JPWO2015115635A1 - 生体分子解析キット及び生体分子解析方法 - Google Patents
生体分子解析キット及び生体分子解析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2015115635A1 JPWO2015115635A1 JP2015557255A JP2015557255A JPWO2015115635A1 JP WO2015115635 A1 JPWO2015115635 A1 JP WO2015115635A1 JP 2015557255 A JP2015557255 A JP 2015557255A JP 2015557255 A JP2015557255 A JP 2015557255A JP WO2015115635 A1 JPWO2015115635 A1 JP WO2015115635A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reaction
- reagent
- biomolecule analysis
- container
- analysis kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 137
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 165
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 152
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 82
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims abstract description 62
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 54
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 54
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 54
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 48
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 46
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 46
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 40
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 38
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 38
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 38
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 33
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 30
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 29
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 26
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 23
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 20
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 11
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 claims description 11
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 8
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 8
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 claims description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims 2
- 238000002407 reforming Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 37
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 36
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 36
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 34
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 27
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 25
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 17
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 9
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 8
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 238000001921 nucleic acid quantification Methods 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 5
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 4
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 4
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 4
- -1 polydimethylsiloxane Polymers 0.000 description 4
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 4
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 3
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000007847 digital PCR Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 2
- 238000004049 embossing Methods 0.000 description 2
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229920002120 photoresistant polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 238000004528 spin coating Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- MDOJTZQKHMAPBK-UHFFFAOYSA-N 4-iodo-3-nitrobenzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=C(I)C([N+]([O-])=O)=C1 MDOJTZQKHMAPBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007397 LAMP assay Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000011118 polyvinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000565 sealant Substances 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 238000007039 two-step reaction Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003466 welding Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6858—Allele-specific amplification
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502715—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by interfacing components, e.g. fluidic, electrical, optical or mechanical interfaces
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502746—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by the means for controlling flow resistance, e.g. flow controllers, baffles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6452—Individual samples arranged in a regular 2D-array, e.g. multiwell plates
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/06—Fluid handling related problems
- B01L2200/0642—Filling fluids into wells by specific techniques
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/06—Fluid handling related problems
- B01L2200/0673—Handling of plugs of fluid surrounded by immiscible fluid
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/06—Fluid handling related problems
- B01L2200/0689—Sealing
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
- B01L2300/0829—Multi-well plates; Microtitration plates
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0848—Specific forms of parts of containers
- B01L2300/0851—Bottom walls
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
- B01L2300/0864—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices comprising only one inlet and multiple receiving wells, e.g. for separation, splitting
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0887—Laminated structure
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/12—Specific details about materials
- B01L2300/123—Flexible; Elastomeric
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/16—Surface properties and coatings
- B01L2300/161—Control and use of surface tension forces, e.g. hydrophobic, hydrophilic
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/16—Surface properties and coatings
- B01L2300/168—Specific optical properties, e.g. reflective coatings
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2400/00—Moving or stopping fluids
- B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
- B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
- B01L2400/0487—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2400/00—Moving or stopping fluids
- B01L2400/08—Regulating or influencing the flow resistance
- B01L2400/084—Passive control of flow resistance
- B01L2400/086—Passive control of flow resistance using baffles or other fixed flow obstructions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
- G01N2021/6439—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Optical Measuring Cells (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
Description
本願は、2014年1月31日に日本に出願された特願2014−017942号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
例えば、ヒトの遺伝子病は、一つの遺伝子中のSNPが病気の原因となると考えられている。また、生活習慣病やガンなどは、複数の遺伝子におけるSNPが影響していると考えられている。したがって、SNPの解析は、創薬ターゲットの探索または副作用の予見などの医薬品の開発において、極めて有効であると考えられる。このため、SNPの解析は世界的な巨大プロジェクトとして押し進められている。
近年、あらかじめ患者の遺伝子を解析することによって、最適な薬剤を選択し患者に投与する方法が考えられている。さらに、単一遺伝子疾患のみならず多因子疾患についても、遺伝子診断の意義が急速に高まりつつある。また、病原細菌やウイルスを標的とした薬物の効果は、同一種であっても、個体毎に異なることがあり、これらは個体毎の遺伝子の微細な違いによることが多い。このような外来因子である病原細菌やウイルスの遺伝子診断も、今後は検査対象が確実に増加することが予想される。
このように、ポストゲノム時代の医療においては、ヒトや病原微生物の遺伝子の微細な違い、とりわけSNPを解析できることは重要であり、今後もその重要性が増すと予想される。
SNPを解析する場合、目的とする遺伝子断片は試料中にわずかしか含まれていないのが一般的である。この場合、目的とする遺伝子を、何らかの方法によって予め増幅させておくことが必要となる。PCR(Polymerase Chain Reaction)法は、迅速かつ再現性の高い遺伝子増幅法として従来からよく知られている。
二段階反応を必要としないSNP検出方法として、インベーダー法がある。インベーダー法はPCRの増幅を必要とせず、等温で反応を進めることができるため、装置が小型化できる。しかし、インベーダー法では、遺伝子の増幅工程を含まないので、シグナル増幅が遅く、検出判定を行うためには数時間の反応時間を要する。インベーダー法は、酵素反応を用いた検出方法である。その中でも、酵素を用いたシグナル増幅において、シグナルの濃度が飽和する時間を短縮する方法として、微小空間内で反応させる方法が考えられる。
微小空間においてインベーダー反応を行うと、1ウェルに含まれる解析対象の分子が1つ以下になるようにでき、解析対象分子が見かけ上濃縮された状態になるため、シグナルが飽和する時間を短縮することができる。また、1ウェルに入る検出分子を1つ以下にしているため、シグナルが得られたウェルをカウントすることで、検出分子の濃度を正確に調べることが可能である。
たとえば特許文献1では、1pl以下の容積を有する微小空間内で酵素反応を行うことで遺伝子検査が可能であることが示されている。
前記低吸着構造部は、前記試料の吸着率が前記基体部よりも低く、前記基体部が前記反応容器内に露出している場合と比較して、前記シグナル検出におけるバックグラウンドが低くてもよい。
前記低吸着構造部は、前記試薬の吸着率が前記基体部よりも低く、前記基体部が前記反応容器内に露出している場合と比較して、前記シグナル検出におけるシグナル強度が高くてもよい。
前記反応容器は、前記容器形状部の内面において前記吸着率を前記基体部より下げるために前記基体部の表面が改質された改質部をさらに有し、前記容器形状部は、直径5マイクロメートル以下の略円形を有する開口部を有する有底円柱形状であってもよい。
前記反応容器は、前記容器形状部の内面において前記吸着率を前記基体部より下げるために前記基体部に積層された低吸着物質層をさらに有し、前記容器形状部は、直径5マイクロメートル以下の略円形を有する開口部を有する有底円柱形状であってもよい。
前記酵素反応が等温反応であってもよい。
解析対象となる前記試料が、DNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つを含み、解析対象物質がDNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つであってもよい。
解析対象物質が核酸であり、前記酵素反応がインベーダー反応であってもよい。
前記試薬は、蛍光、発光、pH、吸光、電位のいずれか1つによりシグナルを発してもよい。
前記吸着防止剤が界面活性剤であってもよい。
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤であってもよい。
前記非イオン性界面活性剤がTween20であってもよい。
前記非イオン性界面活性剤がTriton−100であってもよい。
前記界面活性剤の濃度が0.0005%以上5%以下であってもよい。
本発明の第五態様に係る生体分子解析方法は、前記複数のウェルに前記試薬を充填する前に、前記流路を通じて前記複数の容器形状部に洗浄用のバッファーを充填する工程をさらに有していてもよい。
本発明の第六態様に係る生体分子解析方法は、上記第一態様、第二態様、または第四態様に係る生体分子解析キットを用いた生体分子解析方法であって、前記容器形状部に洗浄用のバッファーを供給した後に、前記容器形状部に前記試薬を供給する。
以下、本発明の第一実施形態に係る生体分子解析キット及び生体分子解析方法を、図1及び図2を参照しながら説明する。
図1は、本実施形態に係る生体分子解析方法を適用可能な生体分子解析キットの断面図である。本実施形態に係る生体分子解析キットでは、解析する生体分子として、DNA、RNA、miRNA、mRNA(以下、RNA類と言うことがある。)、タンパク質のいずれかが選ばれる。
反応容器10は、一端が開口された有底円柱形状の微小空間11(容器形状部)を有するように成形された基体部2と、基体部2の表面に配された低吸着構造部3と、を有する。
ポリジメチルシロキサン(PDMS(polydimethylsiloxane))製の軟性平板12に対してインプリントにより微小空間11が作製されることによって、反応容器10が形成される。
たとえば、微小空間11は、軟性平板12において縦横5mmの長方形を有する表面に対して、その各辺に沿った格子状に配列される。各微小空間11の間の隙間の大きさは、各微小空間11において独立してシグナル検出ができる分解能に応じて設定される。
微小空間11の容積は適宜設定されてよいが、微小空間11の容積が小さい方がシグナル検出可能となるまでの反応時間を短縮可能である。一例として、微小空間11の容積は、100ピコリットル(pl)またはそれ以下である。
(構成例1)
低吸着構造部3は、基体部2の表面のうち反応容器10の微小空間11の内面に位置する領域が疎水性を有する。たとえば、低吸着構造部3は、基体部2の表面が疎水性となるように改質することで形成される改質部4を有する。
(構成例2)
低吸着構造部3は、基体部2の表面のうち反応容器10の内面に位置する領域に低吸着物質層4Aを有する。低吸着物質層4Aは、本実施形態の生体分子解析キット100を用いた解析の対象となる試料あるいはその解析試薬の吸着率が低い材料から形成される。たとえば、低吸着物質層4Aは、疎水性の被膜である。
また、低吸着物質層4Aの他の例として、蛍光物質が透過不能な分子構造を有する高分子被膜を挙げることができる。この高分子被膜は、上記のPDMSと比較して密な分子構造を有することが好ましく、蛍光物質の透過を抑制することによってシグナル強度の低下を防止する効果を奏する。なお、PDMS以外に対しても、基体部2の材料となる物質の分子構造に基づいて、試薬の透過を防止可能な分子構造を有する高分子被膜が選択されてもよい。これらの高分子被膜はシグナル強度の低下を抑制する。
なお、低吸着構造部3における高分子被膜は、蛍光物質の透過を抑制する被膜に限られず、酵素反応に関わる物質の透過を抑制する被膜が、使用される試薬に応じて適宜選択されてよい。
本実施形態では、各試薬に吸着防止剤が含まれていることで、生体分子解析キット100の反応容器10の内面に対して試薬の構成成分が吸着されるのを防止することができる。
吸着防止剤の組成は、たとえば、界面活性剤、リン酸脂質、その他の高分子化合物のうちの少なくとも1種を含んだ組成であり、任意の材料を混合して用いても良い。例を挙げると、界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤が挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、Tweenやglycerоl、Triton−X100等が挙げられる。また、高分子化合物としては、Pоlyethyleneglycоl(PEG),DNA,蛋白質が挙げられる。
また、2種以上の材料が混合された吸着防止剤として、例えば、リン酸脂質とPEGとを混合した吸着防止剤が挙げられる。
界面活性剤として非イオン性界面活性剤を用いる場合、試薬に含まれる非イオン性界面活性剤の濃度は5%以下であることが好ましい。Tween20を用いる場合、試薬に含まれるTween20の濃度は0.0005%以上5%以下の範囲であることが好ましく、0.001%以上0.5%以下の範囲であることが特に好ましい。Tween20の濃度が0.0005%以上であると、複数の微小空間11における反応を独立して検出することができ、微小空間11の蛍光を正しく計測できる。Tween20の濃度が5%以下であると、十分な酵素反応が得られる。
また、微小空間11にオイルを入れる場合、オイルに上記の吸着防止剤を入れて用いても良い。
酵素反応に用いられる酵素、解析対象となる核酸やタンパク質、及びシグナル検出に利用される標識物質等のうちの少なくとも1つが最初に反応容器10の内部に供給される前から、シグナル検出が終了するまでの間に反応容器10の内部に接する試薬のすべてに吸着剤が含まれていても良い。
(第二実施形態)
図6は本実施形態に係る核酸定量用アレイデバイス20の断面図である。本実施形態に係る生体分子解析キットでは、解析する生体分子として、DNA、RNA、miRNA、mRNA(以下、RNA類と言うことがある。)、及びタンパク質のいずれかが選ばれる。
微小孔アレイは、基板24に直接形成されていてもよいし、微小孔アレイが形成された部材が基板24に、接着、溶着等の手段で固定して設けられてもよい。
各貫通孔25aの容積は適宜設定されてよいが、貫通孔25aの容積が小さい方がシグナル検出可能となるまでの反応時間を短縮可能である。
一例としては、各貫通孔25aの容積は、100ピコリットルまたはそれ以下である。
なお、本実施形態において、蛍光の検出以外に、可視光の発光、発色、pHの変化、電位変化などをシグナルとして検出する検出系を適用してもよい。また、タンパク質を解析するために本実施形態の構成を適用することも可能である。
各貫通孔25aの間隔(隙間)の大きさは、各貫通孔25aにおいて独立してシグナル検出ができる分解能に応じて設定される。
各貫通孔25aは微小孔アレイ層25に対して三角格子状をなして配列されている。
なお、各貫通孔25aの配列のされ方は特に限定されない。微小孔アレイ層25に形成された貫通孔25aと、基板24の表面24aとによって、基板24を底面部26aとする有底筒状の微小なウェル26(容器形状部)が基体部23には形成されている。
微小孔アレイ層25は、基板24上に積層された疎水性膜のベタパターンに対してエッチング,エンボス形成,あるいは切削等の加工が施されることによって貫通孔25aが形成される。また、微小孔アレイ層25が基板24と一体成型される場合は、基板24にエッチング,エンボス形成、あるいは切削等の加工が施されることによって、微小孔アレイ層25の貫通孔25aに相当する部分が形成される。これによって、疎水部及び親水部を有するパターンを基板に形成することができる。
図7及び図8に示すように、検出反応試薬21は、基体部23とカバー部27との間に注入口部から送液可能な溶液である。検出反応試薬21は、解析対象物質に対する酵素反応などの生化学的反応を行うための試薬である。
解析対象物質に対する生化学的反応は、たとえば、DNA(核酸)が解析対象物質の場合、核酸が存在する条件下でシグナル増幅が起こるような反応である。検出反応試薬21は、たとえば核酸を検出可能な方法に応じて選択される。たとえば、インベーダー(登録商標)法や、LAMP法(商標登録)、TaqMan(登録商標)法または、蛍光プローブ法やその他の方法に使用される試薬が本実施形態の検出反応試薬21に含まれる。
本実施形態では、解析対象物質が核酸のときに、従来のようなPCR法での核酸の増幅工程を行わずに検出可能であるが、必要に応じてPCR法等を使って解析対象核酸を増幅したものをサンプルとして用いても良い。
また、解析対象物質が核酸以外でも、本実施形態に適用できるように、必要な前処理を適宜行ってから本実施形態を適用することができる。
試薬の例としては、バッファー、検出反応試薬、サンプル(解析対象物:DNA、RNA類、タンパク質等)溶液、封止液、試薬やサンプルの希釈用溶媒が挙げられる。
吸着防止剤の組成は、たとえば、界面活性剤、リン酸脂質、その他の高分子化合物のうちの少なくとも1種を含んだ組成であり、任意の材料を混合して用いても良い。例を挙げると、界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤が挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、Tweenやglycerоl、Triton−X100等が挙げられる。また、高分子化合物としては、Pоlyethyleneglycоl(PEG)や,DNA, 蛋白質が挙げられる。
また、2種以上の材料が混合された吸着防止剤として、例えば、リン酸脂質とPEGとを混合した吸着防止剤が挙げられる。
界面活性剤として非イオン性界面活性剤を用いる場合、試薬に含まれる非イオン性界面活性剤の濃度は5%以下であることが好ましい。Tween20を用いる場合、試薬に含まれるTween20の濃度は0.0005%以上5%以下の範囲であることが好ましく、0.001%以上0.5%以下の範囲であることが特に好ましい。Tween20の濃度が0.0005%以上であると、複数のウェル26における反応を独立して検出することができウェル26の蛍光を正しく計測できる。Tween20の濃度が5%以下であると、十分な酵素反応が得られる。
界面活性剤は非イオン性に限られない。界面活性剤として、イオン性界面活性剤(陰イオン、陽イオン、両性イオン)が用いられても良い。イオン性界面活性剤同士の混合物や、イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤との混合物を用いても良い。
また、界面活性剤と高分子化合物との混合物を、吸着防止剤として使用することも可能である。
本実施形態では、生体分子解析キット100Aのウェル26の内面に対して試薬の構成成分が吸着されるのを防止する目的で、油性封止液22に吸着防止剤が含まれていていてもよい。
油性封止液22(図8参照)は、基体部23とカバー部27との間に注入口部から送液可能な溶液である。油性封止液22は、解析対象物質を含む試料と混合しない材料から選ぶことができる。油性封止液22としてはミネラルオイルやフッ素系液体のFC40等を用いることができる。
また、本実施形態では、生体分子解析キット100Aのウェル26の内面に対して試薬の構成成分が吸着されるのを防止する目的で、試薬を送液する前にウェル洗浄用のバッファーを送液してもよい。バッファーには吸着防止剤が含まれていてもよい。
また、酵素反応に用いられる酵素、解析対象となる核酸やタンパク質、及びシグナル検出に利用される標識物質等のうちの少なくとも1つが最初に反応容器10の内部に供給される前から、シグナル検出が終了するまでの間に反応容器10の内部に接する試薬のすべてに吸着剤が含まれていても良い。
バッファー33を送液するのではなく、反応容器30中にバッファー33が予め満たされていてもよい。この場合、注入口部、排出口部をフィルムなどで封止してバッファー33を反応容器30中に封止しておいてもよい。
しかしバッファー33がウェル26の内面に保持された状態で維持されるウェル26も存在する。この場合、試薬は複数のウェル26内に満たされたバッファー33と置き換わることなく、バッファー33に試薬が重層された状態となる。しかしながら、バッファー33と試薬とは互いに容易に混合されるので、バッファー33に試薬が重層された状態となった後、試薬中の溶質はバッファー33へと拡散する。このため、バッファーと試薬が置き換わったウェルと、バッファー33と試薬とが重層されたウェルでの反応は実質的に同じである。
また、このような吸着防止剤に代えて、試薬の構成成分の表面張力を低下させる物質を試薬が含んでいてもよい。例えば界面活性剤は試薬の表面張力を低下させる。そのため、各ウェルへ試薬を充填するためにも、試薬に界面活性剤を含むことは有効である。
次に、本発明の第一実施形態に係る生体分子解析方法の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。図3は、本実施例における蛍光量測定試験の結果を示す蛍光画像図である。図4は、本実施例における蛍光強度測定試験の結果を示すグラフである。なお、図4における横軸は反応時間を示し、図4における縦軸は蛍光強度を示している。図5は、本実施例における反応時間測定試験の結果を示す表である。なお、図5において、「良」は定量性が良好であることを示し、「劣」は定量性において本実施例に劣ることを示す。
まず、反応容器10の微小空間11内に、インベーダー反応試薬とともに、3種類の人工合成DNAを封入した。ここで、それぞれの人工合成DNAの濃度は、1ウェルに1分子が入る30pMと、1ウェルに1666分子が入る50nMと、1ウェルに1分子も入らない0Mと、に設定した。
図3に示すように、DNA濃度が30pM以上であれば、0Mである場合のバックグラウンドに対してほぼすべての微小空間11において蛍光量に差が生じ、DNAが存在していることがわかる。
次に、上述の設定の人工合成DNAが封入された反応容器10を、62℃のオーブンにてインキュベートし、0分、10分、15分後の状態を確認するため、DNA濃度ごとに5ウェルの画像を選び、各画像における21ピクセルの蛍光量の平均値を求めた。ここでは、反応後のウェルは、蛍光顕微鏡(ツァイス社、AX10)、対物レンズ(EC Plan−Neofluar 40× oil NA1.3)、光源(LEJ社、FluoArc001.26A Usable with HBO 10)、センサー(浜松ホトニクス社、EM−CCD C9100)、フィルター(オリンパス社、U−MNIBA2)、及び解析ソフト(浜松ホトニクス社、AQUACOSMOS 2.6:露光時間 64.3ms、EMゲイン 180、オフセット 0、ビニング ×1)を用いて計測された。
続いて、従来の解析方法と本発明の解析方法とにおける反応時間の比較をした。反応時間の測定試験には、本発明との比較対象として、1ナノリットル(nl)×多ウェルの試薬量でデジタルPCR反応を行う方法(比較例1)、20マイクロリットル(μl)の試薬量でPCR反応を行う方法(比較例2)、20μlの試薬量でPCR+インベーダー反応を行う方法(比較例3)、20μlの試薬量でインベーダー反応を行う方法(比較例4)、及び100フェムトリットル(fl)×多ウェルの試薬量でデジタルELISA反応を行う方法(比較例5)を採用した。
次に、本発明の第二実施形態に係る生体分子解析方法の作用効果を確認するために行った実施例について説明する。図10は、本実施例におけるウェルを示す蛍光画像図である。図11Aから図11Mは、本実施例における蛍光量測定試験の結果を示す蛍光画像図である。図12は、本実施例における蛍光強度測定試験の結果を示すグラフである。なお、図12における横軸はTween20の濃度を示し、図12における縦軸は蛍光強度を示している。
0.5mm厚のガラス製の基板にCYTOP(登録商標)(旭硝子製)をスピンコートした後、180℃で1時間ベークした。形成されたCYTOPの厚みは3μmだった。CYTOPを基板にスピンコートによってコートした後、ポジティブフォトレジストをコートし、フォトマスクを用いてパターンを形成した。その後、O2プラズマによってCYTOPをドライエッチングした。表面に残ったフォトレジストを除去するためにアセトンとエタノールにより表面を洗浄、リンスした。
図10に示すようにCYTOPによって形成されたウェル(微小空間)の直径は5μmであり、インベーダー反応によるシグナル検出が数分で可能な体積を有する。1つの基体部には100ブロックのウェルアレイが設けられた。また、各々のブロックは10,000個のウェルを有した。そのため、合計100万個のウェルが形成された。図6に示すように、送液ポート(注入口部:不図示)を有するガラス製の板と基体部とを、50μmの厚みを有し流路形状に加工された両面テープを用いて接着した。
界面活性剤であるTween20の濃度による液滴の形成しやすさを確かめた。
まず、界面活性剤を含む洗浄バッファーを送液ポートを通じて核酸定量用アレイデバイスに送液した。その後、インベーダー反応試薬(検出反応試薬21:1μM アレルプローブ、1μM インベーダーオリゴ、1μM FAM標識アーム、10mM MOPS pH7.5、6.25mM MgCl2、50U/μL クリベース、Tween 20)22μl及び解析対象物質であるDNAを送液ポートを通じて核酸定量用アレイデバイスに送液した。
その後、フッ素系液体であるFC40(油性封止液22)を送液ポートを通じて80μl送液することで各ウェル内に試薬を分割して封入した。これを63のホットプレート上で加熱し、インベーダー反応を実施した。
次に、蛍光顕微鏡(オリンパス製)を使用し、63℃10分、20分経過時の各ウェルの蛍光を検出した。露光時間は、明視野:100msec、NIBA :2000msec、mCherry:2000msecとした。
10分加熱後の各ウェルを顕微鏡で観察した結果を図11Aから図11Gに示す。20分加熱後の各ウェルを顕微鏡で観察した結果を図11Hから図11Mに示す。
図12はTeeen20の濃度に応じた蛍光強度の値を示すグラフである。Teeen20の濃度が高くなるにつれ、蛍光強度が弱くなった。すなわち、Tween20の濃度が増えることで反応を阻害している挙動が確認された。そのため、Tween20の最適な濃度は5%程度までと推察される。また、コストの観点から、Tween20の濃度は0.5%以下がより好ましいと考えられる。
また、同様の試薬10μlを96ウェルプレートに分注し、10μlの体積での反応性をライトサイクラーLC480(ロシュ製)を用いて検出した。ライトサイクラーの温調条件は、63℃一定とした。ライトサイクラーで同様の組成で反応を確かめた結果、Tween20の濃度によらずインベーダー反応の蛍光シグナル増加は一定であった。このことから界面活性剤は酵素の反応性を高めるためではなく液滴の安定性に寄与していることが分かった。
界面活性剤は、試薬に含まれる検出対象物質がCYTOPやガラスなどに吸着するのを防ぐことができる濃度を添加すればよい。Triron−X100などのほかの界面活性剤の場合には最適な濃度が異なっていてもよいが、Tween20の例を考慮できる。
次に、本発明の第二実施形態に係る生体分子解析方法の作用効果を確認するために行ったさらなる実施例について説明する。図13は、本発明の第二実施形態に係る生体分子解析方法の作用効果を説明するための図である。図14Aから図14Fは本実施例における蛍光量測定試験の結果を示す蛍光画像図である。図13において、反応性の欄の「良」とは、反応性が良好であったことを示す。図13において、液滴の欄の「○」とは、は隣り合う2つのウェルの間に蛍光が観察されなかったことを示す。図13において、液滴の欄の「△」とは、は隣り合う2つのウェルの間に蛍光が観察されたが、濃度測定には影響がない程度であったことを示す。図13において、液滴の欄の「×」とは、隣り合う2つのウェルの間に蛍光が観察されたことにより、隣り合う2つのウェルの間の領域を用いたときは正しくデジタル計測ができない場合があったことを示す。
2,23 基体部
3,32 低吸着構造部
4 改質部
4A,35 低吸着物質層
10,30 反応容器
11 微小空間(容器形状部)
12 軟性平板
13 カバーガラス
14 ガラス基板
22 油性封止液
24 基板
26 ウェル(容器形状部)
31 流路
33 バッファー
解析対象となる前記試料が、DNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つを含み、解析対象物質がDNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つであってもよい。
解析対象物質が核酸であり、前記酵素反応がインベーダー反応であってもよい。
前記試薬は、蛍光、発光、pH、吸光、電位のいずれか1つによりシグナルを発してもよい。
前記吸着防止剤が界面活性剤であってもよい。
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤であってもよい。
前記非イオン性界面活性剤がTween20であってもよい。
前記非イオン性界面活性剤がTriton−100であってもよい。
前記界面活性剤の濃度が0.0005%以上0.5%以下であってもよい。
本発明の他の生体分子解析方法は、流路及び複数の容器形状部を有し、表面が疎水性を有する反応容器に対し、前記流路を通じて前記複数の容器形状部に界面活性剤を含有するバッファーを充填し、前記複数の容器形状部から前記バッファーを排出しつつ前記複数の容器形状部に試薬を充填し、前記流路に油性封止液を送液し、前記複数の容器形状部内の前記試薬を前記油性封止液により封止することにより前記複数の容器形状部を複数の独立した核酸検出反応容器とする。
前記界面活性剤の濃度は0.0005%以上0.5%以下であってもよい。
本発明の他の生体分子解析方法は、流路及び複数の容器形状部を有し、表面が疎水性を有する反応容器に対し、タンパク質が前記複数の容器形状部の間の領域に吸着されるのを低減するための界面活性剤を含有するバッファーを前記流路を通じて前記複数の容器形状部に充填し、前記複数の容器形状部から前記バッファーを排出しつつ前記複数の容器形状部に試薬を充填し、前記流路に油性封止液を送液し、前記複数の容器形状部内の前記試薬を前記油性封止液により封止することにより前記複数の容器形状部を複数の独立した核酸検出反応容器とする。
前記界面活性剤の濃度は0.0005%以上0.5%以下であってもよい。
Claims (20)
- 酵素反応を行うための反応容器を有し、
前記反応容器は、
容器形状部を有する基体部と、
前記容器形状部の少なくとも内面に設けられ、前記酵素反応における解析対象となる試料と前記酵素反応のための試薬との少なくとも一方の吸着率が前記基体部の吸着率よりも低い低吸着構造部と、
を有し、
前記反応容器内において酵素反応が行われたときに、前記酵素反応によるシグナルを検出するように構成されている生体分子解析キット。 - 前記低吸着構造部は、前記試料の吸着率が前記基体部よりも低く、前記基体部が前記反応容器内に露出している場合と比較して、前記シグナル検出におけるバックグラウンドが低い請求項1に記載の生体分子解析キット。
- 前記低吸着構造部は、前記試薬の吸着率が前記基体部よりも低く、前記基体部が前記反応容器内に露出している場合と比較して、前記シグナル検出におけるシグナル強度が高い請求項1または請求項2に記載の生体分子解析キット。
- 前記反応容器は、前記容器形状部の内面において前記吸着率を前記基体部より下げるために前記基体部の表面が改質された改質部をさらに有し、
前記容器形状部は、直径5マイクロメートル以下の略円形を有する開口部を有する有底円柱形状である請求項1から請求項3のいずれか一項に記載の生体分子解析キット。 - 前記反応容器は、前記容器形状部の内面において前記吸着率を前記基体部より下げるために前記基体部に積層された低吸着物質層をさらに有し、
前記容器形状部は、直径5マイクロメートル以下の略円形を有する開口部を有する有底円柱形状である請求項1から3のいずれか一項に記載の生体分子解析キット。 - 解析対象となる試料を供給可能な容器形状部及び前記容器形状部が形成された基体部を有し、酵素反応を行うための反応容器と、
前記反応容器に供給可能であって前記酵素反応に使用される試薬と、
を有し、
前記試薬は、前記試料と前記試薬との少なくとも一方の前記基体部への吸着率を低減するための吸着防止剤を含有し、
前記反応容器内において前記酵素反応が行われたときに、前記酵素反応によるシグナルを検出するように構成されている生体分子解析キット。 - 前記酵素反応が等温反応である請求項1から請求項6のいずれか一項に記載の生体分子解析キット。
- 解析対象となる前記試料が、DNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つを含み、解析対象物質がDNA、RNA、miRNA、mRNA、タンパク質のいずれか1つである請求項1から請求項7のいずれか一項に記載の生体分子解析キット。
- 解析対象物質が核酸であり、前記酵素反応がインベーダー反応である請求項8に記載の生体分子解析キット。
- 前記試薬は、蛍光、発光、pH、吸光、電位のいずれか1つによりシグナルを発する請求項1から請求項9のいずれか一項に記載の生体分子解析キット。
- 請求項1から請求項10のいずれか一項に記載の生体分子解析キットを用いた生体分子解析方法。
- 流路を通じて試料を供給可能な容器形状部と、前記容器形状部が形成された基体部と、を有する酵素反応を行うための反応容器と、
前記反応容器に供給可能であって前記酵素反応に使用される試薬と、
を有し、
前記試薬は、前記試薬の表面張力を低減するための界面活性剤を含有し、
前記反応容器内において酵素反応が行われたときに、前記酵素反応による蛍光若しくは発色シグナルを検出するように構成されている生体分子解析キット。 - 前記吸着防止剤が界面活性剤である請求項6に記載の生体分子解析キット。
- 前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤である請求項13に記載の生体分子解析キット。
- 前記非イオン性界面活性剤がTween20である請求項14に記載の生体分子解析キット。
- 前記非イオン性界面活性剤がTriton−100である請求項14に記載の生体分子解析キット。
- 前記界面活性剤の濃度が0.0005%以上5%以下である請求項13に記載の生体分子解析キット。
- 流路及び複数の容器形状部を有する反応容器において、前記流路に試薬を送液し、前記複数のウェルに前記試薬を充填し、
前記流路に油性封止液を送液し、前記複数のウェル内の前記試薬を前記油性封止液により封止することにより前記複数のウェルを複数の独立した核酸検出反応容器を形成すること、を有し、
前記試薬、及び前記油性封止液のうちいずれか1つに界面活性剤が含まれる生体分子解析方法。 - 前記複数のウェルに前記試薬を充填する前に、前記流路を通じて前記複数のウェルに洗浄用のバッファーを充填する工程をさらに有する請求項18に記載の生体分子解析方法。
- 請求項1から10のいずれか一項または請求項12から17のいずれか一項に記載された生体分子解析キットを用いた生体分子解析方法であって、
前記容器形状部に洗浄用のバッファーを供給した後に、前記容器形状部に前記試薬を供給する生体分子解析方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017016262A JP6968544B2 (ja) | 2014-01-31 | 2017-01-31 | バックグラウンド低下剤及びその使用 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014017942 | 2014-01-31 | ||
JP2014017942 | 2014-01-31 | ||
PCT/JP2015/052803 WO2015115635A1 (ja) | 2014-01-31 | 2015-02-02 | 生体分子解析キット及び生体分子解析方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017016262A Division JP6968544B2 (ja) | 2014-01-31 | 2017-01-31 | バックグラウンド低下剤及びその使用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2015115635A1 true JPWO2015115635A1 (ja) | 2017-03-23 |
JP6183471B2 JP6183471B2 (ja) | 2017-08-23 |
Family
ID=53757200
Family Applications (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015557255A Active JP6183471B2 (ja) | 2014-01-31 | 2015-02-02 | 生体分子解析キット及び生体分子解析方法 |
JP2017016262A Active JP6968544B2 (ja) | 2014-01-31 | 2017-01-31 | バックグラウンド低下剤及びその使用 |
JP2018031015A Active JP6477940B2 (ja) | 2014-01-31 | 2018-02-23 | 生体分子解析方法及び生体分子解析キット |
JP2019040985A Active JP6870697B2 (ja) | 2014-01-31 | 2019-03-06 | 生体分子解析方法及び生体分子解析キット |
JP2019205781A Pending JP2020052050A (ja) | 2014-01-31 | 2019-11-13 | 吸着防止剤及びその使用 |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017016262A Active JP6968544B2 (ja) | 2014-01-31 | 2017-01-31 | バックグラウンド低下剤及びその使用 |
JP2018031015A Active JP6477940B2 (ja) | 2014-01-31 | 2018-02-23 | 生体分子解析方法及び生体分子解析キット |
JP2019040985A Active JP6870697B2 (ja) | 2014-01-31 | 2019-03-06 | 生体分子解析方法及び生体分子解析キット |
JP2019205781A Pending JP2020052050A (ja) | 2014-01-31 | 2019-11-13 | 吸着防止剤及びその使用 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US11261484B2 (ja) |
EP (2) | EP3101115B1 (ja) |
JP (5) | JP6183471B2 (ja) |
CN (3) | CN109652295A (ja) |
SG (1) | SG11201606193RA (ja) |
WO (1) | WO2015115635A1 (ja) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109652295A (zh) | 2014-01-31 | 2019-04-19 | 凸版印刷株式会社 | 生物分子分析试剂盒及生物分子分析方法 |
WO2017043530A1 (ja) * | 2015-09-08 | 2017-03-16 | 凸版印刷株式会社 | 生体物質検出方法 |
JPWO2017061600A1 (ja) * | 2015-10-08 | 2018-08-02 | 凸版印刷株式会社 | マイクロ流体デバイスおよび試料分析方法 |
JP6825579B2 (ja) | 2015-12-28 | 2021-02-03 | 凸版印刷株式会社 | マイクロ流体デバイスおよび観察方法 |
JP6808940B2 (ja) * | 2016-01-29 | 2021-01-06 | 凸版印刷株式会社 | アレイデバイス、生体分子解析用キット及び溶媒の封止方法 |
JP6958547B2 (ja) * | 2016-04-27 | 2021-11-02 | 凸版印刷株式会社 | 反応容器及び生化学分析方法 |
JP6835075B2 (ja) | 2016-04-28 | 2021-02-24 | 凸版印刷株式会社 | 解析装置 |
US10324041B2 (en) | 2016-12-21 | 2019-06-18 | Abbott Japan Co., Ltd. | Optical imaging system using lateral illumination for digital assays |
US11047854B2 (en) | 2017-02-06 | 2021-06-29 | Abbott Japan Llc | Methods for reducing noise in signal-generating digital assays |
WO2019098301A1 (ja) | 2017-11-17 | 2019-05-23 | 凸版印刷株式会社 | 標的分子の検出方法 |
JP2019100940A (ja) * | 2017-12-06 | 2019-06-24 | 東ソー株式会社 | 未分化細胞を高感度に検出および回収する方法 |
WO2019131592A1 (ja) * | 2017-12-26 | 2019-07-04 | 凸版印刷株式会社 | 標的分子の検出における偽陰性判定の発生を抑制する方法および検出デバイス |
CN108169480B (zh) * | 2018-02-07 | 2024-03-08 | 上海澜澈生物科技有限公司 | 一种生物标志物的分子数量的检测方法及系统、芯片 |
CN113490854A (zh) | 2019-03-01 | 2021-10-08 | 凸版印刷株式会社 | 微流体设备及试样分析方法 |
US11976269B2 (en) * | 2019-03-18 | 2024-05-07 | Cellular Research, Inc. | Precise delivery of components into fluids |
JPWO2020235607A1 (ja) * | 2019-05-21 | 2020-11-26 | ||
EP3978931A4 (en) * | 2019-05-30 | 2022-08-03 | Toppan Inc. | PROCEDURE FOR APPLICATION OF LIQUID INTO WELLS |
US20220348993A1 (en) * | 2019-07-04 | 2022-11-03 | Riken | Method and kit for detecting target nucleic acid fragment |
JPWO2021117667A1 (ja) * | 2019-12-09 | 2021-06-17 | ||
JPWO2022050247A1 (ja) * | 2020-09-02 | 2022-03-10 | ||
WO2023039540A2 (en) * | 2021-09-10 | 2023-03-16 | Jacobs Technion-Cornell Institute | Compositions and methods for determining humoral immune responses against seasonal coronaviruses and predicting efficiency of sars-cov-2 spike targeting, covid-19 disease severity, and providing interventions |
JPWO2023080102A1 (ja) | 2021-11-04 | 2023-05-11 | ||
CN118140141A (zh) * | 2021-11-04 | 2024-06-04 | 凸版控股株式会社 | 靶物质的检测方法 |
WO2024085226A1 (ja) * | 2022-10-20 | 2024-04-25 | Toppanホールディングス株式会社 | 検出キット及び標的分子の検出方法 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005505754A (ja) * | 2001-07-25 | 2005-02-24 | ザ トラスティーズ オブ プリンストン ユニバーシテイ | 高スループットのマクロ分子分析用のナノチャンネル・アレイ並びにその準備および使用 |
JP2008531039A (ja) * | 2005-02-28 | 2008-08-14 | バイオクエスト インク | 核酸分子が含まれる直接酵素反応方法 |
JP2009189267A (ja) * | 2008-02-13 | 2009-08-27 | Nissui Pharm Co Ltd | 微小ウェル内に分配するための容器 |
JP2010516281A (ja) * | 2007-01-22 | 2010-05-20 | ウェハージェン,インコーポレイテッド | 高スループット化学反応用装置 |
JP2010158182A (ja) * | 2009-01-06 | 2010-07-22 | Shimadzu Corp | Dna定量方法、及び遺伝子解析方法 |
JP2011504094A (ja) * | 2007-11-07 | 2011-02-03 | ザ ユニヴァーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア | マイクロ流体デバイスおよびその使用方法 |
WO2011070776A1 (ja) * | 2009-12-11 | 2011-06-16 | サントル ナショナル ドゥラ ルシェルシュ シヤンティフィック | マイクロチャンバーに捕捉されるdna分子からのタンパク質の合成方法及びその装置 |
WO2013002193A1 (ja) * | 2011-06-28 | 2013-01-03 | コニカミノルタアドバンストレイヤー株式会社 | 界面活性剤を使用した非特異吸着防止処理がなされている分子間相互作用測定方法用のセンサーチップ、当該センサーチップの製造方法、および当該センサーチップを使用する分子間相互作用測定方法 |
Family Cites Families (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0968484A (ja) * | 1995-08-31 | 1997-03-11 | Eiken Chem Co Ltd | 液体採取方法、および液体採取器具 |
US6875572B2 (en) * | 1996-01-24 | 2005-04-05 | Third Wave Technologies, Inc. | Nucleic acid detection assays |
EP2202520A1 (en) | 2000-11-27 | 2010-06-30 | Intelligent Medical Devices LLC | Clinically intelligent diagnostic devices and methods |
WO2003031972A1 (fr) * | 2001-10-05 | 2003-04-17 | Bml, Inc. | Plaque de detection |
EP1461615B1 (en) * | 2001-12-12 | 2007-03-28 | Proteome Systems Intellectual Property Pty Ltd. | Diagnostic testing process |
EP1380642B1 (en) * | 2002-07-10 | 2010-03-31 | FUJIFILM Corporation | A method for the separation and purification of nucleic acid |
US20060147955A1 (en) * | 2004-11-03 | 2006-07-06 | Third Wave Technologies, Inc. | Single step detection assay |
JP3727026B2 (ja) | 2003-04-10 | 2005-12-14 | 博行 野地 | 一分子酵素活性検出に用いられるマイクロチャンバと1000fL以下の液滴を調製する方法 |
KR20080014144A (ko) * | 2003-08-18 | 2008-02-13 | 화이자 프로덕츠 인크. | erbB2 항암제에 대한 투약 스케쥴 |
EP1670945A2 (en) * | 2003-09-19 | 2006-06-21 | Applera Corporation | Microplates useful for conducting thermocycled nucleotide amplification |
US20070014694A1 (en) * | 2003-09-19 | 2007-01-18 | Beard Nigel P | High density plate filler |
EP1746158A4 (en) * | 2004-05-07 | 2009-11-25 | Konica Minolta Med & Graphic | MICROREACTOR FOR TESTING, GENETIC TEST EQUIPMENT AND GENETIC TEST PROCEDURE |
JP5238250B2 (ja) * | 2005-03-31 | 2013-07-17 | 国立大学法人名古屋大学 | 核酸マイクロアレイ、その製造方法および核酸マイクロアレイ用基材 |
US20090054809A1 (en) * | 2005-04-08 | 2009-02-26 | Takeharu Morishita | Sampling Device for Viscous Sample, Homogenization Method for Sputum and Method of Detecting Microbe |
US20090099029A1 (en) * | 2005-06-15 | 2009-04-16 | Invitrogen Corporation | Methods and substrates for conducting assays |
WO2007002588A2 (en) | 2005-06-23 | 2007-01-04 | Applera Corporation | Thermal-cycling pipette tip |
DE102005051978A1 (de) | 2005-10-31 | 2007-05-10 | Forschungszentrum Borstel Zentrum für Medizin und Biowissenschaften | Verfahren zur Bestimmung der Spaltbarkeit von Substraten |
DE102006029032A1 (de) * | 2006-02-17 | 2007-08-23 | Poly-An Gesellschaft zur Herstellung von Polymeren für spezielle Anwendungen und Analytik mbH | Vorrichtung, Verfahren und Kit zum Nachweis von Analyten in einer Probe |
US20080003142A1 (en) | 2006-05-11 | 2008-01-03 | Link Darren R | Microfluidic devices |
CN101578520B (zh) * | 2006-10-18 | 2015-09-16 | 哈佛学院院长等 | 基于形成图案的多孔介质的横向流动和穿过生物测定装置、及其制备方法和使用方法 |
US20090004754A1 (en) | 2007-06-26 | 2009-01-01 | Oldenburg Kevin R | Multi-well reservoir plate and methods of using same |
EP2286228B1 (en) * | 2008-05-16 | 2019-04-03 | Advanced Liquid Logic, Inc. | Droplet actuator devices and methods for manipulating beads |
JP2010156629A (ja) | 2008-12-29 | 2010-07-15 | Yokogawa Electric Corp | 化学処理用カートリッジおよびその使用方法 |
US20110287951A1 (en) * | 2009-01-30 | 2011-11-24 | Emmert-Buck Michael R | Methods and systems for purifying, transferring, and/or manipulating nucleic acids |
US8846314B2 (en) | 2009-03-03 | 2014-09-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Isotachophoretic focusing of nucleic acids |
CN101947124B (zh) * | 2010-06-25 | 2012-07-04 | 博奥生物有限公司 | 一种集成式微流控芯片装置及其使用方法 |
CN103415774B (zh) * | 2011-03-08 | 2014-09-24 | 独立行政法人科学技术振兴机构 | 颗粒封入方法、检测靶分子的方法、阵列、试剂盒及靶分子检测装置 |
US9095852B2 (en) * | 2011-08-22 | 2015-08-04 | The Regents Of The University Of California | Multilayer high density microwells |
US9617589B2 (en) * | 2012-05-25 | 2017-04-11 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Microfluidic devices, solid supports for reagents and related methods |
JP6106374B2 (ja) | 2012-07-06 | 2017-03-29 | ローム株式会社 | 電力供給システム |
CN109652295A (zh) * | 2014-01-31 | 2019-04-19 | 凸版印刷株式会社 | 生物分子分析试剂盒及生物分子分析方法 |
-
2015
- 2015-02-02 CN CN201811188924.3A patent/CN109652295A/zh active Pending
- 2015-02-02 CN CN201580006310.7A patent/CN105940096B/zh active Active
- 2015-02-02 SG SG11201606193RA patent/SG11201606193RA/en unknown
- 2015-02-02 EP EP15742996.0A patent/EP3101115B1/en active Active
- 2015-02-02 JP JP2015557255A patent/JP6183471B2/ja active Active
- 2015-02-02 WO PCT/JP2015/052803 patent/WO2015115635A1/ja active Application Filing
- 2015-02-02 CN CN201910930242.3A patent/CN110564604B/zh active Active
- 2015-02-02 EP EP19190779.9A patent/EP3584306A1/en active Pending
-
2016
- 2016-07-27 US US15/221,143 patent/US11261484B2/en active Active
-
2017
- 2017-01-31 JP JP2017016262A patent/JP6968544B2/ja active Active
-
2018
- 2018-02-23 JP JP2018031015A patent/JP6477940B2/ja active Active
-
2019
- 2019-03-06 JP JP2019040985A patent/JP6870697B2/ja active Active
- 2019-04-17 US US16/387,241 patent/US11371089B2/en active Active
- 2019-11-13 JP JP2019205781A patent/JP2020052050A/ja active Pending
-
2022
- 2022-05-23 US US17/751,031 patent/US20220290222A1/en active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005505754A (ja) * | 2001-07-25 | 2005-02-24 | ザ トラスティーズ オブ プリンストン ユニバーシテイ | 高スループットのマクロ分子分析用のナノチャンネル・アレイ並びにその準備および使用 |
JP2008531039A (ja) * | 2005-02-28 | 2008-08-14 | バイオクエスト インク | 核酸分子が含まれる直接酵素反応方法 |
JP2010516281A (ja) * | 2007-01-22 | 2010-05-20 | ウェハージェン,インコーポレイテッド | 高スループット化学反応用装置 |
JP2011504094A (ja) * | 2007-11-07 | 2011-02-03 | ザ ユニヴァーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア | マイクロ流体デバイスおよびその使用方法 |
JP2009189267A (ja) * | 2008-02-13 | 2009-08-27 | Nissui Pharm Co Ltd | 微小ウェル内に分配するための容器 |
JP2010158182A (ja) * | 2009-01-06 | 2010-07-22 | Shimadzu Corp | Dna定量方法、及び遺伝子解析方法 |
WO2011070776A1 (ja) * | 2009-12-11 | 2011-06-16 | サントル ナショナル ドゥラ ルシェルシュ シヤンティフィック | マイクロチャンバーに捕捉されるdna分子からのタンパク質の合成方法及びその装置 |
WO2013002193A1 (ja) * | 2011-06-28 | 2013-01-03 | コニカミノルタアドバンストレイヤー株式会社 | 界面活性剤を使用した非特異吸着防止処理がなされている分子間相互作用測定方法用のセンサーチップ、当該センサーチップの製造方法、および当該センサーチップを使用する分子間相互作用測定方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
KAN, C.W. ET AL.: "Isolation and detection of single molecules on paramagnetic beads using sequential fluid flows in mi", LAB ON A CHIP, vol. 12, no. 5, JPN6015015933, 2012, pages 977 - 985, ISSN: 0003253649 * |
SAKAKIHARA, S. ET AL.: "A single-molecule enzymatic assay in a directly accessible femtoliter droplet array.", LAB ON A CHIP, vol. 10, no. 24, JPN6015015932, 2010, pages 3355 - 3362, ISSN: 0003586633 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2018121634A (ja) | 2018-08-09 |
JP6870697B2 (ja) | 2021-05-12 |
CN110564604A (zh) | 2019-12-13 |
US20160333400A1 (en) | 2016-11-17 |
SG11201606193RA (en) | 2016-08-30 |
JP6968544B2 (ja) | 2021-11-17 |
JP2019141047A (ja) | 2019-08-29 |
CN110564604B (zh) | 2023-09-29 |
JP6183471B2 (ja) | 2017-08-23 |
WO2015115635A1 (ja) | 2015-08-06 |
EP3101115A1 (en) | 2016-12-07 |
EP3584306A1 (en) | 2019-12-25 |
CN109652295A (zh) | 2019-04-19 |
EP3101115B1 (en) | 2020-10-21 |
EP3101115A4 (en) | 2017-12-13 |
CN105940096B (zh) | 2019-11-05 |
US20220290222A1 (en) | 2022-09-15 |
JP6477940B2 (ja) | 2019-03-06 |
CN105940096A (zh) | 2016-09-14 |
JP2020052050A (ja) | 2020-04-02 |
US20190241948A1 (en) | 2019-08-08 |
US11261484B2 (en) | 2022-03-01 |
JP2017113009A (ja) | 2017-06-29 |
US11371089B2 (en) | 2022-06-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6477940B2 (ja) | 生体分子解析方法及び生体分子解析キット | |
Fu et al. | A microfluidic chip based on surfactant-doped polydimethylsiloxane (PDMS) in a sandwich configuration for low-cost and robust digital PCR | |
US20170233790A1 (en) | Nucleic acid introduction method, nucleic acid detection method, biomolecule analysis method, array device for biomolecule quantification, and biomolecule analysis kit | |
US20180196059A1 (en) | Method for detecting biological substance | |
US11008610B2 (en) | Multiplex slide plate device and operation method thereof | |
JP2011062119A (ja) | 生体試料定量用チップ | |
Sun et al. | Wet-etched microchamber array digital PCR chip for SARS-CoV-2 virus and ultra-early stage lung cancer quantitative detection | |
Schulz et al. | High dynamic range digital assay enabled by dual-volume centrifugal step emulsification | |
JP2017049151A (ja) | 生体物質検出方法 | |
US20220088598A1 (en) | Method of introducing liquid into wells | |
US11135592B2 (en) | Multiplex slide plate device having storage tank | |
Wang et al. | Fluorescence quantification of intracellular materials at the single-cell level by an integrated dual-well array microfluidic device | |
WO2024085132A1 (ja) | 生体物質処理方法及び反応検出方法並びに生体物質処理装置及び反応検出装置 | |
EP4368289A1 (en) | Pcr module | |
JP2011062197A (ja) | 生体試料定量方法 | |
JP2010088317A (ja) | 生体試料定量用チップ、生体試料定量用キット、及び生体試料定量方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20151124 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151120 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20151120 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20151120 |
|
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20160113 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160216 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160418 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160419 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160705 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160905 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160906 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20161101 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170131 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170201 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20170131 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20170207 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20170214 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170418 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170515 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170516 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170627 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170710 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6183471 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |