JP6744425B2

JP6744425B2 - キツネノマゴ抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物

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Publication number: JP6744425B2
Application number: JP2018553180A
Authority: JP
Inventors: ジュビョンユン; ヒョンヨンリ; ジヒョンヨン; グァン‐ヒョンキム; ジヒョンチョン; ファンボンチョン; ジヨンウー; ミヒユン; ミンスチェ; トンラクチェ
Original assignee: トンファファームカンパニーリミテッド
Priority date: 2016-04-15
Filing date: 2017-04-13
Publication date: 2020-08-19
Anticipated expiration: 2037-04-13
Also published as: AU2017251303B2; EP3443972A4; CA3020822C; KR20180107041A; CN109328066A; US10869904B2; CA3020822A1; KR20170118613A; EP3443972A1; ZA201807306B; JP2019511521A; US20190134126A1; KR101901828B1; KR102006738B1; AU2017251303A1; WO2017179931A1

Description

本発明は、キツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を有効成分として含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物、及び前記抽出物を有効成分として含む、呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物に関する。

呼吸器官は、肺と気道、呼吸筋から構成されており、気道は、鼻や口から始まり、肺までつながっている空気の通り道であって、鼻や口から咽頭（ｐｈａｒｙｎｘ）までの上気道と、喉頭（ｌａｒｙｎｘ）、気管（ｔｒａｃｈｅａ）、気管支（ｂｒｏｎｃｈｕｓ）までの下気道と構成されている。呼吸器疾患とは、主に肺及び気道に関連する疾患のことをいい、種類に応じて、風邪及び肺炎、気管支炎、喘息、鼻炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣｈｒｏｎｉｃＯｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅＰｕｌｍｏｎａｒｙＤｉｓｅａｓｅ、ＣＯＰＤ）などを含む。
代表的な呼吸器疾患の一つである喘息は、肺の中の気管支に起こる炎症作用及び気道が狭くなる病理学的特徴を有する疾患であり、呼吸困難及び咳、喘鳴等の症状が現れる。喘息は、その発症原因に応じて、アレルゲンによる免疫過敏反応に起因するアレルギー性喘息（ａｌｌｅｒｇｉｃａｓｔｈｍａ）、特定の薬物によって引き起こされるアスピリン喘息（ａｓｐｉｒｉｎａｓｔｈｍａ）、運動によって引き起こされる運動誘発喘息（ｅｘｅｒｃｉｓｅ−ｉｎｄｕｃｅｄａｓｔｈｍａ）、細菌及びウイルス感染、肥満などを伴う喘息など、様々な誘発原因によって発症される異種疾患（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｏｕｓｅｄｉｓｅａｓｅ）である。アレルギー性喘息の炎症作用は、一般的な炎症作用とは異なり、主にＴヘルパー２（Ｔｈｅｌｐｅｒ２、Ｔｈ２）細胞が過度に活性化されて起こるアレルギー性炎症であり、Ｔヘルパー２細胞から由来したインターロイキン−４、−５（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｅ−４、−５；ＩＬ−４、ＩＬ−５）、免疫グロブリンＥ（ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＥ；ＩｇＥ）、好酸球（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ）、ヒスタミン（Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ）などが関与することが知られている。非アレルギー性喘息及び一部の悪性喘息（ｓｅｖｅｒｅａｓｔｈｍａ）は好酸球ではなく、好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ）の増加を特徴とし、Ｔｈ１７細胞及びインターロイキン−８（Ｉｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｅ−８）、インターフェロン−ガンマ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ、ＩＦＮ−γ）などが増加する特徴を持っている（Ｐｅｌａｉａ，Ｇ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｍｅｄｉａｔｏｒｓｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１５，２０１５）。
気道が狭くなる代表的な理由としては、炎症により刺激された気管支粘膜から過度に分泌された粘液（Ｍｕｃｕｓ）が気道を防ぐ場合、気管支粘膜が腫れた場合、平滑筋の収縮作用により気道が狭くなる場合等などがある。
一方、呼吸器疾患のうち、他の一つである慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、主に喫煙のように有害粒子やガスの吸入により肺に炎症反応が起こり、これにより不可逆的に気道が閉塞されて肺機能が徐々に低下する疾患であって、肺気腫（Ｅｍｐｈｙｓｅｍａ）と慢性気管支炎（Ｃｈｒｏｎｉｃｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ）を総称して慢性閉塞性肺疾患と言う。喘息と同様に呼吸困難、咳、痰などの症状が現れるが、喘息は一時的に気流閉鎖によるものであり、可逆的に回復できる一方で、慢性閉塞性肺疾患は肺機能が回復できない不可逆的な特徴を有する。
前記した呼吸器疾患の治療剤は、主に抗炎症作用をする調節剤（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒ）と気道拡張作用をする緩和剤（Ｒｅｌｉｅｖｅｒ）とに分類される。代表的な調節剤であるグルココルチコイドステロイド剤（Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓｔｅｒｏｉｄｄｒｕｇ）は、抗炎症効果に優れた反面、成長の遅れや骨粗しょう症などの深刻な副作用を引き起こすため局所に適用される吸入型製剤であって、使用が制限されている。一方、代表的な緩和剤であるベータ２−アゴニスト（ｂ２−ａｇｏｎｉｓｔ）は、気道拡張効果に優れた反面、抗炎症効果がないことから、これらの薬物のみを長期間服用すると、むしろ喘息が悪化するという報告があり、これらの薬物もまた吸入型製剤である。吸入型製剤は、薬効が迅速に現れるという利点はあるが服薬が不便で、特に高齢者や子供たちには半分以上服薬が正常に行われないという報告がある。
服薬コンプライアンスの高い経口型製剤のうちの代表的な調節剤としては、ロイコトリエン受容体拮抗剤（ＬｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅＲｅｃｅｐｔｏｒＡｎｔａｇｏｎｉｓｔ）があり、緩和剤としては、テオフィリン（Ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）等がある。ロイコトリエン受容体拮抗剤は、比較的安全で服薬が便利であるという利点はあるが、比較的弱い薬効のため、その使用は吸入型薬物のための補助療法に限定されている。テオフィリンは、非特異的なアデノシン受容体拮抗薬（ＡｄｅｎｏｓｉｎｅＲｅｃｅｐｔｏｒＡｎｔａｇｏｎｉｓｔ）でありながら非特異的なホスホジエステラーゼ抑制剤（Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）である。これらのターゲットは、抗炎症作用及び気道拡張作用が知られているが、非特異的な抑制のために心血管関連の副作用があり、キサンチン（Ｘａｎｔｈｉｎｅ）系の化合物の特性上、他の薬剤との相互作用などが多いため、その使用に制限がある。前記アデノシン受容体は、全４種類（Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、Ａ３）が存在するが、心血管関連の副作用は、Ａ２Ａのため惹起されることが知られており、Ａ１、Ａ２Ｂ、Ａ３では、拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）が気道拡張作用及び抗炎症効果を奏するのに対し、Ａ２Ａでは、アゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）が気道拡張作用及び抗炎症効果があることが知られている。したがって、アデノシン受容体を非特異的に抑制するテオフィリンを代替してＡ２ＢまたはＡ３にのみ選択的に抑制する薬物に対する研究が活発に行われているが、まだ商業化されていない（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｃ．Ｎ．Ｂｒｉｔｉｓｈｊｏｕｒｎａｌｏｆｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１５５（４），４７５−４８６，２００８）。
一方、ホスホジエステラーゼ−４（ＰＤＥ４）を抑制する場合にも、抗炎症作用及び気道拡張効果があることが知られており、ＰＤＥ４選択的抑制剤であるロフルミラスト（ｒｏｆｌｕｍｉｌａｓｔ）（ブランド名：Ｄａｘａｓ）は、現在、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）重症度治療剤として承認を受けて世界的に使用されている。
しかし、現在、喘息のような呼吸器疾患に使用できる経口用治療剤は、非常に限定的であるため、安全性が確保されて効能が改善された経口用薬剤の開発が求められており、抗炎症効果及び気道拡張効果を同時に満足できるレベルまで奏するためには、多重成分／多重機序の特徴を有する生薬抽出物が、呼吸器疾患の治療において適切な素材と言うことができる。
キツネノマゴ科（Ａｃａｎｔｈａｃｅａｅ）のキツネノマゴ属（Ｊｕｓｔｉｃｉａｇｅｎｕｓ）は、約６００個の種からなっている。代表的なキツネノマゴ属の植物としては、ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．，Ｊｕｓｔｉｃｉａｐｅｃｔｏｒａｌｉｓ，Ｊｕｓｔｉｃｉａｇｅｎｄａｒｕｓｓａ，Ｊｕｓｔｉｃｉａａｎｓｅｌｌｉａｎａ，及びＪｕｓｔｉｃｉａａｄｈａｔｏｄａなど等があり、キツネノマゴ属の植物は、抗ウイルス効果をはじめとする様々な生理学的活性があることが知られているが、それぞれの生理学的活性を示す活性成分についての研究はまだ十分に行われていない。このうちキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）は、一年草であって、大韓民国、日本、中国、インド等に分布する。キツネノマゴの薬理学的活性においては、全草のメタノール抽出物の場合、ウサギの血小板凝集及び癌細胞の増殖を抑制させる作用が知られており、地上部（Ａｅｒｉａｌｐａｒｔ）のメタノール抽出物の場合、水疱性口内炎ウイルス（ｖｅｓｉｃｕｌａｒｓｔｏｍａｔｉｔｉｓｖｉｒｕｓ）の抑制効果が知られている。しかし、キツネノマゴの呼吸器疾患の治療効果についてはまだ知られていない。

本発明の目的は、キツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を有効成分として含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物、及び呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供することである。
また、本発明の目的は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物、及び呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供することである。
また、本発明の目的は、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）と、及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物、及び呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供することである。
また、本発明の目的は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）と、及びジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物、及び呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供することである。
また、本発明の目的は、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物、及び呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供することである。
また、本発明の目的は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物、及び呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供することである。
また、本発明の目的は、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物、及び呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供することである。

前記目的を達成するために、本発明は、キツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．＝Ｒｏｓｔｅｌｌｕｌａｒｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ（Ｌ．）Ｎｅｅｓ）アルコールまたは有機溶媒抽出物を有効成分として含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物を提供する。
本発明のキツネノマゴは、ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．を学名とする一年草である。キツネノマゴの高さは３０ｃｍ程度であり、葉は対生し、卵形であり、長さは２〜４ｃｍ、幅は１〜２ｃｍであり、両端が尖っており、葉のまわりは滑らかでありまたはギザギザしている。花は、薄い赤紫であり、７〜９月に咲き、実る時期は９〜１０月である。キツネノマゴの全草は、秋に採取し、干してから使い、清熱、解毒、利湿、活血、止痛の効能があり、細菌性下痢、黄疸、腎炎性浮腫、筋骨疼痛、打撲傷等に用いられるという報告がある。
本発明のキツネノマゴは、自然の中で自生したもの、購入したもの、栽培したものがいずれも制限なく使用でき、その全草、地上部、葉、根、茎、花、種子などの全ての部位が制限なく含まれるが、好ましくは、その全草、地上部、または葉及び花が使用される。
本発明において「抽出物」とは、キツネノマゴから分離して得られた物質のことを意味し、具体的には、アルコールまたは有機溶媒抽出物を含むことができ、好ましくは、アルコールまたは有機溶媒抽出物、粗抽出物またはその濃縮物であり得る。前記アルコール、炭素数１〜４の低級アルコールであってもよく、前記有機溶媒は、ヘキサン、酢酸エチル、ジクロロメタン、エーテル、クロロホルム及びアセトンからなる群より選択される１種以上であってもよい。前記炭素数１〜４の低級アルコールは、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール及びｎ−ブタノールからなる群より選択される１種以上であることが好ましく、最も好ましくはエタノールであってもよい。また、炭素数１〜４の低級アルコールは、無水または含水アルコールを含むことができる。前記アルコールは、例えば、好ましくは、エタノールは、１〜１００％（ｖ／ｖ％）、好ましくは３０〜１００％、または５０％〜１００％、より好ましくは７０〜１００％、さらにより好ましくは３０％、５０％、７０％、または１００％エタノールであってもよい。
本発明の抽出物は、上述した抽出溶媒による抽出物だけでなく、通常の精製過程を経た抽出物をも制限なく含むことができる。例えば、所定の分子量カット−オフ値を持つ限外ろ過膜を用いた分離、多様なクロマトグラフィー（サイズ、電荷、疎水性または親和性による分離のために製作されたもの）による分離など、追加実施された様々な精製方法により得られた分画物も、本発明の抽出物に含まれる。
また、本発明の抽出物は、減圧蒸留及び凍結乾燥または噴霧乾燥などの追加のプロセスによって粉末状態でも製造することができる。
本発明のキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、下記の工程を通じて製造されるが、これに限定されない。
１）キツネノマゴを陰干しして粉砕する段階；
２）粉砕されたキツネノマゴを抽出して抽出物を得る段階；
３）抽出物をろ過した後、減圧濃縮する段階。
前記１）段階に用いられるキツネノマゴは自然の中で自生したもの、直接栽培したものまたは市販されるものを制限なく用いることができる。
前記２）段階の抽出は、浸漬（冷浸、温浸）抽出、熱水抽出、超音波抽出または還流冷却抽出法を制限なく用いることができるが、浸漬抽出、超音波抽出、還流抽出法を用いることが望ましい。
前記抽出の抽出温度は１５〜１００℃、好ましくは１５〜８０℃であってもよく、抽出時間は１時間〜７２時間、好ましくは２時間〜４８時間であってもよい。また、本発明の抽出物は、抽出効率により、前記抽出回数を限定しないが、抽出回数は１〜５、好ましくは２または３回であってもよい。
このように得られたキツネノマゴ粗抽出物は、医薬品の原料として好適に用いられるように、残存する低級アルコール及び有機溶媒を除去するために減圧乾燥、噴霧乾燥、または凍結乾燥等の通常の乾燥方法を用いて粉末状態に製造することができる。
本発明のキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、脾臓細胞の異常な過増殖を抑制し、炎症性サイトカインの分泌を抑制することができ、喀痰排出効果及び気道収縮抑制効果を示すので、呼吸器疾患を効果的に予防、治療または改善することができる。
本発明において、前記呼吸器疾患は、各種の誘発原因によって引き起こされる様々な疾患を制限なく含むことができ、好ましくは、風邪及び肺炎、気管支炎、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患からなる群より選ばれた１種以上であり得る。具体的には、前記喘息はアレルギー性喘息または非アレルギー性喘息であり得る。
本発明において、予防は、前記キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物を含む組成物の投与により呼吸器疾患を抑制または遅延させる全ての行為を意味し、本発明において、治療は、前記キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物を含む組成物の投与により疾患の症状が好転したり、有利に変更されたりするすべての行為を意味する。
また、本発明の前記キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上を含むことを特徴とする。
したがって、本発明は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）またはこれらの混合物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）と、及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）と、及びジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物を提供する。
前記ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）は、キツネノマゴの抽出物において呼吸器疾患に対する予防、改善、及び治療効果を示す活性物質である。キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、これらの活性物質を個別にまたは組み合わせて１種以上、好ましくはジュスチシジンＢを必須に含み、選択的に残りの３つの化合物（ジュスチシジンＡ、ジュスチシジンＣ、及びフィラミリシンＣ）のうち１種以上を含むか、またはジュスチシジンＡを必須に含み、選択的に残りの３つの化合物（ジュスチシジンＢ、ジュスチシジンＣ、及びフィラミリシンＣ）のうち１種以上を含むことにより、優れた呼吸器疾患の予防、改善及び治療効果を奏する。
本発明において、前記ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）は、キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物から分離されたことを特徴とし、具体的な構造は、図１に構造式で示されている。（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ１：ジュスチシジンＢ、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２：ジュスチシジンＡ、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ３：ジュスチシジンＣ、Ｃｏｍｐｏｕｕｎｄ４：フィラミリシンＣ）
具体的な一製造例において、キツネノマゴエタノール抽出物からジュスチシジンＡ、ジュスチシジンＢ、ジュスチシジンＣ及びフィラミリシンＣを分離し、具体的な一実施例において、キツネノマゴメタノール、イソプロパンアルコール、及びエタノール抽出物から前記４つの化合物の存在を確認し、一方、キツネノマゴ水抽出物からは前記４つの化合物が検出されないことを確認した。
本発明のジュスチシジンＡ、ジュスチシジンＢ、ジュスチシジンＣ及びフィラミリシンＣは、それぞれ単一の化合物において、脾臓細胞増殖抑制能とＩＬ４及びＩＬ５分泌抑制能とを有し、特に組み合わせ（併用）の化合物においては、相乗的な脾臓細胞増殖抑制能と相乗的なＩＬ４及びＩＬ５分泌抑制能とを有することを特徴とする。
具体的な一実施例において、ジュスチシジンＢを基準としてジュスチシジンＡ、ジュスチシジンＣ及びフィラミリシンＣのうちいずれか１種以上の化合物を組み合わせ、脾臓細胞増殖抑制能及びＩＬ４、ＩＬ５分泌抑制能の様々な評価を行なった結果、単一の化合物のそれぞれの処理により得られた結果に比べて著しく優れた脾臓細胞増殖抑制能及びＩＬ４、ＩＬ５分泌抑制能を示し、これらはＣＩ数値がいずれも１未満であることから確認できた。（実施例２）

本発明の前記ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）は、キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物のうち、抽出物に対して１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇの含量で含まれることが好ましい。
より好ましくは、本発明のキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物において、前記ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）は、抽出物に対して１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇで含まれてもよい。
また、本発明のキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物において、前記ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）は、抽出に対して１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇで含まれてもよい。
また、本発明の組成物にジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）及びジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）が含まれる場合は、１０：１〜１：１の割合で含まれてもよく、具体的には９：１、８：１、７；１、６：１、５：１、４：１、３：１及び２：１の割合で含まれてもよい。
また、本発明の組成物にジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）及びジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）が含まれる場合は、１０：１〜５：１の割合で含まれてもよく、具体的には９：１、８：１、７：１及び６：１の割合で含まれてもよい。前記ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）は、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）であってもよく、前記ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）は、フィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）であってもよい。
本発明のキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、活性物質として、前記ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）またはフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）を前記のような含有量で含むことにより、優れた呼吸器疾患の予防、改善及び治療効果を奏する。
好ましくは、本発明のジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）またはフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）の活性物質を個別にまたは組み合わせて１種以上を含むキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物において、前記キツネノマゴは、全草、地上部、根、葉、花及び種子からなる群より選択されるいずれか１つ以上であってもよく、好ましくは、キツネノマゴ地上部であってもよく、前記キツネノマゴアルコール抽出物は、炭素数１〜４の低級アルコール、例えば、エタノール抽出物、より好ましくは３０％、５０％、７０％または１００％のエタノール抽出物であってもよく、前記キツネノマゴ有機溶媒抽出物は、ヘキサン、酢酸エチル、ジクロロメタン、エーテル、クロロホルムまたはアセトン抽出物であってもよい。
上述したような本発明のキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、単独または呼吸器疾患に効果があると公知された様々な１種以上の医薬品、生薬剤などと混合して使用することができる。他の植物の抽出物と混合して使用する場合、当該植物は、キツネノマゴと混合した後に抽出可能であり、個別に抽出された後に混合可能である。
本発明の薬学的組成物は、呼吸器疾患を予防し治療するための通常の方法によって錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤、エアロゾル、注射溶液などの形態に剤形化して使用されてもよい。例えば、本発明の薬学的組成物に含まれてもよい担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油が挙げられる。製剤化する場合は、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調製される。
経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれており、このような固形製剤は、複合組成物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混ぜて調製されてもよい。また、単純な賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤も使用されてもよい。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが含まれており、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に、様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが使用されてもよい。
非経口投与のための製剤は、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤などを含むことができる。非水性溶剤と懸濁溶剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが使用されてもよい。
また、本発明の薬学的組成物は、担体、賦形剤または希釈剤をさらに含むことができる。担体、賦形剤または希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、二酸化ケイ素などの鉱物などが使用されてもよい。
本発明に係る薬学的組成物の投与量は、薬学的に有効な量でなければならない。薬学的に有効な量とは、医学的治療に適用可能な合理的な有益／リスク比で疾患を予防または治療するのに十分な量を意味し、有効容量レベルは、製剤化方法、患者の状態及び体重、患者の性別、年齢、疾患の程度、薬物の形態、投与経路及び期間、排泄速度、反応感応性などの要因に応じて、当業者により多様に選択できる。有効量は、当業者に認識されているように、処理の経路、賦形剤の使用及び他の薬剤と一緒に使用できる可能性に応じて変わることができる。
本発明に係るキツネノマゴのアルコールまたは有機溶媒抽出物の投与量または服用量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率及び疾患の重症度に応じて、その範囲が多様であるが、成人基準で０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇを１回乃至数回に分けて服用することが好ましい。
本発明の薬学的組成物は、マウス、家畜、人間などの哺乳動物に多様な経路を介して投与され得る。投与のすべての方式は予想可能であり、例えば、経口、非経口、静脈内、真皮内、及び皮下注射によって投与可能である。
また、他の様態として、本発明は、キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物を含む薬学的組成物を、これを必要とする対象体に投与する段階を含む呼吸器疾患の予防または治療方法を提供する。
前記投与は、経口、非経口、静脈内、真皮内、及び皮下注射の経路により行うことができる。前記抽出物を対象体に投与する場合、これはアレルギー性疾患の予防または治療に必要な有効量で投与できる。キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物を対象体に投与すると、呼吸器関連疾患の症状を抑制することができる。前記投与により予防または治療できる呼吸器疾患は、各種誘発刺激により誘発される様々な疾患を制限なく含むことができ、好ましくは、風邪及び肺炎、気管支炎、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患からなる群より選択される１種以上であり得る。
本発明において、前記対象体は動物を指し、典型的に本発明の抽出物を用いた治療により有益な効果が示される哺乳動物である。このような対象体の好適な例には、ヒトのような霊長類が含まれる。また、このような対象体には、呼吸器疾患の症状を有するか、有する危険のある対象体が全て含まれる。呼吸器疾患を予防または治療するのに有効な量とは、単一または多重容量で、単独または一つまたはそれ以上の他の組成物（他の呼吸器疾患治療剤など）との組み合わせで、対象体に対して所望の成果または客観的もしくは主観的な利点を提供する量を意味する。
また他の態様として、本発明は、キツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を有効成分として含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）と、及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）と、及びジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）またはこれらの混合物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
また、本発明は、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
本発明の前記食品組成物に含まれているキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、食品に含まれて摂取するとき、脾臓細胞の異常な過増殖を抑制し、Ｔｈ２炎症性サイトカインの分泌を抑制することができ、粘液分泌抑制及び気道収縮抑制に有用で優れた呼吸器疾患の改善効果を奏するので、呼吸器疾患を効果的に予防または改善することができる。
前記食品組成物は、本発明の目的に応じて機能性食品であり得、したがって、本発明は、前記食品が健康機能食品である呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
前記機能性食品は、食品の生体調節機能を強調した食品であり、物理的、生化学的、生物工学的な方法を利用して特定の目的に作用及び発現するように付加価値を付与した食品である。このような機能性食品の成分は、生体防御と身体リズムの調節、疾患の防止及び回復に関与する身体調節機能を生体に対して十分に発揮するように設計して加工することになり、食品として許容可能な食品補助添加剤、甘味料または機能性原料を含有することができる。
本発明に係る食品組成物としては、例えば、各種食品類、例えば、飲料、ガム、お茶、ビタミン複合剤、健康補助食品類などがあり、前記飲料には、天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料、野菜飲料などが含まれる。本発明の食品組成物は、公知の製造方法により打錠、錠剤、顆粒、粉末、カプセル、液状の溶液、丸などの剤形に製造することができる。
また、本発明の食品組成物は、通常の様々な香味剤、天然炭水化物などをさらに含有することができる。香味剤としては、タウマチン、ステビア抽出物などの天然香味剤がありサッカリン、アスパルテームなどの合成香味剤を使用してもよい。上述した天然炭水化物は、ブドウ糖、果糖などの単糖類、マルトース、スクロースなどの二糖類、デキストリン、シクロデキストリンなどの多糖類、キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールなどを含むことができる。その他にも、本発明の食品組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤や天然風味剤などの風味剤、着色剤、増進剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、無水クエン酸のような有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤、天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料及び野菜飲料を製造するための果肉などの食品学的に許容可能な食品補助添加剤をさらに含有することができる。このような添加剤は、独立してまたは組み合わせて使用できる。
さらにまた他の様態として、本発明は、呼吸器疾患の予防または治療のためのキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物の用途を提供する。
さらにまた他の様態として、本発明は、呼吸器疾患の予防または治療のための薬剤の製造において、キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物を含む薬学的組成物の用途を提供する。
前記薬剤の製造のための前記キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、薬剤学的に許容される担体、賦形剤及び希釈剤などを混合することができ、その他、活性製剤と一緒に複合製剤として製造されて相乗作用を有することができる。
以上、本明細書に記載の数値は、特に明示されていない限り、均等範囲にまで含むものと解釈されなければならない。

本発明によれば、キツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物またはジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）及びこれを含むキツネノマゴアルコールまたは有機溶媒抽出物は、免疫反応を惹起させる脾臓細胞（Ｓｐｌｅｅｎｃｅｌｌ）の成長を抑制し、喘息に関連するＴｈ２サイトカインを抑制することができ、ＩＣＲマウスで喀痰排出効果を示し、Ｂａｌｂ／ｃマウスでメタコリン（Ｍｅｔａｃｈｏｌｉｎｅ）により誘発された気道抵抗性抑制効果を示すので、究極的に呼吸器疾患の予防または治療剤、及び呼吸器疾患の予防または改善剤として幅広く用いることができる。

本発明に係るキツネノマゴ抽出物から分離されたＣｏｍｐｏｕｎｄ１−４の化学構造を示す図である。（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ１：ジュスチシジンＢ、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２：ジュスチシジンＡ、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ３：ジュスチシジンＣ、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４：フィラミリシンＣ）本発明に係るキツネノマゴ水抽出物及びエタノール抽出物のＨＰＬＣ結果を示す図である。本発明に係るキツネノマゴその他アルコール抽出物のＨＰＬＣ結果を示す図である。本発明に係るキツネノマゴエタノール抽出物に対する気道過敏反応の結果を示す図である。本発明に係るキツネノマゴエタノール抽出物に対する肺組織染色の結果を示す図である。本発明に係るキツネノマゴエタノール抽出物及びコロイド性二酸化ケイ素の混合物に対する肺組織染色の結果を示す図である。

以下、本発明の理解を助けるために好ましい製造例、実施例及び製剤例を提示する。しかし、下記の製造例、実施例及び製剤例は、本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎず、製造例、実施例及び製剤例により本発明の内容が限定されるものではない。
製造例１：キツネノマゴ抽出物の製造
実験に使用したキツネノマゴは、韓国の忠清北道堤川（チュンチョンプクトチェチョン）で栽培して採取した後、乾燥カットして使用し、韓国国立生物資源館（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｏｕｒｃｅｓ、ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ、Ｋｏｒｅａ）から植物の起源を同定された（確証標本番号：ＮＩＢＲＶＰ００００５３０７４２）。以下、水、有機溶媒であるエタノールまたはその他のアルコールを抽出溶媒として用いてキツネノマゴ抽出物を製造した。
製造例１−１：キツネノマゴ水抽出物の製造
陰干ししたキツネノマゴの地上部（Ａｂｏｖｅｇｒｏｕｎｄｐａｒｔ）を約１〜２ｃｍに切断した後、約１０ｇを正確に取り、精製水を用いて１００ｍｌずつ２回（１回目２時間、２回目１時間）、８０℃の恒温水浴槽（ハンソルサイエンス、Ｄ−６）で還流抽出した。抽出物をろ紙で自然ろ過した後、ろ液を６０℃で減圧濃縮器（ＥＹＥＬＡ、Ｎ−１１００）で蒸発濃縮した後、真空乾燥機（ＪＥＩＯＴｅｃｈ、ＯＶ−１２）で６０℃で１２時間乾燥させてキツネノマゴ水抽出物１．６４ｇを得た。
製造例１−２：キツネノマゴエタノール抽出物及びその他のアルコール抽出物の製造
使用した生薬（キツネノマゴの地上部）の重量及び抽出溶媒を除いては前記製造例１−１と同様の方法によりキツネノマゴエタノール抽出物及びその他のアルコール抽出物を製造した。具体的には、キツネノマゴの地上部をエタノール３０％、５０％、７０％、１００％（ｖ／ｖ％）で濃度を変えて抽出することにより、キツネノマゴエタノール抽出物を製造し、イソプロパノール及びメタノールを使用してそれぞれのアルコール抽出物を製造した。
製造例１−３：キツネノマゴ部位別エタノール抽出物の製造
陰干ししたキツネノマゴの地上部（Ａｂｏｖｅｇｒｏｕｎｄｐａｒｔ）を地上部；茎；及び葉と花；に区分した後、粉砕機（コリアメディ（株）、ＫＳＰ−３５）で粉砕した。粉砕物の約５ｇを正確に取り、エタノール１００ｍｌを加え、１時間超音波（ハンイル超音波ＵＧ６００）抽出した後、ろ液を真空乾燥機（ＪＥＩＯＴｅｃｈ、ＯＶ−１２）で６０℃で１２時間乾燥させてエタノール抽出物を製造した。
製造例１−４：抽出方法によるキツネノマゴエタノール抽出物の製造
陰干ししたキツネノマゴの地上部を約１〜２ｃｍに切断した後、約５ｇを正確に取り、エタノール３０％、５０％、７０％、１００％（ｖ／ｖ％）で濃度を変えて、それぞれの溶媒１００ｍｌを加えて超音波抽出（１時間）、浸漬抽出（５時間）により抽出した後、ろ液を真空乾燥機（ＪＥＩＯＴｅｃｈ、ＯＶ−１２）で６０℃で１２時間乾燥させてそれぞれの抽出物を製造した。
製造例２：活性物質の分離及び製造
約１〜２ｃｍに切断して陰干ししたキツネノマゴの地上部（Ａｂｏｖｅｇｒｏｕｎｄｐａｒｔ）４８０ｇを、エタノールを用いて３Ｌずつ２回（１回目２時間、２回目１時間）、８０℃の恒温水浴槽（ＪＩＳＣＯ社、Ｊ−ＢＡＬ）で還流抽出した。抽出液を減圧濾過した後、ろ液を５０〜６０℃で減圧濃縮器（ＥＹＥＬＡ社、Ｎ−１１００）で蒸発濃縮してエタノール濃縮液約１１．４４ｇ（収率２．４％）を得た。エタノール濃縮液を蒸留水１Ｌで懸濁した後、ｎ−ヘキサン１Ｌで３回溶媒分画を行った。製造したｎ−ヘキサン分画物（約５ｇ）をジクロロメタン及びメタノールを移動相溶媒として濃度勾配溶媒システムを用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い、合計１１個の小分画を製造した（ＪＰ−Ｈｅｘ−０１〜１１）。このうち小分画Ｎｏ．４（ＪＰ−Ｈｅｘ−０４）を再びメチレンクロライド及びメタノールを移動相溶媒としてシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い、小分画９個を製造した（ＪＰ−Ｈｅｘ−０４０１〜０４０９）。これらのうち最後の小分画Ｎｏ．４（ＪＰ−Ｈｅｘ−０４０４）を７０％メタノールで逆相分取高速液体クロマトグラフィーを行い、保持時間８．１分のｃｏｍｐｏｕｎｄ１（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）と、保持時間１０．２分のｃｏｍｐｏｕｎｄ２（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）と、保持時間１４．３分のｃｏｍｐｏｕｎｄ３（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）と、をそれぞれ分離製造した。
また、小分画Ｎｏ．６（ＪＰ−Ｈｅｘ−０６）を再びｎ−ヘキサン及び酢酸エチルを移動相溶媒としてシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行い、小分画１９個を製造した（ＪＰ−Ｈｅｘ−０６０１〜０６１９）。これらのうち小分画Ｎｏ．６（ＪＰ−Ｈｅｘ−０６０６）を７０％メタノールで逆相分取高速液体クロマトグラフィーを行い、保持時間１４．７分のｃｏｍｐｏｕｎｄ４（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）を製造した。
前記で分離したｃｏｍｐｏｕｎｄ１−４に対する構造分析を行い、その結果をそれぞれの文献で確認した。確認されたｃｏｍｐｏｕｎｄ１−４の化学構造は、図１に示す。

Ｃｏｍｐｏｕｎｄ１（ジュスチシジンＢ；ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）：^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）δ７．７０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），７．１８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．１１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−５’），６．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，Ｈ−２’），６．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．５，８．０Ｈｚ，Ｈ−６’），６．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２２．４Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），６．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２２．４Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），５．３８（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２ａ），４．０５（３Ｈ，ｓ，７−ＯＣＨ_３），３．８１（３Ｈ，ｓ，６−ＯＣＨ_３）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）δ１７０．０（Ｃ−３ａ），１５１．９（Ｃ−７），１５０．２（Ｃ−６），１４７．６（Ｃ−３），１４７．６（Ｃ−４），１３９．８（Ｃ−２），１３９．６（Ｃ−４），１３３．３（Ｃ−８ａ），１２８．９（Ｃ−４ａ），１２８．５（Ｃ−１），１２３．６（Ｃ−６），１１８．６（Ｃ−３），１１８．４（Ｃ−１），１１０．７（Ｃ−２），１０８．３（Ｃ−５），１０６．１（Ｃ−８），１０６．０（Ｃ−５），１０１．３（Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），６８．１（Ｃ−２ａ），５６．１（７−ＯＣＨ_３），５５．９（６−ＯＣＨ_３）。このような結果からＣｏｍｐｏｕｎｄ１をジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）と同定し、文献ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，Ｖｏｌ．５８，Ｎｏ２，２４４−２４９，１９９５の結果と一致した。
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２（ジュスチシジンＡ；ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）：^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）δ７．５４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．０６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５），６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｈ−５），６．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，Ｈ−２），６．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．５，７．７Ｈｚ，Ｈ−６），６．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２２．３Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），６．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２２．３Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），５．５４（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２ａ），４．１３（３Ｈ，ｓ，１−ＯＣＨ_３），４．０７（３Ｈ，ｓ，７−ＯＣＨ_３），３．８０（３Ｈ，ｓ，６−ＯＣＨ_３）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）δ１６９．７（Ｃ−３ａ），１５１．７（Ｃ−７），１５０．４（Ｃ−６），１４７．９（Ｃ−１），１４７．６（Ｃ−３），１４７．５（Ｃ−４），１３４．５（Ｃ−４），１３０．７（Ｃ−４ａ），１２８．６（Ｃ−１），１２６．１（Ｃ−８ａ），１２４．６（Ｃ−２），１２３．７（Ｃ−６），１１９．４（Ｃ−３），１１０．８（Ｃ−２），１０８．３（Ｃ−５），１０６．３（Ｃ−５），１０１．３（Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），１００．７（Ｃ−８），６６．７（Ｃ−２ａ），５９．７（１−ＯＣＨ_３），５６．２（７−ＯＣＨ_３），５５．９（６−ＯＣＨ_３）。このような結果からＣｏｍｐｏｕｎｄ２をジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）と同定し、文献ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，Ｖｏｌ．６２，１０５６−１０５８，１９９９の結果と一致した。
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ３（ジュスチシジンＣ；ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）：^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）δ７．６９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），６．９８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５），６．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，Ｈ−５），６．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，Ｈ−２），６．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．７，７．７Ｈｚ，Ｈ−６），６．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），６．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），５．１３（２Ｈ，ｓ，Ｈ−３ａ），４．３７（３Ｈ，ｓ，１−ＯＣＨ_３），４．０６（３Ｈ，ｓ，７−ＯＣＨ_３），３．８３（３Ｈ，ｓ，６−ＯＣＨ_３）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）δ１６９．４（Ｃ−２ａ），１５５．５（Ｃ−１），１５２．５（Ｃ−６），１４９．９（Ｃ−７），１４８．４（Ｃ−３），１４７．６（Ｃ−４），１３９．１（Ｃ−３），１３３．５（Ｃ−４ａ），１２９．８（Ｃ−１），１２６．５（Ｃ−４），１２３．７（Ｃ−８ａ），１２３．０（Ｃ−６），１０９．９（Ｃ−２），１０９．５（Ｃ−２），１０９．１（Ｃ−５），１０４．２（Ｃ−５），１０２．４（Ｃ−８），１０１．５（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ），６８．９（Ｃ−３ａ），６３．６（１−ＯＣＨ３），５６．２（７−ＯＣＨ３），５６．０（６−ＯＣＨ３）。このような結果からＣｏｍｐｏｕｎｄ３をジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）と同定し、文献ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ，Ｎｏ．１２，ｐｐ．９２３−９２５，１９７０の結果と一致した。
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４（フィラミリシンＣ；ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）：^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，５００ＭＨｚ）δ７．６９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５），６．９８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−１），６．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−５），６．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｈ−２），６．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．８，７．８Ｈｚ，Ｈ−６），６．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），６．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），５．１３（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２ａ），４．３７（３Ｈ，ｓ，６−ＯＣＨ_３），４．０６（３Ｈ，ｓ，８−ＯＣＨ_３），３．８３（３Ｈ，ｓ，７−ＯＣＨ_３）．^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１２５ＭＨｚ）δ１６９．３（Ｃ−３ａ），１５５．５（Ｃ−６），１５２．５（Ｃ−７），１４９．９（Ｃ−８），１４８．４（Ｃ−３），１４７．６（Ｃ−４），１４３．５（Ｃ−４），１３９．１（Ｃ−２），１３３．５（Ｃ−８ａ），１２９．８（Ｃ−１），１２６．４（Ｃ−３），１２３．７（Ｃ−４ａ），１２３．０（Ｃ−６），１０９．９（Ｃ−２），１０９．１（Ｃ−５），１０４．２（Ｃ−１），１０２．４（Ｃ−５），１０１．５（Ｏ−ＣＨ_２−Ｏ），６８．９（Ｃ−２ａ），６３．６（６−ＯＣＨ_３），５６．２（８−ＯＣＨ_３），５６．０（７−ＯＣＨ_３）。このような結果からＣｏｍｐｏｕｎｄ４をフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）と同定し、文献ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，Ｖｏｌ．５８，Ｎｏ２，２４４−２４９，１９９５の結果と一致した。
前記分離された活性成分のうちジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を多く確保し、標準品（純度：９５．２５％）は、ＨＰＬＣによりその純度を確認して使用した。
製造例３：キツネノマゴ１００％エタノール抽出物及びコロイド性二酸化ケイ素の混合物（１：１）の製造
約１ｃｍ程度に粉砕されたキツネノマゴ約４００ｋｇを１００％エタノール４０００Ｌを用いて２４時間常温（２５℃）で循環浸漬抽出した後、減圧濾過した。残渣をさらに１００％エタノール３２００Ｌで２４時間常温（２５℃）で循環浸漬抽出した後、減圧濾過した。前記ろ液を６０℃で減圧濃縮して、固形分が約１４％のキツネノマゴ１００％エタノール抽出物約９３．８５ｋｇ（収率３．３％）を得た。キツネノマゴエタノール抽出物の固形分重量に相当する同じ重量のコロイド性二酸化ケイ素（Ｅｖｏｎｉｋ社、ＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）２００）を約１３ｋｇを加えて十分に攪拌した後、減圧乾燥機で７２時間乾燥させた。乾燥したキツネノマゴ１００％エタノール抽出物及びコロイド性二酸化ケイ素の混合物（１：１）を粉末化してキツネノマゴ１００％エタノール抽出物及びコロイド性二酸化ケイ素の混合物（１：１）約２６ｋｇを製造した。
実施例１：キツネノマゴ抽出物の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）パターン及びジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）の含有量
前記製造例１−１乃至１−４の製造方法により製造したキツネノマゴ抽出物中に含まれている活性成分を確認するために、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０、ＵＳＡ）を下記表１のような条件下で行い、その結果を図２及び図３に示した。

ＨＰＬＣ試験結果、キツネノマゴエタノール及びその他のアルコール抽出物からは、すべて活性成分が検出された。具体的には、キツネノマゴエタノール抽出物中の活性成分であるＣｏｍｐｏｕｎｄ１−４のピークは、図２に示すように、それぞれＲＴ４６．２分（ジュスチシジンＢ）、ＲＴ４９．５分（ジュスチシジンＡ）、ＲＴ５３．４分（ジュスチシジンＣ及びフィラミリシンＣ）で検出され、その他のアルコール抽出物中の活性成分であるＣｏｍｐｏｕｎｄ１−４のピークは、図３に示すように、それぞれＲＴ４７．６分（ジュスチシジンＢ）、ＲＴ５１．３分（ジュスチシジンＡ）、ＲＴ５５．４分（ジュスチシジンＣ及びフィラミリシンＣ）で検出された。
一方、キツネノマゴ水抽出物からは、ジュスチシジンＢ、ジュスチシジンＡ、ジュスチシジンＣ、またはフィラミリシンＣが全く検出されなかった。
キツネノマゴ水抽出物及びエタノール抽出物、部位別エタノール抽出物中のジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）の含有量は、（数１）を用いて計算し、その結果を表２及び３に示した。
Ｐ_ｔ、Ｐ_ｓ：検液及び標準液中のジュスチシジンＢのピーク面積
Ｃ_ｔ、Ｃ_ｓ：検液及び標準液の製造濃度（検液０．００１ｇ／ｍＬ、標準液０．０５ｍｇ／ｍＬ）
Ｐ：ジュスチシジンＢの純度（０．９５２５）
また、前記製造例３の製造方法により製造したキツネノマゴ１００％エタノール抽出物及びコロイド性二酸化ケイ素の１：１混合物からも同様の方法によりジュスチシジンＢを検出し、その結果、ジュスチシジンＢの含有量は、１６．８７ｍｇ／ｇであることを確認した。
実施例２：キツネノマゴ抽出物の脾臓細胞増殖抑制効果及びＴｈ２炎症性サイトカインの分泌抑制効果
キツネノマゴ抽出物の炎症抑制効果を確認するために、Ｂａｌｂ／ｃマウスから分離した脾臓（ｓｐｌｅｅｎ）を利用して脾臓細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅ）を分離した。分離した脾臓細胞は、１０％ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ、ＦＢＳ）及び抗生剤（ペニシリン１００Ｕ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬ）が含まれたＲＰＭＩ培地に、５×１０^６細胞／ｍＬの濃度に希釈した後、２４ウェルプレートに５００μｌ／ｗｅｌｌずつ、９６ウェルプレートに１００μｌ／ｗｅｌｌ分注し、３７℃、５％ＣＯ_２培養器に入れて４８時間培養した。脾臓細胞を分注するとき、コンカナバリンＡ（ＣｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ）５μｇ／ｍＬを処理して免疫反応を誘導し、この時、製造例１−１乃至１−２及び製造例２で製造されたキツネノマゴ抽出物、活性物質または陽性対照群であるデキサメタゾン（Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）及びモンテルカスト（Ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ）を処理した。２４ウェルプレートの培地は、Ｔｈ２炎症性サイトカイン（ＩＬ４、ＩＬ５）の分泌程度を測定するために使用し、９６ウェルプレートは、細胞増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）程度を測定するために使用した。先ず、Ｔｈ２サイトカインを測定するために、２４ウェルプレートの培地を収集し、８００×ｇで５分間遠心分離を行い、上清液のみを分離し、上清液中のウェル当り１００μｌずつをＩＬ４またはＩＬ５酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ、コマバイオテック）の実験に利用して、これらサイトカインの分泌程度を測定した。また、細胞増殖の程度を測定するために、９６ウェルプレートの各ウェルにＣＣＫ８（Ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｋｉｔ８、Ｄｏｎｊｉｎｄｏ）溶液１０ｍＬを添加し、４時間後に吸光値を測定した。薬物による脾臓細胞増殖抑制の程度及びＴｈ２サイトカインの分泌抑制の程度は、下記の（数２）を用いて計算した。薬物の相乗効果（Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ）は、薬物単独投与時の濃度をｘ座標とし、この時の抑制能をｙ座標として、濃度における抑制能を活用して１次方程式を作り、この方程式を利用して、併用投与時の抑制能に該当する薬物の単独投与濃度を計算して併用指数（ＣｏｍｂｉｎａｔｉｏｎＩｎｄｅｘ、ＣＩ）を（数３）により計算した。
ＣＩ値が１未満である場合、薬効の相乗効果（Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ）があり、ＣＩ値が１である場合、添加効果（Ａｄｄｉｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔ）があり、ＣＩ値が１を超える場合、拮抗効果（Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ）があると解釈される（ＬｉａｎｇＺｈａｏｅｔ．ａｌ．，ＣｌｉｎｉｃａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，１０，７９９４−８００４，２００４）。測定結果は、表４乃至表８に示した。
Ｃａ：併用投与時のａ薬物の濃度、
Ｃｂ：併用投与時のｂ薬物の濃度
Ｃｘ：併用投与時のｘ薬物の濃度
ＩＣａ：併用投与時の抑制能に該当する単独投与時のａ薬物の濃度
ＩＣｂ：併用投与時の抑制能に該当する単独投与時のｂ薬物の濃度
ＩＣｘ：併用投与時の抑制能に該当する単独投与時のｘ薬物の濃度

前記表４から明らかなように、脾臓細胞の増殖抑制の程度がキツネノマゴ水抽出物の場合にはほとんど表示されず、抽出エタノール％が高くなるほど抑制能が増加することが確認できた。また、キツネノマゴイソプロパノール及びメタノール抽出物を処理した場合にも、脾臓細胞の増殖をそれぞれ４３％、３６％に抑制することを確認した。
一方、表５及び６に示すように、それぞれのジュスチシジンＡ、ジュスチシジンＢ、ジュスチシジンＣ、及びフィラミリシンＣは、単一の物質単独でも脾臓細胞増殖抑制効果を示し、特にジュスチシジンＡ及びジュスチシジンＢが高い抑制活性を示した。
また、ジュスチシジンＡまたはジュスチシジンＢと他の３つの活性物質を組み合わせて処理した結果から、ジュスチシジンＡまたはジュスチシジンＢの単独処理時よりも高い抑制効果を確認し、特に、ＣＩ数値が１未満であるので、組み合わせ（併用）投与時に薬効の相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ）があることが確認できた。
表７及び表８に示すように、ジュスチシジンＡ、ジュスチシジンＢ、ジュスチシジンＣ、及びフィラミリシンＣは、単独処理時にＩＬ４及びＩＬ５の分泌を抑制した。また、ジュスチシジンＡ及びジュスチシジンＢと他の活性物質を組み合わせて処理した結果から、ジュスチシジンＡ及びジュスチシジンＢの単独処理時よりも高い抑制効果があることが確認され、特にＣＩ数値が１未満であるので、併用投与時に薬効の相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔ）があることが確認された。陽性対照群として使用したモンテルカストの場合は、ＩＬ４分泌抑制効果は観察されず、ＩＬ５分泌抑制効果のみが観察された。
実施例３：去痰活性評価試験
製造例１−１乃至１−２で製造されたキツネノマゴ水及びエタノール抽出物の去痰活性を評価するために、体重３０〜３３ｇの雄ＩＣＲマウス（オリエントバイオ）を用いて去痰活性評価試験を行った。具体的には、前日絶食させたマウスに実験群別に抽出物及び比較薬物であるアンブロキソール（２００ｍｇ／ｋｇ、ａｍｂｒｏｘｏｌ、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ）を経口投与し、３０分後に５％のフェノールレッド（ｐｈｅｎｏｌｒｅｄ）を腹腔注射した。３０分後、マウスの腹部大動脈を切断して放血させ、気管（ｔｒａｃｈｅａ）全体を切除した。分離された気管を１ｍｌの生理食塩水に入れて２４時間冷蔵保存し、その後、気管を５分間超音波処理して上澄み液に１Ｎ苛性ソーダ（ＮａＯＨ）を添加（上澄み液１ｍＬ当たり１ＮＮａＯＨ０．１ｍＬ）した後、５４６ｎｍで吸光度を測定して、フェノールレッドの濃度により去痰活性を測定した。統計処理のために、結果値を下記の式４を用いて計算して表７に示した。
前記表９から明らかなように、キツネノマゴ抽出物の喀痰排出能力を確認した結果、水抽出物は、喀痰排出能力がないのに対し、３０％〜１００％のエタノール抽出物は、陽性対照群として使用したアンブロキソールよりも優れた喀痰排出能力があることが確認された。
実施例４：気道過敏反応の評価試験
製造例１−２のキツネノマゴエタノール抽出物の肺機能検査のために全身体積変動記録法（Ｗｈｏｌｅｂｏｄｙｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈｙ、ＤＳＩＷＢＰＳｙｓｔｅｍ；ＤＳＩｓＢｕｘｃｏＩｎｃ、ＵＳＡ）を用いて、メタコリン（Ｍｅｔｈａｃｈｏｌｉｎｅ）による気道狭窄を誘発して気道の過敏反応を測定した。このため、実験動物としては６週齢の雌Ｂｌａｂ／ｃマウスを購入した後、正常群、誘発群（陰性対照群）及び試験群に分離した。動物は１週間純化させ、誘発群及び試験群は、その後から０、１４日に０．１％卵白アルブミン（ＯＶＡ１ｍｇ／ｍｌ、Ａｌ（ＯＨ）_３２０ｍｇ／ｍｌ）を製造し、１００μｌ／ｍｏｕｓｅ量を腹腔注射して全身感作させた。最後の全身感作後、１週間後（２１日目）から毎日１０日間、試験群別にキツネノマゴ１００％エタノール抽出物２００ｍｇ／ｋｇを経口投与し、陽性対照群であるデキサメタゾン３ｍｇ／ｋｇを腹腔投与した後、１時間後、ネブライザー（ＰＡＲＩＢｏｙＳＸ、ドイツＧｍｂＨ社）を用いて０．２％卵白アルブミン溶液を噴霧して１時間吸入させた。最後の感作（３０日目）後、実験動物をそれぞれのチャンババイアス（ｃｈａｍｂｅｒｂｉａｓ）に入れて１２分間安定化し、その後、メタコリンを１分間吸入させて３分間記録する方式で気道過敏性のデータを測定した。メタコリンの濃度は、０、１２．５、２５、５０ｍｇ／ｋｇまで増加し、ＰｅｎＨ値に換算して気道過敏性を評価した。ＰｅｎＨ値は、（数５）により換算された。実験結果は、図４に示した。
ＰＩＦ：最大吸気流量（ｐｅａｋｉｎｓｐｉｒａｔｏｒｙｆｌｏｗ）
ＰＥＦ：最大呼気流量（ｐｅａｋｅｘｐｉｒａｔｏｒｙｆｌｏｗ）
Ｔｅ：呼気時間（ｅｘｐｉｒａｔｏｒｙｔｉｍｅ）
ＴＲ：緩和時間（ｒｅｌａｘａｔｉｏｎｔｉｍｅ）
その結果、図４に示すように、キツネノマゴ１００％エタノール抽出物を経口投与した場合、陽性対照群として用いたデキサメタゾンを腹腔投与したときと類似したレベルで気道収縮を抑制することを確認した。
実施例５：ＯＶＡ誘発Ｂａｌｂ／ｃマウスの組織染色による気道収縮抑制能の評価
５週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを購入した後、１週間純化させ、純化の１週間後から０、１４日に０．１％卵白アルブミン（ＯＶＡ１ｍｇ／ｍＬ、Ａｌ（ＯＨ）_３２０ｍｇ／ｍＬ）を製造し、１００μｌ／ｍｏｕｓｅ量を腹腔注射して全身感作させた。最後の全身感作後、１週間後（２１日目）から毎日１０日間、キツネノマゴ１００％エタノール抽出物２００ｍｇ／ｋｇを経口投与し、１時間後、ネブライザー（ＰＡＲＩＢｏｙＳＸ、ドイツＧｍｂＨ社）を用いて０．２％卵白アルブミン溶液を噴霧して１時間吸入させた。最後の感作（３０日目）後、５時間後に剖検して肺組織を取り、１０％中性ホルマリンに固定した。その後、肺組織を切断してスライドを作製し、Ｈ＆Ｅ染色を行い、組織を観察した。組織の観察においては、顕微鏡４００倍の画像を撮影し、撮影された組織の上皮下平滑筋（Ｓｕｂｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅ）の厚さ及び上皮（Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）の厚さをＩｍａｇｅ−ｐｒｏＰｌｕｓ６．０プログラムを用いて測定した。その結果を表１０及び図５に示した。
その結果、表１０及び図５に示すように、キツネノマゴ１００％エタノール抽出物を経口投与した場合、肺組織内の気道収縮に関与する上皮下平滑筋の厚さ及び上皮の厚さが減少することが確認された。
実施例６：好中球性喘息Ｂａｌｂ／ｃマウスモデルにおけるキツネノマゴ抽出物の喘息抑制効果の評価
５週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを購入した後、１週間純化させ、純化の１週間後から０、７日にマウス当たり７５μｇ卵白アルブミン及び１０μｇ脂質多糖類（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、ＬＰＳ）の鼻腔内投与により全身感作させ、１４、１５、２１、２２、２８、２９、３５、３６、３７日目に製造例３のキツネノマゴ抽出物２０、５０、１００ｍｇ／ｋｇまたは陽性対照群（モンテルカスト１０ｍｇ／ｋｇ、デキサメタゾン１ｍｇ／ｋｇ）を経口投与した。投与してから１時間後、５０μｇ卵白アルブミンを鼻腔内投与し、最後の感作（３７日）２４時間後に気管切開術により肺洗浄液を確保し、肺組織を分離した。収集した肺洗浄液は３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離を行い、上清液は、生理活性物質（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＦＮ−γ）を測定するために使用し、沈殿物（ｐｅｌｌｅｔ）は炎症細胞数を測定するために使用した。分離された肺洗浄液内の生理活性物質であるインターロイキン−４（ＩＬ−４）及びインターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）は、それぞれに該当する酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ、ＩＬ−４：コマバイオテック＃Ｋ０３３１１４４、ＩＬ−５：Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍ＃Ｍ５０００、ＩＦＮ−γ：コマバイオテック＃Ｋ０３３１１３８）を用いて測定した。
また、肺洗浄液の沈殿物をリン酸緩衝溶液０．５ｍＬを加えて再溶解させた後、９６−ウェルプレートにそれぞれ０．１ｍＬずつ添加し、８００ｒｐｍで５分間遠心分離し、細胞を底面に付着させた（サンプル当たり３ウェル）。その後、ディフ・クイック染色溶液（ＤｉｆｆＱｕｉｋｓｔａｉｎｉｎｇｓｏｌｕｔｉｏｎ、Ｓｙｓｍｅｘ）で染色し、顕微鏡で無作為に２〜６箇所の写真を撮影し、サンプル当たり２００個前後の細胞を数え、各炎症細胞別の比率（％）を計算した。全体炎症細胞数は、血球計数器（ｈｅｍａｔｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を用いて顕微鏡で測定し、各炎症細胞別の比率（％）を用いて好酸球の数及び好中球の数を換算した。
肺組織の染色は、実施例５と同様の方法により行い、統計処理のためにＳＰＳＳプログラムを用い、等分散検定のためにルビーン検定（Ｌｅｖｅｎｅ’ｓｔｅｓｔ）を行い、一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｖａｒｉａｎｃｅ、略称：ｏｎｅ−ｗａｙＡＮＯＶＡ）により有意性検定を行った。その結果を表１１及び図６に示した。

＊＊ｐ＜０．０１ｖｓ．正常群、＃ｐ＜０．０５ｖｓ．誘発群、＃＃ｐ＜０．０１ｖｓ．誘発群、＄ｐ＜０．０５ｖｓ．モンテルカスト、＄＄ｐ＜０．０１ｖｓ．モンテルカスト
その結果、表１１及び図６に示すように、好中球性喘息マウスモデルにおいて、キツネノマゴ抽出物は、濃度依存的に、アレルギー性喘息標識因子であるＩＬ−４、ＩＬ−５、好酸球性細胞の減少効果はもとより、非アレルギー性喘息標識因子であるＩＦＮ−γ及び好中球性細胞の減少効果を示した。また、上皮の厚さ及び上皮下平滑筋の厚さもキツネノマゴ抽出物に濃度依存的に減少されることが観察された。これらの標識因子のうち、キツネノマゴ抽出物によるＩＬ−５、ＩＦＮ−γ、上皮の厚さ及び上皮下平滑筋の厚さの減少程度は、陽性対照群であるモンテルカストの場合よりも統計的に有意に減少することが観察された。
製剤例１：医薬品の製造
１−１：散剤の製造
キツネノマゴ属抽出物または分画物１００ｍｇ
乳糖１００ｍｇ
タルク１０ｍｇ
前記成分を混合し、気密布に充填して散剤を製造する。
１−２：錠剤の製造
キツネノマゴ属抽出物または分画物１００ｍｇ
トウモロコシ澱粉１００ｍｇ
乳糖１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム２ｍｇ
前記成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法により打錠して錠剤を製造する。
１−３：カプセル剤の製造
キツネノマゴ属抽出物または分画物１００ｍｇ
トウモロコシ澱粉１００ｍｇ
乳糖１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム２ｍｇ
通常のカプセル剤の製造方法により、前記成分を混合し、ゼラチンカプセルに充填してカプセルを製造する。
１−４：注射剤の製造
キツネノマゴ属抽出物または分画物１００ｍｇ
注射用滅菌蒸留水適量
ｐＨ調整剤適量
通常の注射剤の製造方法により、１アンプル当たり（２ｍｌ）前記成分含量で製造する。
１−５：液剤の製造
キツネノマゴ属抽出物または分画物１００ｍｇ
砂糖２０ｇ
異性化糖２０ｇ
レモンの香り適量
精製水を加えて全体を１，００ｍＬに合わせた。通常の液剤の製造方法により、前記成分を混合した後、褐色瓶に充填して滅菌させ、液剤を製造する。
製剤例２：食品の製造
キツネノマゴ属抽出物または分画物１００ｍｇ
ビタミン混合物適量
ビタミンＡアセテート７０μｇ
ビタミンＥ１．０ｍｇ
ビタミンＢ１０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２０．２μｇ
ビタミンＣ１０ｍｇ
ビオチン１０μｇ
ニコチン酸アミド１．７ｍｇ
葉酸５０μｇ
パントテン酸カルシウム０．５ｍｇ
無機質混合物適量
硫酸第一鉄１．７５ｍｇ
酸化亜鉛０．８２ｍｇ
第一リン酸カリウム１５ｍｇ
第二リン酸カルシウム５５ｍｇ
クエン酸カリウム９０ｍｇ
炭酸カルシウム１００ｍｇ
塩化マグネシウム２４．８ｍｇ
前記したビタミン及びミネラル混合物の組成比は、健康機能食品に適合した成分を好適な実施例として混合組成しているが、その配合比を任意に変形して実施しても構わなく、通常の健康機能食品の製造方法により、前記成分を混合した後、通常の方法により、健康機能食品の組成物の製造（例えば、栄養キャンディ等）に用いることができる。
製剤例３：飲料の製造
キツネノマゴ属抽出物または分画物１００ｍｇ
クエン酸１０００ｍｇ
オリゴ糖１００ｇ
梅肉エキス２ｇ
タウリン１ｇ
精製水を加えて全体９００ｍＬ
通常の健康機能性飲料の製造方法により、前記成分を混合した後、約１時間８５℃で攪拌加熱した後、製造された溶液をろ過し、滅菌された２ｌの容器に取って密封滅菌した後、冷蔵保管してから本発明の健康機能性飲料の組成物の製造に用いる。
前記した組成比は、比較的嗜好飲料に適合した成分を好適な実施例として混合組成しているが、消費者の階層、消費国、使用用途等の地域的、民族的嗜好度により、その配合比を任意で変形して実施しても構わない。

Claims

キツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を有効成分として含む、呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
前記キツネノマゴは、キツネノマゴの全草、地上部、根、葉、花、及び種子からなる群より選ばれるいずれか１つ以上である、請求項1に記載の薬学的組成物。
前記アルコール抽出物は、炭素数１〜４の低級アルコールである、請求項１に記載の薬学的組成物。
前記アルコール抽出物は、エタノール抽出物である、請求項１に記載の薬学的組成物。
前記アルコール抽出物は、３０％、５０％、７０％または１００％エタノール抽出物である、請求項１に記載の薬学的組成物。
前記有機溶媒は、ヘキサン、酢酸エチル、ジクロロメタン、エーテル、クロロホルム、及びアセトンのうちから選ばれるいずれか１つ以上である請求項１に記載の薬学的組成物。
前記呼吸器疾患は、風邪、肺炎、気管支炎、非アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患、及び非アレルギー性鼻炎からなる群より選ばれるいずれか１つ以上である請求項１に記載の薬学的組成物。
キツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を有効成分として含む、呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物。
前記食品は、健康機能食品である請求項８に記載の組成物。
ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物。
前記食品は、健康機能食品である請求項１１に記載の組成物。
ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）と、及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）と、及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物。
前記食品は、健康機能食品である請求項１４に記載の組成物。
ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）と、及びジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）と、及びジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）、ジュスチシジンＣ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＣ）及びフィラミリシンＣ（ＰｈｙｌｌａｍｙｒｉｃｉｎＣ）のうちいずれか１つ以上と、を含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物。
前記食品は、健康機能食品である請求項１７に記載の組成物。
ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
前記キツネノマゴは、キツネノマゴの全草、地上部、根、葉、花、及び種子からなる群より選ばれるいずれか１つ以上である、請求項１９に記載の薬学的組成物。
前記アルコール抽出物は、炭素数１〜４の低級アルコールである請求項１９に記載の薬学的組成物。
前記アルコール抽出物は、エタノール抽出物である請求項１９に記載の薬学的組成物。
前記アルコール抽出物は、３０％、５０％、７０％または１００％エタノール抽出物である、請求項１９に記載の薬学的組成物。
前記有機溶媒は、ヘキサン、酢酸エチル、ジクロロメタン、エーテル、クロロホルム、及びアセトンのうち選ばれるいずれか１つ以上である、請求項１９に記載の薬学的組成物。
前記呼吸器疾患は、風邪、肺炎、気管支炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、及び鼻炎からなる群より選ばれるいずれか１つ以上である、請求項１９に記載の薬学的組成物。
ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む,呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物。
前記食品は、健康機能食品である請求項２６に記載の組成物。
ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物。
前記食品は、健康機能食品である請求項２９に記載の組成物。
ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ及びジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）を１ｍｇ／ｇ〜２００ｍｇ／ｇ含むキツネノマゴ（ＪｕｓｔｉｃｉａｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓＬ．）アルコールまたは有機溶媒抽出物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物。
前記食品は、健康機能食品である請求項３２に記載の組成物。
ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）またはこれらの混合物を含む呼吸器疾患の予防または治療用の薬学的組成物。
ジュスチシジンＡ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＡ）、ジュスチシジンＢ（ＪｕｓｔｉｃｉｄｉｎＢ）またはこれらの混合物を含む呼吸器疾患の予防または改善用の食品組成物。