JP5933223B2 - 細胞培養チャンバーとその製造方法、および、この細胞培養チャンバーを利用した組織モデルとその作製方法 - Google Patents
細胞培養チャンバーとその製造方法、および、この細胞培養チャンバーを利用した組織モデルとその作製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5933223B2 JP5933223B2 JP2011246873A JP2011246873A JP5933223B2 JP 5933223 B2 JP5933223 B2 JP 5933223B2 JP 2011246873 A JP2011246873 A JP 2011246873A JP 2011246873 A JP2011246873 A JP 2011246873A JP 5933223 B2 JP5933223 B2 JP 5933223B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vitrigel membrane
- dried
- support
- model
- membrane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title claims description 144
- 238000013334 tissue model Methods 0.000 title claims description 79
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 39
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 374
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 claims description 341
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 82
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 65
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 59
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 54
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 45
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims description 26
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 claims description 26
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 20
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 19
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 claims description 18
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 claims description 18
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 16
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims description 8
- 230000029142 excretion Effects 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 claims description 7
- 231100000478 corneal permeability Toxicity 0.000 claims description 6
- 238000009509 drug development Methods 0.000 claims description 6
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 claims description 6
- 230000010224 hepatic metabolism Effects 0.000 claims description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 claims description 6
- 238000003466 welding Methods 0.000 claims description 6
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 claims description 5
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 claims description 4
- 206010059516 Skin toxicity Diseases 0.000 claims description 4
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 claims description 4
- 238000013210 evaluation model Methods 0.000 claims description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 4
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 claims description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000007056 liver toxicity Effects 0.000 claims description 4
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 claims description 4
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 claims description 4
- 231100000438 skin toxicity Toxicity 0.000 claims description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 128
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 127
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 127
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 127
- 239000010408 film Substances 0.000 description 66
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 45
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 34
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 34
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 34
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 33
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 24
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 23
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 22
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 22
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 19
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 19
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 18
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 14
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 14
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 10
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 description 9
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 9
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 9
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 9
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- -1 transparency Substances 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 229920002799 BoPET Polymers 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 5
- 210000002782 epithelial mesenchymal cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 4
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 4
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 4
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 3
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 3
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013335 3D tissue model Methods 0.000 description 2
- 206010015946 Eye irritation Diseases 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003522 acrylic cement Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 2
- 231100000013 eye irritation Toxicity 0.000 description 2
- 210000003976 gap junction Anatomy 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000031891 intestinal absorption Effects 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- DBSABEYSGXPBTA-RXSVEWSESA-N (2r)-2-[(1s)-1,2-dihydroxyethyl]-3,4-dihydroxy-2h-furan-5-one;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O DBSABEYSGXPBTA-RXSVEWSESA-N 0.000 description 1
- 229920002818 (Hydroxyethyl)methacrylate Polymers 0.000 description 1
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 102000010970 Connexin Human genes 0.000 description 1
- 108050001175 Connexin Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000009331 Experimental Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100037369 Nidogen-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003940 Occludin Human genes 0.000 description 1
- 108090000304 Occludin Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 1
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 1
- 229920006397 acrylic thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012237 artificial material Substances 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 description 1
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 108010015046 cell aggregation factors Proteins 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012822 chemical development Methods 0.000 description 1
- 231100000045 chemical toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 description 1
- 210000000399 corneal endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003560 epithelium corneal Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000001703 glandular epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 239000012943 hotmelt Substances 0.000 description 1
- 239000003845 household chemical Substances 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N hydron Chemical compound [H+] GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000005732 intercellular adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 231100000286 mucous membrane, eye irritation or corrosion testing Toxicity 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 229920006284 nylon film Polymers 0.000 description 1
- 108010008243 osteopoietin Proteins 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 1
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 239000005060 rubber Substances 0.000 description 1
- 229920006298 saran Polymers 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N tert-butyl prop-2-enoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)C=C ISXSCDLOGDJUNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004416 thermosoftening plastic Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/10—Petri dish
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
- C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/02—Membranes; Filters
- C12M25/04—Membranes; Filters in combination with well or multiwell plates, i.e. culture inserts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/14—Scaffolds; Matrices
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
<1>筒状の枠体の一方の開放端面にビトリゲル膜乾燥体が被覆固定されていることを特徴とする1室型細胞培養チャンバー。
<2>ビトリゲル膜乾燥体の形状は、枠体の開放端面と略同形状であることを特徴とする前記1室型細胞培養チャンバー。
<3>ビトリゲル膜乾燥体は、ウレタン系接着剤によって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする前記1室型細胞培養チャンバー。
<4>ビトリゲル膜乾燥体は、両面テープによって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする前記1室型細胞培養チャンバー。
<5>ビトリゲル膜乾燥体は、熱溶着によって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする前記1室型細胞培養チャンバー。
<6>枠体には、ビトリゲル膜乾燥体が被覆固定されている端面と対向する開放端面の外周縁部に、外側へ突出する係止部が配設されていることを特徴とする前記1室型細胞培養チャンバー。
<7>2つの筒状の枠体が、対向する開放端面同士の間にビトリゲル膜乾燥体を介在させた状態で互いに連結固定され、ビトリゲル膜乾燥体を介して第1室および第2室が形成されていることを特徴とする2室型細胞培養チャンバー。
<8>ビトリゲル膜乾燥体の形状は、枠体の開放端面と略同形状であることを特徴とする前記2室型細胞培養チャンバー。
<9>ビトリゲル膜乾燥体は、ウレタン系接着剤によって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする前記2室型細胞培養チャンバー。
<10>ビトリゲル膜乾燥体は、両面テープによって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする前記2室型細胞培養チャンバー。
<11>ビトリゲル膜乾燥体は、熱溶着によって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする前記2室型細胞培養チャンバー。
<12>2つの枠体は、対向する開放端面同士の周囲が外側からフィルム状接着部材によって接着固定されていることを特徴とする前記2室型細胞培養チャンバー。
<13>前記1室型細胞培養チャンバー内のビトリゲル膜乾燥体上に播種された細胞が単層または多層培養されて構築された組織モデル。
<14>化学物質の経皮吸収モデル、角膜透過性モデル、腸管等の消化管吸収モデル、肺等の気道吸収モデル、血管透過性モデル、肝代謝モデル、腎糸球体濾過排泄モデル、皮膚毒性評価モデル、角膜毒性評価モデル、口腔粘膜毒性評価モデル、神経毒性評価モデル、肝臓毒性評価モデル、腎臓毒性評価モデル、胚発生毒性評価モデル、薬剤開発のための血管新生モデル、癌浸潤モデルのうちのいずれかであること特徴とする<13>の組織モデル。
<15>前記1室型細胞培養チャンバー内のビトリゲル膜乾燥体上に1種以上の細胞を播種し、単層または多層培養する工程を含むことを特徴とする組織モデルの作製方法。
<16>前記2室型細胞培養チャンバー内のビトリゲル膜乾燥体の両面に播種された細胞が単層または多層培養されて構築された組織モデル。
<17>化学物質の経皮吸収モデル、角膜透過性モデル、腸管等の消化管吸収モデル、肺等の気道吸収モデル、血管透過性モデル、肝代謝モデル、腎糸球体濾過排泄モデル、皮膚毒性評価モデル、角膜毒性評価モデル、口腔粘膜毒性評価モデル、神経毒性評価モデル、肝臓毒性評価モデル、腎臓毒性評価モデル、胚発生毒性評価モデル、薬剤開発のための血管新生モデル、癌浸潤モデルのうちのいずれかであること特徴とする<16>の組織モデル。
<18>前記2室型細胞培養チャンバー内に組織モデルを作製する方法であって、以下の工程:第1室側から、ビトリゲル膜上に細胞を播種し、単層または多層培養する工程;および培養チャンバーの上下を反転させ、第2室側から、ビトリゲル膜上に細胞を播種し、単層または多層培養する工程を含むことを特徴とする組織モデルの作製方法。
<19>以下の工程:(1)基板上にビトリゲル膜乾燥体が剥離可能なフィルムを敷き、このフィルム上に配置した壁面鋳型内部にハイドロゲルを形成し、ハイドロゲル内の自由水の一部を基板と壁面鋳型の間隙から流出させる工程;(2)壁面鋳型を基板上から除去する工程;(3)ハイドロゲルを乾燥させて残留する自由水を除去し、ガラス化したハイドロゲル乾燥体を作製する工程;(4)ハイドロゲル乾燥体を再水和してビトリゲル膜を作製する工程;(5)ビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、ガラス化したビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;(6)フィルムに吸着した状態のビトリゲル膜乾燥体をフィルムとともに基板上から剥離させ、筒状の枠体の一方の開放端面にビトリゲル膜乾燥体側を接着固定する工程;(7)ビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程;および(8)ビトリゲル膜乾燥体からフィルムを除去する工程
を含むことを特徴とする1室型細胞培養チャンバーの製造方法。
<20>以下の工程:(1)容器内部に支持体を内包したハイドロゲルを形成し、これを乾燥させて自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;(2)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;(3)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、容器内にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;(4)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して容器から剥離させた後、マグネットで挟持した状態で乾燥させることで、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;(5)筒状の枠体の一方の開放端面に、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を接着固定する工程;および(6)支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程を含むことを特徴とする1室型細胞培養チャンバーの製造方法。
<21>以下の工程:(1)基板上に配置した壁面鋳型内部に、支持体を内包したハイドロゲルを形成し、ハイドロゲル内の自由水の一部を基板と壁面鋳型の間隙から流出させる工程;(2)壁面鋳型を基板上から除去する工程;(3)支持体を内包したハイドロゲルを乾燥させて残留する自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;(4)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;(5)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、基板上にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;(6)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して基板から剥離させた後、マグネットで挟持した状態で乾燥させることで、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;(7)筒状の枠体の一方の開放端面に、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を接着固定する工程;および(8)支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程を含むことを特徴とする1室型細胞培養チャンバーの製造方法。
<22>以下の工程:(1)容器内部に支持体を内包したハイドロゲルを形成し、これを乾燥させて自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;(2)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;(3)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、容器内にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;(4)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して容器から剥離させた後、フィルム上に載置する工程;(5)筒状の枠体の一方の開放端面に、再水和され、フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜のビトリゲル膜側を接着固定する工程;(6)フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜を乾燥させて、フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;(7)フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程;および(8)支持体付きビトリゲル膜乾燥体からフィルムを除去する工程を含むことを特徴とする1室型細胞培養チャンバーの製造方法。
<23>前記<19>から<22>のいずれかの方法で製造された1室型細胞培養チャンバーの筒状の枠体に接着固定されたビトリゲル膜乾燥体または支持体付きビトリゲル膜乾燥体の非接着面側から、前記筒状の枠体と同一の平断面形状からなる別の筒状の枠体の開放端面を当接させて、2つの筒状の枠体同士の間にビトリゲル膜乾燥体または支持体付きビトリゲル膜乾燥体を介在させた状態で枠体同士を互いに連結固定する工程を含むことを特徴とする2室型細胞培養チャンバーの製造方法。
(1)基板上にビトリゲル膜乾燥体が剥離可能なフィルムを敷き、このフィルム上に配置した壁面鋳型内部にハイドロゲルを形成し、ハイドロゲル内の自由水の一部を基板と壁面鋳型の間隙から流出させる工程
(2)壁面鋳型を基板上から除去する工程
(3)ハイドロゲルを乾燥させて残留する自由水を除去し、ガラス化したハイドロゲル乾燥体を作製する工程
(4)ハイドロゲル乾燥体を再水和してビトリゲル膜を作製する工程
(5)ビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、ガラス化したビトリゲル膜乾燥体を作製する工程
本発明において、「ハイドロゲル」とは、高分子が化学結合によって網目状構造をとり、その網目に多量の水を保有した物質を指し、より具体的には、天然物由来の高分子や合成高分子の人工素材に架橋を導入してゲル化させたものをいう。
2室型細胞培養チャンバーYは、枠体1同士の接着を解除することもできる。
(1)容器内部に支持体を内包したハイドロゲルを形成し、これを乾燥させて自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;
(2)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;
(3)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、容器内にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(4)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して容器から剥離させた後、マグネットで挟持した状態で乾燥させることで、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(5)筒状の枠体の一方の開放端面に、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を接着固定する工程;および
(6)支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程
を含む。
(1)基板上に配置した壁面鋳型内部に、支持体を内包したハイドロゲルを形成し、ハイドロゲル内の自由水の一部を基板と壁面鋳型の間隙から流出させる工程;
(2)壁面鋳型を基板上から除去する工程;
(3)支持体を内包したハイドロゲルを乾燥させて残留する自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;
(4)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;
(5)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、基板上にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(6)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して基板から剥離させた後、マグネットで挟持した状態で乾燥させることで、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(7)筒状の枠体の一方の開放端面に、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を接着固定する工程;および
(8)支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程
を含む。
第4実施形態では、例えば、以下の工程:
(1)容器内部に支持体を内包したハイドロゲルを形成し、これを乾燥させて自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;
(2)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;
(3)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、容器内にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(4)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して容器から剥離させた後、フィルム上に載置する工程;
(5)筒状の枠体の一方の開放端面に、再水和され、フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜を接着固定する工程;
(6)フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜を乾燥させて、フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(7)フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程;および
(8)支持体付きビトリゲル膜乾燥体からフィルムを除去する工程
を含む。
基板として、直径60mmの疎水性ポリスチレン製培養シャーレ(Falcon # 35-1007)の底表面を用いた。また、壁面鋳型としては、外円の直径が39mmで内円の直径が35mmで高さが10.0mmのアクリルを用いた。パラフィルム(Pechiney Plastic Packaging社製)は、直径50mmの円形に切断して用いた。なお、壁面鋳型およびパラフィルムともに70% エタノールを噴霧して拭き取る滅菌処理を施してから使用した。具体的には、直径60mmの疎水性ポリスチレン製培養シャーレの底表面上に直径50mmの円形に切断した1枚のパラフィルムを敷いて、その上に1つの壁面鋳型を設置することで、基板上に敷いたパラフィルムと壁面鋳型を分離できる1つの容器を作製した。
従来、ビトリゲル膜乾燥体は、培養シャーレに付着した状態で作製されていたため、膜状態で取り扱うことはできなかったため、例えば、パームセルのような2相性容器に水分を含むビトリゲル膜を物理的に挟み込むことでビトリゲル膜を固定したチャンバーを作製することが試みられていた。しかしながら、その作製に伴う操作は煩雑であり、大量生産を実現することは困難であった。
アクリル製の円筒チューブの一方の開放端面にウレタン系接着剤を塗布し、パラフィルムと重層化しているコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を当接させ、さらに、円筒チューブの上から重り載せて両者を密着状態とした。そして、密着状態の円筒チューブとコラーゲンビトリゲル膜乾燥体とを室温で十分換気しながら静置することで両者を接着固定した。さらに、コラーゲンビトリゲル膜乾燥体は、円筒チューブから外側にはみ出した部分を切断し、円筒チューブの端面形状と対応させ、その後、接着固定されているコラーゲンビトリゲル膜乾燥体からパラフィルムを剥離させ、底面にコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を有する1室型細胞培養チャンバーを作製した。
上記の方法で1室型細胞培養チャンバーを作製し(第1室)コラーゲンビトリゲル乾燥体側の非接着面側から、同径かつ高さの低い別体の円筒チューブ(第2室)を当接させ、パラフィルムによって当接部分を外側から被覆することで、コラーゲンビトリゲル乾燥体を挟んで2つの枠体同士を連結固定した。これによって、コラーゲンビトリゲル膜乾燥体を介して2室(第1室、第2室)が形成されている2室型細胞培養チャンバーを作製した。
上記の1室型細胞培養チャンバーを使用した。以下では、本発明のチャンバーと、市販のチャンバー(後述の比較例)とを区別するため、本発明のチャンバーを便宜的に「ビトリゲルチャンバー」と記載する(実施例4および実施例6においても同様)。
ビトリゲルチャンバーを容器内に吊り下げた形態で保持しビトリゲルチャンバー内に10mg/mlBSAを含有したリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を500μl、容器内にPBSを1ml注入した(図12)。これを保湿インキュベーター(37.0℃, 5%CO2 / 95%空気)内で16時間静置した後、容器内のPBS中のBSA濃度をQuick Startプロテインアッセイキット(バイオ・ラッド ラボラトリーズ(株)#500-0201JA)で測定した。その結果、BSA濃度は2.1mg/mlであり、BSAはビトリゲル膜を透過した。
市販のコラーゲン膜チャンバー(高研(株):細胞培養用透過性コラーゲン膜 #CM-24)のタンパク質透過性を調べるため、上記(1)に記載したビトリゲルチャンバーと同様の試験を行った。(ただし、チャンバーの大きさがビトリゲルチャンバーと比べ小さいため、チャンバー内の液量を337μl, 容器内の液量を674μlとして、チャンバー内の液の高さおよびチャンバー内外の液量比がビトリゲルチャンバーと同じになるようにした。)その結果、容器内のPBS中のBSA濃度はキットの検出下限以下であり、BSAは市販品のコラーゲン膜を透過しなかった。
(1)実施例
ビトリゲルチャンバーを容器内に吊り下げる形態(図5(A)(B)に例示)で保持し、ビトリゲルチャンバー内に培養液[10%非動化ウシ胎児血清(Sigma#F2442)、20mM HEPES(GIBCO BRL #15630)、100units/ml ペニシリン、100μg/ml ストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培養液(GIBCO BRL #11885-084)]に懸濁したPC-12細胞を2.5×103個/cm2となるように播種した。また、容器内に培養液のみまたはNGF(upstate #01-125)を5ng/ml含有する培養液を1.2ml注入した(図13)。これを保湿インキュベーター(37.0℃, 5%CO2 / 95%空気)内で2日間静置培養した後、位相差顕微鏡で細胞の形態を観察した。
同様の実験を市販のコラーゲン膜チャンバー(高研(株):細胞培養用透過性コラーゲン膜 #CM-24)で行った。その結果、NGFの有無にかかわらすPC-12細胞の形態は球形で神経様突起の伸張は認められなかった(図14下欄)。すなわち、容器内のNGFはPC-12細胞に作用しなかった。
(1)1室型細胞培養チャンバーを利用した組織モデル
図15は、1室型細胞培養チャンバーを利用した組織モデルの構築工程を示した概要図である。この実施例では、図4(A)(B)に例示した形態の1室型細胞培養チャンバーを利用している。また、図16は、培養された角膜モデル凍結切片の染色像を示した図である。
図18は、図11の模式図に例示した形態に対応する各層の細胞の写真である。
(1)実施例
ビトリゲルチャンバー上で作製した角膜上皮モデル(実施例5(1))のビトリゲル膜(角膜上皮細胞層が付着している)をメスでアクリル円筒から切り離した。このビトリゲル膜をTissue-Tek O.C.T.コンパウンド(Sakura Finetek製)中に包埋して凍結した。凍結した試料をクライオスタット(LEICA製CM3050S)内で厚さ5μmに薄切したところ、ビトリゲル膜に細胞層が付着した(正常な)状態の切片が得られた。(図16に、切片のHE染色像および免疫染色像を示す)。
市販のPET膜チャンバー(ミリポア製)内でビトリゲルチャンバーと同じ手順で角膜上皮モデルを作製した。ビトリゲルチャンバーと同じ手順で凍結切片を作製したところ、PET膜の部分で試料が割れてPET膜が細胞層から剥離しPET膜に細胞層が付着した(正常な)状態の切片が得られなかった(図19)。
以下の工程A〜工程Cによって、フィルムが吸着していないビトリゲル膜乾燥体を作製した。なお、以下の工程における、環状ナイロン膜支持体付きコラーゲンビトリゲル膜の作製は、本発明者によって出願されたWO2005/014774および特開2007-185107号公報の方法を踏まえている。
以下の工程A〜工程Cによって、フィルムが吸着していないビトリゲル膜乾燥体を作製した。
実施例7、8で作製したコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を、以下の方法で筒状の枠体へ接着固定した。
a)ウレタン系接着剤を用いた接着固定
アクリル製の円筒チューブ(外形15mm、内径11mm)の一方の開放端面にウレタン系接着剤(セメダイン、No. UM700)を塗布し、そこに、実施例7、8で作製した環状マグネットで挟んだコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を当接させて両者を密着状態とし、接着固定した。さらに、環状マグネットで挟んだコラーゲンビトリゲル膜乾燥体は、円筒チューブから外側にはみ出した部分を切断し、円筒チューブの端面形状と対応させ、底面にコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を有する1室型細胞培養チャンバーを作製した。
b)両面テープを用いた接着固定
アクリル製の円筒チューブ(外形15mm、内径11mm)の一方の開放端面に円筒チューブの端面と同じサイズに切り抜いたアクリル接着系両面テープ(日東電工 No.57115B)を貼り付け、そこに、実施例7、8で作製した環状マグネットで挟んだコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を密着させ、接着固定した。さらに、環状マグネットで挟んだコラーゲンビトリゲル膜乾燥体は、円筒チューブから外側にはみ出した部分を切断し、円筒チューブの端面形状と対応させ、底面にコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を有する1室型細胞培養チャンバーを作製した。
c)熱溶着を用いた接着固定
ポリスチレン製またはアクリル製の円筒チューブ(外形15mm、内径11mm)の一方の開放端面に、実施例7、8で作製した環状マグネットで挟んだコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を当接させて、両者が接触している部分にのみにヒートシーラーを用いて熱を作用させて、接着固定した(熱溶着した)。さらに、環状マグネットで挟んだコラーゲンビトリゲル膜乾燥体は、円筒チューブから外側にはみ出した部分を切断し、円筒チューブの端面形状と対応させ、底面にコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を有する1室型細胞培養チャンバーを作製した。
以下の工程A〜工程Dによって、筒状の枠体にビトリゲル膜が接着固定された細胞培養チャンバーを作製した。
工程B; 再度、シャーレ内に2.0mlのPBSを加えて再水和し、さらにシャーレの内壁を周囲に沿って先の鋭敏なピンセットでなぞることで、環状ナイロン膜支持体付きコラーゲンビトリゲル膜をシャーレ底面および壁面より剥離した。
工程A; 2室型細胞培養チャンバーの第2室内のコラーゲンビトリゲル膜乾燥体上に、培養液(DMEM, 10%FBS, 20mM HEPES, 100units/mlPenicillin, 100μg/mlStreptomycin, 0.1mM l-Ascorbic acid phosphate, magnesium salt n-hydrate)500μlに懸濁したヒト皮膚線維芽細胞1×104個を播種し、保湿インキュベーター(37.0℃, 5%CO2/95%空気)内で8日間静置培養することで、線維芽細胞にコラーゲン産生と細胞層の多層化を誘導させた。
2 ビトリゲル膜乾燥体
3 フィルム
4 係止部
X 1室型細胞培養チャンバー
Y 2室型細胞培養チャンバー
Claims (23)
- 筒状の枠体の一方の開放端面にビトリゲル膜乾燥体が被覆固定されていることを特徴とする1室型細胞培養チャンバー。
- ビトリゲル膜乾燥体の形状は、枠体の開放端面と略同形状であることを特徴とする請求項1の1室型細胞培養チャンバー。
- ビトリゲル膜乾燥体は、ウレタン系接着剤によって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする請求項1または2の1室型細胞培養チャンバー。
- ビトリゲル膜乾燥体は、両面テープによって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする請求項1または2の1室型細胞培養チャンバー。
- ビトリゲル膜乾燥体は、熱溶着によって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする請求項1または2の1室型細胞培養チャンバー。
- 枠体には、ビトリゲル膜乾燥体が被覆固定されている端面と対向する開放端面の外周縁部に、外側へ突出する係止部が配設されていることを特徴とする請求項1から5のいずれかの1室型細胞培養チャンバー。
- 2つの筒状の枠体が、対向する開放端面同士の間にビトリゲル膜乾燥体を介在させた状態で互いに連結固定され、ビトリゲル膜乾燥体を介して第1室および第2室が形成されていることを特徴とする2室型細胞培養チャンバー。
- ビトリゲル膜乾燥体の形状は、枠体の開放端面と略同形状であることを特徴とする請求項7の2室型細胞培養チャンバー。
- ビトリゲル膜乾燥体は、ウレタン系接着剤によって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする請求項7または8の2室型細胞培養チャンバー。
- ビトリゲル膜乾燥体は、両面テープによって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする請求項7または8の2室型細胞培養チャンバー。
- ビトリゲル膜乾燥体は、熱溶着によって枠体の開放端面に固定されていることを特徴とする請求項7または8の2室型細胞培養チャンバー。
- 2つの枠体は、対向する開放端面同士の周囲が外側からフィルム状接着部材によって接着固定されていることを特徴とする請求項7から11のいずれかの2室型細胞培養チャンバー。
- 請求項1から6のいずれかの1室型細胞培養チャンバー内のビトリゲル膜乾燥体上に播種された細胞が単層または多層培養されて構築された組織モデル。
- 化学物質の経皮吸収モデル、角膜透過性モデル、腸管等の消化管吸収モデル、肺等の気道吸収モデル、血管透過性モデル、肝代謝モデル、腎糸球体濾過排泄モデル、皮膚毒性評価モデル、角膜毒性評価モデル、口腔粘膜毒性評価モデル、神経毒性評価モデル、肝臓毒性評価モデル、腎臓毒性評価モデル、胚発生毒性評価モデル、薬剤開発のための血管新生モデル、癌浸潤モデルのうちのいずれかであることを特徴とする請求項13の組織モデル。
- 請求項1から6のいずれかの1室型細胞培養チャンバー内のビトリゲル膜乾燥体上に1種以上の細胞を播種し、単層または多層培養する工程を含むことを特徴とする組織モデルの作製方法。
- 請求項7から12のいずれかの2室型細胞培養チャンバー内のビトリゲル膜乾燥体の両面に播種された細胞が単層または多層培養されて構築された組織モデル。
- 化学物質の経皮吸収モデル、角膜透過性モデル、腸管等の消化管吸収モデル、肺等の気道吸収モデル、血管透過性モデル、肝代謝モデル、腎糸球体濾過排泄モデル、皮膚毒性評価モデル、角膜毒性評価モデル、口腔粘膜毒性評価モデル、神経毒性評価モデル、肝臓毒性評価モデル、腎臓毒性評価モデル、胚発生毒性評価モデル、薬剤開発のための血管新生モデル、癌浸潤モデルのうちのいずれかであることを特徴とする請求項16の組織モデル。
- 請求項7から12のいずれかの2室型細胞培養チャンバー内に組織モデルを作製する方法であって、以下の工程:
第1室側から、ビトリゲル膜上に細胞を播種し、単層または多層培養する工程;および
培養チャンバーの上下を反転させ、第2室側から、ビトリゲル膜上に細胞を播種し、単層または多層培養する工程
を含むことを特徴とする組織モデルの作製方法。 - 以下の工程:
(1)基板上にビトリゲル膜乾燥体が剥離可能なフィルムを敷き、このフィルム上に配置した壁面鋳型内部にハイドロゲルを形成し、ハイドロゲル内の自由水の一部を基板と壁面鋳型の間隙から流出させる工程;
(2)壁面鋳型を基板上から除去する工程;
(3)ハイドロゲルを乾燥させて残留する自由水を除去し、ガラス化したハイドロゲル乾燥体を作製する工程;
(4)ハイドロゲル乾燥体を再水和してビトリゲル膜を作製する工程;
(5)ビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、ガラス化したビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(6)フィルムに吸着した状態のビトリゲル膜乾燥体をフィルムとともに基板上から剥離させ、筒状の枠体の一方の開放端面にビトリゲル膜乾燥体側を接着固定する工程;
(7)ビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程;および
(8)ビトリゲル膜乾燥体からフィルムを除去する工程
を含むことを特徴とする1室型細胞培養チャンバーの製造方法。 - 以下の工程:
(1)容器内部に支持体を内包したハイドロゲルを形成し、これを乾燥させて自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;
(2)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;
(3)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、容器内にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(4)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して容器から剥離させた後、マグネットで挟持した状態で乾燥させることで、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(5)筒状の枠体の一方の開放端面に、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を接着固定する工程;および
(6)支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程
を含むことを特徴とする1室型細胞培養チャンバーの製造方法。 - 以下の工程:
(1)基板上に配置した壁面鋳型内部に、支持体を内包したハイドロゲルを形成し、ハイドロゲル内の自由水の一部を基板と壁面鋳型の間隙から流出させる工程;
(2)壁面鋳型を基板上から除去する工程;
(3)支持体を内包したハイドロゲルを乾燥させて残留する自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;
(4)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;
(5)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、基板上にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(6)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して基板から剥離させた後、マグネットで挟持した状態で乾燥させることで、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(7)筒状の枠体の一方の開放端面に、基板から脱離した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を接着固定する工程;および
(8)支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程
を含むことを特徴とする1室型細胞培養チャンバーの製造方法。 - 以下の工程:
(1)容器内部に支持体を内包したハイドロゲルを形成し、これを乾燥させて自由水を除去し、ガラス化した支持体付きハイドロゲル乾燥体を作製する工程;
(2)支持体付きハイドロゲル乾燥体を再水和して、支持体付きビトリゲル膜を作製する工程;
(3)支持体付きビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、容器内にガラス化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(4)支持体付きビトリゲル膜乾燥体を再水和して容器から剥離させた後、フィルム上に載置する工程;
(5)筒状の枠体の一方の開放端面に、再水和され、フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜のビトリゲル膜側を接着固定する工程;
(6)フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜を乾燥させて、フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体を作製する工程;
(7)フィルムと重層化した支持体付きビトリゲル膜乾燥体の形状を、枠体の開放端面と略同形状に成形する工程;および
(8)支持体付きビトリゲル膜乾燥体からフィルムを除去する工程
を含むことを特徴とする1室型細胞培養チャンバーの製造方法。 - 請求項19から22のいずれかの方法で製造された1室型細胞培養チャンバーの筒状の枠体に接着固定されたビトリゲル膜乾燥体または支持体付きビトリゲル膜乾燥体の非接着面側から、前記筒状の枠体と同一の平断面形状からなる別の筒状の枠体の開放端面を当接させて、2つの筒状の枠体同士の間にビトリゲル膜乾燥体または支持体付きビトリゲル膜乾燥体を介在させた状態で枠体同士を互いに連結固定する工程を含むことを特徴とする2室型細胞培養チャンバーの製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011246873A JP5933223B2 (ja) | 2010-11-12 | 2011-11-10 | 細胞培養チャンバーとその製造方法、および、この細胞培養チャンバーを利用した組織モデルとその作製方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010254255 | 2010-11-12 | ||
JP2010254255 | 2010-11-12 | ||
JP2011246873A JP5933223B2 (ja) | 2010-11-12 | 2011-11-10 | 細胞培養チャンバーとその製造方法、および、この細胞培養チャンバーを利用した組織モデルとその作製方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012115262A JP2012115262A (ja) | 2012-06-21 |
JP5933223B2 true JP5933223B2 (ja) | 2016-06-08 |
Family
ID=46051062
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011246873A Active JP5933223B2 (ja) | 2010-11-12 | 2011-11-10 | 細胞培養チャンバーとその製造方法、および、この細胞培養チャンバーを利用した組織モデルとその作製方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130280807A1 (ja) |
EP (1) | EP2639293B1 (ja) |
JP (1) | JP5933223B2 (ja) |
CN (1) | CN103261394B (ja) |
WO (1) | WO2012063925A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11814488B2 (en) | 2017-05-17 | 2023-11-14 | National Agriculture And Food Research Organization | Production method and production apparatus for dried vitrigel membrane |
Families Citing this family (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103622762A (zh) * | 2012-08-23 | 2014-03-12 | 上海国睿生命科技有限公司 | 一种组织工程软骨的构建方法 |
JP6124051B2 (ja) * | 2013-02-01 | 2017-05-10 | 国立大学法人九州工業大学 | 細胞培養シート、およびその製造方法、並びにこれを用いた細胞培養容器 |
EP3041926B1 (en) * | 2013-09-05 | 2020-03-04 | Universität Bern | Device for in-vitro modelling in-vivo tissues of organs |
JP6189787B2 (ja) | 2014-04-28 | 2017-08-30 | 豊田合成株式会社 | 細胞培養器具 |
JP6425420B2 (ja) * | 2014-05-27 | 2018-11-21 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 細胞培養チャンバーとその製造方法、細胞培養チャンバーを利用した細胞培養方法および細胞培養キット |
DE102014222547B3 (de) * | 2014-11-05 | 2016-02-25 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Bioreaktorsystem und Verfahren zur Langzeitstabilisierung von Korneagewebe |
WO2016141137A1 (en) * | 2015-03-03 | 2016-09-09 | President And Fellows Of Harvard College | Methods of generating functional human tissue |
EP3383992A4 (en) | 2015-12-04 | 2019-10-02 | President and Fellows of Harvard College | MICROFLUIDIC DEVICES WITH UPPER OPENING AND METHODS OF SIMULATING A FUNCTION OF A FABRIC |
CN108291188B (zh) * | 2015-12-04 | 2023-03-10 | 公立大学法人大阪府立大学 | 细胞培养容器及观察用样品室 |
US20210230526A1 (en) | 2016-06-28 | 2021-07-29 | National Agriculture And Food Research Organization | Cell enclosure device and use for same |
KR20190104159A (ko) | 2017-01-18 | 2019-09-06 | 고쿠리츠겐큐가이하츠호징 노우교 · 쇼쿠힝 산교기쥬츠 소고겐큐기코 | 반투막 및 그 사용 |
JP6840629B2 (ja) * | 2017-06-16 | 2021-03-10 | 豊田合成株式会社 | 細胞培養器具および細胞培養方法 |
WO2019073951A1 (ja) | 2017-10-12 | 2019-04-18 | 国立大学法人東京工業大学 | 多能性幹細胞から肝細胞への分化誘導方法 |
JP7083144B2 (ja) | 2017-12-12 | 2022-06-10 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 吸引管付き細胞封入用デバイス及びその使用 |
CN107993294A (zh) * | 2017-12-14 | 2018-05-04 | 山东数字人科技股份有限公司 | 一种局部解剖数据处理方法、装置及系统 |
WO2019132008A1 (ja) * | 2017-12-28 | 2019-07-04 | 国立大学法人東京大学 | 人工組織灌流デバイス、人工組織を用いた薬剤評価方法 |
FR3078712B1 (fr) * | 2018-03-12 | 2020-03-06 | Centre D'etude Des Cellules Souches (Cecs) | Procede et dispositif pour la preparation d'un implant issu d'une culture de cellules souches |
WO2020054659A1 (ja) | 2018-09-10 | 2020-03-19 | 国立大学法人東京工業大学 | 多能性幹細胞から腸細胞の作製方法 |
WO2020213634A1 (ja) * | 2019-04-18 | 2020-10-22 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 細胞培養装置及びその使用 |
WO2021075451A1 (ja) * | 2019-10-18 | 2021-04-22 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 血液組織関門インビトロモデル、及び薬物の血液組織関門移行性評価方法 |
EP3839033A1 (en) * | 2019-12-20 | 2021-06-23 | Comenius University in Bratislava | Device for the three-dimensional culture of cells |
JP7462452B2 (ja) * | 2020-03-27 | 2024-04-05 | 株式会社日立製作所 | 培養細胞の分化レベルを評価するための評価装置および評価方法、並びに自動細胞培養システム |
US20210309952A1 (en) * | 2020-04-06 | 2021-10-07 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Systems for cell plate co-culture |
JP2022061818A (ja) | 2020-10-07 | 2022-04-19 | ウシオ電機株式会社 | マイクロ流体デバイス及びマイクロ流体デバイスの使用方法 |
US20220340848A1 (en) * | 2021-04-23 | 2022-10-27 | The Charles Stark Draper Laboratory Inc. | Highly deformable porous membrane culture system and actuation methods for studying the effects of biomechanical stretch on cultured tissue |
CN113189317A (zh) * | 2021-04-29 | 2021-07-30 | 广东省人民医院 | 一套人工血管三维静态培养的实验装置及其使用方法 |
JP7296046B1 (ja) | 2021-12-22 | 2023-06-22 | 東洋製罐グループホールディングス株式会社 | 細胞培養膜、及び生体組織の製造方法 |
WO2024090514A1 (ja) * | 2022-10-27 | 2024-05-02 | 株式会社アンズコーポレーション | 三次元皮膚モデル |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3081130B2 (ja) * | 1995-02-23 | 2000-08-28 | 科学技術振興事業団 | 細胞外マトリックス成分含有ハイドロゲル薄膜 |
US20020086423A1 (en) * | 1997-09-09 | 2002-07-04 | Toshiaki Takezawa | Hydrogel thin film containing extracellular matrix components |
US6071304A (en) * | 1998-04-06 | 2000-06-06 | Augustine Medical, Inc. | Wound treatment apparatus with a heater adhesively joined to a bandage |
DE10133870A1 (de) * | 2001-07-12 | 2003-02-06 | Chris P Lohmann | Ophthalmisches Mittel, Verwendung von EGF zur Behandlung von Dry Eye-Syndrom und Insert zur Verabreichung von EGF am Auge |
JPWO2005014774A1 (ja) * | 2003-08-11 | 2006-10-26 | 独立行政法人農業生物資源研究所 | 動物細胞の培養担体と、該培養担体を用いた動物細胞の培養方法および移植方法 |
WO2007032224A1 (ja) * | 2005-09-13 | 2007-03-22 | Arblast Co., Ltd. | 培養細胞シート及びその作製方法 |
JP2007167002A (ja) * | 2005-12-22 | 2007-07-05 | Asahi Techno Glass Corp | 細胞培養用カセット、細胞培養用カセット着脱用治具及び細胞培養装置 |
JP4817847B2 (ja) | 2006-01-11 | 2011-11-16 | 独立行政法人農業生物資源研究所 | 磁気付与型ハイドロゲル薄膜 |
JP4677559B2 (ja) | 2006-02-02 | 2011-04-27 | 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | 任意の形状のビトリゲルと、当該ビトリゲルの製造方法 |
WO2007114897A2 (en) * | 2006-04-04 | 2007-10-11 | Northeastern University | Devices and methods for the isolation and cultivation of microorganisms |
US20100047907A1 (en) * | 2008-08-19 | 2010-02-25 | Absorption System Group LLC | Methods of transporting epithelial cell monolayers |
JP2010188887A (ja) | 2009-02-18 | 2010-09-02 | Jtekt Corp | 車両用操舵装置 |
-
2011
- 2011-11-10 WO PCT/JP2011/076009 patent/WO2012063925A1/ja active Application Filing
- 2011-11-10 CN CN201180054332.2A patent/CN103261394B/zh active Active
- 2011-11-10 EP EP11839327.1A patent/EP2639293B1/en active Active
- 2011-11-10 JP JP2011246873A patent/JP5933223B2/ja active Active
- 2011-11-10 US US13/884,651 patent/US20130280807A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11814488B2 (en) | 2017-05-17 | 2023-11-14 | National Agriculture And Food Research Organization | Production method and production apparatus for dried vitrigel membrane |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2639293B1 (en) | 2021-10-20 |
WO2012063925A1 (ja) | 2012-05-18 |
EP2639293A1 (en) | 2013-09-18 |
EP2639293A4 (en) | 2016-11-16 |
CN103261394B (zh) | 2018-11-16 |
JP2012115262A (ja) | 2012-06-21 |
US20130280807A1 (en) | 2013-10-24 |
CN103261394A (zh) | 2013-08-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5933223B2 (ja) | 細胞培養チャンバーとその製造方法、および、この細胞培養チャンバーを利用した組織モデルとその作製方法 | |
JP5892611B2 (ja) | ハイドロゲル乾燥体、ビトリゲル膜乾燥体およびこれらの製造方法 | |
CA2023968C (en) | Living tissue equivalents | |
KR20180068994A (ko) | 다층 기도 오가노이드 및 그의 제조 및 사용 방법 | |
Sánchez-Romero et al. | In vitro systems to study nephropharmacology: 2D versus 3D models | |
CN104726396A (zh) | 一种全层皮肤模型的构建方法 | |
JP7112736B2 (ja) | 半透膜及びその使用 | |
JPWO2005014774A1 (ja) | 動物細胞の培養担体と、該培養担体を用いた動物細胞の培養方法および移植方法 | |
JP6835384B1 (ja) | 細胞培養装置及びその使用 | |
NL2011895C2 (en) | Fluidic device and perfusion system for in vitro tissue reconstruction. | |
Lee et al. | Cellular hydrogel biopaper for patterned 3D cell culture and modular tissue reconstruction | |
Sharma et al. | Considerations for the bioengineering of advanced cardiac in vitro models of myocardial infarction | |
JP7054523B2 (ja) | 細胞封入用デバイス及びその使用 | |
Kukla et al. | Assessing the compatibility of primary human hepatocyte culture within porous silk sponges | |
JP2012239444A (ja) | 細胞培養担体、細胞培養担体の製造方法、及び細胞培養方法 | |
JP6425420B2 (ja) | 細胞培養チャンバーとその製造方法、細胞培養チャンバーを利用した細胞培養方法および細胞培養キット | |
KR101291830B1 (ko) | 녹각교를 포함하는 인공피부 및 이의 제조방법 | |
US20240141269A1 (en) | Device for modelling a blood labyrinth barrier | |
CN114854588A (zh) | 一种屏障-干细胞归巢仿生微流控芯片及其应用 | |
Welter | Prof. Harihara Baskaran | |
Liang | An In Vitro Model of Tissue-Engineered Skin Substitute with Integrated Flow Networks in a Perfusion Bioreactor | |
JPH02113885A (ja) | 多層培養上皮細胞の製法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20141027 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141027 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20150812 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150908 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151106 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160412 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160502 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5933223 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
R370 | Written measure of declining of transfer procedure |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R370 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |