CN101643501B

CN101643501B - 一种新型抗生素及其核苷酸序列、制备方法与应用

Info

Publication number: CN101643501B
Application number: CN2009101575645A
Authority: CN
Inventors: 丘小庆
Original assignee: Protein Design Lab Ltd
Current assignee: American pheromone biotechnology Co
Priority date: 2008-11-07
Filing date: 2009-07-14
Publication date: 2012-06-20
Anticipated expiration: 2029-07-14
Also published as: CN101643501A

Abstract

本发明涉及“一种新型抗生素及其核苷酸序列、制备方法与应用”，属于生物医药领域，包括大肠菌素变构多肽与葡萄球菌信息素肽链，能特异地杀灭该抗生素特异性结合的致病菌而不会伤害人体正常细胞，大肠菌素变构多肽与葡萄球菌信息素线性联接，产生了抗金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌以及绿脓杆菌的新型抗生素，抗菌效果是传统抗生素的千倍以上，而且不易产生耐药性，同时该新型抗生素克服了野生型大肠菌素使人体产生超敏反应的缺陷，使用起来更安全。

Description

一种新型抗生素及其核苷酸序列、制备方法与应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种新型抗生素及其核苷酸序列、制备方法与应用。

背景技术

自1944年青霉素等抗生素投入使用以来，使细菌，尤其是威胁生命的致病菌，如金葡球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、结核杆菌等已对其产生了耐药性。据美国疾病控制中心(CDC)历年发表的有关报告预测，再过10年至20年，这些抗生素将可能完全失效。

上述抗生素主要通过抑制细胞壁合成、抑制或干扰细菌的核酸和蛋白质代谢与合成途径来达到抗菌目的。然而这些抗菌方式容易诱导细菌发生突变而产生耐药性。因此人们一直在致力于开发新型的抗生素，模仿同种异株细菌之间互相杀伤的工作方式来开发新型抗生素是比较有前途的方向之一，自然界中有不少细菌毒素直接在细菌胞膜上形成离子通道来杀死细菌。其模式标本就是大肠杆菌分泌的一种细菌毒素-大肠菌素。其中大肠菌素Ia自1952年被Jacob发现之后，经过数代人的努力，1996年终于揭示了大肠菌素Ia在人工脂质双分子膜上所形成离子通道开放和关闭时的跨膜立体结构(Qiu et al，Major transmemebrane movementsoociated with colicin Ia channel gating.J.Gen.Physiology，107：313-328(1996))，为在分子水平上设计和制备新型的抗菌素奠定了理论基础。

最近，人们发现细菌分泌信号传导多肽到体外，这些多肽能够自动寻找同种细菌胞膜上的相应受体，与受体结合后将信息传入细菌。这些传导多肽多由数个至十数个氨基酸组成，比如金黄色葡萄球菌的信息素AgrD，就是一个8肽(Ji et al，Cell density control ofstaphyliccocal virulence mediated by an octapeptide pheromone.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92：12055-12059(1995))。

如上所述，大肠菌素是一种理想的离子通道抗生素原型，但野生型大肠菌素只能作用于同种异株的大肠杆菌，因此必须改变它的靶向性，才能使大肠菌素转而攻击其它种的致病菌，且野生型大肠菌素的肽链中存在容易引起超敏反应的氨基酸残基；超敏反应指异常的、过高的免疫应答。如能利用致病菌特有的信息素作为诱导物来改变大肠菌素的靶向性，应该是一种理想的抗生素开发方向，目前本发明的发明人获得将大肠杆菌信息素基因与白色链珠球菌信息素基因连接起来表达抗真菌多肽的专利权，专利号为ZL200510020219.9，但由于大肠菌素肽链中存在某些可能引起超敏反应的结构域，因此有必要改进。

发明内容

本发明针对上述技术的缺陷与本领域仍然存在的空白，提供一种新型抗生素及其核苷酸序列、制备方法与应用。该抗生素的肽链含有大肠菌素，能特异地杀灭该抗生素特异性结合的致病菌而不会伤害人体正常细胞，克服了大肠菌素引起超敏反应的缺陷。

一种大肠菌素变构多肽，由能形成离子通道结构域的野生型大肠菌素E1、Ia、Ib、A、B、N或其水性孔道结构域的肽链突变了氨基酸残基G11A、H22R、A26G、V31L和H40K而获得。

所述大肠菌素变构多肽，由野生型大肠菌素Ia变构而来，具有Seq ID NO.36所示的氨基酸序列。编码所述的大肠菌素变构多肽的核苷酸序列。

所述的大肠菌素变构多肽在制备抗菌药物中的应用。

一种新型抗生素，由上述大肠菌素变构多肽和金黄色葡萄球菌信息素AgrD I、AgrD II、AgrD III、AgrD IV或表皮葡萄球菌信息素的肽链线性连接而成。

所述大肠菌素变构多肽由野生型大肠菌素Ia变构而来，所述金黄色葡萄球菌信息素AgrD I、AgrD II、AgrD III、AgrD IV或表皮葡萄球菌信息素的氨基端连接在所述大肠菌素变构多肽的羧基端，连接肽分别具有如Seq ID NO.13、Seq ID NO.15、Seq ID NO.17、Seq ID NO.19、Seq ID NO.21所示的氨基酸序列。

所述金黄色葡萄球菌信息素AgrD I的羧基端连接在大肠菌素变构多肽的氨基端，具有如Seq ID NO.23所示的氨基酸序列。

编码上述新型抗生素的核苷酸序列。具有如Seq ID NO.12、Seq ID NO.14、Seq ID NO.16、Seq ID NO.18、Seq ID NO.20或Seq ID NO.22所示。

包含上述核苷酸序列的重组质粒。

上述新型抗生素在制备抗菌药物中的应用。

一种新型抗生素的制备方法：是指将权利要求9所述的重组质粒转入表达系统中表达，分离纯化表达的多肽而获得新型抗生素。

所述表达系统指大肠杆菌工程菌菌株E.coli BL-21。

本发明为预防临床使用中大肠菌素氨基端的某些肽链片段可能引起宿主的超敏反应，事先选择性的突变了这些肽链片段中的氨基酸残基：G11A、H22R、A26G、V31L和H40K，降低可能的致敏原性，从而获得了编码大肠菌素变构多肽的核苷酸序列和该变构多肽的氨基酸序列，变构多肽仍然保留了大肠菌素离子通道活性，能够将同种异株的大肠杆菌杀死。这些野生型大肠菌素可以选自能形成离子通道结构域的大肠菌素E1、Ia、Ib、A、B、N或其水性孔道结构域。

本发明优选突变大肠菌素Ia，将Ia的变构多肽Ia′与其他致病菌信息素的肽链可操作地连接，如图7所示，连接肽可以改变Ia′的靶向性，使该连接肽链攻击其能够识别的其他致病菌菌株，从而获得各种新型的抗生素，其机理是：可与靶致病菌胞膜受体结合的信息素作为诱导物诱导变构多肽到达靶致病菌胞膜附近，然后变构多肽在靶致病菌胞膜上形成致死性离子通道，使靶致病菌胞内容物泄漏而致靶致病菌死亡，从而达到杀菌的目的。

本发明优选将Ia′与金黄色葡萄球菌信息素AgrD I、AgrD II、AgrD、AgrD IV以及表皮葡萄球菌信息素的肽链线性连接，当金黄色葡萄球菌信息素AgrD I、AgrD II、AgrD、AgrD IV以及表皮葡萄球菌信息素的肽链连接在大肠菌素变构多肽Ia′的羧基端，如图1～5所示，获得5种新型抗生素，由实施例4、5、6、7及表1、表2的数据可以看出，本发明获得的这5种新型抗生素的杀菌效果；当葡萄球菌信息素连接在大肠菌素变构多肽Ia′的第1号氨基酸位置即其实密码子编码的甲硫氨酸之后获得的5种连接肽链中，经实验发现仅AgrD I与Ia′的连接肽链如图6所示，对绿脓杆菌有抗菌作用，其核苷酸序列如Seq ID NO 23所示。

所述编码本发明获得的新型抗生素的核苷酸序列。由于密码子的简并性，编码本发明获得的大肠菌素变构多肽、葡萄球菌新型抗生素、绿脓杆菌新型抗生素的氨基酸序列的核苷酸序列是可以调整的，即只要是编码本发明新型抗生素的核苷酸序列都属于本发明的保护范围。

将编码本发明的新型抗生素的核苷酸序列载入骨架质粒中可获得能在宿主中表达本发明新型抗生素的重组质粒。本发明中，构建重组质粒的原始质粒为Promega公司的pSELECT^TM-1质粒，向其中装载大肠菌素变构多肽基因和immunity蛋白基因；按照Strategene公司药箱操作将编码葡萄球菌信息素的核苷酸序列经双链寡聚核苷酸点突变技术(QuickChang^TMKit，Strategene公司)插入到变构多肽基因的氨基端或羧基端得到本发明的重组质粒；本发明优选将5种葡萄球菌信息素基因序列插入到Ia′基因的626号氨基酸(即羧基端)位置之后或第1号氨基酸位置即起始密码子之后而获得本发明如图1～6所示的六种能表达抗生素的重组质粒。

本发明所指的新型抗生素的制备方法是指将上述重组质粒转染入大肠杆菌工程菌而获得可产生新型抗生素的转基因大肠杆菌，分离纯化转基因大肠杆菌表达的目的蛋白即可得到本发明的新型抗生素。本发明优选大肠杆菌工程菌菌株BL-21。

本发明获得的新型抗生素可在制备治疗或者预防大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、绿脓杆菌感染的药中应用。可以通过将本发明中获得的新型抗生素的多肽添加到药学上可接受的载体或者赋形剂或可选的其它成分而制成临床上适用的药物组合物。

本发明的新型抗生素相较于现用抗生素的优点在于，其不会诱导细菌产生传统的耐药性而且克服了以大肠菌素为抗生素有效结构的重组抗生素会引起超敏反应的缺点，如实施例10的实验结果显示，与野生型大肠菌素采用野生型大肠菌素构建的重组抗生素相比，本发明的大肠菌素变构多肽及新型抗生素免疫小鼠的血清效价要比前者低两个数量级；由于细菌可通过突变产生β-内酰胺酶、减少摄入、改变药物作用位点等方式改变其细胞壁结构、蛋白质和核酸代谢等来对传统抗生素产生耐药性，但是细菌却较难以通过突变来修复被本发明新型抗生素所造成的胞膜完整性的缺损，因为这种缺损往往在数分钟内即可导致细菌死亡，本发明的新型抗生素对于耐药性菌具有其它抗生素难以企及的杀灭作用；实验数据显示，本发明获得的新型抗生素不仅具有极好的杀菌效果，且PMC-SA1，PMC-SA两种抗生素对于实验鼠表现出良好的体内保护作用。

附图说明

图1.重组质粒pBHC-SA1的结构；

含有金黄色葡萄球菌信息素AgrD I的基因和大肠菌素变构多肽Ia′基因。

图2.重组质粒pBHC-SA2的结构；

含有金黄色葡萄球菌信息素AgrD II的基因和大肠菌素变构多肽Ia′的基因。

图3.重组质粒pBHC-SA3的结构；

含有金黄色葡萄球菌信息素AgrD III的基因和大肠菌素变构多肽Ia′的基因。

图4.重组质粒pBHC-SA4的结构；

含有金黄色葡萄球菌信息素AgrD IV的基因和大肠菌素变构多肽Ia′的基因。

图5重组质粒pBHC-SE的结构；

含有表皮葡萄球菌信息素的基因和大肠菌素变构多肽Ia′的基因。

图6重组质粒pBHC-PA的结构：

含有金黄色葡萄球菌信息素AgrD I的基因和大肠菌素变构多肽Ia’的基因，其中AgrD I基因连接在大肠菌素变构多肽Ia’的第1位氨基酸的密码子位置；

图7新型抗生素的结构；

T，R，分别是大肠菌素变构多肽Ia’位于氨基端的两个信号识别结构域，其中T结构域的部分氨基酸残基已被突变；channel-forming，是大肠菌素变构多肽Ia’位于羧基端的能成离子通道的结构域，信息素连接在大肠菌素变构多肽Ia’的羧基端。

图8为本发明新型抗生素PMC-SA1对青霉素敏感金葡菌的抑制实验结果。

图中Con：对照；PEN：青霉素；COL：野生型大肠菌素；BL21：无质粒的BL-21工程菌所产蛋白；FP：大肠菌素Ia羧基端连接其它8肽的重组蛋白；PMC：PMC-SA1。各实验组的药物用量均为100ng/ml。

图9为PMC-SA1对耐甲氧西林金葡菌(ATCC BAA-42)杀菌效果的透射电镜观察(放大25,000倍)。

Con，对照组，菌形态正常；

Oxa，苯唑西林500ug/ml处理一个半小时，菌形态有变化，但菌体仍完整；

PMC：PMC-SA1 10ug/ml处理半小时，菌破裂，内容物泄漏。

图10为本发明新型抗生素PMC-SA1和PMC-SE对表皮葡萄球菌的抑制作用。

表皮葡萄球菌的生长仅被PMC-SA1部分抑制，却被PMC-SE完全抑制。Con：对照组；PEN：青霉素；PMC：PMC-SA1；PMC-SE：PMC-SE新型抗生素，药物浓度2ug/ml。

图11为本发明各种新型抗生素对耐甲氧西林金葡菌(ATCC BAA-42)的生长抑制作用。

表明耐甲氧西林金葡菌的生长几乎不能被苯唑西林所抑制，PMC-PA的抑菌效果最差，抑制效果最好的是PMC-SA1，其次是PMC-SE和PMC-SA4，PMC-SA2和PMC-SA3再次之；

图中Con：对照；Oxa：苯唑西林；SA1：PMC-SA1；SA2：PMC-SA2；SA3：PMC-SA3；SA4：PMC-SA4；SE：PMC-SE和PA：PMC-PA，药物浓度5ug/ml；

图12为本发明新型抗生素PMC-SA1和PMC-PA对绿脓杆菌的抑制作用。

绿脓杆菌的生长仅被PMC-PA完全抑制。

Con：对照组；COL：野生型大肠菌素；PMC1：PMC-SA1新型抗生素；PMC2：PMC-PA，药物浓度5ug/ml。

图13为新型抗生素的多重耐药绿脓杆菌感染动物体内保护试验结果之小鼠生存曲线。

1)对照组，2)哌拉西林50mg/kg组，3)阿米卡星15mg/kg组，4)头孢他啶50mg/kg组，5)左氧氟沙星5mg/kg组，6)PMC-PA5mg/kg组。

具体实施方式

结合附图，通过对本发明较佳实施例的描述具体说明本发明。

【实施例1】表达新型抗生素的质粒的构建和新型抗生素制备

原始质粒为装载了大肠菌素变构多肽Ia’和immunity蛋白基因的pSELECT^TM-1质粒(8.3kb)(购于Promega公司)。经双链寡聚核苷酸点突变技术(QuickChange^TM Kit，Strategene公司)将编码葡萄球菌信息素基因序列如：SEQ ID NO 1、3、5、7、9所示，分别插入到大肠菌素变构多肽Ia′基因的626号氨基酸位置之后，获得制备新型抗生素的一系列重组质粒，pBHC-SA1、pBHC-SA2、pBHC-SA3pBHC-SA4、pBHC-SE，如图1～图5所示，以及金黄色葡萄球菌信息素AgrDI的基因序列如SEQ ID NO 1所示连接在变构多肽Ia′基因的第1号氨基酸位置前而获得重组质粒pBHC-PA如图6所示。重组质粒转染入E.coli BL-21工程菌制备新型抗生素。

突变程序按Strategene QuickChange SiteDirected Mutagenesis Kit(catalog#200518)药箱手册进行：

1.准备点突变反应物：

5ul 10Xbuffer

2ul(10ng)装载了大肠菌素变构多肽和immunity蛋白基因的原始质粒pSELECT^TM-1。

1.25ul(125ng)设计的5’-3’寡聚核苷酸引物(见SEQ ID NO24～34偶数序列)

1.25ul(125ng)设计的3’-5’寡聚核苷酸引物(见SEQ ID NO25～35奇数序列)

1ul dNTP

双蒸水50ul

1ul pfu

(除质粒、引物和双蒸水外，均为药箱所备试剂)

2.进行PCR扩增，扩增条件：变性95℃，35秒，退火53℃，70秒，延伸68℃，17分，共20个循环；

3.加入Dpn 1内切酶1ul消化母体DNA链后(37℃，1小时)，取1ul反应物与XL1-Blue感受态细胞50ul冰孵30分钟，热冲击42℃，45秒，再置入冰中2分钟；

4.加入NZY培基0.5ml，220rpm，37℃摇菌1小时，取50-100ul反应物铺板(LB培基加1％琼脂，加50ug/ml氨苄青霉素，37℃过夜)；

5.18小时后挑菌，提取质粒后测序确定突变成功；

6.将突变质粒100ng与制备的BL-21工程菌感受态细胞40ul冰孵5分钟，热冲击42℃，30秒，再置入冰中2分钟，加入SOC培基160ul，220rpm，37℃摇菌1小时后铺板(LB培基加1％琼脂，加50ug/ml氨苄青霉素，37℃过夜)，挑取单克隆菌落大量增菌；

7.大量增菌，8-10升FB培基，250rpm，37℃，3-4小时；加入IPTG ，250rpm，28℃再生长4小时；4℃，6000g，20分钟离心沉淀菌体，取4℃，50mM硼酸缓冲液(pH9.0，2mMEDTA)80-100ml悬浮菌体，加入PMSF 50ug后超声破碎菌体(4℃，400W，1分钟，重复4-5次，间歇2-3分钟确保菌液温度)，高速离心沉淀破碎的菌体(4℃，75,000g，90分钟)，取上清加入硫酸链霉素500万单位沉淀DNA(4℃搅拌1小时)，10000g，4℃，10分钟离心沉淀后，取上清装入分子量15,000透析袋于4℃，50mM硼酸缓冲液10升透析过夜后，再次10,000g，4℃，10分钟离心沉淀，取上清上样于CM离子交换柱，充分冲洗后，0.3M NaCl+50mM硼酸缓冲液洗脱即可得到所制备的新型抗生素。对应于以上6种重组质粒，可分别获得PMC-SA1、PMC-SA2、PMC-SA3、PMC-SA4、PMC-SE以及PMC-PA六种新型抗生素。

制备上述6种突变质粒的信息素基因所设计的寡聚核苷酸序列分别如下：

pBHC-SA1

5’-3’(SEQ ID NO.24)

gcg aat aag ttc tgg ggt att TAT TCC ACC TGT GAT TTT ATA ATG taa ata aaa tat aag aca ggc

3’-5’(SEQ ID NO.25)

gcc tgt ctt ata ttt tat tta CAT TAT AAA ATC ACA GGT GGA ATA aat acc cca gaa ctt att cgc

pBHC-SA2

5’-3’(SEQ ID NO.26)

gcg aat aag ttc tgg ggt att GGA GTT AAC GCA TGT TCT TCC CTG TTT taa ata aaa tat aagaca ggc

3’-5’(SEQ ID NO.27)

gcc tgt ctt ata ttt tat tta AAA CAG GGA AGA ACA TGC GTT AAC TCC aat acc cca gaa ctt attcgc

pBHC-SA3

5’-3’(SEQ ID NO.28)

gcg aat aag ttc tgg ggt att TAT ATA AAC TGT GAT TTT CTT CTG taa ata aaa tat aag aca ggc

3’-5’(SEQ ID NO.29)

gcc tgt ctt ata ttt tat tta CAG AAG AAA ATC ACA GTT TAT ATA aat acc cca gaa ctt att cgc

pBHC-SA4

5’-3’(SEQ ID NO.30)

gcg aat aag ttc tgg ggt att TAT TCC ACC TGT TAC TTT ATA ATG taa ata aaa tat aag aca ggc

3’-5’(SEQ ID NO.31)

gcc tgt ctt ata ttt tat tta CAT TAT AAA GTA ACA GGT GGA ATA aat acc cca gaa ctt att cgc

pBHC-PA

5’-3’(SEQ ID NO.32)

gga tga agg aga tac cga atg TAT TCC ACC TGT GAT TTT ATA ATG tct gac cct gta cgt att aca

3’-5’(SEQ ID NO.33)

gtg aat acg tac agg gtc aga CAT TAT AAA ATC ACA GGT GGA ATA cat tcg gta tct cct tca tcc

pBHC-SE

5’-3’(SEQ ID NO.34)

gcg aat aag ttc tgg ggt att GAT TCC GTT TGT GCA TCC TAT TTT taa ata aaa tat aag aca ggc

3’-5’(SEQ IDNO.35)

gcc tgt ctt ata ttt tat tta AAA ATA GGA TGC ACA AAC GGA ATC aat acc cca gaa ctt att cgc

【实施例2】新型抗生素对青霉素敏感金葡菌的抑制作用

细菌为美国标准菌株，ATCC 25923青霉素敏感金葡菌，菌液2微升(10⁵CFU/ml)加入1％胰蛋白胨，1％NaCl，0.5％酵母，0.5％葡萄糖，0.1％K₂HPO₄的培养液10毫升中，共准备6组，第一组加入0.3M NaCl+50mM硼酸缓冲液(即新型抗生素、野生型大肠菌素Ia和无质粒的BL-21工程菌所产蛋白的空白保存液，量与实验组中加入的新型抗生素液体量相同)作为对照，第二组加入100ng/ml青霉素G钠，第三组加入100ng/ml野生型大肠菌素Ia，第四组加入100ng/ml无质粒的BL-21工程菌所产蛋白，第五组加入100ng/ml大肠菌素Ia羧基端连接其它8肽的重组蛋白，第六组加入100ng/ml PMC-SA1新型抗生素。

上述各组液体分别置于100毫升三角烧瓶中，200rpm，37℃生长，每小时采样100微升加入96孔酶表板中经分光光度计(A 595nm)比色测试细菌生长浊度，画出细菌生长曲线来比较新型抗生素的抑菌效力，结果如图8所示，显示青霉素敏感金葡菌只能被青霉素和PMC-SA1所抑制。

【实施例3】新型抗生素PMC-SA1对耐甲氧西林金葡菌(ATCC BAA-42)杀菌效果的透射电镜观察(1％磷钨酸染色，放大25,000倍)。

培养液：1％胰蛋白胨，1％NaCl，0.5％酵母，0.5％葡萄糖，0.1％K₂HPO₄。

Con：对照组，菌加入前述培养液中和适量0.3M NaCl+50mM硼酸缓冲液中200rpm，37℃生长2小时后，菌形态仍然正常；

Oxa：菌加入前述培养液和苯唑西林500ug/ml中200rpm，37℃生长1.5小时后，菌的颜色和形态有变化，但菌体仍完整；

PMC：菌加入前述培养液中和PMC-SA1 10ug/ml处理半小时后，菌破裂，内容物泄漏。

如图9所示，新型抗生素与青霉素的杀菌机制完全不同，500ug/ml苯唑西林可损伤耐甲氧西林金葡菌，而10ug/ml PMC-SA1可有效杀伤耐甲氧西林金葡菌，苯唑西林分子(分子量450左右)和PMC-SA1分子(分子量70,000左右)的分子量相差160倍，本实施例中苯唑西林和PMC-SA1的使用浓度相差50倍，因此PMC-SA1在本实施例中表现出来的抗菌效力比苯唑西林强八千倍左右。

【实施例4】新型抗生素PMC-SA1的体外抗菌活性

一、实验材料

(1)药物

●PMC-SA1：规格：1.5mg/ml

●注射用头孢唑林钠：规格：0.5g/瓶，华北制药股份有限公司生产。

●注射用青霉素钠：规格：80万单位/瓶，华北制药股份有限公司生产。

●注射用氨苄西林钠：规格：1g/瓶，华北制药股份有限公司生产。

●注射用苯唑西林钠：规格：0.5g/瓶，华北制药股份有限生产。

●万古霉素：规格：2.5mg/ml，

●以上样品用无菌水溶解稀释，药物终浓度为128mg/L、64mg/L、32mg/L、16mg/L、8mg/L、4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0.125mg/L、0.06mg/L、0.03mg/L、0.015mg/L。

(2)细菌

临床分离菌株：所有菌种在收集分离的单位(华西医科大学检验科细菌室)均经鉴定。

金黄色葡萄菌28株(MRSA菌株10株，MSSA菌株18株)、表皮葡萄球菌10株(MRSA菌株5株，MSSE菌株5株)、肠球菌5株、大肠杆菌10株、鲍曼不动杆菌10株，共63株。

标准质控菌株：青霉素敏感金黄色葡萄球菌ATCC 25923、耐青霉素金黄色葡萄球菌ATCC29213，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC BAA-42，耐万古霉素肠球菌ATCC 700802。

(3)培养基

●MH肉汤培养基：称取25g加100ml蒸馏水，加热溶解，分装，高压灭菌，116℃，20分钟。MH固体培养基：称取36g，加1000m蒸馏水，高压灭菌，116℃，20分钟，用于革兰氏阳性、阴性需氧菌的药敏试验。

●肠球菌用血培养基，即在MH培养基中加5-10％脱纤维兔血配置而成，5％CO₂中37℃培养24小时。

二、试验方法

1、最低抑菌浓度MIC的测定

采用琼脂二倍稀释法测定PMC-SA1的最低抑菌浓度(MIC)。用多点接种仪(Deneley A400)将细菌接种于含不同药物浓度的琼脂平皿表面，每点含菌量为10⁵CFU/ml，37℃孵育18-24小时观察结果，以无细菌生长平皿培养基中所含药物的最低浓度为药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC值)。

三、结果

实验结果见表1

表1PMC-SA的体外抗菌活性比较

【实施例5】新型抗生素的对金葡菌、肠球菌和大肠杆菌感染动物体内保护试验

一.实验材料

(1).药物

使用药物同【实施例4】。

以上样品用无菌水溶解稀释，药物注射浓度为10mg/kg、5mg/kg、2.5mg/kg。

(2)细菌

耐甲氧西林金葡菌ATCC BAA-42、耐青霉素金葡菌ATCC 29213、耐万古霉素肠球菌ATCC700802、大肠杆菌(临床分离氨苄青霉素敏感株，32033)。

二.实验方法

昆明小鼠340只，雌雄各半，体重15～20克，随机分组为腹腔分别注射金黄色葡萄球菌ATCC BAA-42、ATCC29213、肠球菌ATCC 700802和大肠杆菌(临床分离氨苄青霉素敏感株，32033)四个大组，其中PMC-SA1、青霉素、氨苄西林、头孢唑林和万古霉素实验组分别为每组小鼠5只，对照组每组小鼠10只。腹腔注射致死剂量的细菌后，各药物试验组小鼠分别自静脉注射10mg、5mg、2.5mg/kg剂量的药物一次，每24小时观察结果，连续观察7-14天，以小鼠死亡为阳性结果。

三.结果

5mg、3mg和1mg药物剂量组结果显示，PMC-SA1组小鼠存活率在3个剂量组中与万古霉素组小鼠存活率始终保持了恒定的差距，因此在体内试验中PMC-SA1对抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的治疗效果远优于万古霉素。这可能是PMC-SA1既杀菌又抑制细菌毒素分泌的双重效果所致。因而该药在临床应用时可能具有其他抗生素无法比拟的治疗效果，其他各抗生素小鼠死亡率＞80％，已不具备可比性；对照组于48小时内全部死亡。

试验结果见表2

表2PMC-SA1体内保护试验结果(静脉给药)

由实施例4和5的表1和表2结果可以看出：

1.金葡球菌(MRSA)体外抗菌活性比较：苯唑西林MIC90测定值比PMC-SA1测定值大8倍。PMC-SA1分子量(70,0000)是万古霉素分子量(1,400)的49倍，苯唑西林分子量(450)的155倍。按单位体积内相同药物分子数标定，则PMC-SA1对金葡球菌(MRSA)体外抗菌活性相当于万古霉素对MRSA体外抗菌活性的3倍，相当于苯唑西林对MRSA体外抗菌活性的1,240倍。

2.PMC-SA1感染小鼠体内保护实验中，最小剂药量(2.5mg/kg)条件下PMC-SA1组的死亡率最低(40％)，其他各组死亡率分别为青霉素组60％，氨苄西林组100％，万古霉素60％，对照组100％。该结果显示PMC-SA1的保护率最高(60％)；青霉素和万古霉素的保护率次之(40％)。

【实施例6】新型抗生素对表皮葡萄球菌生长的影响

细菌为购自中国菌种保存中心(国家医药管理局生物制品检定所，北京天坛)的表皮葡萄球菌标准菌株，编号26069，菌液3微升(10⁶CFU/ml级菌量)加入1％蛋白胨，1％NaCl，0.5％酵母。0.5％葡萄糖，0.1％K₂HPO₄的培养液10ml中，共准备4组，第一组加入0.3MNaCl+50mM硼酸缓冲液(量与实验组中抗菌多肽液体量相同)作为对照，第二组加入2μg/ml青霉素G钠，余各实验组加入2μg/ml PMC-SA1和PMC-SE(保存液为0.3M NaCl+50mM硼酸缓冲液)。

上述各组液体置于100ml三角烧瓶中，200rpm，37℃生长，每小时采样100μl加入96孔酶标板中经分光光度计(A 595nm)比色测定细菌生长浊度，画出细菌生长曲线来比较抗菌多肽的抑菌效力，结果见图10，由图中可见，表皮葡萄球菌的生长可被抗金葡多肽部分抑制，可被抗表葡多肽有效的抑制。

【实施例7】几种新型抗生素抑菌效果的比较

以下试验比较了本发明制备的6种抗菌多肽的抑菌活性，细菌为美国标准菌株，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC BAA-42，菌液5微升(10⁶CFU/ml级菌量)加入1％蛋白胨，1％NaCl，0.5％酵母。0.5％葡萄糖，1％K₂HPO₄的培养液10ml中，共准备8组，第一组加入0.3MnaCl+50mM硼酸缓冲液(量与实验组中抗菌多肽液体量相同)作为对照，第二组加入5μg/ml青霉素G钠，余各组加入PMC-SA1、PMC-SA2、PMC-SA3、PMC-SA4、PMC-SE和PMC-PA(保存液为0.3M NaCl+50mM硼酸缓冲液)。

上述各组液体置于100ml三角烧瓶中，200rpm，37℃生长，每小时采样100μl加入96孔酶标板中经分光光度计(A 595nm)比色测试细菌生长浊度，画出细菌生长曲线来比较抗菌多肽的抑菌能力，结果见图11。

结果显示，耐甲氧西林金葡菌的生长几乎不能被苯唑西林抑制，PMC-PA的抑菌效果最差，抑制效果最好的是PMC-SA1，其次是PMC-SE和PMC-SA4，PMC-SA2和PMC-SA3再次之。

【实施例8】新型抗生素对绿脓杆菌生长的影响

细菌为购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的绿脓杆菌标准菌株(ATCC27853)，菌液5微升(10⁶CFU/ml级菌量)加入MH培养液10ml中，共准备7组，第一组加入0.3MNaCl+50mM硼酸缓冲液(量与实验组中抗菌多肽液体量相同)作为对照，第二组加入5μg/ml野生型大肠菌素Ia，第三组加入5μg/ml PMC-SA1，第四组加入5μg/mlPMC-PA。

上述各组液体置于100ml三角烧瓶中，200rpm，37℃生长，每小时采样100μl加入96孔酶标板中经分光光度计(A 595nm)比色测定细菌生长浊度，画出细菌生长曲线来比较抗菌多肽的抑菌效力，结果见图12。

由图中可见，实验中绿脓杆菌的生长仅被PMC-PA完全抑制，而野生型大肠菌素Ia和PMC-SA1均不能有效抑制绿脓杆菌的生长。

【实施例9】新型抗生素的多重耐药绿脓杆菌感染动物体内保护试验

一.实验材料

(1)药物

PMC-PA、哌拉西林、阿米卡星、头孢他啶、左氧氟沙星。

(2)细菌

多重耐药绿脓杆菌(临床分离株13280，华西医科大学检验科细菌室)。

二.实验方法

昆明小鼠60只，雌雄各半，体重15～20克，随机分组，腹腔注射多重耐药绿脓杆菌，其中PMC-PA、哌拉西林、阿米卡星、头孢他啶和左氧氟沙星实验组分别为每组小鼠10只，对照组每组小鼠10只。腹腔注射致死剂量的细菌后，各药物试验组小鼠分别自静脉注射上述药物一次，每24小时观察结果，连续10天，以小鼠死亡为阳性结果。

三.结果

如图13所示小鼠生存曲线，腹腔注射致死剂量多重耐药绿脓杆菌后，(1)，对照组在2天内全部死亡，(2)，哌拉西林50mg/kg组在3天内全部死亡，(3)，阿米卡星15mg/kg组在4天内全部死亡，(4)，头孢他啶50mg/kg组的10天存活率为20％，(5)，左氧氟沙星5mg/kg组的10天存活率为40％，(6)PMC-PA 5mg/kg组的10天存活率为100％。

结果显示，对多重耐药绿脓杆菌致死性感染，本发明的新型抗生素PMC-PA表现出了所试现用抗生素无法比拟的抗菌活性。

【实施例10】大肠菌素变构多肽的免疫效果观察

取大肠菌素Ia变构多肽、实施例1中PMC-SA1及野生型大肠菌素Ia、发明人前期发明的抗金葡菌多肽(ZL01128836.1)各一份免疫小鼠：上述各蛋白与佐剂混合后，基础量和追加量为腹腔注射每只50μg(0.5ml)1次。间隔两周，免疫5针。ELISA间接法检测小鼠血清效价(肖毅等，抗金葡菌多肽单克隆抗体制备及初步测定，陕西医学杂志，35(1)：6-7，32(2006))。野生型大肠菌素Ia以及抗金葡菌多肽(ZL01128836.1)所免疫小鼠血清效价为10^-4至10^-5，而大肠菌素Ia变构多肽以及本发明PMC-SA1所免疫小鼠血清效价为10^-2至10^-3。

因此大肠菌素Ia变构多肽以及本发明的新型抗生素PMC-SA1造成宿主致敏反应的可能性要比野生型大肠菌素Ia以及抗金葡菌多肽造成宿主致敏反应的可能性低一至两个数量级。

以上对本发明的详细描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

附录：

序列表：

SEQ ID NO.1

编码金黄色葡萄球菌信息素AgrDI的基因片段

tattccacct gtgattttat aatg 24

SEQ ID NO.2

金黄色葡萄球菌信息素AgrDI的人工序列

Tyr Ser Thr Cys Asp Phe Ile Met

SEQ ID NO.3

<213>编码金黄色葡萄球菌信息素AgrDII的基因片段

ggagttaacg catgttcttc cctgttt 27

SEQ ID NO.4

金黄色葡萄球菌信息素AgrDII的人工序列

Gly Val Asn Ala Cys Ser Ser Leu Phe

SEQ ID NO.5

编码金黄色葡萄球菌信息素AgrD III的基因片段

tatataaact gtgattttct tctg 24

SEQ ID NO.6

金黄色葡萄球菌信息素AgrD III的人工序列

Tyr Ile Asn Cys Asp Phe Leu Leu

SEQ ID NO.7

编码金黄色葡萄球菌信息素AgrDIV的基因片段

tattccacct gttactttat aatg 24

SEQ ID NO.8

金黄色葡萄球菌信息素AgrDIV的人工序列

Tyr Ser Thr Cys Tyr Phe Ile Met

SEQ ID NO 9

编码表皮葡萄球菌信息素的基因片段

gattccgttt gtgcatccta tttt 24

SEQ ID NO 10

表皮葡萄球菌信息素的人工序列

Asp Ser Val Cys Ala Ser Tyr Phe

SEQ ID NO 11

大肠菌素Ia变构多肽基因序列

atgtctgacc ctgtacgtat tacaaatccc gcagcagaat cgctggggta tgattcagat 60

ggcaaagaaa ttatgggtgt tgatatttat ctcaaccctc cacgtgtcga tgtctttaaa 120

ggtaccccgc ctgcatggag ttccttcggg aacaaaacca tctggggcgg aaacgagtgg 180

gttgatgatt ccccaacccg aagtgatatc gaaaaaaggg acaaggaaat cacagcgtac 240

aaaaacacgc tcagcgcgca gcagaaagag aatgagaata agcgtactga agccggaaaa 300

cgcctctctg cggcgattgc tgcaagggaa aaagatgaaa acacactgaa aacactccgt 360

gccggaaacg cagatgccgc tgatattaca cgacaggagt tcagactcct gcaggcagag 420

ctgagagaat acggattccg tactgaaatc gccggatatg acgccctccg gctgcataca 480

gagagccgga tgctgtttgc tgatgctgat tctcttcgta tatctccccg ggaggccagg 540

tcgttaatcg aacaggctga aaaacggcag aaggatgcgc agaacgcaga caagaaggcc 600

gctgatatgc ttgctgaata cgagcgcaga aaaggtattc tggacacccg gttgtcagag 660

ctggaaaaaa atggcggggc agcccttgcc gttcttgatg cacaacaggc ccgtctgctc 720

gggcagcaga cacggaatga cagggccatt tcagaggccc ggaataaact cagttcagtg 780

acggaatcgc ttaacacggc ccgtaatgca ttaaccagag ctgaacaaca gctgacgcaa 840

cagaaaaaca cgcctgacgg caaaacgata gtttcccctg aaaaattccc ggggcgttca 900

tcaacaaatc attctattgt tgtgagcggt gatccgagat ttgccggtac gataaaaatc 960

acaaccagcg cagtcatcga taaccgtgca aacctgaatt atcttctgag ccattccggt 1020

ctggactata aacgcaatat tctgaatgac cggaatccgg tggtgacaga ggatgtggaa 1080

ggtgacaaga aaatttataa tgctgaagtt gctgaatggg ataagttacg gcaaagattg 1140

cttgatgcca gaaataaaat cacctctgct gaatctgcgg taaattcggc gagaaataac 1200

ctcagtgcca gaacaaatga gcaaaagcat gcaaatgacg ctcttaatgc cctgttgaag 1260

gaaaaagaga atatacgtaa ccagctttcc ggcatcaatc agaagatagc ggaagagaaa 1320

agaaaacagg atgaactgaa ggcaacgaaa gacgcaatta atttcacaac agagttcctg 1380

aaatcagttt cagaaaaata tggtgcaaaa gctgagcagt tagccagaga gatggccggg 1440

caggctaaag ggaagaaaat acgtaatgtt gaagaggcat taaaaacgta tgaaaagtac 1500

cgggctgaca ttaacaaaaa aattaatgca aaagatcgtg cagcgattgc cgcagccctt 1560

gagtctgtga agctgtctga tatatcgtct aatctgaaca gattcagtcg gggactggga 1620

tatgcaggaa aatttacaag tcttgctgac tggatcactg agtttggtaa ggctgtccgg 1680

acagagaact ggcgtcctct ttttgttaaa acagaaacca tcatagcagg caatgccgca 1740

acggctcttg tggcactggt cttcagtatt cttaccggaa gcgctttagg cattatcggg 1800

tatggtttac tgatggctgt caccggtgcg ctgattgatg aatcgcttgt ggaaaaagcg 1860

aataagttct ggggtatt 1878

SEQ ID NO 12

编码新型抗生素PMC-SA1的基因序列

atgtctgacc ctgtacgtat tacaaatccc gcagcagaat cgctggggta tgattcagat 60

ggcaaagaaa ttatgggtgt tgatatttat ctcaaccctc cacgtgtcga tgtctttaaa 120

ggtaccccgc ctgcatggag ttccttcggg aacaaaacca tctggggcgg aaacgagtgg 180

gttgatgatt ccccaacccg aagtgatatc gaaaaaaggg acaaggaaat cacagcgtac 240

aaaaacacgc tcagcgcgca gcagaaagag aatgagaata agcgtactga agccggaaaa 300

cgcctctctg cggcgattgc tgcaagggaa aaagatgaaa acacactgaa aacactccgt 360

gccggaaacg cagatgccgc tgatattaca cgacaggagt tcagactcct gcaggcagag 420

ctgagagaat acggattccg tactgaaatc gccggatatg acgccctccg gctgcataca 480

gagagccgga tgctgtttgc tgatgctgat tctcttcgta tatctccccg ggaggccagg 540

tcgttaatcg aacaggctga aaaacggcag aaggatgcgc agaacgcaga caagaaggcc 600

gctgatatgc ttgctgaata cgagcgcaga aaaggtattc tggacacccg gttgtcagag 660

ctggaaaaaa atggcggggc agcccttgcc gttcttgatg cacaacaggc ccgtctgctc 720

gggcagcaga cacggaatga cagggccatt tcagaggccc ggaataaact cagttcagtg 780

acggaatcgc ttaacacggc ccgtaatgca ttaaccagag ctgaacaaca gctgacgcaa 840

cagaaaaaca cgcctgacgg caaaacgata gtttcccctg aaaaattccc ggggcgttca 900

tcaacaaatc attctattgt tgtgagcggt gatccgagat ttgccggtac gataaaaatc 960

acaaccagcg cagtcatcga taaccgtgca aacctgaatt atcttctgag ccattccggt 1020

ctggactata aacgcaatat tctgaatgac cggaatccgg tggtgacaga ggatgtggaa 1080

ggtgacaaga aaatttataa tgctgaagtt gctgaatggg ataagttacg gcaaagattg 1140

cttgatgcca gaaataaaat cacctctgct gaatctgcgg taaattcggc gagaaataac 1200

ctcagtgcca gaacaaatga gcaaaagcat gcaaatgacg ctcttaatgc cctgttgaag 1260

gaaaaagaga atatacgtaa ccagctttcc ggcatcaatc agaagatagc ggaagagaaa 1320

agaaaacagg atgaactgaa ggcaacgaaa gacgcaatta atttcacaac agagttcctg 1380

aaatcagttt cagaaaaata tggtgcaaaa gctgagcagt tagccagaga gatggccggg 1440

caggctaaag ggaagaaaat acgtaatgtt gaagaggcat taaaaacgta tgaaaagtac 1500

cgggctgaca ttaacaaaaa aattaatgca aaagatcgtg cagcgattgc cgcagccctt 1560

gagtctgtga agctgtctga tatatcgtct aatctgaaca gattcagtcg gggactggga 1620

tatgcaggaa aatttacaag tcttgctgac tggatcactg agtttggtaa ggctgtccgg 1680

acagagaact ggcgtcctct ttttgttaaa acagaaacca tcatagcagg caatgccgca 1740

acggctcttg tggcactggt cttcagtatt cttaccggaa gcgctttagg cattatcggg 1800

tatggtttac tgatggctgt caccggtgcg ctgattgatg aatcgcttgt ggaaaaagcg 1860

aataagttct ggggttattc cacctgtgat tttataatga tt 1902

SEQ ID NO.13

新型抗生素PMC-SA1的人工序列

Ser Asp Pro Val Arg Ile Thr Asn Pro Ala Ala Glu Ser Leu Gly Tyr

Asp Ser Asp Gly Arg Glu Ile Met Gly Val Asp Ile Tyr Leu Asn Pro

Pro Arg Val Asp Val Phe Lys Gly Thr Pro Pro Ala Trp Ser Ser Phe

Gly Asn Lys Thr Ile Trp Gly Gly Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro

Thr Arg Ser Asp Ile Glu Lys Arg Asp Lys Glu Ile Thr Ala Tyr Lys

Asn Thr Leu Ser Ala Gln Gln Lys Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu

Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala Ile Ala Ala Arg Glu Lys Asp Glu

Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp Ile

Thr Arg Gln Glu Phe Arg Leu Leu Gln Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly

Phe Arg Thr Glu Ile Ala Gly Tyr Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu

Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala Asp Ser Leu Arg Ile Ser Pro Arg

Glu Ala Arg Ser Leu Ile Glu Gln Ala Glu Lys Arg Gln Lys Asp Ala

Gln Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg

Arg Lys Gly Ile Leu Asp Thr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly

Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Gln Gln Ala Arg Leu Leu Gly

Gln Gln Thr Arg Asn Asp Arg Ala Ile Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu

Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg

Ala Glu Gln Gln Leu Thr Gln Gln Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr

Ile Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser

Ile Val Val Ser Gly Asp Pro Arg Phe Ala Gly Thr Ile Lys Ile Thr

Thr Ser Ala Val Ile Asp Asn Arg Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser

His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg Asn Ile Leu Asn Asp Arg Asn Pro

Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly Asp Lys Lys Ile Tyr Asn Ala Glu

Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg Gln Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn

Lys Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ala Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu

Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gln Lys His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala

Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn Ile Arg Asn Gln Leu Ser Gly Ile Asn

Gln Lys Ile Ala Glu Glu Lys Arg Lys Gln Asp Glu Leu Lys Ala Thr

Lys Asp Ala Ile Asn Phe Thr Thr Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu

Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gln Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gln

Ala Lys Gly Lys Lys Ile Arg Asn Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr

Glu Lys Tyr Arg Ala Asp Ile Asn Lys Lys Ile Asn Ala Lys Asp Arg

Ala Ala Ile Ala Ala Ala Leu Glu Ser Val Lys Leu Ser Asp Ile Ser

Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe

Thr Ser Leu Ala Asp Trp Ile Thr Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr

Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val Lys Thr Glu Thr Ile Ile Ala Gly

Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Phe Ser Ile Leu Thr Gly

Ser Ala Leu Gly Ile Ile Gly Tyr Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly

Ala Leu Ile Asp Glu Ser Leu Val Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly

Ile Tyr Ser Thr Cys Asp Phe Ile Met

SEQ ID NO.14

编码新型抗生素PMC-SA2的基因序列

atgtctgacc ctgtacgtat tacaaatccc gcagcagaat cgctggggta tgattcagat 60

ggcaaagaaa ttatggccgt tgatatttat ctcaaccctc cacgtgtcga tgtctttaaa 120

ggtaccccgc ctgcatggag ttccttcggg aacaaaacca tctggggcgg aaacgagtgg 180

gttgatgatt ccccaacccg aagtgatatc gaaaaaaggg acaaggaaat cacagcgtac 240

aaaaacacgc tcagcgcgca gcagaaagag aatgagaata agcgtactga agccggaaaa 300

cgcctctctg cggcgattgc tgcaagggaa aaagatgaaa acacactgaa aacactccgt 360

gccggaaacg cagatgccgc tgatattaca cgacaggagt tcagactcct gcaggcagag 420

ctgagagaat acggattccg tactgaaatc gccggatatg acgccctccg gctgcataca 480

gagagccgga tgctgtttgc tgatgctgat tctcttcgta tatctccccg ggaggccagg 540

tcgttaatcg aacaggctga aaaacggcag aaggatgcgc agaacgcaga caagaaggcc 600

gctgatatgc ttgctgaata cgagcgcaga aaaggtattc tggacacccg gttgtcagag 660

ctggaaaaaa atggcggggc agcccttgcc gttcttgatg cacaacaggc ccgtctgctc 720

gggcagcaga cacggaatga cagggccatt tcagaggccc ggaataaact cagttcagtg 780

acggaatcgc ttaacacggc ccgtaatgca ttaaccagag ctgaacaaca gctgacgcaa 840

cagaaaaaca cgcctgacgg caaaacgata gtttcccctg aaaaattccc ggggcgttca 900

tcaacaaatc attctattgt tgtgagcggt gatccgagat ttgccggtac gataaaaatc 960

acaaccagcg cagtcatcga taaccgtgca aacctgaatt atcttctgag ccattccggt 1020

ctggactata aacgcaatat tctgaatgac cggaatccgg tggtgacaga ggatgtggaa 1080

ggtgacaaga aaatttataa tgctgaagtt gctgaatggg ataagttacg gcaaagattg 1140

cttgatgcca gaaataaaat cacctctgct gaatctgcgg taaattcggc gagaaataac 1200

ctcagtgcca gaacaaatga gcaaaagcat gcaaatgacg ctcttaatgc cctgttgaag 1260

gaaaaagaga atatacgtaa ccagctttcc ggcatcaatc agaagatagc ggaagagaaa 1320

agaaaacagg atgaactgaa ggcaacgaaa gacgcaatta atttcacaac agagttcctg 1380

aaatcagttt cagaaaaata tggtgcaaaa gctgagcagt tagccagaga gatggccggg 1440

caggctaaag ggaagaaaat acgtaatgtt gaagaggcat taaaaacgta tgaaaagtac 1500

cgggctgaca ttaacaaaaa aattaatgca aaagatcgtg cagcgattgc cgcagccctt 1560

gagtctgtga agctgtctga tatatcgtct aatctgaaca gattcagtcg gggactggga 1620

tatgcaggaa aatttacaag tcttgctgac tggatcactg agtttggtaa ggctgtccgg 1680

acagagaact ggcgtcctct ttttgttaaa acagaaacca tcatagcagg caatgccgca 1740

acggctcttg tggcactggt cttcagtatt cttaccggaa gcgctttagg cattatcggg 1800

tatggtttac tgatggctgt caccggtgcg ctgattgatg aatcgcttgt ggaaaaagcg 1860

aataagttct ggggtggagt taacgcatgt tcttccctgt tttaa 1905

SEQ ID NO.15

新型抗生素PMC-SA2的人工序列

Ser Asp Pro Val Arg Ile Thr Asn Pro Ala Ala Glu Ser Leu Gly Tyr

Asp Ser Asp Gly Arg Glu Ile Met Ala Val Asp Ile Tyr Leu Asn Pro

Pro Arg Val Asp Val Phe Lys Gly Thr Pro Pro Ala Trp Ser Ser Phe

Gly Asn Lys Thr Ile Trp Gly Gly Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro

Thr Arg Ser Asp Ile Glu Lys Arg Asp Lys Glu Ile Thr Ala Tyr Lys

Asn Thr Leu Ser Ala Gln Gln Lys Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu

Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala Ile Ala Ala Arg Glu Lys Asp Glu

Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp Ile

Thr Arg Gln Glu Phe Arg Leu Leu Gln Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly

Phe Arg Thr Glu Ile Ala Gly Tyr Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu

Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala Asp Ser Leu Arg Ile Ser Pro Arg

Glu Ala Arg Ser Leu Ile Glu Gln Ala Glu Lys Arg Gln Lys Asp Ala

Gln Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg

Arg Lys Gly Ile Leu Asp Thr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly

Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Gln Gln Ala Arg Leu Leu Gly

Gln Gln Thr Arg Asn Asp Arg Ala Ile Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu

Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg

Ala Glu Gln Gln Leu Thr Gln Gln Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr

Ile Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser

Ile Val Val Ser Gly Asp Pro Arg Phe Ala Gly Thr Ile Lys Ile Thr

Thr Ser Ala Val Ile Asp Asn Arg Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser

His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg Asn Ile Leu Asn Asp Arg Asn Pro

Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly Asp Lys Lys Ile Tyr Asn Ala Glu

Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg Gln Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn

Lys Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ala Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu

Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gln Lys His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala

Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn Ile Arg Asn Gln Leu Ser Gly Ile Asn

Gln Lys Ile Ala Glu Glu Lys Arg Lys Gln Asp Glu Leu Lys Ala Thr

Lys Asp Ala Ile Asn Phe Thr Thr Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu

Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gln Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gln

Ala Lys Gly Lys Lys Ile Arg Asn Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr

Glu Lys Tyr Arg Ala Asp Ile Asn Lys Lys Ile Asn Ala Lys Asp Arg

Ala Ala Ile Ala Ala Ala Leu Glu Ser Val Lys Leu Ser Asp Ile Ser

Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe

Thr Ser Leu Ala Asp Trp Ile Thr Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr

Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val Lys Thr Glu Thr Ile Ile Ala Gly

Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Phe Ser Ile Leu Thr Gly

Ser Ala Leu Gly Ile Ile Gly Tyr Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly

Ala Leu Ile Asp Glu Ser Leu Val Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly

Ile Gly Val Asn Ala Cys Ser Ser Leu Phe

SEQ ID NO.16

编码新型抗生素PMC-SA3的基因序列

atgtctgacc ctgtacgtat tacaaatccc gcagcagaat cgctggggta tgattcagat 60

ggcaaagaaa ttatggccgt tgatatttat ctcaaccctc cacgtgtcga tgtctttaaa 120

ggtaccccgc ctgcatggag ttccttcggg aacaaaacca tctggggcgg aaacgagtgg 180

gttgatgatt ccccaacccg aagtgatatc gaaaaaaggg acaaggaaat cacagcgtac 240

aaaaacacgc tcagcgcgca gcagaaagag aatgagaata agcgtactga agccggaaaa 300

cgcctctctg cggcgattgc tgcaagggaa aaagatgaaa acacactgaa aacactccgt 360

gccggaaacg cagatgccgc tgatattaca cgacaggagt tcagactcct gcaggcagag 420

ctgagagaat acggattccg tactgaaatc gccggatatg acgccctccg gctgcataca 480

gagagccgga tgctgtttgc tgatgctgat tctcttcgta tatctccccg ggaggccagg 540

tcgttaatcg aacaggctga aaaacggcag aaggatgcgc agaacgcaga caagaaggcc 600

gctgatatgc ttgctgaata cgagcgcaga aaaggtattc tggacacccg gttgtcagag 660

ctggaaaaaa atggcggggc agcccttgcc gttcttgatg cacaacaggc ccgtctgctc 720

gggcagcaga cacggaatga cagggccatt tcagaggccc ggaataaact cagttcagtg 780

acggaatcgc ttaacacggc ccgtaatgca ttaaccagag ctgaacaaca gctgacgcaa 840

cagaaaaaca cgcctgacgg caaaacgata gtttcccctg aaaaattccc ggggcgttca 900

tcaacaaatc attctattgt tgtgagcggt gatccgagat ttgccggtac gataaaaatc 960

acaaccagcg cagtcatcga taaccgtgca aacctgaatt atcttctgag ccattccggt 1020

ctggactata aacgcaatat tctgaatgac cggaatccgg tggtgacaga ggatgtggaa 1080

ggtgacaaga aaatttataa tgctgaagtt gctgaatggg ataagttacg gcaaagattg 1140

cttgatgcca gaaataaaat cacctctgct gaatctgcgg taaattcggc gagaaataac 1200

ctcagtgcca gaacaaatga gcaaaagcat gcaaatgacg ctcttaatgc cctgttgaag 1260

gaaaaagaga atatacgtaa ccagctttcc ggcatcaatc agaagatagc ggaagagaaa 1320

agaaaacagg atgaactgaa ggcaacgaaa gacgcaatta atttcacaac agagttcctg 1380

aaatcagttt cagaaaaata tggtgcaaaa gctgagcagt tagccagaga gatggccggg 1440

caggctaaag ggaagaaaat acgtaatgtt gaagaggcat taaaaacgta tgaaaagtac 1500

cgggctgaca ttaacaaaaa aattaatgca aaagatcgtg cagcgattgc cgcagccctt 1560

gagtctgtga agctgtctga tatatcgtct aatctgaaca gattcagtcg gggactggga 1620

tatgcaggaa aatttacaag tcttgctgac tggatcactg agtttggtaa ggctgtccgg 1680

acagagaact ggcgtcctct ttttgttaaa acagaaacca tcatagcagg caatgccgca 1740

acggctcttg tggcactggt cttcagtatt cttaccggaa gcgctttagg cattatcggg 1800

tatggtttac tgatggctgt caccggtgcg ctgattgatg aatcgcttgt ggaaaaagcg 1860

aataagttct ggggtattta tataaactgt gattttcttc tgtaa 1905

SEQ ID NO 17

新型抗生素PMC-SA3的人工序列

Ser Asp Pro Val Arg Ile Thr Asn Pro Ala Ala Glu Ser Leu Gly Tyr

Asp Ser Asp Gly Arg Glu Ile Met Gly Val Asp Ile Tyr Leu Asn Pro

Pro Arg Val Asp Val Phe Lys Gly Thr Pro Pro Ala Trp Ser Ser Phe

Gly Asn Lys Thr Ile Trp Gly Gly Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro

Thr Arg Ser Asp Ile Glu Lys Arg Asp Lys Glu Ile Thr Ala Tyr Lys

Asn Thr Leu Ser Ala Gln Gln Lys Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu

Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala Ile Ala Ala Arg Glu Lys Asp Glu

Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp Ile

Thr Arg Gln Glu Phe Arg Leu Leu Gln Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly

Phe Arg Thr Glu Ile Ala Gly Tyr Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu

Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala Asp Ser Leu Arg Ile Ser Pro Arg

Glu Ala Arg Ser Leu Ile Glu Gln Ala Glu Lys Arg Gln Lys Asp Ala

Gln Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg

Arg Lys Gly Ile Leu Asp Thr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly

Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Gln Gln Ala Arg Leu Leu Gly

Gln Gln Thr Arg Asn Asp Arg Ala Ile Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu

Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg

Ala Glu Gln Gln Leu Thr Gln Gln Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr

Ile Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser

Ile Val Val Ser Gly Asp Pro Arg Phe Ala Gly Thr Ile Lys Ile Thr

Thr Ser Ala Val Ile Asp Asn Arg Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser

His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg Asn Ile Leu Asn Asp Arg Asn Pro

Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly Asp Lys Lys Ile Tyr Asn Ala Glu

Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg Gln Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn

Lys Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ala Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu

Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gln Lys His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala

Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn Ile Arg Asn Gln Leu Ser Gly Ile Asn

Gln Lys Ile Ala Glu Glu Lys Arg Lys Gln Asp Glu Leu Lys Ala Thr

Lys Asp Ala Ile Asn Phe Thr Thr Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu

Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gln Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gln

Ala Lys Gly Lys Lys Ile Arg Asn Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr

Glu Lys Tyr Arg Ala Asp Ile Asn Lys Lys Ile Asn Ala Lys Asp Arg

Ala Ala Ile Ala Ala Ala Leu Glu Ser Val Lys Leu Ser Asp Ile Ser

Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe

Thr Ser Leu Ala Asp Trp Ile Thr Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr

Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val Lys Thr Glu Thr Ile Ile Ala Gly

Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Phe Ser Ile Leu Thr Gly

Ser Ala Leu Gly Ile Ile Gly Tyr Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly

Ala Leu Ile Asp Glu Ser Leu Val Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly

Ile Tyr Ile Asn Cys Asp Phe Leu Leu

SEQ ID NO 18

编码新型抗生素PMC-SA4的基因序列

atgtctgacc ctgtacgtat tacaaatccc gcagcagaat cgctggggta tgattcagat 60

ggcaaagaaa ttatgggtgt tgatatttat ctcaaccctc cacgtgtcga tgtctttaaa 120

ggtaccccgc ctgcatggag ttccttcggg aacaaaacca tctggggcgg aaacgagtgg 180

gttgatgatt ccccaacccg aagtgatatc gaaaaaaggg acaaggaaat cacagcgtac 240

aaaaacacgc tcagcgcgca gcagaaagag aatgagaata agcgtactga agccggaaaa 300

cgcctctctg cggcgattgc tgcaagggaa aaagatgaaa acacactgaa aacactccgt 360

gccggaaacg cagatgccgc tgatattaca cgacaggagt tcagactcct gcaggcagag 420

ctgagagaat acggattccg tactgaaatc gccggatatg acgccctccg gctgcataca 480

gagagccgga tgctgtttgc tgatgctgat tctcttcgta tatctccccg ggaggccagg 540

tcgttaatcg aacaggctga aaaacggcag aaggatgcgc agaacgcaga caagaaggcc 600

gctgatatgc ttgctgaata cgagcgcaga aaaggtattc tggacacccg gttgtcagag 660

ctggaaaaaa atggcggggc agcccttgcc gttcttgatg cacaacaggc ccgtctgctc 720

gggcagcaga cacggaatga cagggccatt tcagaggccc ggaataaact cagttcagtg 780

acggaatcgc ttaacacggc ccgtaatgca ttaaccagag ctgaacaaca gctgacgcaa 840

cagaaaaaca cgcctgacgg caaaacgata gtttcccctg aaaaattccc ggggcgttca 900

tcaacaaatc attctattgt tgtgagcggt gatccgagat ttgccggtac gataaaaatc 960

acaaccagcg cagtcatcga taaccgtgca aacctgaatt atcttctgag ccattccggt 1020

ctggactata aacgcaatat tctgaatgac cggaatccgg tggtgacaga ggatgtggaa 1080

ggtgacaaga aaatttataa tgctgaagtt gctgaatggg ataagttacg gcaaagattg 1140

cttgatgcca gaaataaaat cacctctgct gaatctgcgg taaattcggc gagaaataac 1200

ctcagtgcca gaacaaatga gcaaaagcat gcaaatgacg ctcttaatgc cctgttgaag 1260

gaaaaagaga atatacgtaa ccagctttcc ggcatcaatc agaagatagc ggaagagaaa 1320

agaaaacagg atgaactgaa ggcaacgaaa gacgcaatta atttcacaac agagttcctg 1380

aaatcagttt cagaaaaata tggtgcaaaa gctgagcagt tagccagaga gatggccggg 1440

caggctaaag ggaagaaaat acgtaatgtt gaagaggcat taaaaacgta tgaaaagtac 1500

cgggctgaca ttaacaaaaa aattaatgca aaagatcgtg cagcgattgc cgcagccctt 1560

gagtctgtga agctgtctga tatatcgtct aatctgaaca gattcagtcg gggactggga 1620

tatgcaggaa aatttacaag tcttgctgac tggatcactg agtttggtaa ggctgtccgg 1680

acagagaact ggcgtcctct ttttgttaaa acagaaacca tcatagcagg caatgccgca 1740

acggctcttg tggcactggt cttcagtatt cttaccggaa gcgctttagg cattatcggg 1800

tatggtttac tgatggctgt caccggtgcg ctgattgatg aatcgcttgt ggaaaaagcg 1860

aataagttct ggggttattc cacctgtgat tttataatga tt 1902

SEQ ID NO.19

新型抗生素PMC-SA4的人工序列

Ser Asp Pro Val Arg Ile Thr Asn Pro Ala Ala Glu Ser Leu Gly Tyr

Asp Ser Asp Gly Arg Glu Ile Met Gly Val Asp Ile Tyr Leu Asn Pro

Pro Arg Val Asp Val Phe Lys Gly Thr Pro Pro Ala Trp Ser Ser Phe

Gly Asn Lys Thr Ile Trp Gly Gly Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro

Thr Arg Ser Asp Ile Glu Lys Arg Asp Lys Glu Ile Thr Ala Tyr Lys

Asn Thr Leu Ser Ala Gln Gln Lys Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu

Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala Ile Ala Ala Arg Glu Lys Asp Glu

Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp Ile

Thr Arg Gln Glu Phe Arg Leu Leu Gln Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly

Phe Arg Thr Glu Ile Ala Gly Tyr Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu

Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala Asp Ser Leu Arg Ile Ser Pro Arg

Glu Ala Arg Ser Leu Ile Glu Gln Ala Glu Lys Arg Gln Lys Asp Ala

Gln Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg

Arg Lys Gly Ile Leu Asp Thr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly

Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Gln Gln Ala Arg Leu Leu Gly

Gln Gln Thr Arg Asn Asp Arg Ala Ile Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu

Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg

Ala Glu Gln Gln Leu Thr Gln Gln Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr

Ile Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser

Ile Val Val Ser Gly Asp Pro Arg Phe Ala Gly Thr Ile Lys Ile Thr

Thr Ser Ala Val Ile Asp Asn Arg Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser

His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg Asn Ile Leu Asn Asp Arg Asn Pro

Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly Asp Lys Lys Ile Tyr Asn Ala Glu

Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg Gln Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn

Lys Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ala Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu

Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gln Lys His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala

Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn Ile Arg Asn Gln Leu Ser Gly Ile Asn

Gln Lys Ile Ala Glu Glu Lys Arg Lys Gln Asp Glu Leu Lys Ala Thr

Lys Asp Ala Ile Asn Phe Thr Thr Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu

Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gln Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gln

Ala Lys Gly Lys Lys Ile Arg Asn Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr

Glu Lys Tyr Arg Ala Asp Ile Asn Lys Lys Ile Asn Ala Lys Asp Arg

Ala Ala Ile Ala Ala Ala Leu Glu Ser Val Lys Leu Ser Asp Ile Ser

Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe

Thr Ser Leu Ala Asp Trp Ile Thr Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr

Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val Lys Thr Glu Thr Ile Ile Ala Gly

Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Phe Ser Ile Leu Thr Gly

Ser Ala Leu Gly Ile Ile Gly Tyr Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly

Ala Leu Ile Asp Glu Ser Leu Val Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly

Ile Tyr Ser Thr Cys Tyr Phe Ile Met

SEQ ID NO.20

编码新型抗生素PMC-SE的基因序列

atgtctgacc ctgtacgtat tacaaatccc gcagcagaat cgctggggta tgattcagat 60

ggcaaagaaa ttatgggtgt tgatatttat ctcaaccctc cacgtgtcga tgtctttaaa 120

ggtaccccgc ctgcatggag ttccttcggg aacaaaacca tctggggcgg aaacgagtgg 180

gttgatgatt ccccaacccg aagtgatatc gaaaaaaggg acaaggaaat cacagcgtac 240

aaaaacacgc tcagcgcgca gcagaaagag aatgagaata agcgtactga agccggaaaa 300

cgcctctctg cggcgattgc tgcaagggaa aaagatgaaa acacactgaa aacactccgt 360

gccggaaacg cagatgccgc tgatattaca cgacaggagt tcagactcct gcaggcagag 420

ctgagagaat acggattccg tactgaaatc gccggatatg acgccctccg gctgcataca 480

gagagccgga tgctgtttgc tgatgctgat tctcttcgta tatctccccg ggaggccagg 540

tcgttaatcg aacaggctga aaaacggcag aaggatgcgc agaacgcaga caagaaggcc 600

gctgatatgc ttgctgaata cgagcgcaga aaaggtattc tggacacccg gttgtcagag 660

ctggaaaaaa atggcggggc agcccttgcc gttcttgatg cacaacaggc ccgtctgctc 720

gggcagcaga cacggaatga cagggccatt tcagaggccc ggaataaact cagttcagtg 780

acggaatcgc ttaacacggc ccgtaatgca ttaaccagag ctgaacaaca gctgacgcaa 840

cagaaaaaca cgcctgacgg caaaacgata gtttcccctg aaaaattccc ggggcgttca 900

tcaacaaatc attctattgt tgtgagcggt gatccgagat ttgccggtac gataaaaatc 960

acaaccagcg cagtcatcga taaccgtgca aacctgaatt atcttctgag ccattccggt 1020

ctggactata aacgcaatat tctgaatgac cggaatccgg tggtgacaga ggatgtggaa 1080

ggtgacaaga aaatttataa tgctgaagtt gctgaatggg ataagttacg gcaaagattg 1140

cttgatgcca gaaataaaat cacctctgct gaatctgcgg taaattcggc gagaaataac 1200

ctcagtgcca gaacaaatga gcaaaagcat gcaaatgacg ctcttaatgc cctgttgaag 1260

gaaaaagaga atatacgtaa ccagctttcc ggcatcaatc agaagatagc ggaagagaaa 1320

agaaaacagg atgaactgaa ggcaacgaaa gacgcaatta atttcacaac agagttcctg 1380

aaatcagttt cagaaaaata tggtgcaaaa gctgagcagt tagccagaga gatggccggg 1440

caggctaaag ggaagaaaat acgtaatgtt gaagaggcat taaaaacgta tgaaaagtac 1500

cgggctgaca ttaacaaaaa aattaatgca aaagatcgtg cagcgattgc cgcagccctt 1560

gagtctgtga agctgtctga tatatcgtct aatctgaaca gattcagtcg gggactggga 1620

tatgcaggaa aatttacaag tcttgctgac tggatcactg agtttggtaa ggctgtccgg 1680

acagagaact ggcgtcctct ttttgttaaa acagaaacca tcatagcagg caatgccgca 1740

acggctcttg tggcactggt cttcagtatt cttaccggaa gcgctttagg cattatcggg 1800

tatggtttac tgatggctgt caccggtgcg ctgattgatg aatcgcttgt ggaaaaagcg 1860

aataagttct ggggtgattc cgtttgtgca tcctatttta tt 1902

SEQ ID NO.21

新型抗生素PMC-SE的人工序列

Ser Asp Pro Val Arg Ile Thr Asn Pro Ala Ala Glu Ser Leu Gly Tyr

Asp Ser Asp Gly Arg Glu Ile Met Gly Val Asp Ile Tyr Leu Asn Pro

Pro Arg Val Asp Val Phe Lys Gly Thr Pro Pro Ala Trp Ser Ser Phe

Gly Asn Lys Thr Ile Trp Gly Gly Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro

Thr Arg Ser Asp Ile Glu Lys Arg Asp Lys Glu Ile Thr Ala Tyr Lys

Asn Thr Leu Ser Ala Gln Gln Lys Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu

Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala Ile Ala Ala Arg Glu Lys Asp Glu

Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp Ile

Thr Arg Gln Glu Phe Arg Leu Leu Gln Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly

Phe Arg Thr Glu Ile Ala Gly Tyr Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu

Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala Asp Ser Leu Arg Ile Ser Pro Arg

Glu Ala Arg Ser Leu Ile Glu Gln Ala Glu Lys Arg Gln Lys Asp Ala

Gln Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg

Arg Lys Gly Ile Leu Asp Thr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly

Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Gln Gln Ala Arg Leu Leu Gly

Gln Gln Thr Arg Asn Asp Arg Ala Ile Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu

Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg

Ala Glu Gln Gln Leu Thr Gln Gln Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr

Ile Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser

Ile Val Val Ser Gly Asp Pro Arg Phe Ala Gly Thr Ile Lys Ile Thr

Thr Ser Ala Val Ile Asp Asn Arg Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser

His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg Asn Ile Leu Asn Asp Arg Asn Pro

Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly Asp Lys Lys Ile Tyr Asn Ala Glu

Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg Gln Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn

Lys Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ala Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu

Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gln Lys His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala

Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn Ile Arg Asn Gln Leu Ser Gly Ile Asn

Gln Lys Ile Ala Glu Glu Lys Arg Lys Gln Asp Glu Leu Lys Ala Thr

Lys Asp Ala Ile Asn Phe Thr Thr Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu

Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gln Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gln

Ala Lys Gly Lys Lys Ile Arg Asn Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr

Glu Lys Tyr Arg Ala Asp Ile Asn Lys Lys Ile Asn Ala Lys Asp Arg

Ala Ala Ile Ala Ala Ala Leu Glu Ser Val Lys Leu Ser Asp Ile Ser

Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe

Thr Ser Leu Ala Asp Trp Ile Thr Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr

Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val Lys Thr Glu Thr Ile Ile Ala Gly

Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Phe Ser Ile Leu Thr Gly

Ser Ala Leu Gly Ile Ile Gly Tyr Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly

Ala Leu Ile Asp Glu Ser Leu Val Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly

Ile Asp Ser Val Cys Ala Ser Tyr Phe

SEQ ID NO.22

编码新型抗生素PMC-SA的基因序列

atgtattcca cctgtgattt tataatgtct gaccctgtac gtattacaaa tcccgcagca 60

gaatcgctgg ggtatgattc agatggcaaa gaaattatgg gtgttgatat ttatctcaac 120

cctccacgtg tcgatgtctt taaaggtacc ccgcctgcat ggagttcctt cgggaacaaa 180

accatctggg gcggaaacga gtgggttgat gattccccaa cccgaagtga tatcgaaaaa 240

agggacaagg aaatcacagc gtacaaaaac acgctcagcg cgcagcagaa agagaatgag 300

aataagcgta ctgaagccgg aaaacgcctc tctgcggcga ttgctgcaag ggaaaaagat 360

gaaaacacac tgaaaacact ccgtgccgga aacgcagatg ccgctgatat tacacgacag 420

gagttcagac tcctgcaggc agagctgaga gaatacggat tccgtactga aatcgccgga 480

tatgacgccc tccggctgca tacagagagc cggatgctgt ttgctgatgc tgattctctt 540

cgtatatctc cccgggaggc caggtcgtta atcgaacagg ctgaaaaacg gcagaaggat 600

gcgcagaacg cagacaagaa ggccgctgat atgcttgctg aatacgagcg cagaaaaggt 660

attctggaca cccggttgtc agagctggaa aaaaatggcg gggcagccct tgccgttctt 720

gatgcacaac aggcccgtct gctcgggcag cagacacgga atgacagggc catttcagag 780

gcccggaata aactcagttc agtgacggaa tcgcttaaca cggcccgtaa tgcattaacc 840

agagctgaac aacagctgac gcaacagaaa aacacgcctg acggcaaaac gatagtttcc 900

cctgaaaaat tcccggggcg ttcatcaaca aatcattcta ttgttgtgag cggtgatccg 960

agatttgccg gtacgataaa aatcacaacc agcgcagtca tcgataaccg tgcaaacctg 1020

aattatcttc tgagccattc cggtctggac tataaacgca atattctgaa tgaccggaat 1080

ccggtggtga cagaggatgt ggaaggtgac aagaaaattt ataatgctga agttgctgaa 1140

tgggataagt tacggcaaag attgcttgat gccagaaata aaatcacctc tgctgaatct 1200

gcggtaaatt cggcgagaaa taacctcagt gccagaacaa atgagcaaaa gcatgcaaat 1260

gacgctctta atgccctgtt gaaggaaaaa gagaatatac gtaaccagct ttccggcatc 1320

aatcagaaga tagcggaaga gaaaagaaaa caggatgaac tgaaggcaac gaaagacgca 1380

attaatttca caacagagtt cctgaaatca gtttcagaaa aatatggtgc aaaagctgag 1440

cagttagcca gagagatggc cgggcaggct aaagggaaga aaatacgtaa tgttgaagag 1500

gcattaaaaa cgtatgaaaa gtaccgggct gacattaaca aaaaaattaa tgcaaaagat 1560

cgtgcagcga ttgccgcagc ccttgagtct gtgaagctgt ctgatatatc gtctaatctg 1620

aacagattca gtcggggact gggatatgca ggaaaattta caagtcttgc tgactggatc 1680

actgagtttg gtaaggctgt ccggacagag aactggcgtc ctctttttgt taaaacagaa 1740

accatcatag caggcaatgc cgcaacggct cttgtggcac tggtcttcag tattcttacc 1800

ggaagcgctt taggcattat cgggtatggt ttactgatgg ctgtcaccgg tgcgctgatt 1860

gatgaatcgc ttgtggaaaa agcgaataag ttctggggta tt 1902

SEQ ID NO.23

新型抗生素PMC-SA的肽链

Tyr Ser Thr Cys Asp Phe Ile Met Ser Asp Pro Val Arg Ile Thr Asn

Pro Ala Ala Glu Ser Leu Gly Tyr Asp Ser Asp Gly Arg Glu Ile Met

Gly Val Asp Ile Tyr Leu Asn Pro Pro Arg Val Asp Val Phe Lys Gly

Thr Pro Pro Ala Trp Ser Ser Phe Gly Asn Lys Thr Ile Trp Gly Gly

Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro Thr Arg Ser Asp Ile Glu Lys Arg

Asp Lys Glu Ile Thr Ala Tyr Lys Asn Thr Leu Ser Ala Gln Gln Lys

Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala

Ile Ala Ala Arg Glu Lys Asp Glu Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala

Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp Ile Thr Arg Gln Glu Phe Arg Leu Leu

Gln Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly Phe Arg Thr Glu Ile Ala Gly Tyr

Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala

Asp Ser Leu Arg Ile Ser Pro Arg Glu Ala Arg Ser Leu Ile Glu Gln

Ala Glu Lys Arg Gln Lys Asp Ala Gln Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala

Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg Arg Lys Gly Ile Leu Asp Thr Arg

Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp

Ala Gln Gln Ala Arg Leu Leu Gly Gln Gln Thr Arg Asn Asp Arg Ala

Ile Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn

Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg Ala Glu Gln Gln Leu Thr Gln Gln

Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr Ile Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro

Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser Ile Val Val Ser Gly Asp Pro Arg

Phe Ala Gly Thr Ile Lys Ile Thr Thr Ser Ala Val Ile Asp Asn Arg

Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg

Asn Ile Leu Asn Asp Arg Asn Pro Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly

Asp Lys Lys Ile Tyr Asn Ala Glu Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg

Gln Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn Lys Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ala

Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gln Lys

His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn Ile

Arg Asn Gln Leu Ser Gly Ile Asn Gln Lys Ile Ala Glu Glu Lys Arg

Lys Gln Asp Glu Leu Lys Ala Thr Lys Asp Ala Ile Asn Phe Thr Thr

Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gln

Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gln Ala Lys Gly Lys Lys Ile Arg Asn

Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr Glu Lys Tyr Arg Ala Asp Ile Asn

Lys Lys Ile Asn Ala Lys Asp Arg Ala Ala Ile Ala Ala Ala Leu Glu

Ser Val Lys Leu Ser Asp Ile Ser Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg

Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe Thr Ser Leu Ala Asp Trp Ile Thr

Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val

Lys Thr Glu Thr Ile Ile Ala Gly Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala

Leu Val Phe Ser Ile Leu Thr Gly Ser Ala Leu Gly Ile Ile Gly Tyr

Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly Ala Leu Ile Asp Glu Ser Leu Val

Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly Ile

SEQ ID NO.24

金黄色葡萄球菌信息素AgrDI基因的5′引物

gcgaataagt tctggggtat ttattccacc tgtgatttta taatgtaaat aaaatataag 60

acaggc 66

SEQ ID NO.25

金黄色葡萄球菌信息素AgrDI基因的3′引物

gcctgtctta tattttattt acattataaa atcacaggtg gaataaatac cccagaactt 60

attcgc 66

SEQ ID NO.26

金黄色葡萄球菌信息素AgrDII基因的5′引物

gcgaataagt tctggggtat tggagttaac gcatgttctt ccctgtttta aataaaatat 60

aagacaggc 69

SEQ ID NO.27

金黄色葡萄球菌信息素AgrDII基因的3′引物

gcctgtctta tattttattt aaaacaggga agaacatgcg ttaactccaa taccccagaa 60

cttattcgc 69

SEQ ID NO.28

金黄色葡萄球菌信息素AgrD III基因的5’引物

gcgaataagt tctggggtat ttatataaac tgtgattttc ttctgtaaat aaaatataag 60

acaggc 66

SEQ ID NO.29

金黄色葡萄球菌信息素AgrD III基因的3’引物

gcctgtctta tattttattt acagaagaaa atcacagttt atataaatac cccagaactt 60

attcgc 66

SEQ ID NO.30

金黄色葡萄球菌信息素AgrDIV基因5’引物

gcgaataagt tctggggtat ttattccacc tgttacttta taatgtaaat aaaatataag 60

acaggc 66

SEQ ID NO.31

金黄色葡萄球菌信息素AgrDIV基因3’引物

gcctgtctta tattttattt acattataaa gtaacaggtg gaataaatac cccagaactt 60

attcgc 66

SEQ ID NO.32

用于制备绿脓杆菌抗生素的金黄色葡萄球菌信息素AgrDI基因的5′引物

ggatgaagga gataccgaat gtattccacc tgtgatttta taatgtctga ccctgtacgt 60

attaca 66

SEQ ID NO.33

<213>用于制备绿脓杆菌抗生素的金黄色葡萄球菌信息素AgrDI基因的3′引物

gtgaatacgt acagggtcag acattataaa atcacaggtg gaatacattc ggtatctcct 60

tcatcc 66

SEQ ID NO.34

表皮葡萄球菌信息素基因的5’引物

gcgaataagt tctggggtat tgattccgtt tgtgcatcct atttttaaat aaaatataag 60

acaggc 66

SEQ ID NO.35

<表皮葡萄球菌信息素基因的3’引物

gcctgtctta tattttattt aaaaatagga tgcacaaacg gaatcaatac cccagaactt 60

attcgc 66

SEQ ID NO.36

大肠杆菌Ia变构多肽序列

Ser Asp Pro Val Arg Ile Thr Asn Pro Ala Ala Glu Ser Leu Gly Tyr

Asp Ser Asp Gly Arg Glu Ile Met Gly Val Asp Ile Tyr Leu Asn Pro

Pro Arg Val Asp Val Phe Lys Gly Thr Pro Pro Ala Trp Ser Ser Phe

Gly Asn Lys Thr Ile Trp Gly Gly Asn Glu Trp Val Asp Asp Ser Pro

Thr Arg Ser Asp Ile Glu Lys Arg Asp Lys Glu Ile Thr Ala Tyr Lys

Asn Thr Leu Ser Ala Gln Gln Lys Glu Asn Glu Asn Lys Arg Thr Glu

Ala Gly Lys Arg Leu Ser Ala Ala Ile Ala Ala Arg Glu Lys Asp Glu

Asn Thr Leu Lys Thr Leu Arg Ala Gly Asn Ala Asp Ala Ala Asp Ile

Thr Arg Gln Glu Phe Arg Leu Leu Gln Ala Glu Leu Arg Glu Tyr Gly

Phe Arg Thr Glu Ile Ala Gly Tyr Asp Ala Leu Arg Leu His Thr Glu

Ser Arg Met Leu Phe Ala Asp Ala Asp Ser Leu Arg Ile Ser Pro Arg

Glu Ala Arg Ser Leu Ile Glu Gln Ala Glu Lys Arg Gln Lys Asp Ala

Gln Asn Ala Asp Lys Lys Ala Ala Asp Met Leu Ala Glu Tyr Glu Arg

Arg Lys Gly Ile Leu Asp Thr Arg Leu Ser Glu Leu Glu Lys Asn Gly

Gly Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Ala Gln Gln Ala Arg Leu Leu Gly

Gln Gln Thr Arg Asn Asp Arg Ala Ile Ser Glu Ala Arg Asn Lys Leu

Ser Ser Val Thr Glu Ser Leu Asn Thr Ala Arg Asn Ala Leu Thr Arg

Ala Glu Gln Gln Leu Thr Gln Gln Lys Asn Thr Pro Asp Gly Lys Thr

Ile Val Ser Pro Glu Lys Phe Pro Gly Arg Ser Ser Thr Asn His Ser

Ile Val Val Ser Gly Asp Pro Arg Phe Ala Gly Thr Ile Lys Ile Thr

Thr Ser Ala Val Ile Asp Asn Arg Ala Asn Leu Asn Tyr Leu Leu Ser

His Ser Gly Leu Asp Tyr Lys Arg Asn Ile Leu Asn Asp Arg Asn Pro

Val Val Thr Glu Asp Val Glu Gly Asp Lys Lys Ile Tyr Asn Ala Glu

Val Ala Glu Trp Asp Lys Leu Arg Gln Arg Leu Leu Asp Ala Arg Asn

Lys Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ala Val Asn Ser Ala Arg Asn Asn Leu

Ser Ala Arg Thr Asn Glu Gln Lys His Ala Asn Asp Ala Leu Asn Ala

Leu Leu Lys Glu Lys Glu Asn Ile Arg Asn Gln Leu Ser Gly Ile Asn

Gln Lys Ile Ala Glu Glu Lys Arg Lys Gln Asp Glu Leu Lys Ala Thr

Lys Asp Ala Ile Asn Phe Thr Thr Glu Phe Leu Lys Ser Val Ser Glu

Lys Tyr Gly Ala Lys Ala Glu Gln Leu Ala Arg Glu Met Ala Gly Gln

Ala Lys Gly Lys Lys Ile Arg Asn Val Glu Glu Ala Leu Lys Thr Tyr

Glu Lys Tyr Arg Ala Asp Ile Asn Lys Lys Ile Asn Ala Lys Asp Arg

Ala Ala Ile Ala Ala Ala Leu Glu Ser Val Lys Leu Ser Asp Ile Ser

Ser Asn Leu Asn Arg Phe Ser Arg Gly Leu Gly Tyr Ala Gly Lys Phe

Thr Ser Leu Ala Asp Trp Ile Thr Glu Phe Gly Lys Ala Val Arg Thr

Glu Asn Trp Arg Pro Leu Phe Val Lys Thr Glu Thr Ile Ile Ala Gly

Asn Ala Ala Thr Ala Leu Val Ala Leu Val Phe Ser Ile Leu Thr Gly

Ser Ala Leu Gly Ile Ile Gly Tyr Gly Leu Leu Met Ala Val Thr Gly

Ala Leu Ile Asp Glu Ser Leu Val Glu Lys Ala Asn Lys Phe Trp Gly

Ile

Claims

1.一种大肠菌素变构多肽，由野生型大肠菌素Ia肽链突变了氨基酸残基G11A、H22R、A26G、V31L和H40K而获得，其氨基酸序列如Seq ID NO.36所示。

2.编码权利要求1所述的大肠菌素变构多肽的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的核苷酸序列，如Seq ID NO.11所示。

4.权利要求1所述的大肠菌素变构多肽在制备抗菌药物中的应用。

5.一种新型抗生素，由权利要求1所述的大肠菌素变构多肽和金黄色葡萄球菌信息素AgrDI、AgrD II、AgrD III、AgrD IV或表皮葡萄球菌信息素的肽链线性连接而成。

6.根据权利要求5所述的新型抗生素，所述金黄色葡萄球菌信息素AgrD I、AgrD II、AgrDIII、AgrD IV或表皮葡萄球菌信息素的氨基端连接在所述大肠菌素变构多肽的羧基端，连接肽的氨基酸序列分别如Seq ID NO.13、Seq ID NO.15、Seq ID NO.17、Seq ID NO.19、Seq ID NO.21所示。

7.根据权利要求5所述的新型抗生素，所述金黄色葡萄球菌信息素AgrD I的羧基端连接在大肠菌素变构多肽的氨基端，其氨基酸序列如Seq ID NO.23所示。

8.编码权利要求5至7任一所述的新型抗生素的核苷酸序列。

9.根据权利要求8所述的核苷酸序列，如Seq ID NO.12、Seq ID NO.14、Seq ID NO.16、SeqID NO.18、Seq ID NO.20或Seq ID NO.22所示。

10.包含权利要求8或9所述的核苷酸序列的重组质粒。

11.权利要求5至7任一所述新型抗生素在制备抗菌药物中的应用。

12.一种新型抗生素的制备方法：是指将权利要求10所述的重组质粒转入表达系统中表达，分离纯化表达的多肽而获得新型抗生素。

13.根据权利要求12所述的制备方法，所述表达系统指大肠杆菌工程菌菌株E.coli BL-21。