JP5858654B2 - 白毛の予防・治療剤、非治療的な美容方法、エンドセリンレセプターb遺伝子発現促進剤及びmitf−m遺伝子発現促進剤 - Google Patents
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Description
上記課題を解決するための本願第1発明の構成は、
色素幹細胞数の維持・増加成分を有効成分として含有する白毛の予防・治療剤である。
上記課題を解決するための本願第2発明の構成は、
前記色素幹細胞数の維持・増加成分が、サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種である第1発明に記載の白毛の予防・治療剤である。
上記課題を解決するための本願第3発明の構成は、
サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種からなり又はこれらの少なくとも1種を有効成分として含有する色素幹細胞数の維持・増加剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進する非治療的な美容方法である。
上記課題を解決するための本願第4発明の構成は、
色素細胞数の維持・増加成分を有効成分として含有する白毛の予防・治療剤である。
上記課題を解決するための本願第5発明の構成は、
前記色素細胞数の維持・増加成分が、サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種である第4発明に記載の白毛の予防・治療剤である。
上記課題を解決するための本願第6発明の構成は、
サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種からなり又はこれらの少なくとも1種を有効成分として含有する色素細胞数の維持・増加剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進する非治療的な美容方法である。
上記課題を解決するための本願第7発明の構成は、
サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリン、メリッサ抽出物から選ばれる少なくとも1種からなり又はこれらの少なくとも1種を有効成分とするエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤である。
上記課題を解決するための本願第8発明の構成は、
第7発明に記載のエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤を有効成分として含有する白毛の予防・治療剤である。
上記課題を解決するための本願第9発明の構成は、
第7発明に記載のエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進する非治療的な美容方法である。
上記課題を解決するための本願第10発明の構成は、
サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリン、メリッサ抽出物から選ばれる少なくとも1種からなり又はこれらの少なくとも1種を有効成分とするMITF−M遺伝子発現促進剤である。
上記課題を解決するための本願第11発明の構成は、
第10発明に記載のMITF−M遺伝子発現促進剤を有効成分として含有する白毛の予防・治療剤である。
上記課題を解決するための本願第12発明の構成は、
第10発明に記載のMITF−M遺伝子発現促進剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進する非治療的な美容方法である。
ヒトは加齢と共に自然に白毛を発症しその進行は緩やかに進む。当該白毛の進行の過程において色素幹細胞の数は加齢と共に減少していく。第1発明によれば、色素幹細胞数の維持・増加により新たな体毛の成長が開始されたとき(即ち、新たな体毛のサイクルが開始されたとき)に色素細胞へ分化・成熟すべき色素幹細胞が確保される。即ち、体毛のサイクルの開始段階で毛包に色素細胞が存在するので、色素を有する毛が生えてくる。
第2発明によれば、より有効な白毛の予防・治療剤が提供される。サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンは色素幹細胞数の維持・増加成分であるが、色素細胞数の維持・増加が推定され、エンドセリンレセプターB遺伝子及びMITF−M遺伝子の発現も促進する。本願発明者は、これら複数の活性の複合的な関与により、より有効な白毛の予防・治療剤が実現したと推定している。
全体毛本数中における白毛本数の割合が増加するのは、加齢における自然な現象である。例えば、加齢にともない白髪や白ひげ等が増加する。第3発明、第6発明、第9発明及び第12発明によれば、体毛そのものの白毛化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進する非治療的な美容方法が提供される。サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリン、メリッサ抽出物は、それぞれ、色素幹細胞数の維持・増加、色素細胞数の維持・増加、エンドセリンレセプターB遺伝子の発現促進及びMITF−M遺伝子の発現促進から選ばれる複数の活性を有しているため、有効な非治療的美容方法が提供される。
白髪を含む白毛の状態・変化については一律の評価を得ることは難しく、むしろ現状について「白毛の増加を抑制したい、現在の白毛状態を維持したい、又は白毛から色素を有する毛へ改善したい」など変化の度合いについての要望が多く、これらの要望に応えることができる非治療的美容方法が提供される。
第4発明によれば、新たな体毛の成長が開始されたとき(即ち、新たな体毛のサイクルが開始されたとき)に色素細胞が確保される。即ち、体毛のサイクルの開始段階で毛包に色素細胞が存在するので、色素を有する毛が生えてくる。
第5発明によれば、より有効な白毛の予防・治療剤が提供される。サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンは色素幹細胞数を維持・増加させ、かつ、白毛の予防・治療効果を有しているので、色素細胞数、特に毛包における色素細胞数の維持・増加が合理的に推定される。また、サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンはエンドセリンレセプターB遺伝子及びMITF−M遺伝子の発現も促進する。本願発明者は、上記した複数の活性の複合的な関与により、より有効な白毛の予防・治療剤が実現したと推定している。
第7発明によれば、有効なエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤が提供される。エンドセリンレセプターB遺伝子の発現が促進されると、白毛の予防・治療効果がある。
第8発明によれば、エンドセリンレセプターB遺伝子の発現促進による、有効な白毛の予防・治療剤が提供される。サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンはエンドセリンレセプターB遺伝子の発現を促進する上に、色素幹細胞数を維持・増加し、色素細胞数の維持・増加が推定され、及びMITF−M遺伝子の発現を促進する。メリッサ抽出物は、エンドセリンレセプターB遺伝子の発現を促進する上に、MITF−M遺伝子の発現を促進する。本願発明者は、これら複数の活性の複合的な関与により、有効な白毛の予防・治療剤が実現したと推定している。
第10発明によれば、有効なMITF−M遺伝子発現促進剤が提供される。MITF−M遺伝子の発現が促進されると、白毛の予防・治療効果がある。その他、色素細胞活性の促進などの効果がある。
第11発明によれば、MITF−M遺伝子の発現促進による、有効な白毛の予防・治療剤が提供される。サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンはMITF−M遺伝子の発現を促進する上に、色素幹細胞数を維持・増加し、色素細胞数の維持・増加が推定され、及びエンドセリンレセプターB遺伝子の発現を促進する。メリッサ抽出物は、MITF−M遺伝子の発現を促進する上に、エンドセリンレセプターB遺伝子の発現を促進する。本願発明者は、これら複数の活性の複合的な関与により、有効な白毛の予防・治療剤が実現したと推定している。
「サクラ抽出物」とは、バラ科のサクラ属の植物であるサクラの葉、茎、花、種子等から溶媒抽出、超臨界流体抽出、水蒸気蒸留等の蒸留法、圧搾等の周知の方法により得られる抽出物をいう。本発明の実施にあたっては、抽出物そのものを使用しても良いし、抽出溶媒等に溶解した状態の溶液を使用しても良い。サクラ抽出物を含有する具体的な市販品として、例えば、一丸ファルコス(株)製の商品名「サクラエキスB」を挙げることができる。
遺伝子の発現においては、遺伝子の転写、翻訳により遺伝子発現が実現するという流れがある。プロモーターとはRNA合成酵素の結合部位であり、プロモーターの活性化は当該プロモーターにより転写が支配される遺伝子のmRNA量の増加を意味し、ひいては遺伝子の発現促進につながる。ゆえに、本発明におけるエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤は、エンドセリンレセプターB遺伝子プロモーター活性化剤を含む概念であり、MITF−M遺伝子発現促進剤はMITF−M遺伝子プロモーター活性化剤を含む概念である。
エンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤、MITF−M遺伝子発現促進剤がサクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリン、メリッサ抽出物から選ばれる少なくとも1種からなる場合、例えば抽出物そのもの、ルテオリンそのもの、上記4成分の2種以上の混合物がエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤、MITF−M遺伝子発現促進剤を構成する。この場合、当該剤の量そのものが有効成分量となる。
本発明のエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤、MITF−M遺伝子発現促進剤には、多価アルコールを含有させることができる。多価アルコールとしては、グリコール類、グリセリン類等が挙げられる。
本発明のエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤、MITF−M遺伝子発現促進剤の剤型は限定されないが、例えば液状、乳液状、クリーム状又はゲル状が好適である。また、顆粒剤、糖衣剤、カプセル剤、吸入剤とすることも好ましい。
本発明のエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤、MITF−M遺伝子発現促進剤の投与経路は特に限定されず、経口投与、吸入投与、手や塗布具等によって皮膚に塗布する経皮吸収、血管投与、皮下注射および皮内注射などが可能であり、経皮吸収及び経口投与が好ましく、経皮吸収が特に好ましい。
本発明において体毛はヒトを含む動物の任意の毛を意味する。本発明における体毛は頭に生える毛髪、口髭や顎鬚を含むひげ、眉毛、睫毛、腕・脚・胸に生える毛を好ましく例示することができ、毛髪、ひげ、眉毛、睫毛を更に好ましく例示することができ、毛髪、ひげを特に好ましく例示することができる。
本発明における白毛の予防・治療剤の色素幹細胞数の維持・増加成分は特に限定されないが、上述のサクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種が好ましい。これらの1種を単独で用いても良いし、2種以上を用いても良い。本発明における色素幹細胞数の維持・増加剤は、サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種からなり又はこれらの少なくとも1種を有効成分とするものである。サクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種が必須成分である。
本発明における色素幹細胞数の維持・増加剤がサクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種からなる場合、例えば抽出物そのもの、ルテオリンそのもの、上記3成分の2種以上の混合物が色素幹細胞数の維持・増加剤を構成する。この場合、当該剤の量そのものが有効成分量となる。
本発明における白毛の予防・治療剤の色素細胞数の維持・増加成分は特に限定されないが、上述のサクラ抽出物、ローマカミツレ抽出物、ルテオリンから選ばれる少なくとも1種が好ましい。これらの1種を単独で用いても良いし、2種以上を用いても良い。
本発明における白毛の予防・治療剤は、上述のエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤、MITF−M遺伝子発現促進剤、色素幹細胞数の維持・増加成分又は色素細胞数の維持・増加成分を有効成分として含有する白毛の予防・治療剤である。また、これらの有効成分を複数含有する白毛の予防・治療剤としても良い。
本発明における非治療的な美容方法は、上述の色素幹細胞数の維持・増加剤、色素細胞数の維持・増加剤、エンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤又はMITF−M遺伝子発現促進剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進する非治療的な美容方法である。また、これらの剤を複数用いても良い。
白髪モデルマウスとして、PCT/JP2006/302783号に開示された公知の白髪モデルマウス(以下、単に「マウス」という)を使用した。このマウスは、詳細な説明は省くが、上述の通り一定の遺伝子型を持ったノックアウト・トランスジェニックマウスであって、生後はじめて生える体毛の色が黒色ないしほぼ黒色であり、加齢と共に白毛を自然発症するという表現型を持っている。
マウスが生後4ケ月齢の時点で体毛のサイクルの休止期を迎えるのに合わせ、マウスの背中部における同一特定部位の特定面積の体毛をバリカンまたはシェーバーにより長方形の形状(サイズ:1.5cmx3.0cm)に毛刈りし(当該刈った体毛を以下、検体毛と称する)、毛刈によって得た全検体毛本数を計数した上で、以下の各例の方法で供試薬剤を当該毛刈り部位の皮膚表面に一日1回投与を続けた。最初に供試薬剤を投与した日が試験開始日である。その後1ヶ月ごとに供試薬剤の投与部位の毛刈りを実施し、検体毛の白毛率を後述の方法により必要に応じて測定した。
検体毛を、光学顕微鏡(オリンパス社製BX61、10倍〜20倍)にて1本ずつ白毛か黒毛かを分別し、白毛率=白毛本数/全検体毛本数として算出した。白毛か黒毛かの分別においては、マウス体毛である検体毛のメジュラー中にメラニンが見られるか否かを基準として判断した。この基準に基づく黒毛の例を図1の「黒毛」と表記した上側の顕微鏡写真(メジュラー中にメラニンが詰まっている)に、白毛の例を図1の「白毛」と表記した下側の顕微鏡写真(メジュラー中にメラニンが一切見られない)にそれぞれ示す。図1の例では両極端の例を示しているが、中間の場合、即ち少しでもメラニンが確認できれば、黒毛であるとして判断した。
検体毛の白毛率を色彩色差計を用いて測定する方法を検討した。予めマウスの、目視で明らかに白毛率が異なると思われる61種の体毛について前記視覚的観察による白毛率を求めた後、色彩測色計(コニカミノルタ社製CR−400)を用いて、L*a*b*表色系の明度指数L*を測定した。測定においては、図2に示すように刈り取った検体毛を毛束状にし、色彩色差計のプローブを毛束に押し当てて測定した。図2の右側はほぼ100%白毛の毛束を、左側は白毛混じりの毛束を示している。白毛率(%)と、測定したL*値との相関性を表計算ソフト(マイクロソフト社エクセル)により統計処理をしたところ、yを白毛率(%)、xをL*値、決定係数R2とした時、y=0.021x+0.4024 R2=0.9101という一次回帰直線を求めることができ、白毛率とL*値には相関があることが示された。
ローマカミツレ抽出物試験区として、水と1,3−ブチレングリコールが質量比1:1で混合された溶媒中に有効成分としてのローマカミツレ抽出物を0.6質量%含有する一丸ファルコス(株)製「ファルコレックスローマカミツレB」の白毛予防・治療効果を評価した。マウスに対し、毛刈り部位に体積比(v/v)でエタノール:水=7:3(以下、70%エタノールと称する)にて希釈したファルコレックスローマカミツレBの10%(v/v)溶液を毎日200μL塗布した。コントロールとして、希釈溶媒である70%エタノールを同様に塗布した。n(以後、nは検体数を示す)=7にて5ヶ月間塗布しつづけ、試験開始から1ヶ月ごとに白毛率を求めた結果を図3に示す。なお、試験期間中の毛刈部位の全検体毛本数はほぼ一定の数で推移した。
白毛率の平均は、ローマカミツレ抽出物の投与区(図3中では▲でプロットしている。)では、投与期間1ヶ月(図3中では1Mと表現している。以下、期間の長さに合わせて2M等とする。)で12.3%、2ヶ月で11.3%、3ヶ月で16.1%、4ヶ月で16.4%、5ヶ月で13.8%であった。一方、70%エタノールの投与区(図3中では◆でプロットしている。)では、1ヶ月で13.9%、2ヶ月で14.7%、3ヶ月で21.5%、4ヶ月で23.5%、5ヶ月で24.4%であった。
以上の通り、ローマカミツレ抽出物試験区とコントロールの比較から、ローマカミツレ抽出物は有意に白毛率の上昇を抑制し、白毛予防・治療効果を有することが確認された。また、ローマカミツレ抽出物は非治療的な美容方法に用いることが可能であることが示された。
有効成分の濃度と効果の関係を評価した。マウスへの投与条件は実施例1と同様で、70%エタノールにて希釈したファルコレックスローマカミツレBの2%(v/v)溶液、5%(v/v)溶液および10%(v/v)溶液をそれぞれ5ヶ月間塗布し、試験開始から5ヶ月後に塗布部位の検体毛と、70%エタノールを同様に塗布した部位の検体毛とのL*値の差を比較した結果を白毛率に換算して図4に示す。なお、試験期間中の毛刈部位の全検体毛本数はほぼ一定の数で推移した。
白毛率の平均は、70%エタノールの投与区が22.9%、2%(v/v)溶液の投与区が15.6%、5%(v/v)溶液の投与区が13.1%、10%(v/v)溶液の投与区が11.0%であった。
以上の通り、ローマカミツレ抽出物の濃度と白毛率の上昇抑制効果は比例しており、白毛予防・治療効果は有効成分の濃度に依存することが確認された。また、非治療的な美容方法における効果も有効成分の濃度に依存することが確認された。本実施例の結果より、有効成分の投与量を調節することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化の抑制や体毛における白毛から色素を有する毛への変化の促進について所望の程度を実現可能であることが示された。
実施例1と同様の条件で、サクラ抽出物試験区として、水と1,3−ブチレングリコールが質量比1:1で混合された溶媒中に有効成分としてのサクラ抽出物を2.0質量%含有する一丸ファルコス(株)製「サクラエキスB」を、70%エタノールにて10%(v/v)希釈した溶液を用いn=7にて白毛予防・治療効果を評価した結果を図5に示す。また、ルテオリン試験区として、LKT社製「ルテオリン」を70%エタノールにて1%(w/v)希釈した溶液を用いn=13にて白毛予防・治療効果を評価した結果を図6に示す。なお、それぞれの試験期間中の毛刈部位の全検体毛本数はほぼ一定の数で推移した。
図5に示す白毛率の平均は、サクラ抽出物の投与区(図5中では■でプロットしている。)では、塗布前で7.0%、投与期間1ヶ月で12.0%、2ヶ月で11.4%、3ヶ月で16.1%、4ヶ月で15.3%、5ヶ月で17.8%、6ヶ月で19.3%、7ヶ月で15.9%、8ヶ月で19.0%、9ヶ月で19.0%であった。一方、70%エタノールの投与区(図5中では◆でプロットしている。)では、塗布前で7.0%、投与期間1ヶ月で13.9%、2ヶ月で14.7%、3ヶ月で21.5%、4ヶ月で23.5%、5ヶ月で24.4%、6ヶ月で26.7%、7ヶ月で26.8%、8ヶ月で31.2%、9ヶ月で35.3%であった。
図6に示す白毛率の平均は、ルテオリンの投与区(図6中では■でプロットしている。)では、塗布前で14.3%、投与期間1ヶ月で14.1%、2ヶ月で16.5%、3ヶ月で19.0%、4ヶ月で21.1%であった。一方、70%エタノールの投与区(図6中では◆でプロットしている。)では、塗布前で14.1%、1ヶ月で20.3%、2ヶ月で25.0%、3ヶ月で30.2%、4ヶ月で35.1%であった。
以上の通り、サクラ抽出物試験区とコントロールの比較、ルテオリン試験区とコントロールの比較から、サクラ抽出物、ルテオリンは有意に白毛率の上昇を抑制し、白毛予防・治療効果を有することが確認された。また、サクラ抽出物、ルテオリンは非治療的な美容方法に用いることが可能であることが示された。
メリッサ抽出物試験区として、水と1,3−ブチレングリコールが質量比1:1で混合された溶媒中に有効成分としてのメリッサ抽出物を0.8質量%含有する一丸ファルコス(株)製「ファルコレックスメリッサB」を、70%エタノールにて10%(v/v)希釈した溶液を用いn=5にて白毛予防・治療効果を評価した。マウスへの投与条件は実施例1と同様であるが、溶液の塗布期間は2週間とし、試験開始から2週間後に塗布部位の検体毛と、70%エタノールを塗布した部位の体毛とのL*値の差(ΔL*)を比較した結果を図7に示す。なお、試験期間中の毛刈部位の全検体毛本数はほぼ一定の数で推移した。ΔL*値の平均は、メリッサ抽出物の投与区で4.59、70%エタノールの投与区で2.13であった。
以上の通り、メリッサ抽出物試験区とコントロールの比較から、メリッサ抽出物は有意に体毛を黒色化し、白毛予防・治療効果を有することが確認された。また、メリッサ抽出物は非治療的な美容方法に用いることが可能であることが示された。
有効成分が色素幹細胞数に与える効果を評価した。色素幹細胞数の計数は、以下の(1)〜(9)に述べる手順により実施した。
(1)検体毛を毛刈りした部分の皮膚の一部(約10mm×5mm角)を切除後に縫合可能なように切り取る。
(2)切り取った皮膚を未固定にて凍結包埋する
(3)凍結切片を12μmの厚さにて作製する
(4)スライドグラスに切片をのせ、10分間冷アセトンで固定する
(5)PBSにて洗浄し、4℃で抗dct抗体(サンタクルーズ社製を1:1000で使用)および抗c−kit抗体(サンタクルーズ社製を1:1000で使用)にて免疫染色する
(6)12時間後、PBSにて洗浄する
(7)Alexa 594 donkey αgoat IgG(サンタクルーズ社製を1:1000で使用)およびAlexa 488 donkey αRat IgG(サンタクルーズ社を1:1000)にて室温で10分間二次抗体反応をさせる。
(8)PBSにて洗浄し、核染色後封入する。
(9)光学顕微鏡(オリンパス社製BX61 20〜40倍)にて毛包を観察し、下記(I)〜(III)の全ての条件を満たす細胞を色素幹細胞とし、各例で評価するマウス皮膚中の毛包70本中の色素幹細胞を計数した。
なお、色素幹細胞と判断する条件は以下の(I)〜(III);
(I)体毛バルジ領域に存在する細胞である。
(II)dctが発現している。
(III)c−kitの発現がない細胞、もしくは弱い細胞である。
を満たすものとした。
以上の方法を用い、実施例1,3,4で使用したマウスおよびコントロールのマウスを対象に実施した結果を、図8〜10に示す。
図8について、実験開始後4ヶ月時点での色素幹細胞数の平均は、ファルコレックスローマカミツレBの10%(v/v)溶液の投与区(n=2)では22.2個、70%エタノールの投与区(n=5)では14.4個であり、t−testによりこれらの間には有意差が認められた。
図9について、実験開始後7ヶ月時点での色素幹細胞数の平均は、サクラエキスBの10%(v/v)溶液の投与区(n=4)では22.3個、70%エタノールの投与区(n=5)では14.4個であり、t−testによりこれらの間には有意差が認められた。
図10について、実験開始後4ヶ月時点での色素幹細胞数の平均は、ルテオリンの1%(w/v)溶液の投与区(n=6)では17.2個、70%エタノールの投与区では10.0個であり、Paired t−testによりこれらの間には有意差が認められた。
以上の通り、各試験区とコントロールの比較から、ローマカミツレ抽出物、サクラ抽出物、ルテオリンは有意に色素幹細胞数を維持・増加させる効果を有することが確認された。この結果は、これら成分が同時に色素細胞数を維持・増加する効果を有することも示しているのは明らかである。
有効成分がエンドセリンレセプターB(EDNRB)遺伝子発現促進に与える効果を評価した。評価は、以下の方法により実施した。
(1)6cm dishを用いて、SK−Mel28ヒトメラノーマ細胞にリポフェクトアミンLTX(Invitrogen社)を使用し、発明者らが作製したヒトEDNRB遺伝子プロモーター(上流1013bp)配列が入ったプラスミドDNAをトランスフェクションする。
(2)24時間後、96ウエルプレートに細胞をまきなおす。
(3)24時間後、有効成分を100μLの培地に対し0.1μL添加した。なお各有効成分は、ローマカミツレ抽出物、サクラ抽出物およびメリッサ抽出物については実施例1,3,5で使用した市販品を希釈せずそのまま用い、ルテオリンについてはアナリティコン社製の10mg/mlジメチルスルホキシド溶液として市販されているものを用いた。コントロールとしては、各市販品の溶媒を用いた。
(4)24時間後、Dual Ruciferase Kit(Promega社)を使用しプロモーター活性を測定した。測定は、当該キットの説明書に記載の方法に従った。
以上の方法を用い、上述したローマカミツレ抽出物、サクラ抽出物、ルテオリンおよびメリッサ抽出物について評価した結果を図11〜14に示す。
ローマカミツレ抽出物の投与区では、コントロールと比較してプロモーター活性が3.50倍に上昇した(図11)。サクラ抽出物の投与区では、コントロールと比較してプロモーター活性が1.51倍に上昇した(図12)。ルテオリンの投与区では、コントロールと比較してプロモーター活性が2.63倍に上昇した(図13)。メリッサ抽出物の投与区では、コントロールと比較してプロモーター活性が2.57倍に上昇した(図14)。なお、遺伝子の発現においては、遺伝子の転写から翻訳へという流れがある。プロモーターの活性化からは転写の活性化(転写量の増大)が合理的に推測さるので、即ちプロモーターの活性化からは遺伝子発現の促進が合理的に推定できる。
以上の通り、ローマカミツレ抽出物、サクラ抽出物、ルテオリンおよびメリッサ抽出物は有意にエンドセリンレセプターB遺伝子発現を促進させる効果を有することが確認された。
(1)6cm dishを用いて、SK−Mel28ヒトメラノーマ細胞にリポフェクトアミンLTX(Invitrogen社)を使用し、発明者らが作製したヒトMITF−M 遺伝子プロモーター(上流330bp)配列が入ったプラスミドDNAをトランスフェクションする。
(2)24時間後、96ウエルプレートに細胞をまきなおす。
(3)24時間後、有効成分を100μLの培地に対し0.1μL添加した。なお各有効成分は、ローマカミツレ抽出物、サクラ抽出物およびメリッサ抽出物については実施例1,3,5で使用した市販品を希釈せずそのまま用い、ルテオリンについてはアナリティコン社製の10mg/mlジメチルスルホキシド溶液として市販されているものを用いた。コントロールとしては、各市販品の溶媒を用いた。
(4)24時間後、Dual Ruciferase Kit(Promega社)を使用しプロモーター活性を測定した。測定は、当該キットの説明書に記載の方法に従った。
以上の方法を用い、上述したローマカミツレ抽出物、サクラ抽出物、ルテオリンおよびメリッサ抽出物について評価した結果を図15〜18に示す。
ローマカミツレ抽出物の投与区では、コントロールと比較してプロモーター活性が1.79倍に上昇した(図15)。サクラ抽出物の投与区では、コントロールと比較してプロモーター活性が2.22倍に上昇した(図16)。ルテオリンの投与区では、コントロールと比較してプロモーター活性が2.68倍に上昇した(図17)。メリッサ抽出物の投与区では、コントロールと比較してプロモーター活性が1.88倍に上昇した(図18)。なお、遺伝子の発現においては、遺伝子の転写から翻訳へという流れがある。プロモーターの活性化からは転写の活性化(転写量の増大)が合理的に推測さるので、即ちプロモーターの活性化からは遺伝子発現の促進が合理的に推定できる。
以上の通り、ローマカミツレ抽出物、サクラ抽出物、ルテオリンおよびメリッサ抽出物は有意にMITF−M遺伝子発現を促進させる効果を有することが確認された。
頭髪に白髪が出始めた30代男性を被験者とし、70%エタノールにて希釈した上述の「サクラエキスB」の1%(v/v)溶液を被験者の白髪が出始めた部位の頭皮表面に1回あたり200μlずつ毎日2回、半年間塗布した。塗布を開始して半年間経過後、被験者の当該塗布部位の白髪は休止期になって抜け落ちたが、その後、1年半にわたり、当該塗布部位からは黒い髪しか生えてこなかった。
顎に白鬚が生えている40代男性を被験者とした。本実施例においては、原則として白黒の判別は目視にて行った。ただし、目視で白黒の判別がつきにくい場合は株式会社モリテックスのCharm View(30倍)を用いて鬚を撮影し、Adobe Photoshop Creative Suite 2 Premium(Adobe Systems Incorporated)を用いて以下のデータ処理を行った。鬚の表面画像の一部を0.3cm×1.0cmの範囲で選択し、この選択部について色調の平均化を行った。L*値が40を越える鬚を白鬚、40以下の鬚を黒鬚と判断した。
左右両眉に白眉毛が生えている50代男性を被験者とした。本実施例においては、株式会社モリテックスのCharm View(30倍)を用いて眉毛を撮影し、原則として白黒の判別は撮影した写真の画像を用いて目視にて行った。ただし、目視で白黒の判別がつきにくい場合はAdobe Photoshop Creative Suite 2 Premium(Adobe Systems Incorporated)を用いて以下のデータ処理を行った。眉毛の表面画像の一部を0.3cm×1.0cmの範囲で選択し、この選択部について色調の平均化を行った。L*値が40を越える眉毛を白眉毛、40以下の眉毛を黒眉毛と判断した。
Claims (10)
- 色素幹細胞数の維持・増加成分であるサクラ抽出物を有効成分として含有することを特徴とする白毛の予防・治療剤。
- サクラ抽出物を有効成分として含有する色素幹細胞数の維持・増加剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進することを特徴とする非治療的な美容方法。
- 色素細胞数の維持・増加成分であるサクラ抽出物を有効成分として含有することを特徴とする白毛の予防・治療剤。
- サクラ抽出物を有効成分として含有する色素細胞数の維持・増加剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進することを特徴とする非治療的な美容方法。
- サクラ抽出物、メリッサ抽出物から選ばれる少なくとも1種からなり又はこれらの少なくとも1種を有効成分とすることを特徴とするエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤。
- 請求項5に記載のエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤を有効成分として含有することを特徴とする白毛の予防・治療剤。
- 請求項5に記載のエンドセリンレセプターB遺伝子発現促進剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進することを特徴とする非治療的な美容方法。
- サクラ抽出物、メリッサ抽出物から選ばれる少なくとも1種からなり又はこれらの少なくとも1種を有効成分とすることを特徴とするMITF−M遺伝子発現促進剤。
- 請求項8に記載のMITF−M遺伝子発現促進剤を有効成分として含有することを特徴とする白毛の予防・治療剤。
- 請求項8に記載のMITF−M遺伝子発現促進剤を投与することにより、体毛における色素を有する毛から白毛への変化を抑制し又は白毛から色素を有する毛への変化を促進することを特徴とする非治療的な美容方法。
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