JP2002212080A - 抗血栓形成剤としてのアデノシン - Google Patents
抗血栓形成剤としてのアデノシンInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 抗血栓形成剤としてのアデノシンの使用を提
供すること。 【解決手段】本発明はアデノシンと血小板膜受容体蛋白
質ｇｐIIｂ／IIIａの特異性結合を開示し、これに基づ
いて、血小板凝集および血栓形成の抑制として用いられ
るアデノシンの抗血栓形成剤としての使用を開示する。
供すること。 【解決手段】本発明はアデノシンと血小板膜受容体蛋白
質ｇｐIIｂ／IIIａの特異性結合を開示し、これに基づ
いて、血小板凝集および血栓形成の抑制として用いられ
るアデノシンの抗血栓形成剤としての使用を開示する。
Description
【０００１】
【関連出願の表示】本出願は台湾出願番号第８９１２６
４８４号（２０００年１２月１２日出願）の部分的連続
出願を基礎出願とするものである。
４８４号（２０００年１２月１２日出願）の部分的連続
出願を基礎出願とするものである。
【０００２】
【技術分野】本発明はアデノシンを、血小板膜受容体蛋
白質ｇｐIIｂ／IIIａの拮抗剤として血小板凝集及び血
栓形成抑制に用いる新規用途に関するものである。
白質ｇｐIIｂ／IIIａの拮抗剤として血小板凝集及び血
栓形成抑制に用いる新規用途に関するものである。
【０００３】
【背景技術】多くの血栓塞栓疾病は、アテローム性動脈
硬化と動脈硬化、急性心筋梗塞、狭心症、一時性虚血発
作、末梢血管疾病、動脈血栓形成、子癇前症、塞栓及び
頚動脈内膜切除術を含み、血管中の血塊また血栓の形成
が関与していると考えられている。血小板の凝集は血栓
形成にて重要な役割をはたしており、血小板の凝集にお
いては、フィブリノーゲンとその他の血清蛋白が、血小
板血漿膜での血小板膜受容体蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと
の結合に関与していることが知られている。血小板がア
ゴニスト（例えばトロンビン）によって活性化された
時、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａとの結合部位がフィブリノ
ーゲンの作用を受けて、その他の血清蛋白と結合し、血
小板凝集を引き起し、血栓が形成される。従ってフィブ
リノーゲンとその他の血清蛋白質が、蛋白質ｇｐIIｂ／
IIIａとの結合を抑制できるかどうかが血栓形成を予防
する一つの重要な要件となる。
硬化と動脈硬化、急性心筋梗塞、狭心症、一時性虚血発
作、末梢血管疾病、動脈血栓形成、子癇前症、塞栓及び
頚動脈内膜切除術を含み、血管中の血塊また血栓の形成
が関与していると考えられている。血小板の凝集は血栓
形成にて重要な役割をはたしており、血小板の凝集にお
いては、フィブリノーゲンとその他の血清蛋白が、血小
板血漿膜での血小板膜受容体蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと
の結合に関与していることが知られている。血小板がア
ゴニスト（例えばトロンビン）によって活性化された
時、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａとの結合部位がフィブリノ
ーゲンの作用を受けて、その他の血清蛋白と結合し、血
小板凝集を引き起し、血栓が形成される。従ってフィブ
リノーゲンとその他の血清蛋白質が、蛋白質ｇｐIIｂ／
IIIａとの結合を抑制できるかどうかが血栓形成を予防
する一つの重要な要件となる。
【０００４】従って、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ拮抗剤の
開発が、血小板凝集及び血栓形成の抑制のために望まれ
ており、期待される解決の方式ともいえる。業界では、
いずれのアゴニストに対してすべて血小板の活性化及び
凝集を抑制できるような、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａに対
して特異性のある抗血小板凝集剤の開発が望まれてい
る。
開発が、血小板凝集及び血栓形成の抑制のために望まれ
ており、期待される解決の方式ともいえる。業界では、
いずれのアゴニストに対してすべて血小板の活性化及び
凝集を抑制できるような、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａに対
して特異性のある抗血小板凝集剤の開発が望まれてい
る。
【０００５】現在までに既に使用されている血小板凝集
及び血栓形成予防のための各種異なる製品または化合物
は、例えばアスピリンを抗アラキドン酸として、チクロ
ピジン（ｔｉｃｌｏｐｉｄｉｎｅ）を抗アデノシン二燐
酸（ＡＤＰ）として、ヒルジンをアンチトロンビンとし
て、さらにトロンボキサンＡ２シンターゼ抑制剤または
受容体拮抗剤をトロンボキサンＡ２シンターゼ阻害剤と
して使用するものが知られている。しかし、これら製剤
または化合物は、フィブリノーゲンとその他の血清蛋白
質ｇｐIIｂ／IIIａとの結合を特異的に抑制できないば
かりか、その後に出血などの重篤な副作用を引き起す恐
れがある。
及び血栓形成予防のための各種異なる製品または化合物
は、例えばアスピリンを抗アラキドン酸として、チクロ
ピジン（ｔｉｃｌｏｐｉｄｉｎｅ）を抗アデノシン二燐
酸（ＡＤＰ）として、ヒルジンをアンチトロンビンとし
て、さらにトロンボキサンＡ２シンターゼ抑制剤または
受容体拮抗剤をトロンボキサンＡ２シンターゼ阻害剤と
して使用するものが知られている。しかし、これら製剤
または化合物は、フィブリノーゲンとその他の血清蛋白
質ｇｐIIｂ／IIIａとの結合を特異的に抑制できないば
かりか、その後に出血などの重篤な副作用を引き起す恐
れがある。
【０００６】ＵＳＰ６，１３７，００２，ＵＳＰ６，０
２０，３６２，ＵＳＰ５，７３１，３２４及びＵＳＰ
５，６１８，８４３には、二つの縮合の６員環で形成さ
れたビシクロ化合物が、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａの拮抗
剤として血小板凝集抑制に用いられることが開示されて
いる。
２０，３６２，ＵＳＰ５，７３１，３２４及びＵＳＰ
５，６１８，８４３には、二つの縮合の６員環で形成さ
れたビシクロ化合物が、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａの拮抗
剤として血小板凝集抑制に用いられることが開示されて
いる。
【０００７】ＵＳＰ６，０１７，８７７，ＵＳＰ６，０
１３，２５，ＵＳＰ５，８５８，９７２，ＵＳＰ５，７
８０，３０３，ＵＳＰ５，６７２，５８５，及びＵＳＰ
５，６１２，３１１には、ある蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ
に対して高特異性を有する環状ペプチドが開示され、血
小板凝集と血栓形成抑制の治療に用いられることが記載
されている。
１３，２５，ＵＳＰ５，８５８，９７２，ＵＳＰ５，７
８０，３０３，ＵＳＰ５，６７２，５８５，及びＵＳＰ
５，６１２，３１１には、ある蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ
に対して高特異性を有する環状ペプチドが開示され、血
小板凝集と血栓形成抑制の治療に用いられることが記載
されている。
【０００８】また、ＵＳＰ５，８４９，６９３，ＵＳＰ
５，８１７，７４９，ＵＳＰ５，６６８，１５９及びＵ
ＳＰ５，６３５，４７７には、あるヘテロ環系で連結さ
れた環状化合物が、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ拮抗剤とし
て血栓形成の治療に用いられることが開示されている。
５，８１７，７４９，ＵＳＰ５，６６８，１５９及びＵ
ＳＰ５，６３５，４７７には、あるヘテロ環系で連結さ
れた環状化合物が、蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ拮抗剤とし
て血栓形成の治療に用いられることが開示されている。
【０００９】また、ＵＳＰ５，０５３，３９３には、Ｎ
―[８―[（アミノイミノメチル）アミノ]―１―オキソ
オクチル]―Ｎ−Ｌ―α―アスパルチル−Ｌ―フェニル
アラニンが血小板凝集抑制に有効な化合物であることが
開示されている。
―[８―[（アミノイミノメチル）アミノ]―１―オキソ
オクチル]―Ｎ−Ｌ―α―アスパルチル−Ｌ―フェニル
アラニンが血小板凝集抑制に有効な化合物であることが
開示されている。
【００１０】また、ＵＳＰ４，８７９，３１３には、あ
るペプチド様の化合物が血小板凝集抑制及び血栓形成の
治療に用いられることが開示されている。
るペプチド様の化合物が血小板凝集抑制及び血栓形成の
治療に用いられることが開示されている。
【００１１】ＵＳＰ５，９５１，９８１には、あるフィ
ブロラーゼ（ｆｉｂｒｏｌａｓｅ）と特定の結合ペプチ
ドとを化学架橋して成る共役化合物が、血栓阻害活性を
有することが開示されている。
ブロラーゼ（ｆｉｂｒｏｌａｓｅ）と特定の結合ペプチ
ドとを化学架橋して成る共役化合物が、血栓阻害活性を
有することが開示されている。
【００１２】ＵＳＰ５，７８０，５９０には、抗血栓形
成剤の化合物として、Ｎ―[Ｎ―[Ｎ―[（４―ピペリジ
ン−４―イル）ブタノイル]―Ｎ―エチルグリシル]―
（Ｌ）―アスパルチル] ―（Ｌ）―（β）―シクロヘキ
シルーアラニンアミドが開示されている。
成剤の化合物として、Ｎ―[Ｎ―[Ｎ―[（４―ピペリジ
ン−４―イル）ブタノイル]―Ｎ―エチルグリシル]―
（Ｌ）―アスパルチル] ―（Ｌ）―（β）―シクロヘキ
シルーアラニンアミドが開示されている。
【００１３】さらに、ＵＳＰ５，６８１，８２３には、
抗血栓形成剤の化合物としてｐ１，ｐ４―ジチオー
ｐ２，ｐ３―モノクロロメチレン５´，５"−ジアデノ
シンｐ１，ｐ４―テトラホスフェートが開示されてい
る。
抗血栓形成剤の化合物としてｐ１，ｐ４―ジチオー
ｐ２，ｐ３―モノクロロメチレン５´，５"−ジアデノ
シンｐ１，ｐ４―テトラホスフェートが開示されてい
る。
【００１４】本発明者は、高密度グリディング技術（hi
gh-density gridding technology）を用いて、紅花（Ca
rthamus tinctorius Ｌ）の抽出分画液から蛋白質ｇｐI
Iｂ／IIIａに特異的に結合する活性成分をスクリーニン
グし、意外にもある小分子化合物を発見し、さらに同定
した結果、これはアデノシンであることが判明した。加
えて、これは蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと強く結合するこ
とによって、血小板凝集及び血栓形成を抑制することが
できることが分った。既知の化合物、特にＡＤＰが血小
板の内因性アゴニストを活性化できる事実と対照した場
合、アデノシンが血小板凝集及び血栓形成を抑制するこ
とは非自明性のものであるとの知見に達した。したがっ
て、本発明は、アデノシンが抗血栓形成剤として有効で
あることを開示する。
gh-density gridding technology）を用いて、紅花（Ca
rthamus tinctorius Ｌ）の抽出分画液から蛋白質ｇｐI
Iｂ／IIIａに特異的に結合する活性成分をスクリーニン
グし、意外にもある小分子化合物を発見し、さらに同定
した結果、これはアデノシンであることが判明した。加
えて、これは蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと強く結合するこ
とによって、血小板凝集及び血栓形成を抑制することが
できることが分った。既知の化合物、特にＡＤＰが血小
板の内因性アゴニストを活性化できる事実と対照した場
合、アデノシンが血小板凝集及び血栓形成を抑制するこ
とは非自明性のものであるとの知見に達した。したがっ
て、本発明は、アデノシンが抗血栓形成剤として有効で
あることを開示する。
【００１５】アデノシンは既知の化合物であり、いまま
では抗不整脈剤として用いられ、同時にその誘導体は抗
腫瘍剤として用いられることが知られている。しかし、
アデノシンが特異的に蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａに結合
し、血栓性塞栓疾患の治療用途に用いられることについ
ては、いままでの先行技術、文献では開示されたことも
ないし、示唆もされていない。
では抗不整脈剤として用いられ、同時にその誘導体は抗
腫瘍剤として用いられることが知られている。しかし、
アデノシンが特異的に蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａに結合
し、血栓性塞栓疾患の治療用途に用いられることについ
ては、いままでの先行技術、文献では開示されたことも
ないし、示唆もされていない。
【００１６】従って、本発明はアデノシンの血小板凝集
及び血栓形成抑制での新規治療用途または適応症を発見
し、本発明の完成に致ったものである。
及び血栓形成抑制での新規治療用途または適応症を発見
し、本発明の完成に致ったものである。
【００１７】
【発明の開示】本発明は、高密度グリッディング技術を
用いた、紅花の抽出分取液から蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ
と特異的に結合する活性化成分のスクリーニングに関す
る。
用いた、紅花の抽出分取液から蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ
と特異的に結合する活性化成分のスクリーニングに関す
る。
【００１８】又、本発明は、アデノシンを、蛋白質ｇｐ
IIｂ／IIIａの拮抗剤として、血小板凝集及び血栓形成
抑制に使用する新規用途に関する。
IIｂ／IIIａの拮抗剤として、血小板凝集及び血栓形成
抑制に使用する新規用途に関する。
【００１９】本発明はさらに、血小板凝集及血小板形成
を抑制する方法として、哺乳動物の体内に有効量のアデ
ノシンを投与することに関する。
を抑制する方法として、哺乳動物の体内に有効量のアデ
ノシンを投与することに関する。
【００２０】また、本発明は血栓性塞栓疾患の予防及び
治療方法として、哺乳動物の体内に有効量のアデノシン
を投与する方法であって、その血栓性塞栓疾患 は、ア
テローム性動脈硬 化と動脈硬化、急性心筋梗塞、狭心
症、一時性虚血発作、末梢血管疾病、動脈血栓形成、子
癇前症、塞栓及び頚動脈内膜切除術等を含むものである
方法に関する。
治療方法として、哺乳動物の体内に有効量のアデノシン
を投与する方法であって、その血栓性塞栓疾患 は、ア
テローム性動脈硬 化と動脈硬化、急性心筋梗塞、狭心
症、一時性虚血発作、末梢血管疾病、動脈血栓形成、子
癇前症、塞栓及び頚動脈内膜切除術等を含むものである
方法に関する。
【００２１】本発明はさらに、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ）でサンプル中の蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａとアデノシ
ンを接触 させて、サンプル中における蛋白質ｇｐIIｂ
／IIIａの存在の有無を検出する方法に関する。
ｏ）でサンプル中の蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａとアデノシ
ンを接触 させて、サンプル中における蛋白質ｇｐIIｂ
／IIIａの存在の有無を検出する方法に関する。
【００２２】本発明はさらに、有効量のアデノシン及び
製薬上許容しうる担体または希釈剤を含み、哺乳動物の
血栓性塞栓疾患 に用いられる薬品組成物であって 、該
血栓性塞栓疾患 がアテローム性動脈硬化と動脈硬化、
心筋梗塞、狭心症、一時性虚血発作、末梢血管疾病、動
脈血栓形成、子癇前症、塞栓及び筋動脈内膜切除術等を
含むものである薬品組成物に関する。さらに、本発明は
アデノシンを含有する第１容器、及び製薬上許容される
担体または希釈剤を含む第２容器をを備えた、哺乳動物
の血小板凝集及血栓形成抑制に用いられるキットに関す
る。
製薬上許容しうる担体または希釈剤を含み、哺乳動物の
血栓性塞栓疾患 に用いられる薬品組成物であって 、該
血栓性塞栓疾患 がアテローム性動脈硬化と動脈硬化、
心筋梗塞、狭心症、一時性虚血発作、末梢血管疾病、動
脈血栓形成、子癇前症、塞栓及び筋動脈内膜切除術等を
含むものである薬品組成物に関する。さらに、本発明は
アデノシンを含有する第１容器、及び製薬上許容される
担体または希釈剤を含む第２容器をを備えた、哺乳動物
の血小板凝集及血栓形成抑制に用いられるキットに関す
る。
【００２３】
【発明の詳細な記述】本発明はアデノシンを血小板膜受
容体蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ拮抗剤として、血小板凝集
及び血栓形成抑制の新規用途に関するものである。
容体蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ拮抗剤として、血小板凝集
及び血栓形成抑制の新規用途に関するものである。
【００２４】本発明者は、高密度グリッディング技術に
より、紅花の抽出分画液から蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと
特異的に結合する活性成分を発見し、その後該活性成分
を同定した結果アデノシンであることを確認することが
できた。従って、アデノシンが血小板凝集及血栓形成を
抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。
より、紅花の抽出分画液から蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと
特異的に結合する活性成分を発見し、その後該活性成分
を同定した結果アデノシンであることを確認することが
できた。従って、アデノシンが血小板凝集及血栓形成を
抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００２５】通常、高密度グリッディング技術（high-d
ensity gridding technology）は、定性また定量的に生
物サンプルに標的物質が既に存在するかを検出すること
に使われている技術である。一般的に高密度グリッディ
ング技術とは、固体担体の表面に格子状に多数の小体積
または微小体積のサンプルを固定配置するもので、その
高密度グリッディング技術により、標的物質が存在する
かも知れないバイオサンプルを固定担体に配置または固
定し、該標的物質と融合または結合できる標識プローブ
を用いて固体担体をさらに処理し、融合または結合した
固体担体を現像及び分析して、迅やかに該標識プローブ
と特異的に反応する候補的標的物質をスクリーニングす
ることができるものである。
ensity gridding technology）は、定性また定量的に生
物サンプルに標的物質が既に存在するかを検出すること
に使われている技術である。一般的に高密度グリッディ
ング技術とは、固体担体の表面に格子状に多数の小体積
または微小体積のサンプルを固定配置するもので、その
高密度グリッディング技術により、標的物質が存在する
かも知れないバイオサンプルを固定担体に配置または固
定し、該標的物質と融合または結合できる標識プローブ
を用いて固体担体をさらに処理し、融合または結合した
固体担体を現像及び分析して、迅やかに該標識プローブ
と特異的に反応する候補的標的物質をスクリーニングす
ることができるものである。
【００２６】本発明はＨＰＬＣを利用して紅花の抽出物
から分取したそれぞれの分取液をプラスチックプレート
上に配置し、そして、標識血小板膜受容体蛋白質ｇｐII
ｂ／IIIａ（血小板凝集及び血栓形成に関与する重要な
作用因子）を該プラスチックプレート上に添加し、結合
反応を行なう。その後、未結合の蛋白質ｇｐIIｂ／III
ａを除去し、該標識蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと結合シグ
ナルを示す候補分取液を選出し、該標識蛋白質ｇｐIIｂ
／IIIａと結合の単一成分が得られるまで前記の工程を
繰り返す。該蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと特異的に結合す
る単一成分は同定によりアデノシンと判明された。
から分取したそれぞれの分取液をプラスチックプレート
上に配置し、そして、標識血小板膜受容体蛋白質ｇｐII
ｂ／IIIａ（血小板凝集及び血栓形成に関与する重要な
作用因子）を該プラスチックプレート上に添加し、結合
反応を行なう。その後、未結合の蛋白質ｇｐIIｂ／III
ａを除去し、該標識蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと結合シグ
ナルを示す候補分取液を選出し、該標識蛋白質ｇｐIIｂ
／IIIａと結合の単一成分が得られるまで前記の工程を
繰り返す。該蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａと特異的に結合す
る単一成分は同定によりアデノシンと判明された。
【００２７】アデノシンは既知の化合物で、いままで抗
不整脈剤として用いられ、同時にその誘導体は抗腫瘍剤
として用いられることが知られている。しかし、アデノ
シンが特異的に蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａに結合し、血栓
性塞栓疾患の治療用途に用いられることについては、い
ままでの先行技術、文献では開示されたこともないし、
提案もされていない。従って本発明はアデノシが抗血栓
形成剤として血栓性塞疾患の治療に用いられることを開
示するものである。
不整脈剤として用いられ、同時にその誘導体は抗腫瘍剤
として用いられることが知られている。しかし、アデノ
シンが特異的に蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａに結合し、血栓
性塞栓疾患の治療用途に用いられることについては、い
ままでの先行技術、文献では開示されたこともないし、
提案もされていない。従って本発明はアデノシが抗血栓
形成剤として血栓性塞疾患の治療に用いられることを開
示するものである。
【００２８】血栓性塞栓疾患はアテローム性動脈硬化と
動脈硬化、急性心筋梗塞、狭心症、一時性虚血発作、末
梢血管疾病、動脈血栓形成、子癇前症、塞栓及び筋動脈
内膜切除術等を含むものである。
動脈硬化、急性心筋梗塞、狭心症、一時性虚血発作、末
梢血管疾病、動脈血栓形成、子癇前症、塞栓及び筋動脈
内膜切除術等を含むものである。
【００２９】本発明は、哺乳動物（人類を含む）の体内
に有効量のアデノシンを投与して、血小板凝集及び血栓
形成を抑制する方法を提供することを目的とする。
に有効量のアデノシンを投与して、血小板凝集及び血栓
形成を抑制する方法を提供することを目的とする。
【００３０】また、本発明は、哺乳動物（人類を含む）
の体内に有効量のアデノシンを投与して、血栓性塞栓疾
病を予防及び治療する方法を提供することを目的とす
る。
の体内に有効量のアデノシンを投与して、血栓性塞栓疾
病を予防及び治療する方法を提供することを目的とす
る。
【００３１】本発明は、有効含有量のアデノシン及び製
薬上許容しうる担体または希釈剤を含有する、哺乳動物
（人類を含む）の血小板凝集及び血栓形成の抑制に用い
られる薬品組成物を提供することを目的とする。
薬上許容しうる担体または希釈剤を含有する、哺乳動物
（人類を含む）の血小板凝集及び血栓形成の抑制に用い
られる薬品組成物を提供することを目的とする。
【００３２】また、本発明は有効含有量のアデノシン及
び製薬上許容しうる担体または希釈剤を含有する、哺乳
動物（人類を含む）の血栓性塞栓疾患の予防及び治療に
用いられる薬品組成物を提供することを目的とする。
び製薬上許容しうる担体または希釈剤を含有する、哺乳
動物（人類を含む）の血栓性塞栓疾患の予防及び治療に
用いられる薬品組成物を提供することを目的とする。
【００３３】さらに、本発明はアデノシンを含有する第
１容器、及び製薬上許容しうる担体及び希釈剤を含有す
る第２容器からなる、哺乳動物（人類を含有）の血小板
凝集及び血栓形成の抑制に用いられるキットを提供する
ことを目的とする。
１容器、及び製薬上許容しうる担体及び希釈剤を含有す
る第２容器からなる、哺乳動物（人類を含有）の血小板
凝集及び血栓形成の抑制に用いられるキットを提供する
ことを目的とする。
【００３４】さらに本発明は試料をアデノシンと接触さ
せて、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で試料中に蛋白質ｇ
ｐIIｂ／IIIａが存在するかを検出する方法を提供する
ことを目的とする。
せて、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で試料中に蛋白質ｇ
ｐIIｂ／IIIａが存在するかを検出する方法を提供する
ことを目的とする。
【００３５】本発明の薬品組成物は、経口投与または静
脈注射の投与方式をとることができる。本発明の薬品組
成物の適宜の剤型としては、例えば錠剤、カプセル剤、
丸剤、散剤、顆粒剤、溶液剤、エリキシル、チンキ剤、
シロップ、懸濁剤、乳剤、及びそれら類似剤型とするこ
とができる。
脈注射の投与方式をとることができる。本発明の薬品組
成物の適宜の剤型としては、例えば錠剤、カプセル剤、
丸剤、散剤、顆粒剤、溶液剤、エリキシル、チンキ剤、
シロップ、懸濁剤、乳剤、及びそれら類似剤型とするこ
とができる。
【００３６】本発明の薬品組成物の投与量は、投与経
路、患者の年齢、健康及び生理的状態、体重、病状自
体、及び達成されるベき効果等により適宜選択すること
ができる。通常、アデノシンの一日の経口投与量は、患
者の体重に応じて約１５~１５０ｍｇ／ｋｇで、静脈注
射の場合は約１５~１５０ｍｋｇである。
路、患者の年齢、健康及び生理的状態、体重、病状自
体、及び達成されるベき効果等により適宜選択すること
ができる。通常、アデノシンの一日の経口投与量は、患
者の体重に応じて約１５~１５０ｍｇ／ｋｇで、静脈注
射の場合は約１５~１５０ｍｋｇである。
【００３７】本発明の薬品組成物は、その他の既知の抗
血栓形成剤と併用することにより、治療的相乗効果作用
を得ることができる。既知の抗血栓形成剤としては、例
えばクマリン、アスピリン、ヘパリン、ＬＭＷヘパリ
ン、チクロピジン、ヒルジン及びトロンボキサンＡ２シ
ンターゼ抑制剤または受容体拮抗剤を用いることができ
る。
血栓形成剤と併用することにより、治療的相乗効果作用
を得ることができる。既知の抗血栓形成剤としては、例
えばクマリン、アスピリン、ヘパリン、ＬＭＷヘパリ
ン、チクロピジン、ヒルジン及びトロンボキサンＡ２シ
ンターゼ抑制剤または受容体拮抗剤を用いることができ
る。
【００３８】動物（ラット）モデルから得られた実験デ
ータにより、本発明の薬品組成物は、とくに静脈内注射
で患者に単一剤量のアデノシン約７０ｍｇ／患者体重ｋ
ｇの投与量でも、患者に対していかなる急性毒性現象も
示すことはない。
ータにより、本発明の薬品組成物は、とくに静脈内注射
で患者に単一剤量のアデノシン約７０ｍｇ／患者体重ｋ
ｇの投与量でも、患者に対していかなる急性毒性現象も
示すことはない。
【００３９】以下の実施例により、本発明をさらに詳し
く例示し説明するが、本発明はこれら実施例により何ら
限定されるものでないことを表明する。
く例示し説明するが、本発明はこれら実施例により何ら
限定されるものでないことを表明する。
【００４０】
【実施例】実施例１ 常用のブレンド法により、メタノール（４０ｍｌ）で紅
花（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ Ｌ；台
湾、台中市の聯合中西薬局より購入）（５ｇ）を抽出
し、抽出液を最終容積８ｍｌまで濃縮する。得られた濃
縮抽出液（１００ｍｌ）をＯＤＳ―ゲルＯＳＤ ８０Ｔ
Ｍ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ、ＴＯＳＯＨ、日本）カラム
のＨＰＬＣ（ｓｈｉｍａｚｕ １０―ＡＴ 日本）分析に
付し、最初に水で濃縮抽出液を５分間溶離し、さらにエ
タノールー水の溶離液（約１０５分内にエタノール濃度
を０％（ｖ／ｖ）から７０％（ｖ／ｖ）まで増加）で溶
離し、さらにその後５分間の溶離で、溶離液のエタノー
ル濃度を１００％（ｖ／ｖ）まで上昇させた。２５４ｎ
ｍ波長の下で、溶離液の試料を検出し、０．５ｍｌ毎に
試料収集した。その溶離図を図１Ａに示す。
花（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ Ｌ；台
湾、台中市の聯合中西薬局より購入）（５ｇ）を抽出
し、抽出液を最終容積８ｍｌまで濃縮する。得られた濃
縮抽出液（１００ｍｌ）をＯＤＳ―ゲルＯＳＤ ８０Ｔ
Ｍ（４．６ｍｍ×２５ｃｍ、ＴＯＳＯＨ、日本）カラム
のＨＰＬＣ（ｓｈｉｍａｚｕ １０―ＡＴ 日本）分析に
付し、最初に水で濃縮抽出液を５分間溶離し、さらにエ
タノールー水の溶離液（約１０５分内にエタノール濃度
を０％（ｖ／ｖ）から７０％（ｖ／ｖ）まで増加）で溶
離し、さらにその後５分間の溶離で、溶離液のエタノー
ル濃度を１００％（ｖ／ｖ）まで上昇させた。２５４ｎ
ｍ波長の下で、溶離液の試料を検出し、０．５ｍｌ毎に
試料収集した。その溶離図を図１Ａに示す。
【００４１】次に、標的物質の結合分析を行い、血小板
から血小板膜受容体蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａを精製し、
ＳＤＳ―ＰＡＧＥ及び銀染色法によりその純度を測定し
た。常用の方法及び手段により、ビオチンを用いて精製
された蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａを標識し、収集された１
２０の試料をそれぞれ３８４ウェルを有するプラスチッ
クプレート上に塗布した。ビオチンで標識された蛋白質
ｇｐIIｂ／IIIａを該試料塗布のプラスチックプレート
上に分注し、室温でそのプラスチックプレートを３０分
間保温培養した。ＴＢＳＴ緩衝液によりそれぞれのウェ
ルを３回洗浄し、それぞれのウェルにアビジン外共役の
アルカリ性ホスファターゼを添加し、さらに３０分間イ
ンキューベートした。前記の洗浄工程を繰り返し、それ
ぞれのウェルにＰ―ニトロフェニル燐酸エステルを添加
し呈色反応を起させ、自動的ＥＬＩＳＡ読取器（Ｄｙｎ
ａｘ）を用いて４０５ｎｍ波長の下で吸収度を測定し
た。図１Ｂに図１Ａで示された対応の試料のＯＤ
４０５ｎｍ測定値を示す。これらはそれぞれのウェルに
おける内容物質と蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合の能力を
説明するものである。
から血小板膜受容体蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａを精製し、
ＳＤＳ―ＰＡＧＥ及び銀染色法によりその純度を測定し
た。常用の方法及び手段により、ビオチンを用いて精製
された蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａを標識し、収集された１
２０の試料をそれぞれ３８４ウェルを有するプラスチッ
クプレート上に塗布した。ビオチンで標識された蛋白質
ｇｐIIｂ／IIIａを該試料塗布のプラスチックプレート
上に分注し、室温でそのプラスチックプレートを３０分
間保温培養した。ＴＢＳＴ緩衝液によりそれぞれのウェ
ルを３回洗浄し、それぞれのウェルにアビジン外共役の
アルカリ性ホスファターゼを添加し、さらに３０分間イ
ンキューベートした。前記の洗浄工程を繰り返し、それ
ぞれのウェルにＰ―ニトロフェニル燐酸エステルを添加
し呈色反応を起させ、自動的ＥＬＩＳＡ読取器（Ｄｙｎ
ａｘ）を用いて４０５ｎｍ波長の下で吸収度を測定し
た。図１Ｂに図１Ａで示された対応の試料のＯＤ
４０５ｎｍ測定値を示す。これらはそれぞれのウェルに
おける内容物質と蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合の能力を
説明するものである。
【００４２】実施例２ 図１Ａで示された第２５~４０の画分を集め、実施例１
で述べられた方法で、集めた画分をカラムに注入し、Ｈ
ＰＬＣによって分析を行った。ここでエタノールー水の
洗浄を２０分間に改め、エタノールの濃度は２０％~３
０％直線勾配とし、その溶出のプロフィルを図２Ａに示
す。
で述べられた方法で、集めた画分をカラムに注入し、Ｈ
ＰＬＣによって分析を行った。ここでエタノールー水の
洗浄を２０分間に改め、エタノールの濃度は２０％~３
０％直線勾配とし、その溶出のプロフィルを図２Ａに示
す。
【００４３】実施例１で述べられた方法に基づき、ター
ゲツト蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合分析を行い、それぞ
れの画分の蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合能力の結果を図
２Ｂに示す。
ゲツト蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合分析を行い、それぞ
れの画分の蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合能力の結果を図
２Ｂに示す。
【００４４】実施例３ 図２Ａで示された第５及び６の画分を集め、さらに第３
回目のＨＰＬＣ分析を実施し、無勾配溶離液（エタノー
ル９％と水９１％）で２０分間溶離した。
回目のＨＰＬＣ分析を実施し、無勾配溶離液（エタノー
ル９％と水９１％）で２０分間溶離した。
【００４５】その結果、保持時間１０．７分間の単一成
分（ピーク）が得られ、最も強い結合活性が示された
（図３の溶離プロフィル参照）。
分（ピーク）が得られ、最も強い結合活性が示された
（図３の溶離プロフィル参照）。
【００４６】図３のプロフィルで採集された化合物を乾
燥させ、電気スプレーイオン化質量分析計（ｅｌｅｃｔ
ｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｍａｓｓ ｓｐ
ｃｔｒｃｍｅｔｒｙ）でその分子量を測定した。図４Ａ
で示された如く、主要ピーク値が２６８．０４ｍ／ｚ
（標準誤差±０．１１）で、同時に測定差が約２１．９
ｍ／ｚのもうーつのピーク値２８９．９ｍ／ｚが測定さ
れ、主要ピーク値の化合物のナトリウム塩であることが
確認された。
燥させ、電気スプレーイオン化質量分析計（ｅｌｅｃｔ
ｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｍａｓｓ ｓｐ
ｃｔｒｃｍｅｔｒｙ）でその分子量を測定した。図４Ａ
で示された如く、主要ピーク値が２６８．０４ｍ／ｚ
（標準誤差±０．１１）で、同時に測定差が約２１．９
ｍ／ｚのもうーつのピーク値２８９．９ｍ／ｚが測定さ
れ、主要ピーク値の化合物のナトリウム塩であることが
確認された。
【００４７】そしてさらに関連の多くの多重電荷のピー
ク値（５３５．６，８０２．１，１０６９．７，１３５
７．９，１６０４．４，及び１８７１．１ｍ／ｚ；図４
Ｂ参照）も測定された。多重電荷スプレー法は通常生体
高分子の測定に用られるもので、図４Ｂで示された多数
のピークは明らかにそれぞれ主要ピークの化合物に対応
する二量体から七量体のものである。それぞれの多重電
荷ピーク値の近く（約２２ｍ／ｚの差の箇所）で現われ
たピークの信号はその対応する共役ナトリウム塩である
ことが認められた。それらの結果から、該分離された化
合物の分子量が２６８ｇｍ／モルで、重合体形成能を有
することが分かる。
ク値（５３５．６，８０２．１，１０６９．７，１３５
７．９，１６０４．４，及び１８７１．１ｍ／ｚ；図４
Ｂ参照）も測定された。多重電荷スプレー法は通常生体
高分子の測定に用られるもので、図４Ｂで示された多数
のピークは明らかにそれぞれ主要ピークの化合物に対応
する二量体から七量体のものである。それぞれの多重電
荷ピーク値の近く（約２２ｍ／ｚの差の箇所）で現われ
たピークの信号はその対応する共役ナトリウム塩である
ことが認められた。それらの結果から、該分離された化
合物の分子量が２６８ｇｍ／モルで、重合体形成能を有
することが分かる。
【００４８】実施例４ 図３のプロフィルから得られた、実施例３で乾燥された
化合物を特定した。融点は２３０~２３２℃で、元素分
析結果はＣ：４４．９４％、Ｈ：４．９０％、Ｎ：２
６．２１％及びＯ：２３．９５％である。質量スペクト
ルで測定された該化合物の分子量は２６７．２４ｇｍ／
モルで、初期データで化合物の分子式がＣ １０Ｈ１３Ｎ
５Ｏ４であることが算出された。
化合物を特定した。融点は２３０~２３２℃で、元素分
析結果はＣ：４４．９４％、Ｈ：４．９０％、Ｎ：２
６．２１％及びＯ：２３．９５％である。質量スペクト
ルで測定された該化合物の分子量は２６７．２４ｇｍ／
モルで、初期データで化合物の分子式がＣ １０Ｈ１３Ｎ
５Ｏ４であることが算出された。
【００４９】１―Ｄ１Ｈと１３ＣＮＭＲ、２Ｄ１Ｈ―１
Ｈ相関、１Ｈ―検出１３Ｃ−１Ｈ及び１５Ｎ−１Ｈ相関
ＮＭＲ技術を利用して該化合物の構造を分析し、Ｖａｒ
ｉａｎ ６００ＮＭＲスペクトルでデータを収集した。
１―Ｄ１ＨＮＭＲと２―Ｄ１Ｈ―１ＨＣＯＳＹとＴＯＣ
ＳＹスペトルでプロトン結合パターンを樹立したとこ
ろ、該化合物は一つのβ―リボフラノシル残基、三つの
交換可能のプロトン（ＯＨ基由来）、及び一つのプリン
環系が含まれていることが示された。フラグメントパタ
ーンの統合結末は元素分析で得られたプロトンの数と一
致した。１３ＣＮＭＲ分析データで該化合物に存在する
炭素原子数が立証された。１Ｈ＿検測１３Ｃ−１ＨＮＭ
Ｒで炭素原子と水素原子の連結状態及び該水素原子の位
置を測定、測定の結果プリンとリボース環系は一致し
た。１５Ｎ―１Ｈ相関ＮＭＲ分析データから該化合物に
含まれる四の窒素原子のパターンはプリン環系と一致し
た。
Ｈ相関、１Ｈ―検出１３Ｃ−１Ｈ及び１５Ｎ−１Ｈ相関
ＮＭＲ技術を利用して該化合物の構造を分析し、Ｖａｒ
ｉａｎ ６００ＮＭＲスペクトルでデータを収集した。
１―Ｄ１ＨＮＭＲと２―Ｄ１Ｈ―１ＨＣＯＳＹとＴＯＣ
ＳＹスペトルでプロトン結合パターンを樹立したとこ
ろ、該化合物は一つのβ―リボフラノシル残基、三つの
交換可能のプロトン（ＯＨ基由来）、及び一つのプリン
環系が含まれていることが示された。フラグメントパタ
ーンの統合結末は元素分析で得られたプロトンの数と一
致した。１３ＣＮＭＲ分析データで該化合物に存在する
炭素原子数が立証された。１Ｈ＿検測１３Ｃ−１ＨＮＭ
Ｒで炭素原子と水素原子の連結状態及び該水素原子の位
置を測定、測定の結果プリンとリボース環系は一致し
た。１５Ｎ―１Ｈ相関ＮＭＲ分析データから該化合物に
含まれる四の窒素原子のパターンはプリン環系と一致し
た。
【００５０】これらの結果も元素分析と一致した。最後
に１―Ｄ１ＨＮＭＲで、アデノシンについて分析し、ア
デノシンと該化合物に示されたスペクトルはほとんど区
別がつかないことが判明された。
に１―Ｄ１ＨＮＭＲで、アデノシンについて分析し、ア
デノシンと該化合物に示されたスペクトルはほとんど区
別がつかないことが判明された。
【００５１】ＮＭＲ分析データは下記の表の如くであ
る。
る。
【００５２】表１Ｈ，１３Ｃ及び１５Ｎ化学シフト（Ｔ
ＭＳの１Ｈ＝０．０００ｐｐｍに対応；ＤＭＳＯの１３
Ｃ＝３９．８０ｐｐｍに対応；及び１５Ｎ該当）及び１
Ｈ１Ｈ・カップリング係数（＞１、０Ｈｚ；かっこ
内）、推定のアデノシン異性体及び図３プロフィルで得
られた化合物に対して、ＤＳＯ―ｄ６及び３０８゜Ｋで
ある。
ＭＳの１Ｈ＝０．０００ｐｐｍに対応；ＤＭＳＯの１３
Ｃ＝３９．８０ｐｐｍに対応；及び１５Ｎ該当）及び１
Ｈ１Ｈ・カップリング係数（＞１、０Ｈｚ；かっこ
内）、推定のアデノシン異性体及び図３プロフィルで得
られた化合物に対して、ＤＳＯ―ｄ６及び３０８゜Ｋで
ある。
【００５３】
【表１】 該化合物のＵＶ最大吸収はアデノシンと一致し、該化合
物のＩＲスペクトルもアデノシンと一致した。
物のＩＲスペクトルもアデノシンと一致した。
【００５４】二つの異なるカラム（ｓｙｎｅｒｇｉ Ｐ
ｏｌａｒ―ＲとＳｙｎｅｒｇｉ ｍａｘ―ＲＰ）を用い
て、二つの異なる流動速度と数種類の移動相、及びアデ
ノシンを主要標準物とし、ＨＰＬＣ分析を実施した、そ
の結果、該化合物は９５．０５の純度（サンプル中に水
が存在したため）を有し、該化合物とアデノシンＨＰＬ
Ｃ分析の保持時間は同じであった。
ｏｌａｒ―ＲとＳｙｎｅｒｇｉ ｍａｘ―ＲＰ）を用い
て、二つの異なる流動速度と数種類の移動相、及びアデ
ノシンを主要標準物とし、ＨＰＬＣ分析を実施した、そ
の結果、該化合物は９５．０５の純度（サンプル中に水
が存在したため）を有し、該化合物とアデノシンＨＰＬ
Ｃ分析の保持時間は同じであった。
【００５５】上記の分析から該化合物はアデノシンと判
明された。
明された。
【００５６】実施例５ 実施例４で得られた化合物（アデノシン）を各バッチで
製造された化合物を特定する標準物として用いる。精製
された該化合物を収集乾燥し、それらと蛋白質ｇｐIIｂ
／IIIａとの結合能を検証する。結合分析を実施するた
めに、該化合物の水溶液を調合し、さらにー連の希釈に
よって最終濃度0〜５０ｍｇ／ ｍｌ溶液を作成する。そ
れぞれの試験溶液には異なる化合物の量が含まれて居
り、９６ウェルのプラスチックプレートの平面ウェルに
スポットした。続いてそれぞれのテストウェルに標識さ
れた蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａを添加し、実施例１で述 べ
られた方法によって呈色反応を行った。その結合曲線を
図５に示す。該化合物の濃度が１０ｍｇ／ｍｌ以下であ
る時、結合現象が最も向上されて、最大結合量８０％に
達している。
製造された化合物を特定する標準物として用いる。精製
された該化合物を収集乾燥し、それらと蛋白質ｇｐIIｂ
／IIIａとの結合能を検証する。結合分析を実施するた
めに、該化合物の水溶液を調合し、さらにー連の希釈に
よって最終濃度0〜５０ｍｇ／ ｍｌ溶液を作成する。そ
れぞれの試験溶液には異なる化合物の量が含まれて居
り、９６ウェルのプラスチックプレートの平面ウェルに
スポットした。続いてそれぞれのテストウェルに標識さ
れた蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａを添加し、実施例１で述 べ
られた方法によって呈色反応を行った。その結合曲線を
図５に示す。該化合物の濃度が１０ｍｇ／ｍｌ以下であ
る時、結合現象が最も向上されて、最大結合量８０％に
達している。
【００５７】実施例６ 該化合物の血小板凝集抑制の活性を分析するため習用の
ＡＤＰ活性化の血小板凝集分析を利用し、該分析に用い
られる反応試薬はｓｉｇｍａから購入された。図６Ａは
該化合物の血小板凝集抑制における量的変化による反応
の違いを示す。該化合物の濃度が１０~１５ｍμｇ／ｍ
ｌ血液である時最大の抑制活性約８５％である。該化合
物（濃度１７、４μｇ／ｍｌ）を利用して血小板凝集抑
制の活性と時間との関係を測定し、その結果を図６Ｂに
示す、１４~１６分間の時間的間隔に最大の抑制活性約
８５％に達した。
ＡＤＰ活性化の血小板凝集分析を利用し、該分析に用い
られる反応試薬はｓｉｇｍａから購入された。図６Ａは
該化合物の血小板凝集抑制における量的変化による反応
の違いを示す。該化合物の濃度が１０~１５ｍμｇ／ｍ
ｌ血液である時最大の抑制活性約８５％である。該化合
物（濃度１７、４μｇ／ｍｌ）を利用して血小板凝集抑
制の活性と時間との関係を測定し、その結果を図６Ｂに
示す、１４~１６分間の時間的間隔に最大の抑制活性約
８５％に達した。
【００５８】実施例７ ラットの腸間膜静脈のｉｎ ｖｉｖｏ血栓形成モデル
で、該化合物の静脈血栓形成抑制における効果を評価し
た。詳しく云えば、各投与量で、多数グループの實験ラ
ット（一組３匹、ウィスター雄ラット、体重６０±１０
ｇｍ）を用い、フェノバルビタール・ナトリウム（腹膜
内５０ｍｇ／ｋｇ注射）で麻酔し、スクシ二ルコリンク
ロライド（２ｍｇ／ラットを腹膜内注射）で麻痺させ、
継いで腸間膜と静脈を露出させ、平台の上にのせる。３
７℃下で、電撃による刺激を与える時に一般の塩水で露
出した腸間膜と静脈を浸漬する。解剖顕微鏡と顕微手術
により単極プラチナ電極を挿入し該静脈と接触させる。
Ｇｌａｓｓ Ｓ―４４刺激器による単一スクェア・ウェー
ブ電気パルス（１０００ＰＰＳ、１００ｖ、３００ｍ
ｓ）で該静脈血栓を形成させる。次に顕微鏡検度接眼鏡
で血栓形成を観察する。相対性静脈閉塞（血栓形成の程
度を測度）は静脈直径（０．３６~０．３８ｍｍ）に対
するパーセンテージで測定し、１０秒後（基礎対照値）
と1分間の間隔（２０分間持続）で記録した。腸間膜静
脈電気刺激の５分前に該化合物または担体を静脈注射
し、担体処理組については２０分間隔で記録値を平均
し、静脈直径範囲の４５~５５％に達した数値である。
該化合物の抗血栓活性は担体処理組の対照組に対する抑
制率％を算出して表示する。３匹ラットに対する顕著な
抑制効果（＞３０％）が観察された時点で、直線性回帰
を用いて３匹のラットの投与量毎のＥＤ３０±ＳＥＭ値
を測定した。単位時間毎に一対のＳｔｕｄｅｎｔ´ｓｔ
測定で統計分析を行い、担体対照組とテスト化合物組を
比較した（有意標準＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０
１）。
で、該化合物の静脈血栓形成抑制における効果を評価し
た。詳しく云えば、各投与量で、多数グループの實験ラ
ット（一組３匹、ウィスター雄ラット、体重６０±１０
ｇｍ）を用い、フェノバルビタール・ナトリウム（腹膜
内５０ｍｇ／ｋｇ注射）で麻酔し、スクシ二ルコリンク
ロライド（２ｍｇ／ラットを腹膜内注射）で麻痺させ、
継いで腸間膜と静脈を露出させ、平台の上にのせる。３
７℃下で、電撃による刺激を与える時に一般の塩水で露
出した腸間膜と静脈を浸漬する。解剖顕微鏡と顕微手術
により単極プラチナ電極を挿入し該静脈と接触させる。
Ｇｌａｓｓ Ｓ―４４刺激器による単一スクェア・ウェー
ブ電気パルス（１０００ＰＰＳ、１００ｖ、３００ｍ
ｓ）で該静脈血栓を形成させる。次に顕微鏡検度接眼鏡
で血栓形成を観察する。相対性静脈閉塞（血栓形成の程
度を測度）は静脈直径（０．３６~０．３８ｍｍ）に対
するパーセンテージで測定し、１０秒後（基礎対照値）
と1分間の間隔（２０分間持続）で記録した。腸間膜静
脈電気刺激の５分前に該化合物または担体を静脈注射
し、担体処理組については２０分間隔で記録値を平均
し、静脈直径範囲の４５~５５％に達した数値である。
該化合物の抗血栓活性は担体処理組の対照組に対する抑
制率％を算出して表示する。３匹ラットに対する顕著な
抑制効果（＞３０％）が観察された時点で、直線性回帰
を用いて３匹のラットの投与量毎のＥＤ３０±ＳＥＭ値
を測定した。単位時間毎に一対のＳｔｕｄｅｎｔ´ｓｔ
測定で統計分析を行い、担体対照組とテスト化合物組を
比較した（有意標準＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０
１）。
【００５９】図７Ａは電流刺激後、７、１１、１２、１
３、１４、１５、１６、１７、及び１９分の時点で、担
体処理組に対して、該化合物（４００ｍｇ／ラット）に
顕著な血栓活性が示されている。
３、１４、１５、１６、１７、及び１９分の時点で、担
体処理組に対して、該化合物（４００ｍｇ／ラット）に
顕著な血栓活性が示されている。
【００６０】該化合物（２５、５０、１００、２００、
及び４００ｍｇ／ラット）の抗血栓活性上の投与量依存
性に関しては図７Ｂに示されている。
及び４００ｍｇ／ラット）の抗血栓活性上の投与量依存
性に関しては図７Ｂに示されている。
【００６１】該化合物の経口投与後の抗血栓活性につい
て評価し、前記動物実験モデルと類似の方式で行い、但
し、静脈注射の代りに経口投与（電流刺激時間前）を用
い、投与量は４ ｍｇ／ラットである。実験の結果を図
７Ｃに示す。担体処理組に対して、１４、１５、１６、
１７、１８、及び２０分の時点において顕著な抗血栓活
性が見られた。
て評価し、前記動物実験モデルと類似の方式で行い、但
し、静脈注射の代りに経口投与（電流刺激時間前）を用
い、投与量は４ ｍｇ／ラットである。実験の結果を図
７Ｃに示す。担体処理組に対して、１４、１５、１６、
１７、１８、及び２０分の時点において顕著な抗血栓活
性が見られた。
【００６２】実施例８ 競合型ＥＬＩＳＡ検定法を利用して化合物のフィブリノ
ーゲンと蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合能力を比較分析し
た、実施例４の化合物を用いて、市場購入のアデノシン
（Ｓｉｇｍａ 製品、カタログ番号Ａ―９２５１、Ｌｏ
ｔ．１８Ｈ０２９５）とＲｅｏＰｒｏ（登録商標）（ａ
ｂｃｉｘｉｍａｂ）（１０ｍｇ／ｍｌ；Ｅｌｉ Ｌｉｌ
ｌｙ製品、實験室のみに使用、Ｌｏｔ．９７Ｆ０３、モ
ノクローナル抗体及び蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａの拮抗剤
である）をテスト化合物とした。血小板から精製された
蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａを９６ウェルプラスチックプレ
ートの平底ウェルに塗布する。それぞれのテスト化合物
のサンプル（濃度５~６０ｍｇ／ｍｌ）及びビオチン標
識のフィブリノーゲン溶液（濃度１．５ｍｇ／ｍｌ）を
調製し、それぞれのテスト化合物のサンプルを同じ容積
のビオチン標識のフィブリノーゲンと混合した後にウェ
ルヘ注入し、３７℃下でウェル中の競合性結合反応を２
時間行い、さらに２時間育成後、それぞれのウェルにス
トレプト・アビジン共役のアルカリ性フォスフォターゼ
を添加し、常用の方法によりＰ―ニトロフェニル フォ
スフェートを含む溶液をそれぞれのウェルヘ注入して呈
色反応を行う。各テスト化合物のフィブリノーゲンと蛋
白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合抑制力を測定してＯＤ値で示
す。結果は図８の如くである。実施例４の化合物と市販
のアデノシンはフィブリノーゲンと蛋白質ｇｐIIｂ／II
Iａの抑制に同等の効果が、そして実施例４の化合物は
ＲｅｏＰｒｏ（登録商標）（ａｂｃｉｘｉｍａｂ）より
優れたフィブリノーゲンと蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａの結
合抑制効果があることが判明された。
ーゲンと蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合能力を比較分析し
た、実施例４の化合物を用いて、市場購入のアデノシン
（Ｓｉｇｍａ 製品、カタログ番号Ａ―９２５１、Ｌｏ
ｔ．１８Ｈ０２９５）とＲｅｏＰｒｏ（登録商標）（ａ
ｂｃｉｘｉｍａｂ）（１０ｍｇ／ｍｌ；Ｅｌｉ Ｌｉｌ
ｌｙ製品、實験室のみに使用、Ｌｏｔ．９７Ｆ０３、モ
ノクローナル抗体及び蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａの拮抗剤
である）をテスト化合物とした。血小板から精製された
蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａを９６ウェルプラスチックプレ
ートの平底ウェルに塗布する。それぞれのテスト化合物
のサンプル（濃度５~６０ｍｇ／ｍｌ）及びビオチン標
識のフィブリノーゲン溶液（濃度１．５ｍｇ／ｍｌ）を
調製し、それぞれのテスト化合物のサンプルを同じ容積
のビオチン標識のフィブリノーゲンと混合した後にウェ
ルヘ注入し、３７℃下でウェル中の競合性結合反応を２
時間行い、さらに２時間育成後、それぞれのウェルにス
トレプト・アビジン共役のアルカリ性フォスフォターゼ
を添加し、常用の方法によりＰ―ニトロフェニル フォ
スフェートを含む溶液をそれぞれのウェルヘ注入して呈
色反応を行う。各テスト化合物のフィブリノーゲンと蛋
白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合抑制力を測定してＯＤ値で示
す。結果は図８の如くである。実施例４の化合物と市販
のアデノシンはフィブリノーゲンと蛋白質ｇｐIIｂ／II
Iａの抑制に同等の効果が、そして実施例４の化合物は
ＲｅｏＰｒｏ（登録商標）（ａｂｃｉｘｉｍａｂ）より
優れたフィブリノーゲンと蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａの結
合抑制効果があることが判明された。
【００６３】実施例９ ラット体内における実施例４の化合物の潜在的急性毒性
について検試し、２０匹のラットを５組に分けて（２匹
の雄ラットと２匹の雌ラットを一組とする）静脈内に投
与注射し、グループ１：対照組、グループ２：１ｍｇ化
合物／ｋｇラット体重、グループ３：１０ｍｇ化合物／
ｋｇラット体重、グループ４：５０ｍｇ化合物／ｋｇラ
ット体重及びグループ５：１００ｍｇ化合物／ｋｇラッ
ト体重とする。０．９％ＮａＣｌ注射溶液でテスト化合
物を調合し、０．６４±０．０５ｍｇ／ｋｇ（グループ
２）、６．８９±１．１３ｍｇ／ｋｇ（グループ３）、
３５．０２±５．０２ｍｇ／ｋｇ（グループ４）及び６
９．５５±５．６５ｍｇ／ｋｇ（グループ５）とした。
第1日目に静脈注射でテスト物質をラット体内に注射
し、８日目に解剖して臓器と組織を検定し、臓器の重量
を測定し、潜在的組織病理について組織を検測した。観
察した結果、化合物処理組については全く化合物による
臨床的症状、血清化学、血液学、解剖学検定、体重及臓
器重量（絶対的及び相対的に）での変化が見られず、結
論として化合物処理組には明らかな毒性現象が観察され
なかったことになる。
について検試し、２０匹のラットを５組に分けて（２匹
の雄ラットと２匹の雌ラットを一組とする）静脈内に投
与注射し、グループ１：対照組、グループ２：１ｍｇ化
合物／ｋｇラット体重、グループ３：１０ｍｇ化合物／
ｋｇラット体重、グループ４：５０ｍｇ化合物／ｋｇラ
ット体重及びグループ５：１００ｍｇ化合物／ｋｇラッ
ト体重とする。０．９％ＮａＣｌ注射溶液でテスト化合
物を調合し、０．６４±０．０５ｍｇ／ｋｇ（グループ
２）、６．８９±１．１３ｍｇ／ｋｇ（グループ３）、
３５．０２±５．０２ｍｇ／ｋｇ（グループ４）及び６
９．５５±５．６５ｍｇ／ｋｇ（グループ５）とした。
第1日目に静脈注射でテスト物質をラット体内に注射
し、８日目に解剖して臓器と組織を検定し、臓器の重量
を測定し、潜在的組織病理について組織を検測した。観
察した結果、化合物処理組については全く化合物による
臨床的症状、血清化学、血液学、解剖学検定、体重及臓
器重量（絶対的及び相対的に）での変化が見られず、結
論として化合物処理組には明らかな毒性現象が観察され
なかったことになる。
【図１Ａ】図１Ａは紅花（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ Ｔｉｎ
ｃｔｏｒｉｕｓ Ｌ）抽出の１２０分間内のＨＰＬＣ溶
離図を示す。
ｃｔｏｒｉｕｓ Ｌ）抽出の１２０分間内のＨＰＬＣ溶
離図を示す。
【図１B】図１Ｂは４０５ｎｍ波長での吸収性での図１
Ａの溶離サンプルの蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａに対する結
合の説明図。
Ａの溶離サンプルの蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａに対する結
合の説明図。
【図２Ａ】図２Ａは図１Ａで示された２５〜４０番目画
分から収集されたサンプルの２０分間内のＨＰＬＣ溶離
図。
分から収集されたサンプルの２０分間内のＨＰＬＣ溶離
図。
【図２B】図２Ｂは図１Ａで示された溶離サンプルを４
０５ｎｍ波長の吸収性により蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａヘ
の結合を説明する図。
０５ｎｍ波長の吸収性により蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａヘ
の結合を説明する図。
【図３】図３は図２Ａで示された５〜６番目画分から収
集されたサンプルの１５分間内のＨＰＬＣ溶離図、その
中、単一ピークの保持時間１０．７分で、蛋白質ｇｐII
ｂ／IIIａに対して最も強い結合性を示している。
集されたサンプルの１５分間内のＨＰＬＣ溶離図、その
中、単一ピークの保持時間１０．７分で、蛋白質ｇｐII
ｂ／IIIａに対して最も強い結合性を示している。
【図４Ａ】図４Ａは電気スプレーイオン化質量スペクト
ルの検定により、図３のプロフィルで得られた化合物の
分子量が２６８ｇｍ／モルであることを示す。
ルの検定により、図３のプロフィルで得られた化合物の
分子量が２６８ｇｍ／モルであることを示す。
【図４B】図４Ｂは図３のプロフィルで得られた化合物
にナトリウム塩とオリゴーマ（ダイマーから７ポリマ
ー）が存在することの説明図。
にナトリウム塩とオリゴーマ（ダイマーから７ポリマ
ー）が存在することの説明図。
【図５】図５は実施例４で得られた化合物と蛋白質ｇｐ
IIｂ／IIIａの結合曲線を示し、その中、化合物の濃度
が１０ｍｇ／ｍｌである時結合が顕著に増長し、最大結
合量８０％となることを説明。
IIｂ／IIIａの結合曲線を示し、その中、化合物の濃度
が１０ｍｇ／ｍｌである時結合が顕著に増長し、最大結
合量８０％となることを説明。
【図６Ａ】図６Ａは実施例で得られた化合物の血小板凝
集抑制に対する濃度依存性を示し、該化合物が血液中１
０〜１５ｍｇ／ｍｌ濃度である時最大抑制活制活性約８
５％となることを示す。
集抑制に対する濃度依存性を示し、該化合物が血液中１
０〜１５ｍｇ／ｍｌ濃度である時最大抑制活制活性約８
５％となることを示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは実施例４で得られた化合物濃度が１
７．４ｍｇ／ｍｌである時の血小板凝集の抑制活性と時
間との関係を示し、その中、第１４分から１６分の時間
的間隔中に最大の抑制活性の約８５％に達することを示
す。
７．４ｍｇ／ｍｌである時の血小板凝集の抑制活性と時
間との関係を示し、その中、第１４分から１６分の時間
的間隔中に最大の抑制活性の約８５％に達することを示
す。
【図７Ａ】図７Ａは実施例４で得られた化合物を経口授
与（４００ｍｇ／１００ｍｌ／ラット）した後、ｉｎ
ｖｉｖｏにおけるラットの腸間膜静脈の血栓形成抑制と
時間の関係を示す。
与（４００ｍｇ／１００ｍｌ／ラット）した後、ｉｎ
ｖｉｖｏにおけるラットの腸間膜静脈の血栓形成抑制と
時間の関係を示す。
【図７Ｂ】図７Ｂは実施例４で得られた化合物の静脈内
注射による、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットの腸間膜静
脈の血栓形成抑制との関係を示す。
注射による、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットの腸間膜静
脈の血栓形成抑制との関係を示す。
【図７Ｃ】図７Ｃは実施例４で得られた化合物を経口投
与後、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットの腸間膜静脈の血
栓形成抑制と時間との関係を示す。
与後、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットの腸間膜静脈の血
栓形成抑制と時間との関係を示す。
【図８】図８はＥＬＩＳＡ検定により、実施例４で得ら
れた化合物、市販購入のアデノシン及びＲｅｏＰｒｏ
（登録商標）（ａｂｃｉｘｉｍａｂ）を用いてフィブリ
ノーゲンと蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合を比較した結果
を示す。
れた化合物、市販購入のアデノシン及びＲｅｏＰｒｏ
（登録商標）（ａｂｃｉｘｉｍａｂ）を用いてフィブリ
ノーゲンと蛋白質ｇｐIIｂ／IIIａ結合を比較した結果
を示す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 7/02 Ａ６１Ｐ 7/02 9/00 9/00 9/10 9/10 １０１ １０１ １０３ １０３ 15/00 15/00 Ｇ０１Ｎ 33/68 Ｇ０１Ｎ 33/68 Ｃ０７Ｈ 19/167 // Ｃ０７Ｈ 19/167 Ａ６１Ｋ 37/64 Ｆターム(参考） 2G045 BB01 BB14 BB21 BB24 BB48 BB51 DA36 FB06 GC30 4C057 BB02 DD01 LL29 LL41 4C084 AA02 AA03 AA19 BA44 DC35 MA02 ZA401 ZA451 ZA541 ZA542 ZA811 ZC202 ZC422 4C086 AA01 AA02 BA08 CB26 EA27 MA02 MA04 MA07 ZA36 ZA40 ZA45 ZA54 ZA81
Claims (18)
- 【請求項１】 哺乳動物（ヒトを含む）体内に有効量の
アデノシンを投与することを特徴とする哺乳動物（ヒト
を含む）の血小板凝集抑制方法。 - 【請求項２】 哺乳動物（ヒトを含む）体内に有効量の
アデノシンを投与することを特徴とする哺乳動物（ヒト
を含む）の血栓形成抑制方法。 - 【請求項３】 哺乳動物（ヒトを含む）体内に有効量の
アデノシンを投与することを特徴とする哺乳動物（ヒト
を含む）の血栓性塞栓疾患の予防及び治療方法。 - 【請求項４】 該血栓性塞栓疾患がアテローム性動脈硬
化と動脈硬化、急性心筋梗塞、狭心症、一時性虚血発
作、末梢血管疾患、動脈血栓形成、子癇前症、塞栓また
は頚動脈内膜切除術から選ばれる疾患である請求項３に
記載の方法。 - 【請求項５】 哺乳動物（ヒトを含む）体内に有効量の
アデノシン及び抗血栓形成剤を投与する請求項１〜４の
いずれかに記載の方法。 - 【請求項６】 抗血栓形成剤がクマリン、ヘパリン、Ｌ
ＭＷヘパリン、チクロピジン、ヒルジンまたはトロンボ
キサンＡ２シンターゼ抑制剤または受容体拮抗剤から選
ばれる請求項５に記載の方法。 - 【請求項７】 検定サンプルとアデノシンとを接触させ
ることを特徴とするｉｎ ｖｉｖｏにてサンプル中に蛋
白質ｇｐIIｂ／IIIａが存在するかを検定する方法。 - 【請求項８】 哺乳動物（ヒトを含む）体内で血小板凝
集抑制として用いられることを特徴とするアデノシンの
用塗。 - 【請求項９】 抗血栓形成剤として用いられることを特
徴とするアデノシンの用塗。 - 【請求項１０】 有効量のアデノシン及び薬学的に許容
される担体または希釈剤を含むことを特徴とする哺乳動
物（ヒトを含む）血小板凝集抑制の薬学組成物。 - 【請求項１１】 有効量のアデノシン及び薬学的に許容
される担体または希釈剤を含むことを特徴とする哺乳動
物（ヒトを含む）血小板形成抑制の薬学組成物。 - 【請求項１２】 有効量のアデノシン及び薬学的に許容
される担体または希釈剤を含むことを特徴とする哺乳動
物（ヒトを含む）血栓性塞栓疾患の予防及び治療として
の薬学組成物。 - 【請求項１３】 該血栓性塞栓疾患がアテローム性動脈
硬化と動脈硬化、急性心筋梗塞、狭心症、一時性虚血発
作、末梢血管疾患、動脈血栓形成、子癇前症、塞栓また
は頚動脈内膜切除術から選ばれる疾患である請求項１２
に記載の薬学組成物。 - 【請求項１４】 さらに抗血栓形成剤が含まれている請
求項１０〜１３のいずれかに記載の薬学組成物。 - 【請求項１５】 抗血栓形成剤がクマリン、ヘパリン、
ＬＭＷヘパリン、チクロピジン、ヒルジンまたはトロン
ボキサンＡ２シンターゼ抑制剤または受容体拮抗剤から
選ばれる請求項１４に記載の薬学組成物。 - 【請求項１６】 アデノシンを含む第１容器、及び薬学
的に許容される担体または希釈剤を含む第２容器からな
ることを特徴とする、哺乳動物(ヒトを含む)の血小板凝
集及び血栓形成の抑制に用いられるキット。 - 【請求項１７】 アデノシンを含む第1容器、血栓形成
抑制を含む第２容器、及び薬学的に許容される担体また
は希釈剤を含む第３容器からなることを特徴とする、哺
乳動物（ヒトを含む）の血小板凝集及び血栓形成の抑制
に用いられるキット。 - 【請求項１８】 該抗血栓形成剤がクマリン、アスピリ
ン、ヘパリン、ＬＭＷヘパリン、チクロピジン、ヒルジ
ン、またはトロボキサンＡ２シンターゼ抑制剤または受
容体拮抗剤から選ばれる請求項１７に記載のキット。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US70830600A | 2000-11-07 | 2000-11-07 | |
| US09/853524 | 2001-05-10 | ||
| US09/853,524 US20020082241A1 (en) | 2000-11-07 | 2001-05-10 | Adenosine as antithrombotic |
| US09/708306 | 2001-05-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002212080A true JP2002212080A (ja) | 2002-07-31 |
Family
ID=27108053
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001340593A Pending JP2002212080A (ja) | 2000-11-07 | 2001-11-06 | 抗血栓形成剤としてのアデノシン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002212080A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013082738A (ja) * | 2013-01-16 | 2013-05-09 | Soda Aromatic Co Ltd | 血小板凝集抑制剤 |
| KR101876471B1 (ko) * | 2009-05-26 | 2018-07-16 | (주)아모레퍼시픽 | 콩 추출물을 함유하는 혈액 순환 개선 및 혈관 건강 증진용 조성물 |
-
2001
- 2001-11-06 JP JP2001340593A patent/JP2002212080A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101876471B1 (ko) * | 2009-05-26 | 2018-07-16 | (주)아모레퍼시픽 | 콩 추출물을 함유하는 혈액 순환 개선 및 혈관 건강 증진용 조성물 |
| JP2013082738A (ja) * | 2013-01-16 | 2013-05-09 | Soda Aromatic Co Ltd | 血小板凝集抑制剤 |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050726 |
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| A02 | Decision of refusal |
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