CZ20013989A3 - Rekombinantní destičkový kolagenový receptor glykoproteinu VI a jeho farmaceutické pouľití - Google Patents
Rekombinantní destičkový kolagenový receptor glykoproteinu VI a jeho farmaceutické pouľití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20013989A3 CZ20013989A3 CZ20013989A CZ20013989A CZ20013989A3 CZ 20013989 A3 CZ20013989 A3 CZ 20013989A3 CZ 20013989 A CZ20013989 A CZ 20013989A CZ 20013989 A CZ20013989 A CZ 20013989A CZ 20013989 A3 CZ20013989 A3 CZ 20013989A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- gpvi
- platelet
- collagen
- sequence
- recombinant
- Prior art date
Links
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 title abstract description 10
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 title abstract description 10
- 108010048623 Collagen Receptors Proteins 0.000 title description 4
- 102000009268 Collagen Receptors Human genes 0.000 title description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 33
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 17
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 230000007211 cardiovascular event Effects 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 102100038394 Platelet glycoprotein VI Human genes 0.000 claims 3
- 101710194982 Platelet glycoprotein VI Proteins 0.000 claims 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 abstract description 25
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 7
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 abstract description 5
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 4
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 abstract description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 abstract 2
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 abstract 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 16
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 11
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 108010089485 convulxin Proteins 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- GCRLIVCNZWDCDE-SJXGUFTOSA-N n-methyl-n-[(2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl]nonanamide Chemical compound CCCCCCCCC(=O)N(C)C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO GCRLIVCNZWDCDE-SJXGUFTOSA-N 0.000 description 5
- SBWGZAXBCCNRTM-CTHBEMJXSA-N n-methyl-n-[(2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl]octanamide Chemical compound CCCCCCCC(=O)N(C)C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO SBWGZAXBCCNRTM-CTHBEMJXSA-N 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1OCCO IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010010336 Platelet Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000015795 Platelet Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- -1 acetic Chemical class 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 3
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 2
- 241000796533 Arna Species 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- HVIBGVJOBJJPFB-OFQRNFBNSA-N Gly-Pro-Hyp Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)C(O)CC1 HVIBGVJOBJJPFB-OFQRNFBNSA-N 0.000 description 2
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102100037872 Intercellular adhesion molecule 2 Human genes 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 2
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 2
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 2
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 2
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001455 anti-clotting effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 108010017349 glycyl-prolyl-hydroxyproline Proteins 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NVKZKCWZPSNZFD-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonochloridate Chemical compound ClC(=O)ON1C(=O)CCC1=O NVKZKCWZPSNZFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGWULZWUXSCWPX-UHFFFAOYSA-N 2-sulfanylideneimidazolidin-4-one Chemical compound O=C1CNC(=S)N1 UGWULZWUXSCWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710170920 62 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101710122462 65 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101150106774 9 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091023043 Alu Element Proteins 0.000 description 1
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 1
- 206010059245 Angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 229940123228 Collagen inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 241000271538 Crotalus durissus Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- BWLUMTFWVZZZND-UHFFFAOYSA-N Dibenzylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1CNCC1=CC=CC=C1 BWLUMTFWVZZZND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010056764 Eptifibatide Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 1
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 1
- 101000777658 Homo sapiens Platelet glycoprotein 4 Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 101710148794 Intercellular adhesion molecule 2 Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101150044441 PECAM1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 102100031574 Platelet glycoprotein 4 Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 1
- 101710146343 Scaffold protein D13 Proteins 0.000 description 1
- 102000007365 Sialoglycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010032838 Sialoglycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 1
- 229940127090 anticoagulant agent Drugs 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid group Chemical group C(C1=CC=CC=C1)(=O)O WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Substances ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- GLGOPUHVAZCPRB-LROMGURASA-N eptifibatide Chemical compound N1C(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCNC(=N)N)NC(=O)CCSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H]1CC1=CN=C2[C]1C=CC=C2 GLGOPUHVAZCPRB-LROMGURASA-N 0.000 description 1
- 229960004468 eptifibatide Drugs 0.000 description 1
- UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N ethenamine Chemical compound NC=C UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229940083124 ganglion-blocking antiadrenergic secondary and tertiary amines Drugs 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 108010005808 hementin Proteins 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000004394 hip joint Anatomy 0.000 description 1
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 1
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 1
- UWYVPFMHMJIBHE-OWOJBTEDSA-N hydroxymaleic acid group Chemical group O/C(/C(=O)O)=C/C(=O)O UWYVPFMHMJIBHE-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 150000002763 monocarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 108010064773 platelet membrane glycoprotein VI Proteins 0.000 description 1
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001120 potassium sulphate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000719 purinergic P2Y receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108091006084 receptor activators Proteins 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960000103 thrombolytic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 125000005270 trialkylamine group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003628 tricarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
- G01N2015/018—Platelets
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4728—Details alpha-Glycoproteins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/22—Haematology
- G01N2800/222—Platelet disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká glykoproteinu VI (GPVI), jeho izolování, čištění a způsobů pro rekombinantní produkci. Obzvláště se vynález týká použití GPVI, s výhodou rekombinantního GPVI, k léčení poruch a patologických příhod souvisejících přímo nebo nepřímo s poruchami srážení krve, jako jsou trombotické a kardiovaskulární choroby. Mimobuněčného rekombinantního proteinu je také možno použít k zavedení skríningových testů při hledání potenciálních inhibitorů GPVI vázaných na membrány k zabránění interakcím destiček a kolagenu. GPVI na povrchu destiček se v průběhu života destiček in vivo mění a může se ho proto použít jako markéru věkového profilu destiček.
Dosavadní stav techniky
Glykoprotein VI je 62/65 kDa (neredukovaný, případně redukovaný) glykoprotein destičkových membrán, který tvoří komplexy spolu s obecnou subjednotkou Fcgama. Podjednotka GPVI obsahuje vazební místo pro kolagen a podjednotka Fcgama zodpovídá za signalizování. Komplexy se tvoří na hlavních receptorech kolagenu na povrchu destičky, což je rozhodující pro aktivaci destičky v odezvě na kolagen. Rozeznávací sekvence kolagenu sestává ze sekvencí (GlyProHyp)n. Jsou známy pacienti v Japonsku, kteří mají vrozený nedostatek GPVI. Mají mírné problémy s krvácivostí a jejich destičky účinkují jen slabě na kolagen, pravděpodobně vlivem jiných receptorů. Mnoho poznatků se získalo o signalizačních kaskádách vznikajících na GPVI, což se silně podobá signalizačním kaskádám z imunitních receptorů včetně receptorů T-buněk, receptorů B-buněk a receptorů pří2 • · rodních zabíječů buněk. K těmto kaskádám patří obzvláště rodina tyrosinkináz, jako je Fyn a Lyn, stejně jako p72SYK a mnoho jiných tyrosinkináz a fosfatáz a adaptorů proteinů jako je LAT. Hlavním cílem těchto kaskád je aktivace fosfolipázy Cgama2, která štěpí fosfolipidy na sekundární mediátorový diacylglycerol a IP3 . Má se zato, že GPVI se podílí na aktivaci destičkového integrinu «2/31, který má hlavní roli v ulpívání destiček na stěnách poškozených cév. Myši s vyřazenou (knocked out) podjednotkou Fcgama mají destičky, které stále vykazují odezvy na kolagen, což znamená, že zbytkový stav «2/31 může být také regulován komplexem GPVI/Fcgama. Detičkový kolagenový receptor GPVI je úzký vztah k přírodním zabíječům aktivátorů receptorů rodiny p58KAR stejně jako Fc«R.
Adheze a aktivace zbytkových kolujích destiček v místě poškození cévy je prvním stupněm v procesu vedoucím k vytváření trombu, který se přemění v hemostatickou zátku. Kolagen je jednou z hlavních součástí cévní stěny zodpovědný za aktivaci destiček. Existuje mnoho typů kolagenu a sedm z nich se nachází v subendothe1ových vrstvách. Bylo identifikováno několik různých receptorů pro kolagen na destičkách, avšak za hlavní se dnes považuje integrin «3/31 a ne i ntegr inový GPVI. Ačkoli «3Ρ1 je dobře charakterizován, a obě podjednotky byly klonovány a sekvencovány již před několika lety, zůstává struktura GPVI těžko postižitelnou, ačkoli bylo identifikováno několik význaků. Přibližně před dvaceti lety se zjistilo, že GPVI je hlavním destičkovým glykoproteinem s molekulovou hmotností v rozmezí 60 až 65 kDa a s kyselou hodnotou pH. Jeho role jako domnělého receptoru kolagenu byla stanovena po identifikaci pacienta v Japonsku s mírnou poruchou krvácivosti, jehož destičky vykázaly specifický defekt odezvy na kolagen a postrádaly tento receptor. Tento pacient také vyvinul autoproti 1átky proti deficitnímu receptoru a těch se použilo k dalšímu charakterizování molekuly. Nověji se zjistilo, že GPVI je spojen nekovalentně se známou podjednotkou Fcgama, která působí jako signalizační část komplexu. Ukázalo se také, že rozeznávací sekvencí kolagenu pro GPVI je opakující se triplet Gly-Pro-Hyp uvnitř spirální struktury kolagenového tripletu, a že syntetických peptidů založených na této struktuře by se mohlo použít jako specifických agonistů zaměřených na GPVI. Ukázalo se, že komplex GPVI/Fcgama signalizuje do vnitřku destiček mechanismem podobným imunitnímu receptoru, zahrnujícím aktivaci p72SYK a vedoucí kaskádou interakcí kináza/fosfatáza/adaptor proteinu k aktivaci PLCgama2 a tedy k uvolňování granulí a agregaci destiček. Dalším stupněm v charakterizaci této molekuly bylo předvedení, že hadí lectin typu C, convulxin z tropického chřestýše Crotalus durrisus terrificus je schopen aktivovat destičky shlukováním GPVI multimerní interakcí. Ukázalo se, že konvulxin se váže specificky na GPVI, což umožňuje způsob čištění tohoto receptoru ve spojení se zavedenými přístupy.
Z dosavadního stavu techniky se jeví GPVI jako velmi zajímavá sloučenina v mnoha terapeutických oborech, týkajících se především aplikací, jež se vztahují přímo nebo nepřímo ke případům koagulace krve závislým na interakci kolagen-destíčky. Úkolem vynálezu tedy je připravit GPVI v rekombinantní formě a doložit jeho účinnost jako přímého terapeutického cíle nebo jako nástroje ke skrínování krátkých sloučenin, obzvláště chemicky syntetizovaných nebo syntetizovatelných sloučenin majících schopnost inhibovat interakci přírodní destičky-kolagen. Vynález se týká také částí fragmentů proteinu GPVI, které si zachovaly svou biologickou aktivitu, kterou je vazba na kolagen .
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu jsou DNA kódující glykoprotein VI nebo jeho biologicky aktivní fragmenty.
Vynález je úspěšný v čištění přiměřených množství GPVI
- 4 » · · • · • · ·· • · <
pro primární charakterisaci a pro sekvencování peptidu. Sekvencí je použito ke konstrukci positivní sekvence v knihovně DNA použito jako sondy k isolování s knihovny a vypuštění sekvence 5 RACE s knihovny destiček cDNA.
primerů pro PCR k identifikaci Této sekvence DNA je pak téměř úplné sekvence cDNA se síská použitím spůsobu
Vynáles je také užitečný v předvedení použití rekombinantního GPVI jako terapeuticky aplikovatelné sloučeniny, která je schopna při podání pacientovi například s poškosenými krevními cévami, vásat kolagen a tak zabraňovat, aby se destičky, obsahující na membránu vásaný GPVI, vázaly na uvedený kolagen. Rekombinantní rozpustná mimobuněčná doména GPVI obsahuje kolagen vázající místa a může zabraňovat aktivaci destiček kolagenem. Mohla by tudíž být aplikovatelná k léčení chorobných stavů zahrnujících zvýšenou aktivaci destiček kolagenem, jako je atherosklerotické rozrušování krevních destiček u chorob jako je nestabilní angína nebo během chirurgických zásahů jako je perkutanní transluminální koronární angiopiastika (PTCA), kdy se arterie otevírají balónkovým katetrera, což způsobuje značné poškození stěny cév a velkou aktivaci destiček a často vede k pozdějšímu opětnému ucpání cévy. Přednost rekombinantních fragmentů GPVI ve srovnání se současnými léčebnými metodami je v tom, že působí v ranném stavu prevencí nebo redukcí aktivace destiček spíše než potlačením příhod po aktivaci destiček, jako je agregace antagonisty GPIIb-IIIa. Uvolňují se tudíž menší množství obsahu destičkových granulí včetně růstových faktorů a chemokinů, které se podílejí nejenom na opravě ran ale na přestavbě cévních stěn migrací hladkého svalstva a přitažením fagocytových buněk, jako jsou monocyty, o nichž je známo, že přispívají k atherosklerose. Fab fagment humanizovaných myších monoklonálních protilátek proti GPVI by se dalo použít s podobným efektem k blokování GPVI na povrchu destiček s podobnou aplikací jako shora uvedeno.
·· ·· • · · • · · ··
Rekombinantního GPVI podle vynálezu může být použito při vazební zkoušce na kolagen ke skrínování malých molekul (například v kombinačních knihovnmách) schopných inhibovat tuto interakci a kterého může být použito k vyvinutí terapeutických sloučenin které jsou inhibitory interakcí kolagen-destičky. Vhodnou, derivatizací se tyto sloučeniny stávají orálně dostupnými. Hlavním účelem je opět připravit sloučeniny redukující interakce GPVI-kolagen a tedy aktivace destiček v situacích, kdy přicházejí destičky do styku s kolagenem. Skrinovací technologie, použitá podle vynálezu, je dobře zavedená v dosavadním stavu techniky. Při takových skrinovacích zkouškách umožňuje vynález vyhledat a vyvinout nové cíle, které mohou inhibovat GPVI vázané na přírodní membrány na povrchu destiček jako kolagenový antagonist. Takovými cíli mohou být malé chemické molekuly, jež pak mohou být podkladem pro další výzkumy.
Jinou velkou aplikací GPVI a reakčních činidel, která rozeznávají specifické domény GPVI, je použití jako markérů věku a funkčnosti destiček. Mladé destičky se obecně považují za aktivnější a funkčnější než starší. Mladé destičky se váží a jsou aktivovány hadím jedem lektin konvulxin C-typ, který je specifický pro GPVI a jak stárnou, klesá jejich vázání a stupeň aktivace. Může to být způsobeno buď proteolytickými nebo konformačními změnami v GPVI nebo jejich spojením s Fc gama díky aktivaci destiček nebo poruch v jejich oběhu. To může být užitečným parametrem k měření věku a funkčního profilu destiček u pacientů stejně jako u normálních osob během lékařských kontrol. Věkový profil destiček se mění u mnoha chorob ovlivňujících kostní dřeň nebo imunitní systém a mohl by být významným diagnostickým kriteriem, kdyby byly dostupné jiné metody pro jeho stanovení. Například pacienti s chorobami zahrnujícími zvýšený obrat destiček vykazují více mladých destiček, zatímco pacienti po chemoterapii nebo ozařování vykazují stabilně stárnoucí populaci. Takový věkový profil může tedy sloužit k přesnému monitorování léčby. U normální zdravé popuβ
láce je velmi málo známo o rozdělení věkového profilu a jeho úloze jako předvídače změn zdraví. Není známo, zda změny GPVI jsou způsobovány částečným zahrnutím destiček v hemostatických příhodách a zda změny mohou být výraznější u pacientů s rozsáhlou kardiovaskulární chorobou. V současné době se k detekci mladých oběhových destiček obsahujících mRNA používá thiazolové oranže. Tato mRNA se rychle rozkládá, což omezuje metodu na pouze nejmladší destičky. Léčiva, kterých by bylo možno použít v takové zkoušce, by obsahovala specifické GPVI proteiny hadího jedu, jako je konvulxin, nebo monoklonální nebo polyklonální protilátky rozeznávající N-koncovou oblast GPVI nebo monoklonální protilátky rozeznávající nová místa nebo konformace vystavené proteolýzou N-koncových domén nebo specifické konformace přítomné buď v nedotčené molekule a nikoli ve staré a naopak nebo malé chemické jednotky k rozeznání specificky nedotčeného GPVI nebo jeho modifikované formy. Tato reakční činidla by byla značena fluorescenčním markérem nebo spolu s fluorescenčně značenou druhou protilátkou nebo afinitním reakčním činidlem a použita v průtokové cytometrii ke změření vazebního profilu destiček. V dalším stupni by bylo možno přijmout alternativní, méně pracné techniky založené na automatickém měření profilu destiček. S použitím způsobů třídění s průtočnou cytometrií nebo magnetickými kuličkami by mělo být možno oddělovat mladé destičky od starých destiček ke zkoumání faktorů účastnících se odstraňování destiček z oběhu. Reakční činidla rozeznávající specifické formy GPVI by byly klíčem k takovým studiím.
Vynález se tedy týká DNA kódujícího glykoproteinu VI nebo jeho biologicky aktivních fragmentů, obzvláště v sekvenci podle obr. 2.
Vynález se dále týká DNA kódující Glykoprotein VI se sekvencemi aminokyselin podle obr. la a lb.
• v
• · · · • · · • · · ·· * · • · · · ·
Vynález se dále týká farmaceutického prostředku obsahujícího rekombinantní GPVI spolu s farmaceuticky přijatelným ředidlem, nosičem nebo excipientem a jeho použití k výrobě léčiv v terapeutickém oboru trombotických a kardiovaskulárních příhod a poruch souvisejících s interakcemi destíčky-kolagen.
Dále se vynález týká použití rekombinantního GPVI jako skrinovací ho nástroje k detekci specifických inhibitorů interakcí destičky-kolagen.
Vynález se ještě dále týká použití GPVI jako markéru pro věk destiček a účasti na kardiovaskulárních nemocech.
Možnými medikálními indikacemi a aplikacemi jsou například nestabilní angína pectoris, PTCA, použití stentů v této oblasti, operace koronárních cév, obecné operace krevních cév, operace, které mohou poškodit větší krevní cévy jako jsou operace kyčelního kloubu. Kromě toho jsou zahrnuty všechny indikace pocházející z tromboembolických příhod způsobených poruchami interakce mezi cévní stěnou a koagulačním systémem s vysokým rizikem tvoření trombů a ucpání cév.
Jak shora uvedeno, hodí se protein GPVI a jeho fragmenty podle vynálezu jako farmaceuticky účinné sloučeniny ve farmaceutických prostředcích a kombinacích.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou popřípadě obsahovat přídavné aktivní přísady jako jsou anti-koagulanty jako je hirudin nebo heparin nebo trombolytická činidla jako je plasminogenový aktivátor nebo hementin nebo antagonisty jiných receptorů destiček jako jsou antagonisty GPIIb-IIIa jako abciximab nebo eptifibatid nebo antagonisty ADP-receptorů jako je clopidogrel.
Nový protein a jeho biologicky aktivní fragmenty mohou podle vynálezu tvořit farmaceuticky přijatelmé soli s kterou8 φ· ·· φ φ · φ φ φ φφ • · · · • φ · φ kol i farmaceuticky přijatelnou netoxickou organickou nebo anorganickou kyselinou. Anorganickými kyselinami jsou například kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová nebo fosforečná a kyselé kovové soli jako je natriummonohydrogenortofosf át a kaliumhydrogensíran. Příklady organických kyselin jsou monokarboxylové, dikarboxylové a trikarboxylové kyseliny, jako je kyselina octová, glykolová, mléčná, pyrohroznová, malonová, jantarová, glutarová, fumarová, jablečná, vinná, citrónová, askorbová, maleinová, hydroxymale inová, benzoová, hydroxybenzoová, fenyloctová, skořicová, sylicylová a sulfonová, jako je methansulfonová kyselina. Jakožto soli karboxy1ového koncového aminokyselinového podílu se příékladně uvádějí netoxícké soli karboxylové kyseliny tvořené s kteroukoli vhodnou anorganickou nebo organickou zásadou. Jakožto takové soli se příkladně uvádějí soli s alkalickými kovy jako je sodík alkalických zemin jako je vápník a hořčík, s piny IIIA, včetně hliníku a s organickými primárními, sekundárními a terciárními aminy jako jsou trialkylaminy, včetně triethylaminu, prokainu, dibenzylaminu, 1-ethenaminu, Ν, N -dibenzylethylendiaminu, dihydroabiethylaminu a N-alkylpiperidinu.
a draslík, s kovy lehkámi kovy skuVýrazem farmaceuticky přijatelný nosič” se vždy míní inertní, netoxícké pevné nebo tekuté plnidlo, ředidlo nebo kapslovací materiál, nereagující škodlivě s účinnou složkou nebo s pacientem. Vhodné, s výhodou tekuté nosiče jsou v oboru známé, jako je sterilní voda, solanka, vodná dextróza, cukerné roztoky, ethanol, glykoly a oleje, včetně ropného, živočišného, rostlinného nebo syntetického původu, jako je například arašidový, sojový a minerální olej.
Prostředky podle vynálezu se mohou podávat v jednotkových dávkách obsahujících běžné netoxícké farmaceuticky přijatelné nosiče, ředidla, adjuvanty a nosiče, které jsou typické pro parenterální podávání.
♦· · * ··
4 4 »4 44 9 4 4
4 444 4 · · · • 4 4 4 9 4 » · « · • · · 4 4 4 4 4
4 4 9 9 4 4 44 4 4» 4
Pod označením parenterální se míní subkutánní, intravenosní, intra-arti kulární a intratracheální injekční a infusní techniky. Vhodné jsou také jiné druhy podání, jako je orální a topické. Parenterální prostředky a kombinace se nejvhodněji podávají intravenozně buď jako bolus nebo jako konstantní fúze o sobě známými způsoby. Tablety a kapsle k orálnímu podání obsahují běžné excipienty jako jsou pojidla , plnidla, ředidla, tabletovací činidla, mazadla, desintegrátory a smáčedla. Tablety se mohou povlékat způsoby známými v oboru.
Kapalné orální prostředky mohou být ve formě vodných nebo olejových suspenzí, roztoků, emulzí, sirupů nebo elixírů nebo se mohou podávat jako sušený produkt pro smísení s vodou nebo s jiným vhodným nosičem před použitím. Takové kapalné prostředky mohou obsahovat běžné aditivy jako jsou suspenzační činidla, emulgátory, nevodné nosiče a konzervační činidla. Typické prostředky mohou být ve formě vodných nebo olejových suspenzí, roztoků, emulzí, želé nebo s výhodou emulzních mastí
Jednotkové dávky podle vynálezu mohou obsahovat denní požadované množství proteinu podle vynálezu, nebo jejich podíly k vytvoření potřebné dávky. Optimální terapenticky přijatelná dávka a míra dávkování pro daného pacienta (savce včetně lidí) závisí na mnoha činitelech, jako je aktivita použité specifické účinné látky, věk, hmotnost, celkový zdravotní stav, pohlaví, dieta, čas a cesta podání, rychlost uvolňování, účel léčení, například terapie nebo profylaxe, a povaha léčené trombotické nemoci, protidestičková nebo proti sráží ivá ativita.
Proto je v prostředcích a kombinacích užitečných jako proti sráží ivá činidla u léčeného pacienta (in vivo) farmaceuticky účinná denní dávka peptidů podle vynálezu přibližně 0,01 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti, s výhodou 0,1 až 10 mg/kg tělesné hmotnosti. Podle formy podání může jednotková dávka obsahovat 0,5 až 10 mg inhibitoru kolagenu. K dosažení
protisrášlivého účinku v mimotělní krvi je farmaceuticky účinné množství peptidů podle vynálezu 0,2 až 150 mg/1, s výhodou 1 mg až 20 mg/1 mimotělní krve.
Popis obrázků na výkresech
Obr. 1 Proteinová sekvence GPVI (jednopísměnový kód) la = vůdčí sekvence lb: zralý protein
Otevřený čtecí rámec: 339 aminokyselin
Hvězda: glykosilační místo
Dvojité podtržení: transmembránová doména
Podtržení: sekvencované peptidy
Obr. 2 Sekvence nukleotidu GPVI zahrnující volný čtecí rámec 1017 bp plus 3 a 5 oblasti celkem 1249 bp
Vynález blíže objasňuje následující podrobný popis.
Dvě sekvence 7 aminokyselin, vykazující nejmenší degeneraci v genetickém kódu, se volí pro syntesu DNA primerů k zesílení části GPVIcDNA pomocí PCR. Jelikož umístění obou peptidů v proteinu bylo zcela neznámé, připraví se pro každý z nich dva degenerační primery jeden mající smys, druhý nemající smysl (antisense). Těchto primerů je použito k zesílení knihovny kostní dřeně. Kombinace smyslového 5 TYA THC CNG CNA TGA ARMG 3 primerů kódující sekvenci PAříKRSL s ant i smyslovým 5' TTR TAN ARN GCR AAY TGR TC 3' odpovídajícím DQFALYK zesílí fragment DNA 221 bp. Vedle vybraných peptidů kóduje zesílená DNA LysC/AspN peptid DQLELVATGVFAKPSLSAQPGPAVSS, zřetelně spojující sekvenci k cDNA pro GPVI.
Výsledkem skrínování 600 000 pfu z knihovny kostní dřeně s tímto fragmentem 221 bpDNA jsou čtyři positivní pfu. Tři mají inzert 1350 bp byť vyříznutý restrikčním enzymem Sal I nebo • tt tttt ► tt · » tttttttt tttt ♦ tt • tttt tt tttt • tt tt · tttttt
EcoR I a patří do superrodiny IgG. Čtvrtý má insert 4,6 kb digescí Sal I a dává dva fragmenty 2300 bp a 1300 bp při zpracování EcoRI. Jeho DNA kóduje sekvenci 10 peptidů odvozených z aminokyseliny sekvencující GPVI avšak konci těsně u aminozakončení. Nemohl být nalezen startovací methionin nebo vůdčí sekvence, je však přítomno více než 2000 bp předem sekvencovaného nečtecího rámce DNA končící v sekvenci Alu. Pokus 5 koncová RACE se ukončila na destičkové póly ARNA s primery umístěnými v části sekvence GPVI, která byla zesílena sekvencí peptidů. Nalezl se fragment 348 bp včetně 278 bp na sekvenci čtvrtého klonu a 70 bp nové formy bp 1987 odpovídající 14 aminokyselinám včetně prvního methioninu před spadnutím zpět na ustavenou sekvenci GPVI. Bylo tedy možno sekvencovat cDNA obsahující celkem 1249 bp, 25 bp 5 sekvenci proti směru startovacího kodonu, otevřeného čtecího rámce 1017 bp kódujícího protein, včetně vůdčí sekvence, se 339 aminokyselinami a 3 oblastí 207 bp včetně stop kodonu.
cDNA kódující destičky GPVI se klonuje a sekvencuje z knihovny cDNA lidské kostní dřeně pomocí RACE s destičkou mRNA k nahražení chybějící 5 sekvence. Otevřený čtecí rámec 1017 bp kóduje 339 aminokyselin a netranslatovanou oblast 3 . Analysa hydrofobici ty sekvence aminokyselin ukázala přítomnost dvou domnělých transmembránových domén, domnělé signální sekvence 20 aminokyselin a domén 19 aminokyselin mezi zbytky 247 a 265 zralého proteinu. Sekvence a její translace aminokyselin jsou znázorněny na obr. 2 a 1. Porovnání se sekvencí aminokyselin nejvíce podobných molekul nalezených v genové bance (GenBank) ukazuje zřetelně, že patří do superrodiny imunoglobulinu a extracelulární doména obsahuje dvě 1gC2-doménové smyčky tvořené dvěma disulfidovými můstky. Je to membránou pronikající proteinová třída jedné molekuly s N-zakončením na vnějšku a traversuje membránu jednou. Nejtěsněji příbuzné molekuly patří k třídě receptorů přírodního žabí ječe, která obsahuje jak inhibiční, tak aktivační typy. GPVI patří zřejmě do
99 99 99 · • * · 99 «· «9 99
9 9 99 9 9 999
9999· · 9499 9
9999 9 9 «99
99 999 499 99 999 aktivační podtřídy nejenom svou funkcí, ale také, jelikož na rozdíl od inhibiční třídy, neobsahuje sekvence ITIM ve své cytoplasmové doméně. Ani neobsahuje žádné tyrosinové zbytky, které by se mohly podílet na fosforylaci. V jeho doméně je několik zbytků threoninu a šeřinu, ty se však netýkají kriterií pro dohodnoté sekvence kinázy. Podobně jako aktivační třída receptoru NK, obsahuje GPVI zbytek angininu na třetí aminokyselině membránu pronikající domény, která se podílí na tvorbě komplexu s podjednotkou Fc gama. Cytoplasmová doména obsahuje 51 aminokyselin, vykazujících jen malou podobnost (v oblasti těsně pod membránou) s cytoplasmovými doménami této rodiny. To naznačuje, že tato doména GPVI muže být sdružena s různými typy cytoplasmové molekuly spíše než ostatní členy rodiny. GPVI obsahuje pouze samostatné domnělé N-glykolyzační místo u Asn69. Doména těsně nad memránou pod beta vrstvami lg doménového ukončení, je však bohatá na threoninové a serinové zbytky, které by mohly poskytnout O-glykosylační místa, jako se zjistila u GPIbcť a GPV. Hlavní funkce této O-glykosylace spočívá pravděpodobně v poskytnutí receptorové struktury dobře rozšířené z povrchu destiček k usnadnění interakcí s jejich objemnými ligandy. Jelikož GPVI byl nověji stanoven jako sialoglykoprotein, rozdíl v molekulové hmotnosti mezi teoretickou hmotností aminokyselin (37 kDa) a hmotností stanovenou gelovou e1etroforézou (65 kDa sníženou) musí být způsoben jeho glykosylací.
Struktura přírodních žabí jecích receptorů obou doménových typů se zjistila rentgenovými krystalogafickými studiemi a ukázalo se, že obě Ig-domény tvoří ostrý úhel s místem receptoru pro peptid nesoucí antigeny HLA ležícími na vnější straně oblouku. Přímé porovnání struktury vazebního místa peptidu HLA s místem kolagenu bezprostředně naznačuje, proč mají tyto receptory stejný původ, jelikož několikanásobné of šrouboví cové struktury vazebního místa HLA a peptidu, který obsahuje, se silně podobají trojnásobné šroubovicové struktuře kola13
4> ·
Φ» · · • · · » · ♦ · • · ♦·· · « · · ♦ A · * » · · · · ·
99 999 999 • 99
9
9 • 9
9 genu. Má se zato, že přírodní žabí ječí receptory pracují dimerizačním mechanismem se dvěma receptory rozeznávajícími dvě oddělená místa HLA na buňce kterou buňka přírodního žabí ječe zkoumá. Tato dimerizace je možná součástí aktivačního nebo deaktivačního mechanismu, závisejícího na třídě receptoru. V případě GPVI může být také stejně možné, že se dvě molekuly GPVI spojí s jedním Fc gama, jelikož každý monomer dimeru Fc gama má rozlišovací sekvenci. Stechiometrie není však dosud známa a záleží na struktuře kolagenů, kolagenu podobných peptidů, které působí cestou GPVI a konvulxinu, jeví se jako možné, že síla signálu se vztahuje k řadě komplexů GPVI/Fc gama, které jsou spolu propleteny. Jinými receptory destiček patřícími do této Ig-rodiny jsou ICAM-2 (CD102) a PECAM(CD31).
Všechny mikroorganismy, buněčné linie, expresní systémy, hostitelé expresí, plasmidy, promotory, resistanční markéry, replikační původy, restrikční místa nebo jiné fragmenty nebo části vektorů, o kterých je zmínka v popisu ne přímo ve spojení s nárokovaným vynálezem, jsou komerčně nebo jinak obecně dostupné. Za předpokladu, že neexistují jiné překážky, je jich použito pouze jako příkladů a nejsou nezbytné pro podstatu vynálezu a mohou být nahrazeny jinými vhodnými nástroji a biologickými materiály.
Způsoby, které jsou nezbytné podle vynálezu jsou zde podrobně popsány. Jiné způsoby, které nejsou podrobně popsány, jsou známými standardními způsoby pro pracovníky v oboru, nebo jsou popsány podrobněji v uvedených odkazech a v patentové a ve standardní literatuře (například Sambrook a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, Colt Spring Harbor, 1989; Harlov Line (1989) Antibodies: Laboratory Manual, Colt Spring Harbor, 1988).
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení.
* t· »· • · · • · 9 99 · · • · ·
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Materiály
Protein A-Sefarósa, peroxidáaou conjugované kosí anti-myší a anti-králičí protilátky, albunmin hovězího séra, jed hada Crotalus durissus terrificus, aglutinin pšeničných zrn (WGA), N-hydroxysukcinimidylchlorformátem aktivovaná sesítěná 4% kuličková agaróza a Triton X-114 (obchodní produkt společnosti Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) , oktanoyl-N-methy1glukamid (ONMG) a nonanoy1 -N-methylglukamid (NNMG) (obchodní produkt společnosti Oxyl Chemie, Bobbingen, Německo).
Příklad 2
Isolace GPVI z destiček
Membránové glykoproteiny se isolují s destiček shora popsaným způsobem. V podstatě se destičky (se 40 buffy-kos) promyjí a lysují se ve 2% Tritonu X-114 v přítomnosti inhibitorů proteázy. Triton X-114 a vodné fáse se oddělí a detergentová fáse se vnese na sloupec pšeničného aglutinu spojeného se Se pharózou 4B. Destičkové glykoproteiny se eluují sa použití 10 mM Tris HCl, hodnota pH 7,4, 30 mM NaCl, 0,2 % oktanoyl-N-methylglukamidu (ONMG) a 2 % N-acetylglukosami nu. Po dialýse a skoncentrováni se vnese rostok glykoproteinů na sloupec konvulxinu vázaného na N-hydroxy1sukeinamidyl-p-nitrofenylchlorformát aktivovaný sesítěnou 4% srni tou agarózou (1 mg/ml). Sloupec se promyje 4 objemy 10 mM Tris HCl, hodnota pH 7,4, 30 mM NaCl, 0,2 % nonanoyl-N-methylglukamidu (NNMG) a pak 4 objemy 10 mM Tris HCl, hodnota pH 7,4, 30 mM NaCl a 2 % NNMG. GPVI se eluuje 0,08% SDS v 10 mM Tris HCl, hodnota pH 7,4. Rostok se skoncentruje a vnese se na preparační gel 8,50% polyakrylamidu použitím modelu 491 PrepCell (BioRad, CA). Preparativní elektroforéza se provede sa neredukovaných podmínek
ftft ftft ftftft · • ftftftft ft ftft ft · ft ftft ft ftft ftft * ft · ftftft podle instrukcí výrobce. GPVI se eluuje v jediném pásu při 65 kDa. Frakce se promyjí, zkoncentrují na Centricon-30 (Amicon, Beverly, MA) a resuspendují se v 10 mM Tris HCI, hodnota pH 7,4 a 0,1% ONMG.
Příklad 3
Aminokyselinová analysa GPVI
GPVI se digeruje s endoproteinázami LysC a AspN (Boehringer Mannheim Německo). Deset vytvořených peptidů se oddělí reverní fázovou chromatografií HPLC a sekvencuje se na pulzním kapalinovém proteinovém sekvenceru Applied Biosystem model 477A s on-line analyzátorem aminokyseliny feny1thiohydantoin model 120A.
Příklad 4
Zesílení fragmentu 221 bp kódujícího část GPVI z knihovny lambdagtllcDNA
Vzorek (101θ pfu) (destičky vytvářejících jednotek) z knihovny lidské kostní dřeně (Clonetech, Palo Alto, CA) se zesílí pomocí dvou kombinací 4-degeneratových primerů. Koncentrace konečného primeru je 2 μΜ, koncentrace dNTP je 200 μΜ a použije se 2U/100 μΐ reakce AmpliTaqCold (Perkin Elmer, Rotkreuz, v» O
Švýcarsko). Podmínky PCR jsou 5 cyklů při teplotě 37 C následované 30 cykly při teplotě 44 C. Smyslový 19 mer 5 TYATHCCNGCNATGAARMG3 a antismyslový 20 mer 5 TTRTAHARNGCRAAYTGRTC3 zesílí fragment 221 bp, který byl subklonován v Bluescript KS+ (Stratagene. La Jolla, CA) a sekvencuje se použitím soupravy T7 Sequenase kit (Amersham, Švýcarsko).
Příklad 5
Skrínování knihovny lambdagtll cDNA sondou 221 bp GPVI
Fragment 221 bp se odřízne z plasmidu, vyčistí se a ozna16 • a ·· · a a» a • » a a * a a a··· • a · ·· a a a a a aaaaa a aaaa a a a a a a a a a a aa aa aa· ·*· a* aaa čí se of32P-ATP (20MBq/50 pl, Hartmann Analytik, Braunschweig, Německo) pomocí soupravy High Prime Labelling kit (Boehringer Mannheim, Švýcarsko). Skrínuje se knihovna lidské kostní dřeně podle výrobcovy instrukce. Positivní fágy se nechají růst, jejich DNA se isoluje a subklonuje se v BlueScriptu pomocí míst ether EcoRI nebo Sall a sekvencuje se. Sekvencování se provede pomocí systému ABS RACE. Destičkový póly ARNA se připraví shora popsaným způsobem (Power a kol. Cytokine 7, str. 479 aš 482, 1995). Reversní transkripce (30 pl se provede pomocí 5 pg polyARNA primerem 5 TGAATGAGAGCGGTCAGTTCAGC3 (20 pM) dNTP (1 mM),RNAsin (40 U), pufru IX AMV a 20 U AMV reversní transo kriptázy po 20 minut při teplotě 45 C, pak 20 minut při tepo lotě 52 C. Reakční směs se zpracuje 2 pl 6N NaOH 30 minut při o
teplotě 65 C, neutralizuje se 2 pl 6N octovou kyselinou a zkoncentruje se v zařízení Centricon 30 (Amicon). Kotva se váže na první standardní DNA podle protokolu Aptes a Siebert (BioTechniques 15, str. 890 až 893, 1993). Provede se zahnízdění PCR pomocí primerů komplementárního ke kotvě a primerů 5'TTGTACAGAGCAAATTGGTC3' (35 cyklů, 55 °C a následovaný primerem 5 GACCAGAGGCTTCCGTTCTG3 (30 cyklů při teplotě 53 °C).
Nejvyšší pruh (350 bp) se oddělí agarozovou elektroforézou od nižších, subklonuje se na BlueScriptu a sekvencuje se.
Příklad 6
Příprava anti-GPVIFab a F(ab )s
Polyklonální antiséra proti lidské GPVI se generují v králících. Podle popisu se čistí IgG z králičího anti-GPVI antiséra. Provede se digesce IgG imobi 1 izovaným papainem (Pierce) k vytvoření fragmentů Fab podle standardního výrobcova protokolu, Fragmenty Fab se oddělí od nedigerovaného IgG a fragmentů Fc pomocí imobi1 izovaného sloupce Proteinu A (Sigma). Průtok se zavede do dialyzační zkumavky, zkoncentruje se použitím pevného polyethylenglykolu 20 000, opatrně se dialyzuje proti mM Hepes, 140 mM NaCl, 4 mM KC1, hodnota pH 7,4 a uloží se ·* ·· · « ·· <
• · · »· · · · · · · • 1 ·»* · * * 9» » • · · · · · «999 · • · · * 9 9 · 9 9
9· 999 *<· 99
Ο Λ při teplotě 4 C až do použití. Fragmenty F(ab >2 se připraví pepsinovou digescí IgG, hmotnostní poměr emzymu k substrátu 1=50, v 0, 5M acetátového pufru, hodnota pH 4,0, 18 hodin při s
teplotě 37 C. Hodnota pH se opraví na 7,4 zředěným roztokem hydroxidu sodného a vzorek se dialyzuje proti 20 mM fosfátu, hodnota pH 7,4. Fragmenty F(ab >2 se oddělí od nedigerovaného IgG a fragmentů Fc použitím chromatografie Proteinu A. Proteklý produkt se zavede do dialyzační zkumavky, zkoncentruje se použitím pevného polyethylenglykolu 20 000, intenzivně se dialyzuje proti 20 mM Hepes, 140 mM NaCl, 4 mM KC1, hodnota pH
O
7,4 a uloží se v podílech při teplotě -20 C. Promyté destičky se lysují v Tritonu X-114 a oddělení fází se provede na rozpustném materiálu před izolováním membrány glykoproteinů spojených s fází Triton X-114 afinitní chromatografií na aglutinin Sefaróze 4B pšeničných klůíčků, jak shora popsáno. Jelikož GPVI představuje jen velmi malý zlomek shromážděného glykoproteinu destičkových membrán, použije se specifičnosti hadího lektinového konvulxinu typu C k izolaci tohoto receptoru. Afinitní chromatogtafi i na konvulxinu spojeného se Sefarózou 4B se získá protein 65 kDa jako hlavní produkt. Avšak necharakterizovaný materiál jak s vyšším, tak s nižším Mr koelugoval s GPVI a nemohl být odstraněn extensivním promýváním sloupce. Jako konečný stupeň čištění se zařadila preparativní gelová eletroforéza na 8,5% polyakrylamidu. Frakce obsahující GPVI se shromáždí a dají samostatný pruh při reanalyse. Vyčištěný GPVI se testuje na schopnost blokovat shlukování destiček kolagenem. Pozoruje se mírný inhibiční účinek po přidání podílů roztoku GPVI do suspenze destiček. Předběžnou inkubací GPVI s kolagenem před přidáním směsi do suspenze destiček se však může agregaci zabránit způsobem závislým na dávce. Tyto destičky se dále agregovaly po přidání čerstvého kolagen. Za neredukčních podmínek má izolovaný protein Mr 62 kDa s posunem směrem k mírně vyšší Mr (65 kDa) při redukčních podmínkách. Jelikož se zjistilo, že zakončení GPVI je blokováno, digeroval se protein s enzymy LysC a LysC/AspN, což vytvořilo 4 a 6 peptidů,
44 • 4 9 • 4 · ·· • 4 4 4
4 4 4 ♦ 4 44
se kterých byla sekvence získána. Peptidy se oddělí reversní fázovou chromatografií HPLC na sloupci C4 a sekvencují se Edmanovým způsobem. Sekvence aminokyselin těchto peptidů jsou v translatované sekvenci cDNA podtrženy (obr. 1).
Průmyslová využitelnost
Glykoprotein VI (GPVI) zvláště rekombinantní GPVI pro výrobu farmaceutických prostředků k léčení poruch a patologických příhod souvisejících přímo nebo nepřímo s poruchami srážení krve a dále pro skríningové testy při hledání možných inhibitorů GPVI vázaných na membrány k zabránění interakcím destiček a kolagenu.
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. DNA kódující giykoprotein VI nebo jeho biologicky aktivní fragmenty.
- 2. DNA podle nároku 1 obsahující částečně nebo plně sekvenci podle obr. 2.
- 3. DNA podle nároku 1 obsahující sekvenci podle obr. 2.
- 4. DNA podle nároku 1 až 3 kódující giykoprotein VI obsahující sekvenci aminokyselin podle obr. la a lb.
- 5. Rekombinantní lidský giykoprotein VI jako léčivo, obsahující sekvenci aminokyselinovou sekvenci podle obr. lb.
- 6. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, že obsahuje protein podle nároku 5 a farmaceuticky přijatelné ředidlo, nosič nebo excipient.
- 7. Farmaceutický prostředek vyznačujíc! se t i m, že obsahuje přídavně farmakologicky účinnou látku.
- 8. Použití rekombinantního GPVI jako skrinovacího činidla k detekci specifických inhibitorů interakcí destička-kolagen.
- 9. Použití rekombinantního GPVI pro výrobu léčiv v terapeutickém oboru trombotických a kardiovaskulárních příhod a poruch souvisejících s interakcemi destička-kolagen.
- 10. Použití změn GPVI jako markéru pro věk destiček a pro posouzení vystavení destiček trombotickým a kardiovaskulárním stavům nebo příhodám.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99109094 | 1999-05-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20013989A3 true CZ20013989A3 (cs) | 2002-02-13 |
| CZ302693B6 CZ302693B6 (cs) | 2011-09-07 |
Family
ID=8238132
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20013989A CZ302693B6 (cs) | 1999-05-07 | 2000-04-25 | Rekombinantní lidský glykoprotein VI, DNA, která ho kóduje a farmaceutický prostredek, který ho obsahuje |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US7928066B1 (cs) |
| EP (3) | EP2341141B1 (cs) |
| JP (2) | JP5480457B2 (cs) |
| KR (1) | KR100703592B1 (cs) |
| CN (1) | CN1253569C (cs) |
| AR (1) | AR023848A1 (cs) |
| AT (1) | ATE393223T1 (cs) |
| AU (1) | AU775952B2 (cs) |
| BR (1) | BRPI0010325B1 (cs) |
| CA (1) | CA2372515C (cs) |
| CY (2) | CY1108190T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ302693B6 (cs) |
| DE (1) | DE60038675T2 (cs) |
| DK (2) | DK2341141T3 (cs) |
| ES (2) | ES2534652T3 (cs) |
| HK (1) | HK1045714B (cs) |
| HU (1) | HUP0201049A2 (cs) |
| MX (1) | MXPA01011274A (cs) |
| NO (1) | NO333408B1 (cs) |
| PL (1) | PL204449B1 (cs) |
| PT (2) | PT1177289E (cs) |
| RU (1) | RU2287580C2 (cs) |
| SI (1) | SI1177289T1 (cs) |
| SK (1) | SK15762001A3 (cs) |
| WO (1) | WO2000068377A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200110071B (cs) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2287580C2 (ru) | 1999-05-07 | 2006-11-20 | Авентис Фарма Дойчланд Гмбх | Рекомбинантный рецептор коллагена на тромбоцитах гликопротеин vi и его применение в фармацевтике |
| US6245527B1 (en) | 1999-06-30 | 2001-06-12 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules encoding glycoprotein VI and recombinant uses thereof |
| US7291714B1 (en) * | 1999-06-30 | 2007-11-06 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Glycoprotein VI and uses thereof |
| US20040001826A1 (en) | 1999-06-30 | 2004-01-01 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Glycoprotein VI and uses thereof |
| WO2001016321A1 (en) * | 1999-09-01 | 2001-03-08 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Platelet membrane glycoprotein vi (gpvi) dna and protein sequences, and uses thereof |
| EP1224942A1 (en) * | 2001-01-23 | 2002-07-24 | Bernhard Dr. Nieswandt | Use of JAQ1 (monoclonal antibody anti GPVI) as a medicament for the protection against thrombotic diseases |
| AU2002333241B2 (en) * | 2001-07-18 | 2008-09-18 | Merck Patent Gmbh | Glycoprotein VI fusion proteins |
| US7531178B2 (en) | 2002-06-07 | 2009-05-12 | Trigen Gmbh | Immunoadhesin comprising a glycoprotein VI domain |
| EP1369128A1 (en) | 2002-06-07 | 2003-12-10 | Procorde GmbH | Inhibitors of glycoprotein VI and their therapeutic use |
| US20070071744A1 (en) | 2002-06-07 | 2007-03-29 | Gotz Munch | Agents which bind to epitopes of glycoprotein VI |
| DE102004017295A1 (de) * | 2004-04-05 | 2005-11-03 | Zlb Behring Gmbh | Verbindungen, welche die Entfernung von Rezeptoren von Zelllmembranen bewirken oder verhindern, und Verfahren zu ihrem Nachweis |
| WO2005111083A2 (en) | 2004-04-29 | 2005-11-24 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Antibodies specific for glycoprotein vi and methods of producing these antibodies |
| US7645592B2 (en) | 2004-04-29 | 2010-01-12 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Glycoprotein VI antibodies and methods of use thereof |
| US20090041783A1 (en) | 2005-04-28 | 2009-02-12 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Anti-platelet membrane glycoprotein vi monoclonal antibody |
| US20100297116A1 (en) * | 2007-10-31 | 2010-11-25 | Yongge Liu | Uses of a glycoprotein vi (gpvi) inhibitor |
| EP3150750B1 (en) | 2011-04-08 | 2018-12-26 | Prognosys Biosciences, Inc. | Peptide constructs and assay systems |
| EP3184544A1 (en) * | 2015-12-23 | 2017-06-28 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Glycoprotein v inhibitors for use as coagulants |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2143416C (en) | 1993-07-01 | 2003-06-10 | Jurgen Hemberger | Inhibitor of collagen-stimulated platelet aggregation |
| NZ275492A (en) * | 1993-10-22 | 1998-05-27 | Ellerman Pharm Ltd | Peptide analogues of platelet-derived growth factor |
| WO1998031806A2 (en) * | 1997-01-21 | 1998-07-23 | Human Genome Sciences, Inc. | Fc RECEPTORS AND POLYPEPTIDES |
| EP0896002A4 (en) * | 1997-01-29 | 2005-02-02 | Toray Industries | CHIMERIC PROTEINS, THEIR HETERODIMER COMPLEXES AND BLOOD PLATE REPLACEMENT |
| RU2287580C2 (ru) | 1999-05-07 | 2006-11-20 | Авентис Фарма Дойчланд Гмбх | Рекомбинантный рецептор коллагена на тромбоцитах гликопротеин vi и его применение в фармацевтике |
| US7291714B1 (en) * | 1999-06-30 | 2007-11-06 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Glycoprotein VI and uses thereof |
| US20040001826A1 (en) * | 1999-06-30 | 2004-01-01 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Glycoprotein VI and uses thereof |
| US6245527B1 (en) * | 1999-06-30 | 2001-06-12 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules encoding glycoprotein VI and recombinant uses thereof |
| WO2001016321A1 (en) * | 1999-09-01 | 2001-03-08 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Platelet membrane glycoprotein vi (gpvi) dna and protein sequences, and uses thereof |
| AU2002333241B2 (en) | 2001-07-18 | 2008-09-18 | Merck Patent Gmbh | Glycoprotein VI fusion proteins |
| EP1538165A1 (en) | 2003-12-03 | 2005-06-08 | Procorde GmbH | Inhibitors of glycoprotein VI based on monoclonal antibody hgp 5c4 |
-
2000
- 2000-04-25 RU RU2001132140/13A patent/RU2287580C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-04-25 AU AU45555/00A patent/AU775952B2/en not_active Ceased
- 2000-04-25 DK DK11001216T patent/DK2341141T3/en active
- 2000-04-25 DE DE60038675T patent/DE60038675T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-25 EP EP11001216.8A patent/EP2341141B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-25 MX MXPA01011274A patent/MXPA01011274A/es active IP Right Grant
- 2000-04-25 SK SK1576-2001A patent/SK15762001A3/sk unknown
- 2000-04-25 US US09/959,802 patent/US7928066B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-25 AT AT00927035T patent/ATE393223T1/de active
- 2000-04-25 ES ES11001216.8T patent/ES2534652T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-25 KR KR1020017014164A patent/KR100703592B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-04-25 ES ES00927035T patent/ES2304347T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-25 HU HU0201049A patent/HUP0201049A2/hu unknown
- 2000-04-25 EP EP08004264.1A patent/EP1942186B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-25 SI SI200030996T patent/SI1177289T1/sl unknown
- 2000-04-25 PL PL351437A patent/PL204449B1/pl unknown
- 2000-04-25 CA CA2372515A patent/CA2372515C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-25 JP JP2000616343A patent/JP5480457B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-25 PT PT00927035T patent/PT1177289E/pt unknown
- 2000-04-25 PT PT110012168T patent/PT2341141E/pt unknown
- 2000-04-25 EP EP00927035A patent/EP1177289B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-04-25 WO PCT/EP2000/003683 patent/WO2000068377A1/en active IP Right Grant
- 2000-04-25 BR BRPI0010325A patent/BRPI0010325B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-04-25 CN CNB008072922A patent/CN1253569C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-25 CZ CZ20013989A patent/CZ302693B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-04-25 DK DK00927035T patent/DK1177289T3/da active
- 2000-05-04 AR ARP000102136A patent/AR023848A1/es unknown
-
2001
- 2001-11-06 NO NO20015420A patent/NO333408B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-12-06 ZA ZA200110071A patent/ZA200110071B/xx unknown
-
2002
- 2002-09-26 HK HK02107061.7A patent/HK1045714B/zh not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-03-21 US US11/689,385 patent/US8198030B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2007-03-21 US US11/689,392 patent/US20070172480A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-07-11 CY CY20081100731T patent/CY1108190T1/el unknown
-
2010
- 2010-12-20 JP JP2010283409A patent/JP5554696B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-03-11 US US13/046,210 patent/US8278430B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2015
- 2015-04-09 CY CY20151100344T patent/CY1116336T1/el unknown
-
2016
- 2016-03-08 US US15/064,157 patent/US20160207976A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5554696B2 (ja) | 組換え血小板コラーゲン受容体糖タンパク質ｖｉおよびその薬学的使用 | |
| US6998469B2 (en) | Platelet membrane glycoprotein VI (GPVI) DNA and protein sequences, and uses thereof | |
| PL200384B1 (pl) | Polipeptyd blokujący adhezję płytek krwi, sposób jego otrzymywania, zastosowanie i zawierający go preparat farmaceutyczny | |
| CA2378473A1 (en) | Modulation of platelet activation | |
| EP3077048B1 (en) | Compositions and methods of treating thrombosis | |
| JPH1057060A (ja) | 第ＶＩＩＩ因子凝固活性およびｖＷＦ結合活性を示す医薬製剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20180425 |