JP6528187B2 - 蜜蜂花粉組成物 - Google Patents

Description

本発明は、蜜蜂花粉組成物に係り、より詳しくは、固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤からなる混合剤と、蒸留水とを混合した後、粉砕工程を経て、蜜蜂花粉組成物の粒子径を１００〜５００ｎｍとすることにより、蜜蜂花粉の細胞壁を効率よく破壊し、体内または皮膚への吸収が容易な剤形に製造することができるという長所があり、粉砕工程において固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤等の混合剤を混合することにより、安定性を増進させることができ、抗酸化効果及びポリフェノール含有量が増進する効果があるので、化粧品材料または医薬品組成物として用いられることを特徴とする蜜蜂花粉組成物に関する。

蜜蜂花粉は、ローヤルゼリーの原料であり、花粉は、蜜蜂が幼い蜂に食べさせるために、体につけて蜂の巣に持ち帰る花の粉を意味する。花粉または花の粉は、ポーレン（Ｐｏｌｌｅｎ）と言われ、植物の花から花粉を集め、蜜蜂の奥歯から分泌されたパロチン及び唾液を混ぜて丸めた粒子を花粉団子または花粉粒という。

１ｇの花粉団子中における、花粉の粒子は２０００から６０万個であり、２００個余りの成分が混ざっており、人体に必要な１６種のミネラルのうち１２種を含有している。他の食品に比べてビタミンＣが遥かに多く含有され、１００ｇのうち繊維質は４．９ｇが含有されていると報告されており、大韓養蜂協会で提示した花粉の成分は、下記表１の通りである。

大韓養蜂協会の資料によると、蜜蜂花粉に含有されたルチン（１７ｍｇ／ｇ）成分は、血管を丈夫にして毛細血管を強化し、約５，０００種の酵素が含有され、新陳代謝と消化機能等を活発にし、強壮作用とスタミナの向上に効果があり、生体リズム機能を強化し、自然治癒力、免疫力を増大させ、老人病予防及び動脈硬化改善への効果に優れたものと知られている。また、各種の酵素とビタミンＢの含有量が多く、老化防止及び皮膚再生、皮膚老化予防に役立ち、脳下垂体ホルモンに類似した「ゴナドトロピン（性腺刺激ホルモン）」というホルモンを含有しており、生殖機能の活性化と前立腺炎・前立腺肥大症の治療にも効果的であると報告されている。加えて、花粉に含有された抗貧血因子は、赤血球とヘモグロビンの迅速な増加により貧血治療に役立ち、ストレス低減、神経障害改善、集中力・記憶力増進、閉経期症状改善、月経前症候群改善、ダイエット効果増大、病後回復効果増大、成人病予防、消化器系機能向上等の効果に優れることが知られている。

ヨーロッパで進行された研究結果によると、花粉は、良性前立腺肥大症の症状改善に極めて効果があり（非特許文献１、２参照）、これにより、現在、乾燥した蜂花粉を丸薬形態で処方し、様々の前立腺疾患の治療に用いられているが、未だ医薬品として許可されたものではなく、現在、用いられている蜂花粉は、殆ど健康補助食品または食品添加物の形態である。

風味が改善された蜜蜂花粉発酵液の製造方法及びその方法で製造された蜜蜂花粉発酵液に関し、蜜蜂花粉を粉末化した後、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）とラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）のいずれかの菌株とアスぺルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）菌株を用いて発酵する段階を含む栄養成分を容易に摂取することができ、風味が改善された蜜蜂花粉発酵液の製造方法について開示されており（特許文献１参照）、花粉発酵物の製造方法、これにより製造された花粉発酵物及びそれを含む食品に関し、穀類、豆類、及び米ぬか類を含む群から選ばれた少なくとも一つと花粉を含む花粉混合物を製造、殺菌及び冷却してから、花粉混合物に糸状菌と生菌を接種して発酵させて、花粉発酵物を製造することにより、花粉の外皮が分解され、花粉の有効成分を食品として効果的に利用可能な花粉発酵物を製造する方法について開示されている（特許文献２参照）。

蜜蜂花粉の皮は、外皮のエキシン（ｅｘｉｎｅ）と内皮のインティン（ｉｎｔｉｎｅ）で構成されるが、エキシンは、殆どの動物、昆虫、強酸、アルカリ、及び消化酵素等によって分解され難いものと知られている（非特許文献３参照）。また、蜂花粉は、フレンチプレス（Ｆｒｅｎｃｈ ｐｒｅｓｓｏｒ）、バンタムミル（Ｂａｎｔａｍ ｍｉｌｌ）、ガラスビーズミル（Ｇｌａｓｓ ｂｅａｄ ｍｉｌｌ）、ホモジナイザー、ソニケーター（Ｓｏｎｉｃａｔｏｒ）のみならず、ボールミル（Ｂａｌｌ ｍｉｌｌ）とハンマミル（Ｈａｍｍｅｒ ｍｉｌｌ）を用いた破砕でも、満たすべき結果が得られなかった（非特許文献４参照）。したがって、花粉を医薬品組成物の用途として摂取する場合は、花粉の硬い外皮を破壊して、内容物質が直ちに消化酵素の作用を受けるようにすることが重要であり、特に、化粧品材料等の用途として用いるときは、外皮の物理的破壊と適切な剤形の開発が必須である。

すなわち、蜜蜂花粉に菌及び発酵剤を添加して発酵させなくとも、蜜蜂花粉の細胞壁を効率よく破壊し、体内または皮膚に吸収が容易な剤形に製造する方法についての開発が必要であることが実状である。

韓国登録特許第１０‐１１８０９０９号公報 韓国登録特許第１０‐０８９４８３４号公報

バック（Ｂｕｃｋ）、外４名、「花粉抽出物セルニルトンを用いた良性前立腺過形成による流出路狭窄の治療（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｏｕｔｆｌｏｗ ｔｒａｃｔ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｄｕｅ ｔｏ ｂｅｎｉｇｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｌｌｅｎ ｅｘｔｒａｃｔ， ｃｅｒｎｉｌｔｏｎ： Ａ ｄｏｕｂｌｅ‐ｂｌｉｎｄ， ｐｌａｃｅｂｏ‐ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｓｔｕｄｙ）」、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ユーロロジー（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ）、（英国）、１９９０年、第６６巻、第４号、ｐ．３９８‐４０４ 安本、外６名、「良性前立腺過形成患者におけるセルニチン花粉抽出物を使用した長期間処置の臨床評価（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ‐ｔｅｒｍ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｕｓｉｎｇ ｃｅｒｎｉｔｉｎ ｐｏｌｌｅｎ ｅｘｔｒａｃｔ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｅｎｉｇｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）」、クリニカル・セラピューティクス（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、（オランダ）、１９９５年、第１７巻、第１号、ｐ．８２‐８７ ブルックス（Ｂｒｏｏｋｓ）およびショー（Ｓｈａｗ）、「花粉および胞子エキシンに由来するスポロポレニンの化学、生化学、地化学および四分子形成後の発生論に関する近年の発展（Ｒｅｃｅｎｔ ｄｅｖｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ｇｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ａｎｄ ｐｏｓｔ-ｔｅｔｒａｄ ｏｎｔｏｇｅｎｙ ｏｆ ｓｐｏｒｏｐｏｌｌｅｎｉｎｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｐｏｌｌｅｎ ａｎｄ ｓｐｏｒｅ ｅｘｉｎｅ）」、ポーレン・ディベロップメント・アンド・フィジオロジー（Ｐｏｌｌｅｎ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ）（Ｊ．Ｈｅｓｌｏｐ‐Ｈａｒｒｉｓｏｎ編）、（英国）、バターワース・ロンドン（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ Ｌｏｎｄｏｎ）、１９９７年、ｐ．９９‐１１４ イボンウ、「Ｐｏｌｌｅｎ Ｌｏａｄの加工処理による化学成分の変化に関する研究」、中央大学校大学院食品加工学科修士論文、（韓国）、１９８９年

本発明は、上記問題点を解決し、必要な技術を提供するためになされたものであり、固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤からなる混合剤と、蒸留水とを混合した後、粉砕工程を経て、蜜蜂花粉組成物の粒子径を１００〜５００ｎｍとすることにより、蜜蜂花粉の細胞壁を効率よく破壊し、体内または皮膚への吸収が容易な剤形に製造された蜜蜂花粉組成物を提供することを目的とする。

また、粉砕工程において固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤等の混合剤を混合することにより、安定性を増進させることができ、抗酸化効果及びポリフェノール含有量が増進する効果があるので、化粧品材料または医薬品組成物として用いられるという長所を有する蜜蜂花粉組成物を提供することを他の目的とする。

上記目的を達成するための本発明の一実施形態として、本発明は、固形化した蜜蜂花粉３〜２０重量％、分散剤０．１〜４重量％、防腐剤０．１〜４重量％、粘増剤１〜１０重量％、酸化防止剤０．０５〜０．３重量％、及び中和剤０．１〜１重量％と、残りは蒸留水で構成されるように混合した後、混合物を粉砕させる粉砕工程を経て製造されることを特徴とする蜜蜂花粉組成物を提供する。

本発明において、前記分散剤はカルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）であり、防腐剤は１，２‐ヘキサンジオール（１，２‐ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ）であり、粘増剤はカーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）であり、酸化防止剤はピロ亜硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｐｙｒｏｓｕｌｆｉｔｅ）であり、中和剤はテトラエチルアンモニウム（ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ）であることを特徴としてもよい。

また、本発明において、前記粉砕工程を経て製造された蜜蜂花粉組成物は、粒子径が１００〜５００ｎｍに粉砕されたことを特徴としてもよい。

本発明の一実施形態によれば、固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤からなる混合剤と、蒸留水とを混合した後、粉砕工程を経て、蜜蜂花粉組成物の粒子径を１００〜５００ｎｍとすることにより、蜜蜂花粉の細胞壁を効率よく破壊し、体内または皮膚への吸収が容易な剤形に製造された蜜蜂花粉組成物を提供することができるという長所がある。

すなわち、蜜蜂花粉に菌及び発酵剤を添加して発酵させなくとも、蜜蜂花粉の細胞壁を効率よく破壊し、体内または皮膚に吸収が容易な剤形に製造することができるので、体内または皮膚への吸収が容易な蜜蜂花粉組成物を製造する工程が簡便になり、菌を添加して発酵させることにより生じ得る蜜蜂花粉に含まれた有効成分の損失を最大限防止することができるという長所がある。

また、本発明の一実施形態による蜜蜂花粉組成物は、粉砕工程において固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤等の混合剤を混合することにより、安定性を増進させることができ、抗酸化効果及びポリフェノール含有量が増進する効果があるので、化粧品材料または医薬品組成物として用いられるという長所がある。

第１比較群と第２比較群及び第１実験群のサンプルを製造後、直ちにそれぞれのサンプルの剤形を比較した結果を示す写真である。 混合剤を添加しなかった蜜蜂花粉組成物の剤形変化を観察した実験の結果を示す写真である。 混合剤を添加した蜜蜂花粉組成物の剤形変化を観察した実験の結果を示す写真である。 混合剤を添加した蜜蜂花粉組成物の加速試験実施後、剤形変化を観察した実験の結果を示す写真である。 粉砕工程を経て製造された蜜蜂花粉組成物の粒子径による花粉の外皮の粉砕結果を示す写真である。 粉砕工程の時間を１時間に設定して製造された蜜蜂花粉組成物の粒子径を測定したグラフである。 粉砕工程の時間を２時間に設定して製造された蜜蜂花粉組成物の粒子径を測定したグラフである。 粉砕工程の時間を３時間に設定して製造された蜜蜂花粉組成物の粒子径を測定したグラフである。 粉砕工程の時間を５時間に設定して製造された蜜蜂花粉組成物の粒子径を測定したグラフである。 総ポリフェノール（ＴＰＣ）分析試験において用いられる標準物質である没食子（タンニン）酸（ｇａｌｌｉｃ（ｔａｎｎｉｃ） ａｃｉｄ）で作成した標準曲線である。

以下、本発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に実施可能なように、本発明の実施形態を挙げて詳述する。本発明の実施形態は、当業界における平均の知識を有する者に本発明をさらに完全に説明するために提供されるものである。したがって、本発明の実施形態は、様々な他の形態に変形されてもよく、本発明の範囲が後述する実施形態に限定されるものではない。

本発明の明細書の全体において、ある部分がある構成要素を「含む」というとき、これは、特に断りがない限り、他の構成要素を除外するものではなく、他の構成要素をさらに含んでもよいことを意味する。

本明細書の全体において用いられる「約」、「実質的に」なる用語は、言及された意味に固有な製造及び物質許容誤差が提示されるとき、その数値またはその数値に近接した意味として用いられ、本発明の理解を助けるために正確または絶対的な数値が言及された開示内容を、非良心的な侵害者が不当に利用することを防止するために用いられる。

以下、本発明の一実施形態による蜜蜂花粉組成物の製造方法及び製造された蜜蜂花粉組成物に対する成分分析実験及び活性実験を挙げて具体的に説明する。本発明の一実施形態による蜜蜂花粉組成物は、後述する成分分析実験及び活性実験結果によりさらに明確に理解され得る。

本発明の一実施形態による蜜蜂花粉組成物は、固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、及び中和剤を添加し、蒸留水を混合した後、粉砕工程を経て製造されることを特徴とするが、これは、最終的に製造される蜜蜂花粉組成物の安定性を増進させるためである。

本発明の一実施形態によると、蜜蜂花粉組成物を製造するために行う粉砕工程は、固形化した蜜蜂花粉３〜２０重量％、分散剤０．１〜４重量％、防腐剤０．１〜４重量％、粘増剤１〜１０重量％、酸化防止剤０．０５〜０．３重量％、及び中和剤０．１〜１重量％と、残りは蒸留水で構成されるように混合した後、混合物を粉砕させることを特徴とする。

また、本発明の一実施形態によると、前記分散剤は、カルボキシメチルセルロースであり、防腐剤は１，２‐ヘキサンジオールであり、粘増剤はカーボポールであり、酸化防止剤はピロ亜硫酸ナトリウムであり、中和剤はテトラエチルアンモニウムであることを特徴としてもよい。

カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ＣＭＣ）は、アルカリに溶解されたセルロースにモノクロル酢酸ナトリウムを反応させて作られた物質であり、セルロース中におけるヒドロキシ基の４０％以上をカルボキシメチル化したものは、冷水にもよく溶解され、粘度の高い安定的なコロイド溶液となる特徴がある物質であり、食用可能な物質である。蜜蜂花粉組成物の全体重量％に対してカルボキシメチルセルロースのような分散剤が０．１重量％未満の比率で添加されて混合されると、蜜蜂花粉組成物の分散力が低下する恐れがあり、分散剤が４重量％を超える比率で添加されて混合されると、相対的に添加される蜜蜂花粉の含量が減らし、蜜蜂花粉の有効成分が添加不足となる恐れがある。

１，２‐ヘキサンジオールは、化粧料に用いられる防腐剤であって、蜜蜂花粉組成物の全体重量％に対して１，２‐ヘキサンジオールのような防腐剤が０．１重量％未満の比率で添加されて混合されると、防腐効果が低下する恐れがあり、防腐剤が４重量％を超える比率で添加されて混合されると、防腐効果は増進するのに対して、相対的に添加される蜜蜂花粉の含量が減らし、蜜蜂花粉の有効成分が添加不足となる恐れがある。

カーボポールは、透明のゲルと乳化製品に用いられる原料であって、粘度を高める役割を担当する。蜜蜂花粉組成物の全体重量％に対して、カーボポールのような粘増剤が１重量％未満の比率で添加されて混合されると、最終的に製造される蜜蜂花粉組成物の粘度が高くならない恐れがあり、粘増剤が１０重量％を超える比率で添加されて混合されると、粘度が高くなり過ぎる問題点が発生し、相対的に添加される蜜蜂花粉の含量が減らし、蜜蜂花粉の有効成分が添加不足となる恐れがある。

ピロ亜硫酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ５）炭酸ナトリウム水溶液に二酸化硫黄を長時間通した後、溶液を濃い硫酸の上で蒸発濃縮させて得られた結晶であり、酸化を防止する特徴がある。蜜蜂花粉組成物の全体重量％に対して、ピロ亜硫酸ナトリウムのような酸化防止剤が０．０５重量％未満の比率で添加されて混合されると、含まれるピロ亜硫酸ナトリウムの比率があまりにも低く、最終的に製造された蜜蜂花粉組成物が酸化され、食品材料、化粧品材料、または医薬品組成物として利用できない恐れがあり、酸化防止剤が０．３重量％を超える比率で添加されて混合されると、相対的に添加される蜜蜂花粉の含量が少なくなり、蜜蜂花粉の有効成分が添加不足となる恐れがある。

テトラエチルアンモニウム（ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ、ＴＥＡ）は、アルカリ原料として、カーボポールと一緒に用いると、カーボポールの粘度を高めるのに重要な役割を担当する。蜜蜂花粉組成物の全体重量％に対して、テトラエチルアンモニウムのような中和剤が０．１重量％未満の比率で添加されて混合されると、含まれるテトラエチルアンモニウムの混合比率があまりにも低く、カーボポールの粘度を高めるのに役立たない恐れがあり、中和剤が１重量％を超える比率で添加されて混合されると、テトラエチルアンモニウムの副作用である眼科疾患または皮膚乾燥症等を引き起こし得るので、食品材料、化粧品材料、または医薬品組成物として用いられるには不向きである。

したがって、蜜蜂花粉組成物を製造するために行う粉砕工程は、固形化した蜜蜂花粉３〜２０重量％、カルボキシメチルセルロース０．１〜４重量％、１，２‐ヘキサンジオール０．１〜４重量％、カーボポール１〜１０重量％、ピロ亜硫酸ナトリウム０．０５〜０．３重量％、及びテトラエチルアンモニウム０．１〜１重量％と、残りは蒸留水で構成されるように混合した後、混合物を粉砕させることが最も好ましい。

本発明の一実施形態による方法として、固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤からなる混合剤と、蒸留水とを混合した後、粉砕工程を経て製造される蜜蜂花粉組成物は、粒子径が１００〜５００ｎｍに粉砕されたことを特徴としてもよい。これは、粉砕された粒子径に応じて蜜蜂花粉の外皮を観察する実験である実施例１における粉砕工程を行う時間による花粉外皮の粉砕結果観察実験を実施した結果により設定した数値であり、前記観察実験によると、蜜蜂花粉の細胞壁が破砕された程度が５００ｎｍの粒子で分散された状態では、若干の細胞壁残留物が観察されたのに対して（図５のＤ）、１００〜４００ｎｍサイズの分散粒子の抽出物では、花粉の細胞壁残留物は、全く観察されないものと確認された（図５のＥ及びＦ）。

したがって、蜜蜂花粉の形態学的観察による結果、食用材料、化粧品材料または医薬品組成物の原料としての蜜蜂花粉中の有効成分の抽出効率を高めるためには、粉砕工程を経て製造された蜜蜂花粉組成物の粒子径が１００〜５００ｎｍに粉砕されることが最も好ましい。

固形化した蜜蜂花粉の粉砕工程の条件に応じて別に製造された蜜蜂花粉組成物の剤形変化を観察して、分散度及び安定性を検討し、蜜蜂花粉組成物の粉砕後、粒子径による外皮の粉砕程度を観察する実験を行うことにより、食用材料、化粧品材料、または医薬品組成物の原料としての蜜蜂花粉中の有効成分の抽出効率を高めるための蜜蜂花粉組成物の粒子径を設定する。

１．対照群及び実験群の設定
蜜蜂花粉組成物の最適の粒子径を選定するために、固形化した蜜蜂花粉そのものまたは対照群を設定し、粉砕工程で添加される試料の比率を調節し、多様な実験群を製造した後、時間による剤形変化、濃度及び温度による剤形変化を観察した。対照群についての説明は、表２に示しており、実験群のそれぞれについての説明は、下記表３に示した。分散剤としてはカルボキシメチルセルロースを使用し、防腐剤としては１，２‐ヘキサンジオールを使用し、粘増剤としてはカーボポールを使用し、酸化防止剤としてはピロ亜硫酸ナトリウムを使用し、中和剤としてはテトラエチルアンモニウムを使用した。

上記した表２及び表３のように製造された比較群及び実験群のうち、固形化した蜜蜂花粉そのものである第１対象群、固形化した蜜蜂花粉を１０００ｎｍ以上の粒子径に粉砕した後、蒸留水を混合して製造した第２対象群、及び固形化した蜜蜂花粉に蒸留水を添加した後、湿式粉砕装置を用いて約１００〜８００ｎｍ以上の粒子径となるように粉砕して製造した第１実験群のサンプルを製造後、直ちにそれぞれのサンプルの剤形を比較した結果を図１に示した。

２．混合剤を添加しなかった蜜蜂花粉組成物の剤形変化観察実験
第１実験群に該当するサンプルを製造する過程で、粉砕工程を１時間、２時間、３時間、または５時間の間行って、それぞれのサンプルを製造し、第１実験群の５つのサンプルと第１対照群を２５〜３５℃の常温で、一週間の経過後、剤形変化を観察した結果を図２に示した。

図２に示すように、固形化した花粉の対象群と比較して、分散剤と防腐剤のような混合剤を添加しなかった状態で、１〜５時間の間粉砕し、粉砕工程の時間条件に差をつけて製造した第１実験群の５つのサンプルを２５〜３５℃の常温で一週間の間放置した後、第１実験群の剤形を観察した結果、全ての材料が自然発酵され、効果的な食用、化粧品、及び製薬の材料として用いられないものと示された。

花粉の外皮を効果的に抽出する場合、花粉の細胞内に含まれている有効成分により、微生物が生息しやすい環境になってしまうので、空気中や低温状態で約１ヵ月間保管しても微生物により発酵され始める。このように発酵された組成物は、花粉が本来有していた固有な成分に対する変性をもたらし、または安定性に問題が生じる恐れがあるので、食品材料、化粧品材料、及び医薬品組成物の原料としては用いられない。

したがって、上記した第１実験群の５つのサンプルは、７日経過後、観察された剤形の変化により発酵されたものと認められ、これは、１〜５時間の間粉砕して粉砕工程を行った場合、花粉の外皮が効果的に除去され、花粉に含まれている有効成分の抽出効率は増加するのに対して、貯蔵過程で変性及び変質して、安定性に問題が発生し得ると判断される。

３．混合剤を添加した蜜蜂花粉組成物の剤形変化観察実験
蜜蜂花粉組成物の製造過程において分散剤と防腐剤を添加して製造するが、蜜蜂花粉の重量％比率を別に設定して製造した第２実験群、第３実験群、及び第４実験群のサンプルと、第１対照群を２５〜３５℃の常温で、３ヵ月間放置した後、剤形変化を観察した結果を図３に示した。

図３に示すように、粉砕工程において分散剤と防腐剤を添加して製造した蜜蜂花粉５重量％が含有された第２実験群、蜜蜂花粉１０重量％が含有された第3実験群、及び蜜蜂花粉１５重量％が含有された第4実験群のサンプルの全てを室温で３ヵ月以上観察した結果、第２実験群、第３実験群、及び第４実験群のサンプル共に、同様に花粉粒子が水よりも軽い状態で分散された状態に維持されるものと示され、分散剤及び防腐剤の処理をしなかった第１実験群のサンプルとは異なり、発酵もされず、安定性も確保されるものと確認された。

４．混合剤を添加した蜜蜂花粉組成物の加速試験実施後、剤形変化観察実験
蜜蜂花粉組成物の製造過程において、分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、及び中和剤を添加して製造するが、蜜蜂花粉の重量％比率を別に設定して製造した第５実験群、第６実験群、及び第７実験群のサンプルと、第１対照群を４８℃の温度で、３０日間加速試験を実施した結果を図４に示した。

図４に示すように、粉砕工程において分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、及び中和剤を添加して製造した蜜蜂花粉５重量％が含有された第５実験群、蜜蜂花粉１０重量％が含有された第６実験群、及び蜜蜂花粉１５重量％が含有された第７実験群のサンプル共に、混合剤の添加により安定化した分散結果を示すものと確認され、上記結果により、本剤形は、常温で１年以上は安定した構造で流通可能であると判断される。これは、通常の化粧品原料の場合、剤形と分散の安定度は、約４５℃の温度で、１ヵ月間加速試験を実施した場合、肉眼で観察された分散の程度が分離される層が発見されなければ、常温における１年の流通が可能であるという基準によるものであり、本発明の一実施形態による第５実験群、第６実験群、及び第７実験群のサンプルは、常温で１年以上は安定した構造で流通可能であると予測することができる。

５．粉砕工程を行う時間による花粉外皮の粉砕結果観察実験
本発明の一実施形態により固形化した蜜蜂花粉に混合剤と蒸留水を混合した後、粉砕工程を経て蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間による蜜蜂花粉組成物の粒子径を観察し、製造された蜜蜂花粉組成物の粒子径による花粉外皮の粉砕結果を観察した。すなわち、蜜蜂花粉の形態学的観察による結果により、食用材料、化粧品材料、または医薬品組成物の原料としての蜜蜂花粉内の有効成分の抽出効率を高めるために、最も効率的な蜜蜂花粉組成物の粒子径を設定した。前記花粉外皮の粉砕結果を観察した結果を図５に示した。また、粉砕工程の時間を別に設定して製造したサンプルの粒子径を測定した実験の結果を図６（粉砕工程１時間）、図７（粉砕工程２時間）、図８（粉砕工程３時間）、及び図９（粉砕工程５時間）に示した。

図５に示すように、蜜蜂花粉組成物を製造するために行う粉砕工程の時間を１時間、２時間、３時間、及び５時間にそれぞれ設定し、別途に製造した第７実験群のサンプルと、第１対照群である固形化した蜜蜂花粉そのものをホモジナイザーで３０分間破砕したサンプルを、光学顕微鏡４００倍の倍率で観察した結果、ホモジナイザーで３０分間破砕した第１対照群のサンプルでは、多量の花粉が細胞壁が破砕されなかった状態として観察された（図５のＡ）。

しかしながら、時間の差をつけて、本発明の一実施形態により粉砕工程を行って製造した第７実験群のサンプルを観察した結果、時間による粒子径により、花粉の細胞壁が破砕した程度が５００ｎｍの粒子で分散された状態では、若干の細胞壁残留物が観察されたのに対して（図５のＤ）、１００〜４００ｎｍサイズの分散粒子の抽出物では、花粉の細胞壁残留物は全く観察されなかったものと示された（図５のＥ及びＦ）。

上記実験による蜜蜂花粉の形態学的観察による結果、食用材料、化粧品材料、または医薬品組成物の原料としての蜜蜂花粉内の有効成分の抽出効率を高めるためには、粉砕工程を経て製造された蜜蜂花粉組成物の粒子径が１００〜５００ｎｍに粉砕されることが好ましいと判断される。

固形化した蜜蜂花粉そのものである第１対照群をホモジナイザーで３０分間破砕して製造したサンプルと、第７実験群として蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間を３時間に設定して製造したサンプルに対する抗酸化活性を評価する試験を実施した。

抗酸化活性評価は、ＡＢＴＳラジカル消去活性を測定し、ＤＰＰＨラジカル消去活性を測定して評価した。

１．ＡＢＴＳラジカル消去活性の測定
７ｍＭ ＡＢＴＳ（２，２’‐アジノ‐ビス(３‐エチルベンゾチアゾリン‐６‐スルホン酸）バッファと、２．４５ｍＭ過硫酸カリウムバッファ（Ｋ２Ｓ２О８）を製造してから、ＡＢＴＳと過硫酸カリウムを２：１の体積比で混ぜてストックバッファを製造し、製造されたストックバッファは１２〜１６時間遮光して反応させた。ストックバッファを７３４ｎｍで測定したО．Ｄ．値が０．７程度となるように希釈し、ストックバッファ０．１ｍｌに第１対照群として製造したサンプルと、第７実験群として製造したサンプルを濃度別に希釈した試料０．１ｍｌを添加し、室温で６分間反応させた。この試料を９６ウェルプレートに移し、７３４ｎｍで吸光度を測定し、それぞれの試料に対するＩＣ５０値を求めて比較した。ＩＣ５０値は、ラジカルを５０％抑制するのに必要な濃度値を示し、抑制率は、下記の式１のように計算した（Ｎｉｔａｙａ Ｍｅｅｎａｋｓｈｉ Ｒ ａｎｄ Ｓｕｇａｎｔｈｉ Ｒ， Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏ Ｓｃｉ ２０１３ Ａｐｒ；４（２）：（Ｂ）３１２‐３１８）。ＡＢＴＳラジカル消去活性を測定した。

固形化した蜜蜂花粉そのものである第１対照群をホモジナイザーで３０分間破砕して製造
したサンプルと、第７実験群として蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間を

３時間に設定して製造したサンプルに対する抗酸化活性評価として、ＡＢＴＳラジカル消去能試験を実施した結果によると、本発明の一実施形態による粉砕工程を経なかった無処理花粉結晶体では、ＩＣ５０値が２１７μｇ／ｍｌと測定されたのに対して、３時間の粉砕工程を経たサンプルでは、ＩＣ５０値が３２μｇ／ｍｌと多く減少するものと測定され、抗酸化効果は、全体組成物に対して蜜蜂花粉が１５％含有されている第７実験群として蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間を３時間に設定して製造したサンプルが約６．５倍高く示されるものと確認された。このような結果から、花粉の外皮を除去するための粉砕工程を経ると、既存の熱分解、酵素処理等の抽出方法から発生する細胞内有効成分の化学的な変性を防止し、安定した状態で抽出可能であって、機能性の高い物質を流出させることができると類推できる。

２．ＤＰＰＨラジカル消去活性の測定
ＤＰＰＨ（１，１‐ジフェニル‐２‐ピクリルヒドラジル）溶液を試料または標準物質と一緒に入れた反応液を、下記表４のように準備し、充分に混合した後、５分間常温で反応させ、吸光光度計を用いて５１７ｎｍでの吸光度を測定した。抑制率は、下記式２のように計算した（Ｎｉｔａｙａ Ｍｅｅｎａｋｓｈｉ Ｒ ａｎｄ Ｓｕｇａｎｔｈｉ Ｒ， Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏ Ｓｃｉ ２０１３ Ａｐｒ：４（２）：（Ｂ）３１２‐３１８）。

固形化した花粉そのものである第１対照群をホモジナイザーで３０分間破砕して製造した
サンプルと、第７実験群として蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間を３時

間に設定して製造したサンプルに対する抗酸化活性評価としてＤＰＰＨラジカル消去能試験を実施した結果によると、本発明の一実施形態による粉砕工程を経なかった無処理花粉結晶体では、ＩＣ５０値が２４２．９μｇ／ｍｌと測定されたのに対して、３時間の粉砕工程を経たサンプルでは、ＩＣ５０値が７４．９μｇ／ｍｌと多く減少するものと測定され、抗酸化効果は、全体組成物に対して蜜蜂花粉が１５％含有されている第７実験群として蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間を３時間に設定して製造したサンプルが約３．３倍高く示されるものと確認された。このような結果から、花粉の外皮を除去するための粉砕工程を経ると、既存の熱分解、酵素処理等の抽出方法から発生する細胞内有効成分の化学的な変性を防止し、安定した状態で抽出可能であって、機能性の高い物質を流出させることができると類推できる。

固形化した蜜蜂花粉そのものである第１対照群をホモジナイザーで３０分間破砕して製造したサンプルと、第７実験群として蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間を３時間に設定して製造したサンプルに対するポリフェノールの含量を分析する試験を実施し、その結果を下記表５及び表１０に示した。

総ポリフェノール含量（ＴＰＣ）を分析するために、ポリフェノール定量は、Ａ．О．Ａ．Ｃ法に準じて１００倍希釈した試料溶液３ｍｌにフォリン‐シオカルトーフェノール試薬（Ｆｏｌｉｎ‐Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ ｐｈｅｎｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ）１ｍｌを加え、１Ｎ ＨＣｌ０．２ｍｌを入れてから、飽和溶液Ｎa２ＣＯ３１ｍｌを加えて混合した後、１時間室温で放置し、６４０ｎｍで吸光度を測定し、標準物質である没食子（タンニン）酸で予め作成した標準曲線の吸光度値と比較して、ポリフェノール含量を算出した（Ｃｌａｕｄｉａ Ａｎｅｓｉｎｉ， Ｇｒａｃｉｅｌａ Ｅ． Ｆｅｒｒａｒａ， Ｒｏｓａｎａ Ｆｉｌｉｐｉ， Ｊ． Ａｇｒｉｃ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ． ２００８， ５６， ９２２５‐９２２９）。

下記表５は、固形化した蜜蜂花粉そのものである第１対照群をホモジナイザーで３０分間破砕して製造したサンプルと、第７実験群として蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間を３時間に設定して製造したサンプルのポリフェノール含量を比較分析した結果であり、図１０は、標準物質である没食子（タンニン）酸で作成した標準曲線である。

上記表５は、固形化した蜜蜂花粉そのものである第１対照群をホモジナイザーで３０分間破砕して製造したサンプル（表４のＡ）と、第７実験群として蜜蜂花粉組成物を製造するが、粉砕工程を行う時間を３時間に設定して製造したサンプル（表４のＢ）に対するポリフェノール含量を分析した結果を示すものであって、本発明の一実施形態による粉砕工程を経なかった無処理花粉結晶体と、３時間の粉砕工程を経たサンプルとのポリフェノールの含量を比較分析した結果、３時間の粉砕工程を経たサンプル（表４のＢ）のポリフェノール含量が約１０倍高く示された。

植物のポリフェノールは、血液循環を円滑にする機能に優れるので、動脈硬化、老人性痴呆症、脳梗塞、心筋梗塞、糖尿病、癌等を予防する作用をするものと広く知られている。また、老化を防止し、癌を抑制するのに、ポリフェノールがラジカルを除去する役割をするとも報告されている。

すなわち、蜜蜂花粉を、一般の塊で食用服用し、または１０００ｎｍサイズ以上の粒子に粉砕して食用服用するよりは、本発明の一実施形態による粉砕工程を通じて粉砕されて製造された蜜蜂花粉組成物を服用することが多量のポリフェノールを摂取可能な方法であると思われる。

結論的に、本発明の一実施形態による蜜蜂花粉組成物は、固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤からなる混合剤と、蒸留水とを混合した後、粉砕工程を経て、蜜蜂花粉組成物の粒子径を１００〜５００ｎｍとすることにより、蜜蜂花粉の細胞壁を効率よく破壊し、体内または皮膚への吸収が容易な剤形に製造された蜜蜂花粉組成物を提供することができるという長所があり、蜜蜂花粉に菌及び発酵剤を添加して発酵させなくとも、蜜蜂花粉の細胞壁を効率よく破壊し、体内または皮膚への吸収が容易な剤形に製造することができるので、体内または皮膚に吸収が容易な蜜蜂花粉組成物の製造工程が簡便になり、菌を添加して発酵させることにより生じ得る蜜蜂花粉に含まれた有効成分の損失を最大限防止することができるという長所がある。また、本発明の一実施形態による蜜蜂花粉組成物は、粉砕工程において固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤等の混合剤を混合することにより、安定性を増進させることができ、抗酸化効果及びポリフェノール含有量が増進する効果があるので、化粧品材料または医薬品組成物として用いられるという長所があると判断される。

以上、実施例を挙げて本発明を詳しく説明したが、本発明は、上記した実施例に限定されず、様々な形態への変形が可能であり、本発明の技術的思想の範囲内で、当該分野における通常の知識を有する者により、多くの変形が可能であることが明らかである。また、請求の範囲に記載された本発明の技術的思想を逸脱しない範囲内で、当該技術の分野における通常の知識を有する者により、多様な形態の置換、変形、及び変更が可能であり、これも本発明の範囲に属するものと言える。

本発明は、固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤からなる混合剤と、蒸留水とを混合した後、粉砕工程を経て、蜜蜂花粉組成物の粒子径を１００〜５００ｎｍとすることにより、蜜蜂花粉の細胞壁を効率よく破壊し、体内または皮膚への吸収が容易な剤形に製造することができるという長所があり、粉砕工程において固形化した蜜蜂花粉に分散剤、防腐剤、粘増剤、酸化防止剤、または中和剤等の混合剤を混合することにより、安定性を増進させることができ、抗酸化効果及びポリフェノール含有量が増進する効果があるので、化粧品材料または医薬品組成物として有用に用いられ得る。

Claims (2)

1. 固形化した蜜蜂花粉３〜２０重量％、分散剤０．１〜４重量％、防腐剤０．１〜４重量％、粘増剤１〜１０重量％、酸化防止剤０．０５〜０．３重量％、及び中和剤０．１〜１重量％と、残りは蒸留水で構成されるように混合および粉砕された混合物からなることを特徴とする、蜜蜂花粉組成物。
2. 前記分散剤はカルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）であり、防腐剤は１，２−ヘキサンジオール（１，２−ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ）であり、粘増剤はアクリル酸高分子ポリマー粘増剤であり、酸化防止剤はピロ亜硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｐｙｒｏｓｕｌｆｉｔｅ）であり、中和剤はテトラエチルアンモニウム（ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ）であることを特徴とする請求項１に記載の蜜蜂花粉組成物。