JP2016104810A

JP2016104810A - バイオフィルム除去方法

Info

Publication number: JP2016104810A
Application number: JP2016032681A
Authority: JP
Inventors: 健太郎浅岡; Kentaro Asaoka; 磯部　和雄; Kazuo Isobe; 和雄磯部
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2016-02-24
Filing date: 2016-02-24
Publication date: 2016-06-09
Anticipated expiration: 2031-12-14
Also published as: JP6235055B2

Abstract

【課題】バイオフィルムを効率的に除去することができ、かつ、皮膚に対する刺激が低いバイオフィルム除去方法を提供する。【解決手段】（Ａ）アシル基の炭素数が８〜２２であるアシルグリシン塩、及び、炭素数が１６〜１８の不飽和脂肪酸塩からなる群より選ばれる１種以上の界面活性剤〔以下、（Ａ）成分という〕、並びに、（Ｂ）炭素数が４〜１０のアルコール〔以下、（Ｂ）成分という〕を含有する組成物を、バイオフィルムに適用する、バイオフィルム除去方法であって、前記組成物における（Ｂ）成分のＬｏｇＰ値が−０．４〜０であり、前記組成物における（Ａ）成分の含有量と（Ｂ）成分の含有量の質量比が、〔（Ｂ）成分の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．９〜６であり、前記組成物における界面活性剤〔但し、（Ａ）成分及び両性界面活性剤を除く〕〔以下、その他の界面活性剤という〕の含有量と（Ａ）成分の含有量との質量比が、〔その他の界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．６以下であり、かつ、前記組成物における（Ａ）成分の含有量と両性界面活性剤の含有量との質量比が、〔両性界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．１８以下であり、前記組成物におけるｐＨ（２５℃）が７〜１１である、バイオフィルム除去方法。【選択図】なし

Description

本発明は皮膚洗浄剤組成物に関する。より詳細には、微生物及び微生物産生物質からなるバイオフィルムを皮膚表面から効率的に除去し、微生物及び微生物産生物質からなるバイオフィルムに起因する危害を防止すると同時に、皮膚に対して低刺激性である皮膚洗浄剤組成物に関する。

バイオフィルムは生物膜やスライムとも言われ、一般に水系で微生物が物質の表面に付着・増殖することによって微生物細胞内から多糖やタンパク質、核酸などの高分子物質を産生して、微生物の生体及び死骸をもその構造の一部とする高分子フィルム状の構造体を形成したものを指す。バイオフィルムが形成されると、微生物を原因とする危害が発生して人体に様々な影響を及ぼす。

バイオフィルムを形成した微生物集合体に対しては、水系に分散浮遊状態にある微生物に対する場合と比較して、殺菌剤・静菌剤のような微生物制御薬剤の効果が十分に出ないことも多い。

例えば医療の面では近年、医療器具の狭い隙間や空孔内に微生物が残存してバイオフィルムを形成し、これを原因とする院内感染例が数多く報告されている。またヒト口腔内においては歯に形成するバイオフィルム、いわゆるデンタルプラーク（歯垢）がう蝕や歯周病の原因となることが知られており、これらの問題について長い間検討がなされている。さらに人の皮膚表面、特に褥瘡などの慢性皮膚創傷部位には例えば黄色ブドウ球菌、緑膿菌、レンサ球菌などからなるバイオフィルムが形成され、これが存在することにより創傷の治癒を遅延させることが知られている（非特許文献１、２）。

特許文献１〜７にはアシルグリシンナトリウムまたはアシルグリシンカリウムと、ジプロピレングリコールや１，３−ブチレングリコールなどを含有する様々な皮膚洗浄剤組成物に関する技術が提案されている。特許文献１、５、７の組成物は、アニオン界面活性剤、ノニオン界面活性剤及び両性界面活性剤を含有する。特許文献２の組成物は、アニオン界面活性剤を含有する。特許文献３の組成物は、アニオン界面活性剤と両性界面活性剤を含有する。特許文献４の組成物は、両性界面活性剤とノニオン界面活性剤を含有する。特許文献５の組成物は、両性界面活性剤を含有する。

特許文献８には多価アルコールを使用することによるアニオン性界面活性剤の刺激低減化方法が開示されている。

特許文献９には脂肪酸又はその塩とアニオン性又は両性界面活性剤を含有する皮膚用液体洗浄剤組成物が開示されている。

特開２０００−８７０８１号公報特開２０００−１４３４９７号公報特表２００３−５２１５７０号公報特開２００４−３０７２６０号公報特開２００６−１８３０３９号公報特開２０１０−２４１７４０号公報国際特許公開１９９４−２２９９４号公報特開２００２−５３４５７号公報特開平９−２２７３５８号公報

James G. A. et al., Wound Rep. Reg., 16, 37-(2008) S. Percivalら、"Microbiologyof Wounds"、CRC Press社

バイオフィルムは、微生物細胞内から多糖やタンパク質、核酸などの高分子物質を産生して、微生物の生体及び死骸をもその構造の一部とする高分子フィルム状の構造体を形成したものが作られていることから、酵素や殺菌剤などの薬剤をバイオフィルムの深部まで作用させることは難しい。

また、特許文献１、２、３、６に開示されている皮膚洗浄剤組成物は何れも皮膚に対して低刺激性であることに対して満足できるものではなく、特許文献４、５、８、９に開示されている皮膚洗浄剤組成物はバイオフィルムを効率的に除去することに対して満足できず、特許文献７は開示されている皮膚洗浄剤組成物はバイオフィルムを効率的に除去すること、皮膚に対して低刺激性であることを両立する性能を有してはいなかった。すなわち今までの技術ではバイオフィルムを効率的に除去し、かつ皮膚に対して低刺激性であることを両立する皮膚洗浄剤を達成することは困難であった。

本発明の課題は、バイオフィルムを効率的に除去することができ、かつ、皮膚に対する刺激が低い皮膚洗浄剤組成物を提供することである。

本発明は、（Ａ）アシル基の炭素数が８〜２２であるアシルグリシン塩、及び、炭素数が１６〜１８の不飽和脂肪酸塩からなる群より選ばれる１種以上の界面活性剤〔以下、（Ａ）成分という〕、並びに、（Ｂ）炭素数が４〜１０のアルコール〔以下、（Ｂ）成分という〕を含有する皮膚洗浄剤組成物であって、
（Ｂ）成分のＬｏｇＰ値が−０．４〜０であり、
（Ａ）成分の含有量と（Ｂ）成分の含有量の質量比が、〔（Ｂ）成分の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．９〜６であり、
界面活性剤（但し、（Ａ）成分及び両性界面活性剤を除く）〔以下、その他の界面活性剤という〕の含有量と（Ａ）成分の含有量との質量比が、〔その他の界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．６以下であり、かつ、
（Ａ）成分の含有量と両性界面活性剤の含有量との質量比が、〔両性界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．１８以下である、
皮膚洗浄剤組成物に関する。

本発明によると、バイオフィルムを効率的に除去することができ、かつ、皮膚に対する刺激が低い皮膚洗浄剤組成物が提供される。

＜（Ａ）成分＞
本発明の皮膚洗浄剤組成物は、（Ａ）成分として、（Ａ）アシル基の炭素数が８〜２２であるアシルグリシン塩〔以下、（Ａ１）成分という〕、及び、炭素数が１６〜１８の不飽和脂肪酸塩〔以下、（Ａ２）成分という〕からなる群より選ばれる１種以上の界面活性剤を含有する。本発明の皮膚洗浄剤組成物は、（Ａ１）成分を含有するのが好ましく、（Ａ１）成分及び（Ａ２）成分を含有するのがより好ましい。

（Ａ１）成分のアシル基は、バイオフィルム除去性の観点から、炭素数が８〜２２であり、１０〜２２であることが好ましく、１２〜１８であることがより好ましく、１２〜１４であることがさらに好ましい。（Ａ１）成分のアシル基はＲ−ＣＯで表される基である（例えば、下記一般式（Ａ−１）参照）。（Ａ１）成分のアシル基のＲは炭化水素基であるが、該炭化水素基はヒドロキシ基で置換されていてもよい。（Ａ１）成分のアシル基の炭素数は、バイオフィルム除去性の観点から、７〜２１であり、９〜２１であることが好ましく、１１〜１７であることがより好ましく、１１〜１３であることがさらに好ましい。

（Ａ１）成分としては、下記一般式（Ａ−１）で表される化合物〔以下、化合物（Ａ１）という〕が好ましい。
Ｒ−ＣＯＮＨ−ＣＨ₂−ＣＯＯ^-Ｍ⁺ （Ａ−１）
［一般式（Ａ−１）において、Ｒは炭素数７〜２１の炭化水素基を示し、該炭化水素基はヒドロキシ基で置換されていてもよい。Ｍ⁺はアルカリ金属イオン、アルカノールアンモニウムイオン、又は、正に帯電した塩基性アミノ酸を示す。］

一般式（Ａ−１）において、Ｒの炭化水素基としては、アルキル基、アルケニル基及びヒドロキシアルキル基が挙げられ、アルキル基、アルケニル基が好ましく、これらは直鎖でも分岐鎖でもよいが、バイオフィルム除去効果の点から、炭素数７〜２１のものであり、炭素数９〜２１のものが好ましく、炭素数１１〜１７のものが好ましく、中でも、炭素数１１〜１３のアルキル基、炭素数１１〜１７のアルケニル基が更に好ましい。また、Ｒは単一組成の炭化水素基であっても混合組成の炭化水素基であってもよく、天然由来（例えば、ヤシ油、パーム核油、大豆、菜種由来）の様々な鎖長のアルキル基（混合アルキル基）を有する混合組成の炭化水素基も好適に用いることができる。

一般式（Ａ−１）において、Ｍ⁺は、バイオフィルム除去効果の点から、アルカリ金属
イオン、アルカノールアンモニウムイオン、又は正に帯電した塩基性アミノ酸であり、アルカリ金属イオンが好ましい。アルカリ金属イオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオンが好ましく、カリウムイオンがより好ましい。アルカノールアンモニウムイオンとしては、トリエタノールアンモニウムイオン、メチルプロパノールアンモニウムイオンが好ましく、正に帯電した塩基性アミノ酸としては、正に帯電したアルギニン、正に帯電したヒスチジン、正に帯電したリジンが好ましい。

（Ａ１）成分、例えば、化合物（Ａ１）は、（ヒドロキシ）脂肪酸とグリシンを反応させることにより得られるが、製造方法は特に限定されるものではない。また、（Ａ１）成分、例えば、化合物（Ａ１）は、バイオフィルム除去効果を阻害しない範囲で未反応物、副生成物を含んでいてもよい。

（Ａ２）成分としては、下記一般式（Ａ−２）で表される化合物〔以下、化合物（Ａ２）という〕が好ましい。
Ｒ’−ＣＯＯ^-Ｍ’⁺ （Ａ−２）
［一般式（Ａ−２）において、Ｒ’は不飽和結合を１つ以上含む炭素数１５〜１７の炭化水素基である。Ｍ’⁺はアルカリ金属イオン、アルカノールアンモニウムイオン、又は、正に帯電した塩基性アミノ酸を示す。］

一般式（Ａ−２）において、Ｒ’の炭化水素基は、直鎖でも分岐鎖でもよい。炭化水素基としては、バイオフィルム除去効果の点から、炭素数１５〜１７であり、工業的利用性（汎用性）の観点から炭素数１７が好ましい。また炭化水素基はその水素原子がヒドロキシ基で置換されていてもよい。

一般式（Ａ−２）において、Ｍ’⁺はアルカリ金属イオン、アルカノールアンモニウムイオン、又は、正に帯電した塩基性アミノ酸である。アルカリ金属イオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオンが好ましく、カリウムイオンがより好ましい。また、アルカノールアンモニウムイオンとしては、トリエタノールアンモニウムイオン、メチルプロパノールアンモニウムイオンが好ましい。また、正に帯電した塩基性アミノ酸としては、正に帯電したアルギニン、正に帯電したヒスチジン、正に帯電したリジンが好ましい。バイオフィルム除去効果の点から、Ｍ’⁺はアルカリ金属イオンが好ましい。

（Ａ２）成分は、バイオフィルム除去効果の観点から、不飽和結合を１〜３有するもの（例、リノレン酸塩）が好ましく、１〜２有するものがより好ましい。安定性の観点から、不飽和結合の数は１が好ましい。一般式（Ａ−２）中のＲ’も同様である。

（Ａ２）成分の好適な例としては、オレイン酸、パルミトレイン酸、リノール酸、リノレン酸、及び、リシノール酸から選ばれる不飽和脂肪酸の塩、例えばアルカリ金属塩、アルカノールアミン塩、塩基性アミノ酸塩が挙げられる。中でも、オレイン酸、パルミトレイン酸、及び、リノール酸から選ばれる不飽和脂肪酸の塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩が高いバイオフィルム除去性能を示すため好ましい。オレイン酸塩が好ましく、更にオレイン酸アルカリ金属塩が好ましい。さらに、オレイン酸のナトリウム塩、オレイン酸のカリウム塩が好ましく、オレイン酸のカリウム塩がより好ましい。

本発明の皮膚洗浄剤組成物は、（Ａ）成分として、（Ａ１）成分及び（Ａ２）成分の両方を含有することが好ましい。その場合、組成物中の（Ａ１）成分の含有量と（Ａ２）成分の含有量（Ａ２）の質量比〔（Ａ１）成分の含有量〕／〔（Ａ２）成分の含有量〕は、バイオフィルム除去性能、皮膚に対する低刺激性の両立の面から２０／８０〜８０／２０が好ましく、３０／７０〜７０／３０がより好ましい。

＜（Ｂ）成分＞
本発明の皮膚洗浄剤組成物は、バイオフィルム除去性能、皮膚に対する低刺激性を両立する観点から、（Ｂ）成分として、炭素数が４〜１０のアルコールを含有する。（Ｂ）成分が有する水酸基の数は１〜８、更に１〜４、より更に１〜２個が好ましい。（Ｂ）成分の有機化合物のＬｏｇＰ値は−０．４〜０である。本発明のＬｏｇＰ値は、オクタノール／水分配係数であり、Chembio Office2008のChemdraw ultra 11.0（Hulinks社）による計算予測値である。（Ｂ）成分のアルコールとしては、１，３−ブチレングリコール（炭素数４、ＬｏｇＰ＝−０．３７）、ジプロピレングリコール（炭素数６、ＬｏｇＰ＝−０．３１）、エチルジグリコール（炭素数６、ＬｏｇＰ＝−０．２５）、イソプレングリコール（炭素数５、ＬｏｇＰ＝−０．１５）が挙げられる。

バイオフィルム除去性能の観点から、（Ｂ）成分は、ＬｏｇＰ値が−０．４〜−０．２であることが好ましく、−０．４〜−０．３５であることがより好ましい。（Ｂ）成分としては、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、及び、エチルジグリコールから選ばれる１種以上であることが好ましく、１，３−ブチレングリコール、及び、ジプロピレングリコールから選ばれる１種以上であることがより好ましい。

＜（Ａ）成分以外の界面活性剤＞
本発明の皮膚洗浄剤組成物は、（Ａ）成分以外の界面活性剤を含有することができるが、バイオフィルム除去性能の観点から、その含有量は制限される。（Ａ）成分以外の界面活性剤としては、（１）（Ａ）成分及び両性界面活性剤以外の両性界面活性剤（以下、その他の界面活性剤という）、（２）両性界面活性剤が挙げられ、本発明では、後述の通り、（Ａ）成分の含有量に対するこれら界面活性剤の含有量が所定範囲とされる。

その他の界面活性剤としては、（Ａ）成分以外のアニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、及びノニオン界面活性剤から選ばれる１種以上が挙げられる。

また、その他の界面活性剤としては、（Ａ）成分以外のアニオン界面活性剤、及びノニオン界面活性剤から選ばれる１種以上が挙げられる。

（Ａ）成分以外のアニオン界面活性剤としては、不飽和脂肪酸塩以外の脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル硫酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキルアミドスルホン酸塩、アルキルアリールスルホン酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、オレフィンスルホン酸塩、パラフィンスルホン酸塩、アルキルスルホコハク酸塩、アルキルエーテルスルホコハク酸塩、ポリオキシアルキレンアルキルエーテルカルボン酸塩、アルキルアミドスルホコハク酸塩、アルキルサクシンアミド塩、アルキルスルホ酢酸塩、アシルサルコシン塩、アシルイセチオン酸塩、アルケニルコハク酸塩、アルキルエーテル酢酸塩、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル酢酸塩；アルキルリン酸塩、アルキルエーテルリン酸塩、ポリオキシアルキレンアルキルエーテルリン酸塩等のリン酸塩；Ｎ−アシルタウリン塩、Ｎ−アシルアラニン塩、Ｎ−アシルグルタミン酸塩、Ｎ−アシルアスパラギン酸塩等のアシル化アミノ酸塩等が挙げられる。

カチオン界面活性剤としては、ジアルキル（炭素数１０〜２４）−ジメチル−アンモニウム・塩化物または臭化物、アルキル（炭素数１０〜２４）−ジメチル−エチル−アンモニウム・塩化物または臭化物、トリアルキル（炭素数１０〜２４）−トリメチル−アンモニウム・塩化物または臭化物、アルキル（炭素数１０〜２４）−ジメチル−ベンジルアンモニウム・塩化物または臭化物などの第４級アンモニウム塩、好ましくは炭素数１０〜２４のアルキル基を１〜３個有する第４級アンモニウム塩等が挙げられる。

ノニオン界面活性剤としては、脂肪アルコールエトキシレート（アルキル−ポリエチレングリコール）、アルキルフェノール−ポリエチレングリコール、アルキル化ポリエチレングリコール、脂肪アミンエトキシレート（アルキルアミノポリエチレングリコール）、脂肪酸エトキシレート（アシルポリエチレングリコール）、ポリプロピレングリコールエトキシレート、脂肪酸アルキルアミド（脂肪酸アミノポリエチレングリコール）、サッカロースエステル、ソルビトールエステル、およびポリグリコールエーテル、アルキルポリグルコシド等が挙げられる。

両性界面活性剤としては、イミダゾリン（アミドアミン）、アミドアミノ酸塩、カルボベタイン（アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン）、スルホベタイン（アルキルスルホベタイン、アルキルヒドロキシスルホベタイン）、ホスホベタイン、アシル第３級アミンオキサイド、アシル第３級ホスフォンオキシド等が挙げられる。これらのうち、カルボベタイン（アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン）及びスルホベタイン（アルキルスルホベタイン、アルキルヒドロキシスルホベタイン）から選ばれる１種以上の両性界面活性剤の含有量を制限することが好ましい。

両性界面活性剤は、上記で定義されるように、「その他の界面活性剤」からは除かれる。

＜皮膚洗浄剤組成物＞
本発明の皮膚洗浄剤組成物において、組成物中の（Ａ）成分の含有量と（Ｂ）成分の含有量の質量比は、バイオフィルム除去性能と皮膚に対する低刺激性を両立する観点から、〔（Ｂ）成分の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．９〜６である。好ましくは１．５〜４であり、より好ましくは２〜４である。

また、本発明の皮膚洗浄剤組成物において、組成物中の（Ａ）成分の含有量とその他の界面活性剤の含有量との質量比は、バイオフィルム除去性能の観点から、〔その他の界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．６以下である。好ましくは０．３以下である。また、その他の界面活性剤を含有しない、つまりこの質量比が０であってもよい。

また、本発明の皮膚洗浄剤組成物において、組成物中の（Ａ）成分の含有量と、両性界面活性剤の含有量との質量比は、バイオフィルム除去性能の観点から、〔両性界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．１８以下である。好ましくは０．１５以下であり、より好ましくは０．０９以下である。また、この質量比が０、つまり、本発明の皮膚洗浄剤組成物は両性界面活性剤を含有しなくてもよい。

上記の各質量比を満たした上で、本発明の皮膚洗浄剤組成物は、バイオフィルム除去性能の観点から、（Ａ）成分を２〜３０質量％、更に３〜２０質量％、より更に４〜１０質量％含有することができる。また、（Ｂ）成分を２〜３０質量％、更に５〜２０質量％、より更に７〜１５質量％含有することができる。

上記の各質量比を満たした上で、本発明の皮膚洗浄剤組成物中の両性界面活性剤の含有量は、バイオフィルム除去性能の観点から、５質量％以下、さらに１質量％以下、よりさらに０．３質量％以下であることが好ましい。両性界面活性剤の含有量は０質量％、つまり、本発明の皮膚洗浄剤組成物は両性界面活性剤を含有しないことが好ましい。

上記の各質量比を満たした上で、本発明の皮膚洗浄剤組成物中のその他の界面活性剤の含有量は、バイオフィルム除去性能の観点から、１０質量％以下、さらに５質量％以下、よりさらに１質量％以下であることが好ましい。その他の界面活性剤の含有量は０質量％、つまり、本発明の皮膚洗浄剤組成物はその他の界面活性剤を含有しないことが好ましい。

本発明の皮膚洗浄剤組成物は、水を含有することが好ましい。水は組成物の残部であるが、組成物中に９８〜４０質量％、更に９５〜６０質量％、より更に９０〜７０質量％含有することができる。

本発明の皮膚洗浄剤組成物は、バイオフィルムの効率的な除去と皮膚に対する低い刺激の観点から、ｐＨ（２５℃）が、７〜１１であることが好ましく、７．５〜１０．５であることがより好ましく、８〜１０であることが更に好ましい。

本発明の皮膚洗浄剤組成物は、バイオフィルム除去性能、皮膚に対する低刺激性の面で阻害しない限り、（Ａ）成分、（Ｂ）成分、その他の界面活性剤、及び両性界面活性剤以外の成分を含有することができる。

本発明の皮膚洗浄剤組成物は、そのままあるいは希釈して皮膚の洗浄に用いることができる。皮膚に適用する際の濃度としては、（Ａ）成分が１〜２０質量％、更に２〜１５質量％、より更に３〜１０質量％が好ましく、また、（Ｂ）成分が１〜１８質量％、更に４〜１５質量％、より更に６〜１２質量％が好ましい。

本発明の皮膚洗浄剤組成物は、例えば、チューブタイプ、スプレータイプ、ポンプタイプ、ジャータイプ等の容器に封入して使用される。本発明の皮膚洗浄剤組成物の使用の簡便性の観点から、ポンプタイプの容器を用いることが好ましく、さらに、ポンプタイプの容器の中でもフォーマー容器に封入して用いる方法が好ましい。よって、本発明では、本発明の皮膚洗浄剤組成物を、泡吐出機構を備えた容器に充填してなる皮膚洗浄剤物品を提供することができる。

実施例１〜２０及び比較例１〜２２
表１、２に示す成分を用い、以下に示す方法で表に示す組成の皮膚洗浄剤組成物を調製した。下記方法により、黄色ブドウ球菌の形成するバイオフォルム（ＢＦ）の除去性能、及び、皮膚刺激性の評価を行った。

《皮膚洗浄剤組成物の調製》
１００ｍｌのガラスビーカーに、スターラーピース（直径８ｍｍ、長さ３０ｍｍ、増田理化工業製）を挿入し、さらに皮膚洗浄剤組成物の出来上がり質量が１００ｇとなるように、表１、２に示す質量比率にて、全ての成分を投入した。ウォーターバスにて８０℃まで昇温し、１００ｒｐｍで３０分間撹拌した。水溶液の外観が均一になったことを確認し、室温（２５℃）まで冷却した。

《ｐＨ（２５℃）の測定》
皮膚洗浄剤組成物のｐＨ（２５℃）は、HORIBA pH Meter F-21（（株）堀場製作所製）を用いて原液で測定した。

《バイオフィルム除去性能の評価》
黄色ブドウ球菌（NBRC13276）１株を、２５ｍｌのTBSNo.2培地（シグマ社製）で３７℃、２２時間振盪培養した（得られた液を「菌液」とよぶ）。波長６００ｎｍの光により菌液の濁度を測定し（濁度計 HITACHI社製 U-2800）、濁度が０．１となるようにTBS No.2培地で菌液を希釈した（得られた液を「希釈した菌液」と呼ぶ）後、底面が平面である滅菌９６ウェルプレート（ファルコン社製）の各ウェルに希釈した菌液を０．１５ｍｌ添加して、３７℃、２４時間あるいは４８時間静置培養した。また、ポジティブコントロールとして、同じプレートの異なるウェルに菌を含まないTSB No.2培地を０．１５ｍｌ加えたサンプルも調製した。上澄みを廃棄後、各ウェルに０．２ｍｌの滅菌生理食塩水（以下、生食という）を添加し、上澄みを廃棄する操作（以下、washという）を２回行った。次いで、各ウェルに０．２ｍｌの生食を添加し、表１、２に示す各皮膚洗浄剤組成物を添加する直前まで保持した。

上澄みの廃棄直後、特に記載がない限り、室温（２５℃）で保存した表１、２に示す各皮膚洗浄剤組成物を各ウェルに添加し、室温（２５℃）で1分放置した。その後上澄みを廃棄し、2回washした。また、皮膚洗浄剤組成物の代わりに生食を用いて同様の操作を行ったものをネガティブコントロールとし、ポジティブコントロールは生食で同様の操作を実施した。
その後、各ウェルに、クリスタルバイオレット（和光純薬工業（株）製）の０．１％水溶液０．２ｍｌを添加し、室温で１時間放置した。生食で１回washした後、エタノール（シグマ社製）０．２ｍｌを各ウェルに添加し、４℃で一晩放置した。次いで、各ウェルに関し、５７０ｎｍの吸光度を測定した。得られた吸光度値を下記の式に代入し、バイオフィルム除去率を算出した。
なお、上記全ての工程は無菌状態にて実施した。

バイオフィルム除去率（％）＝１００×［（Ａｎ−Ａｐ）−（Ａｓ−Ａｐ）］／（Ａｎ−Ａｐ）

式中、
Ａｓ：サンプル吸光度
Ａｎ：ネガティブコントロール吸光度
Ａｐ：ポジティブコントロール吸光度

《皮膚刺激性の評価》
In vitro試験で皮膚刺激性を予測できることが知られている三次元皮膚モデルを用い、その生細胞率を算出して皮膚刺激性を測定した〔参考文献１：加藤ら、第22回日本動物実験代替法学会（2009年）、参考文献２：LabCyteエピモデル取扱説明書〕。三次元皮膚モデルとして、株式会社ジャパン・ティッシュ・エンジニアリング（略称J-TEC）製のLabCyte EPI-MODEL 24（ラボサイトエピ・モデル 24ウェル）（以降エピモデルと略す）を用いた。
本評価の操作は無菌状態で行った。エピモデルに同封されているアッセイ培地（以降アッセイ培地と略す。）をあらかじめ37℃に加温し、24個のウェルの各ウェルに0.5（ml）分注した。エピモデルをアッセイ培地が分注された24個のウェルに移し、37℃、5％ CO₂の嫌気条件下で1時間以上培養した。
その後各種サンプル溶液（皮膚洗浄剤組成物の原液）をエピモデルの表面に50（μl）添加し１０分放置した。このときネガティブコントロールを生食で処理したものとした。その後溶液を廃棄し、0.5（ml）の生食で5回ウォッシュした。アッセイ培地を交換し、37℃、5％ CO₂の嫌気条件下で42時間培養した。アッセイ培地を廃棄後、37℃にあらかじめ加温した0.5（mg / ml）MTT（3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide、関東化学）/ DMEM培地（ギブコBRL）に置換し、37℃、5％ CO₂の嫌気条件下で3時間培養した。陰性対象のウェルが青紫色に染まっていることを確認後、ヒト表皮組織を底面のフィルムごとメスで切り取って採取した。表皮組織をマイクロチューブに加え、0.5（ml）のイソプロピルアルコール（以降IPAと略す。）（和光純薬工業（株）製）を添加し、室温、暗所で1晩放置した。抽出溶液を0.2（ml）分取り、96ウェルに加えた（ブランクにIPAを同量添加）。サンプル、ネガティブコントロール（生食）、及びブランクのそれぞれについて、570（nm）、650（nm）の吸光度を測定し、570（nm）の吸光度の値から650（nm）の吸光度の値を差し引き、下記の計算式で用いる吸光度の値（Ｂｓ、Ｂｎ、Ｂｂ）に用いた。以下の式で生細胞率を算出し、皮膚刺激性を測定した。
生細胞率（％）＝１００×（Ｂｓ−Ｂｂ）／（Ｂｎ−Ｂｂ）

式中、
Ｂｓ：サンプル吸光度
Ｂｎ：ネガティブコントロール（生食）吸光度
Ｂｂ：ブランク（IPA単独）吸光度

以下に表１、表２に記載した化合物の説明をする。なお、表中の含有量は有効分に基づく質量％である。また、（Ｂ）成分、（Ｂ）成分のＬｏｇＰ値は、全て、Chembio Office2008のChemdraw ultra 11.0（Hulinks社）による計算予測値である。
（Ａ）成分：
・ココイルグリシンカリウム塩：アミライトGCK-12K（味の素株式会社製）有効分３０％（残部は水）、表には有効分のアシルグリシン塩を（Ａ）成分として記載した。〔ココイル基の脂肪酸組成はＣ12：44％、Ｃ14：16％、Ｃ18：10％（飽和3％、不飽和7％の合計）、Ｃ16：8％、Ｃ8：8％、Ｃ10：6％、出典稲葉恵一、平野二郎著脂肪酸化学（昭和56年初版）〕
・オレイン酸カリウム塩：（試薬）有効分１９％（残部は水）
（Ｂ）成分：
・１，３−ブチレングリコール：（試薬）
・ジプロピレングリコール：（試薬）
・エチルジグリコール：（試薬）
・イソプレングリコール：（試薬）

（Ａ）成分以外の界面活性剤：
＜その他の界面活性剤＞
・ラウロイルメチルタウリン塩：ニッコールLMT（日光ケミカル株式会社製）
・ラウロイルサルコシン塩：（試薬）
・ラウリン酸ナトリウム塩：（試薬）
・アシルグルタミン酸カリウム塩：アミソフトＬＫ-11（Ｆ）（味の素株式会社製）
・ヤシ油脂肪酸ソルビタン：レオドールＳＰ−Ｌ10（花王株式会社製）
・グリセリンモノ−２−エチルヘキシルエーテル：ペネトールGE-EH（花王株式会社製）
・ステアリン酸カリウム塩：（試薬）
＜両性界面活性剤＞
・アルキルヒドロキシスルホベタイン：アンヒトール20HD（花王株式会社製）
・アルキルアミドプロピルベタイン：アンヒトール20AB（花王株式会社製）

（Ｂ’）成分〔（Ｂ）成分の比較化合物〕：
・グリセリン：化粧品用濃グリセリン（花王株式会社製）
・プロピレングリコール：化粧用プロピレングリコール（株式会社ＡＤＥＫＡ製）
・メタノール：（試薬）
・ベンジルアルコール：（試薬）

Claims

（Ａ）アシル基の炭素数が８〜２２であるアシルグリシン塩、及び、炭素数が１６〜１８の不飽和脂肪酸塩からなる群より選ばれる１種以上の界面活性剤〔以下、（Ａ）成分という〕、並びに、（Ｂ）炭素数が４〜１０のアルコール〔以下、（Ｂ）成分という〕を含有する組成物を、バイオフィルムに適用する、バイオフィルム除去方法であって、
前記組成物における（Ｂ）成分のＬｏｇＰ値が−０．４〜０であり、
前記組成物における（Ａ）成分の含有量と（Ｂ）成分の含有量の質量比が、〔（Ｂ）成分の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．９〜６であり、
前記組成物における界面活性剤〔但し、（Ａ）成分及び両性界面活性剤を除く〕〔以下、その他の界面活性剤という〕の含有量と（Ａ）成分の含有量との質量比が、〔その他の界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．６以下であり、かつ、
前記組成物における（Ａ）成分の含有量と両性界面活性剤の含有量との質量比が、〔両性界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．１８以下であり、
前記組成物におけるｐＨ（２５℃）が７〜１１である、
バイオフィルム除去方法。
前記組成物を、皮膚に形成されたバイオフィルムに適用する、請求項１記載のバイオフィルム除去方法。
前記組成物における（Ａ）成分が、アシル基の炭素数が８〜２２であるアシルグリシン塩、及び、炭素数が１６〜１８の不飽和脂肪酸塩である、請求項１又は２記載の皮膚洗浄剤組成物。
前記組成物における（Ｂ）成分のＬｏｇＰ値が−０．４〜−０．２である、請求項１〜３の何れか１項記載のバイオフィルム除去方法。
前記組成物における（Ｂ）成分が、１，３−ブチレングリコールである、請求項１〜４の何れか１項記載のバイオフィルム除去方法。
前記組成物におけるその他の界面活性剤が、（Ａ）成分以外のアニオン界面活性剤、及び、ノニオン界面活性剤から選ばれる１種以上である、請求項１〜５の何れか１項記載のバイオフィルム除去方法。
前記組成物における両性界面活性剤が、カルボベタイン及びスルホベタインから選ばれる１種以上のベタインである請求項１〜６の何れか１項記載のバイオフィルム除去方法。
前記組成物が水を含有する、請求項１〜７の何れか１項記載のバイオフィルム除去方法。
前記組成物が（Ａ）成分を１〜２０質量％、（Ｂ）成分を１〜１８質量％含有する、請求項１〜８の何れか１項記載のバイオフィルム除去方法。
（Ａ）アシル基の炭素数が８〜２２であるアシルグリシン塩、及び、炭素数が１６〜１８の不飽和脂肪酸塩からなる群より選ばれる１種以上の界面活性剤〔以下、（Ａ）成分という〕、並びに、（Ｂ）炭素数が４〜１０のアルコール〔以下、（Ｂ）成分という〕を含有するバイオフィルム除去剤であって、
（Ｂ）成分のＬｏｇＰ値が−０．４〜０であり、
（Ａ）成分の含有量と（Ｂ）成分の含有量の質量比が、〔（Ｂ）成分の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．９〜６であり、
界面活性剤〔但し、（Ａ）成分及び両性界面活性剤を除く〕〔以下、その他の界面活性剤という〕の含有量と（Ａ）成分の含有量との質量比が、〔その他の界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．６以下であり、かつ、
（Ａ）成分の含有量と両性界面活性剤の含有量との質量比が、〔両性界面活性剤の含有量〕／〔（Ａ）成分の含有量〕で０．１８以下であり、
ｐＨ（２５℃）が７〜１１である、
バイオフィルム除去剤。
皮膚用である、請求項１０記載のバイオフィルム除去剤。