JP6183471B2 - 生体分子解析キット及び生体分子解析方法 - Google Patents
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Description
本願は、2014年1月31日に日本に出願された特願2014−017942号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
例えば、ヒトの遺伝子病は、一つの遺伝子中のSNPが病気の原因となると考えられている。また、生活習慣病やガンなどは、複数の遺伝子におけるSNPが影響していると考えられている。したがって、SNPの解析は、創薬ターゲットの探索または副作用の予見などの医薬品の開発において、極めて有効であると考えられる。このため、SNPの解析は世界的な巨大プロジェクトとして押し進められている。
近年、あらかじめ患者の遺伝子を解析することによって、最適な薬剤を選択し患者に投与する方法が考えられている。さらに、単一遺伝子疾患のみならず多因子疾患についても、遺伝子診断の意義が急速に高まりつつある。また、病原細菌やウイルスを標的とした薬物の効果は、同一種であっても、個体毎に異なることがあり、これらは個体毎の遺伝子の微細な違いによることが多い。このような外来因子である病原細菌やウイルスの遺伝子診断も、今後は検査対象が確実に増加することが予想される。
このように、ポストゲノム時代の医療においては、ヒトや病原微生物の遺伝子の微細な違い、とりわけSNPを解析できることは重要であり、今後もその重要性が増すと予想される。
SNPを解析する場合、目的とする遺伝子断片は試料中にわずかしか含まれていないのが一般的である。この場合、目的とする遺伝子を、何らかの方法によって予め増幅させておくことが必要となる。PCR(Polymerase Chain Reaction)法は、迅速かつ再現性の高い遺伝子増幅法として従来からよく知られている。
二段階反応を必要としないSNP検出方法として、インベーダー法がある。インベーダー法はPCRの増幅を必要とせず、等温で反応を進めることができるため、装置が小型化できる。しかし、インベーダー法では、遺伝子の増幅工程を含まないので、シグナル増幅が遅く、検出判定を行うためには数時間の反応時間を要する。インベーダー法は、酵素反応を用いた検出方法である。その中でも、酵素を用いたシグナル増幅において、シグナルの濃度が飽和する時間を短縮する方法として、微小空間内で反応させる方法が考えられる。
微小空間においてインベーダー反応を行うと、1ウェルに含まれる解析対象の分子が1つ以下になるようにでき、解析対象分子が見かけ上濃縮された状態になるため、シグナルが飽和する時間を短縮することができる。また、1ウェルに入る検出分子を1つ以下にしているため、シグナルが得られたウェルをカウントすることで、検出分子の濃度を正確に調べることが可能である。
たとえば特許文献1では、1pl以下の容積を有する微小空間内で酵素反応を行うことで遺伝子検査が可能であることが示されている。
解析対象となる前記試料が、DNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つを含み、解析対象物質がDNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つであってもよい。
解析対象物質が核酸であり、前記酵素反応がインベーダー反応であり、前記低吸着構造部は、蛍光物質が透過不能な分子構造を有する高分子被膜を含んでいてもよい。
前記試薬は、蛍光、発光、pH、吸光、電位のいずれか1つによりシグナルを発してもよい。
前記吸着防止剤が界面活性剤であってもよい。
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤であってもよい。
前記非イオン性界面活性剤がTween20であってもよい。
前記非イオン性界面活性剤がTriton−100であってもよい。
前記界面活性剤の濃度が0.0005%以上0.5%以下であってもよい。
本発明の他の生体分子解析方法は、酵素と、解析対象となる試料を流路を通じて供給可能な複数の容器形状部及び前記容器形状部が形成された基体部及び前記基体部の表面であって複数の前記容器形状部の間に位置する部位に設けられた疎水性の面を有し酵素反応を行うための反応容器とを用いて解析を行う生体分子解析方法であって、前記反応容器に対し、前記酵素が前記複数の容器形状部の間の領域に吸着されるのを低減するための界面活性剤を含有するバッファーを前記流路を通じて前記複数の容器形状部に充填し、前記複数の容器形状部から前記バッファーを排出しつつ前記複数の容器形状部に試薬を充填し、前記流路に疎水性の油性封止液を送液し、前記容器形状部外の前記流路に存在する前記酵素を前記反応容器の外へ移動させ、且つ前記複数の容器形状部内の前記試薬を前記油性封止液により封止することにより、前記複数の容器形状部を複数の独立した核酸検出反応容器とする。
前記界面活性剤の濃度は0.0005%以上0.5%以下であってもよい。
以下、本発明の第一実施形態に係る生体分子解析キット及び生体分子解析方法を、図1及び図2を参照しながら説明する。
図1は、本実施形態に係る生体分子解析方法を適用可能な生体分子解析キットの断面図である。本実施形態に係る生体分子解析キットでは、解析する生体分子として、DNA、RNA、miRNA、mRNA(以下、RNA類と言うことがある。)、タンパク質のいずれかが選ばれる。
反応容器10は、一端が開口された有底円柱形状の微小空間11(容器形状部)を有するように成形された基体部2と、基体部2の表面に配された低吸着構造部3と、を有する。
ポリジメチルシロキサン(PDMS(polydimethylsiloxane))製の軟性平板12に対してインプリントにより微小空間11が作製されることによって、反応容器10が形成される。
たとえば、微小空間11は、軟性平板12において縦横5mmの長方形を有する表面に対して、その各辺に沿った格子状に配列される。各微小空間11の間の隙間の大きさは、各微小空間11において独立してシグナル検出ができる分解能に応じて設定される。
微小空間11の容積は適宜設定されてよいが、微小空間11の容積が小さい方がシグナル検出可能となるまでの反応時間を短縮可能である。一例として、微小空間11の容積は、100ピコリットル(pl)またはそれ以下である。
(構成例1)
低吸着構造部3は、基体部2の表面のうち反応容器10の微小空間11の内面に位置する領域が疎水性を有する。たとえば、低吸着構造部3は、基体部2の表面が疎水性となるように改質することで形成される改質部4を有する。
(構成例2)
低吸着構造部3は、基体部2の表面のうち反応容器10の内面に位置する領域に低吸着物質層4Aを有する。低吸着物質層4Aは、本実施形態の生体分子解析キット100を用いた解析の対象となる試料あるいはその解析試薬の吸着率が低い材料から形成される。たとえば、低吸着物質層4Aは、疎水性の被膜である。
また、低吸着物質層4Aの他の例として、蛍光物質が透過不能な分子構造を有する高分子被膜を挙げることができる。この高分子被膜は、上記のPDMSと比較して密な分子構造を有することが好ましく、蛍光物質の透過を抑制することによってシグナル強度の低下を防止する効果を奏する。なお、PDMS以外に対しても、基体部2の材料となる物質の分子構造に基づいて、試薬の透過を防止可能な分子構造を有する高分子被膜が選択されてもよい。これらの高分子被膜はシグナル強度の低下を抑制する。
なお、低吸着構造部3における高分子被膜は、蛍光物質の透過を抑制する被膜に限られず、酵素反応に関わる物質の透過を抑制する被膜が、使用される試薬に応じて適宜選択されてよい。
本実施形態では、各試薬に吸着防止剤が含まれていることで、生体分子解析キット100の反応容器10の内面に対して試薬の構成成分が吸着されるのを防止することができる。
吸着防止剤の組成は、たとえば、界面活性剤、リン酸脂質、その他の高分子化合物のうちの少なくとも1種を含んだ組成であり、任意の材料を混合して用いても良い。例を挙げると、界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤が挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、Tweenやglycerоl、Triton−X100等が挙げられる。また、高分子化合物としては、Pоlyethyleneglycоl(PEG),DNA,蛋白質が挙げられる。
また、2種以上の材料が混合された吸着防止剤として、例えば、リン酸脂質とPEGとを混合した吸着防止剤が挙げられる。
界面活性剤として非イオン性界面活性剤を用いる場合、試薬に含まれる非イオン性界面活性剤の濃度は5%以下であることが好ましい。Tween20を用いる場合、試薬に含まれるTween20の濃度は0.0005%以上5%以下の範囲であることが好ましく、0.001%以上0.5%以下の範囲であることが特に好ましい。Tween20の濃度が0.0005%以上であると、複数の微小空間11における反応を独立して検出することができ、微小空間11の蛍光を正しく計測できる。Tween20の濃度が5%以下であると、十分な酵素反応が得られる。
また、微小空間11にオイルを入れる場合、オイルに上記の吸着防止剤を入れて用いても良い。
酵素反応に用いられる酵素、解析対象となる核酸やタンパク質、及びシグナル検出に利用される標識物質等のうちの少なくとも1つが最初に反応容器10の内部に供給される前から、シグナル検出が終了するまでの間に反応容器10の内部に接する試薬のすべてに吸着剤が含まれていても良い。
(第二実施形態)
図6は本実施形態に係る核酸定量用アレイデバイス20の断面図である。本実施形態に係る生体分子解析キットでは、解析する生体分子として、DNA、RNA、miRNA、mRNA(以下、RNA類と言うことがある。)、及びタンパク質のいずれかが選ばれる。
微小孔アレイは、基板24に直接形成されていてもよいし、微小孔アレイが形成された部材が基板24に、接着、溶着等の手段で固定して設けられてもよい。
各貫通孔25aの容積は適宜設定されてよいが、貫通孔25aの容積が小さい方がシグナル検出可能となるまでの反応時間を短縮可能である。
一例としては、各貫通孔25aの容積は、100ピコリットルまたはそれ以下である。
なお、本実施形態において、蛍光の検出以外に、可視光の発光、発色、pHの変化、電位変化などをシグナルとして検出する検出系を適用してもよい。また、タンパク質を解析するために本実施形態の構成を適用することも可能である。
各貫通孔25aの間隔(隙間)の大きさは、各貫通孔25aにおいて独立してシグナル検出ができる分解能に応じて設定される。
各貫通孔25aは微小孔アレイ層25に対して三角格子状をなして配列されている。
なお、各貫通孔25aの配列のされ方は特に限定されない。微小孔アレイ層25に形成された貫通孔25aと、基板24の表面24aとによって、基板24を底面部26aとする有底筒状の微小なウェル26(容器形状部)が基体部23には形成されている。
微小孔アレイ層25は、基板24上に積層された疎水性膜のベタパターンに対してエッチング,エンボス形成,あるいは切削等の加工が施されることによって貫通孔25aが形成される。また、微小孔アレイ層25が基板24と一体成型される場合は、基板24にエッチング,エンボス形成、あるいは切削等の加工が施されることによって、微小孔アレイ層25の貫通孔25aに相当する部分が形成される。これによって、疎水部及び親水部を有するパターンを基板に形成することができる。
図7及び図8に示すように、検出反応試薬21は、基体部23とカバー部27との間に注入口部から送液可能な溶液である。検出反応試薬21は、解析対象物質に対する酵素反応などの生化学的反応を行うための試薬である。
解析対象物質に対する生化学的反応は、たとえば、DNA(核酸)が解析対象物質の場合、核酸が存在する条件下でシグナル増幅が起こるような反応である。検出反応試薬21は、たとえば核酸を検出可能な方法に応じて選択される。たとえば、インベーダー(登録商標)法や、LAMP法(商標登録)、TaqMan(登録商標)法または、蛍光プローブ法やその他の方法に使用される試薬が本実施形態の検出反応試薬21に含まれる。
本実施形態では、解析対象物質が核酸のときに、従来のようなPCR法での核酸の増幅工程を行わずに検出可能であるが、必要に応じてPCR法等を使って解析対象核酸を増幅したものをサンプルとして用いても良い。
また、解析対象物質が核酸以外でも、本実施形態に適用できるように、必要な前処理を適宜行ってから本実施形態を適用することができる。
試薬の例としては、バッファー、検出反応試薬、サンプル(解析対象物:DNA、RNA類、タンパク質等)溶液、封止液、試薬やサンプルの希釈用溶媒が挙げられる。
吸着防止剤の組成は、たとえば、界面活性剤、リン酸脂質、その他の高分子化合物のうちの少なくとも1種を含んだ組成であり、任意の材料を混合して用いても良い。例を挙げると、界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤が挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、Tweenやglycerоl、Triton−X100等が挙げられる。また、高分子化合物としては、Pоlyethyleneglycоl(PEG)や,DNA, 蛋白質が挙げられる。
また、2種以上の材料が混合された吸着防止剤として、例えば、リン酸脂質とPEGとを混合した吸着防止剤が挙げられる。
界面活性剤として非イオン性界面活性剤を用いる場合、試薬に含まれる非イオン性界面活性剤の濃度は5%以下であることが好ましい。Tween20を用いる場合、試薬に含まれるTween20の濃度は0.0005%以上5%以下の範囲であることが好ましく、0.001%以上0.5%以下の範囲であることが特に好ましい。Tween20の濃度が0.0005%以上であると、複数のウェル26における反応を独立して検出することができウェル26の蛍光を正しく計測できる。Tween20の濃度が5%以下であると、十分な酵素反応が得られる。
界面活性剤は非イオン性に限られない。界面活性剤として、イオン性界面活性剤(陰イオン、陽イオン、両性イオン)が用いられても良い。イオン性界面活性剤同士の混合物や、イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤との混合物を用いても良い。
また、界面活性剤と高分子化合物との混合物を、吸着防止剤として使用することも可能である。
本実施形態では、生体分子解析キット100Aのウェル26の内面に対して試薬の構成成分が吸着されるのを防止する目的で、油性封止液22に吸着防止剤が含まれていていてもよい。
油性封止液22(図8参照)は、基体部23とカバー部27との間に注入口部から送液可能な溶液である。油性封止液22は、解析対象物質を含む試料と混合しない材料から選ぶことができる。油性封止液22としてはミネラルオイルやフッ素系液体のFC40等を用いることができる。
また、本実施形態では、生体分子解析キット100Aのウェル26の内面に対して試薬の構成成分が吸着されるのを防止する目的で、試薬を送液する前にウェル洗浄用のバッファーを送液してもよい。バッファーには吸着防止剤が含まれていてもよい。
また、酵素反応に用いられる酵素、解析対象となる核酸やタンパク質、及びシグナル検出に利用される標識物質等のうちの少なくとも1つが最初に反応容器10の内部に供給される前から、シグナル検出が終了するまでの間に反応容器10の内部に接する試薬のすべてに吸着剤が含まれていても良い。
バッファー33を送液するのではなく、反応容器30中にバッファー33が予め満たされていてもよい。この場合、注入口部、排出口部をフィルムなどで封止してバッファー33を反応容器30中に封止しておいてもよい。
しかしバッファー33がウェル26の内面に保持された状態で維持されるウェル26も存在する。この場合、試薬は複数のウェル26内に満たされたバッファー33と置き換わることなく、バッファー33に試薬が重層された状態となる。しかしながら、バッファー33と試薬とは互いに容易に混合されるので、バッファー33に試薬が重層された状態となった後、試薬中の溶質はバッファー33へと拡散する。このため、バッファーと試薬が置き換わったウェルと、バッファー33と試薬とが重層されたウェルでの反応は実質的に同じである。
また、このような吸着防止剤に代えて、試薬の構成成分の表面張力を低下させる物質を試薬が含んでいてもよい。例えば界面活性剤は試薬の表面張力を低下させる。そのため、各ウェルへ試薬を充填するためにも、試薬に界面活性剤を含むことは有効である。
次に、本発明の第一実施形態に係る生体分子解析方法の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。図3は、本実施例における蛍光量測定試験の結果を示す蛍光画像図である。図4は、本実施例における蛍光強度測定試験の結果を示すグラフである。なお、図4における横軸は反応時間を示し、図4における縦軸は蛍光強度を示している。図5は、本実施例における反応時間測定試験の結果を示す表である。なお、図5において、「良」は定量性が良好であることを示し、「劣」は定量性において本実施例に劣ることを示す。
まず、反応容器10の微小空間11内に、インベーダー反応試薬とともに、3種類の人工合成DNAを封入した。ここで、それぞれの人工合成DNAの濃度は、1ウェルに1分子が入る30pMと、1ウェルに1666分子が入る50nMと、1ウェルに1分子も入らない0Mと、に設定した。
図3に示すように、DNA濃度が30pM以上であれば、0Mである場合のバックグラウンドに対してほぼすべての微小空間11において蛍光量に差が生じ、DNAが存在していることがわかる。
次に、上述の設定の人工合成DNAが封入された反応容器10を、62℃のオーブンにてインキュベートし、0分、10分、15分後の状態を確認するため、DNA濃度ごとに5ウェルの画像を選び、各画像における21ピクセルの蛍光量の平均値を求めた。ここでは、反応後のウェルは、蛍光顕微鏡(ツァイス社、AX10)、対物レンズ(EC Plan−Neofluar 40× oil NA1.3)、光源(LEJ社、FluoArc001.26A Usable with HBO 10)、センサー(浜松ホトニクス社、EM−CCD C9100)、フィルター(オリンパス社、U−MNIBA2)、及び解析ソフト(浜松ホトニクス社、AQUACOSMOS 2.6:露光時間 64.3ms、EMゲイン 180、オフセット 0、ビニング ×1)を用いて計測された。
続いて、従来の解析方法と本発明の解析方法とにおける反応時間の比較をした。反応時間の測定試験には、本発明との比較対象として、1ナノリットル(nl)×多ウェルの試薬量でデジタルPCR反応を行う方法(比較例1)、20マイクロリットル(μl)の試薬量でPCR反応を行う方法(比較例2)、20μlの試薬量でPCR+インベーダー反応を行う方法(比較例3)、20μlの試薬量でインベーダー反応を行う方法(比較例4)、及び100フェムトリットル(fl)×多ウェルの試薬量でデジタルELISA反応を行う方法(比較例5)を採用した。
次に、本発明の第二実施形態に係る生体分子解析方法の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。図10は、本実施例におけるウェルを示す蛍光画像図である。図11Aから図11Mは、本実施例における蛍光量測定試験の結果を示す蛍光画像図である。図12は、本実施例における蛍光強度測定試験の結果を示すグラフである。なお、図12における横軸はTween20の濃度を示し、図12における縦軸は蛍光強度を示している。
0.5mm厚のガラス製の基板にCYTOP(登録商標)(旭硝子製)をスピンコートした後、180℃で1時間ベークした。形成されたCYTOPの厚みは3μmだった。CYTOPを基板にスピンコートによってコートした後、ポジティブフォトレジストをコートし、フォトマスクを用いてパターンを形成した。その後、O2プラズマによってCYTOPをドライエッチングした。表面に残ったフォトレジストを除去するためにアセトンとエタノールにより表面を洗浄、リンスした。
図10に示すようにCYTOPによって形成されたウェル(微小空間)の直径は5μmであり、インベーダー反応によるシグナル検出が数分で可能な体積を有する。1つの基体部には100ブロックのウェルアレイが設けられた。また、各々のブロックは10,000個のウェルを有した。そのため、合計100万個のウェルが形成された。図6に示すように、送液ポート(注入口部:不図示)を有するガラス製の板と基体部とを、50μmの厚みを有し流路形状に加工された両面テープを用いて接着した。
界面活性剤であるTween20の濃度による液滴の形成しやすさを確かめた。
まず、界面活性剤を含む洗浄バッファーを送液ポートを通じて核酸定量用アレイデバイスに送液した。その後、インベーダー反応試薬(検出反応試薬21:1μM アレルプローブ、1μM インベーダーオリゴ、1μM FAM標識アーム、10mM MOPS pH7.5、6.25mM MgCl2、50U/μL クリベース、Tween 20)22μl及び解析対象物質であるDNAを送液ポートを通じて核酸定量用アレイデバイスに送液した。
その後、フッ素系液体であるFC40(油性封止液22)を送液ポートを通じて80μl送液することで各ウェル内に試薬を分割して封入した。これを63のホットプレート上で加熱し、インベーダー反応を実施した。
次に、蛍光顕微鏡(オリンパス製)を使用し、63℃10分、20分経過時の各ウェルの蛍光を検出した。露光時間は、明視野:100msec、NIBA :2000msec、mCherry:2000msecとした。
10分加熱後の各ウェルを顕微鏡で観察した結果を図11Aから図11Gに示す。20分加熱後の各ウェルを顕微鏡で観察した結果を図11Hから図11Mに示す。
図12はTeeen20の濃度に応じた蛍光強度の値を示すグラフである。Teeen20の濃度が高くなるにつれ、蛍光強度が弱くなった。すなわち、Tween20の濃度が増えることで反応を阻害している挙動が確認された。そのため、Tween20の最適な濃度は5%程度までと推察される。また、コストの観点から、Tween20の濃度は0.5%以下がより好ましいと考えられる。
また、同様の試薬10μlを96ウェルプレートに分注し、10μlの体積での反応性をライトサイクラーLC480(ロシュ製)を用いて検出した。ライトサイクラーの温調条件は、63℃一定とした。ライトサイクラーで同様の組成で反応を確かめた結果、Tween20の濃度によらずインベーダー反応の蛍光シグナル増加は一定であった。このことから界面活性剤は酵素の反応性を高めるためではなく液滴の安定性に寄与していることが分かった。
界面活性剤は、試薬に含まれる検出対象物質がCYTOPやガラスなどに吸着するのを防ぐことができる濃度を添加すればよい。Triron−X100などのほかの界面活性剤の場合には最適な濃度が異なっていてもよいが、Tween20の例を考慮できる。
次に、本発明の第二実施形態に係る生体分子解析方法の作用効果を確認するために行ったさらなる実施例について説明する。図13は、本発明の第二実施形態に係る生体分子解析方法の作用効果を説明するための図である。図14Aから図14Fは本実施例における蛍光量測定試験の結果を示す蛍光画像図である。図13において、反応性の欄の「良」とは、反応性が良好であったことを示す。図13において、液滴の欄の「○」とは、は隣り合う2つのウェルの間に蛍光が観察されなかったことを示す。図13において、液滴の欄の「△」とは、は隣り合う2つのウェルの間に蛍光が観察されたが、濃度測定には影響がない程度であったことを示す。図13において、液滴の欄の「×」とは、隣り合う2つのウェルの間に蛍光が観察されたことにより、隣り合う2つのウェルの間の領域を用いたときは正しくデジタル計測ができない場合があったことを示す。
2,23 基体部
3,32 低吸着構造部
4 改質部
4A,35 低吸着物質層
10,30 反応容器
11 微小空間(容器形状部)
12 軟性平板
13 カバーガラス
14 ガラス基板
22 油性封止液
24 基板
26 ウェル(容器形状部)
31 流路
33 バッファー
Claims (13)
- 解析対象となる試料を流路を通じて供給可能な複数の容器形状部及び前記容器形状部が形成された基体部及び前記基体部の表面であって複数の前記容器形状部の間に位置する部位に設けられた疎水性の面を有し、酵素反応を行うための反応容器と、
前記反応容器に供給可能であって前記酵素反応に使用される試薬と、
を有し、
前記試薬は、
酵素と、前記酵素が前記複数の容器形状部の間の領域に吸着されるのを低減するための界面活性剤と、を含有する分析試薬と、
前記酵素反応が行われる複数の前記容器形状部を個別に封止して各容器形状部において独立して酵素反応を可能とするための疎水性の油性封止液と、を含み、
前記反応容器内において前記酵素反応が行われたときに、前記酵素反応によるシグナルを検出するように構成されている生体分子解析キット。 - 前記酵素反応が等温反応である請求項1に記載の生体分子解析キット。
- 解析対象となる前記試料が、DNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つを含み、解析対象物質がDNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つである請求項1に記載の生体分子解析キット。
- 解析対象物質が核酸であり、前記酵素反応がインベーダー反応であり、
前記低吸着構造部は、蛍光物質が透過不能な分子構造を有する高分子被膜を含む
請求項1に記載の生体分子解析キット。 - 前記試薬は、蛍光、発光、pH、吸光、電位のいずれか1つによりシグナルを発する請求項1に記載の生体分子解析キット。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載の生体分子解析キットを用いた生体分子解析方法。
- 前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である請求項1に記載の生体分子解析キット。
- 前記非イオン性界面活性剤がTween20である請求項7に記載の生体分子解析キット。
- 前記非イオン性界面活性剤がTriton−100である請求項7に記載の生体分子解析キット。
- 前記界面活性剤の濃度が0.0005%以上0.5%以下である請求項7に記載の生体分子解析キット。
- 請求項1に記載の生体分子解析キットを用いた生体分子解析方法であって、
前記反応容器に対して、前記酵素が前記複数の容器形状部の間の領域に吸着されるのを低減するための前記界面活性剤を含有する前記試薬を前記流路に送液して前記複数の容器形状部に前記試薬を充填するとともに前記低吸着構造部に前記界面活性剤を結合させ、
前記流路に疎水性の油性封止液を送液し、前記容器形状部外の前記流路に存在する前記酵素を前記反応容器の外へ移動させ、且つ前記複数の容器形状部内の前記試薬を前記油性封止液により封止することにより、前記複数の容器形状部を複数の独立した核酸検出反応容器とする、生体分子解析方法。 - 酵素と、解析対象となる試料を流路を通じて供給可能な複数の容器形状部及び前記容器形状部が形成された基体部及び前記基体部の表面であって複数の前記容器形状部の間に位置する部位に設けられた疎水性の面を有し酵素反応を行うための反応容器とを用いて解析を行う生体分子解析方法であって、
前記反応容器に対し、前記酵素が前記複数の容器形状部の間の領域に吸着されるのを低減するための界面活性剤を含有するバッファーを前記流路を通じて前記複数の容器形状部に充填し、
前記複数の容器形状部から前記バッファーを排出しつつ前記複数の容器形状部に試薬を充填し、
前記流路に疎水性の油性封止液を送液し、前記容器形状部外の前記流路に存在する前記酵素を前記反応容器の外へ移動させ、且つ前記複数の容器形状部内の前記試薬を前記油性封止液により封止することにより、前記複数の容器形状部を複数の独立した核酸検出反応容器とする、生体分子解析方法。 - 前記界面活性剤の濃度が0.0005%以上0.5%以下である請求項12に記載の生体分子解析方法。
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