JP5876416B2 - フォンウィルブランド因子(vWF)含有調製品並びにこれに関連する方法、キット及び使用 - Google Patents
フォンウィルブランド因子(vWF)含有調製品並びにこれに関連する方法、キット及び使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5876416B2 JP5876416B2 JP2012539007A JP2012539007A JP5876416B2 JP 5876416 B2 JP5876416 B2 JP 5876416B2 JP 2012539007 A JP2012539007 A JP 2012539007A JP 2012539007 A JP2012539007 A JP 2012539007A JP 5876416 B2 JP5876416 B2 JP 5876416B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- polypeptide
- fviii
- vwf
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 67
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 title description 145
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 title description 143
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 9
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 title description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 244
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 239
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 238
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 127
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 109
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 102
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 29
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims description 22
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 15
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 15
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 12
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 5
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 5
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 2
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 182
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 182
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 179
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 117
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 98
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 33
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 30
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 30
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 29
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 28
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 26
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 26
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 26
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 25
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 24
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 description 16
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 13
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 12
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 12
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 12
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 12
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 9
- 229940036647 xyntha Drugs 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 8
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 8
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 7
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 7
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000006296 mab medium Substances 0.000 description 7
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- -1 cationic lipid Chemical class 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 239000012539 chromatography resin Substances 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 101000782195 Homo sapiens von Willebrand factor Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 4
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100034044 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH1B Human genes 0.000 description 3
- 101710193111 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH4 Proteins 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 3
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000105975 Antidesma platyphyllum Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 2
- 102000005731 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 2
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 2
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 2
- MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N Zirconium dioxide Chemical compound O=[Zr]=O MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N diglycidyl ether Chemical compound C1OC1COCC1CO1 GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 235000009424 haa Nutrition 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000011537 solubilization buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- XEPXTKKIWBPAEG-UHFFFAOYSA-N 1,1-dichloropropan-1-ol Chemical compound CCC(O)(Cl)Cl XEPXTKKIWBPAEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BXXWFOGWXLJPPA-UHFFFAOYSA-N 2,3-dibromobutane Chemical compound CC(Br)C(C)Br BXXWFOGWXLJPPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036664 Adenosine deaminase Human genes 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101100463459 Arabidopsis thaliana PER6 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010070255 Aspartate-ammonia ligase Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010031111 EBV-encoded nuclear antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010021582 Glucokinase Proteins 0.000 description 1
- 102000030595 Glucokinase Human genes 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051815 Glutamyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 108700001097 Insect Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 101100519625 Komagataella pastoris PEX2 gene Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101000969137 Mus musculus Metallothionein-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 108010011939 Pyruvate Decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N Tunicamycin II Natural products O1C(CC(O)C2C(C(O)C(O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)C(O)C(O)C(NC(=O)C=CCCCCCCCCC(C)C)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1NC(C)=O YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 102000006646 aminoglycoside phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 230000001651 autotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N butane-1,1-diol Chemical compound CCCC(O)O CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 230000007197 cardiovascular pathway Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 125000000950 dibromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001516 effect on protein Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- GKIPXFAANLTWBM-UHFFFAOYSA-N epibromohydrin Chemical compound BrCC1CO1 GKIPXFAANLTWBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 description 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940034998 human von willebrand factor Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000819 hypertonic solution Substances 0.000 description 1
- 229940021223 hypertonic solution Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000005222 photoaffinity labeling Methods 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 239000007320 rich medium Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N tunicamycin Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@@H](O)[C@@H](CC(O)[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)O1)O)NC(=O)/C=C/CC(C)C)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N 0.000 description 1
- MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N tunicamycin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC=CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CC(O)C2OC(C(O)C2O)N3C=CC(=O)NC3=O)OC1OC4OC(CO)C(O)C(O)C4NC(=O)C MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000001631 vena cava inferior Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本願は、2009年11月13日に出願された米国特許出願第61/261,145号の利益を主張し、当該出願は、本願にその全てが参照により援用される。
vWF含有調製品に関する方法、組成物及びキットが提供され、これらは、因子VIII(FVIII)の調製に関する方法、キット及び上記調製物の使用を含む。また、vWFポリペプチド及びこれをコードする核酸分子も提供する。
哺乳類細胞が発現するFVIIIは、しばしば、細胞表面成分(例えばプロテオグリカン)により、又は受容体が媒介する事象(例えばLRP受容体との相互作用)により、特異的に、又は非特異的に細胞表面に吸着される。また、発現したFVIIIは、培養細胞の培地中で、酵素的に切断及び/又は分解されることもある。培養期間中、発現したFVIII濃度は、分泌された材料が発現後(例えばかん流技術により)迅速に回収されない限り、培地中で減少していく。
一つの態様において、第一のアミノ酸配列は、FVIII結合ドメインを有するvWFポリペプチドの領域と特異的に結合出来るモノクローナル抗vWF抗体と反応する構造又はドメインを規定する。一つの態様において、前記モノクローナル抗体は、例えばFoster et al., JBC, 262:8443 (1987)及びFulcher et al., J. Clin. Invest., 76:117 (1985)に記載のモノクローナル抗体C3である。これらの文献はモノクローナル抗体C3、及びモノクローナル抗体、特にモノクローナル抗体C3の調製の教示のために、本明細書中に参照により援用される。
他の態様において、前記ポリペプチドの第二のアミノ酸配列は、結合パートナーに対する親和性を有する構造又はドメインを提供する。
他の側面において、本発明は、前記第一及び第二のアミノ酸配列を有するポリペプチドを発現する組換え発現ベクター及び当該発現ベクターで形質転換された宿主細胞を提供する。任意の適切な発現系が採用されてもよい。前記ベクターは、前記第一及び第二のアミノ酸配列をそれぞれコードする第一及び第二のDNA配列を有し、それらが、哺乳類、微生物、ウイルス又は昆虫遺伝子等に由来する適切な転写又は翻訳制御配列と操作可能に連結する。制御配列の例として、転写プロモーター、オペレーター、又はエンハンサー、mRNAリボソーム結合部位、及び転写並びに翻訳の開始及び終結をコントロールする適切な配列が挙げられる。コードしているDNA配列とヌクレオチド配列が機能的に関連するとき、ヌクレオチド配列は、操作可能に連結している。故に、プロモーターヌクレオチド配列は、そのプロモーターヌクレオチド配列がコードされたDNA配列の転写をコントロールするとき、操作可能に連結しているといえる。所望の宿主細胞中で複製する能力は、通常複製起点によりもたらされ、そして形質転換体を同定するための選択遺伝子は、発現ベクター内に追加的に含まれ得る。
他の態様において、本発明は、ポリペプチド及びFVIIIを含有するタンパク質複合体を提供し、ここで、当該ポリペプチドは、vWFポリペプチド中に存在する第一のアミノ酸配列及び当該第一の配列と異種の第二のアミノ酸配列を有し、ここで当該ポリペプチドは、FVIIIと結合できる。一つの態様において、当該複合体は、ダイマー形態の別個のポリペプチド鎖を有し、FVIIIと複合体を形成する。
なおも更なる側面において、本発明は、本発明のタンパク質複合体を調製する方法を提供する。幾つかの態様において、前記第二のアミノ酸配列により規定される構造又はドメインの結合パートナーを含有するアフィニティーカラムが、前記複合体をアフィニティー精製するために採用される。例えば、前記第二のアミノ酸配列がFcポリペプチド抗体に対応する場合、タンパク質A又はGを含有するアフィニティーカラムが、前記複合体のアフィニティー精製に使用できる。幾つかの態様において、前記結合パートナーは、不動化されている。あるいは、前記アフィニティーカラムは、前記ポリペプチドのFc部分に結合する、又は前記ポリペプチドの第一のアミノ酸配列により規定される構造又はドメインに結合する抗体を含有し得る。幾つかの態様において、調製される抗体は、ジスルフィド結合により連結した可溶性融合タンパク質を2つ含むダイマーを有し、ここで、各タンパク質は、FcポリペプチドのN末端と融合した第一のアミノ酸配列を有し、ここで、当該第一のアミノ酸配列はvWFポリペプチド中に存在し、ここで、当該ダイマーは、FVIIIと結合できる。
哺乳類細胞による組換えFVIIIの発現を促進するための組成物(例えば短縮組換えvWF融合タンパク質)及び方法を提供し、これらは、FVIIIの除去及び/又は分解を防ぎ、あるいは、本発明の組換えvWFポリペプチド内に含まれる融合タンパク質ハンドル(例えば前記第二のアミノ酸配列)の使用により、得られるFVIII:vWF複合体の迅速なクロマトグラフィー精製を可能とする。
他の側面において、本発明は、FVIIIの血漿半減期を延長させる方法及び組成物を提供する。例えば、幾つかの態様において、本発明の組換えvWF融合ポリペプチドは、FVIII及び/又は組み合わせられた複合体の半減期の延長を促進し得る、組換え又は血漿由来のFVIIIへの添加物として採用され得る。本発明に従い、幾つかの態様において、前記Fc領域は、FVIIIとの結合が提供され、当該Fc領域が更に複合体に追加の半減期を提供するように、vWFの短縮した断片と融合する。例えば、一つの態様において、前記組換えFVIII:組換えvFW-Fc融合複合体は、発現した培養培地から直接精製されてもよく、その後、例えば過剰の組換えvWV-Fc融合体(即ち本発明のポリペプチド)と共に、又は非存在下で、医薬製剤として患者に注射(例えば静脈内)され得る。幾つかの態様において、過剰のvWF-Fc融合体と一緒(例えばモルベースで2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10倍)の前記複合体の添加は、血漿内での融合ポリペプチド濃度の増大に寄与し、また当該複合体が血漿中で解離した場合に、FVIIIとvWF-Fc融合タンパク質の再結合を提供する。
なおも更なる側面において、本発明のポリペプチド、核酸配列、タンパク質複合体及び/又は組成物を含有するキットが提供される。当該キットは、単一の容器を有していてもよく、又はそれぞれの所望の構成品について別個の容器を有していてもよい。前記組換えポリペプチド及び/又はそれに由来するタンパク質複合体を調製するのに必要な試薬を有するキットも想定され、例えば、試薬として、限定されないが、発現ベクター、当該発現ベクターを有する組換え宿主細胞、及び精製試薬が挙げられる。更に、当該キットの構成品が1つ以上の液体溶液である場合、当該液体溶液は水溶液であり、滅菌水溶液であるのが特に好ましい。しかしながら、当該キットの構成品は、乾燥した粉末として提供されてもよい。試薬又は構成品が乾燥した粉末として提供される場合、当該粉末は、適切な溶媒を添加することにより再構成される。当該キットにおいてかかる溶媒が提供されることも想定される。
短縮vWF-Fc融合ポリペプチドの発現プラスミドの構築
短縮vWF-Fc融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をそれぞれ有するDNA分子が、商業的に合成された。当該DNA分子のヌクレオチド配列及び対応するコードされるアミノ酸配列を同定する配列を表1に示す。
PER.C6哺乳類細胞への発現ベクターのエレクトロポレーション
PER.C6細胞及びB−ドメイン欠失FVIII(BDD−FVIII)を発現するPER.C6細胞であるクローン株078(BDD−078細胞)をそれぞれ、PER−MAb培地(Hyclone, Logan, UT)中でルーチンで継代して、連続的な培養により維持した。エレクトロポレーションの48時間前、細胞を1 x 106 cells/mlで新鮮なPER−MAb培地に播種してリフレッシュした。エレクトロポレーションの当日、を100マイクロリットルのAmaxa Nucleofector(登録商標)Kit V Solution (Lonza Walkersville Inc., Walkersville, MD)に再懸濁した。
アッセイ
FVIII:
市販のBDD−FVIIIBDD-FVIII (a/k/a Xyntha(登録商標); Antihemophilic Factor (Recombinant)) (Wyeth (現在Pfizer Inc., New York, NYの系列会社)のタンパク質を、酵素連結免疫吸着アッセイ(ELISA)を使用した、ロバスト線形アッセイ(robust linear assay)の開発の標準として使用した。マイクロプレートウェルに結合した捕捉抗体は、ヒトFVIIIのA2ドメインを指向するクローンGMA-012 (R8B12) (Green Mountain Antibodies, Inc., Burlington, VT)であり;そして検出抗体は、ヒトFVIIIを認識する、市販のビオチン化羊ポリクローナル抗体SAF8C-APBIO, (Affinity Biologicals, Ontario, Canada)であった。抗体の添加の間の洗浄は、pH7.5のTris緩衝生理食塩水(TBS)の存在下で行われた。405nmでの発色は、pNpp基質のストレプトアビジン−アルカリホスファターゼ媒介切断によって検出された。あるいは、FVIII単位の活性の発色は、製造者の説明に従い、内部血漿キャリブレーター対照を使用するBeckman ACL Coagulation Analyzerにより、又はBDD−FVIII標準を使用するChromogenix Coatest SP4 FVIII kit (Diapharma Group, Columbus, OH)により実施された。
研究グレードの血漿由来vWF(Haemtech, Essex Junction, VT)を、タンパク質量のELISA測定用の抗原標準として使用された。使用された捕捉抗体は、ヒトvWFタンパク質に対する市販のマウスモノクローナル抗体であり;そして検出用抗体として、ヤギ抗ヒトvWF抗体が使用された。450nmにおける発色は、酵素基質のテトラメチルベンジジンとインキュベーションすることにより検出される。
短縮vWF-Fcポリペプチドの特定
PER.C6細胞中で発現した前記短縮vWF-Fcタンパク質(即ちD’-D3-Fc, Pro-D’-D3-Fc, D’-A1-Fc, Pro-D’-A1-Fc, D’-A3-Fc, Pro-D’-A3-Fc;表1)に対応する組換えポリペプチドは、0.2〜1mlの細胞上澄を20μlのタンパク質Gビーズとインキュベーションすることにより免疫沈降された。遠心によりビーズを回収し、そしてTris緩衝液によりこれらを洗浄した。遠心分離したビーズを25マイクロリットルのLaemmli緩衝液中に懸濁し、これを95℃で10分間加熱し、続いて4〜12%濃度勾配Bis-Tris PAGEゲルにロードした。バンドの可視化は、クーマシーブリリアントブルー染色/脱染により行われた。
ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)により分離した組換えポリペプチドをPVDF膜上にブロッティングし;高速Ponceau S染色によりタンパク質バンドを可視化し、そして当該膜からの脱染をエドマン分解用調製物(AIBioTech, Richmond VA)中で実施して、N末端配列情報を取得した。取得されたアミノ末端配列は、vWFの成熟N末端またはプロセシングが不完全な代表的なvWF産物に存在すると考えられるN末端プロペプチド配列の公知の配列と比較した。
D’-D3-Fc, Pro-D’-D3-Fc, D’-A1-Fc, Pro-D’-A1-Fc, D’-A3-Fc, 及びPro-D’-A3-Fcタンパク質を発現する細胞を選択及び育苗した後、細胞上澄の試料を清澄し、活発に増殖するBDD-078細胞(B-ドメイン欠失FVIIIを発現する哺乳類細胞クローン)に添加した。BDD-078細胞は、12.5 x 106 cells/mlで播種され、短縮vWF−Fc融合タンパク質(即ちD’-D3-Fc, Pro-D’-D3-Fc, D’-A1-Fc, Pro-D’-A1-Fc, D’-A3-Fc, Pro-D’-A3-Fc)を発現させるプラスミドコンストラクトをトランスフェクションしたPER.C6細胞上澄で培養した。「BDD Ctrl」において、調整培地が置換された。細胞は、記載されているように、37℃で2日間培養した。その時点で、一部を回収し、遠心し、上澄を、FVIII活性並びにFVIII及びvWF抗原の両方について試験した。図8に、FVIII活性を示す。棒グラフは、vWF-Fcタンパク質を加えなかった対照BDD-FVIIIを基準にした増大を示す。
血漿由来vWF(pd-vWF)及び組換えポリペプチドの高分子量複合体を形成する能力を、非還元1.6又は2%高融点(HGT-P)アガロースゲルでの電気泳動により評価した(Raines et al., Thrombosis Res., 60:201-212 (1990)の変法)。血漿由来FVIII(KOATE-DVI(登録商標)が、vWF-Fcマルチマーの評価の電気泳動標準として使用された。タンパク質は、iBlot装置(Invitrogen Corp., Rockville, MD)を用いた半湿式ブロッティング法によりニトロセルロース膜に転写され、SuperBlock Solution (Pierce, Rockford, IL)でブロッキングした。試料は、ウサギ抗ヒトvWFポリクローナル抗体(Abcam cat# ab6994)、その後、アルカリホスファターゼをコンジュゲートしたヤギ抗ウサギIgG F(ab′)2断片(cat# A3937; Sigma)とインキュベーションされ、そして、バンドは、Western Blue solution (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)とインキュベーションすることにより検出された。反応を終結させるために、蒸留水でリンスをし、そしてバンドをBioRad Molecular Imager ChemiDoc XRS+ Imaging System (Bio-Rad Laboratories Hercules, CA)で可視化した。その結果を、図9に示す。
BDD-FVIII及びpro-D’-A3-Fcタンパク質を発現する細胞培養系の清澄した上澄を、三重の遠心分離、並びに2500xgを7分間、続いて2500xgで11分間分離することにより調製した。そして、上澄をSartobran 150デプスフィルター(0.45マイクロメートル)、続いて0.2マイクロメートルの酢酸セルロースフィルター(#5231307-H4-00) (Sartorius Stedim Stedim Biotech S.A., Aubagne, France)で濾過された。当該フィルターは、ポンプを用いてに100〜200 mlの20 mM Tris, pH 7.0より湿らせておき、そして細胞上澄をアプライし、最後に約25 mlの20 mM Tris, pH 7.0を加えた。最後の濾液は、2倍に希釈された細胞上澄であり、カラムクロマトグラフィーに使用された材料であった。濾過された上澄は、AKTA Explorer Chromatography System (GE Healthcare, Piscataway, NJ)にセットした5又は10ミリリットルのProtein A-HiTrapカラム(part 17-1403-01) (GE Healthcare, Piscataway, NJ)にアプライされた。システムのチューブは20mM Tris, pH 7.0で予め濯がれて、試料のカラムへのアプライの前のベースラインを安定させた。濾過された試料はカラムを5ミリリットル/分で移動させられ、そして溶出物は、「フロースルー」として回収された。全ての材料がロードされた後、当該Protein A-HiTrapカラムは、カラムの5倍の体積の20mM Tris, pH 7.0でベースラインが安定するまで洗浄された。この時点で、当該カラムは、0.1 M CaCl2を含有する、カラムの4倍の体積の20mM Tris, pH 7.0で洗浄され、そして溶出した材料を回収した。前記短縮したvWF-Fc融合体に結合した因子FVIIIは、当該フラクションが溶出するまで(カラム体積の約3倍)、0.3 M CaCl2を含有する20mM Tris, pH 7.0で溶出させられた。当該カラムは更にカラム体積分の20mM Tris, pH 7.0で5回洗浄された。タンパク質Aへの結合を維持している短縮vWF-Fcタンパク質は、250mM Glycine, 150mM NaCl, pH 3.9を添加することにより、カラムから剥離させられた。他の溶出方法は、例えばArakawa et al., Prot. Expr. Purif., 63:158-163 (2009)に記載されている。Protein A-HiTrapカラムから回収された全ての試料は保存され、発色及び/又は凝固アッセイ(上記)を使用して因子VIII活性が試験され、そして一部はSDS-PAGE電気泳動用に調製された。幾つかの場合、例えばFVIIIピーク活性が検出された場合、当該タンパク質は、25mlの所望のFVIII保存緩衝液で予め洗浄されたPD10カラム(GE Healthcare 45000148)にロードした。2及び1.5ミリリットルの溶出したBDD-FVIIIは、各カラムにアプライされ、そして脱塩されたBDD-FVIIIは、3.5mlのFVIII保存緩衝液で溶出させられた。そして、タンパク質は長期保存用に-80℃で保存され、そして、場合によっては、10mg/mlの血清アルブミンが添加された。
前記短縮vWF-FcポリペプチドがFVIIIに結合するか否かを判定するために、BDD-FVIII及びpro-D’-A3-Fcを共発現する細胞を、125μg/mlのネオマイシン及びゼオシンを添加したPER-MAb培地中で5日間培養した。実質的に上記のように、上澄の調製及びクロマトグラフィーを行った。溶出の過程での様々な時点で、試料を保存し、電気泳動した(図10)。図10Aにおいて、5 mlのHiTrap Protein Aカラムに10 mlのBDD-FVIII/proD’A3-Fc PER.C6細胞上澄をアプライした後、様々な緩衝液の条件で溶出したクロマトグラフィートレースのピークを示す(工程5は洗浄工程、工程6は0.1 M CaCl2による溶出物、工程7は0.3M CaCl2洗浄後のFVIII溶出物、工程8は1 M CaCl2洗浄後の溶出物、工程9は低塩濃度での洗浄、そして工程10は、pH5.5のクエン酸でカラムをストリッピングした後の溶出物)。図10Bは、当該溶出試料のポリアクリルアミドゲル電気泳動を示す。レーン1〜9は、それぞれ(1)出発材料、(2)フロースルー、(3) 0.1M CaCl2溶出物、(4) 0.3M CaCl2溶出物、(5) pH 5.5クエン酸溶出物、(6)濃縮されたBDD-FVIII調製物、(7)分子量マーカー(右側に分子量表示)、(8) pro-D’-A3-Fcを発現するPER.C6細胞の上澄、(9)市販BDD-FVIII (Xyntha(登録商標))を表す。アスタリスクは、170、90及び80kdの3つのバンドを示し、これらはそれぞれ全長BDD-FVIII、重鎖及び軽鎖を表す。
強制発現したpro-D’-D3-Fcタンパク質を含有するPER.C6細胞上澄の溶液10mlを(図11、レーン2)、250単位の市販のBDD-FVIII (Xyntha(登録商標)、レーン3)に添加し、そして37℃で4時間インキュベーションした(レーン4及び5)。当該混合物を20 mM Tris-HCl, pH 7.0で2倍に希釈し、そして1 ml Protein A-HiTrapカラムにアプライした。本質的には、上記図10に記載したpro-D'-A3-Fc複合体からのFVIIIの精製と同様に行われた。未結合のタンパク質は、20 mM Tris-HCl, pH 7.0でカラムから洗い流された(レーン6)。図11のレーン6にはFVIII及び/又はvWF-Fcポリペプチドのバンドが認められない(レーン7と比較)ことから、pro-D’-D3タンパク質と複合体を形成したFVIIIの明らかな保持が認められる。その後、0.3 M CaCl2によりFVIIIは劇的に溶出した(レーン7)。これは、FVIII/pro-D’-A3-Fc複合体から溶出したFVIIIと大いに比較される(図10B、レーン4)。短縮vWF-Fcに想到する保持されたポリペプチドは、低pH緩衝液の0.1 Mグリシン、0.15 M NaCl, pH 3.9を用いて溶出される(図11、レーン8)。レーン3の3つのアスタリスクは、170、90及び80kdの3つのバンドを示し、これらはそれぞれ全長BDD-FVIII、重鎖及び軽鎖を表す。pro-D’D3-Fc/FVIII精製の結果から、pro-D’D3-FcへのFVIIIの添加は、FVIIIの捕捉、保持及びその後の特異的な溶出を実証し、この結果は、図10で示されたのと概ね同一である。
FVIIIに結合した、又は裸の精製組換えvWF-Fc融合タンパク質を、アルブミン等の安定化剤を含有するリン酸緩衝液中に添加し、これを約5マイクログラム/マウスの濃度で、マウスの尾部静脈に静脈内注射した。対照として、vWFを有する/有しないFVIIIも同様に注射し、動物内での排出を評価した。5〜8頭の動物(野生型又はFVIII若しくはvWFのいずれか、又はそれら両方の遺伝的欠損による出血疾患を有するマウス系統)を、血液損失の試験に使用した。注射後の様々な時点で(例えば0分、3分、15分、30分、1時間、2時間、4時間、8時間、16時間、24時間)動物をサクリファイスし、下大静脈を通じて抜き取り、そして血漿が調製及び凍結させられた。そして、動物の遺伝的背景に依存して、血漿試料の抗原及び/又は機能的活性を、それぞれELISA及び/又は発色若しくは凝固アッセイにより評価した。血漿からの排出は、抗原及び/又は活性と時間との間の薬物動態的解析により(例えばMordenti et al., Toxicol. Appl. Pharmacol., 137:75-78 (1996)及びLenting et al., J. Biol. Chem., 279:12102-12109 (2004)に記載されるように行われ、これらの文献は、薬物動態解析の教示のため、本明細書中に参照により援用される)、及び対照との比較により決定される。
Claims (23)
- vWFポリペプチド中に存在する第一のアミノ酸配列及び当該第一のアミノ酸配列と異種(heterologous)であって結合パートナーに対する親和性を有する構造又はドメインを提供する第二のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、当該ポリペプチドがFVIIIと結合出来、但し当該ポリペプチドが少なくともvWFのドメインD’及びD3を有し、D4、B1、B2、B3、C1、C2及びCKを欠き、当該第二のアミノ酸配列が、イムノグロブリンFcに対応し、前記第一のアミノ酸配列のC末端に配置される、前記ポリペプチド。
- 前記第一のアミノ酸配列が、配列番号1、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15、配列番号:33、配列番号:34、又は配列番号35のいずれかに記載されたものである、請求項1に記載のポリペプチド。
- 配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22、配列番号:36、配列番号:38、又は配列番号:39に記載された配列を含む、請求項1に記載のポリペプチド。
- ダイマーを形成出来る、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記第二のアミノ酸配列が、配列番号:16に記載された配列を有する、請求項1に記載のポリペプチド。
- 請求項1に記載のポリペプチドを含有する組成物。
- 請求項1に記載のポリペプチド及びFVIIIを含有する、タンパク質複合体。
- 請求項7に記載のタンパク質複合体を含有する組成物。
- 請求項1に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
- 配列番号:23、配列番号:24、配列番号:25、配列番号:26、配列番号:27、配列番号:28、配列番号:37、配列番号:42、又は配列番号:43に記載された配列を含む、請求項9に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項9に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
- 請求項1に記載のポリペプチドを発現する細胞。
- 請求項7に記載のタンパク質複合体を発現する細胞。
- 前記ポリペプチドとFVIIIとを接触させる工程を含む、請求項7に記載のタンパク質複合体を調製する方法。
- 前記接触工程が、FVIIIを発現する細胞中で前記ポリペプチドを組換え発現させる工程を含む、請求項14に記載の方法。
- FVIIIを調製する方法であり:請求項1に記載のポリペプチドをFVIIIと接触させて、当該ポリペプチド及びFVIIIを含有するタンパク質複合体を形成する工程を含む、前記方法。
- 更に、第二のアミノ酸配列により定義されるドメインに親和性を有する結合パートナーを含有する樹脂に前記複合体を選択的に接着させる工程を含む、請求項16に記載の方法。
- 前記結合パートナーがタンパク質A又はタンパク質Gである、請求項17に記載の方法。
- FVIIIの血漿薬物動態性能を改善するための医薬組成物であって、請求項7に記載のタンパク質複合体を含有する、当該医薬組成物。
- 前記性能が血漿半減期の延長である、請求項19に記載の医薬組成物。
- 請求項7に記載のタンパク質複合体及び医薬として許容される担体を含有する医薬組成物。
- 血液の症状を治療するための、請求項21に記載の医薬組成物。
- 前記症状が血友病である、請求項22に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US26114509P | 2009-11-13 | 2009-11-13 | |
US61/261,145 | 2009-11-13 | ||
PCT/US2010/056496 WO2011060242A2 (en) | 2009-11-13 | 2010-11-12 | Von willebrand factor (vwf)-containing preparations, and methods, kits, and uses related thereto |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013510581A JP2013510581A (ja) | 2013-03-28 |
JP2013510581A5 JP2013510581A5 (ja) | 2013-11-14 |
JP5876416B2 true JP5876416B2 (ja) | 2016-03-02 |
Family
ID=43992414
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012539007A Active JP5876416B2 (ja) | 2009-11-13 | 2010-11-12 | フォンウィルブランド因子(vWF)含有調製品並びにこれに関連する方法、キット及び使用 |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8759293B2 (ja) |
EP (1) | EP2499165B1 (ja) |
JP (1) | JP5876416B2 (ja) |
KR (1) | KR101808751B1 (ja) |
CN (1) | CN102648212B (ja) |
AU (1) | AU2010319425B2 (ja) |
BR (1) | BR112012011740A2 (ja) |
CA (1) | CA2780542C (ja) |
CL (1) | CL2012001258A1 (ja) |
ES (1) | ES2600879T3 (ja) |
HK (1) | HK1170244A1 (ja) |
HU (1) | HUE029454T2 (ja) |
IL (1) | IL219679A (ja) |
MX (1) | MX2012005527A (ja) |
NZ (1) | NZ600278A (ja) |
PL (1) | PL2499165T3 (ja) |
PT (1) | PT2499165T (ja) |
RU (1) | RU2579977C2 (ja) |
WO (1) | WO2011060242A2 (ja) |
ZA (1) | ZA201203795B (ja) |
Families Citing this family (43)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6263355A (ja) * | 1985-09-13 | 1987-03-20 | Hitachi Ltd | バツテリバツクアツプramのチエツク方法 |
CA2688490C (en) | 2007-06-01 | 2022-06-21 | Scott E. Strome | Immunoglobulin constant region fc receptor binding agents |
AU2010290131C1 (en) | 2009-08-24 | 2015-12-03 | Amunix Operating Inc. | Coagulation factor VII compositions and methods of making and using same |
MX2012005527A (es) | 2009-11-13 | 2012-08-08 | Grifols Therapeutics Inc | Preparaciones que contienen el factor de von willebrand (fvw) procedimientos, kits y aplicaciones relacionados con las mismas. |
CN105820256A (zh) | 2010-07-28 | 2016-08-03 | 格利克尼克股份有限公司 | 天然人蛋白片段的融合蛋白以产生有序多聚化免疫球蛋白fc组合物 |
AU2012324020A1 (en) | 2011-12-30 | 2013-07-18 | Grifols, S.A. | Method for purifying Factor VIII |
CA2863328A1 (en) * | 2012-01-12 | 2013-07-18 | Biogen Idec Ma Inc. | Chimeric factor viii polypeptides and uses thereof |
TR201816253T4 (tr) | 2012-01-12 | 2018-11-21 | Bioverativ Therapeutics Inc | Faktör VIII terapisi almakta olan bireylerde faktör VIII'e karşı immünojenisiteyi azaltmanın yöntemleri. |
CA2864126A1 (en) | 2012-02-15 | 2013-08-22 | Biogen Idec Ma Inc. | Recombinant factor viii proteins |
SI3564260T1 (sl) | 2012-02-15 | 2023-02-28 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Sestavki faktorja VIII in postopki njegove izdelave in uporabe |
WO2013083858A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-06-13 | Novo Nordisk A/S | Compounds suitable for treatment of haemophilia |
EA029685B1 (ru) * | 2012-07-11 | 2018-04-30 | Амуникс Оперэйтинг Инк. | Комплекс фактора viii с xten и белком фактора фон виллебранда и его применение (варианты) |
US9683044B2 (en) | 2012-08-20 | 2017-06-20 | Gliknik Inc. | Molecules with antigen binding and polyvalent FC gamma receptor binding activity |
CA2888982C (en) * | 2012-10-24 | 2020-07-21 | Platelet Targeted Therapeutics, Llc | Platelet targeted treatment |
GB201304973D0 (en) * | 2013-03-19 | 2013-05-01 | Profactor Pharma Ltd | Recombinant protein |
DK2796145T3 (da) | 2013-04-22 | 2018-01-29 | Csl Ltd | Et kovalent kompleks af von Willebrand-faktor og faktor VIII linket af en disulfidbro |
US20160207977A1 (en) * | 2013-06-12 | 2016-07-21 | Novo Nordisk A/S | Compounds Suitable for Treatment of Haemophilia |
EA201592022A1 (ru) * | 2013-06-28 | 2016-05-31 | Байоджен Ма Инк. | Расщепляемый тромбином линкер, содержащий xten, и его применение |
WO2014210547A1 (en) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | Biogen Idec Ma Inc. | Thrombin cleavable linker |
US10947269B2 (en) | 2013-08-08 | 2021-03-16 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Purification of chimeric FVIII molecules |
EP3033097B1 (en) | 2013-08-14 | 2021-03-10 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Factor viii-xten fusions and uses thereof |
CN114736305B (zh) * | 2014-01-10 | 2023-05-05 | 比奥贝拉蒂治疗公司 | 因子viii嵌合蛋白及其用途 |
US10626164B2 (en) * | 2014-07-25 | 2020-04-21 | Csl Limited | Purification of VWF |
US9701933B2 (en) * | 2014-09-19 | 2017-07-11 | Sarfaraz K. Niazi | Harvesting and purification or perfusion yielder (HAPPY) device |
CA2978374A1 (en) * | 2015-03-06 | 2016-09-15 | Csl Behring Recombinant Facility Ag | Modified von willebrand factor having improved half-life |
WO2016188905A1 (en) | 2015-05-22 | 2016-12-01 | Csl Behring Recombinant Facility Ag | Methods for preparing modified von willebrand factor |
CN107787328B (zh) | 2015-05-22 | 2021-08-06 | 康诺贝林伦瑙有限公司 | 用于治疗血友病的截短的血管性血友病因子多肽 |
CN108472337B (zh) | 2015-08-03 | 2022-11-25 | 比奥贝拉蒂治疗公司 | 因子ix融合蛋白以及其制备和使用方法 |
EP3400238B1 (en) | 2016-01-07 | 2021-05-19 | CSL Behring Lengnau AG | Mutated von willebrand factor |
SG10201912498YA (en) | 2016-01-07 | 2020-02-27 | CSL Behring Lengnau AG | Mutated truncated von willebrand factor |
WO2017214321A1 (en) | 2016-06-07 | 2017-12-14 | Gliknik Inc. | Cysteine-optimized stradomers |
WO2017222337A1 (ko) | 2016-06-24 | 2017-12-28 | 재단법인 목암생명과학연구소 | Fviii 및 vwf 인자를 포함하는 키메라 단백질 및 그 용도 |
DK3538133T3 (da) | 2016-11-11 | 2021-04-19 | CSL Behring Lengnau AG | Trunkeret von willebrand faktor polypeptider til behandling af hæmofili |
TW201828974A (zh) | 2016-11-11 | 2018-08-16 | 瑞士商Csl貝林重組技能公司 | 用於血管外施予以治療或預防凝血疾病之截短型類血友病因子(von Willebrand factor)多肽類 |
TW201835098A (zh) | 2016-12-09 | 2018-10-01 | 美商吉林尼克公司 | 製備最佳化之多聚化斯塔都聚體(stradomer) gl-2045 |
CN111132693A (zh) | 2017-04-20 | 2020-05-08 | 芝加哥大学 | 用与免疫治疗抗体连接的ecm亲和肽治疗癌症的方法和组合物 |
GB201707139D0 (en) * | 2017-05-04 | 2017-06-21 | Imp Innovations Ltd | Polypeptides |
US11141466B2 (en) | 2017-06-22 | 2021-10-12 | CSL Behring Lengnau AG | Modulation of FVIII immunogenicity by truncated VWF |
BR112020000322A2 (pt) * | 2017-07-07 | 2020-07-14 | Baxalta Incorporated | uso de fator de von willebrand recombinante (rvwf) |
US20200347116A1 (en) * | 2017-11-01 | 2020-11-05 | Queen's University At Kingston | Von willebrand factor proteins for treating bleeding disorders |
US10654911B1 (en) | 2019-04-02 | 2020-05-19 | Beijing Neoletix Biological Technology Co., Ltd. | Vector co-expressing truncated von Willebrand factor and factor VIII |
WO2021001522A1 (en) | 2019-07-04 | 2021-01-07 | CSL Behring Lengnau AG | A truncated von willebrand factor (vwf) for increasing the in vitro stability of coagulation factor viii |
WO2021094344A1 (en) | 2019-11-11 | 2021-05-20 | CSL Behring Lengnau AG | Polypeptides for inducing tolerance to factor viii |
Family Cites Families (85)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5234991A (en) | 1975-07-29 | 1993-08-10 | Pasteur Merieux Serums And Vaccines | Porous mineral support coated with an aminated polysaccharide polymer |
US4652639A (en) | 1982-05-06 | 1987-03-24 | Amgen | Manufacture and expression of structural genes |
US4511503A (en) | 1982-12-22 | 1985-04-16 | Genentech, Inc. | Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins |
US4965199A (en) | 1984-04-20 | 1990-10-23 | Genentech, Inc. | Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection |
US4631211A (en) | 1985-03-25 | 1986-12-23 | Scripps Clinic & Research Foundation | Means for sequential solid phase organic synthesis and methods using the same |
US5250421A (en) | 1986-01-03 | 1993-10-05 | Genetics Institute, Inc. | Method for producing factor VIII:C-type proteins |
US5149637A (en) | 1987-04-06 | 1992-09-22 | Scripps Clinic & Research Foundation | Recombinant Factor VIIIC fragments |
US5043429B1 (en) | 1987-05-01 | 1997-10-14 | Scripps Research Inst | Protein fragments containing factor VIII binding domain of von willebrand factor |
FR2616437B1 (fr) | 1987-06-11 | 1990-09-07 | Ibf | Polymeres composites, leur preparation et leur utilisation en chromatographie liquide |
US5200510A (en) * | 1987-06-16 | 1993-04-06 | Zymogenetics, Inc. | Method for purifying factor viii:c, von willebrand factor and complexes thereof |
US4965195A (en) | 1987-10-26 | 1990-10-23 | Immunex Corp. | Interleukin-7 |
US4968607A (en) | 1987-11-25 | 1990-11-06 | Immunex Corporation | Interleukin-1 receptors |
US5683912A (en) | 1994-07-21 | 1997-11-04 | The Salk Institute For Biological Studies | Cloning and expression of a novel acetylcholine-gated ion channel receptor subunit |
FR2632309B1 (fr) | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
WO1990005183A1 (en) | 1988-10-31 | 1990-05-17 | Immunex Corporation | Interleukin-4 receptors |
US5073627A (en) | 1989-08-22 | 1991-12-17 | Immunex Corporation | Fusion proteins comprising GM-CSF and IL-3 |
FR2657884B1 (fr) | 1990-02-05 | 1994-09-02 | Tm Innovation | Procede pour la preparation du facteur viii humain et d'analogues du facteur viii. |
US5350683A (en) | 1990-06-05 | 1994-09-27 | Immunex Corporation | DNA encoding type II interleukin-1 receptors |
AU651596B2 (en) | 1990-06-05 | 1994-07-28 | Immunex Corporation | Type II interleukin-1 receptors |
US5661008A (en) | 1991-03-15 | 1997-08-26 | Kabi Pharmacia Ab | Recombinant human factor VIII derivatives |
WO1993000107A1 (en) * | 1991-06-20 | 1993-01-07 | Rhone-Poulenc Rorer International (Holdings) Inc. | Therapeutic fragments of von willebrand factor |
DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
US5364771A (en) | 1992-04-07 | 1994-11-15 | Emory University | Hybrid human/porcine factor VIII |
US5268097A (en) | 1992-06-19 | 1993-12-07 | Sepracor Inc. | Passivated and stabilized porous mineral oxide supports and method for the preparation and use of same |
WO1994011384A1 (en) | 1992-11-13 | 1994-05-26 | Immunex Corporation | Novel cytokine designated elk ligand |
DE4435485C1 (de) | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
US5849989A (en) | 1994-10-07 | 1998-12-15 | Ontogeny, Inc. | Insulin promoter factor, and uses related thereto |
US5688912A (en) | 1995-09-22 | 1997-11-18 | Bayer Corporation | Peptide ligands which bind to von willebrand factor |
US6312893B1 (en) | 1996-01-23 | 2001-11-06 | Qiagen Genomics, Inc. | Methods and compositions for determining the sequence of nucleic acid molecules |
PL328271A1 (en) | 1996-01-23 | 1999-01-18 | Rapigene Inc | Methods of and compositions for determining sequences of nucleic acid molecules |
US6613508B1 (en) | 1996-01-23 | 2003-09-02 | Qiagen Genomics, Inc. | Methods and compositions for analyzing nucleic acid molecules utilizing sizing techniques |
AT403765B (de) | 1996-04-12 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer präparation enthaltend einen hochgereinigten komplex |
ATE305053T1 (de) | 1996-07-19 | 2005-10-15 | Univ Michigan | Für den von willebrand faktor der hunde kodierende dna und verfahren zu ihrer verwendung |
US6074832A (en) | 1996-07-19 | 2000-06-13 | The Regents Of The University Of Michigan | DNA encoding canine von Willebrand factor and methods of use |
US6063593A (en) | 1996-11-12 | 2000-05-16 | University Of Southern California University Park Campus | TGFβ1 responsive bone marrow derived cells to express a recombinant protein |
PT950067E (pt) | 1996-11-27 | 2007-12-06 | Genentech Inc | Purificação por afinidade de um polipéptido numa matriz de proteína a. |
AT406373B (de) | 1997-02-27 | 2000-04-25 | Immuno Ag | Verfahren zur reinigung von faktor viii/vwf-komplex mittels kationenaustauscherchromatographie |
AT406867B (de) | 1997-02-27 | 2000-10-25 | Immuno Ag | Verfahren zur gewinnung von hochreinem vwf oder faktor viii/vwf-komplex |
WO1998042753A1 (en) | 1997-03-27 | 1998-10-01 | Trustees Of Boston University | Novel antiplatelet agent |
US5804420A (en) | 1997-04-18 | 1998-09-08 | Bayer Corporation | Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium |
HUP0002518A3 (en) | 1997-07-22 | 2003-01-28 | Qiagen Genomics Inc | Computer method and system for correlating sequencing data by ms |
US6660843B1 (en) * | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
AU775529B2 (en) | 1998-11-10 | 2004-08-05 | Stichting Sanquin Bloedvoorziening | A factor VIII-polypeptide with factor VIII:C-activity |
US7144996B1 (en) | 1999-03-05 | 2006-12-05 | Genentech, Inc. | Nucleic acid encoding human suppressor of fused |
US20060099685A1 (en) | 1999-04-15 | 2006-05-11 | Yallop Christopher A | Recombinant expression of factor VIII in human cells |
US6855544B1 (en) | 1999-04-15 | 2005-02-15 | Crucell Holland B.V. | Recombinant protein production in a human cell |
US7604960B2 (en) | 1999-04-15 | 2009-10-20 | Crucell Holland B.V. | Transient protein expression methods |
US20050164386A1 (en) | 1999-04-15 | 2005-07-28 | Uytdehaag Alphonsus G. | Overexpression of enzymes involved in post-translational protein modifications in human cells |
EP1240337B1 (en) | 1999-12-24 | 2006-08-23 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds |
WO2001094366A1 (en) | 2000-06-02 | 2001-12-13 | Blue Heron Biotechnology, Inc. | Methods for improving the sequence fidelity of synthetic double-stranded oligonucleotides |
US7498304B2 (en) | 2000-06-16 | 2009-03-03 | Curis, Inc. | Angiogenesis-modulating compositions and uses |
US20050153383A1 (en) | 2000-07-28 | 2005-07-14 | Montgomery Robert R. | Synthetic and recombinant substrates for the detecion of the von willebrand factor-cleaving protease |
AUPR278301A0 (en) | 2001-01-31 | 2001-02-22 | Bionomics Limited | A novel gene |
JP2003284570A (ja) * | 2001-04-25 | 2003-10-07 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | フォンビルブラント因子(vWF)切断酵素 |
AU2002341746A1 (en) | 2001-09-18 | 2003-04-01 | Avigenics, Inc. | Production of a transgenic avian by cytoplasmic injection |
US7439043B2 (en) | 2001-10-10 | 2008-10-21 | Neose Technologies, Inc. | Galactosyl nucleotide sugars |
WO2003047507A2 (en) | 2001-11-30 | 2003-06-12 | Emory University | Factor viii c2 domain variants |
AU2002357249A1 (en) | 2001-12-13 | 2003-07-09 | Blue Heron Biotechnology, Inc. | Methods for removal of double-stranded oligonucleotides containing sequence errors using mismatch recognition proteins |
CA2484556A1 (en) | 2001-12-21 | 2003-07-24 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
US7317091B2 (en) * | 2002-03-01 | 2008-01-08 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
PT1543106E (pt) | 2002-07-15 | 2007-05-31 | Immunex Corp | Métodos e meios para controlar a sialilação de proteínas produzidas por células de mamíferos |
US7217798B2 (en) | 2003-10-15 | 2007-05-15 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of Fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis |
TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
EP3552627A1 (en) | 2003-05-06 | 2019-10-16 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Clotting factor-fc chimeric proteins to treat hemophilia |
US7348004B2 (en) * | 2003-05-06 | 2008-03-25 | Syntonix Pharmaceuticals, Inc. | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
JP2005073528A (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-24 | Genetics Inst Llc | 生物学的系における生物学的組織への血球の接着を阻害する方法、ならびにその方法に使用するための組成物 |
US7211559B2 (en) | 2003-10-31 | 2007-05-01 | University Of Maryland, Baltimore | Factor VIII compositions and methods |
US7875708B2 (en) | 2004-08-12 | 2011-01-25 | Lipoxen Technologies Limited | Sialic acid derivatives |
CA2578046A1 (en) | 2004-09-07 | 2006-03-16 | Archemix Corp. | Aptamer medicinal chemistry |
GB0423974D0 (en) * | 2004-10-28 | 2004-12-01 | Ares Trading Sa | Proteins |
EP1835938B1 (en) * | 2004-12-27 | 2013-08-07 | Baxter International Inc. | Polymer-von willebrand factor-conjugates |
WO2006074947A2 (en) | 2005-01-14 | 2006-07-20 | Ablynx N.V. | METHODS AND ASSAYS FOR DISTINGUISHING BETWEEN DIFFERENT FORMS OF DISEASES AND DISORDERS CHARACTERIZED BY THROMBOCYTOPENIA AND/OR BY SPONTANEOUS INTERACTION BETWEEN VON WILLEBRAND FACTOR (vWF) AND PLATELETS |
EP1739179A1 (en) | 2005-06-30 | 2007-01-03 | Octapharma AG | Serum-free stable transfection and production of recombinant human proteins in human cell lines |
US20080206246A1 (en) | 2006-04-05 | 2008-08-28 | Ravetch Jeffrey V | Polypeptides with enhanced anti-inflammatory and decreased cytotoxic properties and relating methods |
US9012605B2 (en) * | 2006-01-23 | 2015-04-21 | Amgen Inc. | Crystalline polypeptides |
EP1816201A1 (en) | 2006-02-06 | 2007-08-08 | CSL Behring GmbH | Modified coagulation factor VIIa with extended half-life |
AU2007257683A1 (en) | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Symphogen A/S | Pan-cell surface receptor- specific therapeutics |
CN105838699A (zh) | 2006-12-15 | 2016-08-10 | 巴克斯艾尔塔公司 | 具有延长的体内半衰期的因子VIIa-聚唾液酸结合物 |
JP5448839B2 (ja) * | 2006-12-22 | 2014-03-19 | ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー | インビボで長い半減期を有する修飾された凝固因子 |
CA2709073A1 (en) | 2007-12-27 | 2009-07-09 | Baxter International Inc. | Methods for differentiating plasma-derived protein from recombinant protein in a sample |
JP5784907B2 (ja) | 2007-12-28 | 2015-09-24 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドBaxter International Incorp0Rated | 組換え型vwf製剤 |
CN103739712B (zh) * | 2008-06-24 | 2016-10-05 | 德国杰特贝林生物制品有限公司 | 具有延长的体内半衰期的因子viii、冯·维勒布兰德因子或它们的复合物 |
JP2012500250A (ja) | 2008-08-21 | 2012-01-05 | オクタファルマ アクチェン ゲゼルシャフト | 組換えにより産生したヒト第viii及び第ix因子 |
US20110086362A1 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-14 | Massachusetts Institute Of Technology | High-Throughput Method for Quantifying Sialylation of Glycoproteins |
MX2012005527A (es) | 2009-11-13 | 2012-08-08 | Grifols Therapeutics Inc | Preparaciones que contienen el factor de von willebrand (fvw) procedimientos, kits y aplicaciones relacionados con las mismas. |
-
2010
- 2010-11-12 MX MX2012005527A patent/MX2012005527A/es active IP Right Grant
- 2010-11-12 ES ES10830777.8T patent/ES2600879T3/es active Active
- 2010-11-12 EP EP10830777.8A patent/EP2499165B1/en active Active
- 2010-11-12 WO PCT/US2010/056496 patent/WO2011060242A2/en active Application Filing
- 2010-11-12 NZ NZ600278A patent/NZ600278A/en not_active IP Right Cessation
- 2010-11-12 PT PT108307778T patent/PT2499165T/pt unknown
- 2010-11-12 AU AU2010319425A patent/AU2010319425B2/en active Active
- 2010-11-12 JP JP2012539007A patent/JP5876416B2/ja active Active
- 2010-11-12 US US13/509,309 patent/US8759293B2/en active Active
- 2010-11-12 PL PL10830777T patent/PL2499165T3/pl unknown
- 2010-11-12 HU HUE10830777A patent/HUE029454T2/en unknown
- 2010-11-12 CA CA2780542A patent/CA2780542C/en active Active
- 2010-11-12 RU RU2012122402/10A patent/RU2579977C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-11-12 BR BR112012011740A patent/BR112012011740A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2010-11-12 KR KR1020127013906A patent/KR101808751B1/ko active IP Right Grant
- 2010-11-12 CN CN201080051549.3A patent/CN102648212B/zh active Active
-
2012
- 2012-05-09 IL IL219679A patent/IL219679A/en not_active IP Right Cessation
- 2012-05-14 CL CL2012001258A patent/CL2012001258A1/es unknown
- 2012-05-24 ZA ZA2012/03795A patent/ZA201203795B/en unknown
- 2012-10-29 HK HK12110787.2A patent/HK1170244A1/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2499165B1 (en) | 2016-09-14 |
AU2010319425A1 (en) | 2012-06-14 |
IL219679A0 (en) | 2012-07-31 |
US8759293B2 (en) | 2014-06-24 |
RU2012122402A (ru) | 2013-12-20 |
NZ600278A (en) | 2014-04-30 |
RU2579977C2 (ru) | 2016-04-10 |
KR20120113214A (ko) | 2012-10-12 |
JP2013510581A (ja) | 2013-03-28 |
IL219679A (en) | 2016-11-30 |
PL2499165T3 (pl) | 2017-04-28 |
US20120289468A1 (en) | 2012-11-15 |
MX2012005527A (es) | 2012-08-08 |
HUE029454T2 (en) | 2017-03-28 |
HK1170244A1 (zh) | 2013-02-22 |
WO2011060242A3 (en) | 2011-10-13 |
EP2499165A2 (en) | 2012-09-19 |
KR101808751B1 (ko) | 2017-12-13 |
ZA201203795B (en) | 2014-10-29 |
WO2011060242A2 (en) | 2011-05-19 |
CA2780542A1 (en) | 2011-05-19 |
CL2012001258A1 (es) | 2012-09-14 |
AU2010319425B2 (en) | 2015-07-02 |
CA2780542C (en) | 2020-03-24 |
PT2499165T (pt) | 2016-10-28 |
ES2600879T3 (es) | 2017-02-13 |
BR112012011740A2 (pt) | 2018-03-27 |
CN102648212A (zh) | 2012-08-22 |
EP2499165A4 (en) | 2013-09-11 |
CN102648212B (zh) | 2014-12-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5876416B2 (ja) | フォンウィルブランド因子(vWF)含有調製品並びにこれに関連する方法、キット及び使用 | |
JP6696915B2 (ja) | Mic−1融合タンパク質及びその使用 | |
JP3560609B2 (ja) | Elkリガンドと呼ばれる新規なサイトカイン | |
JP5739865B2 (ja) | 第viii因子変異体および使用の方法 | |
EP1346034B1 (en) | VON WILLEBRAND FACTOR (vWF) CLEAVING PROTEASE POLYPEPTIDE, NUCLEIC ACID ENCODING THE POLYPEPTIDE AND USE OF POLYPEPTIDE | |
CN111018946A (zh) | 基于IL-15/IL-15Rα的缀合物的纯化方法 | |
EP3164150B1 (en) | Modified von willebrand factor | |
AU2017205776B2 (en) | Mutated von Willebrand factor | |
JP2002500011A (ja) | V201dna及びポリペプチド | |
JP2022528006A (ja) | トランケート型フォン・ヴィレブランド因子及び第viii因子を共発現するベクター | |
AU2013202564A1 (en) | Factor VIII, von Willebrand factor or complexes thereof with prolonged in vivo half-life | |
JP2002500012A (ja) | V197dna及びポリペプチド | |
ZA200304741B (en) | Von willebrand factor (vWF) cleaving protease polypeptide, nucleic acid encoding the polypeptide and use of polypeptide. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130924 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130924 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141125 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150728 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150826 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160105 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160121 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5876416 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |