JP6425420B2 - 細胞培養チャンバーとその製造方法、細胞培養チャンバーを利用した細胞培養方法および細胞培養キット - Google Patents
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<1>筒状のチャンバー本体と、ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体と、支持体とを備えた細胞培養チャンバーであって、前記チャンバー本体には、対向する両端に開放端面が形成されており、このうちの一方の開放端面には、前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の一方の面側が当接した状態で固定されており、かつ、このビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の他方の面側には前記支持体が配設されており、前記支持体は、接触角が70°以上であることを特徴とする細胞培養チャンバー。
<2>前記支持体は、プラスチック製の薄膜であることを特徴とする前記<1>の細胞培養チャンバー。
<3>前記支持体は、シリコン処理PET薄膜であることを特徴とする前記<1>の細胞培養チャンバー。
<4>以下の工程:
対向する開放端面が両端に形成されている筒状のチャンバー本体の一方の開放端面に、ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の一方の面側を当接させて固定し、前記開放端面を被覆する工程;および
前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の他方の面側に、接触角が70°以上である支持体を配設する工程
を含むことを特徴とする細胞培養チャンバーの製造方法。
<5>以下の工程:
前記<1>から<3>のいずれかの細胞培養チャンバーの前記チャンバー本体内側に1種また2種以上の細胞を供給する工程;
前記ビトリゲル膜乾燥体が再水和されたビトリゲル膜が前記支持体に支持された状態において、前記ビトリゲル膜上で細胞を培養する工程;および
前記ビトリゲル膜から前記支持体を取り外す工程
を含むことを特徴とする細胞培養方法。
<6>筒状のチャンバー本体と、ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体と、支持体とを含む細胞培養キットであって、前記チャンバー本体は、対向する両端面が開放された開放端面を有し、この開放端面のうちの一方には、前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の一方の面側が当接した状態で固定されており、前記支持体は、接触角が70°以上であり、かつ、前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の他方の面側に配設されるものであることを特徴とする細胞培養キット。
(1)基板上にビトリゲル膜乾燥体が剥離可能なフィルムを敷き、このフィルム上に配置した壁面鋳型内部にハイドロゲルを形成し、ハイドロゲル内の自由水の一部を基板と壁面鋳型の間隙から流出させる工程、
(2)壁面鋳型を基板上から除去する工程、
(3)ハイドロゲルを乾燥させて残留する自由水を除去し、ガラス化したハイドロゲル乾燥体を作製する工程、
(4)ハイドロゲル乾燥体を再水和してビトリゲル膜を作製する工程、
(5)ビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、ガラス化したビトリゲル膜乾燥体を作製する工程、
ここで、「ハイドロゲル」とは、高分子が化学結合によって網目状構造をとり、その網目に多量の水を保有した物質を指し、より具体的には、天然物由来の高分子や合成高分子の人工素材に架橋を導入してゲル化させたものをいう。
(1)特許文献6に記載の方法に準じて、筒状のチャンバー本体の開放端面にビトリゲル膜乾燥体が配設され細胞培養チャンバーを作製した。
(2)次に、Si-PETを配設したことによる効果について検討した。具体的には、Si-PET(厚さ:25μm、50μm、75μm、100μm)を配設した細胞培養チャンバーのチャンバー本体内にPBS1.0mLを加え、12ウェルプレートに吊るした状態で経時的に弛みを検査した。また、比較として、支持薄膜を配設していない従来の細胞培養チャンバーの弛みも同様の条件で検査した。
実施例1と同様の方法で、PET(厚さ75μm)、ポリエチレン(厚さ80μm)、ポリカーボネート(厚さ1000μm)、ポリスチレン(厚さ400μm)、PTFE(厚さ100μm、300μm、1000μm)、シリコンゴム(厚さ100μm、500μm、1000μm)を支持薄膜とした細胞培養チャンバーについて、ビトリゲル膜の弛みなどについて検討した。
実施例1、2で作製した細胞培養チャンバーについて、12ウェルプレートに吊るした状態で、チャンバー本体内に、粒径が44〜105μmの球状セルロース微粒子(関東化学株式会社製:セルロファイン KANTO GH-25)を添加し、その分散の様子を観察した。
細胞培養チャンバーの支持薄膜について接触角を測定した。具体的には、各支持薄膜を直径18mmに切り取り、その上にMQ水を50μL滴下し、横からその液滴を撮影して、接触角を測定した。
実施例1、2で作製した、本発明の細胞培養チャンバーについて、チャンバー本体をクリップで挟んだ状態で市販の引張り強度測定器(日本電産シンポ株式会社製:デジタルフォースゲージ FGPX-0.2)のフックに引っ掛け、支持薄膜を剥がすときの強度を測定した。細胞培養チャンバーについては、ビトリゲル膜乾燥体をPBSで再水和してビトリゲル膜に変換したもの(水和(+))、及び、再水和していないもの(水和(−))の両方を使用した。
実施例1で作製した、ビトリゲル膜乾燥体に支持薄膜としてのSi-PET(厚さ75μm)が配設された細胞培養チャンバーを、10cm dish内に置き、チャンバー本体内に培養液200μLを加え、細胞の播種直前までそのままの状態を維持した。
2 チャンバー本体
3 ビトリゲル膜乾燥体
4 支持体
Claims (6)
- 筒状のチャンバー本体と、ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体と、支持体とを備えた細胞培養チャンバーであって、
前記チャンバー本体には、対向する両端に開放端面が形成されており、このうちの一方の開放端面には、前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の一方の面側が当接した状態で固定されており、かつ、このビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の他方の面側には前記支持体が配設されており、
前記支持体は、接触角が70°以上であることを特徴とする細胞培養チャンバー。 - 前記支持体は、プラスチック製の薄膜であることを特徴とする請求項1の細胞培養チャンバー。
- 前記支持体は、シリコン処理PET薄膜であることを特徴とする請求項1の細胞培養チャンバー。
- 以下の工程:
対向する開放端面が両端に形成されている筒状のチャンバー本体の一方の開放端面に、ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の一方の面側を当接させて固定し、前記開放端面を被覆する工程;および
前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の他方の面側に、接触角が70°以上である支持体を配設する工程
を含むことを特徴とする細胞培養チャンバーの製造方法。 - 以下の工程:
請求項1から3のいずれかの細胞培養チャンバーの前記チャンバー本体内側に1種また2種以上の細胞を供給する工程;
前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体が再水和されたビトリゲル(登録商標)膜が前記支持体に支持された状態において、前記ビトリゲル(登録商標)膜上で細胞を培養する工程;および
前記ビトリゲル(登録商標)膜から前記支持体を取り外す工程
を含むことを特徴とする細胞培養方法。 - 筒状のチャンバー本体と、ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体と、支持体とを含む細胞培養キットであって、
前記チャンバー本体は、対向する両端面が開放された開放端面を有し、この開放端面のうちの一方には、前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の一方の面側が当接した状態で固定されており、前記支持体は、接触角が70°以上であり、かつ、前記ビトリゲル(登録商標)膜乾燥体の他方の面側に配設されるものであることを特徴とする細胞培養キット。
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