JP5916769B2 - 組み換え型ポリペプチド系新規抗菌薬の製造方法 - Google Patents
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Description
2)、ネズミチフス菌復帰突然変異(Ames)試験の結果により、該薬物は陰性反応、即ち突然変異を引き起こす性質を持たないと判断された。(報告WTPJ20100003(2)号)
3)、マウス骨髄小核試験の結果により、該薬物は陰性反応、即ち突然変異を引き起こす作用がないと判断された。(報告WTPJ20100003(3)号)
4)、マウス精子異常試験の結果により、該薬物は陰性反応、即ちマウス精子の異常を引き起こす作用がないと判断された。(報告WTPJ20100003(4)号)
5)、組み換え型ポリペプチド系抗菌薬によって乳牛の乳房炎の病原菌を分離させ、生体外の抑制試験を行った結果により、下記のことが判明した。
B、組み換え型ポリペプチド系抗菌薬(特許文献1を参照)は、ブドウ球菌(黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、腐性ブドウ球菌、リスブドウ球菌)に対する抑制作用が最も良く、MIC50が0.125μg/mL、MBC50が0.25μg/mLに達することができる。かつセファロチン(2ug/ml)と、オキサシリン(4ug/ml)と、ペニシリン、アンピシリン、リンコマイシン、ゲンタマイシン(いずれも8ug/ml以上)とに比べて、差異が極めて著しい。薬物の分子量によって比較を進めた結果により、ポリペプチド(MW70,000)はブドウ球菌に対する抑制作用がセファロチン(MW523)の抑制作用の2100倍、かつオキサシリン(MW423)の抑制作用の5300倍であることが判明した。
C、組み換え型ポリペプチド系抗菌薬は、レンサ球菌と、アルカノバクテリウム・ピオゲネス菌と、大腸菌などの腸内細菌科の細菌とに対する抑制作用を有する。レンサ球菌(S.agalactiae、S.dysgalactiae、S. uberis、S.bovis)に作用する際、MIC50は1.0μg/mLであり、MBC50は2.0μg/mLである。アルカノバクテリウム・ピオゲネス菌に作用する際、MIC50は0.25μg/mLであり、MBC50は1.0μg/mLである。大腸菌などの腸内細菌科の細菌に作用する際、MIC50は1.0μg/mLであり、MBC50は1.0μg/mLである。
D、組み換え型ポリペプチド系抗菌薬は、感受性細菌株に対する抑制作用および薬剤耐性菌株に対する抑制作用の違いがあまりなく、薬剤耐性表現型のブドウ球菌、レンサ球菌および大腸菌を高効率に抑制することができる。
(1)抗菌ペプチドの組み換え体を誘導発見可能な組み換え変異体プラスミドが導入された大腸菌を製造する。
(2)液体培養基によって、ステップ(1)で製造された大腸菌を大量培養する。
(3)ステップ(2)で得られた菌液から、抗菌ペプチドの組み換え体を精製する。
(処理1)4℃で菌株を解凍し、かつ最終濃度が50μg/mlのAMPを含有したLB液体培養基の中で、菌株を220rpmの撹拌速度で撹拌しながら、温度37℃で一晩回復培養する。続いて、LB固体培養基に塗って単集落菌を培養する。
(処理2)単集落菌を取り出して1.5mlのLB液体培養基に入れ、そののち攪拌速度220rpm、温度37℃で5から8時間培養する。続いて、それを100mlのLB液体培養基に移し、そののち攪拌速度220rpm、温度37℃で5から8時間培養する。
本発明の実施例1は下記の培養基を採用する。
(1)LB液体培養基(100ml):
調製方法は1gの塩化ナトリウム、1gのペプトンおよび0.5gの酵母エキスを250mlのフラスコに入れ、続いて100mlの水を加えてそれらを水に溶解させる。続いてオートクレーブに入れて120℃で8分間殺菌する。
(2)LB固定培養基(100ml):
LB固定培養基は、回復培養後の菌株をプレーティングすることで単集落菌を培養するのに使用される。調製方法は 05から1.5gの塩化ナトリウム、0.5から2gのペプトン、0.3から1gの酵母エキスおよび0.8から3gの寒天を250mlのフラスコに入れ、続いて100mlの水を加えてそれらを水に溶解させる。続いてオートクレーブに入れて120℃で8分間殺菌する。
(3)生産用培養基(700ml、20l、100l、200l)
最終溶液中の成分の質量/体積パーセントは下記の通りである。リン酸水素二ナトリウムは0.4から0.7W/V%である。リン酸二水素カリウムは0.1から0.6W/V%である。塩化アンモニアは0.05から0.2W/V%である。塩化カルシウムは0.0005から0.001W/V%である。硫酸マグネシウムは0.5から2.5W/V%である。ペプトンは1から3W/V%である。酵母エキスは0.5から1W/V%である。グルコースは0.1から0.5W/V%である。塩化ナトリウムは0.2から0.8W/V%である。それ以外の部分は水である。
調製方法:5Lのホウ酸緩衝液=1LのA液+4LのB液
A液(1L):ホウ酸12.368g(0.2M),塩化ナトリウム2.925g(0.05M)
B液(4L):四ホウ酸ナトリウム76.27g(0.05M)
1LのA液と4LのB液を混合させ、それに2.9225gのEDTAを加え、最終濃度を2mMに維持する。
特許出願請求番号が200910157564.5、発明名が“新規抗生物質およびそのヌクレオシド配列、製造方法および応用”の明細書内の実施例1に基づいて、組み換え変異体プラスミドpBHC−SA1、pBHC−SA2、pBHC−SA3、pBHC−SA4、pBHC−SE、pBHC−PAを製造する。
6種類の100ngの組み換え変異体プラスミドを別々に遺伝子組み換え菌BL−21のコンピテントセル40ulと5分間冷却させ、42℃で熱衝撃処理を30秒行い、そののち、氷に入れて2分間冷却させ、続いて160ulのSOC培養基を加え、攪拌速度220rpm、温度37℃で細菌を1時間振り、そののち、プレート(LB培養基に1%の寒天と50 ug/mlのアンピシリンを加え、37℃で一晩寝かす)に敷き並べ、単集落菌を選び出し、細胞増殖を行って菌株を形成する。続いて、菌株を低温で保存する。
1、菌株を回復させる
保存された菌株を4℃で解凍し、続いて10mlのLB培養基(50μg/mlのAMPを含有)に1.5mlの株菌を入れ、攪拌速度220rmp、温度37℃で5時間から8時間培養する。
回復した菌液を104または105倍まで希釈し、10ulの希釈された菌液をLB固体培養基(AMP50μg/ml)プレートに塗る。続いてウェットボックスに移し、37℃のインキュベーターで10時間から12時間培養し、培養基の表面に円形の単集落菌を成長させる。
(1)形が丸くて辺縁が滑らかな単集落菌を殺菌済みの楊枝または接種用ループでプレートから選び出し、1.5mlのLB培養基に入れて攪拌速度220rpm、温度37℃で5時間から8時間培養する。
(2)1.5mlのLB培養基の菌液を100mlのLB培養基に移し、攪拌速度220rpm、温度37℃で5時間から8時間培養する。
(3)第一段階の大量培養:上述した100mlの菌液を700mlの生産用培養基に加え、攪拌速度220rpm、温度37℃で5時間から8時間培養する。
(4)第二段階の大量培養:上述した700mlの菌液を6*700mlの生産用培養基に別々に加え、攪拌速度220rpm、温度37℃で5時間から8時間培養する。
(5)第三段階の大量培養:上述した6*700mlの菌液を20Lの生産用培養基に加え、続いて攪拌速度が220rpm、温度が37℃、酸素量が最大に維持された発酵槽で3時間から5時間培養する。
(6)遺伝子組み換え菌の発酵および誘導によってタンパク質を発現する。上述した20Lの菌液を200Lの生産用培養基に加え、発酵槽で培養および誘導を行うことによってタンパク質を発現する。発酵槽での培養および誘導を行う際、攪拌速度を220rpmに設定し、酸素量を最大に維持した上で温度が30℃の時に2時間から4時間、温度が42℃の時に0.5時間、温度が37℃の時に1時間から2時間処理する。温度が42℃に達すると最終濃度が0.5mMのIPTGを添加する。
6000gの培養液を4℃で20分間遠心分離し、遠心分離後の沈殿物を収集し、50mMのホウ酸緩衝液(pH9.0)に入れ、ホウ酸緩衝液に菌体を浮遊させる。ホウ酸緩衝液に加えた2mMのPMSFはフッ化フェニルメタンスルホニルである。菌体を浮遊させた後の作業は4℃で進めなければならない。
pH9.0のホウ酸緩衝液に菌体を完全に浮遊させた後、圧力が500から600barの高圧ホモジェナイザーによって菌体を破砕し、3分から5分ごとに菌体破砕を行い、7回繰り返す。
破砕処理が完了した55000gの菌液を4℃で40分間遠心分離する。続いて、上澄み液を取り出し、それに硫酸ストレプトマイシンを加え(200mlごとに16本の100万単位の硫酸ストレプトマイシンを加え)、マグネチックスターラーで1時間攪拌する。
上述の55000gの菌液を4℃で20分間遠心分離し、上澄み液を取り出して透析袋に入れる。続いて透析袋をホウ酸緩衝液の中に入れて8時間から12時間透析し、その間に4時間ごとに透析液を取り替える。
透析が完了した55000gの菌液を4℃で20分間遠心分離し、上澄み液を取り出してフラスコに入れ、続いてイオン交換法によってタンパク質を精製する。続いて上澄み液からCMイオン交換カラムを取り出し、充分に水洗いし、続いて0.3 M のNaClを含有した50mMのホウ酸緩衝液で溶出を行うことによって新規抗菌性ポリペプチドを生成する。
1、100mlのフラスコに10mlの培養基(未殺菌)を入れ、121℃の高圧蒸気滅菌器で8分間殺菌する。
2、作業台を予めアルコールで拭いて洗浄し、そして赤外線ランプで30分間殺菌する。
3、それぞれの100mlのフラスコに一晩培養した3μlの黄色ブドウ球菌を入れる。
4、10μlの無菌食塩水と、1μl 1mg/mlのAMPと、本発明の実施例1によって製作したpBHC−SA1が 0.8mg/ml のポリペプチドサンプル125μlとをそれぞれの100mlのフラスコに加え、しるしを付ける。
5、振動攪拌培養器に入れて攪拌速度220rmp、温度37℃で培養する。
6、3時間経過後、6時間経過後、9時間経過後、12時間経過後、24時間経過後の順に懸濁状態を観察する。
同じ生産規模を条件とした上で本発明の実施例1により提示された方法と、特許出願請求番号200910157564.5号により公開された方法とによって別々に製造された、異なるグループの抗菌ペプチドpBHC−SA1に対し、ポリアクリルアミドゲル電気泳動および染色を行い、生産物の純度を比較した。その結果は次の通りである。抗菌性ポリペプチド(Pheromonicin−SA)の分子量は75000前後である。本発明の実施例1の方法により製造されたポリペプチドは電気泳動径路5、6、7、8に位置する。電気泳動径路5、6、7、8は相互に単一線状部を呈する。電気泳動径路2、3、4は比較的小さい分子を大量含有したため、複雑な線状部を呈する。つまり、本発明の方法によって製造されたポリペプチドの純度が高いことは実証された。
製造技術の改善および最適化を持続的に進め、生産規模を持続的に拡大することにより、実験用フラスコによって(8.4L)製造することから、42Lの発酵槽で(25L)製造する、200Lの発酵槽で(100L)製造することを実現させることができる。一方、図3に示すように、生産規模が拡大されても生産量および生産率はあまり影響されないため、本発明は抗菌ポリペプチドの製造を規模化および工業化する基礎を固めることができる。フラスコ、42Lの発酵槽および200Lの発酵槽によって別々に10グループの生産を連続した生産量および生産率は表2および図3に示したとおりである。
Claims (5)
- 抗菌ペプチドの組み換え体を誘導発現可能な組み換え変異体プラスミドが導入された大腸菌を製造するステップ(1)と、
液体培養基によって、前記ステップ(1)で製造された前記大腸菌を大量培養するステップ(2)と、
前記ステップ(2)で得られた菌液から、前記抗菌ペプチドの組み換え体を分離精製するステップ(3)と、を含む組み換えポリペプチドを含む薬の製造方法であって、
前記液体培養基の最終溶液は、0.4から0.7W/V%のリン酸水素二ナトリウム、0.1から0.6W/V%リン酸二水素カリウム、0.05から0.2W/V%の塩化アンモニア、0.0005から0.001W/V%の塩化カルシウム、0.5から2.5W/V%の硫酸マグネシウム、1から3W/V%のペプトン、0.5から1W/V%の酵母エキス、0.1から0.5W/V%のグルコース、0.2から0.8W/V%の塩化ナトリウム、および、水を含むことを特徴とする組み換え型ポリペプチド系新規抗菌薬の製造方法。 - 前記液体培養基は、各グループの最終溶液中の質量/体積パーセントに基づいて調製され、各グループの最終溶液中の質量/体積パーセントは下記の通りであり、リン酸水素二ナトリウムは0.68W/V%であり、リン酸二水素カリウムは0.3W/V%であり、塩化アンモニアは0.1W/V%であり、塩化カルシウムは0.001W/V%であり、硫酸マグネシウムは0.02W/V%であり、ペプトンは2.5W/V%であり、酵母エキスは0.75W/V%であり、グルコースは0.2W/V%であり、塩化ナトリウムは0.6W/V%であり、それ以外の部分は水であることを特徴とする請求項1に記載の製造方法。
- 前記ステップ(2)は、攪拌速度が220rpmであり、温度が37℃であり、培養時間が3から8時間であることを特徴とする請求項1に記載の製造方法。
- 前記ステップ(2)は、前記抗菌ペプチドの組み換え体を誘導するステップを含み、
前記抗菌ペプチドの組み換え体を誘導するステップは、細菌培養液に対し、220rpmの速度で撹拌しつつ最大の酸素量を維持しながら、30℃で2から4時間処理し、42℃で0.5時間処理し、37℃で1から2時間処理し、42℃に達したとき、最終濃度が0.5mMのIPTGを添加することを特徴とする請求項1に記載の製造方法。 - 前記ステップ(2)の前で、前記ステップ(1)で製造された前記大腸菌に対して、
(処理1)最終濃度が50μg/mlのAMPを含むLB液体培養基の中で、220rpmの撹拌速度で撹拌しながら温度37℃で一晩回復培養し、LB固体培養基に塗って単集落菌を培養し、
(処理2)単集落菌を取り出して1.5mlのLB液体培養基に入れ、220rpmの撹拌速度で撹拌しながら37℃で5から8時間培養し、100mlのLB液体培養基に移し、220rpmの攪拌速度で撹拌しながら37℃で5から8時間培養し、
前記LB液体培養基が、1W/V%の塩化ナトリウム、1W/V%のペプトン、0.5W/V%の酵母エキス、0.8から1W/V%の寒天、および、水を含むことを特徴とする請求項1に記載の製造方法。
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BRPI0608152A2 (pt) * | 2005-02-09 | 2009-11-10 | Macusight Inc | formulações para tratamento ocular |
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KR20100109902A (ko) * | 2007-12-28 | 2010-10-11 | 로께뜨프레르 | 대규모 미생물 배양 방법 |
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