KR20190066491A

KR20190066491A - 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품

Info

Publication number: KR20190066491A
Application number: KR1020170166235A
Authority: KR
Inventors: 손호용; 성화정
Original assignee: 성화정
Priority date: 2017-12-05
Filing date: 2017-12-05
Publication date: 2019-06-13
Also published as: KR102254421B1

Abstract

본 발명은 패션후르츠(Passion Fruit, Passiflora edulis) 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 항혈전 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 수세 정선된 패션후르츠의 과육과 씨의 혼합물로부터 에탄올 추출물을 조제하고, 이를 유효성분으로 함유하는 혈액 응고 저해를 통한 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다. 본 발명의 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품의 유효성분으로서의 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 혈전 생성 관련 효소 저해 및 혈액 응고 인자의 저해에 의한 강력한 항혈전 활성을 나타냄과 동시에, 인간 적혈구에 대한 용혈 활성을 전혀 나타내지 않고, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성 조건 및 혈장 내에서도 혈전 생성 관련 효소 및 혈액 응고인자 저해 효과의 손실이 나타나지 않으므로, 혈행 개선을 통해 허혈성 뇌졸중 및 출혈성 뇌졸중과 같은 혈전증의 예방 및 치료용으로 사용할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 유효성분은 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명이다.

Description

패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품{PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING THE EXTRACTS FROM THE FLESH AND SEED OF PASSION FRUIT AS AN EFFECTIVE COMPONENT FOR PREVENTION OR TREATMENT OF THROMBOSIS AND HEALTH FUNCTIONAL FOOD COMPRISING THE SAME}

본 발명은 패션후르츠(Passion Fruit, Passiflora edulis) 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 항혈전 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 수세 정선된 패션후르츠의 과육과 씨의 혼합물로부터 에탄올 추출물을 조제하고, 이를 유효성분으로 함유하는 혈액 응고 저해를 통한 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다.

인체 구성 성분으로서의 혈액은 산소, 영양분, 노폐물의 운반 기능과 완충 작용, 체온 유지, 삼투압 조절 및 이온 평형 유지, 수분 일정 유지, 액성 조절 작용, 혈압의 유지 및 조절, 생체 방어 등 다양한 중요 기능들을 가지고 있다. 정상적인 혈액 순환은 체내에서의 혈액 응고 반응계와 혈전 용해 반응계가 상호 보완적으로 조절되면서 혈액 순환을 용이하게 하며, 이들 중 혈액 응고 반응계의 기작은 혈관벽에 혈소판이 점착, 응집하여 혈소판 혈전을 형성한 후, 혈액 응고계가 활성화되어 혈소판 응집괴를 중심으로 피브린 혈전이 형성되는 것으로 보고되어 있다.

한편, 피브린 혈전의 생성은 수많은 혈액 응고 인자들의 여러 단계 반응을 거쳐 피브린 응고에 관여하는 트롬빈이 활성화되어, 최종적으로 피브리노겐으로부터 피브린 단량체를 생성하게 하며, 피브린 단량체들은 칼슘에 의해 중합되어, 혈소판과 내피세포에 결합하게 되며 XIII 인자에 의해 교차 결합된 피브린 폴리머를 형성하면서 영구적인 혈전을 생성하게 된다. 또한, 트롬빈은 혈소판, V 인자, VII 인자들을 활성화시켜 혈액 응고 반응을 촉진시키는 등 혈전 생성에 중추적 역할을 하게 된다. 따라서, 트롬빈의 활성 저해 물질은 과다한 혈액 응고 이상으로 발생하는 다양한 혈전성 질환에 매우 유용한 예방 및 치료제로 사용될 수 있다. 한편, 내인성 혈전 생성 경로에는 XII 인자, XI 인자, XII 인자, IX 인자, X 인자의 순차적 활성화에 이은 프로트롬빈의 활성화가 최종적으로 트롬빈을 활성화하는 것으로 알려져 상기의 혈액 응고 인자의 특이적 저해 역시 중요한 혈전성 질환 치료제의 개발 타겟이 되고 있으며, 외인성 혈전 생성 경로의 경우, II 인자(prothrombin), V 인자, VII 인자, X 인자의 활성화에 따른 혈전 생성이 알려져 있다. 현재까지, 혈전성 질환의 예방과 치료에 헤파린, 쿠마린, 아스피린, 유로키네이즈 등의 다양한 항응고제, 항혈소판제, 혈전용해제 등이 사용되고 있으나, 이들은 가격이 매우 높을 뿐 아니라, 출혈성 부작용과 위장 장해 및 과민 반응 등으로 그 사용이 한정되고 있는 실정이다.

한편, 패션후르츠(Passion Fruit, Passiflora edulis)는 대표적으로 껍질이 많이 발생하는 다소비 열대 과일 중 하나이며, 쌍떡잎식물 측막태좌목 시계꽃과의 덩굴성 여러해살이풀로 패션프룻, 과물시계꽃, 마라꾸자, 또는 백향과라고도 부른다. 원산지는 브라질로 알려져 있으며, 열매 크기는 약 5cm이며, 열매, 껍질 및 씨앗을 식용으로 한다(대한민국 식약처 식품원재료 데이터베이스).

패션후르츠는 불안 해소, 스트레스 감소에 뛰어난 효능이 있으며(Klein N 등, Phytother Res. 2014, 28: 706-713; Barbosa, Paulo R 등, 2008. J. Medicinal Food 11: 282-288), 항산화 활성(Zeraik ML 등. 2011, Food Chem. 128: 259-265), 멜라린 생성 억제 활성(Jorge, A. T. S 등, 2012, Int. J. Cosmetic Sci. 34: 435-440)이 알려져 있다.

과육 주스로부터 분리된 펩타이드 성분은 혈액응고에 중주적인 역할을 수행하는 트롬빈의 저해는 나타나지 않아 트롬빈 타임에는 영향을 미치지 않으면서, 프로트롬빈 저해에 따른 프로트롬빈 타임 증가 및 혈액응고인자 저해에 의한 aPTT 증가를 통한 항응고 활성이 알려져 있다(Sato, Ana Claudia 등, 2012, Protein Peptide Lett. 19: 501?508). 그러나, 상기 주스의 항응고 활성 성분은 트롬빈 저해가 없어 효율적인 항응고제로 사용하기 어려우며, 또한 열처리시 급격히 항응고 활성이 감소하는 문제점을 알려져 있다.

한편, 패션후르츠 씨앗에는 강력한 항균 활성과 함께 항당뇨 활성을 가진 piceatannol이 알려져 있으며(Maruki-Uchida H 등, 2013, Biol Pharm Bull 36:845-849), 잎 추출물에서는 소화효소 트립신 저해활성(Botelho-Junior S 등, 2008, J. Agric. Food Chem. 56: 9404-9409), 항염증 활성(Vargas AJ 등, Fitoterapia. 2007 78: 112-119), 항산화 활성(Sunitha, M. 2009. Indian J. Pharma. Sciences 71: 310-311)이 보고되어 있다.

또한, 패션후르츠 껍질 추출물에 대한 연구는 매우 제한적이며, 현재까지는 껍질 추출물의 궤양성 대장염 예방효과(Cazarin, Cinthia Bb 등, 2014, Exp. Biology Medicine 239: 542-551), 항산화 활성(Kandandapani S 등, Chin J Nat Med. 2015 13: 680-686; da Silva, J.K 등, 2014. LWT- Food Sci. Tech. 59: 1213-1219) 및 고혈압 예방효과(Lewis, B.J 등, 2013, The J. Nutr. Biochem. 24: 1359?1366)이 알려져 있으며, 껍질의 식이섬유에 의한 대장에서의 미생물 성장 촉진 및 short chain fatty acid 합성의 증대효과(da Silva, J.K 등, 2014. LWT- Food Sci. Tech. 59: 1252-1257)가 보고되어 있다.

그러나, 현재까지 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 강력한 항혈전 활성은 보고된 바 없으며, 내열성이 우수하면서 트롬빈, 프로트롬빈, 혈액응고 인자 저해를 통한 항응고 활성은 전혀 알려진 바 없다.

현재까지 알려진 패션후르츠와 관련된 특허로는 대한민국 공개특허 제10-2015-0064314호에 [애플망고 추출물, 패션후르츠 추출물, 용과 추출물, 레드키위 추출물 및 아떼모야 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물]이, 공개특허 제10-2016-0059271호에 [파시플로라 에듈리스의 꽃 추출물을 포함하는 두피 상태 개선용 조성물]이, 공개특허 제10-2016-0058832호에는 [패시플로라 종자들로부터 얻은 지질 추출물]이 공개되어 있으며, US 공개특허 US-0074312호에는 [시계꽃 종자들의 추출물 그리고 이를 포함하는 미용적, 약제학적, 피부과학적 및 영양제학적 조성물들]이, US-0076769호에는 암 치료를 위한 패션후르츠 종자 추출물물을 포함하는 허브조성물이 공개되어 있으며, 일본 등록특허 JP-0278762호에 [항충치 조성물: Cariostatic agent], JP-0350433호에 혈압강하제 및 JP-0302659호에 껍질 추출물의 항염증 효과가 알려져 있다. 그러나, 현재까지 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 강력한 혈전 생성 관련효소 및 혈액응고인자 저해에 의한 항혈전 효과는 알려진 바 없다.

JP

2007-302659

A

Sato, Ana Claudia 등, 2012, Protein Peptide Lett. 19: 501-508

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 패션후르츠의 과육과 씨를 혼합한 추출물을 조제하고, 이를 유효성분으로 함유하는 항혈전성 조성물을 제공하고자 하는 것이다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 패션후르츠(Passiflora edulis) 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 약학적 조성물의 유효성분으로서의 혼합 추출물은 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 패션후르츠(Passiflora edulis) 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈액 응고 억제제를 제공한다.

상기 혈액 응고 억제제의 유효성분으로서의 혼합 추출물은 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 패션후르츠(Passiflora edulis) 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.

상기 건강 기능 식품의 유효성분으로서의 혼합 추출물은 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.

본 발명의 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품의 유효성분으로서의 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 혈전 생성 관련 효소 저해 및 혈액 응고 인자의 저해에 의한 강력한 항혈전 활성을 나타냄과 동시에, 인간 적혈구에 대한 용혈 활성을 전혀 나타내지 않고, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성 조건 및 혈장 내에서도 혈전 생성 관련 효소 및 혈액 응고인자 저해 효과의 손실이 나타나지 않으므로, 혈행 개선을 통해 허혈성 뇌졸중 및 출혈성 뇌졸중과 같은 혈전증의 예방 및 치료용으로 사용할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 유효성분은 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명이다.

도 1은 실험에 사용된 패션후르츠 과일을 나타내고,
도 2는 패션후르츠 과일 단면을 나타내고,
도 3은 패션후르츠 과육 및 씨 혼합물을 나타내고,
도 4는 패션후르츠 껍질를 나타내는 사진도이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 발명자들은 패션후르츠 과일 추출물을 대상으로 항혈전 효능을 검정하기 위하여, 일정 방법으로 제조한 패션후르츠 과육 및 씨 혼합물의 추출물과 껍질 추출물을 조제하고, 상기 추출물의 항혈전 활성을 평가하여 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물을 항혈전 성분으로 회수하였으며, 상기 혼합 추출물은 인간 적혈구에 대해 용혈 활성은 전혀 나타내지 않으면서도, 열 안정성과 산 안정성이 우수한 특징을 가짐을 확인함으로써 상기 혼합 추출물을 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품으로 활용하고자 하였다.

구체적으로, 본 발명자들은 민간에서 다양한 생리 활성이 있다고 알려진 패션후르츠를 이용하여 혈전증의 예방 또는 치료/개선용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품을 개발하기 위하여, 패션후르츠의 과육 및 씨의 혼합물과 껍질를 대상으로 에탄올 추출물을 각각 조제하고, 이들 추출물을 대상으로 항혈전 활성을 트롬빈 저해(Thrombin Time), 프로트롬빈 저해(Prothrombin Time) 및 혈액응고인자 저해(활성부분 트롬보플라스틴 타임, activated Partial Thromboplastin Time: aPTT)를 평가하여, 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물이 강력한 항응고 저해에 따른 항혈전 활성이 우수함을 확인하였다.

패션후르츠의 과육과 씨는 실질적으로 별도로 분리하기가 어려우며, 그대로 식용으로 사용하므로, 과육 및 씨의 혼합물을 에탄올로 추출하여 에탄올 추출물을 조제하였으며, 100g당 11.7g을 회수할 수 있다. 상기 에탄올 추출물은 5mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 2.51배 연장된 트롬빈 타임, 1.87배 연장된 프로트롬빈 타임 및 1.24배 연장된 에이피티 타임을 나타내어, 기존에 패션후르츠 과즙에서 분리된 펩타이드성 항응고제(Sato, Ana Claudia 등, 2012, Protein Peptide Lett. 19: 501?508)와는 활성에서 차별화된다. 또한, 상기 활성 추출물은 인간 적혈구에 대한 용혈활성을 나타내지 않아 급성독성을 유발하지 않음을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 패션후르츠의 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 약학적 조성물의 유효성분인 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물은 열수 추출물 또는 에탄올 추출물일 수 있고, 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 패션후르츠의 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈액 응고 억제제를 제공한다.

상기 혈액 응고 억제제의 유효성분인 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물은 열수 추출물 또는 에탄올 추출물일 수 있고, 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 패션후르츠의 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.

상기 건강 기능 식품의 유효성분인 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물은 열수 추출물 또는 에탄올 추출물일 수 있고, 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.

이하에서는, 본 발명의 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 제조 방법 및 효능 실험 등을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명의 발명자들은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 정선, 세척된 패션후르츠 과일로부터 껍질 및 과육과 씨를 분리하는 단계; 분리된 과육과 씨의 혼합물로부터 추출물을 조제하는 단계; 상기 추출물의 항혈전 활성 평가 및 안정성 평가 단계의 실험들을 수행하였다.

본 발명의 조성물에 포함되는 "패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물"은 패션후르츠 과일로부터 과육과 씨를 회수하는 단계, 과육과 씨의 혼합물을 용매로 추출하는 단계 및 상기 추출액을 0.06mm 이하의 여과망을 사용하여 여과하고, 이를 감압농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용매는 물(냉수, 열수), 주정, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 주정, 프로판올, 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매 등을 이용할 수 있으며, 열수, 또는 95% 에탄올 추출이 가장 바람직하다.

바람직한 구체예로서, 본 발명의 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물은 열수 또는 에탄올로 추출하여 사용할 수 있다. 여기에서, 상기 열수 또는 에탄올 추출물은 헥센, 에틸아세테이트 및 부탄올의 유기용매로 순차 또는 각각 분획하여 헥센 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물 및 물 잔류물을 추가적으로 수득할 수 있다.

본 발명에서는, 패션후르츠 과일의 과육 및 씨의 혼합 추출물을 5mg/ml의 농도로 하여 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 측정한 결과, 무첨가구에 비해 각각 2.51배, 1.87배, 1.24배 연장된 시간을 나타내어 우수한 트롬빈 저해 및 프로트롬빈 저해를 나타내었다. 이러한 저해는, 기존의 패션푸르츠의 펩타이드성 항응고제가 트롬빈 타임에는 영향을 미치지 않고, 에이피티 타임을 연장시킨 것(Sato, Ana Claudia 등, 2012, Protein Peptide Lett. 19: 501?508)과는 대조되는 결과이다. 본 발명의 패션후르츠 과일의 과육과 씨의 혼합 추출물의 항응고 활성은 농도의존적으로 나타났으며, 7mg/ml 농도에서는 무첨가구에 비해 각각 7.56배, 15배 이상 및 2.45배 연장된 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 나타내었다.

이러한 결과는 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물은 강력한 트롬빈, 프로트롬빈 및 혈액응고인자 저해를 나타내어, 위장 장애 등의 부작용 우려가 높은 아스피린을 대치할 수 있는 혈전증 치료제 또는 구체적으로 항응고제(혈액 응고 억제제)로 개발 가능함을 의미하고 있다.

본 발명의 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물은 감압건조 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 이들은 혈장 내의 다양한 분해효소에 분해되지 않으며, 100℃의 열처리와 pH 2의 인체 위 내의 pH에서도 활성을 유지한다.

본 발명의 유효성분은 혈전증과 관련된 다양한 질환들의 예방 또는 치료용으로 사용될 수 있다. 상기 질환들은, 예를 들어, 동맥 혈전증으로서, 급성 심근 경색증, 가슴 통증, 호흡 곤란, 의식 소실, 허혈성 뇌졸중, 출혈성 뇌졸중, 두통, 운동 이상, 감각 이상, 성격 변화, 시력 저하, 간질 발작, 폐 혈전증, 심부정맥 혈전증, 하지 부종, 통증 및 급성 말초 동맥 폐쇄증 등을 들 수 있고, 정맥 혈전증으로서, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 급성 신장정맥 폐쇄증, 뇌 정맥동 혈전증 및 중심 망막정맥 폐쇄 등을 들 수 있다.

본 발명의 유효 성분을 포함하는 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.

이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.

바람직한 구체예로서, 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 등과 같은 윤활제가 사용될 수도 있다.

바람직한 구체예로서, 경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

바람직한 구체예로서, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제 등을 예시할 수 있다. 비수성용제, 현탁제에는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 포함될 수 있다. 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.

본 발명의 유효 성분은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

바람직한 구체예로서, 본 발명의 약학적 조성물에서 유효성분의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 ㎏ 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다.

본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간을 의미한다.

또한, 본 발명의 건강 기능 식품은 혈전증의 예방 또는 개선에 효과적인 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 유효성분을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 유효성분은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다.

상기 향미제로는 타우마틴, 레바우디오시드 A 또는 글리시르히진과 같은 스테비아 등의 천연 향미제 및 사카린, 아스파르탐 등의 합성 향미제를 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강 기능 식품은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 유효성분 100중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 하나의 구체예일뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1: 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 조제

베트남산 패션후르츠 열매를 구입한 후 이물질을 제거하고, 과육 및 씨의 혼합물 및 껍질로 각각 구분(도 1 내지 도 4)하고, 이를 추출물 제조에 사용하였다. 과육과 씨의 혼합물의 에탄올 추출물 조제시에는 시료에 대해 10배의 에탄올(95%, 덕산, 한국)을 가하고, 상온에서 1회 추출한 후 추출액을 모아 필터링한 후, 감압 농축하여 분말로 제조하였다. 에탄올 추출물의 추출 효율과 성분 분석 결과는 표 1에 나타내었다. 한편, 패션후르츠 비가식부위인 껍질을 대상으로 에탄올 추출하였으며, 이를 대조구로 사용하였다. 조제된 추출물 및 분획물의 성분 분석으로 총 폴리페놀, 총 플라보노이드, 총 당 및 환원당 함량을 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 추출 검액 400μl에 50μl의 Folin-ciocalteau, 100μl의 Na₂CO₃ 포화용액을 넣고, 실온에서 1시간 방치한 후 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 총 플라보노이드 함량은 각각의 시료를 18시간 메탄올 교반 추출하고, 여과한 추출 검액 400μl에 90% diethylene glycol 4ml를 첨가하고 다시 1N NaOH 40μl를 넣고 37℃에서 1시간 반응 후 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다. 환원당은 DNS법으로, 총 당은 phenol-sulfuric acid법을 이용하여 정량하였다.

[표 1] 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물 및 껍질 추출물의 수율과 성분 분석

그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이, 패션후르츠 과일의 과육 및 씨의 혼합물의 에탄올 추출 수율은 11.7%로 껍질의 추출 수율보다 4배 이상 높았으며, 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량은 0.7mg/g 및 0.5mg/g으로 매우 낮게 나타났다. 반면, 껍질는 26.5mg/g 및 12.9mg/g의 높은 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량을 나타내었으며, 총 당 함량은 과육 및 씨의 혼합물의 51% 수준을 나타났다.

실시예 2: 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물 및 껍질 추출물의 혈액응고 저해활성 평가

실시예 1에서 제조된 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물 및 껍질 추출물의 혈액응고 저해활성(혈전생성 억제활성)을 평가하였으며, 기존에 보고된 방법(Sohn et al., 2004. Kor. J. Pharmacogn 35. 52-61; Kwon et al., 2004. J. Life Science, 14. 509-513; 류 등 2010. J. Life Science, 20. 922-928)과 동일하게, 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 측정하여 평가하였다. 혈장은 시판 control plasma(MD Pacific Technology Co., Ltd, Huayuan Industrial Area, China)를 사용하였으며 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 타임 측정법은 다음과 같은 과정으로 수행되었다.

트롬빈 타임(Thrombin Time)

37℃에서 0.5U 트롬빈(Sigma Co., USA) 50μl와 20 mM CaCl₂ 50μl, 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 혼합하여 2분간 반응시킨 후, 혈장 100μl를 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 30.5초의 응고시간을 나타내었다. 트롬빈 저해 효과는 3회 이상 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 트롬빈 저해 활성은 시료 첨가시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

프로트롬빈 타임( prothrombin time)

표준혈장(MD Pacific Co., China) 70μl와 다양한 농도의 시료액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온 후, 130μl의 PT reagent를 첨가하고 혈장이 응고될 때까지의 시간을 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 16.7초의 응고시간을 나타내었다. 프로트롬빈 저해활성은 시료 첨가시의 응고시간을 용매 대조구의 응고시간으로 나눈 값으로 나타내었다.

aPTT (activated Partial Thromboplastin Time)

혈장 100μl와 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온한 후, 50μl의 aPTT reagent(Sigma, ALEXIN^TM)를 첨가하고 다시 37℃에서 3분간 배양하였다. 이후 50μl CaCl₂(35mM)을 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였으며, 이 경우 58.1초의 응고시간을 나타내었다. aPTT의 결과는 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었으며, 혈액응고인자 저해활성은 시료 첨가시의 aPTT를 용매 대조구의 aPTT로 나눈 값으로 나타내었다.

[표 2] 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물 및 껍질 추출물의 혈액응고 저해활성 평가

그 결과, 표 2에 나타난 바와 같이, 패션후르츠 과일의 과육과 씨의 혼합 추출물은 껍질 추출물보다 우수한 항응고 활성을 나타내었으며, 구체적으로, 과육 및 씨의 혼합 추출물의 경우, 7mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 7.56배 연장된 트롬빈 타임. 15배 연장된 프로트롬빈 타임, 2.45배 연장된 aPTT를 나타내어 강력한 항응고 활성을 나타내었다. 이러한 결과는 패션후르츠 과육 및 씨의 혼합 추출물이 위장 장애를 나타내는 아스피린을 대치할 수 있는 강력한 항혈전제로 개발 가능함을 제시하고 있다.

실시예 3: 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성 평가

패션후르츠 과육과 씨는 식용으로 사용되고 있으며, 국내 식약처의 식품원재료 데이터베이스에서도 식용으로 등록되어 있다. 따라서, 과육과 씨의 혼합 추출물은 특이한 독성은 없을 것으로 판단된다. 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 잠재적 급성 독성을 평가하기 위해 인간 적혈구 용혈 활성을 평가하였으며, 그 결과는 표 3에 나타내었다. 이때 용혈 활성은 기존의 보고(손호용, 2014년, Korean J. Microbiol. Biotechnol. 42: 285~292)에 준해 평가하였으며, 간단하게는 PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 100μl를 96-well microplate에 가하고 다양한 농도의 시료용액 100μl를 가한 다음 37℃에서 30분간 반응시켰으며, 이후, 반응액을 10분간 원심분리(1,500rpm)하여 상등액 100μl를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 414nm에서 측정하였다. 시료의 용매 대조구로는 DMSO(2%)를 사용하였으며, 적혈구 용혈을 위한 실험 대조구로는 Triton X-100(1mg/ml)를 사용하였다. 용혈 활성은 다음의 수식을 이용하여 계산하였다.

( % ) Hemolysis = [( Abs .S- Abs .C)/( Abs .T- Abs .C)]×100

Abs. S : 시료 첨가구의 흡광도,

Abs. C : DMSO 첨가구의 흡광도,

Abs . T : Triton X-100 첨가구의 흡광도.

[표 3] 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성

먼저, 대조구로 사용된 DMSO와 증류수는 적혈구 용혈 활성이 없었으며, Triton X-100은 1mg/ml 농도에서 적혈구를 100% 용혈시킴을 확인하였다. 한편, 패션후르츠 과육과 씨의 혼합물 추출물에서는 용혈활성이 나타나지 않았다.

실시예 4: 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 혈장, 산 및 열 안정성 평가

상기 실시예 1에서 얻은 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물을 대상으로 항응고 활성에 대한 혈장 안정성, 열 안정성 및 산 안정성을 확인하였다. 상기 혼합 추출물은 100℃에서 1시간 열 처리, pH 2(0.01M HCl)에서의 1시간 처리, 혈장에서 1시간 처리시에도 항응고 활성의 소실이 없이 우수한 활성을 유지하였다. 따라서, 실시예 1의 성분 분석 결과와 상기의 안정성 결과를 고려할 때, 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물의 활성 물질은 다당류성 물질로 예상된다. 이상의 결과는 패션후르츠 과육과 씨의 혼합 추출물이 항혈전제로 실제적 이용이 가능함을 제시하고 있으며, 위장 장애 등의 부작용이 보고된 아스피린을 보완, 대치할 수 있으리라 판단된다.

Claims

패션후르츠(Passiflora edulis) 과육과 씨의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈전증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 기재된 유효성분을 포함하는 혈액 응고 억제제.
제 1항 또는 제 2항에 기재된 유효성분을 포함하는 혈전증의 예방 또는 개선용 건강 기능 식품.