KR20150095793A - 시계꽃 종자들의 추출물 그리고 이를 포함하는 미용적, 약제학적, 피부과학적 및 영양제학적 조성물들 - Google Patents

시계꽃 종자들의 추출물 그리고 이를 포함하는 미용적, 약제학적, 피부과학적 및 영양제학적 조성물들 Download PDF

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Abstract

본 발명은 시계꽃 종자들 및 바람직하게는 패시플로라 에둘리스 (Passiflora edulis) 종자들의 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 조성물은 유리하게 미용적, 약제학적, 피부과학적 또는 영양제학적이다. 본 발명의 주제 문제는 시계꽃 종자들, 바람직하게는 패시플로라 에둘리스 종자들의 추출물을 추출하는 방법, 또한 상기 방법에 의해 획득될 수 있는 추출물이다. 본 발명은 또한 피부, 점막성 막들 또는 피부 부속물들의 장애들 또는 병리학적 병태들의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 혈관성 장애들의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 산화적 스트레스를 극복하는 데 사용하기 위한, 또는 그 외 지방 조직 변형들의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 이러한 조성물 또는 이러한 추출물에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 피부, 피부 부속물들 또는 점막성 막들의 미용적 관리 방법으로서, 그들의 병태, 또는 외양을 개선하는 관점에서 이러한 조성물 또는 이러한 추출물을 투여하는 단계로 구성되는, 방법에 관한 것이다.

Description

시계꽃 종자들의 추출물 그리고 이를 포함하는 미용적, 약제학적, 피부과학적 및 영양제학적 조성물들 {Extract of passionflower seeds and cosmetic, pharmaceutical, dermatological and nutriceutical compositions comprising same}
본 발명은 패시플로라 인카르나타 (Passiflora incarnata) 또는 패시플로라 에둘리스 (Passiflora edulis) 시계꽃 종자들 및 바람직하게는 패시플로라 에둘리 스 종자들의 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 조성물은 유리하게 미용적, 약제학적, 피부과학적 또는 영양제학적이다. 본 발명의 또 다른 주제 문제는 시계꽃 종자들의 추출물을 추출하는 방법 및 상기 방법에 의해 획득될 수 있는 추출물이다. 본 발명은 또한 피부, 점막성 막들 또는 피부 부속물들의 장애들 또는 병리학적 병태들의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 혈관성 장애들의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 산화적 스트레스를 극복하는 데 사용하기 위한, 또는 지방 조직 변형들의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 이러한 조성물 또는 이러한 추출물에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 피부, 피부 부속물들 또는 점막성 막들의 미용적 관리 방법으로서, 그들의 병태, 또는 외양을 개선하는 관점에서 이러한 조성물 또는 이러한 추출물을 투여하는 단계로 구성되는, 방법에 관한 것이다.
시계꽃 (passionflower)
약 500종들의 시계꽃 (패시플로라)들이 존재한다. 본 종은 종종 따뜻하고 온화한 열대 지방들, 상세하게는 아메리카 지역들에 분포하지만, 아시아, 호주 및 열대 아프리카에서는 오히려 희귀하다.
식물학
묘목들은 관목들 또는 등반하는 덩굴들의 형태를 가진다. 잎들은 호생하는, 때로 단순한 엽상이거나 장상이다. 반경 9 cm로 성장할 수 있는 꽃들은 양성 또는 단성이고 규칙적이다. 그들은 흰색과 보라색이고 그리스도의 가시관을 닮은 실모양의 부속물들로 둘러싸인 미세한 꽃잎 모양의 부속물들을 가진다. 열매는 4 내지 5 cm 길이이고 달걀-형태를 가지며 색상은 종종 노란색 내지 오렌지색이다. 가장 널리 분포하는 종들은 명확하게 P. 인카르나타 및 P. 에둘리스이다.
식물화학적 성분들
가장 많이 연구된 종들은 P. 인카르나타 및 P. 에둘리스이다.
P. 인카르나타 : 플라보노이드 패밀리로 대표되는 주요한 성분들은 잎들에 많은 양으로 존재한다. 이것은 높은 농도의 이소비텍신 (isovitexin)을 포함한다. 이것은 단순한 인돌 알칼로이드들 (하메인, 하민 등), 라피노스, 슈크로스, 과당 및 포도당과 같은 당들 그리고 본 식물의 속성이 되는 진정 및 항경련 효과들을 유발하는 분자로서 기술되는 정유들 및 만톨도 역시 포함한다.
P. 에둘리스 : 특이적 화합물인 패시플로린 (사이클로프로판 트레테르펜 글리코사이드)은 건조된 잎들의 메탄올 추출물로부터 확인되어 왔다 (E. Bombardelli et al., 1975). 이것은 P. 인카르나타에서는 관찰되지 않는 플라보노이드인 이소오리엔틴, 및 P. 인카르나타와 동일한 미량의 정유 및 알칼로이드들을 포함한다.
열매의 과육은 스카프토사이드 (schaftoside), 이소스카프토사이드, 이소오리엔틴, 오리엔틴, 이소비텍신 및 루테올린의 유도체들과 같은 플라보노이드들 (M.L. Zeraik, J.H. Yariwake - 2010), 및 아스코브산 (약 60　mg/100　g)을 포함한다.
과육은 글리코실화 시안생성 유도체들: 프루나신 (prunasin), 삼부니그린 (sambunigrin) 및 아미그달린 (amygdalin), 그리고 2가지 최근 확인된 만델오니트릴-β-루티노사이드들 (mandelonitrile-β-rutinoside)도 역시 포함한다 (D. Chassagne and J. Crouzet, 1998; D.S. Seigler, 2002).
독성학
시안생성 성분들이 주로 다양한 시계꽃 변종들의 공중 부분들에 존재한다.
종자 특징
종자들은 P. 에둘리스 열매의 6 내지 12%까지를 차지하고, 다음을 포함한다:
- 폴리페놀들 , 피시아타놀 (라스베라트롤과 유사한 구조) 및 그의 이량체인 쉬르푸신 B (S. Sano; K. Sugiyama; T. Ito, 2011)를 포함하고, 혈관이완 및 항산화 효과들을 가진 물질들.
- 오일 , 파이토스테롤들 (캄페스테롤, 스티그마스테롤, 시토스테롤, 아베나스테롤을 포함하는 0.2%); 60% 내지 73% 리놀레산 (오메가 6), 14% 내지 20% 올레산 및 465　ppm 토코페롤들을 포함하는 용매로 18% (G. Piobom, N. Barou et al., 2006; R. of V.V. Lopes et al.).
- 당들 및 단백질들 .
선행기술
식품으로서 용도
열매는 선사시대 이래로 소비되었던 것으로 믿어진다. 16세기 페루에서 화려한 패시플로라 꽃들은 이미 치료법로서 간주되었고 많은 시계꽃 종들은 보편적인 치료적 관행들로 많은 나라들에서 여전히 사용되고 있다.
의학적 용도
시계꽃들 (종종 공중 부분들 및 때로 열매들)은 세계적으로 항불안제들, 진정제들, 이뇨제들 및 진통제들로서 자주 사용되고 있다 ("Passiflora: review update. K. Dhawan, S. Dhawan, A. Sharma, 2004"의 모든 설명들). 말톨 및 그의 소정의 유도체들은 이러한 진정 효과의 출처이다.
이러한 활성은 P. 인카르나타의 경우 더욱 일정하고 더욱 유의하다.
P. 인카르나타의 추출물들은 모르핀 의존성을 역전시킬 수 있다.
항-염증 효과들도 P. 에둘리스 잎들의 추출물들의 경우에 역시 관찰되었다.
다양한 폴리페놀 패밀리들은 P. 에둘리스의 공중 부분들의 항산화 및 단백질들의 항-글리코실화 효과에 유의하게 기여하는 것으로 여겨진다 (M. Rudnicki et al., 2007).
P. 에둘리스 열매 껍질들의 메탄올 추출물의 항-저혈압 효과 및 섬유-강화 탈지된 종자들의 추출물의 저콜레스테롤혈증 효과도 역시 관찰되었다.
열매 달임 (decoction)은 종양 침습, 전이들 및 혈관생성에 관여하는 기질 금속단백질 분해효소 (MMP2 및 MMP9)의 저해에 의해 항종양 효과를 가진다 (S.S. Patel, 2009).
피부관리 화장품들에서의 용도
브라질에서는 P. 포에티다 (P. foetida) 잎들이 염증성 피부 질환들을 치료하는 데 피부로 사용된다. 모리티우스 및 로드리게스 (Mauritius and Rodrigues)에서 P. 수베로사 (P. suberosa) 잎들의 달임들이 피부 질환들을 치료하도록 수조에 사용된다.
본 출원인은 시계꽃 종자들, 상세하게 패시플로라 인카르나타 (Passiflora incarnata) 또는 패시플로라 에둘리스 (Passiflora edulis) 종자들, 훨씬 더 유리하게는 패시플로라 에둘리스 종자들의 추출물들이 이전에 개시되지 않았던 미용적 및 피부과학적 성질들을 가지는 점을 발견하였다. 상세하게, 시계꽃 종자들의 이러한 추출물들이 이와 같이 그들의 특이적 성질들을 위해 사용되었던 것은 이것이 처음이다.
본 발명의 주제 문제는 활성 제제로서 시계꽃 종자들, 상세하게 패시플로라 인카르나타 또는 패시플로라 에둘리스 종자들, 유리하게는 패시플로라 에둘리스 종자들의 펩타이드 및 당 추출물, 및 필요한 경우라면 적합한 부형제를 포함하는 조성물이다. 본 조성물은 유리하게 미용적, 약제학적 또는 피부과학적이다. 또한 본 조성물은 영양제학적일 수 있다. 상기 조성물은 바람직하게 외부의 국소적 경로 또는 경구적 경로에 의해 투여되도록 제형화된다.
"펩타이드 및 당 추출물"에 의하여 주로 또는 필수적으로 펩타이드들 및 당들을 포함하는 추출물을 의미한다. 종자들에 자연적으로 존재하는 단백질들은 펩타이드들로 가수분해되어 왔고, 유리하게 가수분해는 효소적 가수분해이다.
본 발명의 맥락 내에서, 펩타이드 및 당 추출물은 유리하게 효소적 가수분해에 의해, 더욱 유리하게는 적어도 하나의 단백질 분해효소 및 적어도 하나의 탄수화물 분해효소의 존재 시 획득된다. 더욱 유리하게, 이것은 상세한 설명에서 심화 기술된 방법에 의해 획득될 수 있다.
펩타이드 및 당 추출물에서, 펩타이드들은 유리하게 3,500 Da 이하의 분자량을 가진다. 이들 펩타이드들은 추출물에 존재하는 모든 아미노산 기초 화합물들을 포괄한다.
본 발명의 유리한 변형물에 따르면, 펩타이드 및 당 추출물에서, 펩타이드들의 적어도 90%는 1,200 Da 이하의 분자량을 가진다.
펩타이드 및 당 추출물에서, 유리하게 적어도 30%의 펩타이드들, 더욱 유리하게는 적어도 40%의 펩타이드들은 300 Da 이하의 분자량을 가진다. 본 발명의 유리한 변형물에 따르면, 30% 및 50% 사이 범위의 펩타이드들이 300 Da 이하의 분자량을 가진다.
유리하게 본 발명에 따르면, 추출물의 30% 및 70% 사이 범위, 더욱 유리하게 40% 및 60% 사이 범위의 펩타이드들이 300 및 1,200 Da 사이 범위의 분자량을 가진다.
펩타이드들의 분자량 분포는 전체 펩타이드들의 농도와 대비한 백분율로서 표현된다.
전형적으로, 본 발명에 따른 펩타이드 및 당 추출물은 실질적으로 잠재적으로-알레르기생성 잔류 단백질들을 포함하지 않는다.
본 발명에 따른 추출물은 유리하게 무게로 10% 내지 90%의 펩타이드들 및 무게로 10% 내지 90%의 전체 당들을 포함하고, 백분율들은 상기 추출물의 전체 무게와 대비하여 표현된다 (건조화 지지체의 선택적 첨가 이전에).
펩타이드 및 당 추출물에서 펩타이드들/당들의 무게 비율은 유리하게 0.75 이상, 바람직하게는 1 및 2 사이 범위이다.
펩타이드 및 당 추출물은 유리하게 무게로 20% 내지 70%, 유리하게 30% 내지 65%, 전형적으로 55%의 펩타이드들을 포함하고, 백분율들은 상기 추출물의 전체 무게와 대비하여 표현된다.
펩타이드 및 당 추출물은 유리하게 무게로 20% 내지 60%, 유리하게 30% 내지 55%, 전형적으로 40%의 당들을 포함하고, 백분율들은 상기 추출물의 전체 무게와 대비하여 표현된다.
상세하게, 펩타이드 및 당 추출물은 유리하게 무게로 20% 내지 70%, 유리하게 30% 내지 65%의 펩타이드들, 및 무게로 20% 내지 60%, 유리하게 30% 내지 55%의 당들을 포함하고, 백분율들은 상기 추출물의 전체 무게와 대비하여 표현된다.
본 발명의 바람직한 관점에 따르면, 펩타이드 및 당 추출물은 무게로 55%의 펩타이드들 및 무게로 40%의 당들을 포함하고, 백분율들은 예를 들면 선택적 건조화 지지체의 첨가 이전에 상기 추출물의 활성 물질의 전체 무게와 대비하여 표현된다. 남아있는 5%은 미네랄들 (회분들) 및 기타 다양한 분자들이다.
본 발명의 유리한 변형물에 따르면, 조성물은 건조 추출물의 백분율로서 표현되는 무게로 0.001% 내지 10%, 전형적으로 0.01% 내지 5%의 추출물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 주제 문제는 시계꽃 종자들, 상세하게 패시플로라 인카르나타 종자들 또는 패시플로라 에둘리스 종자들, 유리하게는 패시플로라 에둘리스 종자들의 펩타이드 및 당 추출물을 제조하는 방법으로서, 당업자라면 숙지하고 있는 최적의 pH 및 온도 조건들 하에서 효소적 가수분해의 적어도 하나의 단계를 포함하는, 방법이다. 분산액의 효소적 처리가, 필요한 경우라면 효소들을 변성시키도록 열 처리로 이어질 수 있다.
유리하게 본 발명에 따르면, 시계꽃 종자들의 펩타이드 및 당 추출물을 제조하는 방법은 다음의 연속적인 단계들을 포함한다:
a) 마쇄된 종자들의 수용성 상에서 분산, 다음으로
b) 단계 a)에서 획득된 수용성 분산액의 효소적 처리, 다음으로
c) 필요한 경우라면, 효소들을 변형시키도록 열 처리, 및
d) 단계 b) 또는 c)의 결론에서 펩타이드 및 당 추출물의 수집.
단계 a)에서, 수용성 상은 유리하게 물이다.
효소적 처리 (단계 b)는 유리하게 당업자라면 숙지하고 있는 최적의 pH 및 온도 조건들 하에서, 적어도 하나의 단백질 분해효소 및 적어도 하나의 탄수화물 분해효소를 첨가하여 수행된다. 예를 들면, pH는 3.0 및 9.0 사이 범위이다. 온도는 전형적으로 20℃ 및 90℃ 사이 범위이다. 상세하게, 효소적 처리는 유리하게 펙티나제들, 셀룰라제들, 아라바나제들, 헤미셀룰라제들, 자일라나제들 및 β-글루카나제들로부터 선택되는 탄수화물 분해효소를 첨가하는 단계 b1), 다음으로 알칼리- 또는 산-유형의 단백질 분해효소를 첨가하는 단계 b2)를 연속적으로 포함한다.
본 발명에 따른 방법의 가수분해 단계는 시계꽃 종자들에 존재하는 미가공 단백질들을 펩타이드들로 변형하거나 "절단"하는 것을 가능하게 하기 때문에, 매우 중요하다. 본 단계는 또한 유리하게 시계꽃 종자들에 존재하는 미가공 다당류를 올리고당류 또는 단당류로 변형하거나 "절단"하는 것을 가능하게 한다.
본 방법의 유리한 변형물에서, 시계꽃 종자들은 단계 a) 이전에 탈지된다. 분산되기 (단계 a)) 이전에, 마쇄된 종자들은 상세하게 에탄올에서 탈지된다. 지질들을 제거하는 단계는 연속적인 여과, 초여과 또는 나노여과 단계들을 개선시킨다. 바람직하게는 마쇄된 종자들로서 이들 종자들의 오일 케이크들, 즉 예비적인 오일 추출로부터 얻은 잔류물을 사용하는 것도 역시 가능하다. 이러한 오일 추출은 용매를 사용하거나, 매우 결정적인 (supercritical) CO2 기법을 사용하거나, 바람직하게는 기계적인 프레싱에 의해, 수행될 수 있다.
단계 d) 동안, 펩타이드 및 당 추출물은 유리하게 단계 b)의 결론에서 획득되는 분산액을 교반하면서, 유리하게는 pH 3.0 및 9.0 사이의 범위에서 그리고 유리하게 20℃ 및 90℃ 사이 범위의 온도에서 추출하여 수집된다.
유리한 변형물에서, 본 방법은 단계들 b) 또는 필요한 경우라면 c), 및 d) 사이에 선택적으로 초여과, 투과여과 또는 나노여과로 이어지는 여과 또는 원심분리의 추가적인 단계를 포함한다.
상세하게 막 초여과 또는 투과여과로 이어지는 여과 또는 원심분리 단계들은 잔류 단백질들을 제거한다. 나노여과 단계들은 예를 들면 미네랄 염들 또는 자유 아미노산들을 제거한다.
본 발명에 따른 방법은 유리하게 임의의 잠재적으로-알레르기생성 잔류 단백질들을 제거하는 15 kDa 초여과, 유리하게는 10 kDa 및 15 kDa 사이 범위의 초여과의 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 상세한 구현예에서, 방법은 초여과 단계에 이어서 미네랄 염들 또는 자유 아미노산들 또는 단당류의 일부를 제거하기 위하여, 예를 들면 100 달톤 및 300 달톤 사이 범위, 유리하게 130 달톤 및 300 달톤 사이 범위, 전형적으로 200 달톤 및 300 달톤 사이 범위의 컷오프를 가진 나노여과 단계를 포함한다.
유리하게, 펩타이드 및 당 추출물은 예를 들면 말토덱스트린들 또는 아카시아 섬유들 (Fibregum®, CNI) 유형의 지지체의 존재 또는 부재 시, 당업자에게 숙지된 방법들에 의해 건조시켜서 안정화될 수 있다. 지지체의 비율은 전형적으로 액체 형태의 추출물에서 획득된 건조 물질의 무게 백분율과 대비한 지지체의 무게로 0%부터 80%까지의 비율로 변화한다. 추출물은 바람직하게 최종 분말을 획득하기 위하여 동결-건조에 의해 건조된다. 최종 분말은 무게로 30% 내지 70%의 추출물의 건조 물질을 포함하고, 동결-건조 지지체로 이를 100%까지 올려준다. 더욱 유리하게, 최종 분말은 무게로 추출물로부터 얻은 50%의 건조 물질 및 50%의 동결-건조 지지체%를 포함한다.
바람직하게, 예로서, 펩타이드 및 당 추출물은 다음의 공정에 따라 획득될 수 있다:
a) 물에서 10% 건조 물질의 농도로 프레싱에 의해 탈지된 시계꽃 종자들의 오일 케이크의 용액의 제조;
b) 셀룰라제 (예를 들면, 라이벤사 (Lyven)로부터 얻은 셀루라이베 (Cellulyve))의 작용에 의한 탄수화물들의 효소적 가수분해;
c) 산 단백질 분해효소 (예를 들면, 라이벤사로부터 얻은 프로라이베 PAC)에 의한 가수분해로 진행;
d) 효소들을 변성하도록 열 처리;
e) 15 kDa 막들 상의 원심분리, 초여과 및 투과여과. 본 단계는 상세하게 잠재적으로-알레르기생성 단백질들의 제거를 가능하게 한다.
f) 200 kDa 막 상의 나노여과. 본 단계는 상세하게 예를 들면 미네랄 염들 또는 자유 아미노산들의 제거를 가능하게 한다.
본 발명의 또 다른 주제 문제는 상기에 언급된 방법에 의해 획득될 수 있는 시계꽃 종자들, 상세하게는 패시플로라 인카르나타 또는 패시플로라 에둘리스 종자들, 유리하게 패시플로라 에둘리스 종자들의 추출물이다. 이러한 추출물은 상기에 정의된 명세 사항들을 충족시킨다. 상세하게, 이러한 추출물은 유리하게 무게로 10% 내지 90%의 펩타이드들 및 무게로 10% 내지 90%의 당들을 포함한다. 보다 상세하게, 추출물은 무게로 20% 내지 70%, 유리하게 30% 내지 65%의 펩타이드들 및 무게로 20% 내지 60%, 유리하게 30% 내지 55%의 당들을 포함한다.
추출물은 유리하게 하나 이상의 적합한 부형제들을 포함할 수 있는, 미용적, 피부과학적 또는 약제학적 조성물과 같은 조성물에서 활성 성분으로서 사용된다. 조성물은 시계꽃 가수분해물에 추가하여 적어도 하나의 다른 활성 화합물을 더 포함할 수 있다. 이러한 다른 화합물은 하기에 진술된 모든 화합물들 및 그들의 기능적 동등물들로부터 선택될 수 있다.
이러한 다른 화합물은 상세하게 연화제들, 습윤화 활성 제제들, 케라틴-합성 활성인자들, 각질조절인자들, 각질분해제들, 피부 장벽을 재생하는 제제들 (피부 지질들의 합성의 활성인자들), 퍼옥시좀 증식인자-활성화된 수용체 (PPAR) 작동제들, RXR 또는 LXR 작동제들, 피지-조절화 제제들, 항-자극 제제들, 진정화 제제들, 항-염증 제제들, 항산화제들 및 항-노화 제제들, 탈색화 또는 저탈색화 제제들, 색소침착 제제들, 지질분해 제제들 또는 지질생성 저해제들 또는 항-셀룰라이드 또는 환원화 제제들, 무기 또는 유기 선 필터들 및 차단제들, 항진균 화합물들, 보존제들, 항세균 제제들, 프리바이오틱스들 및 프로바이오틱스들, 항생제들, 면역조절인자들과 같은, 통상적으로 피부과학 또는 화장품학에서 사용되는 활성 제제들로부터 선택될 수 있다.
보다 상세하게, 조합으로 사용될 수 있는 피부 장벽을 치유하고/거나 재생하는 제제들은 유리하게 판테놀 (비타민 B5), 아라비노갈락탄, 산화아연, 세라마이드들, 콜레스테롤, 스쿠알렌 및 인지질들이다.
조합으로 사용될 수 있는 피지-조절화 제제들은 유리하게 5-알파-환원효소 저해제들로 구성되는 그룹으로부터 선택된다. 아연 (및 그의 글루코네이트, 살리실레이트 및 파이로글루탐산 염들과 같은 아연 유도체들) 및 스피로노락톤도 역시 피지-억제 활성을 가진다. 리놀레산과 같은 피지 질적 수준에 작용하는 지질 기원의 다른 피지-조절인자들도 역시 흥미롭다.
항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정 제제는 아라비노갈라탄이다.
조합으로 사용될 수 있는 선 스크린 활성 제제들은 유리하게 요구되는 보호작용의 정도에 따라 그들의 선택 및 농도들을 적응시킬 당업자가 숙지하고 있는 무기 및/또는 유기 차단제 또는 필터들과 같은 UVB 및/또는 UVA 선 필터들 및 차단제들이다.
조합으로 사용될 수 있는 보존제들은 예를 들면 화장품들에서 일반적으로 사용되는 것들이고, 예를 들면 카프리로일 글리신 및 글리세릴 카프릴레이트; 헥산디올, 소듐 레부리네이트, 및 구리와 아연 유도체들 (글루코네이트 및 PCA)와 같은 카프릴 유도체들과 같은 항세균 활성을 가진 분자들 (유사-보존제들)이다.
이러한 기타 화합물은 상세하게 식물 추출물들, 상세하게는 다음으로부터 선택될 수 있다:
- 콩 오일, 평지씨 오일, 아보카도 오일 (국제특허출원 제 WO 2004/012496호, 제 WO 2004/012752호, 제 WO 2004/016106호, 제 WO 2007/057439호) 및/또는 루핀 오일, 유리하게 단 흰색 루핀 오일 (국제특허출원 제 WO 98/47479호)와 같은 식물 오일들, 또는 이들 오일들의 혼합물;
- 상세하게 그들의 습윤화 및/또는 연화, 치유 및/또는 피부-장벽 재생, 항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정 활성에 유용한, 동물 또는 식물 오일, 상세하게는 해바라기의 올레산 증류물 또는 농축물들, 더욱 유리하게 엑스팬사이언스 연구소 (Expanscience Laboratory)에 의해 시판되는 비-비누화물들 (Soline® - 국제특허출원 제 WO 2001/21150호)로 농축된 해바라기 오일과 같은 해바라기의 리놀레산 농축물들, 아보카도 오일, 평지씨 오일, 옥수수 오일 유형의 비-비누화물들로 농축된 오일들,
- 상세하게 그들의 치유 및/또는 피부-장벽 재생, 항-노화, 항-염증 활성에 유용한, 국제특허출원 제 WO 01/21605호에 기술된 방법에 의해 획득될 수 있는 식물들 또는 식물 오일의 비-비누화물들, 유리하게 아보카도 퓨란들 (아보카도퓨란®), 아보카도 및/또는 콩 비-비누화물들, 보다 상세하게는 아보카도 퓨란성 비-비누화물들 및 콩 비-비누화물들의 혼합물, 유리하게는 약 1/3 내지 2/3의 개별적 비율로의 혼합물 (피아스크레딘® (Piascledine®)), 콩 비-비누화물들 (국제특허출원 제 WO 01/51596호에 따라 획득된 바와 같음), 스테롤성 비-비누화물들 (전형적으로 스테롤들, 메틸스테롤들 및 삼중테르펜 알코올들이 비-비누화물들의 전체 무게와 대비하여 무게로 20% 및 95%, 바람직하게는 무게로 45 내지 65% 사이 범위임), 파이토스테롤들, 스테롤들의 에스테르들 및 비타민 유도체들;
- 식물 아미노산들, 상세하게는 아보카도의 펩타이드들 또는 복합체들 (국제특허출원 제 WO 2005/105123에 기술된 것들과 같음), 루핀 펩타이드들 (국제특허출원 제 WO 2005/1002259호에 기술된 것들과 같음), 퀴노아 펩타이드들 (국제특허출원 제 WO 2008/009709호에 기술된 것들과 같음), 메카 펩타이드들 (국제특허출원 제 WO 2004/112742호에 기술된 것들과 같음), 발효되거나 미-발효된 콩 펩타이드들, 쌀 펩타이드들 (국제특허출원 제 WO 2008/009709호에 기술된 것들과 같음), 상세하게 그들은 습윤화 및/또는 연화 (아보카도), 각질조절인자 (루핀, 퀴노아), 치유 및/또는 장벽 재생 (마카, 퀴노아, 콩), 항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정 (루핀, 퀴노아), 항산화 (아보카도), 항-노화 (루핀, 마카), 또는 색소침착 (쌀) 활성에 유용함, 스키산드라 (Schisandra) 펩타이드들 (프랑스 특허 제 FR 0955344호에 기술된 것과 같음), 아카시아 마크로스타키아 (Acacia macrostachya) 종자들의 추출물 (프랑스 특허 제 FR 0958525호에 기술된 것과 같음), 비그나 웅귀 쿨라타 (Vigna unguiculata) 종자들 (프랑스 특허 제 FR 0958529에 기술된 것과 같음);
- 상세하게 그들의 각질조절인자, 치유 및/또는 피부-장벽 재생, 항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정 성질에 유용한, 식물 당들, 상세하게는 아보카도 당들 (국제특허출원 제 WO 2005/115421호에 기술된 것들과 같음);
- 부틸 아보카데이트 (5 알파 아보쿠타®), 5-알파 환원효소 저해제 (국제특허출원 제 WO 01/52837호 및 제 WO 02/06205호) 및 전형적으로 여드름 및 비듬에서 관찰되는 증가된 피지 분비의 조절인자;
- 폴리페놀들이 강화된 추출물들, 보다 상세하게는 아보카도 열매들의 추출물들 (프랑스 특허 제 FR 1 061 055호에 기술된 것들과 같음), 마카 잎들의 추출물들 (프랑스 특허 제 FR 1 061 047호에 기술된 것들과 같음), 및 자이난드롭시스 자 이난드라 (Gynandropsis gynandra)의 공중 부분들의 추출물들 (프랑스 특허 제 FR 1 061 051호에 기술된 것들과 같음);
- 상세하게 치유를 촉진하는 데 유용한 루페올 (프랑스 특허 제 FR 2 822 821호, 제 FR 2 857 596호);
- 상세하게 그의 습윤화 성질들이 인정되는 쿠푸아쿠 버터.
이러한 기타 화합물은 상세하게 옥사졸린들, 상세하게는 2-운데실-4-하이드록시메틸-4-메틸-1,3-옥사졸린, 2-운데실-4,4-디메틸-1,3-옥사졸린, (E)-4,4-디메틸-2-헵타데크-8-에닐-1,3-옥사졸린, 4-하이드록시메틸-4-메틸-2-헵타데실-1,3-옥사졸린, (E)-4-하이드록시메틸-4-메틸-2-헵타데크-8-에닐-1,3-옥사졸린, 2-운데실-4-에틸-4-하이드록시메틸-1,3-옥사졸린 (바람직하게 OX-100 또는 사이클로세라마이드®라고 불리는 2-운데실-4,4-디메틸-1,3-옥사졸린; 국제특허출원 제 WO 2004050052호, 제 WO 2004050079호, 및 제 WO 2004112741호). 그들은 상세하게 그들의 항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정, 항산화, 탈색화, 면역조절인자 활성에 유용하다.
이들 조합들 모두는 시계꽃 종자들의 추출물에 추가하여 적어도 하나의 다른 활성 화합물을 포함하고, 상기에 기술된 바와 같은 2, 3 또는 4가지 이상의 활성 화합물들을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 국소적 적용, 경구적, 직장, 질내, 비강, 귀내 또는 기관지 투여 및 비경구적 투여에 적합한 다양한 조제물들로서 제형화될 수 있다.
첫 번째 변형물에 따르면, 다양한 조제물들은 국소적 적용에 적합하고, 상세하게는 크림들, 에멀전들, 밀크들, 연고들, 로션들, 오일들, 수용성 또는 물-알코올 또는 글리콜 용액들, 분말들, 패치들, 스프레이들, 샴푸들, 바니쉬들 또는 기타 다른 외부적 적용을 위한 산물을 포함한다.
지시된 명세 사항들을 가지는 시계꽃 종자들의 추출물을 포함하는 조성물은 상세하게 미용적, 약제학적, 피부과학적 또는 영양제학적 용도를 목적으로 한다.
미용적, 약제학적 또는 피부과학적 용도의 맥락 내에서, 조성물은 유리하게 국소적 적용에 적합한 조제물로서 제형화될 것이다. 펩타이드 및 당 추출물을 포함하는 조성물은 상세하게 미용적, 약제학적 또는 피부과학적 용도를 목적으로 한다.
영양적 또는 미용적 목적들을 위한 식품 ("미용적 식품")에서 용도의 맥락 내에서, 조성물은 유리하게 경구적 투여에 적합한 조제물로서 제형화될 것이다.
본 발명의 또 다른 주제 문제는 미용적, 약제학적 또는 피부과학적 조성물, 영양제학적 조성물 또는 기능성 식품의 제조를 위한, 상기에 기술된 명세 사항들을 가지는 시계꽃 종자들의 펩타이드 및 당 추출물의 용도이다.
기능성 식품은 통상적인 식품 또는 식품인 것으로 보이는 것, 정상적인 식사의 일부이고 그의 보통의 영양적 기능들을 능가하는 유익한 생리학적 효과들을 제공하거나 만성 질환들의 위험을 감소시키는 특징을 가지는 식품이다.
본 발명의 주제 문제는 이에 따라 본 발명의 추출물을 포함하는 기능적 식품이다.
본 발명의 또 다른 주제 문제는 다음을 예방하고/하거나 치료하는 데 사용하는 본 발명에 따른 추출물 또는 본 발명에 따른 조성물이다:
- 피부 및/또는 점막성 막들 및/또는 피부 부속물들의 장애들 또는 병리학적 병태들,
- 혈관성 장애들,
- 지방 조직 변형들,
- 산화적 스트레스.
상세하게, 본 발명에 따른 조성물 또는 추출물은 알레르기성, 염증성 또는 자극성 반응들 또는 장벽의 병리학적 병태들 또는 장애들의 예방 및/또는 치료, 또는 피부, 피부 부속물들 (머리털 및 손발톱) 및/또는 미성숙, 정상 또는 성숙/노화된 점막성 막들 (잇몸들, 치주, 생식 점막들)의 항상성을 목적으로 한다.
유리하게, 본 발명에 따른 조성물 또는 추출물은 다음의 반응들, 장애들 또는 병리학적 병태들의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다:
- 여드름, 장미증 또는 혈관확장증, 건선, 혈관성 장애들, 기저귀 발진, 아토피 피부염, 습진, 접촉성 피부염, 자극성 피부염, 알레르기성 피부염, 피지성 피부염 (유아 지방관), 건선, 민감성 피부, 반응성 피부, 건조한 피부 (건조증), 탈수된 피부, 발적을 가진 피부, 피부 홍반, 노화 또는 광-노화된 피부, 광민감성 피부, 색소침착된 피부 (기미, 염증-후 색소침착), 탈색된 피부 (백반증), 연조직염을 가진 피부, 늘어진 피부, 선 자국들, 머리비듬, 피부 균열, 곤충 물림, 상세하게 유방들의 균열들, 햇볕 화상들, 모든 종류의 광선들로 인한 염증들, 화학적 제제들, 물리적 제제들 (예를 들면 임신부들의 장력 스트레스), 세균성 제제들, 진균성 또는 바이러스성 제제들, 기생충성 제제들 (이, 좀진드기, 버짐충, 진드기, 피부사상균들), 방사선학적 제제들에 의한 또는 선천적 면역 결함들 (항미생물성 펩타이드들) 또는 후천적 면역 결함들 (세포성, 체액성, 사이토카인들)에 의한 자극들을 가지는 피부와 같은 피부, 및/또는
- 치은염 (신생아들에서 민감한 잇몸들, 담배 사용으로 인한 위생 문제들 등), 치주 질환들을 가진 잇몸들 및 치주와 같은 점막성 막들, 또는 남성 또는 여성의 외부 또는 내부 생식기 부위들의 염증들을 가진 생식 점막, 및/또는
- 미성숙한, 정상 또는 성숙한 손톱들 (부서지는 약한 손톱들 등) 및 털 (탈모증, 비듬, 다모증, 피지성 피부염, 모낭염)과 같은 피부 부속물들, 상세하게는 안드로겐 유전성, 급성, 국소화, 반흔 또는 선천성 탈모증, 신생아들의 탈모증, 화학요법/방사선요법으로 인한 탈모 또는 휴지기 탈모, 성장기 탈모, 털 퇴행위축증, 발모광, 백선 또는 오일성 또는 건조한 비듬과 같은 두피 장애들.
본 발명은 또한 피부 및/또는 피부 부속물들 및/또는 점막성 막들의 미용적 관리 방법으로서, 그들의 병태 및/또는 외양을 개선하는 관점에서 본 발명에 따른 조성물 또는 추출물을 투여하는 단계로 구성되는, 방법에 관한 것이다.
상세하게, 미용적 관리 방법은 유리하게 피부 및/또는 피부 부속물들 및/또는 점막성 막들 위에 국소적 적용에 의해 피부를 당겨주고 "오렌지 껍질 (orange peel)" 효과를 감소시키는 것을 가능하게 한다.
본 발명은 피부의 미용적 관리 방법으로서, 그의 노화를 예방하는 관점에서 본 발명에 따른 조성물 또는 추출물을 피부 위에 적용하는 단계로 구성되는, 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 조성물 또는 추출물은 또한 유리하게 혈관성 장애들, 상세하게는 발적 및 얼룩들의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물 또는 추출물은 또한 유리하게 지방 조직 변형들의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다. 지방 조직 변형들은 상세하게 연조직염 또는 "오렌지 껍질" 효과이다. 본 발명에 따른 조성물은 피부를 당겨주는 것을 가능하게 한다.
본 발명에 따른 화합물들 및 조성물들의 투여의 방식들, 투여 스케줄들 및 최적의 약제학적 형태들은 일반적으로 약제학적 치료, 상세하게는 환자 또는 동물에 적합한 피부과학적, 미용적 또는 수의적 치료의 확립에 고려되는 판정기준, 예를 들면 환자 또는 동물의 연령 또는 체중, 환자 또는 동물의 일반적인 병태의 중증도, 치료에 대한 내성, 주목되는 부작용 및 피부 유형과 같은 판정기준에 따라 결정될 수 있다. 원하는 투여의 유형에 의존하여, 본 발명에 따른 조성물 및/또는 활성을 가진 화합물들은 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 담체, 상세하게는 피부과학적으로 허용가능한 담체 또는 미용적으로 허용가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 첫 번째 변형물에 따르면, 외부의 국소적 적용에 적합한 담체가 사용된다. 본 발명에 따른 조성물은 비후제들, 보존제들, 방향제들, 채색제들, 화학적 또는 무기 필터들, 습윤화 제제들, 열적 스프링 물들 등으로부터 선택되는, 당업자에게 숙지된 적어도 하나의 약제학적 또는 미용적 아쥬반트를 더 포함할 수 있다.
다음의 실시예들은 본 발명을 설명한다.
실시예 1: 본 발명에 따른 추출물
펩타이드 및 당 추출물은 다음의 방법에 따라 획득된다:
a) 물에서 10% 건조 물질의 농도로 프레싱에 의해 탈지된 패시플로라 에둘리스 종자들의 오일 케이크의 용액의 제조;
b) 셀룰라제 (예를 들면, 라이벤사으로부터 얻은 셀루라이베)의 작용에 의한 탄수화물들의 효소적 가수분해;
c) 산 단백질 분해효소 (예를 들면, 라이벤사로부터 얻은 프로라이베 PAC)에 의한 가수분해로 진행;
d) 효소들을 변성하도록 열 처리;
e) 잠재적으로-알레르기생성 단백질들을 제거하도록 15 kDa 막들 상의 원심분리, 초여과 및 투과여과;
f) 미네랄 염들 또는 자유 아미노산들 또는 단당류들을 제거하도록 200 kDa 막 상의 나노여과;
g) 펩타이드 및 당 추출물의 수집.
이에 따라 획득된 액체 펩타이드 및 당 추출물은 다음의 특징들을 가진다:
1 - 물리화학적 분석 ( % / 전체 건조 물질)
건조 추출물 (2시간, 105℃, 환기된 오븐) : 9.7%
pH : 4.0
α-아미노 질소 (OPA, 루이신 동등물) : 24%
펩타이드들 (크예달사 (Kjeldahl), N × 6.25) : 56%
용해성 당들 (HPLC) : 40% 포도당, 과당 포함
전체 회분들 : 6%
2 - 펩타이드들의 분자량 분포들의 프로파일
130 Da 이하 : 26%
130 내지 300 Da 사이 범위 : 17%
300 내지 1,200 Da 사이 범위 : 49%
1,200 내지 3,500 Da 사이 범위 : 7%
3,500 Da 이상 : ≤ 1%
실시예 2; 국소적 적용을 위한 조성물들
국소적 적용을 위한 다수의 조성물들이 하기에 제시된다. 실시예 1의 시계꽃 종자들의 펩타이드 및 당 추출물은 클렌저들, 물 내 오일 에멀전들, 오일 내 물 에멀전들, 오일들, 밀크들, 로션들, 샴푸들, 거품 제품들 및 스프레이들과 같은 다양한 미용적 산물들 내로 도입될 수 있고, 이들 조성물들은 실시예들로서 하기에 제시된다.
습윤화 클렌저
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
정제된 물 QS 내지 100%
생체당 검 1부터 5%까지
부틸렌 글리콜 1부터 5%까지
하이알루론산 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.001부터 10%까지
보존제들 0부터 1%까지
시트르산모노하이드레이트 0부터 1%까지
트로메타민 0부터 1%까지
민감성 피부를 위한 클렌저
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
카프리로일 글리신 0부터 1%까지
수산화나트륨 0부터 1%까지
SEQUESTRANT 0부터 1%까지
부틸렌 글리콜 1부터 5%까지
베타 카로틴 0부터 2%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.001부터 10%까지
보존제들 0부터 1%까지
PEG-32 1부터 5%까지
PEG-7 팜코코에이트 1부터 5%까지
아연 글루코네이트 0부터 1%까지
시트르산 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
향료 0부터 1%까지
폴록사머 184 1부터 5%까지
항-노화 에멀전
원료/상표명 또는 INCI 명칭 %
액체 이소파라핀 5부터 20%까지
이소세틸 스테아레이트 5부터 20%까지
AL - MG 하이드록시스테아레이트 5부터 20%까지
아빌 위 09 1부터 5%까지
글리세롤 1부터 5%까지
무기질 오일 1부터 5%까지
미세화된 아연 옥사이드 1부터 5%까지
부틸렌 글리콜 1부터 5%까지
레티놀 0부터 1%까지
비타민 C 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
이소노닐 이소노나노에이트 1부터 5%까지
벌왁스 1부터 5%까지
소듐 타르트레이트 1부터 5%까지
염화나트륨 0부터 5%까지
글리신 1부터 5%까지
보존제들 0부터 1%까지
콜레스테롤 0부터 1%까지
파이토스핑고신 0부터 1%까지
타르타르산 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
재생 에멀전
원료/상표명 또는 INCI 명칭 %
수소화 폴리데센 5부터 20%까지
로릴글루코사이드-글리스테아레이트 1부터 5%까지
디카프리릴 카보네이트 1부터 5%까지
글리세롤 5부터 20%까지
카보폴 0부터 1%까지
잔탄검 0부터 1%까지
아시아트산 0부터 1%까지
비타민 B5 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
수산화나트륨 0부터 1%까지
보존제들 0부터 1%까지
시트르산 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
슬리밍 오일
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
용해화제 0부터 1%까지
단 아몬드 오일 5부터 20%까지
코프라 카프릴레이트/카프레이트 QS 내지 100%
분쇄된 마카다미아 5부터 20%까지
글리세롤 카프릴로카프레이트 5부터 20%까지
NAT 알파 비사보롤 0부터 1%까지
알파 토코페롤 0부터 1%까지
아이비 추출물 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
보존제 0부터 1%까지
에스테르 0부터 1%까지
건조한 아토피성 피부를 위한 밀크
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
단 아몬드 오일 1부터 5%까지
옥수수 오일 1부터 5%까지
스테아르산 1부터 5%까지
C16 C18 세틸 아코올 0부터 1%까지
항거품제 70414 0부터 1%까지
로르 알코올11OE 1부터 5%까지
PEG 300 모노로레이트 0부터 1%까지
글리세롤 모노레이트 0부터 1%까지
글리세롤 모노스테아레이트 1부터 5%까지
비타민 B12 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.1부터 10%까지
보존제들 0부터 1%까지
시트르산 0부터 1%까지
삼소듐 시트레이트 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
향료 0부터 1%까지
땅콩 오일 1부터 5%까지
수소화된 팜 오일 1부터 5%까지
거품
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
정제된 물 QS 내지 100%
로로암포아세테이트 5부터 20%까지
코코글루코사이드 5부터 20%까지
표면활성제 1 5부터 20%까지
표면활성제 2 5부터 20%까지
PEG 6000 디스테아레이트 1부터 5%까지
보존제들 1부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.001부터 10%까지
카모마일 추출물 1부터 5%까지
시트르산모노하이드레이트 0부터 1%까지
격리제 0부터 1%까지
향료 0부터 1%까지
수산화나트륨 0부터 1%까지
진정 스프레이
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
정제된 물 QS 내지 100%
트리로레스-4 포스페이트 1부터 5%까지
디카프리릴 카보네이트 1부터 5%까지
부틸렌 글리콜 1부터 5%까지
에리트리틸 에스테르 1부터 5%까지
액체 미네랄 오일 1부터 5%까지
쉐어 버터 0부터 1%까지
채소 오일 0부터 1%까지
보존제들 0부터 1%까지
라이코펜 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
수산화나트륨 0부터 1%까지
향료 0부터 1%까지
잔탄검 0부터 1%까지
카보폴 0부터 1%까지
격리제 0부터 1%까지
시트르산 0부터 1%까지
정제화 클렌징 크림
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
정제된 물 QS 내지 100%
알라톤 10부터 30%까지
코코글루코사이드 5부터 20%까지
하이드록시프로필 구아 1부터 5%까지
카프리로일 글리신 0부터 2%까지
보존제들 0부터 2%까지
향료 0부터 1%까지
시트르산 0부터 1%까지
아연 PCA 0부터 1%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.001부터 10%까지
항-여드름 에멀전
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
PEG 40 스테아레이트 1부터 5%까지
PEG 5 글리세릴 스테아레이트 1부터 5%까지
세레신 왁스 1부터 5%까지
글리세롤 모노스테아레이트 1부터 5%까지
소르비탄 스테아레이트 0부터 2%까지
세틸 알코올 0부터 2%까지
디-말레이트 알코올 5부터 20%까지
비타민 E 0부터 1%까지
비타민 B3 0부터 5%까지
리놀레산 0부터 1%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
부틸렌 글리콜 1부터 5%까지
피록토라민 0부터 1%까지
보존제들 0부터 1%까지
글리세롤 1부터 10%까지
잔탄검 0부터 1%까지
아연 PCA 0부터 2%까지
쌀 전분 1부터 5%까지
나일론 6 0부터 2%까지
폴리아크릴아마이드 젤 1부터 5%까지
비타민 B6 0부터 1%까지
향료 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
항-발적 에멀전
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
PEG 40 스테아레이트 1부터 5%까지
PEG 5 글리세릴 스테아레이트 1부터 5%까지
세레신 왁스 1부터 5%까지
글리세롤 모노스테아레이트 1부터 5%까지
소르비탄 스테아레이트 0부터 2%까지
세틸 알코올 0부터 2%까지
디-말레이트 알코올 5부터 20%까지
에스쿨로사이드 0부터 2%까지
소포라 자포니카 0부터 5%까지
비타민 E 0부터 1%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
부틸렌 글리콜 1부터 5%까지
피록토라민 0부터 1%까지
보존제들 0부터 1%까지
글리세롤 1부터 10%까지
잔탄검 0부터 1%까지
아연 PCA 0부터 2%까지
쌀 전분 1부터 5%까지
나일론 6 0부터 2%까지
폴리아크릴아마이드 젤 1부터 5%까지
비타민 B6 0부터 1%까지
향료 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
회복 관리
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
PEG 40 스테아레이트 1부터 5%까지
PEG 5 글리세릴 스테아레이트 1부터 5%까지
세레신 왁스 1부터 5%까지
글리세롤 모노스테아레이트 1부터 5%까지
소르비탄 스테아레이트 0부터 2%까지
세틸 알코올 0부터 2%까지
디-말레이트 알코올 5부터 20%까지
비타민 E 0부터 1%까지
보조효소 Q10 0부터 2%까지
세라마이드 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
부틸렌 글리콜 1부터 5%까지
피록토라민 0부터 1%까지
보존제들 0부터 1%까지
글리세롤 1부터 10%까지
잔탄검 0부터 1%까지
아연 PCA 0부터 2%까지
쌀 전분 1부터 5%까지
나일론 6 0부터 2%까지
폴리아크릴아마이드 젤 1부터 5%까지
비타민 B6 0부터 1%까지
향료 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
탈색화 에멀전
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
이소노일 이소노나노에이트 1부터 10%까지
이소세틸 스테아레이트 1부터 10%까지
PEG 40 스테아레이트 1부터 5%까지
PEG 5 글리세릴 스테아레이트 1부터 5%까지
보존제들 0부터 1%까지
C16 C18 세틸 알코올 0부터 2%까지
PPG/SMDI 중합체 0부터 1%까지
살리실산 0부터 2%까지
스쿠알란 젤 0부터 2%까지
디옥틸 에테르 1부터 10%까지
디-말레이트 알코올 1부터 10%까지
해바라기 추출물 1부터 10%까지
트로메타민 1부터 5%까지
부틸렌 글리콜 1부터 10%까지
트리소듐 시트레이트 0부터 1%까지
스크레로티움 검 0부터 1%까지
쌀 전분 1부터 10%까지
폴리아크릴아마이드 젤 0부터 1%까지
비타민 C 0부터 2%까지
글리신 0부터 2%까지
향료 0부터 1%까지
비타민 E 0부터 2%까지
시트르산 0부터 1%까지
세피화이트 0부터 2%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
정제된 물 QS 내지 100%
항세균 스틱롤
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
정제된 물 QS 내지 100%
부틸렌 글리콜 1부터 5%까지
벤조일 퍼옥사이드 0부터 2%까지
카프리로일 글리신 0부터 5%까지
아연 PCA 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.1부터 10%까지
카보머 0부터 2%까지
보존제들 0부터 1%까지
시트르산 0부터 1%까지
트로메타민 0부터 1%까지
스크럽
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
알라톤 듀오 5부터 20%까지
박피 제제 1부터 10%까지
스크레로티움 검 1부터 10%까지
보존제들 0부터 1%까지
카프리로일 글리신 0부터 1%까지
소다 0부터 1%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
격리제 0부터 1%까지
시트르산 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
향료 0부터 1%까지
각질화 액
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
세틸 알코올 1부터 5%까지
실리콘 345 1부터 5%까지
항산화제 0부터 1%까지
정제된 물 QS 내지 100%
염화세트리모늄 0부터 5%까지
퀴닌 0부터 5%까지
비타민 B5 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
가수분해된 밀 단백질 0부터 1%까지
보존제 0부터 2%까지
향료 0부터 1%까지
pH 조절제 0부터 1%까지
항비듬 샴푸
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
정제된 물 QS 내지 100%
로로암포아세테이트 5부터 20%까지
코코글루코사이드 5부터 20%까지
PEG 6000 디스테아레이트 1부터 5%까지
보존제들 0부터 2%까지
비타민 F 0부터 5%까지
피록톤 올라민 0부터 2%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
아연 파이리치온 0부터 1%까지
pH 조절제 0부터 1%까지
격리제 0부터 1%까지
향료 0부터 1%까지
유연화 액
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
세테아릴 아코올
세테아레스-33		 1부터 5%까지
쿼터늄-82 0부터 2%까지
정제된 물 QS 내지 100%
가수분해된 밀 단백질 0부터 5%까지
보존제들 0부터 2%까지
pH 조절제 0부터 1%까지
향료 0부터 1%까지
시스테인 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
모세혈관 강화 로션
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
정제된 물 QS 내지 100%
메틸 프로판디올 5부터 20%까지
보존제 0부터 2%까지
pH 조절제 0부터 1%까지
향료 0부터 1%까지
바이오틴 0부터 5%까지
비타민 B9 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
베타-시토스테롤 0부터 1%까지
에틸헥실 코코에이트 0부터 5%까지
PEG-40 캐스터 오일 0부터 5%까지
광보호 스틱
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
캐스터 오일 QS 내지 100%
올레 알코올 10부터 20%까지
팜 오일 10부터 20%까지
폴리글리세린-3-벌왁스 10부터 20%까지
칸데릴라 왁스 10부터 20%까지
헥토라이트 10부터 20%까지
티타늄 디옥사이드 0부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
쉐어 버터 0부터 5%까지
비타민 E 0부터 1%까지
SPF 50+ 선크림
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
B4 정제된 물 QS 내지 100%
티타늄 옥사이드 10부터 20%까지
사이클로펜타실록산 5부터 15%까지
옥틸 팔미테이트 5부터 15%까지
C12-C15 알킬 벤조에이트 5부터 10%까지
데실 펜타노에이트 5부터 10%까지
아연 옥사이드 5부터 10%까지
글리세롤 1부터 5%까지
PEG-45/도데실 글리콜 공중합체 1부터 5%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01부터 10%까지
염화나트륨 1부터 5%까지
덱스트린 팔미테이트 1부터 2%까지
비타민 E 0부터 2%까지
보존제들 0부터 2%까지
하이드록실프로필 구아 0부터 1%까지
알로에베라 0부터 1%까지
수산화나트륨 0부터 1%까지
EDTA 2 Na 0부터 1%까지
아연 글루코네이트 0부터 1%까지
SPF 50+ 선 스프레이
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
글리세롤 카프릴로카프레이트 5부터 20%까지
사이클로펜타실록산 10부터 20%까지
디카프리릴 카보네이트 5부터 20%까지
티노소르브 S 1부터 10%까지
티타늄 옥사이드 100 10부터 20%까지
헥토라이트 0부터 5%까지
알파 토코페롤 0부터 2%까지
로릴글루코사이드-글리스테아레이트 0부터 10%까지
B4 정제된 물 QS 내지 100%
시트르산 0부터 2%까지
펜틸렌 글리콜 0부터 5%까지
글리세롤 0부터 5%까지
잔탄검 0부터 2%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.001부터 10%까지
알로에베라 0부터 1%까지
아연 글루코네이트 0부터 1%까지
보존제들 0부터 2%까지
타노소르브 M 1부터 10%까지
약한 부서지는 손톱들을 위한 바니쉬
원료 / 상표명 또는 INCI 명칭 %
아크릴레이트 공중합체 15부터 30%까지
에탄올 QS 내지 100%
아세톤 5부터 20%까지
시계꽃의 펩타이드 및 당 추출물 0.01%부터 5%까지
실시예 3: 경구적 투여를 위한 조성물들
패시플로라 에둘리스의 추출물들은 유리하게 경구적 조성물들, 전형적으로 매일 패시플로라 에둘리스의 추출물 50 mg 내지 200 mg의 투여를 허용하는 조성물들 내로 도입될 수 있다.
1 / 연질 캡슐들의 형태로 항-선 자국들 조성물들
- 패시플로라 에둘리스의 추출물 30 mg
- 아와라 오일 60 mg
- 비-비누화물-강화 평지씨 오일 300 mg
- 그룹 B 비타민들 (B1, B2, B3, B5, B6, B9, B12) QS 내지 100% RDA
- 토코트리에놀들 QS 내지 50% RDA
- 비타민 E
- 벌왁스
- 콩 레시틴
- 영양 젤라틴
- 글리세린 QS 내지 1개 연질 캡슐
본 조성물은 매일 4개 내지 6개의 500 mg 캡슐들로서 투여된다.
2 / 항-탈모 정제들
- 패시플로라 에둘리스의 추출물 25 mg
- 황 아미노산들이 강화된 곡물들의
추출물 (옥수수, 메밀, 기장, 스펠트 밀) 200 mg
- 비타민 C QS 내지 50% RDA
- 생선 연골 글리코사미노글리칸들 200 mg
- 글루시덱스 IT 19 (압박 제제) QS 내지 1개의 800 mg 정제
본 조성물은 매일 5개 내지 8개의 정제들로서 투여된다.
3 / 슬리밍 분말 스틱들의 실시예들
- 패시플로라 에둘리스의 추출물 100 mg
- 폴리페놀-강화 차 추출물 100 mg
- OPC-강화 포도 추출물 50 mg
- 식물 베타-글루칸들 100 mg
- 잔탄검 1 mg
- 소듐 아스코르베이트 0.3 mg
- 말토덱스트린 QS 내지 5 g
본 조성물은 매일 두 번 투여된다.
- 패시플로라 에둘리스의 추출물 100 mg
- 센텔라 아시아티카 (Centella asiatica)의 추출물 100 mg
- 마그네슘, 셀레늄, 망간 QS 내지 100% RDA
- 잔탄검 1 mg
- 소듐 아스코르베이트 0.3 mg
- 말토덱스트린 QS 내지 5 g
본 조성물은 매일 두 번 투여된다.
4 / 초코렛 -향 곡물 스틱의 실시예
- 패시플로라 에둘리스의 추출물 200 mg
- 라이코펜 6 mg
- 아스타잔틴 4 mg
- 퓨코잔틴 4 mg
- 미세피막화된 형태의 루테인 4 mg
- 미세피막화된 토코트리에놀 QS 내지 100% RDA 비타민 A
- 다크 초코렛, 올리고과당, 당, 과당 시럽, 지방-감소된 코코아 분말, 분쇄된 곡물들, 분말화된 스킴 밀크, 아몬드들, 글리세롤, 소비톨, 채소 오일들, 포도당 시럽, 향료, 감미화된 농축된 우유, 콩 레시틴, 지방산 단일- 및 이중글리세라이드들, 카라멜화된 시럽, 말토덱스트린, 소금, 포타슘 소르베이트, 알파 토코페롤. QS 내지 50 g 스틱
본 조성물은 매일 한 번 투여된다.
5 / 바닐라-향 곡물 스틱의 실시예
- 패시플로라 에둘리스의 추출물 200 mg
- 황 아미노산들이 강화된 곡물들의
추출물 (옥수수, 메밀, 기장, 스펠트 밀) 200 mg
- 생선 연골 글리코사미노글리칸들 200 mg
- 폴리페놀-강화 녹차의 추출물 200 mg
- 올리고과당, 당, 과당 시럽, 분쇄된 곡물들, 분말화된 스킴 밀크, 아몬드들, 글리세롤, 소비톨, 채소 오일들, 포도당 시럽, 향료, 감미화된 농축된 우유, 콩 레시틴, 지방산 단일- 및 이중글리세라이드들, 카라멜화된 시럽, 말토덱스트린, 소금, 포타슘 소르베이트, 알파 토코페롤. QS 내지 50 g 스틱
본 조성물은 매일 한 번 투여된다.
6 / 프랄린 -향 우유 음료의 실시예
- 패시플로라 에둘리스의 추출물 200 mg
- 폴리페놀-강화 녹차의 추출물 100 mg
- 그룹 B 비타민들 (B1, B2, B3, B5, B6, B9, B12) QS 내지 100% RDA
- Zn, Mg, Se QS 내지 100% RDA
- 스킴 밀크 분말, 향료, 과당, 달걀 흰자, 헤이즐넛들, 당, 카라멜, 베타-카로틴, 잔탄검, 아스파탐, 포타슘 아세설팜, 콩 레시틴, 말토덱스트린
QS 내지 1개의 30 g 스틱
본 조성물은 매일 한 번 투여된다.
실시예 4: 본 발명에 따른 추출물의 생물학적 활성들의 테스트들
실시예 1의 시계꽃들의 펩타이드 및 당 추출물은 하기 실시예에서 시계꽃 가수분해물이라고 지칭된다.
A - 정상 인간 각질생성세포들 (NHK)에 미치는 활성들의 검색
시계꽃 가수분해물의 생물학적 활성들은 NHK 배양들 상에서 유전자 발현 조절의 테스트에 의해 평가되었다: 43,376개의 유전자 서열들을 포함하는 애질런트 전체 게놈 마이크로어레이 칩들 상의 발현 프로파일 연구.
a - 재료 및 방법
NHK는 24시간 동안 배양되었고 다음으로 시계꽃 가수분해물로 0.05% 건조 물질의 농도로 처리되었다. 각질형성세포들은 각각의 분석 시간대에 동일한 지속시간, 72 + 24시간 동안 배양되도록 교차하는 방식으로 (72시간, 24시간, 6시간) 처리된다.
선택된 유전자들의 발현은 정량적 RT-PCR에 의해 평가되었다.
처리된 시료들 대비 대조군의 강도 비율들 (Ri)은 각각의 유전자 및 각각의 처리 조건에 대하여 계산되었다.
b - 결과
유의한 것으로 고려되는 결과들은 Ri이 각각의 역학들의 대해 > 2이지만 두 가지의 연속 시간대에서 3 내지 6시간 또는 6 내지 24시간이기도 한 결과들이다.
항-세포사멸 효과, 시계꽃 가수분해물에 의한 GADD 패밀리의 전-세포사멸 유전자들인 전사인자 ATF3 자체 그리고 DDIT4, FANCE, IRS2 및 그의 표적 FOXO3과 같은 다른 스트레스-유도성 전-세포사멸 유전자들의 저해에 의해 발현됨.
세포 증식에 미치는 활성인자 효과, 사이클린 CCNB1, CCND1 및 사이클린-의존성 키나제 CDK1의 유전자들의 유도에 의함. 이러한 관찰은 DNA 복제 (RFC4, TIPIN), 세포분열 (CDCA7, CDCA8), 스프라이싱 (SF3A3, SRSF7), RNA 전사 (POP1) 및 단백질 번역 (WDR3, NOP56, MRTO4)과 같은 다양한 세포 활성화-관련된 기작들에 관여하는 유전자들의 유도에 의해 지지된다.
스테롤 생합성에 미치는 활성인자 효과, 각질층 및 이에 따라 표피 장벽에 미치는 단백질 분해 활성을 제시함. 이것은 다음의 유전자들의 활성화에 의해 일어난다: ACAT1, ACAT2, HMGCS1, HMGCR, MVD, FDPS, FDFT1, SQLE, LSS, MSMO1/SC4MOL, DHCR, EBP, DHCR7, LIPA 및 SOAT1.
항산화 기작들에 미치는 활성인자 효과, 금속 티오네인들 MT1A, MT1B, MT1E, MT1F, MT1G, MT1H, MT1L, MT1M, MT1X, MT2A의 유도, 글루타치온: GSTA4, GSTM3, MGST2, GPX1, GPX2, GPX8, GSS, PRDX1 또는 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 SOD1의 생합성에 관여하는 다수 효소들의 유전자들의 자극, 그리고 항산화 반응 요소 (ARE) 및 저산소 반응 요소 (HRE) 모티브들과 그들의 결합에 의해 산화적 스트레스 반응에 중요한 인자들인 MAFB, ATF3 및 JUN에 의해 인코딩되는 다수의 전사인자들의 유전자들의 자극에 의해 일어남.
B - 정상 인간 섬유모세포들 ( NHF )에 미치는 활성들의 검색
시계꽃 가수분해물의 생물학적 활성들은 NHF 배양들 상에서 유전자 발현의 조절의 테스트에 의해 평가되었다. 이에 따라, 배양 배지에서 시계꽃 가수분해물의 존재 시 피부 수화, 항산화 반응 또는 멜라닌세포들에 의한 색소 침착과 직접적으로 대비하여, 진피의 생물학, 연결 조직들의 재생 및 노화에 관여하는 46개의 유전자들, 및 장벽 기능과 같은 표피의 핵심 기능들에 관여하는 46개의 유전자들의 발현이 qRT-PCR에 의해 연구되었다.
a - 재료 및 방법
시계꽃 가수분해물은 배양 배지에 희석되었다. NHF 배양액들은 0.01% 및 0.05% 시계꽃 가수분해물 (및 대조군 분자인 TGFβ1)로 24시간 동안 처리되었다. 적용의 결론에서, 유전자 발현의 차이들은 qRT-PCR에 의해 분석되었다. 시계꽃 가수분해물에 의해 유도된 유전자 발현에서 변화들은 미처리된 배양에 해당하는 조건과 대비하여 상대적 정량 (RQ)으로서 표현된다 (RQ > 1인 경우라면: 유전자 발현의 자극, 또한 RQ < 1 경우라면: 유전자 발현의 저해).
b - 결과
항산화 기작에 미치는 활성인자 효과
0.01% 시계꽃 가수분해물은 그의 항산화력이 알려진 미토콘드리아 효소인 MSRA (미토콘드리아 펩타이드 메티오닌 설폭사이드 환원효소 A)에 대한 유전자 발현을 유도한다.
유사하게, 0.05% 시계꽃 가수분해물은 슈퍼옥사이드 디스뮤타제와 동일한 활성을 가지는 항산화 효소인 NQO1 (NAD(H) 탈수소화제 퀴논 1)에 대한 유전자의 발현을 유도한다.
MSQRA 및 NQO1를 증가시켜서, 시계꽃 가수분해물은 인간 진피의 섬유모세포들이 세포 노화 및 이에 따른 피부 노화를 부여하는 산화적 손상에 대한 더 큰 저항성을 가지도록 한다.
세포외 기질에 미치는 화합물들의 효과
0.01% 및 0.05% 시계꽃 가수분해물은 조직 결합에 결정적인 역할을 담당하는 막통과 프로테오글리칸이 되는 신데칸 1을 인코딩하는 SDC1 유전자의 발현을 유도한다.
0.01%
시계꽃 가수분해물		 0.05%
시계꽃 가수분해물
테스트 유전자 명칭 RQ p-값 RQ p-값
MSRA-Hs00737165_m1 미토콘드리아 펩타이드
메티오닌 설폭사이드
환원효소 A		 1.8542 0.0465
SDC1-Hs00896424_g1 신데칸-1 1.5042 0.0491 1.5667 0.0388
NQO1-Hs00168547_m1 NAD(H) 탈수소화효소
퀴논 1		 2.0835 0.0414
C - 멜라닌화된 재생된 피부에 미치는 활성들의 검색
시계꽃 가수분해물의 생물학적 활성들은 멜라닌화된 재생된 피부 상에서 유전자 발현의 조절의 테스트에 의해 평가되었다. 이에 따라, 배양 배지에서 시계꽃 가수분해물의 존재 시 피부 수화, 항산화 반응 또는 멜라닌세포들에 의한 색소 침착과 직접 대비하여, 진피의 생물학, 연결 조직들의 재생 및 노화에 관여하는 46개의 유전자들, 및 장벽 기능과 같은 표피의 핵심 기능들에 관여하는 46개의 유전자들의 발현이 qRT-PCR에 의해 연구되었다.
a - 재료 및 방법
시계꽃 가수분해물은 배양 배지에 희석되었다. 피부 시료들은 0.01% 및 0.05% 시계꽃 가수분해물 (및 대조군 분자인 TGFβ1)로 24시간 동안 처리되었다. 적용의 결론에서, 유전자 발현의 차이들은 qRT-PCR에 의해 분석되었다. 시계꽃 가수분해물에 의해 유도된 유전자 발현에서 변화들은 미처리된 배양에 해당하는 조건과 대비하여 상대적 정량 (RQ)으로서 표현된다 (RQ > 1인 경우라면: 유전자 발현의 자극, 또한 RQ < 1 경우라면: 유전자 발현의 저해).
b - 결과
진피/표피 결합에 관여하는 유전자들에 미치는 효과
0.05% 시계꽃 가수분해물은 라미닌 C2를 인코딩하는 유전자인 LAMC2의 발현을 유도하고; 이에 따라 시계꽃 가수분해물은 진피-표피 연결부를 강화시키도록 돕고 따라서 피부의 단단함을 촉진할 수 있다.
피부의 장벽 기능에 관여하는 유전자들에 미치는 효과
0.05% 시계꽃 가수분해물은 각질세포 개시 및 성숙에 관여하여 피부의 장벽 기능에서 필수적인 역할을 담당하는 각질 외투의 구조 단백질인 인보루크린 (IVL)을 인코딩하는 유전자의 발현을 유도한다. 또한 수화 및 장벽 기능에도 역시 관여하는 필라그린 (FLG)에 대한 유전자의 발현도 자극한다.
다른 유전자들에 미치는 효과
시계꽃 가수분해물은 멜라닌생성 공정에 관여하는 MC1R, 염증 반응에 관여하는 PTGS2, 및 항-세포사멸 인자 및 줄기세포 마커인 BIRC5의 발현을 감소시킨다.
0.01%
시계꽃 가수분해물		 0.05%
시계꽃 가수분해물
테스트 유전자 명칭 RQ p-값 RQ p-값
LACMC2-Hs01043711_m1 라미닌 소단위체 감마-2 2.7769 0.026
IVL-Hs00846307_s1 인볼루크린 1.4151 0.0048
MC1R-Hs00267167_s1 멜라닌세포-자극 호르몬 수용체 0.7131 0.0194
PTGS2-Hs01573476_g1 프로스타글란딘 G/H 합성효소 2 0.5185 0.0438
BIRC5-Hs00977611_g1 배큘로바이러스 IAP
반복서열-포함 단백질 5
(서비빈)		 0.5122 0.0007
NTRK2-Hs01093103_m1 BDNF/NT-3 성장인자
수용체		 0.1707 0.0359
FLG-Hs00863478_g1 필라그린 0.7257 0.01555
D. 인간 지방 조직의 지질분해에 미치는 효과
인간 흰색 지방 조직은 지방세포 지질분해 공정에 의해 방출되는 지방산들의 형태로 유기체 에너지 분자들을 다른 조직들에 제공하여 기본적인 대사 기능을 수행한다. 지방세포는 지방산들 및 글리세롤에 저장된 삼중글리세라이드들의 가수분해에 의해 그의 에너지 보유원들을 가동시킨다. 이에 따라 혈액에서 방출되는 지방산들은 다른 조직들에 의해 에너지원으로서 사용될 수 있다.
시계꽃 가수분해물의 지방세포 지질분해에 미치는 효과는 삼차원 시스템에서 배양된 성숙한 인간 지방세포들에 저장된 삼중글리세라이드들의 가수분해 동안 방출된 글리세롤의 검정에 의해 평가되었다.
a - 재료 및 방법
4명의 정상-체중 또는 과체중 여성 공여자들로부터 얻은 피하 지방 조직의 생검들로부터 분리된 성숙한 지방세포들이 시계꽃 가수분해물의 존재 시 37℃에서 4시간 동안 배양되었다. 방출된 글리세롤은 비색측정 방법을 사용하여 검정되었고, 획득된 수치들은 DNA의 양으로 정상화되었다. 결과들은 분산의 원-웨이 분석에 의해 통계학적으로 비교되었고 이후 듀네트 테스트로 이어졌다.
b - 결과
결과들은 다음의 표에서 제시된다.
글리세롤
(정상화된 데이타; 평균±SD)
대조군 1.00 ± 0.0
시계꽃 가수분해물 0.005% 1.69 ± 0.23 p<0.05
0.005% 시계꽃 가수분해물은 글리세롤 방출을 유의하게 자극하였고, 지방세포 지질분해에 미치는 활성인자 효과를 보여주었다.
E - 항- 티로시나제 활성
티로시나제는 멜라닌 합성에서 핵심 효소이다. 이러한 효소의 특이적 저해제들은 멜라닌 합성의 저해를 유도하고 이에 따라 탈색화 효과들을 유발할 수 있다.
시계꽃 가수분해물의 효과는 인간 멜라닌 세포들로부터 추출된 티로시나제의 활성에 관해 평가되었다 (무-세포 테스트).
a - 재료 및 방법
시계꽃 가수분해물 및 테스트 표준 (코지산)이 효소적 추출물 (티로시나제)로 다함께 수집되었고 얼음 위에서 10분 동안 배양되었다. 배양의 결론에서, 기질 L-DOPA (2 mM)가 첨가되었고 시료들은 37℃에서 1시간 동안 배양되었다. 효소적 활성은 비색측정법 (540 nm에서 광학 밀도의 해독)에 의해 평가되었다. 결과들은 티로시나제 활성의 백분율로서 표현되었고 스튜던트 t-테스트를 사용하여 통계학적으로 비교되었다.
b - 결과
결과들은 다음의 표에서 제시된다.
티로시나제 활성
(대조군%)		 p IC50
대조군 100 - -
0.0625　mM 코지산 95 NS 0.76　mM
0.125　mM 코지산 93 NS
0.25　mM 코지산 88 p<0.05
0.5　mM 코지산 66 p<0.001
1　mM 코지산 36 p<0.001
0.005% 시계꽃 가수분해물 101 NS 0.16%
0.01% 시계꽃 가수분해물 97 NS
0.05% 시계꽃 가수분해물 83 p<0.05
0.1% 시계꽃 가수분해물 70 p<0.01
0.5% 시계꽃 가수분해물 0 p<0.001
1% 시계꽃 가수분해물 -3 p<0.001
시계꽃 가수분해물은 명확한 농도-의존적인 방식으로 티로시나제의 효소적 활성을 저해하였다 (IC50 = 0.16%).
F. 산화적 스트레스에 대한 보호작용
산화적 스트레스는 내인성으로 또는 외인성으로 (담배 사용, 환경적 오염, UV 조사) 유도되는지 상관없이, 많은 피부 장애들을 부여한다. 따라서, 자유 라디칼들의 생산을 통하여 산화적 스트레스는 피부 세포들의 다양한 성분들을 변경시킬 수 있다: 단백질, 지질들, 핵 및 미토콘드리아 DNA. 시계꽃 가수분해물의 항산화 효과는 먼저 자유 라디칼들의 생산을 조정하는 그의 능력, 그리고 두 번째로 산화적 스트레스에 취약한 세포들에서 지질들의 과산화에 대한 그의 보호 효과를 평가하여 입증되었다.
1. 각질형성세포들에서 반응성 산소종의 생산에 미치는 효과
각질형성세포들에서 과산화수소 (H2O2)에 의해 생성된 산화적 스트레스 상의 시계꽃 가수분해물의 항산화 작용은 생산된 반응성 산소종의 양을 측정하여 평가되었다. 이러한 테스트는 반응성 산소종 (ROS)과 접촉 시 분해되어 형광을 내는 프로브 (DCFH-DA)의 사용을 기초로 한다. 방출된 형광은 이에 따라 산화적 스트레스에 반응하여 세포에 의해 생산되는 ROS의 양과 비례할 것이다.
a - 재료 및 방법
정상 인간 각질형성세포들은 시계꽃 가수분해물 또는 기준 분자들: 10 μM 퀘르세틴 또는 500 μM 비타민 C의 존재 시 24시간 동안 전배양되었다. 다음으로 세포들은 프로브 DCFH-DA의 존재 시 1시간 동안 배양되었고, 다음으로 100 μM H2O2로 여전히 시계꽃 가수분해물 및 기준 분자들의 존재 시 20분 동안 처리되었다. ROS 검정법이 방출된 형광을 측정하여 수행되었다. 결과들은 비슷하게 수행된 중성 레드 흡수 검정법을 사용하여 결정된 생존 세포들의 양으로 정상화되었다. 방출된 ROS의 양은 이에 따라 중성 레드 검정법 (OD540)으로부터 결과를 얻은 형광 밀도 (DFU)/광학 밀도로서 표현된다. 결과들은 터키 테스트로 이어지는 분산의 원-웨이 분석에 의해 통계학적으로 분석되었다.
b - 결과
결과들은 다음의 표에서 제시된다.
ROS 양
DFU/OD540
(평균 ± 표준편차)		 대조군
대비한 증가		 H2O2 대조군
대비한 저해
대조군 62132.821 ± 10278.568
H2O2 대조군 (스트레스) 287593.309 ± 45380.022 +363% p<0.001
퀘르세틴 (기준) 84549.570 ± 9476.724 -71% p<0.001
비타민 C (기준) 35997.820 ± 10389.067 -87% p<0.001
0.01% 시계꽃 가수분해물 98585.727 ± 7972.591 -66% p<0.001
0.05% 시계꽃 가수분해물 56063.620 ± 3540.141 -81% p<0.001
0.1% 시계꽃 가수분해물 45893.532 ± 3120.083 -84% p<0.001
시계꽃 가수분해물은 강력하게 또한 매우 유의한 방식으로 H2O2 스트레스에 의해 유도된 ROS의 생산을 저해하였다.
2. 지질 과산화에 미치는 보호 효과
시계꽃 가수분해물의 지질 과산화에 미치는 보호 효과는 UV-조사된 Jurkat 세포들에서 평가되었다.
a - 재료 및 방법
Jurkat 세포들은 시계꽃 가수분해물 또는 기준 (50　μM BHT)의 존재 또는 부재 시 그리고 지질 과산화물들 (C11-불소)의 측정에 특이적인 형광 프로브의 존재 시 45분 동안 배양되었다. 이러한 형광 프로브는 막 내로 통합되고 형광 강도가 과산화될 때 감소하는 지질 유사체이다. 다음으로 세포들은 시계꽃 가수분해물 또는 기준의 존재 시 UV (UVB 240　mJ/cm2 + UVA 3.5　J/cm2)에 의해 조사되었다. 방사선 조사의 결론에서, 세포들은 유동 세포측정법에 의해 분석되기 이전에 37℃에서 30분 동안 배양되었다. 획득된 형광 강도 결과들은 방사선 조사된 대조군의 %로서 표현되었다.
b - 결과
결과들은 다음의 표에서 제시된다.
지질 과산화물의 양
(방사선 조사된 대조군%)		 보호작용
(%)
대조군 (방사선 미조사) 46 100
조사된 (UV) 대조군 100 0
UV + BHT 83 31
UV + 0.05% 시계꽃 가수분해물 87 24
0.05% 시계꽃 가수분해물은 UV 조사에 의해 유도된 지질 과산화로부터 세포들을 보호한다 (24% 보호작용).

Claims (18)

  1. 활성 제제로서 시계꽃 종자들, 상세하게 패시플로라 인카르나타 (Passiflora incarnata) 종자들 또는 패시플로라 에둘리스 (Passiflora edulis) 종자들, 유리하게는 패시플로라 에둘리스 종자들의 펩타이드 및 당 추출물, 그리고 필요한 경우라면 적합한 부형제를 포함하는 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 펩타이드 및 당 추출물은 효소적 가수분해에 의해, 유리하게는 적어도 하나의 단백질 분해효소 및 적어도 하나의 탄수화물 분해효소의 존재 시 획득되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
    상기 펩타이드 및 당 추출물에서 펩타이드들은 3,500 Da 이하의 크기를 가지는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 펩타이드 및 당 추출물에서 펩타이드들/당들의 무게 비율은 0.75 이상이고, 바람직하게는 1 및 2 사이 범위인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 펩타이드 및 당 추출물은 무게로 20% 내지 70%, 유리하게 30% 내지 65%, 전형적으로 55%의 펩타이드들을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  6. 제 4항에 있어서,
    상기 펩타이드 및 당 추출물은 무게로 20% 내지 60%, 유리하게 30% 내지 55%, 전형적으로 40%의 당들을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  7. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서,
    무게로 0.001% 내지 10%, 유리하게 0.01% 내지 5%의 시계꽃 종자들의 펩타이드 및 당 추출물을 포함하는 조성물로서, 상기 추출물의 무게는 건조 추출물에서 조성물의 전체 무게와 대비하여 표현되는, 조성물.
  8. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 시계꽃 종자들의 펩타이드 및 당 추출물에 추가하여 또 다른 활성 제제를 더 포함하고, 상기 또 다른 활성 제제는 유리하게
    - 연화제들, 습윤화 활성 제제들, 케라틴-합성 활성인자들, 각질조절인자들, 각질분해제들, 피부 장벽을 재생하는 제제들 (피부 지질들의 합성의 활성인자들), 퍼옥시좀 증식인자-활성화된 수용체 (PPAR) 작동제들, RXR 또는 LXR 작동제들, 피지-조절화 제제들, 항-자극 제제들, 진정화 제제들, 항-염증 제제들, 항산화제들 및 항-노화 제제들, 탈색화 또는 저탈색화 제제들, 색소침착 제제들, 지질분해 제제들 또는 지질생성 저해제들 또는 항-셀룰라이드 또는 환원화 제제들, 무기 또는 유기 선 필터들 및 차단제들, 항진균 화합물들, 보존제들, 항세균 제제들, 프리바이오틱스들 및 프로바이오틱스들, 항생제들, 면역조절인자들;
    - 식물 추출물들; 및
    - 옥사졸린들:
    로부터 선택되는, 조성물.
  9. 시계꽃 종자들, 상세하게 패시플로라 인카르나타 종자들 또는 패시플로라 에 둘리스 종자들, 유리하게는 패시플로라 에둘리스 종자들의 펩타이드 및 당 추출물을 제조하는 방법으로서, 적어도 하나의 효소적 가수분해 단계를 포함하는 방법.
  10. 제 9항에 있어서,
    상기 방법은 다음의 연속적인 단계들
    a) 마쇄된 종자들의 수용성 상에서 분산, 다음으로
    b) 유리하게 적어도 하나의 단백질 분해효소 및 적어도 하나의 탄수화물 분해효소를 첨가하여 단계 a)에서 획득된 수용성 분산액의 효소적 처리, 다음으로
    c) 필요한 경우라면, 효소들을 변형시키도록 열 처리, 및
    d) 단계 b) 또는 c)의 결론에서 펩타이드 및 당 추출물의 수집:
    을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
  11. 제 10항에 있어서,
    상기 효소적 처리는 유리하게 펙티나제들, 셀룰라제들, 아라바나제들, 헤미셀룰라제들, 자일라나제들 및 β-글루카나제들로부터 선택되는 탄수화물 분해효소를 첨가하는 단계 b1) 및 단백질 분해효소를 첨가하는 단계 b2)를 연속적으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
  12. 제 10항 또는 제 11항에 있어서,
    단계 a) 이전에 종자들은 탈지되는 것을 특징으로 하는, 방법.
  13. 제 10항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 단계들 b) 또는 필요한 경우라면 c) 및 d) 사이에 선택적으로 초여과, 투과여과 또는 나노여과로 이어지는 여과 또는 원심분리의 추가적인 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
  14. 제 13항에 있어서,
    상기 방법은 15 kDa 초여과의 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
  15. 제 9항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 획득될 수 있는, 시계꽃 종자들, 상세하게 패시플로라 인카르나타 종자들 또는 패시플로라 에둘리스 종자들, 유리하게는 패시플로라 에둘리스 종자들의 펩타이드 및 당 추출물로서, 무게로 10% 내지 90%의 펩타이드들 및 무게로 10% 내지 90%의 당들을 포함하는, 추출물.
  16. 제 15항에 있어서,
    무게로 20% 내지 70%, 유리하게 30% 내지 65%, 전형적으로 55%의 펩타이드들 및 무게로 20% 내지 60%, 유리하게 30% 내지 55%, 전형적으로 40%의 당들을 포함하는, 추출물.
  17. 다음을 예방하고/하거나 치료하는 데 사용하는
    - 피부 및/또는 점막성 막들 및/또는 피부 부속물들의 장애들 또는 병리학적 병태들,
    - 혈관성 장애들,
    - 지방 조직 변형들,
    - 산화적 스트레스:
    제 15항 또는 제 16항에 따른 추출물 또는 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 조성물.
  18. 피부 및/또는 피부 부속물들 및/또는 점막성 막들의 미용적 관리 방법으로서, 그들의 병태 및/또는 외양을 개선하는 관점에서 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따라 정의된 바와 같은 미용적 조성물 또는 제 16항 또는 제 17항에 따라 정의된 바와 같은 추출물을 투여하는 단계로 이루어지는, 방법.
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