JP6053871B2 - 豆抽出物を含有する血液循環改善及び血管健康増進用組成物 - Google Patents
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Description
[実施例1]10%エタノール霜太抽出物の製造
乾燥した霜太1kgを、50℃の温度で10%のエタノール溶液10Lに浸漬し、5時間の間に3回還流抽出した後、常温で12時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は7%〜20%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実施例2]20%エタノール霜太抽出物の製造
乾燥した霜太1kgを、50℃の温度で20%のエタノール溶液10Lに浸漬し、5時間の間に3回還流抽出した後、常温で12時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は7%〜20%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実施例3]50%エタノール霜太抽出物の製造
乾燥した霜太1kgを、50℃の温度で50%のエタノール溶液10Lに浸漬し、5時間の間に3回還流抽出した後、常温で12時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は7%〜20%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実施例4]70%エタノール霜太抽出物の製造
乾燥した霜太1kgを、50℃の温度で70%のエタノール溶液10Lに浸漬し、5時間の間に3回還流抽出した後、常温で12時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は7%〜20%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実施例5]20%エタノール鼠目太抽出物の製造
乾燥した鼠目太1kgを、60℃の温度で20%のエタノール水溶液5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実施例6]20%エタノールインゲン豆抽出物の製造
乾燥したインゲン豆300gを、60℃の温度で20%のエタノール水溶液1.5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実施例7]20%エタノールうずら豆抽出物の製造
乾燥したうずら豆300gを、60℃の温度で20%のエタノール水溶液1.5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実施例8]20%エタノール豆もやし原料豆抽出物の製造
乾燥した豆もやし原料豆300gを、60℃の温度で20%のエタノール溶液1.5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実施例9]20%エタノール黄豆抽出物の製造
乾燥した黄豆1kgを、60℃の温度で20%のエタノール溶液5Lに浸漬し、3時間の間に2回還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで冷凍保存した。
[実施例10]20%エタノール青豆抽出物の製造
乾燥した青豆300gを、60℃の温度で20%のエタノール溶液1.5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで冷凍保存した。
[実施例11]20%エタノールフィールド豆抽出物の製造
乾燥したフィールド豆1kgを、60℃の温度で20%のエタノール溶液5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで低温保存した。
[実施例12]20%エタノール大豆抽出物の製造
乾燥した大豆1kgを、60℃の温度で20%のエタノール溶液5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで低温保存した。
[実施例13]20%エタノール黒小豆抽出物の製造
乾燥した黒小豆300gを、60℃の温度で20%のエタノール溶液1.5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで冷蔵保存した。
[実施例14]20%エタノール赤小豆抽出物の製造
乾燥した赤小豆300gを、60℃の温度で20%のエタノール溶液1.5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで低温保存した。
[実施例15]20%エタノール黒大豆抽出物の製造
乾燥した黒大豆300gを、60℃の温度で20%のエタノール溶液1.5Lに浸漬し、3時間の間に還流抽出した後、常温で所定の時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は3%〜15%であって、調製された粉末は使用時まで低温保存した。
[実施例16]霜太ブタノール抽出物の製造
実施例2で得られた20%エタノール霜太抽出物25gを、蒸留水250mlに溶かしてから、分液漏斗を使用してn−ブタノール250mlずつ2回抽出した後、得られたブタノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥して試料を製造した。収率は5%〜15%であって、製造された試料は使用時まで冷凍保存した。
[実施例17]鼠目太ブタノール抽出物の製造
実施例5で得られた20%エタノール鼠目太抽出物1gを、蒸留水10mlに溶かしてから、分液漏斗を使用してn−ブタノール10mlずつ2回抽出した後、得られたブタノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥して試料を製造した。収率は5%〜15%であって、製造された試料は使用時まで冷凍保存した。
[実施例18]フィールド豆ブタノール抽出物の製造
実施例11で得られた20%エタノールフィールド豆抽出物25gを、蒸留水250mlに溶かしてから、分液漏斗を使用してn−ブタノール250mlずつ2回抽出した後、得られたブタノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥して試料を製造した。収率は5%〜15%であって、製造された試料は使用時まで冷凍保存した。
[実施例19]青豆ブタノール抽出物の製造
実施例10で得られた20%エタノール青豆抽出物1gを、蒸留水10mlに溶かしてから、分液漏斗を使用してn−ブタノール10mlずつ2回抽出した後、得られたブタノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥して試料を製造した。収率は5%〜15%であって、製造された試料は使用時まで低温保存した。
[実施例20]黄豆ブタノール抽出物の製造
実施例9で得られた20%エタノール黄豆抽出物1gを、蒸留水10mlに溶かしてから、分液漏斗を使用してn−ブタノール10mlずつ2回抽出した後、得られたブタノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥して試料を製造した。収率は5%〜15%であって、製造された試料は使用時まで低温保存した。
[実施例21]豆もやし原料豆ブタノール抽出物の製造
実施例8で得られた20%エタノール豆もやし原料豆抽出物1gを、蒸留水10mlに溶かしてから、分液漏斗を使用してn−ブタノール10mlずつ2回抽出した後、得られたブタノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥して試料を製造した。収率は5%〜15%であって、製造された試料は使用時まで低温保存した。
[実施例22]大豆ブタノール抽出物の製造
実施例12で得られた20%エタノール大豆抽出物25gを、蒸留水250mlに溶かしてから、分液漏斗を使用してn−ブタノール250mlずつ2回抽出した後、得られたブタノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥して試料を製造した。収率は5%〜15%であって、製造された試料は使用時まで低温保存した。
[実施例23]インゲン豆ブタノール抽出物の製造
実施例6で得られた20%エタノールインゲン豆抽出物1gを、蒸留水10mlに溶かしてから、分液漏斗を使用してn−ブタノール10mlずつ2回抽出した後、得られたブタノール層を減圧濃縮し、凍結乾燥して試料を製造した。収率は5%〜15%であって、製造された試料は使用時まで低温保存した。
[実施例24]霜太抽出物分画の製造
乾燥した霜太1kgを、50℃の温度で20%のエタノール溶液10Lに浸漬し、5時間の間に3回還流抽出した後、常温で12時間放置した。
[比較例]水を利用した霜太抽出物の製造
乾燥した霜太1kgを、100℃の温度で水10Lに浸漬し、5時間の間に3回還流抽出した後、常温で12時間放置した。抽出液をろ過して減圧濃縮し、凍結乾燥して粉末試料を製造した。収率は7%〜20%であって、調製された粉末は使用時まで低温で保存した。
[実験例1]霜太抽出物のコラーゲンによって誘導されたヒト血小板凝集抑制の観察
エタノール含量による抽出物の活性の差異を比較するために、下記の実験を行なった。
[実験例2]フィールド豆抽出物のコラーゲンによって誘導されたヒト血小板凝集抑制の観察
エタノール含量による抽出物の活性の差異を比較するために、下記の実験を行なった。
[実験例3]豆類依存的ヒト血小板凝集抑制効能の観察
優れた活性を示す20%エタノール抽出条件で、黒豆に対して血小板凝集抑制効能を示すかどうかを調べるために、下記の実験を行なった。実験の際に使用した豆はいずれも韓国産を購入して使用した。
[実験例4]豆類依存的ヒト血小板凝集抑制効能の観察
優れた活性を示す20%エタノール抽出条件で、各種の豆に対して血小板凝集抑制効能を示すかどうかを調べるために、下記の実験を行なった。実験に使用した豆は、いずれも韓国産を購入して使用した。
[実験例5]血小板凝集刺激源毎の活性抑制特異性の観察
20%エタノール抽出条件で、霜太抽出物が血小板凝集刺激源によって特異的活性抑制効能を示すかどうかを調べるために実験を行なった。
[実験例6]血小板凝集後の活性物質発現及び分泌抑制効能の観察
血小板がコラーゲンなどによって刺激を受けて凝集を起こすと、血小板の表面内に特定のタンパク質を発現したり、細胞の外へ特定の分泌物質を放出したりするようになる。したがって、本実験では、20%低濃度エタノール霜太抽出物が血小板凝集を抑制することで、血小板の表面に発現するP−セレクチン(P−selectin)を減少させ、血液内に放出されるセロトニン(serotonin)濃度を減少させる効能を観察した。
[実験例7]SDラットを利用した静脈血栓生成抑制効果の観察
20%エタノールを利用した霜太抽出物を実際に摂取した場合における、生体内において血栓生成抑制効能があるかどうかを調べるための実験を行なった。体重220g〜250gの雄SD(Sprague Dawley)ラットを対象に静脈血栓生成抑制効能の試験を実施した。
[実験例8]霜太分画毎のヒト血小板凝集抑制効能の観察
20%エタノール抽出条件で、どの部分が優れた活性を示すかを調べるための実験を行なった。
[実験例9]各豆のブタノール分画の血小板凝集抑制活性
各豆のブタノール分画が血小板凝集抑制効能を示すか否かを確認するために、下記の実験を行なった。
[実験例10]酢酸エチル分画の血小板凝集刺激源毎の活性抑制特異性の観察
酢酸エチル分画が血小板凝集刺激源毎に活性抑制の特異性を持つか否かを調べるために、前記実験例5と同様な方法で実験を行い、ただし、処理濃度は50μg/ml、100μg/mlとして実施した。その結果を表10に表した。
[実験例11]酢酸エチル分画の血小板凝集後活性物質の発現及び分泌抑制効能の観察
霜太の酢酸エチル分画が、血小板凝集後に発現するP−セレクチンを低減させ、セロトニンの分泌を低減させて、トロンボキサンの生成を抑制させる効果を調べるために、P−セレクチンとセロトニンは、前記実験例6と同様な方法で実験を行なった。また、トロンボキサンの生成抑制率は、実験例1で使用したPRPに酢酸エチル分画を加えて37℃で10分間培養した後、コラーゲン10μg/mlを加えて6分間反応させた。試料の一部を取って、EDTA、インドメタシン(indomethacin、最終50μM)入りの試験管に加えて反応を終結させ、12000xg 2分間遠心分離して上層液のみを取り、生成されたトロンボキサンを、酵素免疫法を用いて定量した。
[実験例12]SDラットを利用した酢酸エチル分画の静脈血栓生成抑制効果の観察 酢酸エチル分画を実際に摂取した場合における、生体内において血栓生成抑制効能があるか否かを調べるために、前記実験例7と同様な方法で実験を行なった。経口投与した分画の濃度は10mg/kg、25mg/kg、50mg/kgであって、投与1時間後に生成された血栓の大きさを図5に示した。
[実験例13]SDラットから分離した血小板凝集抑制効能の観察
霜太の低濃度エタノール抽出物と酢酸エチル分画とが、ラットから分離した血小板の凝集抑制効果を示すか否かを確認するための実験を行なった。具体的な実験過程は前記実験例1と同様である。処理濃度は、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/mlであり、その結果を表14に表した。
[実験例14]血管リングを利用した血管収縮抑制効能の観察
体重250g〜300gの実験用雄の白ねずみ(Sprague−Dawley rat)を大韓バイオリンク(Seoul、korea)から供給され、飼育室温度22±2℃、湿度45%−55%を維持し、午前7時と午後7時を基準に夜と昼の周期それぞれ12時間になるようにした。飼料(ピュリナコリア、Seoul、korea)と水は制限なく供給し、一週間環境に適応させてから実験に使用した。
[実験例15]動物モデルでの血清及び肝脂質数値の低下
体重250g〜300gの8週齢の雌ねずみを使用してケージ当たり8匹ずつ、22±2℃の恒温及び55±15%の相対湿度が維持され、12時間の明暗周期が提供されるポリカーボネートケージに収容した。また、正常食餌及び高コレステロール食餌を供給し、食水を自由に飲用させた。
[実験例16]霜太抽出物分画に対する有効成分の分析
霜太抽出物の活性成分を究明するために、酢酸エチル分画を中心にアッセイ誘導分画技法(assay guided fractionation)を行なった。製作された酢酸エチル分画に対する活性成分を分離し精製した全体的な構造(scheme)は図6に示すとおりである。
20%エタノール霜太抽出物とアデノシン標準品との活性を比較し、その結果を図11と図12に示した。図11と図12を参照すると、霜太抽出物とアデノシン標準品との活性の比較から、20%エタノール霜太抽出物には、約0.35%〜0.5%のアデノシンが含有されていることを算出した。このことから、低濃度の低級アルコールを利用して霜太を抽出した場合、抽出物中のアデノシン含量が非常に優れていることが分かる。また、アデノシン単独で使用した場合よりも霜太抽出物のほうが、血栓生成率が低いことが分かる。したがって、霜太抽出物を使用した場合、アデノシン単独で使用する場合よりも安定的な形態で血栓の生成を抑制することができるであろう。
[実験例18]20%エタノール豆抽出物に含有されたアデノシン含量の測定
霜太を含む各種の豆に対して、20%エタノールで抽出した抽出物中に含有されたアデノシンの含量を測定した。その測定結果を表19に表した。
[実験例19]霜太抽出物の赤血球での凝固促進活性抑制能の測定
豆抽出物が炎症状態で生成される内因性物質としてのLPA(lysophosphatidic acid)とPA(phosphatidic acid)による赤血球のPA(phosphatidyl serine)露出、及びMV(microvesicle)生成に関与するか否かを確認する実験を行なった。
[実験例20]霜太抽出物の血液凝固抑制に及ぼす影響の評価
血液凝固は、各種のチモーゲン(zymogen)である凝固因子(coagulation factor)が連続的に活性化し、最後にフィブリノゲン(fibrinogen)をフィブリン(fibrin)に変化させることで血栓をなす過程からなる。これには、コンタクトシステム(contact system)と呼ばれる内因性経路(intrinsic pathway)と組職因子(tissue factor)による活性化をはじめとする外因性経路(extrinsic pathway)が存在して血栓生成を誘発する。
[実験例21]霜太抽出物が出血時間遅延に及ぼす影響の評価
20%エタノール霜太抽出物、アスピリン、及びクロピドグレルをそれぞれ処理した場合の出血時間を比較測定した。その測定結果を図18に示した。
本発明による豆抽出物含有組成物は、下記のように各種の剤形で応用可能であるが、これらに限定されるものではない。
[製剤例1]軟質カプセル剤
霜太抽出物100mg、大豆抽出物50mg、大豆油180mg、紅参抽出物50mg、ヤシ油2mg、ヤシ硬化油8mg、黄ロウ4mg、及びレシチン6mgを混合し、通常の方法によって1カプセル当たり400mgずつ充填して軟質カプセルを製造した。
[製剤例2]錠剤
フィールド豆抽出物100mg、大豆抽出物50mg、ブドウ糖100mg、紅参抽出物50mg、澱粉96mg、及びマグネシウムステアレート4mgを混合し、30%エタノールを40mg添加して顆粒を形成した後、60℃で乾燥し、打錠機で錠剤として打錠した。
[製剤例3]顆粒剤
霜太抽出物100mg、大豆抽出物50mg、ブドウ糖100mg、紅参抽出物50mg、及び澱粉600mgを混合し、30%エタノールを100mg添加して顆粒を形成した後、60℃で乾燥し、分包充填した。内容物の最終重量は1gとした。
[製剤例4]ドリンク剤
鼠目太抽出物100mg、大豆抽出物50mg、ブドウ糖10g、紅参抽出物50mg、クエン酸2g、及び精製水187.8gを混合し、ビンに充填した。内容物の最終容量は200mlとした。
[製剤例5]健康食品の製造
霜太抽出物...................................1000mg
ビタミン混合物
ビタミンAアセテート.......................70μg
ビタミンE.................................1.0mg
ビタミンB1...............................0.13mg
ビタミンB2..............................0.15mg
ビタミンB6...............................0.5mg
ビタミンB12.............................0.2μg
ビタミンC.................................10mg
ビオチン...................................10μg
ニコチン酸アミド...........................1.7mg
葉酸.......................................50μg
パントテン酸カルシウム.....................0.5mg
無機質混合物
硫酸第1鉄.................................1.75mg
酸化亜鉛...................................0.82mg
炭酸マグネシウム...........................25.3mg
第1リン酸カリウム.........................15mg
第2リン酸カルシウム.......................55mg
クエン酸カリウム...........................90mg
炭酸カルシウム.............................100mg
塩化マグネシウム...........................24.8mg
前記のビタミン及びミネラル混合物の組成比は、比較的に健康食品に適合した成分を好適な実施例にて混合組成したが、その配合比は任意に変形実施してもよく、通常の健康食品製造方法によって前記成分を混合した後、顆粒を製造し、通常の方法によって健康食品組成物の製造に使用することができる。
[製剤例6]健康飲料の製造
フィールド豆抽出物........................1000mg
クエン酸..................................1000mg
オリゴ糖..................................100g
梅濃縮液..................................2g
タウリン..................................1g
精製水を加えた全量........................900ml
通常の健康飲料の製造方法によって前記成分を混合してから、約1時間、85℃で撹拌加熱した後、作られた溶液をろ過して、滅菌された2l容器に入れ、密封滅菌して冷蔵保存し、後で本発明の健康飲料組成物の製造に適宜使用すればよい。
前記組成比は、比較的嗜好飲料に適合した成分を好適な実施例にて混合組成したが、需要階層や、需要国、使用用途など、地域的、民族的嗜好度によってその配合の割合を任意に変形実施しても構わない。本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者ならば、前記内容を基に本発明の範疇内で種々の応用及び変形を行うことが可能であろう。
Claims (12)
- 1%〜25%(v/v)濃度のエタノールで抽出した豆抽出物またはその分画物を含有し、
前記豆抽出物またはその分画物は、アデノシンを含有し、
前記アデノシンの含量は、豆抽出物またはその分画物重量を基準にし、0.01重量%〜1.0重量%である、血小板凝集を抑制する血液循環改善用組成物。 - 前記豆は、霜太(ソリテ)、鼠目太(ソモクッテ)、黒大豆、青豆、黄豆、フィールド豆、インゲン豆、うずら豆、赤小豆、黒小豆、豆もやし原料豆、及び大豆からなる群より選択される1種以上である請求項1に記載の血液循環改善用組成物。
- 前記豆は、霜太またはフィールド豆である請求項1に記載の血液循環改善用組成物。
- 前記分画物は、エタノール抽出物に対する酢酸エチルまたはブタノール分画物である請求項1に記載の血液循環改善用組成物。
- 前記組成物は、血管健康を増進させるものである請求項1に記載の血液循環改善用組成物。
- 請求項1ないし5のいずれかに記載の組成物を含む薬学組成物。
- 前記薬学組成物は、脳卒中、脳出血、動脈硬化、狭心症、心筋梗塞、または高血圧の予防、症状の緩和または治療用である請求項8に記載の薬学組成物。
- 請求項1ないし5のいずれかに記載の組成物を含む健康食品組成物。
- 前記健康食品組成物は、脳卒中、脳出血、動脈硬化、狭心症、心筋梗塞、または高血圧の予防、症状の緩和または治療用である請求項8に記載の健康食品組成物。
- 1%〜25%(v/v)濃度のエタノールで抽出した豆抽出物またはその分画物を含有し、
前記豆は霜太(ソリテ)である、血小板凝集を抑制する血液循環改善用組成物。 - 前記豆抽出物またはその分画物は、アデノシンを含有する請求項10に記載の血液循環改善用組成物。
- 前記アデノシンの含量は、豆抽出物またはその分画物重量を基準にし、0.01重量%〜1.0重量%である請求項11に記載の血液循環改善用組成物。
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