JP5831900B2 - 酵素活性阻害剤 - Google Patents
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ヒシ試料および熱水抽出物の調製
原料のヒシとして、野生のワビシ(Trapa japonica)、オニビシ(Trapanatans)およびトウビシ(Trapabicornis)を採取して使用した。それぞれのヒシは水道水にて洗浄後、天日で2〜3日間乾燥させ、果実と外皮とに分けた。マイクロ波常温乾燥機にて外皮を乾燥させ、粉砕機にて微粉末とした。比較例として、緑茶も同様に微粉末とした。
α−アミラーゼ阻害作用の検証
α−アミラーゼ阻害作用を以下の通り検証した。0.4%可溶性デンプンと5mM塩化カルシウム・2水和物を緩衝液(pH6)に溶かした基質溶液300μlにサンプル溶液50μlを加えた。酵素溶液として、α−アミラーゼ(ブタ膵液由来アミラーゼ、シグマ製TypeVI−B)1.3mgを緩衝液(pH6)に20mlに溶解したもの150μlを加え、37℃で10分間反応させた。その後、沸騰水中で10分間、加熱することで酵素反応を停止させ、水冷し、2M水酸化ナトリウム水溶液100μlと0.5%ジニトロサリチル酸水溶液200μlを加え、沸騰水浴中で10分間加熱し、540nmの吸光度を測定した。
(上記式中、Aは対照(水)のブランク(酵素なし)の吸光度、Bは対照(水)の吸光度、Cはサンプルのブランク(酵素なし)の吸光度、Dはサンプルの吸光度を示す。)
アンジオテンシンI変換酵素(ACE)の阻害活性の検証
アンジオテンシンI変換酵素(ACE)に関する検証は、同仁化学研究所のACE Kit−WSTを用いて行った。ACE Kit−WSTは3−Hydroxybutyryl−Gly−Gly−Gly (3HB−GGG)から切り出されてくる3−Hydroxybutyric acid(3HB)を酵素法により検出するものである。
(上記式中、Aは対照(水)のブランク(酵素なし)の吸光度、Bは対照(水)の吸光度、Cはサンプルのブランク(酵素なし)の吸光度、Dはサンプルの吸光度を示す。)
リパーゼ阻害活性の検証
リパーゼ阻害活性は、リパーゼキットS(大日本住友製薬)を用いて確認した。その原理は次のとおりである。リパーゼは、基質である三酪酸ジメルカプロール(BALB)を分解してジメルカプロール(BAL)を生成させる。生成したBALはDTNBと定量的に反応し、黄色の5−チオ−2−ニトロ安息香酸(TNB)アニオンを生成する。反応停止液を加えることにより、リパーゼの反応を停止すると同時に、反応混液を清澄にする。呈色の強さ(吸光度)は検体中のリパーゼ活性を反映するので、吸光度から直接リパーゼ活性を算出することができる。これを利用して、リパーゼ活性の阻害活性を調べた。
(上記式中、Aは対照(水)のブランク(酵素なし)の吸光度、Bは対照(水)の吸光度、Cはサンプルのブランク(酵素なし)の吸光度、Dはサンプルの吸光度を示す。)
Claims (3)
- 菱科植物の外皮の抽出物を有効成分として含有する酵素活性阻害剤であって、当該酵素が、リパーゼ、またはアンジオテンシンI変換酵素(ACE)であることを特徴とする酵素活性阻害剤。
- 菱科植物が、ワビシ(Trapa japonica)、オニビシ(Trapa natans)、トウビシ(Trapa bicornis)、またはヒメビシ(Trapa incisa)であることを特徴とする請求項1に記載の酵素活性阻害剤。
- 請求項1または2に記載の酵素活性阻害剤の製造方法であって、菱科植物の外皮を熱水中で攪拌することによって熱水抽出することを特徴とする方法。
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