JP6069057B2 - 5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法 - Google Patents
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Description
本発明は、5−アミノレブリン酸生産微生物を用いて5−アミノレブリン酸又はその塩を高い収率で製造する方法を提供することを目的とする。
さらに、酵母エキス等の通常の栄養成分に加えて、グルタミン酸又はその塩の濃度を増加させ、また、さらにL−アルギニン又はその塩を含有する培地で5−アミノレブリン酸生産微生物を培養することにより、5−アミノ−4−ヒドロキシペンタン酸の生成を抑制できることを見出し、本発明を完成するに至った。
〔1〕グルタミン酸又はその塩をグルタミン酸換算で42mM〜100mM含有する培地中で5−アミノレブリン酸生産微生物を培養することを特徴とする5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
〔2〕培地が、さらにL−アルギニン又はその塩を含有するものである〔1〕記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
〔3〕L−アルギニン又はその塩の含有量が、培地中L−アルギニン換算で0.01mM〜30mMである〔2〕記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
〔4〕5−アミノレブリン酸生産微生物が、ロドバクター(Rhodobacter)属に属するものである〔1〕〜〔3〕のいずれかに記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
〔5〕5−アミノレブリン酸生産微生物が、ロドバクター・スフェロイデス(Rhodobacter sphaeroides)又はその変異株である請求項〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
〔6〕5−アミノレブリン酸生産微生物が、ロドバクター・スフェロイデス(Rhodobacter sphaeroides)CR−0072009と命名され、FERM BP−6320として寄託されたものである〔1〕〜〔5〕のいずれかに記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
〔7〕L−アルギニン又はその塩の含有量が、培地中L−アルギニン換算で0.5mM〜15mMである〔2〕〜〔6〕のいずれかに記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
培地1(組成は表1に示す)200mLを2L容三角フラスコに分注し、121℃で20分間滅菌した後、放冷した。これにロドバクター・スフェロイデスCR0072009(FERM BP−6320)を植菌後、32℃、暗所にて26時間振盪培養した。
3L容の培養槽に1.8Lの培地2(組成は表2に示す)を調製したところへ、製造例1で得られた培養物を、初期ODが0.4となるように植菌し、28℃、通気量1.8L/分、DO5%下限で撹拌培養した。培養24〜26時間後にグリシン65mM、レブリン酸を5mMになるように添加し、撹拌回転数を420rpmにして、硫酸を用いてpHを6.4〜6.5に保ちながら培養を続けた。さらに培養40時間後から12時間毎にグリシンが65mMとなるように添加し、最初のグリシン添加から52時間で培養を止めた。培養停止後の5−アミノレブリン酸蓄積量を表3に示す。表3の生産比率とは比較例1の5−アミノレブリン酸蓄積量を100%として表している。
培地に加えるグルタミン酸ナトリウム一水和物の濃度が8.4g/L(グルタミン酸濃度44.9mM)である以外は比較例1と同様な操作を行った。グリシン添加から52時間で培養を止めた際の5−アミノレブリン酸蓄積量を表3に示す。
培地に加えるグルタミン酸ナトリウム一水和物の濃度が9.3g/L(グルタミン酸濃度49.7mM)である以外は比較例1と同様な操作を行った。グリシン添加から52時間で培養を止めた際の5−アミノレブリン酸蓄積量を表3に示す。
培地に加えるグルタミン酸ナトリウム一水和物の濃度が11.4g/L(グルタミン酸濃度60.9mM)である以外は比較例1と同様な操作を行った。グリシン添加から52時間で培養を止めた際の5−アミノレブリン酸蓄積量を表3に示す。
200mLの培地1を2L容三角フラスコに分注し、121℃で20分間滅菌した後、放冷した。これにロドバクター・スフェロイデスCR0072009(FERM BP−6320)を植菌後、32℃、暗所にて24時間振盪培養した。
200mLの培地1を2L容三角フラスコに分注し、121℃で20分間滅菌した後、放冷した。これにロドバクター・スフェロイデスCR0072009(FERM BP−6320)を植菌後、32℃、暗所にて26時間振盪培養した。
3L容の培養槽に1.8Lの培地4(組成は表6に示す)を調製したところへ、製造例3で得られた培養物を、初期ODが0.4となるように植菌し、28℃、通気量1.8L/分、DO5%下限で撹拌培養した。培養24〜26時間後にグリシン65mM、レブリン酸を5mMになるように添加し、撹拌回転数を420rpmにして、硫酸を用いてpHを6.4〜6.5に保ちながら培養を続けた。さらに培養40時間後から12時間毎にグリシンが65mMとなるように添加し、最初のグリシン添加から52時間で培養を止めた。5−アミノレブリン酸蓄積量、及び5−アミノ−4−ヒドロキシペンタン酸の濃度を表7に示す。
グルタミン酸ナトリウム一水和物を9.3g/Lになるように添加した以外は比較例2と同様な操作を行った。5−アミノレブリン酸蓄積量、及び5−アミノ−4−ヒドロキシペンタン酸の濃度を表7に示す。
培養24〜26時間後に、L−アルギニンを5mMになるように添加した以外は比較例3と同様な操作を行った。5−アミノレブリン酸蓄積量、及び5−アミノ−4−ヒドロキシペンタン酸の濃度を表7に示す。
培養24〜26時間後に、L−アルギニンを7.5mMになるように添加した以外は比較例3と同様な操作を行った。5−アミノレブリン酸蓄積量、及び5−アミノ−4−ヒドロキシペンタン酸の濃度を表7に示す。
培養24〜26時間後に、L−アルギニンを10mMになるように添加した以外は比較例3と同様な操作を行った。5−アミノレブリン酸蓄積量、及び5−アミノ−4−ヒドロキシペンタン酸の濃度を表7に示す。
Claims (4)
- グルタミン酸又はその塩をグルタミン酸換算で48mM〜60.9mM、及びL−アルギニン又はその塩をL−アルギニン換算で5mM〜10mM含有する培地中で5−アミノレブリン酸生産微生物を培養することを特徴とする5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
- 5−アミノレブリン酸生産微生物が、ロドバクター(Rhodobacter)属に属するものである請求項1記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
- 5−アミノレブリン酸生産微生物が、ロドバクター・スフェロイデス(Rhodobacter sphaeroides)又はその変異株である請求項1又は2記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
- 5−アミノレブリン酸生産微生物が、ロドバクター・スフェロイデス(Rhodobacter sphaeroides)CR−0072009と命名され、FERM BP−6320として寄託されたものである請求項1〜3のいずれかに記載の5−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法。
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