-01 |
CN106279437A (zh) | 2017-01-04 |
WO2018032637A1 (zh) | 2018-02-22 |
GB2568624B (en) | 2022-05-25 |
KR102276157B1 (ko) | 2021-07-13 |
RU2722374C1 (ru) | 2020-05-29 |
GB2568624A (en) | 2019-05-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6923115B2 (ja) | 高グリコシル化ヒト血液凝固第viii因子の融合タンパク質、その調製方法、および使用 | |
US11472863B2 (en) | Human coagulation factor IX (FIX) fusion protein, preparation method therefor, and use thereof | |
US10954294B2 (en) | Correctly folded etanercept in high purity and excellent yield | |
EP2504360B1 (en) | Monomeric antibody fc | |
TWI526220B (zh) | Fgf21突變體及其用途 | |
TW200415241A (en) | Fc fusion proteins of human erythropoietin with high biological activities | |
CN110950964B (zh) | 突变型单链人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途 | |
CN103739712A (zh) | 具有延长的体内半衰期的因子viii,冯·维勒布兰德因子或它们的复合物 | |
WO2018032639A1 (zh) | 活化的人凝血因子vii融合蛋白及其制备方法与用途 | |
CN102690354B (zh) | 重组二聚化抗凝血酶III-Fc融合蛋白及其哺乳动物细胞高效表达系统 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190315 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200331 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200611 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201201 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210225 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210629 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210713 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6923115 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |