JP3124692B2 - ５−アミノレブリン酸の製造方法 - Google Patents
５−アミノレブリン酸の製造方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、光合成細菌を光を照射
しなくとも培養でき、酸素供給量を調節することで５−
アミノレブリン酸を高収量で製造し得る方法に関する。
しなくとも培養でき、酸素供給量を調節することで５−
アミノレブリン酸を高収量で製造し得る方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】５−アミノレブリン酸は、テトラピロー
ル化合物（ビタミンＢ12、ヘム、クロロフィルなど）を
生合成する色素生合成経路の代謝中間体として広く生物
圈に存在し、生体内で重要な役割を果たしている化合物
である。すなわち、５−アミノレブリン酸は生体系中
で、グリシンとスクシニルＣｏＡから５−アミノレブリ
ン酸合成酵素によって、もしくはグルタミン酸によって
生合成され、５−アミノレブリン酸デヒドラターゼによ
り代謝されていくものである。
ル化合物（ビタミンＢ12、ヘム、クロロフィルなど）を
生合成する色素生合成経路の代謝中間体として広く生物
圈に存在し、生体内で重要な役割を果たしている化合物
である。すなわち、５−アミノレブリン酸は生体系中
で、グリシンとスクシニルＣｏＡから５−アミノレブリ
ン酸合成酵素によって、もしくはグルタミン酸によって
生合成され、５−アミノレブリン酸デヒドラターゼによ
り代謝されていくものである。
【０００３】また、５−アミノレブリン酸は、除草剤、
殺虫剤、植物成長調節剤、植物の光合成増強剤として優
れた効果を示し、しかも人畜に対して毒性を示さず、分
解性が高いため環境への残留性もない、など優れた効果
を示す天然化合物である（特開昭６１−５０２８１４
号、特開平２−１３８２０１号公報）。
殺虫剤、植物成長調節剤、植物の光合成増強剤として優
れた効果を示し、しかも人畜に対して毒性を示さず、分
解性が高いため環境への残留性もない、など優れた効果
を示す天然化合物である（特開昭６１−５０２８１４
号、特開平２−１３８２０１号公報）。
【０００４】しかし、５−アミノレブリン酸は、生産コ
ストが高く、除草剤や植物成長調節剤、植物の光合成増
強剤として使用するには実用性に欠ける（ＣＨＥＭＩＣ
ＡＬＷＥＥＫ／Ｏｃｔｏｂｅｒ，２９，１９８４）。こ
のような現状において、多くの化学合成法が検討されて
いる（例えば特開平２−７６８４１号、同２−２６１３
８９号公報）が、未だ十分満足できる方法が開発されて
いない。
ストが高く、除草剤や植物成長調節剤、植物の光合成増
強剤として使用するには実用性に欠ける（ＣＨＥＭＩＣ
ＡＬＷＥＥＫ／Ｏｃｔｏｂｅｒ，２９，１９８４）。こ
のような現状において、多くの化学合成法が検討されて
いる（例えば特開平２−７６８４１号、同２−２６１３
８９号公報）が、未だ十分満足できる方法が開発されて
いない。
【０００５】一方、微生物を用いた５−アミノレブリン
酸の製造方法も検討されている。例えばプロピオニバク
テリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、
メタノバクテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）属又はメタノサルチナ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉ
ｎａ）属等を用いる方法（特開平５−１８４３７６号公
報等）が提案されているが、生産量が非常に少なく、工
業的には満足できるものではなかった。
酸の製造方法も検討されている。例えばプロピオニバク
テリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、
メタノバクテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ）属又はメタノサルチナ（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉ
ｎａ）属等を用いる方法（特開平５−１８４３７６号公
報等）が提案されているが、生産量が非常に少なく、工
業的には満足できるものではなかった。
【０００６】また、ロドバクター（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔ
ｅｒ）属を用いる方法（特開平６−１４１８７５号公
報）は、上記の微生物を用いる方法に比べ生産量が多い
が、ロドバクター属を含む光合成細菌の著量な色素合成
には光照射が必要であり、色素の前駆体である５−アミ
ノレブリン酸の生産においても十分な光を照射しなけれ
ばならず、コストがかかる等実用化にはなお多くの課題
を残していた。
ｅｒ）属を用いる方法（特開平６−１４１８７５号公
報）は、上記の微生物を用いる方法に比べ生産量が多い
が、ロドバクター属を含む光合成細菌の著量な色素合成
には光照射が必要であり、色素の前駆体である５−アミ
ノレブリン酸の生産においても十分な光を照射しなけれ
ばならず、コストがかかる等実用化にはなお多くの課題
を残していた。
【０００７】この問題を解決するため、ロドバクター属
細菌を変異し、変異株を作製し、光照射を必要としない
従属栄養条件下で５−アミノレブリン酸を製造する方法
も提案されているが（特開平４−３３３５２１号）、そ
の生産量は光照射を用いる方法に比べ少ないものであっ
た。
細菌を変異し、変異株を作製し、光照射を必要としない
従属栄養条件下で５−アミノレブリン酸を製造する方法
も提案されているが（特開平４−３３３５２１号）、そ
の生産量は光照射を用いる方法に比べ少ないものであっ
た。
【０００８】一方、光照射を必要としない従属栄養条件
下での微生物培養において、酸素はエネルギー産生のた
め必要不可欠なものである。
下での微生物培養において、酸素はエネルギー産生のた
め必要不可欠なものである。
【０００９】しかしながら、酸素は光合成細菌、特に紅
色非硫黄細菌の色素合成を阻害し、更に５−アミノレブ
リン酸合成酵素も酸素によって不活性化されるといわれ
ている〔蛋白質、核酸、酵素、Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．
３、１９５（１９７０）〕。
色非硫黄細菌の色素合成を阻害し、更に５−アミノレブ
リン酸合成酵素も酸素によって不活性化されるといわれ
ている〔蛋白質、核酸、酵素、Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．
３、１９５（１９７０）〕。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、好気条件下で、菌の培養を行うことができ、かつ光
の照射、非照射にかかわらず、５−アミノレブリン酸を
高収率で産生することができる方法を提供することにあ
る。
は、好気条件下で、菌の培養を行うことができ、かつ光
の照射、非照射にかかわらず、５−アミノレブリン酸を
高収率で産生することができる方法を提供することにあ
る。
【００１１】
【課題を解決するための手段】斯かる実情に鑑み本発明
者らは鋭意研究を行った結果、５−アミノレブリン酸を
生産する光合成細菌を用い下記の条件で酸素供給を制限
すれば、菌体のエネルギー生成に必要な酸素量を損なう
ことなく、多量の５−アミノレブリン酸を生産できるこ
とを見出し本発明を完成した。
者らは鋭意研究を行った結果、５−アミノレブリン酸を
生産する光合成細菌を用い下記の条件で酸素供給を制限
すれば、菌体のエネルギー生成に必要な酸素量を損なう
ことなく、多量の５−アミノレブリン酸を生産できるこ
とを見出し本発明を完成した。
【００１２】すなわち、本発明は、ロドバクターセファ
ロイデスもしくはロドバクターカプシュレイタスまたは
これらの変異株〔但し、ＣＲ−１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１１７５２）を除く〕を、（ｂ）培養液中の酸化還元電
位が−１８０〜５０ｍＶの条件下で培養することを特徴
とする５−アミノレブリン酸の製造方法を提供するもの
である。また、本発明は、条件（ｂ）と更に（ａ）培養
液中の溶存酸素濃度が1ppm未満の条件下で培養すること
を特徴とする５−アミノレブリン酸の製造法を提供する
ものである。更にまた、本発明は、条件（ａ）及び
（ｂ）と更に（ｃ）菌呼吸速度が５×１０-9〜６×１０
-8〔mol of O2/ml・min・cell〕の条件下で培養するこ
とを特徴とする５−アミノレブリン酸の製造方法を提供
するものである。
ロイデスもしくはロドバクターカプシュレイタスまたは
これらの変異株〔但し、ＣＲ−１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−
１１７５２）を除く〕を、（ｂ）培養液中の酸化還元電
位が−１８０〜５０ｍＶの条件下で培養することを特徴
とする５−アミノレブリン酸の製造方法を提供するもの
である。また、本発明は、条件（ｂ）と更に（ａ）培養
液中の溶存酸素濃度が1ppm未満の条件下で培養すること
を特徴とする５−アミノレブリン酸の製造法を提供する
ものである。更にまた、本発明は、条件（ａ）及び
（ｂ）と更に（ｃ）菌呼吸速度が５×１０-9〜６×１０
-8〔mol of O2/ml・min・cell〕の条件下で培養するこ
とを特徴とする５−アミノレブリン酸の製造方法を提供
するものである。
【００１３】本発明に用いられる菌の中でも、好気条件
において又は天然成分を添加した複合培地中において
も、できるだけ５−アミノレブリン酸の生産能の高い菌
株を用いることが好ましく、そのような菌株としては、
工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ ＢＰ−
５２５５として寄託されているＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ ＣＲ−５２０株を例示するこ
とができる。
において又は天然成分を添加した複合培地中において
も、できるだけ５−アミノレブリン酸の生産能の高い菌
株を用いることが好ましく、そのような菌株としては、
工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ ＢＰ−
５２５５として寄託されているＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ ＣＲ−５２０株を例示するこ
とができる。
【００１４】５−アミノレブリン酸を生産する光合成細
菌を培養するための培地としては、該微生物が十分に増
殖し得るものであればいずれをも用いることができる
が、該培地中には資化し得る炭素源及び窒素源を適当含
有せしめておくことが好ましい。炭素源としては、グル
コース等の糖類、酢酸、リンゴ酸、乳酸、コハク酸等の
酸類などを用いることができる。また、窒素源として
は、硫安、塩安等のアンモニア態窒素化合物、硝酸ナト
リウム等の硝酸態窒素化合物等の無機窒素源、尿素、ポ
リペプトン、酵母エキス等の有機窒素化合物などを用い
ることができる。
菌を培養するための培地としては、該微生物が十分に増
殖し得るものであればいずれをも用いることができる
が、該培地中には資化し得る炭素源及び窒素源を適当含
有せしめておくことが好ましい。炭素源としては、グル
コース等の糖類、酢酸、リンゴ酸、乳酸、コハク酸等の
酸類などを用いることができる。また、窒素源として
は、硫安、塩安等のアンモニア態窒素化合物、硝酸ナト
リウム等の硝酸態窒素化合物等の無機窒素源、尿素、ポ
リペプトン、酵母エキス等の有機窒素化合物などを用い
ることができる。
【００１５】更に、無機塩類等の微量成分、アラニン、
バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニル
アラニン、トリプトファン、メチオニン、グリシン、セ
リン、トレオニン、システイン、グルタミン、アスパラ
ギン、チロシン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸；酵母エキ
ス、乾燥酵母、ペプトン、肉エキス、麦芽エキス、コー
ンスティープリカー、カザミノ酸等の天然成分等を適宜
添加することができる。また５−アミノレブリン酸を生
産する場合、培地にグリシン及びレブリン酸を添加する
ことが好ましい。グリシンの添加量は５〜１００ｍＭ、
特に１０〜６０ｍＭとすることが好ましく、レブリン酸
の添加量は１〜６０ｍＭ、特に５〜３０ｍＭが好まし
い。このグリシン、レブリン酸の添加は、菌株の増殖速
度を低下させる場合があるので、そのときはある程度増
殖した時点で添加するとよい。
バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニル
アラニン、トリプトファン、メチオニン、グリシン、セ
リン、トレオニン、システイン、グルタミン、アスパラ
ギン、チロシン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸；酵母エキ
ス、乾燥酵母、ペプトン、肉エキス、麦芽エキス、コー
ンスティープリカー、カザミノ酸等の天然成分等を適宜
添加することができる。また５−アミノレブリン酸を生
産する場合、培地にグリシン及びレブリン酸を添加する
ことが好ましい。グリシンの添加量は５〜１００ｍＭ、
特に１０〜６０ｍＭとすることが好ましく、レブリン酸
の添加量は１〜６０ｍＭ、特に５〜３０ｍＭが好まし
い。このグリシン、レブリン酸の添加は、菌株の増殖速
度を低下させる場合があるので、そのときはある程度増
殖した時点で添加するとよい。
【００１６】培養にあたっての培養温度、pHは上記菌株
等が生育する条件でよく、例えば、温度２０〜４０℃、
pH６〜８とすることが好ましい。なお５−アミノレブリ
ン酸の生産時にpHが変化する場合には、水酸化ナトリウ
ム、アンモニア、水酸化カリウム等のアルカリ溶液や塩
酸、硫酸、燐酸等の酸を用いてpHを調整することが好ま
しい。また、培養にあたっては、特に光照射をする必要
はない。
等が生育する条件でよく、例えば、温度２０〜４０℃、
pH６〜８とすることが好ましい。なお５−アミノレブリ
ン酸の生産時にpHが変化する場合には、水酸化ナトリウ
ム、アンモニア、水酸化カリウム等のアルカリ溶液や塩
酸、硫酸、燐酸等の酸を用いてpHを調整することが好ま
しい。また、培養にあたっては、特に光照射をする必要
はない。
【００１７】本発明においては、５−アミノレブリン酸
を効率よく生産するために、上記の如く酸素供給の制限
を行うが、具体的には、次のうち一つ以上の条件下で培
養を行う。
を効率よく生産するために、上記の如く酸素供給の制限
を行うが、具体的には、次のうち一つ以上の条件下で培
養を行う。
【００１８】（ａ）培養液中の溶存酸素濃度は１ppm 未
満であるが、特に０．５ppm 未満、更に０．１ppm 未満
（現段階での測定機器における検出限界以下）とするこ
とが好ましい。この濃度の測定は溶存酸素計を用いて行
えばよい。 （ｂ）培養液中の酸化還元電位は−１８０〜５０ｍＶで
あるが、特に−１００〜２０ｍＶ、更に−５０〜０ｍＶ
とすることが好ましい。酸化還元電位の測定は、酸化還
元電位計を用いて行えばよい。
満であるが、特に０．５ppm 未満、更に０．１ppm 未満
（現段階での測定機器における検出限界以下）とするこ
とが好ましい。この濃度の測定は溶存酸素計を用いて行
えばよい。 （ｂ）培養液中の酸化還元電位は−１８０〜５０ｍＶで
あるが、特に−１００〜２０ｍＶ、更に−５０〜０ｍＶ
とすることが好ましい。酸化還元電位の測定は、酸化還
元電位計を用いて行えばよい。
【００１９】（ｃ）菌呼吸速度は５×１０-9〜６×１０
-8〔mol of O2/ml・min・cell〕であるが、特に１×１
０-8〜４×１０-8〔mol of O2/ml・min・cell〕とする
ことが好ましい。
-8〔mol of O2/ml・min・cell〕であるが、特に１×１
０-8〜４×１０-8〔mol of O2/ml・min・cell〕とする
ことが好ましい。
【００２０】菌呼吸速度の測定には、排酸素・炭酸ガス
分析計を用いればよい。
分析計を用いればよい。
【００２１】菌呼吸速度の算定方法は、一般的な計算法
としてのＨｉｒｏｓｅらの計算式（Ａｇｒｉｃ．Ｂｌｏ
ｌ Ｃｈｅｍ，２９，９３１，１９６５）から、更に単
位体積あたりの菌体量のばらつきを補正するために、菌
体量で割り込んで求める方法を採った。すなわち次式に
示す通りである。
としてのＨｉｒｏｓｅらの計算式（Ａｇｒｉｃ．Ｂｌｏ
ｌ Ｃｈｅｍ，２９，９３１，１９６５）から、更に単
位体積あたりの菌体量のばらつきを補正するために、菌
体量で割り込んで求める方法を採った。すなわち次式に
示す通りである。
【００２２】
【数１】
【００２３】Ｒａｂ／ａ：菌呼吸速度（mol of O2/ml・
min・cell） Ｑ：通気量（ml/min） Ｖ：張込液量（ml） Ｔ：培養温度（℃） ｘ0, ｘ1：空気出口及び入口の酸素濃度（％） ｙ0, ｙ1：空気出口及び入口の炭酸ガス濃度（％） ａ：菌体量、ｄｒｙ ｃｅｌｌ ｗｅｉｇｈｔ／Ｌ（ｃ
ｅｌｌ）
min・cell） Ｑ：通気量（ml/min） Ｖ：張込液量（ml） Ｔ：培養温度（℃） ｘ0, ｘ1：空気出口及び入口の酸素濃度（％） ｙ0, ｙ1：空気出口及び入口の炭酸ガス濃度（％） ａ：菌体量、ｄｒｙ ｃｅｌｌ ｗｅｉｇｈｔ／Ｌ（ｃ
ｅｌｌ）
【００２４】菌呼吸速度は培養槽内における菌体の酸素
吸収速度をあらわし、値が大きいほど活発な酸素利用を
示す。
吸収速度をあらわし、値が大きいほど活発な酸素利用を
示す。
【００２５】これら（ａ）〜（ｃ）の指標は、いずれも
同様な傾向を示すことが多いので、少なくとも一つを用
いればよいが、二つ以上の値を分析することが好まし
い。
同様な傾向を示すことが多いので、少なくとも一つを用
いればよいが、二つ以上の値を分析することが好まし
い。
【００２６】これらの条件を満足させる方法としては、
種々の手段を採用しうる。例えば発酵槽への通気量、攪
拌速度、培地張込量の増減、通気ガス中の酸素分圧の調
節、還元物質の添加、培地供給量の調節などがある。ま
た本発明は酸素供給量を制限するため、菌の増殖速度を
低下させる場合があるので、その場合は、菌体生育には
十分な酸素供給を行い、ある程度菌体が増殖した時点で
制御を開始すればよい。
種々の手段を採用しうる。例えば発酵槽への通気量、攪
拌速度、培地張込量の増減、通気ガス中の酸素分圧の調
節、還元物質の添加、培地供給量の調節などがある。ま
た本発明は酸素供給量を制限するため、菌の増殖速度を
低下させる場合があるので、その場合は、菌体生育には
十分な酸素供給を行い、ある程度菌体が増殖した時点で
制御を開始すればよい。
【００２７】なお以上のようにして得られる培養液中の
５−アミノレブリン酸は、常法により精製することがで
きる。例えば、５−アミノレブリン酸は菌体外に分泌さ
れるので、培養液からイオン交換樹脂を用いる等の手段
により分離すればよい。
５−アミノレブリン酸は、常法により精製することがで
きる。例えば、５−アミノレブリン酸は菌体外に分泌さ
れるので、培養液からイオン交換樹脂を用いる等の手段
により分離すればよい。
【００２８】
【発明の効果】本発明方法によれば、光照射を行わなく
とも、生産菌から５−アミノレブリン酸を多量に製造す
ることができる。
とも、生産菌から５−アミノレブリン酸を多量に製造す
ることができる。
【００２９】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。
明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。
【００３０】実施例１ 表１に示した組成の培地（培地１）１Ｌを、２Ｌの発酵
槽に入れ、１２１℃で１５分間滅菌し、室温に冷却し
た。
槽に入れ、１２１℃で１５分間滅菌し、室温に冷却し
た。
【００３１】
【表１】
【００３２】上記の発酵槽に、あらかじめ培地１を２０
０ml入れた１Ｌ容の坂口フラスコで好気条件下で振とう
培養して増殖させたＣＲ−５２０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−
５２５５）（ＫｒＭ＝８．２×１０-8）を植菌し、３０
℃、通気量０．１ｖ／ｖ／ｍ、攪拌数２００rpm で通気
攪拌培養を行った。培養はすべて非光照射条件で行っ
た。培養開始４８時間後には、培養液中の菌体濃度は培
養液１Ｌあたり０．６４ｇとなった。次にグリシン、レ
ブリン酸、グルコース、酵母エキスがそれぞれ６０ｍ
Ｍ、５ｍＭ、５０ｍＭ、１％になるように加え、またpH
が６．５から７．０になるように１Ｎ水酸化ナトリウム
及び１Ｎ硫酸での調整を開始した。通気量を空気０．０
１４ｖ／ｖ／ｍ、に減少させ、Ｎ2ガスを０．０８６ｖ
／ｖ／ｍにて供給した。攪拌数は２００rpm とした。こ
の条件で培養を８４時間後まで行った。この培養の最高
５−アミノレブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液
中の溶存酸素濃度、４８時間後から８４時間後までの平
均酸化還元電位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。な
お、溶存酸素濃度はエイブル社製溶存酸素指示計Ｍ−１
０３２及び発酵用酸素膜電極を、酸化還元電位は三ツワ
バイオシステム社製デジタルＯＲＰコントローラー及び
インゴールド社製ＯＲＰ電極を、菌呼吸速度はウエスト
ロン社製排ガス分析装置ＷＳＭＲ−１４００ＬＢを用い
て測定した。
０ml入れた１Ｌ容の坂口フラスコで好気条件下で振とう
培養して増殖させたＣＲ−５２０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−
５２５５）（ＫｒＭ＝８．２×１０-8）を植菌し、３０
℃、通気量０．１ｖ／ｖ／ｍ、攪拌数２００rpm で通気
攪拌培養を行った。培養はすべて非光照射条件で行っ
た。培養開始４８時間後には、培養液中の菌体濃度は培
養液１Ｌあたり０．６４ｇとなった。次にグリシン、レ
ブリン酸、グルコース、酵母エキスがそれぞれ６０ｍ
Ｍ、５ｍＭ、５０ｍＭ、１％になるように加え、またpH
が６．５から７．０になるように１Ｎ水酸化ナトリウム
及び１Ｎ硫酸での調整を開始した。通気量を空気０．０
１４ｖ／ｖ／ｍ、に減少させ、Ｎ2ガスを０．０８６ｖ
／ｖ／ｍにて供給した。攪拌数は２００rpm とした。こ
の条件で培養を８４時間後まで行った。この培養の最高
５−アミノレブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液
中の溶存酸素濃度、４８時間後から８４時間後までの平
均酸化還元電位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。な
お、溶存酸素濃度はエイブル社製溶存酸素指示計Ｍ−１
０３２及び発酵用酸素膜電極を、酸化還元電位は三ツワ
バイオシステム社製デジタルＯＲＰコントローラー及び
インゴールド社製ＯＲＰ電極を、菌呼吸速度はウエスト
ロン社製排ガス分析装置ＷＳＭＲ−１４００ＬＢを用い
て測定した。
【００３３】実施例２ ４８時間以降の攪拌数を３００rpm とする以外は実施例
１と同様の処理を行った。この培養の最高５−アミノレ
ブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液中の溶存酸素
濃度、４８時間後から８４時間後までの平均酸化還元電
位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。
１と同様の処理を行った。この培養の最高５−アミノレ
ブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液中の溶存酸素
濃度、４８時間後から８４時間後までの平均酸化還元電
位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。
【００３４】実施例３ ４８時間以降の攪拌数を４００rpm とする以外は実施例
１と同様の処理を行った。この培養の最高５−アミノレ
ブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液中の溶存酸素
濃度、４８時間後から８４時間後までの平均酸化還元電
位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。
１と同様の処理を行った。この培養の最高５−アミノレ
ブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液中の溶存酸素
濃度、４８時間後から８４時間後までの平均酸化還元電
位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。
【００３５】実施例４ ４８時間以降の攪拌数を５００rpm とする以外は実施例
１と同様の処理を行った。この培養の最高５−アミノレ
ブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液中の溶存酸素
濃度、４８時間後から８４時間後までの平均酸化還元電
位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。
１と同様の処理を行った。この培養の最高５−アミノレ
ブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液中の溶存酸素
濃度、４８時間後から８４時間後までの平均酸化還元電
位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。
【００３６】実施例５ ４８時間以降の攪拌数を６００rpm とする以外は実施例
１と同様の処理を行った。この培養の最高５−アミノレ
ブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液中の溶存酸素
濃度、４８時間後から８４時間後までの平均酸化還元電
位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。
１と同様の処理を行った。この培養の最高５−アミノレ
ブリン酸蓄積量、４８時間後からの培養液中の溶存酸素
濃度、４８時間後から８４時間後までの平均酸化還元電
位及び平均菌呼吸速度を表２に示す。
【００３７】比較例１ ４８時間以降の攪拌数を４００rpm 、通気量を空気０．
５ｖ／ｖ／ｍとする以外は実施例１と同様の処理を行っ
た。この培養の最高５−アミノレブリン酸蓄積量、４８
時間後からの培養液中の溶存酸素濃度、４８時間後から
８４時間後までの平均酸化還元電位及び４８時間後から
８４時間後までの平均菌呼吸速度を表２に示す。
５ｖ／ｖ／ｍとする以外は実施例１と同様の処理を行っ
た。この培養の最高５−アミノレブリン酸蓄積量、４８
時間後からの培養液中の溶存酸素濃度、４８時間後から
８４時間後までの平均酸化還元電位及び４８時間後から
８４時間後までの平均菌呼吸速度を表２に示す。
【００３８】
【表２】
【００３９】実施例６ 使用する菌株をロドバクター カプシュレイタス（Ｒｈ
ｏｄｏｂａｃｔｅｒｃａｐｓｕｌａｔｕｓ）ＡＴＣＣ１
１１６６（ＫｒＭ＝８．５×１０-8）に、４８時間以降
の攪拌数を４００rpm とする以外は実施例１と同様の処
理を行った。この培養の最高５−アミノレブリン酸蓄積
量は０．０８６ｍＭ、４８時間後からの培養液中の溶存
酸素濃度は検出されず（０．１ppm 未満）、４８時間後
から８４時間後までの平均酸化還元電位は、−３１ｍ
Ｖ、４８時間後から８４時間後までの平均菌呼吸速度は
２．７×１０-8〔mol of O2/ml・min・cell〕であっ
た。
ｏｄｏｂａｃｔｅｒｃａｐｓｕｌａｔｕｓ）ＡＴＣＣ１
１１６６（ＫｒＭ＝８．５×１０-8）に、４８時間以降
の攪拌数を４００rpm とする以外は実施例１と同様の処
理を行った。この培養の最高５−アミノレブリン酸蓄積
量は０．０８６ｍＭ、４８時間後からの培養液中の溶存
酸素濃度は検出されず（０．１ppm 未満）、４８時間後
から８４時間後までの平均酸化還元電位は、−３１ｍ
Ｖ、４８時間後から８４時間後までの平均菌呼吸速度は
２．７×１０-8〔mol of O2/ml・min・cell〕であっ
た。
【００４０】比較例２ 使用する菌株をロドバクター カプシュレイタス（Ｒｈ
ｏｄｏｂａｃｔｅｒｃａｐｓｕｌａｔｕｓ）ＡＴＣＣ１
１１６６とする以外は比較例１と同様の処理を行った。
この培養の最高５−アミノレブリン酸蓄積量は検出され
ず（０．０１ｍＭ未満）、４８時間後からの培養液中の
溶存酸素濃度は１８ppm 、４８時間後から８４時間後ま
での平均酸化還元電位は、１３１ｍＶ、４８時間後から
８４時間後までの平均菌呼吸速度は８．５×１０-8〔mo
l of O2/ml・min・cell〕であった。
ｏｄｏｂａｃｔｅｒｃａｐｓｕｌａｔｕｓ）ＡＴＣＣ１
１１６６とする以外は比較例１と同様の処理を行った。
この培養の最高５−アミノレブリン酸蓄積量は検出され
ず（０．０１ｍＭ未満）、４８時間後からの培養液中の
溶存酸素濃度は１８ppm 、４８時間後から８４時間後ま
での平均酸化還元電位は、１３１ｍＶ、４８時間後から
８４時間後までの平均菌呼吸速度は８．５×１０-8〔mo
l of O2/ml・min・cell〕であった。
【００４１】実施例７ 表１に示した組成の培地（培地１）を、３０Ｌの発酵槽
に入れ、１２１℃で３０分間滅菌した。上記の発酵槽
に、あらかじめ培地１を２００ml入れた１Ｌ容の坂口フ
ラスコで好気条件下で振とう培養して増殖させたＣＲ−
５２０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５２５５）を植菌し、３０
℃、通気量０．１ｖ／ｖ／ｍ、攪拌数２００rpm で通気
攪拌培養を行った。培養はすべて暗条件で行った。培養
開始４８時間後には、培養液中の菌体濃度は培養液１Ｌ
あたり０．６８ｇとなった。次にグリシン、レブリン
酸、グルコース、酵母エキスがそれぞれ６０ｍＭ、５ｍ
Ｍ、５０ｍＭ、１％になるように加え、またpHが６．５
から７．０になるように１Ｎ水酸化ナトリウム及び１Ｎ
硫酸での調整を開始した。通気量を空気０．０２８ｖ／
ｖ／ｍに減少させ、Ｎ2ガス０．１７２ｖ／ｖ／ｍ供給
した。攪拌数は３００rpm とした。この条件で培養を８
４時間後まで行った。この培養の最高５−アミノレブリ
ン酸蓄積量は１２．８ｍＭ、４８時間後からの培養液中
の溶存酸素濃度は検出されず（０．１ppm 未満）、４８
時間後から８４時間後までの平均酸化還元電位は、−２
２ｍＶ、４８時間後から８４時間後までの平均菌呼吸速
度は２．２×１０-8〔mol of O2/ml・min・cell〕であ
った。
に入れ、１２１℃で３０分間滅菌した。上記の発酵槽
に、あらかじめ培地１を２００ml入れた１Ｌ容の坂口フ
ラスコで好気条件下で振とう培養して増殖させたＣＲ−
５２０株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５２５５）を植菌し、３０
℃、通気量０．１ｖ／ｖ／ｍ、攪拌数２００rpm で通気
攪拌培養を行った。培養はすべて暗条件で行った。培養
開始４８時間後には、培養液中の菌体濃度は培養液１Ｌ
あたり０．６８ｇとなった。次にグリシン、レブリン
酸、グルコース、酵母エキスがそれぞれ６０ｍＭ、５ｍ
Ｍ、５０ｍＭ、１％になるように加え、またpHが６．５
から７．０になるように１Ｎ水酸化ナトリウム及び１Ｎ
硫酸での調整を開始した。通気量を空気０．０２８ｖ／
ｖ／ｍに減少させ、Ｎ2ガス０．１７２ｖ／ｖ／ｍ供給
した。攪拌数は３００rpm とした。この条件で培養を８
４時間後まで行った。この培養の最高５−アミノレブリ
ン酸蓄積量は１２．８ｍＭ、４８時間後からの培養液中
の溶存酸素濃度は検出されず（０．１ppm 未満）、４８
時間後から８４時間後までの平均酸化還元電位は、−２
２ｍＶ、４８時間後から８４時間後までの平均菌呼吸速
度は２．２×１０-8〔mol of O2/ml・min・cell〕であ
った。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 徹 埼玉県幸手市権現堂1134−２ 株式会社 コスモ総合研究所研究開発センター内 (72)発明者 堀田 康司 埼玉県幸手市権現堂1134−２ 株式会社 コスモ総合研究所研究開発センター内 (56)参考文献 特開 平６−169758（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−95782（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 13/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (3)
- 【請求項１】 ロドバクターセファロイデスもしくはロ
ドバクターカプシュレイタスまたはこれらの変異株〔但
し、ＣＲ−１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１７５２）を除
く〕を、培養液中の酸化還元電位が−１８０〜５０ｍＶ
の条件下で培養することを特徴とする５−アミノレブリ
ン酸の製造方法。 - 【請求項２】 ロドバクターセファロイデスもしくはロ
ドバクターカプシュレイタスまたはこれらの変異株〔但
し、ＣＲ−１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１７５２）を除
く〕を、次の（ａ）及び（ｂ） （ａ）培養液中の溶存酸素濃度が１ppm未満 （ｂ）培養液中の酸化還元電位が−１８０〜５０ｍＶ の条件下で培養することを特徴とする５−アミノレブリ
ン酸の製造方法。 - 【請求項３】 ロドバクターセファロイデスもしくはロ
ドバクターカプシュレイタスまたはこれらの変異株〔但
し、ＣＲ−１７株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１７５２）を除
く〕を、次の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ） （ａ）培養液中の溶存酸素濃度が１ppm未満 （ｂ）培養液中の酸化還元電位が−１８０〜５０ｍＶ （ｃ）菌呼吸速度が５×１０-9〜６×１０-8〔mol of O
2/ml・min・cell〕 の条件下で培養することを特徴とする５−アミノレブリ
ン酸の製造方法。
Priority Applications (7)
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|---|---|---|---|
| JP31625194A JP3124692B2 (ja) | 1994-12-20 | 1994-12-20 | ５−アミノレブリン酸の製造方法 |
| DE69528440T DE69528440T2 (de) | 1994-12-20 | 1995-12-19 | 5-Aminolävulinsäure produzierender Mikroorganismus |
| EP00114144A EP1041154B1 (en) | 1994-12-20 | 1995-12-19 | Process for the preparation of 5-aminolevulinic acid |
| DE69529930T DE69529930T2 (de) | 1994-12-20 | 1995-12-19 | Verfahren zur Herstellung von 5-Aminolävulinsäure |
| EP95120061A EP0718405B1 (en) | 1994-12-20 | 1995-12-19 | 5-Aminolevulinic acid producing microorganism |
| US08/575,818 US5733770A (en) | 1994-12-20 | 1995-12-20 | 5-aminolevulinic acid producing microorganism and process for producing 5-aminolevulinic acid |
| US08/813,088 US5763235A (en) | 1994-12-20 | 1997-03-07 | 5-aminolevulinic acid producing microorganism and process for producing 5-aminolevulinic acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08168391A JPH08168391A (ja) | 1996-07-02 |
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Family
ID=18075019
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31625194A Expired - Fee Related JP3124692B2 (ja) | 1994-12-20 | 1994-12-20 | ５−アミノレブリン酸の製造方法 |
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|---|---|
| JP (1) | JP3124692B2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| EP1018546B1 (en) * | 1997-05-27 | 2005-04-13 | Cosmo Research Institute | Microorganisms producing 5-aminolevulinic acid and processes for producing 5-aminolevulinic acid by using the same |
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| JP6194255B2 (ja) * | 2013-03-22 | 2017-09-06 | コスモＡｌａ株式会社 | ５−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法 |
| US9963724B2 (en) | 2013-03-22 | 2018-05-08 | Neo Ala Co., Ltd. | Method for producing 5-aminolevulinic acid or salt thereof |
| JP6069057B2 (ja) * | 2013-03-22 | 2017-01-25 | コスモＡｌａ株式会社 | ５−アミノレブリン酸又はその塩の製造方法 |
-
1994
- 1994-12-20 JP JP31625194A patent/JP3124692B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08168391A (ja) | 1996-07-02 |
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