JP6141912B2 - ナツシロギク(タナセタム・パルテニウム(tanacetumparthenium))からのパルテノライドを含有しない生物活性成分及びその製造方法 - Google Patents
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Description
以下は、本発明の方法の或る実施態様に関連する態様の記載である。
生物活性成分Bを、前記実施例1に記載した方法に従って製造した。生物活性成分Bの分析を行ない、その様々な物理化学的、化学的、及び微生物的特徴を測定した。
生物活性成分Cを、前記実施例1に記載した方法に従って製造した。生物活性成分Cの分析を、その様々な物理化学的、化学的、微生物的、及び生物活性の特徴を測定するために行なった。
生物活性成分Aを、前記実施例1に記載した方法に従って製造した。生物活性成分Aの分析は、その様々な物理化学的、化学的、微生物的、及び生物活性の特徴を測定するために行なった。
生物活性成分の再現性を、同じ畑から2つの連続した季節に収穫した新鮮なナツシロギクを用いて分析した。更に、新鮮なナツシロギクを、同じ成長期に、季節当たり2回収穫した。前記の全ての新鮮なナツシロギクバイオマス試料を、前記実施例1に記載した方法を用いて加工処理した。生物活性成分B及びCの収量、選択された特徴及び特性の比較に関連するデータを下に示す。(生物活性成分Aに関連するデータは、実施例に含まれない。何故なら、この成分の結果は非常に小さい収量であったからである。)
以下は、生物活性成分の特定の特徴を測定するために使用した様々な方法である。これらの方法は前記実施例の全体にわたり参照される。以下「試験される生成物」又は「試験試料」への言及は、生物活性成分を指す。
乾燥物質の測定のための手法は、100℃の水浴中完全な水の蒸発までの試験される生成物の蒸発、105℃で3時間の試料のオーブン貯蔵、室温までの冷却、及び固体物質を有する容器の重量の即時の測定を包含した。
L*a*b*値の測定のための手法は、Hunter Labscanの固定形状比色計(fixed geometry colorimeter)を用いて、0°/45°の形状(geometry)を測定した。上に面した覗き窓を有する標準光源D65を用いた。試験される生物活性成分を有する容器を、覗き窓上に設置して、底部を介して測定した。次のCIELAB式を用いた:
メタノール及び30分の長音波処理を用いて試料を抽出した。固定相としてC18逆相カラムを使用し、移動相として44%アセトニトリル:56%水及び0.1%リン酸を使用した。パルテノライド検出は225nmで行ない、パルテノライド濃度は、30μg/g〜900μg/gの範囲の6個のパルテノライド標準品(Sigma−Aldrich Corporation,St.Louis,MO)を用いて作成した多点校正曲線を使用して測定した。これらの条件下での検出限界は0.7μg/mLである。これらの条件のセットを用いて、約30μg/gのパルテノライドを定量することができる。
試験される試料の微生物学的特徴は、米国薬局方(United States Pharmacopoeia;USP)の方法UPS XXVII,NF22,<61>,Microbiological Limit Tests(これはその全体が参照することにより本明細書に組み込まれる)に従って測定した。前記試験は、総好気性菌数、総カビ及び酵母(好気性平板菌数)、サルモネラ種(Salmonella(sp.))・大腸菌(E. coli)・黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)及びシュードモナス種(Pseudomonas sp.)の測定を含む。
試験される生物活性成分のエラスターゼ阻害活性は、ヒト好中球エラスターゼ(Elastin Products Company,Inc.,Owenswille,MO)及び合成ペプチド可溶性基質N−MeO−Suc−Ala−Ala−Pro−Val−p−NA(Sigma−Aldrich Corporation,St.Louis,MO)を用いるアッセイを使用して測定した。このアッセイは、Elastin Products Company’s Catalog,“Determination of human elastase activity,”Research Biochemical Catalog,Elastin Product Company,Inc.,Owensville,MO,at page84(2004)(これはその全体が参照することにより本明細書に組み込まれる)に記載されている修正手法を包含する。基質の酵素開裂は、50mM NaClを含有する0.1Mトリス−HCl緩衝液(pH7.5)を用いて、410nm及び25℃で測定した。分光光度計キュベットの反応培地の全容積は、3.0mLであった。試験される各生物活性成分は、酵素反応速度の50%阻害(IC50)を達成するのに必要な諸濃度で試験した。
用いた方法は、Quick et al.,“Rapid microplate assay for superoxide scavenging efficiency,”J.Neuroscience Methods,97:139−144(2000)(これはその全体が参照することにより本明細書に組み込まれる)の論文に記載された手法に基づいた。
Claims (7)
- ナツシロギク(タナセタム・パルテニウム(Tanacetum parthenium))植物の新鮮なバイオマスの細胞汁液に由来する細胞質画分沈殿を含む、抗炎症活性を有する生物活性成分であって、
前記細胞質画分沈殿が、
ナツシロギク(タナセタム・パルテニウム(Tanacetum parthenium))植物の新鮮なバイオマスを供給する工程;
α−不飽和γ−ラクトン類を少なくとも実質的に含有しない細胞汁液上澄み、及びα−不飽和γ−ラクトン類を含有する膜画分を生じるのに有効な条件下に、前記の新鮮なバイオマスを加工処理する工程であって、
前記の新鮮なバイオマスを加工処理する工程が、
(i)前記の新鮮なバイオマスを、細胞汁液成分及び高繊維質物質に分離する工程、及び(ii)前記細胞汁液成分をpH調整とマイクロ波処理とを組み合わせた工程にかけて、
α−不飽和γ−ラクトン類を少なくとも実質的に含有しない細胞汁液上澄みを生じさせる工程であって、前記pH調整がpHを3〜4の範囲に減少させることを含む前記工程
を含む、前記工程;
第1の細胞汁液漿液上澄み及び細胞質画分沈殿を生じるのに有効な条件下に、前記細胞汁液上澄みを処理する工程;及び
前記細胞質画分沈殿を単離する工程;
を含む方法によって製造され、そして
前記細胞質画分沈殿が、約0.01重量パーセント以下のα−不飽和γ−ラクトン類を含有するとういう点で、前記細胞質画分沈殿が、α−不飽和γ−ラクトン類を実質的に含有しない生物活性画分であり、前記α−不飽和γ−ラクトン類がパルテノライドであり、そして前記細胞質画分沈殿が、有機溶媒を必要とせずに製造される、前記生物活性成分。 - ナツシロギク(タナセタム・パルテニウム(Tanacetum parthenium))植物の新鮮なバイオマスの細胞汁液に由来する安定化された細胞汁液漿液画分を含む、抗炎症活性を有する生物活性成分であって、
前記安定化された細胞汁液漿液画分が、
ナツシロギク(タナセタム・パルテニウム(Tanacetum parthenium))植物の新鮮なバイオマスを供給する工程;
α−不飽和γ−ラクトン類を少なくとも実質的に含有しない細胞汁液上澄み、及びα−不飽和γ−ラクトン類を含有する膜画分を生じるのに有効な条件下に、前記の新鮮なバイオマスを加工処理する工程であって、
前記の新鮮なバイオマスを加工処理する工程が、
(i)前記の新鮮なバイオマスを、細胞汁液成分及び高繊維質物質に分離する工程、
(ii)前記細胞汁液成分を清澄化して、清澄化された細胞汁液成分を得る工程、及び
(iii)前記の清澄化された細胞汁液成分をpH調整とマイクロ波処理とを組み合わせた工程にかけて、α−不飽和γ−ラクトン類を少なくとも実質的に含有しない細胞汁液上澄みを生じさせる工程であって、前記pH調整がpHを3〜4の範囲に減少させることを含む前記工程
を含む、前記工程;
第1の細胞汁液漿液上澄み及び細胞質画分沈殿を生じるのに有効な条件下に、前記細胞汁液上澄みを処理する工程;
第2の細胞汁液漿液上澄みを生じるのに有効な条件下に、前記の第1の細胞汁液漿液上澄みを清澄化する工程;及び
安定化された細胞汁液漿液画分を生じるのに有効な条件下に、安定剤を前記の第2の細胞汁液漿液上澄みと混合する工程;
を含む方法によって製造され、そして
前記安定化された細胞汁液漿液画分が、約0.01重量パーセント以下のα−不飽和γ−ラクトン類を含有するとういう点で、前記安定化された細胞汁液漿液画分が、α−不飽和γ−ラクトン類を実質的に含有しない生物活性画分であり、前記α−不飽和γ−ラクトン類がパルテノライドであり、そして前記安定化された細胞汁液漿液画分が、有機溶媒を必要とせずに製造される、前記生物活性成分。 - 前記安定化された細胞汁液漿液画分が約0.01パーセント(体積/体積)と約2.0パーセント(体積/体積)の間のIC50値の範囲の抗炎症活性を有し、前記IC50値がエラスターゼ酵素反応速度を50パーセント減少させるのに必要な生物活性成分の濃度を表す、請求項2に記載の生物活性成分。
- 前記安定化された細胞汁液漿液画分が約0.007パーセント(体積/体積)と約1.0パーセント(体積/体積)の間のIC50値の範囲の抗酸化活性を有し、前記IC50値がシトクロムc還元速度を50パーセント減少させるのに必要な生物活性成分の濃度を表す、請求項2に記載の生物活性成分。
- ナツシロギク(タナセタム・パルテニウム(Tanacetum parthenium))植物の新鮮なバイオマスの細胞汁液に由来する安定化された濃縮細胞汁液漿液画分を含む、抗炎症活性を有する生物活性成分であって、
前記安定化された濃縮細胞汁液漿液画分が、
ナツシロギク(タナセタム・パルテニウム(Tanacetum parthenium))植物の新鮮なバイオマスを供給する工程;
α−不飽和γ−ラクトン類を少なくとも実質的に含有しない細胞汁液上澄み、及びα−不飽和γ−ラクトン類を含有する膜画分を生じるのに有効な条件下に、前記の新鮮なバイオマスを加工処理する工程であって、
前記の新鮮なバイオマスを加工処理する工程が、
(i)前記の新鮮なバイオマスを、細胞汁液成分及び高繊維質物質に分離する工程、
(ii)前記細胞汁液成分を清澄化して、清澄化された細胞汁液成分を得る工程、及び
(iii)前記の清澄化された細胞汁液成分をpH調整とマイクロ波処理とを組み合わせた工程にかけて、α−不飽和γ−ラクトン類を少なくとも実質的に含有しない細胞汁液上澄みを生じさせる工程であって、前記pH調整がpHを3〜4の範囲に減少させることを含む前記工程
を含む、前記工程;
第1の細胞汁液漿液上澄み及び前記細胞質画分沈殿を生じるのに有効な条件下に、前記細胞汁液上澄みを処理する工程;
第2の細胞汁液漿液上澄みを生じるのに有効な条件下に、前記の第1の細胞汁液漿液上澄みを清澄化する工程;
安定化された細胞汁液漿液画分を生じるのに有効な条件下に、安定剤を前記の第2の細胞汁液漿液上澄みと混合する工程;
濃縮細胞汁液漿液上澄みを生じるのに有効な条件下に、前記の安定化された細胞汁液漿液画分を濃縮する工程;及び
安定化された濃縮細胞汁液漿液画分を生じるのに有効な条件下に、安定剤を前記濃縮細胞汁液漿液上澄みと混合する工程;
を含む方法によって製造され、そして
前記安定化された濃縮細胞汁液漿液画分が、0.00007重量パーセント未満のα−不飽和γ−ラクトン類を含有するとういう点で、前記安定化された濃縮細胞汁液漿液画分がα−不飽和γ−ラクトン類を含有しない生物活性画分であり、前記α−不飽和γ−ラクトン類がパルテノライドであり、そして前記安定化された濃縮細胞汁液漿液画分が、有機溶媒を必要とせずに製造される、前記生物活性成分。 - 前記安定化された濃縮細胞汁液漿液画分が約0.01パーセント(体積/体積)と約2.0パーセント(体積/体積)の間のIC50値の範囲の抗炎症活性を有し、前記IC50値がエラスターゼ酵素反応速度を50パーセント減少させるのに必要な生物活性成分の濃度を表す、請求項5に記載の生物活性成分。
- 前記安定化された濃縮細胞汁液漿液画分が約0.007パーセント(体積/体積)と約1.0パーセント(体積/体積)の間のIC50値の範囲の抗酸化活性を有し、前記IC50値がシトクロムc還元速度を50パーセント減少させるのに必要な生物活性成分の濃度を表す、請求項5に記載の生物活性成分。
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