JP6235055B2 - バイオフィルム除去方法 - Google Patents
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(B)成分のLogP値が−0.4〜0であり、
(A)成分の含有量と(B)成分の含有量の質量比が、〔(B)成分の含有量〕/〔(A)成分の含有量〕で0.9〜6であり、
界面活性剤(但し、(A)成分及び両性界面活性剤を除く)〔以下、その他の界面活性剤という〕の含有量と(A)成分の含有量との質量比が、〔その他の界面活性剤の含有量〕/〔(A)成分の含有量〕で0.6以下であり、かつ、
(A)成分の含有量と両性界面活性剤の含有量との質量比が、〔両性界面活性剤の含有量〕/〔(A)成分の含有量〕で0.18以下である、
皮膚洗浄剤組成物に関する。
本発明の皮膚洗浄剤組成物は、(A)成分として、(A)アシル基の炭素数が8〜22であるアシルグリシン塩〔以下、(A1)成分という〕、及び、炭素数が16〜18の不飽和脂肪酸塩〔以下、(A2)成分という〕からなる群より選ばれる1種以上の界面活性剤を含有する。本発明の皮膚洗浄剤組成物は、(A1)成分を含有するのが好ましく、(A1)成分及び(A2)成分を含有するのがより好ましい。
R−CONH−CH2−COO- M+ (A−1)
[一般式(A−1)において、Rは炭素数7〜21の炭化水素基を示し、該炭化水素基はヒドロキシ基で置換されていてもよい。M+はアルカリ金属イオン、アルカノールアンモニウムイオン、又は、正に帯電した塩基性アミノ酸を示す。]
イオン、アルカノールアンモニウムイオン、又は正に帯電した塩基性アミノ酸であり、アルカリ金属イオンが好ましい。アルカリ金属イオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオンが好ましく、カリウムイオンがより好ましい。アルカノールアンモニウムイオンとしては、トリエタノールアンモニウムイオン、メチルプロパノールアンモニウムイオンが好ましく、正に帯電した塩基性アミノ酸としては、正に帯電したアルギニン、正に帯電したヒスチジン、正に帯電したリジンが好ましい。
R’−COO- M’+ (A−2)
[一般式(A−2)において、R’は不飽和結合を1つ以上含む炭素数15〜17の炭化水素基である。M’+はアルカリ金属イオン、アルカノールアンモニウムイオン、又は、正に帯電した塩基性アミノ酸を示す。]
本発明の皮膚洗浄剤組成物は、バイオフィルム除去性能、皮膚に対する低刺激性を両立する観点から、(B)成分として、炭素数が4〜10のアルコールを含有する。(B)成分が有する水酸基の数は1〜8、更に1〜4、より更に1〜2個が好ましい。(B)成分の有機化合物のLogP値は−0.4〜0である。本発明のLogP値は、オクタノール/水分配係数であり、Chembio Office2008のChemdraw ultra 11.0(Hulinks社)による計算予測値である。(B)成分のアルコールとしては、1,3−ブチレングリコール(炭素数4、LogP=−0.37)、ジプロピレングリコール(炭素数6、LogP=−0.31)、エチルジグリコール(炭素数6、LogP=−0.25)、イソプレングリコール(炭素数5、LogP=−0.15)が挙げられる。
本発明の皮膚洗浄剤組成物は、(A)成分以外の界面活性剤を含有することができるが、バイオフィルム除去性能の観点から、その含有量は制限される。(A)成分以外の界面活性剤としては、(1)(A)成分及び両性界面活性剤以外の両性界面活性剤(以下、その他の界面活性剤という)、(2)両性界面活性剤が挙げられ、本発明では、後述の通り、(A)成分の含有量に対するこれら界面活性剤の含有量が所定範囲とされる。
本発明の皮膚洗浄剤組成物において、組成物中の(A)成分の含有量と(B)成分の含有量の質量比は、バイオフィルム除去性能と皮膚に対する低刺激性を両立する観点から、〔(B)成分の含有量〕/〔(A)成分の含有量〕で0.9〜6である。好ましくは1.5〜4であり、より好ましくは2〜4である。
表1、2に示す成分を用い、以下に示す方法で表に示す組成の皮膚洗浄剤組成物を調製した。下記方法により、黄色ブドウ球菌の形成するバイオフォルム(BF)の除去性能、及び、皮膚刺激性の評価を行った。
100mlのガラスビーカーに、スターラーピース(直径8mm、長さ30mm、増田理化工業製)を挿入し、さらに皮膚洗浄剤組成物の出来上がり質量が100gとなるように、表1、2に示す質量比率にて、全ての成分を投入した。ウォーターバスにて80℃まで昇温し、100rpmで30分間撹拌した。水溶液の外観が均一になったことを確認し、室温(25℃)まで冷却した。
皮膚洗浄剤組成物のpH(25℃)は、HORIBA pH Meter F-21((株)堀場製作所製)を用いて原液で測定した。
黄色ブドウ球菌(NBRC13276)1株を、25mlのTBSNo.2培地(シグマ社製)で37℃、22時間振盪培養した(得られた液を「菌液」とよぶ)。波長600nmの光により菌液の濁度を測定し(濁度計 HITACHI社製 U-2800)、濁度が0.1となるようにTBS No.2培地で菌液を希釈した(得られた液を「希釈した菌液」と呼ぶ)後、底面が平面である滅菌96ウェルプレート(ファルコン社製)の各ウェルに希釈した菌液を0.15ml添加して、37℃、24時間あるいは48時間静置培養した。また、ポジティブコントロールとして、同じプレートの異なるウェルに菌を含まないTSB No.2培地を0.15ml加えたサンプルも調製した。上澄みを廃棄後、各ウェルに0.2mlの滅菌生理食塩水(以下、生食という)を添加し、上澄みを廃棄する操作(以下、washという)を2回行った。次いで、各ウェルに0.2mlの生食を添加し、表1、2に示す各皮膚洗浄剤組成物を添加する直前まで保持した。
その後、各ウェルに、クリスタルバイオレット(和光純薬工業(株)製)の0.1%水溶液0.2mlを添加し、室温で1時間放置した。生食で1回washした後、エタノール(シグマ社製)0.2mlを各ウェルに添加し、4℃で一晩放置した。次いで、各ウェルに関し、570nmの吸光度を測定した。得られた吸光度値を下記の式に代入し、バイオフィルム除去率を算出した。
なお、上記全ての工程は無菌状態にて実施した。
As:サンプル吸光度
An:ネガティブコントロール吸光度
Ap:ポジティブコントロール吸光度
In vitro試験で皮膚刺激性を予測できることが知られている三次元皮膚モデルを用い、その生細胞率を算出して皮膚刺激性を測定した〔参考文献1:加藤ら、第22回 日本動物実験代替法学会(2009年)、参考文献2:LabCyteエピモデル取扱説明書〕。三次元皮膚モデルとして、株式会社ジャパン・ティッシュ・エンジニアリング(略称J-TEC)製のLabCyte EPI-MODEL 24(ラボサイト エピ・モデル 24ウェル)(以降エピモデルと略す)を用いた。
本評価の操作は無菌状態で行った。エピモデルに同封されているアッセイ培地(以降アッセイ培地と略す。)をあらかじめ37℃に加温し、24個のウェルの各ウェルに0.5(ml)分注した。エピモデルをアッセイ培地が分注された24個のウェルに移し、37℃、5% CO2の嫌気条件下で1時間以上培養した。
その後各種サンプル溶液(皮膚洗浄剤組成物の原液)をエピモデルの表面に50(μl)添加し10分放置した。このときネガティブコントロールを生食で処理したものとした。その後溶液を廃棄し、0.5(ml)の生食で5回ウォッシュした。アッセイ培地を交換し、37℃、5% CO2の嫌気条件下で42時間培養した。アッセイ培地を廃棄後、37℃にあらかじめ加温した0.5(mg / ml)MTT(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide、関東化学)/ DMEM培地(ギブコBRL)に置換し、37℃、5% CO2の嫌気条件下で3時間培養した。陰性対象のウェルが青紫色に染まっていることを確認後、ヒト表皮組織を底面のフィルムごとメスで切り取って採取した。表皮組織をマイクロチューブに加え、0.5(ml)のイソプロピルアルコール(以降IPAと略す。)(和光純薬工業(株)製)を添加し、室温、暗所で1晩放置した。抽出溶液を0.2(ml)分取り、96ウェルに加えた(ブランクにIPAを同量添加)。サンプル、ネガティブコントロール(生食)、及びブランクのそれぞれについて、570(nm)、650(nm)の吸光度を測定し、570(nm)の吸光度の値から650(nm)の吸光度の値を差し引き、下記の計算式で用いる吸光度の値(Bs、Bn、Bb)に用いた。以下の式で生細胞率を算出し、皮膚刺激性を測定した。
生細胞率(%)=100×(Bs−Bb)/(Bn−Bb)
Bs:サンプル吸光度
Bn:ネガティブコントロール(生食)吸光度
Bb:ブランク(IPA単独)吸光度
(A)成分:
・ココイルグリシンカリウム塩:アミライトGCK-12K(味の素株式会社製)有効分30%(残部は水)、表には有効分のアシルグリシン塩を(A)成分として記載した。〔ココイル基の脂肪酸組成はC12:44%、C14:16%、C18:10%(飽和3%、不飽和7%の合計)、C16:8%、C8:8%、C10:6%、出典 稲葉恵一、平野二郎著 脂肪酸化学(昭和56年初版)〕
・オレイン酸カリウム塩:(試薬)有効分19%(残部は水)
(B)成分:
・1,3−ブチレングリコール:(試薬)
・ジプロピレングリコール:(試薬)
・エチルジグリコール:(試薬)
・イソプレングリコール:(試薬)
<その他の界面活性剤>
・ラウロイルメチルタウリン塩:ニッコールLMT(日光ケミカル株式会社製)
・ラウロイルサルコシン塩:(試薬)
・ラウリン酸ナトリウム塩:(試薬)
・アシルグルタミン酸カリウム塩:アミソフトLK-11(F)(味の素株式会社製)
・ヤシ油脂肪酸ソルビタン:レオドールSP−L10(花王株式会社製)
・グリセリンモノ−2−エチルヘキシルエーテル:ペネトールGE-EH(花王株式会社製)
・ステアリン酸カリウム塩:(試薬)
<両性界面活性剤>
・アルキルヒドロキシスルホベタイン:アンヒトール20HD(花王株式会社製)
・アルキルアミドプロピルベタイン:アンヒトール20AB(花王株式会社製)
・グリセリン:化粧品用濃グリセリン(花王株式会社製)
・プロピレングリコール:化粧用プロピレングリコール (株式会社ADEKA製)
・メタノール:(試薬)
・ベンジルアルコール:(試薬)
Claims (9)
- (A)アシル基の炭素数が8〜22であるアシルグリシン塩、及び、炭素数が16〜18の不飽和脂肪酸塩からなる群より選ばれる1種以上の界面活性剤〔以下、(A)成分という〕、並びに、(B)炭素数が4〜10のアルコール〔以下、(B)成分という〕を含有するバイオフィルム除去剤であって、
(B)成分のLogP値が−0.4〜0であり、
(A)成分の含有量と(B)成分の含有量の質量比が、〔(B)成分の含有量〕/〔(A)成分の含有量〕で0.9〜6であり、
界面活性剤〔但し、(A)成分及び両性界面活性剤を除く〕〔以下、その他の界面活性剤という〕の含有量と(A)成分の含有量との質量比が、〔その他の界面活性剤の含有量〕/〔(A)成分の含有量〕で0.33以下であり、かつ、
(A)成分の含有量と両性界面活性剤の含有量との質量比が、〔両性界面活性剤の含有量〕/〔(A)成分の含有量〕で0.18以下であり、
pH(25℃)が7〜11である、
バイオフィルム除去剤。 - 皮膚用である、請求項1記載のバイオフィルム除去剤。
- (A)成分が、アシル基の炭素数が8〜22であるアシルグリシン塩、及び、炭素数が16〜18の不飽和脂肪酸塩である、請求項1又は2記載のバイオフィルム除去剤。
- (B)成分のLogP値が−0.4〜−0.2である、請求項1〜3の何れか1項記載のバイオフィルム除去剤。
- (B)成分が、1,3−ブチレングリコールである、請求項1〜4の何れか1項記載のバイオフィルム除去剤。
- その他の界面活性剤が、(A)成分以外のアニオン界面活性剤、及び、ノニオン界面活性剤から選ばれる1種以上である、請求項1〜5の何れか1項記載のバイオフィルム除去剤。
- 両性界面活性剤が、カルボベタイン及びスルホベタインから選ばれる1種以上のベタインである請求項1〜6の何れか1項記載のバイオフィルム除去剤。
- 水を含有する、請求項1〜7の何れか1項記載のバイオフィルム除去剤。
- (A)成分を1〜20質量%、(B)成分を1〜18質量%含有する、請求項1〜8の何れか1項記載のバイオフィルム除去剤。
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