JP5996558B2 - Csf−1rに対する抗体 - Google Patents
Csf−1rに対する抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5996558B2 JP5996558B2 JP2013552940A JP2013552940A JP5996558B2 JP 5996558 B2 JP5996558 B2 JP 5996558B2 JP 2013552940 A JP2013552940 A JP 2013552940A JP 2013552940 A JP2013552940 A JP 2013552940A JP 5996558 B2 JP5996558 B2 JP 5996558B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- csf
- antibody
- seq
- human
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Description
本出願は、2009年3月11日出願のPCT/EP2009/001733に基づく米国国内段階出願であり、また、2008年3月14日出願の欧州特許出願第08360005.6の優先権および2008年4月10日出願の米国仮出願第61/043,884号の利益を主張する、2010年9月13日出願の米国特許出願第12/922,441号の一部継続出願である。
本出願はEFS−Webにより提出された配列表を含み、引用することによりその全内容を本明細書の一部とする。2011年3月30日に作成された前記ASCIIコピーのファイル名は13026944.txtであり、56,764バイトのサイズである。
CSF−1(コロニー刺激因子−1)は、様々な細胞種によって個々に発現されるサイトカインである。サイトカインは、CSF−1の受容体(CSF−1R)を発現する単核食細胞系譜の細胞に対する分化、増殖および生存因子である(SHERR. Colony-stimulating factor-1 receptor. blood. 1990, vol.75, no.1, p.1-12)。CSF−1Rは、細胞内キナーゼドメインと、5つの免疫グロブリン様サブドメインに組織化されたリガンド結合細胞外領域とを含有するc−fms癌原遺伝子によりコードされているチロシンキナーゼ受容体である。CSF−1に対する応答は、生存、増殖、分化の増大、および機能の可逆的変化をもたらす。c−fms遺伝子はそれ自体、マクロファージ分化マーカーである。c−fmsの発現程度は、リゾチームおよびマクロファージ特異的タンパク質チロシンホスファターゼを含む、他のマクロファージ特異的遺伝子よりも強い(HUME, et al. Regulation of CSF-1 receptor expression. Molecular reproduction and development. 1997, vol.46, no.1, p.46-52)。
p.14404-9)。CSF−1R発現はまた、急性骨髄芽球性白血病およびB細胞慢性リンパ球性白血病においても検出されている(RAMBALDI, et al. Expression of the macrophage colony-stimulating factor and c-fms genes in human acute myeloblastic leukemia cells. Journal of Clinical Investigation. 1988, vol.81, no.4, p.1030-5)。
本発明は、CSF−1Rと、より具体的には、ヒトCSF−1Rと特異的に結合する抗体に関する。
(i)配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、もしくは配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸を含んでなる、少なくとも1つのCDR、
または
(ii)配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、または配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸を含んでなる、少なくとも1つのCDR
を含んでなる。
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列、
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、または
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
の少なくとも5個の連続するアミノ酸を含んでなるCDRの群から互いに独立に選択される。
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列、
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、または
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
の少なくとも5個の連続するアミノ酸を含んでなるCDRの群から互いに独立に選択される。
(i)
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、もしくは
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列
少なくとも5個の連続するアミノ酸を含んでなるCDRの群から互いに独立に選択される2つ、いっそうより好ましくは、3つのCDR、または
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、もしくは
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
の少なくとも5個の連続するアミノ酸を含んでなるCDRの群から互いに独立に選択される、2つ、いっそうより好ましくは、3つのCDR
を含んでなる。
(i)
・配列番号の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、および
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列
で示されるCDRの群から互いに独立に選択される少なくとも1つのCDR、または
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
で示されるCDRの群から互いに独立に選択される少なくとも1つのCDR
を含んでなる。
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列、
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
で示されるCDRの群から互いに独立に選択される少なくとも1つのCDRを含んでなる。
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列、
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
で示されるCDRの群から互いに独立に選択される2、3、4または5つ、いっそうより好ましくは、6つのCDRを含んでなる。
(i)
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列
で示されるCDRの群から互いに独立に選択される2つ、いっそうより好ましくは、3つのCDR、または
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
で示されるCDRの群から互いに独立に選択される、2つ、いっそうより好ましくは、3つのCDR
を含んでなる。
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、および
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列
で示されるCDRを含んでなる。
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
で示されるCDRを含んでなる。
(i)
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列、および
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列
で示されるCDRを含んでなる可変領域;
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列
で示されるCDRを含んでなる可変領域;
(iii)配列番号11、12および13で示される3つのCDRを含んでなる可変領域;
(iv)配列番号14、15および16で示される3つのCDRを含んでなる可変領域;
(v)配列番号17、18および19で示される3つのCDRを含んでなる可変領域;
(vi)配列番号20、21および22で示される3つのCDRを含んでなる可変領域;
(vii)配列番号23、24および25で示される3つのCDRを含んでなる可変領域;
(viii)配列番号26、27および28で示される3つのCDRを含んでなる可変領域
からなる群から互いに独立に選択される。
(i)
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる第1の可変領域と、
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる第2の可変領域と
を含んでなる。
・配列番号11、12および13で示される3つのCDRを含んでなる可変領域、および
・配列番号14、15および16で示される3つのCDRを含んでなる可変領域
を含んでなる。
・配列番号17、18および19で示される3つのCDRを含んでなる可変領域、および
・配列番号20、21および22で示される3つのCDRを含んでなる可変領域
を含んでなる。
・配列番号23、24および25で示される3つのCDRを含んでなる可変領域、および
・配列番号26、27および28で示される3つのCDRを含んでなる可変領域
を含んでなる。
・配列番号6で示される可変領域、および
・配列番号9で示される可変領域
を含んでなる。
(i)
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる重鎖可変領域と、
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる。
(i)
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる可変領域と、
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる可変領域と
を含んでなる。
・配列番号11、12および13で示される3つのCDRを含んでなる可変領域と、
・配列番号14、15および16で示される3つのCDRを含んでなる可変領域と
を含んでなる。
・配列番号17、18および19で示される3つのCDRを含んでなる可変領域と、
・配列番号20、21および22で示される3つのCDRを含んでなる可変領域と
を含んでなる。
・配列番号23、24および25で示される3つのCDRを含んでなる可変領域と、
・配列番号26、27および28で示される3つのCDRを含んでなる可変領域と
を含んでなる。
・配列番号6で示される可変領域と、
・配列番号9で示される可変領域と
を含んでなる。
(i)
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる重鎖可変領域と、
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる。
・配列番号11、12および13で示される3つのCDRを含んでなる重鎖可変領域と、
・配列番号14、15および16で示される3つのCDRを含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる。
・配列番号17、18および19で示される3つのCDRを含んでなる重鎖可変領域と、
・配列番号20、21および22で示される3つのCDRを含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる。
・配列番号23、24および25で示される3つのCDRを含んでなる重鎖可変領域と、
・配列番号26、27および28で示される3つのCDRを含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる。
・配列番号6で示される重鎖可変領域と、
・配列番号9で示される軽鎖可変領域と
を含んでなる。
(i)
・配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる重鎖可変領域と、
(ii)
・配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列で示されるCDR、
・配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列で示されるCDR、および
・配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列で示されるCDR
を含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる、ヒト抗体に関する。
・配列番号11、12および13で示される3つのCDRを含んでなる重鎖可変領域と、
・配列番号14、15および16で示される3つのCDRを含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる、ヒト抗体に関する。
・配列番号17、18および19で示される3つのCDRを含んでなる重鎖可変領域と、
・配列番号20、21および22で示される3つのCDRを含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる、ヒト抗体に関する。
・配列番号23、24および25で示される3つのCDRを含んでなる重鎖可変領域と、
・配列番号26、27および28で示される3つのCDRを含んでなる軽鎖可変領域と
を含んでなる、ヒト抗体に関する。
・配列番号6で示される重鎖可変領域と、
・配列番号9で示される軽鎖可変領域と
を含んでなる、ヒト抗体に関する。
(a)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号2の45番で始まり54番で終わる配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸を有し;
CDR2は、配列番号2の66番で始まり87番で終わる配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸を有し;かつ
CDR3は、配列番号2の117番で始まり126番で終わる配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸を有する)
で定義される第1の可変領域と;
(b)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号4の44番で始まり56番で終わる配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸を有し;
CDR2は、配列番号4の66番で始まり76番で終わる配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸を有し;かつ
CDR3は、配列番号4の109番で始まり117番で終わる配列の少なくとも5個の連続するアミノ酸を有する)
で定義される第2の可変領域と
を含んでなる抗体に関する。
(a)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号11、17および23からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し;
CDR2は、配列番号12、18および24からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し;かつ
CDR3は、配列番号13、19および25からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する)
で定義される第1の可変領域と;
(b)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号14、20および26からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し;
CDR2は、配列番号15、21および27からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し;かつ
CDR3は、配列番号16、22および28からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する)
で定義される第2の可変領域と
を含んでなる抗体に関する。
下記の(i)、(ii)または(iii):
(i)
(a)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号11で示される通りであり;
CDR2は、配列番号12で示される通りであり;かつ
CDR3は、配列番号13で示される通りである)
で定義される第1の可変領域と;
(b)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号14で示される通りであり;
CDR2は、配列番号15で示される通りであり;かつ
CDR3は、配列番号16で示される通りである)
で定義される第2の可変領域;または
(ii)
(a)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号17で示される通りであり;
CDR2は、配列番号18で示される通りであり;かつ
CDR3は、配列番号19で示される通りである)
で定義される第1の可変領域と;
(b)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号20で示される通りであり;
CDR2は、配列番号21で示される通りであり;かつ
CDR3は、配列番号22で示される通りである)
で定義される第2の可変領域;または
(iii)
(a)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号23で示される通りであり;
CDR2は、配列番号24で示される通りであり;かつ
CDR3は、配列番号25で示される通りである)
で定義される第1の可変領域と;
(b)下式:
FR1−CDR1−FR2−CDR2−FR3−CDR3−FR4
(式中、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
ここで、
CDR1は、配列番号26で示される通りであり;
CDR2は、配列番号27で示される通りであり;かつ
CDR3は、配列番号28で示される通りである)
で定義される第2の可変領域
のうちいずれか1つを含んでなる抗体に関する。
・配列番号6のアミノ酸配列を含んでなる第1の可変領域と、
・配列番号9のアミノ酸配列を含んでなる第2の可変領域と
を含んでなる抗体に関する。
・配列番号2のアミノ酸配列を含んでなる第1の可変領域と、
・配列番号4のアミノ酸配列を含んでなる第2の可変領域と
を含んでなる抗体に関する。
・配列番号37(図32参照)および配列番号38からなる群から選択される重鎖と、
・配列番号39、配列番号40および配列番号41からなる群から選択される軽鎖と
を含んでなる抗体に関する。
・配列番号42および配列番号43からなる群から選択される第1の可変領域と、
・配列番号44、配列番号45および配列番号46からなる群から選択される第2の可変領域と
を含んでなる抗体に関する。
l. Selection of phage antibodies by binding affinity. Mimicking affinity maturation. Journal of molecular biology. 1992, vol.226, no.3, p.889-96参照。
・In Vitro試験:本発明による抗体は、CSF−1R受容体との結合に関してIL−34リガンドと競合しない;
・In Vitro試験:本発明による抗体は、CSF−1R受容体との結合に関してCSF−1リガンドと部分的に競合する;
・ADCC試験:正常ヒト末梢血単核細胞の存在下で、本発明の抗体は、CSF1−R発現ヒト細胞、特に、CSF1−R発現ヒト癌細胞に対して抗体依存性細胞傷害性(ADCC)を示す;
・In Vivo試験:本発明の抗体は、CSF1−R発現ヒト癌細胞を持つ非ヒト動物に対して抗腫瘍作用を示す;
・In Vivo試験:本発明の抗体は、CSF1−R発現ヒト癌細胞を持つ、ヒトを含む動物に対して抗腫瘍作用を示す;
・In Vivo試験:本発明の抗体は、AML5細胞のCSF−1依存的増殖を阻害する;
・In Vivo試験:本発明の抗体は、CSF−1RのCSF−1依存的リン酸化を部分的に阻害する;
・In Vivo試験:本発明の抗体は、CSF−1Rに対して直接的な拮抗活性を持たない。
B4−800−5細胞株は、NIH/3T3細胞を、全長ヒトCSF−1Rをコードする発現プラスミドで安定的にトランスフェクトすることにより作出した。B4−800−5細胞上での細胞表面CSF−1R発現を、アイソタイプ対照と比較し、抗ヒトCSF−1R mAb 61701(マウスIgG1、R&D Systems)または2−4A5−4(ラットIgG1,k、GeneTex)を用いた間接免疫染色により確認した(図1、上のパネルおよび中央のパネル)。ハイブリドーマCXIIG6または陰性対照ハイブリドーマからの培養上清をB4−800−5細胞または親NIH/3T3細胞の免疫染色に用いた(図1、下のパネル)。
3×105のTHP−1細胞(ヒトCSF−1R陽性単球性白血病細胞株)を、ハイブリドーマ培養上清、ナイーブまたは抗CSF−1R免疫マウスからの血清(1:1000希釈)、mAb抗CSF−1R 2−4A5−4(GeneTex)もしくは対照ラットIgG1(10μg/ml)のいずれかの存在下、または試薬無しで、4℃にて30分間インキュベートした。冷PBSで2回洗浄した後、細胞を1μg/mlのビオチン化組換えヒトCSF−1とともに30分間インキュベートした。細胞を2回洗浄し、さらに4℃にて30分間、10μg/mlストレプトアビジン−Alexa Fluor488(Invitrogen)とともにインキュベートした。PBSで洗浄し、4%パラホルムアルデヒドで固定した後、細胞染色をフローサイトメトリーにより分析した。
CSF−1R上の、mAb CXIIG6の結合部位を特定するため、CSF−1Rの細胞外領域の、5つの細胞外免疫グロブリン様ドメイン(Met1〜Glu512、R&D Systems)か、3つのみのN末端免疫グロブリン様ドメイン(Met1〜Ser290)のいずれか(双方ともC末端でヒトIgG1のFc領域と融合)を含んでなる可溶型のヒトCSF−1Rを用いてウエスタンブロットを行った。ヒトIgG1 Fcと融合された可溶型のEGFR(R&D Systems)を陰性対照として用いた。
CSF−1依存性マウス骨髄性白血病M−NFS−60細胞株(番号CRL−1838、ATCC)を用いて、ヒトおよびマウスCSF−1Rに対するCXIIG6ハイブリドーマ上清の遮断活性を評価した。5ngの可溶性ヒトCSF−1R(CSF−1R1−512:Fc、R&D Systems製)を、白色96ウェルマイクロプレートにて、ハイブリドーマ上清、mAb 61701(R&D Systems)またはマウスアイソタイプ対照mAbのいずれかの希釈系とともにプレインキュベートした。次に、これらの培養ウェルに、CSF−1の不在下で一晩培養した10E4 M−NFS−60細胞を、0.1ngのヒトCSF−1とともに最終アッセイ容量100μlとして加えた。培養物を37℃で48時間インキュベートし、細胞増殖ELISA(Roche)を用い、BrdUの組み込みにより増殖を定量した。
破骨細胞は、健常な血液ドナーからのPBMCのエルトリエーションによって得られたヒト単球から作製した。簡単にいえば、単球を96ウェルプレートに2×10E4細胞/ウェルで播種し、ハイブリドーマ培養上清、mAbs抗ヒトCSF−1R 61701(R&D Systems)または2−4A5−4(GeneTex)、mAb抗ヒトCSF−1 26730(R&D Systems)、マウスもしくはラットアイソタイプ対照、またはナイーブおよびCSF−1R免疫マウスからの血清のいずれかをハイブリドーマ培養培地で希釈したもので45分間処理した。これらの培養ウェルに完全a−MEM培地をヒトCSF−1およびRANKL(PeproTech、それぞれ25および40ng/ml)とともに、または伴わずに加えた。ハイブリドーマ上清、mAbまたは/およびサイトカインを含む、もしくは含まない培地を9日間、3日ごとに補充した。9日目に馴化培養上清を採取し、ELISAアッセイ(R&D Systems)を用い、全ヒトMMP−9をアッセイした。破骨細胞の形成は、Sigma−Aldrichからの白血球酸性ホスファターゼキットを用い、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ(TRAP)の染色により評価した。
ヒトCSF−1Rを発現するプラスミドでNIH/3T3細胞を安定的にトランスフェクトすることにより得られたB4−800−5細胞株を用いて、CSF−1依存性CSF−1Rリン酸化に対するCXIIG6ハイブリドーマ上清の効果を検討した。細胞を2×10E5細胞/60mmペトリ皿で播種し、48〜72時間培養した。37℃で1時間血清飢餓状態にした後、細胞を37℃で1時間、CXIIG6ハイブリドーマ上清、mAb 2−4A5−4(NeoMarkers)またはアイソタイプ対照mAb(陰性ハイブリドーマ上清で希釈)のいずれかを含有する培養培地で処理し、次に、37℃で5分間、100ng/mlのhCSF−1で刺激するか、または刺激せずにおいた。次に、細胞層を溶解させ、全タンパク質を抽出した。10μgのタンパク質を、ウエスタンブロットを、ウサギpAb c−fms/CSF−1R H300またはウサギpAb p−c−fms/CSF−1R(Tyr708)−R(Santa Cruz Biotechnology)のいずれかで、その後、ヤギ抗ウサギ免疫グロブリンHRPでプロービングすることにより分析した。
チロシンキナーゼ受容体のIII型サブファミリーに属し、細胞外Ig様ドメインにおいてCSF−1Rと相同性を示す一連の精製可溶性受容体:可溶性VEGFR−1、VEGFR−2、Flt−3およびPDGFRβ(4つは総てFc融合タンパク質として発現される)に対してELISAによりmAb CXIIG6の交差反応性を試験するとともに、PDGFRαおよびSCFR(c−kit)をR&D Systemsから入手し、ELISAプレートを被覆するのに用いた。チロシンキナーゼ受容体のEGFRサブファミリーからの可溶性EGFR(R&D Systems)を陰性対照として用いた。
DG44哺乳動物細胞株においてmAb CXIIG6を生産するために、CXIIG6重鎖および軽鎖をコードする遺伝子のクローニングにOptiCHO(商標)抗体発現キット(Invitrogen、カタログ番号12762−019)を用いた。OptiCHO(商標)抗体発現キットは、(1)CMVプロモーターの下流に目的遺伝子のクローニングを可能とする二シストロン性プラスミドpOptiVEC(商標)ベクター(目的遺伝子の転写は、内部リボソームエントリー部位(IRES)によりジヒドロ葉酸レダクターゼ(DHFR)要求性選択マーカーから隔てられ、同じmRNAで目的遺伝子と選択マーカーの転写が可能となる);(2)CMVプロモーターの下流に目的遺伝子のクローニングを可能とするpcDNA(商標)3.3ベクター(このpcDNA(商標)3.3はジェネティシン(登録商標)を用いて選択が可能なネオマイシン耐性遺伝子を含む)を含む。このpOptiVEC(商標)およびpcDNA(商標)3.3ベクターは、目的遺伝子のmRNAの3’末端の適切なプロセシングを命令するTKポリA配列を含む。
mAb CXIIG6の可変ドメインをヒト定常領域と組み合わせた。
ヒト化軽鎖変異体を作製するため、配列番号9で示されるような軽鎖可変領域内で表2に従うアミノ酸置換を行った。
精製組換えマウスCXIIG6(従前に記載の通り)およびそのキメラIgG1変異体(従前に記載されているようなキメラCXIIG6 IgG1)が可溶性ヒトCSF−1Rを遮断することができたかどうかを判定するため、M−NFS−60細胞増殖および破骨細胞分化モデル(従前に記載の通り)で用量応答試験を行った。Rockland(Rockland,010−0141)からの精製ポリクローナルマウスIgG2aおよび本出願者が作製したキメラIgG1を対照抗体として並行して試験した。細胞を、SPRバイオセンサーアッセイにおいて抗原結合により測定される、ある濃度範囲の活性抗CSF−1R抗体に曝すことにより遮断効果を評価した。mAb CXIIG6とそれらの個々の対照mAbとの比較は、同量の全抗体をロードすることによって行った(Fc結合によるSPRバイオセンサーアッセイ)。
これらの実験は、本発明の抗体のエピトープの位置を決定するため、より詳しくは、本発明の抗体が市販のいくつかの抗CSF−1R抗体と同じエピトープと結合するか異なるエピトープと結合するかを判定するために設計されたものである。
ヒトCSF−1R機能に対して遮断活性を有するマウスIgG2aを産生するハイブリドーマCXIIG6の作製は上記に記載されている。CXIIG6 IgG2aの重鎖および軽鎖をクローニングし、配列を決定した(図6および7参照)。mAb CXIIG6の可変ドメインVHおよびVLとヒトIgG1定常領域を組み合わせてモノクローナル抗体のキメラ型(chCXIIG6)を構築した(上記参照)。ヒト抗体配列との相同性を高め、モノクローナル抗体の潜在的免疫原性を減じるために、VHおよびVLドメイン中に突然変異を導入することにより、ヒト化変異体を作製した(図15および16参照)。
A - H27K15抗体のヨウ素− 125 による放射性標識
材料
本発明のモノクローナル抗体H27K15は、2.1mg/mL濃度の水溶液(PBS pH7.5)として提供した。
100μgの抗体に、1.2mCiのNa125I溶液(44.4MBq)および7.6μLの新しく調製したクロラミン−T溶液(リン酸バッファー中1mg/mL)を加えた。室温で2分後に、12.7μLのメタ重亜硫酸ナトリウム(リン酸バッファー中1mg/mL)を加えることにより反応を停止させた。
精製前に、ITLCで決定された放射化学的収量は97.8%であった。
b1 125 I−H27K15の親和性結合の測定
結合親和性の尺度として平衡解離定数(KD)を用いた。125I−H27K15抗体のKDは、一定数の細胞に漸増濃度の放射性標識抗体を加える飽和アッセイにより測定した。
0.5%BSAを含有するPBS中の放射性標識抗体の溶液
EL4−CSF−1R細胞を、最終容量150μL中、漸増濃度の放射性標識抗体とともに、振盪しながら氷上で1時間インキュベートした(50μL PBS/BSA0.5%中2×106細胞)。
EL4−CSF−1R細胞に対するヒト化125I−H27K15抗体の親和性定数および細胞当たりの最大結合部位はPrismソフトウエアにより求めた。
この試験の目的は、免疫反応性のある放射性標識抗体の親和性が非標識抗体と同じかどうかを調べることであった。一定の濃度の放射性標識抗体と非標識抗体の連続希釈系を用いて放射性標識解離結合アッセイを行った。
これらの結合データを図21に示す。
IC50は、放射性標識抗体の50%阻害を達成するのに必要な非標識抗体の濃度である)
を用いて絶対阻害定数Kiに変換した。
IC50値および阻害定数を以下にまとめる。
0.5%BSAを含有するPBS中、放射性標識H27K15抗体の溶液:上記の通り
非標識抗体の溶液
種々の抗体を次のように表で示す。
細胞を、非標識競合物の不在下(総結合:対照ウェル)および50μL中、様々な濃度(上述)の非標識競合物の存在下で、1.5nM 125I−H27K15抗体50μLとともに、振盪しながら氷上で1時間インキュベートした(50μL PBS/BSA0.5%中、2×106細胞)。
これらの結合データを図22に示す。
IC50は、125I−H27K15抗体の50%阻害を達成するのに必要な競合物の濃度であり、
KDは、125I−H27K15抗体の親和性定数である)
を用いて絶対阻害定数Kiに変換した。
CSF−1(1−444)を、ビオチン−NHS(Sigma ref. B3295−10MG)を用いてビオチン化した。ビオチン化CSF−1(0.012μg/mlを100μl/ウェル)を、FC−D1−D5 ヒトCSF−1R(1μg/mLを100μL/ウェル)(R&D systems ref. 329−MR−100)をコーティングしたウェルに加え、結合した分子を、ストレプトアビジン−HRPを用いて検出した。競合実験のために、漸増量のモノクローナル抗体(0.030μg/ml〜200μg/mlを100μl/ウェル)をビオチン化CSF−1とプレインキュベート、同時インキュベートまたはポストインキュベートした。
材料
0.5%BSA 125I−H27K15を含有するPBS中、放射性標識抗体の溶液(上記の通り)。
天然リガンドを用いたこの競合試験では2つの異なるプロトコールを実施した。
A.モノクローナル抗体の発現および精製
キメラCXIIG6、hCXIIG6変異体H19K12、H27K5、H27K15およびリツキシマブを、接着性CHO−K1もしくはCHO−DG44細胞の一時的トランスフェクションか、または安定なCHO−DG44トランスフェクタントのポリクローナルプールのいずれかにより発現させた。
方法
マイクロタイタープレート(Maxisorp、Nunc)を、各ウェル当たり300ngの、R&D Systemsか購入した下記可溶性受容体:CSF−1R20−512−F(カタログ番号329−MR/CF)、(EGFR)2−Fc−6xhis(カタログ番号1129−ER)、Flt−3−Fc−6xhis(カタログ番号368−ST/CF)、PDGFRβ−Fc−6xhis(カタログ番号385−PR/CF)、血管内皮増殖因子受容体(VEGFR)2−Fc−6xhis(カタログ番号357−KD/CF)、VEGFR1−Fc−6xhis(カタログ番号321−FL−050)、ヒトSCFR(カタログ番号332−SR/CF)およびPDGFRαECD(カタログ番号322−PR/CF)でコーティングした。50μlのH27K5、H27K15、H19K12 mAbまたはリツキシマブ(PBS中500ng/ml)のいずれかをウェルに加え、プレートを37℃で1時間インキュベートした。ウェルの効率的なコーティングを制御するため、受容体−ヒトFc融合タンパク質Flt−3−Fc−、PDGFRβ−Fc、VEGFR2−Fc、VEGFR1−Fcをコーティングしたウェルとともに抗ヒトIgG(ヤギ抗ヒトIgG、Sigmaカタログ番号I3382)もインキュベートし、PDGFRα−およびSCFRコーティングウェルは、それぞれ抗PDGF−Rα(マウスIgG1、R&Dsystemsカタログ番号MAB322)および抗SCF−RヤギIgG(R&DSystemsカタログ番号AF332)とともにインキュベートした。抗体結合は、ヒトIgκ軽鎖(Bethyl Laboratories、カタログ番号A80−115P)、ヤギIgG(Santa Cruzカタログ番号sc2033)またはマウスIg(Sigmaカタログ番号A0412)のいずれかに対するセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)コンジュゲートAbで検出した。テトラメチルベンジジン(Sigma、カタログ番号T8665)(0.05M酢酸ナトリウム、0.05Mクエン酸、H2O2 1/7000中、0.1mg/ml)で可視化した後、分光光度計(Berthold、Tristar LB941)を用いて450nmで吸光度を測定し、540nmでの吸光度を差し引くことにより補正した。
chCXIIG6と同様に、これらのヒト化変異体の中に他の受容体ECDのいずれかと免疫反応性を示したものはなかったが、それらは不死化CSF−1R ECDとは強く結合した(図27)。この結果は、ヒト化が他のチロシンキナーゼ受容体の中でもCSF−1Rに対するmAb H19K12、H27K5およびH27K15の特異性を変化させなかったことを示す。
C.1 M−NFS−60細胞増殖アッセイで試験した可溶性CSF−1R−Fcの遮断
方法
M−NFS−60細胞を、CSF−1を含まない完全RPMI−1640培地で2回洗浄し、CSF−1欠乏とするために同じ培地中で一晩インキュベートした。可溶性ヒトCSF−1Rの中和に関してアッセイするために、5ngのヒトCSF−1R20−512−Fcを、完全RPMI−1640培地中、抗体(H27K5、H27K15、H19K12 mAb、chCXIIG6またはリツキシマブ)の連続希釈液の入った白色96ウェルマイクロプレート(ViewPlateTM−96、Packard)中で30分間インキュベートした。次に、これらの培養ウェルに、104個のCSF−1欠乏細胞を、0.1ngのヒトCSF−1とともに最終アッセイ容量100μlで加えた。細胞を37℃で48時間インキュベートし、Rocheからの細胞増殖ELISA(カタログ番号11647223001)を製造者のプロトコールに従って用いて、5−ブロモ−2’−デオキシウリジン(BrdU)の組み込みを2時間行った後に増殖を定量した。ODを分光光度計(Berthold Tristar LB941)で測定した。
マウス骨髄性白血病細胞株M−NFS−60はその増殖がCSF−1に依存し、マウスmAb CXIIG6CSF−1R遮断活性を証明するためにこれまでに使用されてきた。このアッセイでは、M−NFS−60細胞をヒトCSF−1およびヒト可溶性ホモ二量体ジスルフィド結合CSF−1R20−512−Fcとともに培養する。可溶性CSF−1RによるCSF−1の捕捉が細胞増殖の阻害をもたらす。ヒトCSF−1Rを中和する抗体を加えると、可溶性CSF−1RによるCSF−1の捕捉が妨げられ、細胞増殖が回復する。陰性対照リツキシマブの存在下では、可溶性CSF−1Rは、CSF−1により媒介されるM−NFS−60細胞の増殖を完全に阻害した(図28)。H19K12、H27K5およびH27K15は、chCXIIG6と同様に、可溶性CSF−1R20−512−Fcの用量依存的中和をもたらし、細胞増殖を回復させた。GraphPad Prismソフトウエアで5パラメーターロジスティック方程式を用いて計算したND50(最大CSF−1R遮断効果の50%を与える中和用量)は、供試した3つのhCXIIG6変異体で同等であり(それぞれH19K12、H27K5およびH27K15に関して29.8、30.7および29.1ng/ml)、親mAb chCXIIG6(18.1ng/ml)のND50と有意に異なるとは思われなかった。
方法
AML5細胞の免疫細胞化学およびフローサイトメトリー分析
AML5細胞(OCI−AML5、DSMZカタログ番号ACC−247)を免疫細胞化学およびフローサイトメトリーにより分析した。5×105細胞を100μlのPBS中、抗ヒトCSF−1R mAb 3291(マウスIgG1、クローン61701、10μg/ml)(R&D Systemsカタログ番号MAB3291)、マウスIgG1アイソタイプ対照(R&D Systemsカタログ番号MAB002、10μg/ml)、chCXIIG6(10μg/ml)またはリツキシマブのいずれかとともに氷上で30分間インキュベートした。次に、細胞を氷上で30〜45分間、フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗マウスIg(BD Pharmingenカタログ番号550589)またはフルオレセインイソチオシアネートコンジュゲート抗ヒトIgG F(ab’)2(Milliporeカタログ番号AQ112F)のいずれかで標識した。
AML5細胞を、平底(実験1および2、TPPカタログ番号92096)または丸底(実験3、Falconカタログ番号3077)いずれかの96ウェルプレートにて、2.5 E4細胞/100μl/ウェルで播種した。各ウェルに、ヒトCSF−1を含有する100μlの培地を加えた。細胞を48時間培養し、Rocheからの細胞増殖ELISA(カタログ番号11647223001)を製造者のプロトコールに従って用いて、BrdUの組み込みを4時間行った後にそれらの増殖を測定した。ODは分光光度計(Berthold、Tristar LB941)で測定した。4反復ウェルから平均OD+/−semを計算し、GraphPad Prismを用いてlog[CSF−1](ng/ml)に対してプロットし、3パラメーター方程式を用いて非線形回帰曲の当てはめを行った。
細胞を培養し、上記のように96ウェルプレートに播種した。段階的量のchCXIIG6、H27K15、H27K5、H19K12または陰性対照リツキシマブを50μl培地中に加えた。37℃で30分のインキュベーションの後、40ng/ml hCSF−1を含有する50μlの培地を各ウェルに加えた。各実験は、それぞれ各2反復のmAb濃度を含んでなる4つの同じ96ウェルプレートで行った。細胞を48時間培養し、上記のようにBrdUの組み込みを4時間行った後に、それらの増殖を測定した。各プレートからの結果をまずGraphPad Prismを用いて分析し、5パラメーター方程式を用いて非線形回帰曲線の当てはめを行った。4つの供試mAbのうち少なくとも3つに関してGraphPad Prismに当てはまる結果を示すプレートを平均+/−semの計算のために選択した。このようにして、実験1および2は4つのプレートのうち2つからの結果に基づいて分析し(平均は4反復のOD値から計算)、実験3は4つのプレートのうち3つからの結果に基づいて分析した(平均は6つのOD値から計算)。EC50およびR二乗は、各供試mAbについてGraphPad Prismにより計算した。
コロニー刺激因子−1は、ヒト急性骨髄性白血病細胞株OCI−AML5(AML5)の増殖を刺激することが報告されている(Drexler HG, Zaborski M, Quentmeier H., 2007. Cytokine response profile of human myeloid factor-dependent leukaemia cell lines. Leukemia 11:701-8)。AML5細胞を免疫細胞化学およびフローサイトメトリーにより分析した。市販の抗hCSF−1R マウスIgG1 3291での染色(マウスIgG1アイソタイプ対照と比較)およびchCXIIG6での染色(リツキシマブと比較)は陽性であり、AML5細胞が表面CSF−1Rを発現したことを示す(図29A)。
方法
B4−800−5は、マウスNIH/3T3細胞を、ヒトCSF−1Rをコードする発現プラスミドpTG17366で安定的にトランスフェクトすることにより得られた組換え細胞株である。B4−800−5細胞は、60mmペトリ皿当たり2×105細胞で播種し、72時間培養した。細胞は、1%FCSを含有する1mlのDMEM培地にて、実験1時間前に37℃で培養することにより血清飢餓状態とした。
本発明者らは、チロシン708のCSF−1依存的リン酸化に対するhCXIIG6変異体H19K12、H27K5およびH27K15、ならびにchCXIIG6の効果と、それらの促進効果の欠如を検討した。CSF−1の不在下で、どのmAbも、0.1、1または10μg/mlのいずれかで試験した場合、チロシン708でリン酸化されたCSF−1Rに特異的な抗体を用いた場合に見られるような受容体のリン酸化を誘導しなかった。このことは、キメラ型またはヒト化型のいずれのCXIIG6−mAb誘導体も総て、B4−800−5細胞に単独で適用された場合に促進効果を示さないことを示した。
方法
マウスリンパ腫由来T細胞株EL4(ATCCカタログ番号TIB−39)を、ヒト全長CSF−1Rをコードするレンチウイルスベクターで安定的にトランスフェクトすることにより、EL4−CSF−1R組換え細胞株を作出した。表面CSF−1R発現は、mAb CXIIG6(マウスIgG2a)または3291での免疫染色およびフローサイトメトリー分析により確認した(データは示されていない)。
chCXIIG6およびhCXIIG6変異体(ヒトIgG1)のADCC活性を、種々の血液ドナーからのPBMCを用い、標的EL4−CSF−1R細胞で試験した。
chCXIIG6およびhCXIIG6変異体はヒトCSF−1Rに特異的であり、かつ、そのマウス同族体を認識せず、それらのin vivo効果は、ヒトCSF−1R陽性腫瘍を用いたマウスモデルでしか検討できない。しかしながら、ヒトCSF−1の不在下では、ヒトCSF−1Rは不活性のままであり、その機能の遮断を調べることができない。さらに、治療利益をもたらすと予想されるCSF−1R陽性宿主細胞(腫瘍関連マクロファージ、破骨細胞)の遮断は、このモデル系では実現不可能である。ヒトCSF−1R陽性BeWo腫瘍を用いた下記の実験では、腫瘍細胞に対するmAbの細胞傷害効果だけが治療効力をもたらし得る。
in vitroで培養したBeWo細胞をmAb H27K15(リードヒト化抗CSF−1R)で免疫染色し、共焦顕微鏡で蛍光を分析した。陰性対照のリツキシマブと比較した場合の、H27K15で見られた特異的染色は、BeWo細胞がそれらの表面にヒトCSF−1Rを発現することを示す。BeWo細胞は、培養上清のELISA滴定により判定した場合、CSF−1を分泌しない(結果は示されていない)。
400万個のBeWo細胞をNMR1ヌードマウスの側腹部に皮下移植した。マウス11匹の群をキメラCXIIG6の3回の注射(chCXIIG6、PBS中50mg/kg、IP、1、3および7日目に投与)で処置し、別の11匹の群は、同じ方法に基づきリツキシマブアイソタイプ対照で処置した。腫瘍成長の阻害(図31A)およびマウス生存期間の延長(図31B)がchCXIIG6処置マウスで見られたが、このことはヒトCSF−1R陽性BeWo腫瘍をこのmAbで標的化することが治療効果を有することを示す。
下記の2つの改変を加えて上記のプロトコールを繰り返した。
Claims (28)
- CSF−1Rと特異的に結合する、単離された、組換え型の、または精製された抗体であって、
(i)(a)配列番号42からなる第1の可変領域と、(b)配列番号44からなる第2の可変領域;または、
(ii)(a)配列番号43からなる第1の可変領域と、(b)配列番号45からなる第2の可変領域;または、
(iii)(a)配列番号42からなる第1の可変領域と、(b)配列番号46からなる第2の可変領域
を含んでなる、抗体。 - 前記CSF−1Rが、ヒトCSF−1Rである、請求項1に記載の抗体。
- (a)配列番号37からなる重鎖と、(b)配列番号39からなる軽鎖とを含んでなる、請求項1に記載の抗体。
- (a)配列番号38からなる重鎖と、(b)配列番号40からなる軽鎖とを含んでなる、請求項1に記載の抗体。
- (a)配列番号37からなる重鎖と、(b)配列番号41からなる軽鎖とを含んでなる、請求項1に記載の抗体。
- ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、抗原結合フラグメントまたはダイアボディーである、請求項1に記載の抗体。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体をコードする、核酸。
- 請求項7に記載の核酸を含んでなる、ベクター。
- プラスミドまたはウイルス起源である、請求項8に記載のベクター。
- ウイルス起源であり、ポックスウイルス、アデノウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルス、アルファウイルス、泡沫状ウイルスまたはアデノウイルス随伴ウイルスに由来する、請求項9に記載のベクター。
- 前記ポックスウイルスが、ワクシニアウイルスまたはカナリア痘ウイルスである、請求項10に記載のベクター。
- 前記ワクシニアウイルスが、改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)である、請求項11に記載のベクター。
- 請求項7に記載の核酸を含んでなる、細胞。
- 真核細胞である、請求項13に記載の細胞。
- 前記真核細胞が、哺乳動物細胞である、請求項14に記載の細胞。
- 前記哺乳動物細胞が、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞またはベビーハムスター(BHK)細胞である、請求項15に記載の細胞。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体を製造する方法であって、請求項13〜16のいずれか一項に記載の細胞を、前記抗体の発現を可能とする条件下で培養すること、および、前記細胞または前記細胞の周囲の培地から前記抗体を精製することを含んでなる、方法。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体と、薬学上許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。
- 請求項7に記載の核酸と、薬学上許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。
- 請求項8〜12のいずれか一項に記載のベクターと、薬学上許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。
- 薬剤として使用される、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体。
- 薬剤として使用される、請求項7に記載の核酸。
- 薬剤として使用される、請求項8〜12のいずれか一項に記載のベクター。
- 薬剤として使用される、請求項18〜20に記載の医薬組成物。
- 癌、破骨細胞活性の増強に関連する疾患、炎症性疾患および関節リウマチからなる群から選択される疾患の治療に用いられる、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体。
- 癌、破骨細胞活性の増強に関連する疾患、炎症性疾患および関節リウマチからなる群から選択される疾患の治療に用いられる、請求項7に記載の核酸。
- 癌、破骨細胞活性の増強に関連する疾患、炎症性疾患および関節リウマチからなる群から選択される疾患の治療に用いられる、請求項8〜12のいずれか一項に記載のベクター。
- 癌、破骨細胞活性の増強に関連する疾患、炎症性疾患および関節リウマチからなる群から選択される疾患の治療に用いられる、請求項18〜20に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US13/026,944 US8470977B2 (en) | 2008-03-14 | 2011-02-14 | Antibody against the CSF-1R |
US13/026,944 | 2011-02-14 | ||
PCT/EP2012/052043 WO2012110360A1 (en) | 2011-02-14 | 2012-02-07 | Antibody against the csf-1r |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014506572A JP2014506572A (ja) | 2014-03-17 |
JP5996558B2 true JP5996558B2 (ja) | 2016-09-21 |
Family
ID=45808764
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013552940A Expired - Fee Related JP5996558B2 (ja) | 2011-02-14 | 2012-02-07 | Csf−1rに対する抗体 |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8470977B2 (ja) |
EP (1) | EP2675826B1 (ja) |
JP (1) | JP5996558B2 (ja) |
KR (1) | KR101920946B1 (ja) |
CN (2) | CN103476794B (ja) |
AU (1) | AU2012217303B2 (ja) |
BR (1) | BR112013020500A8 (ja) |
CA (1) | CA2825243A1 (ja) |
DK (1) | DK2675826T3 (ja) |
ES (1) | ES2654551T3 (ja) |
HK (1) | HK1203976A1 (ja) |
HU (1) | HUE035617T2 (ja) |
IL (1) | IL227078A (ja) |
MX (1) | MX347020B (ja) |
RU (1) | RU2621859C2 (ja) |
SG (1) | SG191899A1 (ja) |
WO (1) | WO2012110360A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201306869B (ja) |
Families Citing this family (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2567298T3 (es) | 2008-03-14 | 2016-04-21 | Transgene Sa | Anticuerpo contra el CSF-1R |
US8470977B2 (en) | 2008-03-14 | 2013-06-25 | Transgene S.A. | Antibody against the CSF-1R |
RS58693B1 (sr) | 2009-12-10 | 2019-06-28 | Hoffmann La Roche | Antitela koja poželjno vezuju ekstracelularni domen 4 humanog csf1r, i njihova primena |
KR101656548B1 (ko) | 2010-03-05 | 2016-09-09 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 인간 csf-1r에 대한 항체 및 이의 용도 |
EP2542588A1 (en) | 2010-03-05 | 2013-01-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Antibodies against human csf-1r and uses thereof |
TWI713942B (zh) | 2010-05-04 | 2020-12-21 | 美商戊瑞治療有限公司 | 與集落刺激因子1受體(csf1r)結合之抗體類 |
DK2734547T3 (en) | 2011-07-18 | 2017-04-03 | Univ Melbourne | USE OF C-FMS ANTIBODIES |
SG11201401639QA (en) * | 2011-10-21 | 2014-05-29 | Transgene Sa | Modulation of macrophage activation |
WO2013059885A2 (en) | 2011-10-28 | 2013-05-02 | Cephalon Australia Pty Ltd | Polypeptide constructs and uses thereof |
RU2658603C2 (ru) | 2011-12-15 | 2018-06-21 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитела против человеческого csf-1r и их применения |
US20130302322A1 (en) | 2012-05-11 | 2013-11-14 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r) |
WO2014036357A1 (en) | 2012-08-31 | 2014-03-06 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r) |
EP2938635A1 (en) | 2012-11-09 | 2015-11-04 | Transgene SA | Modulation of monocytes, or precursors thereof, differentiation |
BR112015025622A2 (pt) | 2013-04-12 | 2017-07-18 | Morphosys Ag | anticorpo ou fragmento de anticorpo isolado, composição farmacêutica, ácido nucleico, vetor, e célula hospedeira isolada |
US20140314741A1 (en) * | 2013-04-18 | 2014-10-23 | Developmen Center For Biotechnology | Human Antibody against Interleukin-20 and Treatment for Inflammatory Diseases |
AR095882A1 (es) | 2013-04-22 | 2015-11-18 | Hoffmann La Roche | Terapia de combinación de anticuerpos contra csf-1r humano con un agonista de tlr9 |
GB201315487D0 (en) * | 2013-08-30 | 2013-10-16 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
GB201315486D0 (en) * | 2013-08-30 | 2013-10-16 | Ucb Pharma Sa | Antibodies |
AR097584A1 (es) | 2013-09-12 | 2016-03-23 | Hoffmann La Roche | Terapia de combinación de anticuerpos contra el csf-1r humano y anticuerpos contra el pd-l1 humano |
AU2015280362B2 (en) | 2014-06-23 | 2021-03-04 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R) |
ES2833425T3 (es) | 2014-07-16 | 2021-06-15 | Roussy Inst Gustave | Combinación de virus oncolítico con moduladores de punto de control inmunitario |
HUE045108T2 (hu) | 2014-07-16 | 2019-12-30 | Transgene Sa | Onkolitikus vírus immunellenõrzõpont-modulátorok expresszálására |
EP3835323A1 (en) | 2014-10-29 | 2021-06-16 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Combination therapy for cancer |
EA201791421A1 (ru) | 2014-12-22 | 2017-10-31 | Файв Прайм Терапьютикс, Инк. | Антитела против csf1r для лечения pvns |
EP3283527B1 (en) | 2015-04-13 | 2021-01-13 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Combination therapy for cancer |
ES2758480T3 (es) * | 2015-04-28 | 2020-05-05 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Proteína de unión a RGMa y uso de la misma |
JP6851322B2 (ja) * | 2015-05-27 | 2021-03-31 | ユーシービー バイオファルマ エスアールエル | 神経疾患を治療する方法 |
MA42843A (fr) | 2015-09-16 | 2018-07-25 | Ablexis Llc | Anticorps anti-cd115 |
BR112018076029A2 (pt) | 2016-06-16 | 2019-03-26 | Farmhannong Co., Ltd. | métodos e composições para conferir e/ou melhorar tolerância a herbicida com o uso de protoporfirinogênio oxidase ou variante do mesmo |
WO2017220988A1 (en) | 2016-06-20 | 2017-12-28 | Kymab Limited | Multispecific antibodies for immuno-oncology |
EP3486254A4 (en) * | 2016-07-05 | 2019-12-18 | Ibentrus, Inc. | COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF CANCER FOR INHIBITING TUMOR ANGIOGENESIS, CONTAINING A VEGF DEEP-BLOCKING AGENT, AND METHOD FOR PREPARING THE SAME |
EP3504239A1 (en) | 2016-08-25 | 2019-07-03 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Intermittent dosing of an anti-csf-1r antibody in combination with macrophage activating agent |
CN110072553B (zh) | 2016-12-22 | 2023-09-15 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 在抗pd-l1/pd1治疗失败之后抗csf-1r抗体与抗pd-l1抗体组合对肿瘤的治疗 |
CA3039846A1 (en) * | 2017-01-10 | 2018-07-19 | National Yang-Ming University | Method for treating cancer metastasis and composition thereof |
MX2020002301A (es) | 2017-09-13 | 2020-07-13 | Five Prime Therapeutics Inc | Terapia de combinacion de anticuerpos anti receptor del factor estimulante de colonias 1 (csf1r) y anti proteina de muerte programada 1 (pd-1) combinados para cancer pancreatico. |
CN109096397B (zh) * | 2018-07-18 | 2019-04-16 | 博奥信生物技术(南京)有限公司 | 一种抗人csf-1r单克隆抗体及应用 |
TWI733274B (zh) * | 2018-12-13 | 2021-07-11 | 財團法人生物技術開發中心 | 抗人類csf-1r抗體及其用途 |
TW202112812A (zh) * | 2019-05-24 | 2021-04-01 | 香港商安立璽榮生醫(香港)有限公司 | Csf1r抗體、il10融合蛋白及其用途 |
WO2021058718A1 (en) | 2019-09-26 | 2021-04-01 | Roche Diagnostics Gmbh | Anti-csf-1r antibody |
RU2751249C1 (ru) * | 2020-10-28 | 2021-07-12 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | Моноклональное антитело, которое специфически связывается с csf-1r |
CN114907489A (zh) * | 2022-04-24 | 2022-08-16 | 首都医科大学附属北京天坛医院 | 一种可诱导嵌合抗原受体及其应用 |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US317403A (en) * | 1885-05-05 | Seal-lock for car-doors | ||
US245471A (en) * | 1881-08-09 | fabwell | ||
US59113A (en) * | 1866-10-23 | Improvement in horse-rakes | ||
US4603112A (en) | 1981-12-24 | 1986-07-29 | Health Research, Incorporated | Modified vaccinia virus |
FR2583429B1 (fr) | 1985-06-18 | 1989-11-03 | Transgene Sa | Vecteur d'expression de l'interferon u dans les cellules de mammifere, procede pour sa mise en oeuvre et produit obtenu et composition pharmaceutique contenant l'interferon u |
US5710158A (en) | 1991-05-10 | 1998-01-20 | Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. | Aryl and heteroaryl quinazoline compounds which inhibit EGF and/or PDGF receptor tyrosine kinase |
JPH0517367A (ja) | 1991-07-08 | 1993-01-26 | Green Cross Corp:The | 骨粗鬆症治療剤 |
US6005079A (en) | 1992-08-21 | 1999-12-21 | Vrije Universiteit Brussels | Immunoglobulins devoid of light chains |
US5747323A (en) | 1992-12-31 | 1998-05-05 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Retroviral vectors comprising a VL30-derived psi region |
ES2134346T3 (es) | 1993-02-16 | 1999-10-01 | Onyx Pharma Inc | Virus citopatico para el tratamiento y la profilaxis de la neoplasia. |
FR2705686B1 (fr) | 1993-05-28 | 1995-08-18 | Transgene Sa | Nouveaux adénovirus défectifs et lignées de complémentation correspondantes. |
US6107045A (en) * | 1994-06-30 | 2000-08-22 | Oklahoma Medical Research Foundation | Antibodies to lipoproteins and apolipoproteins and methods of use thereof |
FR2727689A1 (fr) | 1994-12-01 | 1996-06-07 | Transgene Sa | Nouveau procede de preparation d'un vecteur viral |
FR2737222B1 (fr) | 1995-07-24 | 1997-10-17 | Transgene Sa | Nouveaux vecteurs viraux et lignee pour la therapie genique |
FR2759382A1 (fr) | 1997-02-10 | 1998-08-14 | Transgene Sa | Nouveaux composes et compositions les contenant utilisables pour le transfert d'au moins une substance therapeutiquement active, notamment un polynucleotide, dans une cellule cible et utilisation en therapie genique |
US7083950B2 (en) | 1998-09-25 | 2006-08-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | High affinity fusion proteins and therapeutic and diagnostic methods for use |
CA2296792A1 (en) * | 1999-02-26 | 2000-08-26 | Genset S.A. | Expressed sequence tags and encoded human proteins |
CA2388298C (en) | 1999-10-28 | 2013-05-14 | Seyedhossein Aharinejad | The use of csf-1 inhibitors |
JP2005525314A (ja) | 2002-01-03 | 2005-08-25 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニム | 抗腫瘍療法のために使用可能な組み合わせ物 |
AR045563A1 (es) | 2003-09-10 | 2005-11-02 | Warner Lambert Co | Anticuerpos dirigidos a m-csf |
ES2543833T3 (es) | 2004-01-07 | 2015-08-24 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Anticuerpo monoclonal M-CSF-específico y usos del mismo |
ES2364147T3 (es) | 2004-01-16 | 2011-08-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Polipéptidos de fusión capaces de activar receptores. |
EP2057465A4 (en) * | 2006-08-09 | 2010-04-21 | Homestead Clinical Corp | SPECIFIC ORGAN PROTEINS AND METHODS OF USE |
DK2188313T3 (en) | 2007-08-21 | 2017-12-11 | Amgen Inc | HUMAN C-FMS ANTI-BINDING PROTEINS |
ES2567298T3 (es) * | 2008-03-14 | 2016-04-21 | Transgene Sa | Anticuerpo contra el CSF-1R |
US8470977B2 (en) * | 2008-03-14 | 2013-06-25 | Transgene S.A. | Antibody against the CSF-1R |
SG11201401639QA (en) * | 2011-10-21 | 2014-05-29 | Transgene Sa | Modulation of macrophage activation |
EP2938635A1 (en) * | 2012-11-09 | 2015-11-04 | Transgene SA | Modulation of monocytes, or precursors thereof, differentiation |
-
2011
- 2011-02-14 US US13/026,944 patent/US8470977B2/en active Active
-
2012
- 2012-02-07 HU HUE12707246A patent/HUE035617T2/en unknown
- 2012-02-07 SG SG2013052584A patent/SG191899A1/en unknown
- 2012-02-07 WO PCT/EP2012/052043 patent/WO2012110360A1/en active Application Filing
- 2012-02-07 CA CA2825243A patent/CA2825243A1/en not_active Abandoned
- 2012-02-07 AU AU2012217303A patent/AU2012217303B2/en not_active Ceased
- 2012-02-07 EP EP12707246.0A patent/EP2675826B1/en active Active
- 2012-02-07 DK DK12707246.0T patent/DK2675826T3/en active
- 2012-02-07 ES ES12707246.0T patent/ES2654551T3/es active Active
- 2012-02-07 BR BR112013020500A patent/BR112013020500A8/pt not_active IP Right Cessation
- 2012-02-07 JP JP2013552940A patent/JP5996558B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-07 KR KR1020137021322A patent/KR101920946B1/ko active IP Right Grant
- 2012-02-07 CN CN201280008872.1A patent/CN103476794B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-07 MX MX2013009362A patent/MX347020B/es active IP Right Grant
- 2012-02-07 RU RU2013141956A patent/RU2621859C2/ru active
- 2012-02-07 CN CN201410224979.0A patent/CN104140467B/zh not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-05-17 US US13/896,932 patent/US9428584B2/en active Active
- 2013-06-20 IL IL227078A patent/IL227078A/en active IP Right Grant
- 2013-09-12 ZA ZA2013/06869A patent/ZA201306869B/en unknown
-
2015
- 2015-05-11 HK HK15104422.3A patent/HK1203976A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-07-19 US US15/214,220 patent/US9982055B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SG191899A1 (en) | 2013-08-30 |
CN103476794B (zh) | 2017-05-03 |
WO2012110360A1 (en) | 2012-08-23 |
RU2013141956A (ru) | 2015-03-27 |
ES2654551T3 (es) | 2018-02-14 |
KR20140032992A (ko) | 2014-03-17 |
AU2012217303B2 (en) | 2016-10-20 |
CN103476794A (zh) | 2013-12-25 |
MX2013009362A (es) | 2014-04-25 |
CA2825243A1 (en) | 2012-08-23 |
US20110178278A1 (en) | 2011-07-21 |
BR112013020500A8 (pt) | 2018-01-09 |
IL227078A (en) | 2017-06-29 |
HUE035617T2 (en) | 2018-05-28 |
CN104140467B (zh) | 2017-05-31 |
EP2675826A1 (en) | 2013-12-25 |
NZ612038A (en) | 2014-09-26 |
US20170002081A1 (en) | 2017-01-05 |
HK1203976A1 (en) | 2015-11-06 |
KR101920946B1 (ko) | 2018-11-21 |
EP2675826B1 (en) | 2017-11-01 |
RU2621859C2 (ru) | 2017-06-07 |
US20130289250A1 (en) | 2013-10-31 |
US9982055B2 (en) | 2018-05-29 |
ZA201306869B (en) | 2014-05-28 |
US8470977B2 (en) | 2013-06-25 |
BR112013020500A2 (pt) | 2016-10-18 |
DK2675826T3 (en) | 2018-01-22 |
JP2014506572A (ja) | 2014-03-17 |
US9428584B2 (en) | 2016-08-30 |
AU2012217303A1 (en) | 2013-07-11 |
MX347020B (es) | 2017-04-06 |
CN104140467A (zh) | 2014-11-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9982055B2 (en) | Antibody against the CSF-1R | |
US9221912B2 (en) | Antibody against the CSF-1R | |
NZ612038B2 (en) | Antibody against the csf-1r |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150119 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20151125 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20151201 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160212 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160325 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160421 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160729 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160824 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5996558 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |