JP5826107B2

JP5826107B2 - 微生物の腸内投与用組成物

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Publication number: JP5826107B2
Application number: JP2012108867A
Authority: JP
Inventors: チー‐チェンチェン，; ブルーノエイチ．リューエンベルゲア，; ローニシュヴァイケルト，; アーンストツェディ，
Original assignee: DSM IP Assets BV
Current assignee: DSM IP Assets BV
Priority date: 2005-05-18
Filing date: 2012-05-10
Publication date: 2015-12-02
Anticipated expiration: 2026-05-18
Also published as: US20090214647A1; JP5576606B2; ES2368344T3; ATE515198T1; US8697126B2; WO2006122965A1; CN101257804A; JP2012175977A; EP1885207B1; EP1885207A1; JP2008539777A

Description

発明の詳細な説明

本発明は、腸管へ微生物を供給するために使用することができる組成物に関する。生きた微生物を含む、栄養または医薬目的の組成物を製造する場合、いくつかの問題に直面する可能性がある。こうした問題のいくつかは、国際公開第９７／１６１９８号パンフレットで取り組まれている。特に、腸管内で活性を発揮させることを目的とする微生物については、胃液中に存在する酸の影響から保護する必要がある。さらに、通常凍結乾燥されている、担体または保護マトリックス中に内包された微生物は、吸湿性を有する傾向があり、通常の保存条件ではケーキングを起こしやすい。このケーキングによって、例えば流動性が不十分になることから、錠剤などの固形製剤への加工が困難となるおそれがあり、また、さらには、急激な吸湿により微生物の生存という観点で貯蔵安定性にマイナスの影響を及ぼすおそれがある。粉末物の流動性は、粒径があまりに小さいと流動が妨げられることがあるように、粒径によっても影響を受け、その結果、例えば、錠剤中の活性成分の含有量の均一性に問題が生じるおそれがある。したがって、吸湿性が低くかつ流動性に優れることが、例えば錠剤やカプセルなどを調製するための粉末物の加工に、特に微生物を含む粉末物の加工に必須の特徴である。

国際公開第９７／１６１９８号パンフレットには、胃液耐性マトリックス中に担持させた乳酸桿菌種などのプロバイオティック微生物の組成物が開示されている。この組成物は、乾燥した微生物を胃液耐性マトリックス成分と混合し、その混合物を圧密化し、得られた混合物を乾式造粒することにより調製される。場合により、こうして得られた粒状物は、さらなる乾式造粒工程に供され、その粒状物に胃液耐性コーティングが施される。

国際公開第９７／１６１９８号パンフレットに記載された方法で調製された粒状物を使用するなど、公知の製剤方法を用いても、必ずしも、取扱い中に錠剤が容易に壊れないような錠剤硬さや錠剤曲げ強度などの満足できる特性を示す錠剤が得られるとは限らないことが判った。

本発明によれば、微生物を、錠剤化のために優れた特性を有する、特に、吸湿性がなく、かつ良好な流動性を有する粒状物または粉末に加工することができ、そして、それらから、微生物を中鎖または長鎖脂肪酸の塩とブレンドおよび／または圧密化して、粉末混合物または圧密化粒状物を調製する第１の工程と、前記粉末混合物または圧密化粒状物にコーティングを施す第２の工程とを含む新規な方法により、満足できる取扱い特性を有する錠剤を調製できることが判った。

したがって、一態様では、本発明は、微生物を含む固体組成物の製造方法であって、第１の工程で微生物と中鎖または長鎖脂肪酸の塩との混合物を圧密化および粒状化し、その後直ちに、第２の工程で前記粒状物にコーティングを施す方法に関する。

他の態様では、本発明は、微生物を含む固体組成物の製造方法であって、第１の工程で微生物を中鎖または長鎖脂肪酸の塩とブレンドして粉末混合物を製造し、その後直ちに、第２の工程で粉末混合物の粒子にコーティングを施す方法、および、前記方法により得られる組成物に関する。

さらに他の態様では、本発明は、中鎖または長鎖脂肪酸の塩によりコーティングされるか、または、その塩に内包された微生物を含有する固体組成物であって、微生物は場合により中鎖または長鎖脂肪酸の塩によるコーティングの下に第１のコーティング層を有し、かつ、この組成物は、この組成物に含まれるいかなる物質も実質的に含有しない外部コーティングを有している、固体組成物に関する。

コーティングは、コーティング材料の量およびコーティング条件に応じて連続であってもよいし不連続であってもよい。理論に拘束されるものではないが、粒子のなかには、部分的または完全にコーティングされ、その後、凝集して大きな粒子を形成するものがあると考えられる。これらの凝集粒子は、その後またコーティングされる。このように、コーティングプロセスには本質的に粒状化プロセスが含まれるであろう。実際、そのような粒状化プロセスは、粒子を大きくし、粉の流動を改善するという点で、望ましい。

本発明の方法は、いかなる微生物またはその混合物を使用しても実施することができる。ここで使用されている微生物という用語は、一般に炭水化物および／またはタンパク質などの助剤を含む凍結乾燥調製物や、例えばタンパク質、マルトデキストリン、トレハロースおよび／またはアスコルビン酸などのマトリックス材料で微生物をコーティングもしくは内包した調製物など、あらゆる固体形態の微生物を意味する。本発明の文脈においては、「１種の微生物」とは、少なくとも１種の微生物を意味する。微生物は、栄養補助剤または医薬品または食品添加物として腸管へ供給することができるものが好ましい。微生物は、プロバイオティックまたはその混合物がより好ましい。プロバイオティックは、ここでは、微生物のバランスを改善することによってヒト宿主細胞に有益な影響を及ぼす、生きた微生物菌株であると定義する。好ましいプロバイオティックは、ビフィドバクテリウム属、乳酸桿菌属、プロピオニバクテリウム属、腸球菌属の分離菌株およびこれらの混合物である。より好ましいプロバイオティック菌種は、ビフィドバクテリウムインファンティス、ビフィドバクテリウムロングム、ビフィドバクテリウムアニマリス、ビフィドバクテリウムラクティス、ラクトバチルスアシドフィルス、ラクトバチルスラムノスス、ラクトバチルスカゼイ、ラクトバチルスパラカゼイ、ラクトバチルスヘルベティクスおよびこれらの混合物である。好ましい実施形態においては、微生物は、活性成分として、次のプロバイオティック：ＣＢＳに受託番号ＣＢＳ１１６４１１で寄託したラクトバチルスアシドフィルス株ラフティ（ＬＡＦＴＩ）（登録商標）Ｌ１０、ＣＢＳに受託番号ＣＢＳ１１６４１２で寄託したラクトバチルスカゼイ株ラフティ（登録商標）Ｌ２６およびビフィドバクテリウムアニマリスであるラフティ（登録商標）Ｂ９４、の少なくとも１種を含む。好ましい実施形態においては、プロバイオティックは、少なくとも前記寄託菌株の生物学的に純粋な培養物、または、実質的に生物学的に純粋な培養物からなる。より好ましい実施形態においては、プロバイオティックは、他の有益なプロバイオティックと組み合わせた、少なくとも前記寄託菌株の生物学的に純粋な培養物、または、実質的に生物学的に純粋な培養物からなる。さらに好ましい実施形態においては、プロバイオティックは、ビフィドバクテリウムインファンティス、ビフィドバクテリウムロングム、ビフィドバクテリウムラクティス、ビフィドバクテリウムアニマリス、ラクトバチルスアシドフィルス、好ましくはラクトバチルスアシドフィルスラフティ（登録商標）Ｌ１０ＣＢＳ１１６４１１、ラクトバチルスラムノスス、ラクトバチルスカゼイ、好ましくはラクトバチルスカゼイラフティ（登録商標）Ｌ２６ＣＢＳ１１６４１２、ラクトバチルスパラカゼイおよびラクトバチルスヘルベティクスからなる群より選択される。微生物が、ラクトバチルスアシドフィルスＣＢＳ１１６４１１、および／またはラクトバチルスカゼイＣＢＳ１１６４１２および／またはビフィドバクテリウムアニマリスであると、よりいっそう好ましい。

本発明の方法の第１の工程において、微生物が、ステアリン酸塩またはパルミチン酸塩などの無毒の中鎖または長鎖（例えば、Ｃ_{１０〜３０}−）脂肪酸の塩と混合、または、混合かつ圧密化される。特には、無毒の塩は、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸マグネシウムである。使用可能な他の無毒の塩としては、ステアリン酸やパルミチン酸などの長鎖脂肪酸のナトリウム、カリウムまたは亜鉛の塩が例示される。微生物との混合物中における中鎖または長鎖脂肪酸の塩の量は、微生物の乾燥重量を基準にして、好適には約５〜約９０重量％、好ましくは約５〜約８０重量％、より好ましくは約５〜約５０重量％、最も好ましくは約５〜約３０重量％である。もし食料油を加えるなら、その食料油の中鎖または長鎖脂肪酸の塩に対する比は、好適には約１：１０重量部以下、例えば約１：２０重量部とすることが適切である。

ここで使用される「圧密化する」もしくは「圧密化」という用語は、成分が均質で密着した混合物を調製する方法を意味する。圧密化は、好適には、微生物を、中鎖または長鎖脂肪酸の塩と、均質なペーストを得るために場合により添加される食用油、好ましくは、中鎖（例えば、Ｃ_８〜１４）のトリグリセリド、ａ−トコフェロールなどのトコフェロール、大豆油、パーム油、ひまわり油または他の公知の食用油、あるいはこれらの混合物とともに混練することによって行われる。造粒では、このペーストから適切なサイズ、例えば約１０μｍ〜約８００μｍの粒子を生成し、その後、コーティングを施す。あるいは、例えば振盪することによって、微生物と中鎖または長鎖脂肪酸の塩とが密着した粉末混合物を生成させてもよい。微生物が中鎖または長鎖脂肪酸の塩、例えばステアリン酸マグネシウムで覆われていると考えられるこの粉末混合物にもコーティングが施される。

本発明の方法の第２の工程において、粒状粒子または粉末がコーティングされる。コーティングは、コーティングすべき粉末または粒状物の流動層にコーティング物質の溶液をスプレーするのが好ましい方法であるものの、いかなるコーティング技術で行ってもよい。

コーティング物質は、粘凋な溶液または懸濁液として水に溶解するかまたは懸濁させることができるものが適している。この目的には炭水化物およびタンパク質が適している。本発明の方法においてコーティング物質として使用される炭水化物の例としては、アルギン酸塩、ペクチン、デンプン、加工デンプン、マルトデキストリン、カラゲナン、アラビアゴム、グァーガム、キサンタン、セルロース、および、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなどのセルロース誘導体などの多糖類、オリゴ糖類、二糖類、並びに、単糖類が挙げられる。本発明の方法においてコーティング物質として使用されるタンパク質の例としては、ゼラチン、植物性タンパク質および乳漿タンパク質が挙げられる。好ましいコーティング物質は、約０．１〜約８重量％の水溶液として使用してもよいアルギン酸ナトリウムである。当業者に知られる他のコーティング剤、特に胃液耐性コーティングを形成するものとして知られるコーティング剤、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなどのセルロース誘導体もまた使用することができる。

コーティングの量は、組成物の全重量を基準にして、好ましくは１５重量％以下、より好ましくは約０．１重量％〜約１０重量％、さらに好ましくは約０．１重量％〜約５重量％、最も好ましくは約１重量％〜約３重量％である。

本発明の方法の第１の工程で使用される微生物は、凍結乾燥で調製したものが適しており、コーティング、特に胃液耐性コーティングを有していてもよい。ブレンドまたは圧密化工程で使用する微生物は、コーティングを有するか、または、マトリックス材中に内包されていることが好ましい。あるいは、スプレードライ、流動層乾燥などの他の微生物乾燥方法を使用することも可能である。胃液耐性コーティングを有する、そのような微生物の凍結乾燥調製物は、微生物の細胞懸濁液を、タンパク質（乳漿、ミルク、その他）、糖類（マルトース、トレハロース、ラクトース、ショ糖）、デンプン、セルロース、および場合によりアスコルビン酸のような他の安定剤ないし凍結保護剤からなる群より少なくとも選択される化合物と処理することにより得られる。細胞懸濁液を、タンパク質、マルトデキストリン、トレハロース、および場合によりアスコルビン酸のような他の安定剤ないし凍結保護剤と処理することによって、粘凋なペーストを生成し、それを凍結乾燥に供することがより好ましい。そうして得られた物質を約１０μｍ〜約８００μｍのサイズに粉砕する。特に、凍結乾燥調製物は、韓国特許ＫＲ４２９４９４Ｂ号明細書またはＫＲ４２９４９５Ｂ号明細書に記載の方法により得られる。それらの内容は、参照により本明細書に援用されるものとする。したがって、特に好ましい実施形態では、本発明は、中鎖または長鎖脂肪酸の塩によりコーティングされるかまたはその中に内包された微生物を含有する固体組成物であって、微生物は、中鎖または長鎖脂肪酸の塩によるコーティングの下に第１のコーティング層を有し、かつ、この組成物は、この組成物に含まれるいかなる物質も実質的に含有しない外部コーティングを有している、固体組成物に関する。

好ましい実施形態では、コーティング後の組成物中の残留水分濃度が１０％未満である。残留水分濃度は、より好ましくは５％未満であり、さらに好ましくは４％未満である。残留水分濃度は、乾燥減量により測定することが好ましい。この方法は、４ｇの生成物に対し、７０℃、６０分間で行うことが好ましい。他の好ましい実施形態では、コーティング後の組成物の水分活性が０．０４〜０．３の範囲である。水分活性は、より好ましくは０．０４〜０．２の範囲であり、さらに好ましくは０．０４〜０．１５の範囲であり、最も好ましくは０．０４〜０．１である。水分活性は、所定の温度で、粉末が置かれた密閉チャンバ内の上部空間における平衡相対湿度（ｅｒｈ）を測定して得ることが好ましい。好ましい温度は２５℃である。水分活性はｅｒｈを１００で除した値で表される。

したがって、そのような低い残留水分濃度または水分活性を有する組成物を得るために、粒状粒子または粉末をコーティングする最終工程は、同時に、流動層中で行われる乾燥工程でもある。あるいは、乾燥工程は、粒状粒子または粉末をコーティングした後の追加工程として実施される。意外なことに、比較的低い残留水分濃度または水分活性を有する組成物では、貯蔵中の微生物がはるかに良好な生存率を示すことが判った。

本発明の組成物は、栄養補助食品、すなわち栄養価を有する医薬品、または薬剤（この場合は、微生物）によって栄養価が高められた食品として、または栄養成分として、あるいは健康成分として、あるいは食品もしくは飲料に加えるサプリメントとして、あるいは独立した薬剤として使用され得る。したがって、他の実施形態では、本発明は、本発明の組成物を含む食品または飲料に関する。そのような食品または飲料は、生理的に許容されるものであればいかなる賦形剤および／または希釈剤を含んでもよい。好ましい食品は、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、粉ミルク、カバラチャー（油、砂糖および乳タンパク（乳漿）の混合物と定義される）、乳児用ミルク、発酵肉製品、または、乳飲料、スポーツ飲料、果汁、果実飲料などの飲料である。

他の実施形態では、本発明の組成物は、錠剤、カプセル、粉末または粒状物、経口投与液体製剤、坐薬、ドライ製剤の形態を有する。より好ましくは、組成物は、胃で損傷を受けずに腸に達する腸溶性の錠剤、カプセル、粉末または粒状物の形態を有する。これらの全ての形態は、食品グレードの、それぞれ薬剤として許容される担体、賦形剤、溶剤または補助剤を使用して、公知の方法で調製することができる。薬剤の調製には、既に、レミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）：「ザ・サイエンス・アンド・プラクティス・オブ・ファーマシー（Ｔｈｅｓｃｉｅｎｃｅａｎｄｐｒａｃｔｉｃｅｏｆｐｈａｒｍａｃｙ）」、１９９５年、マック・パブリッシング・カンパニー（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｃｏ）、イーストン（Ｅａｓｔｏｎ）、ペンシルバニア州（ＰＡ）、１８０４２、米国（ＵＳＡ）、に記載の標準的成分および調製法を使用することができる。レミントンの文献を参照により本明細書に援用するものとする。

したがって、好ましい実施形態では、本発明の方法は、微生物を含む固体組成物の製造方法であって、この組成物が、微生物を含む公知の固体組成物に比べて、流動性が向上し、かつ／または、吸湿性が低下している方法となる。

以下の実施例により本発明をさらに詳しく説明する。明細書および特許請求の範囲を通して、用語「ラフティ（登録商標）Ｌ１０」とは、先に明細書中で定義したように、ラクトバチルスアシドフィルスの凍結乾燥細胞調製物をいう。中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）は、９５％以上がオクタン酸およびデカン酸であるトリグリセリドの混合物からなるものであった（「ハンドブック・オブ・ファーマスーティカル・エクシピエンツ（ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）」、第２版、アメリカン・ファーマシスト・アソシエーション（Ａｍ．Ｐｈａｒｍ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、ワシントン（Ｗａｓｈ．）、米国、１９９４年を参照のこと）。

［実施例１］
［圧密化／流動層コーティング］
［工程１］
ステアリン酸マグネシウム（４６．７４ｇ）、アルファ−トコフェロール（６．４６ｇ）および中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、３．８ｇ）をビーカー中で混合し、その後、混合物が均一になるまでパスタメーカー（アトラス１５０型（ＭｏｄｅｌＡｔｌａｓ１５０）、ファブリク・エン・イタリー・パル（ＦａｂｒｉｑｕｅＥｎＩｔａｌｉｅＰａｒ）、カンポダルセゴ（Ｃａｍｐｏｄａｒｓｅｇｏ）、イタリア（Ｉｔａｌｉ））で混練した。その後、混合物をラフティ（登録商標）Ｌ１０（ＣＢＳ１１６４１１）（３２３ｇ）と混合し、均一でフレーク状になるまでパスタメーカーで混練した。フレーク状材料を８００ミクロンの篩に加圧通過させて、粒状粒子を形成した。

［工程２］
アルギン酸ナトリウム（水分含量１３％；ＦＭＣバイオポリマー（ＦＭＣＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒ）、フィラデルフィア（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）、米国）７．３７２ｇを脱イオン水（９９．５ｇ）に溶解させて、６％アルギン酸塩溶液を調製した。ステアリン酸マグネシウムで被覆したラフティ（登録商標）Ｌ１０（工程１で得られたもの、３５０ｇ）を流動層造粒機（ＭＰ−１マルチ−プロセッサー（ＭＰ−１Ｍｕｌｔｉ−Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ）、エアロマティック−フィールダー（Ａｅｒｏｍａｔｉｃ−Ｆｉｅｌｄｅｒ）、ブーベンドルフ（Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ）、スイス（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））に入れ、毎分約１．６ｇの割合で６％アルギン酸塩溶液（１０６．９ｇ）を底部からスプレーした。最後に、生成物を水分含量が４％未満になるまで乾燥させて、次のような表１に示す粒度分布を有する最終生成物を得た。

最終生成物は次のような表２に示す組成を有した。

流動性：試料１００ｇが首部直径１１ｃｍのロートを通過するのに要する時間を記録することによって流動性を測定した。流動性は１００ｇ当たり１６秒であったが、未処理のラフティ（登録商標）調製物では粉末流動性は認められなかった。

ラクトバチルスアシドフィルスのプロセス生存率を下記表３に示す。ｃｆｕの数は、マン・ロゴサ・シャープ（ＭａｎｎＲａｇｏｓａＳｈａｒｐ）（ＭＲＳ）（オキソイド（Ｏｘｏｉｄ）、英国（ＵＫ））の寒天上に生成したラクトバチルスのコロニー（植菌した寒天プレートを、嫌気性条件下、３７℃で４８時間培養後）を列挙して推定した。

［実施例２］
［錠剤化］
ポリプラスドンＸＬ１０（ＰｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅＸＬ１０）（クロスポビドン）２．８０ｇおよびアビセルｐＨ３０２（ＡｖｉｃｅｌｐＨ３０２）（微結晶性セルロース）１８１．９６ｇを１ｍｍの篩にかけた。実施例１で得られたラフティ（登録商標）Ｌ１０調製物９５．２４ｇを加え、タンブラーミキサーで１０分間混合した。

この錠剤用混合物を、シングルパンチプレス（コンプレックスＩＩ（ＣｏｍｐｒｅｘＩＩ））を使用し、２０ｋＮの圧縮力で、重さ約１４００ｍｇの楕円形の錠剤（２２ｍｍ×９ｍｍ）へと圧縮した。得られた錠剤の特性は以下のようであった。
圧壊力：２７７Ｎ（クレーマーＵＴＳ４．１（ＫｒａｅｍｅｒＵＴＳ４．１）により測定）
壊変時間：７分１０秒（ＵＳＰ２７による、脱塩水）
加算カウント（Ａｄｄｅｄｃｏｕｎｔｓ）／錠９０．８^＊１０^９
実測カウント（Ｆｏｕｎｄｃｏｕｎｔｓ）／錠８９．６^＊１０^９（残率＝９９％）

用語「加算カウント」とは、実施例１のラフティ（登録商標）Ｌ１０調製物とともに加えた微生物のカウント数（コロニー形成単位）をいい、用語「実測カウント」は錠剤中に見出されるコロニー形成単位を意味する。

［実施例３］
［ブレンド／流動層コーティング］
［工程１］
ラフティ（登録商標）Ｌ１０（２７２ｇ）およびステアリン酸マグネシウム（４８ｇ）を１リットル瓶に入れ、４５ＲＰＭで２０分間振盪した（タービュラＴ２Ｃ（ＴｕｒｂｕｌａＴ２Ｃ）、ウィリーＡ．バコーフェン（ＷｉｌｌｙＡ．Ｂａｃｈｏｆｅｎ）、バーゼル（Ｂａｓｅｌ）、スイス）。

［工程２］
アルギン酸ナトリウム（水分含量１３％；ＦＭＣバイオポリマー、フィラデルフィア、米国）６．３２１ｇを脱イオン水（８５．３ｇ）に溶解させて、６％アルギン酸塩溶液を調製した。工程１で得られた生成物（３００ｇ）を流動層造粒機（ＭＰ−１マルチ−プロセッサー、エアロマティック−フィールダー、ブーベンドルフ、スイス）に入れ、毎分０．８６〜１．６ｇの割合で６％アルギン酸塩溶液（９１．６５ｇ）を底部からスプレーした。最後に、アルギン酸塩およびステアリン酸マグネシウムで被覆したラフティ（登録商標）Ｌ１０を水分含量が４％未満になるまで乾燥させて、次のような表４に示す粒度分布を有する最終生成物を得た。

最終生成物は次のような表５に示す組成を有する。

流動性：実施例１に記載した方法で流動性を測定したところ、１００ｇ当たり１０秒であったが、未処理のラフティ（登録商標）調製物では粉末流動性は認められなかった。

ラクトバチルスアシドフィルスのプロセス生存率を下記表６に示す。

［実施例４］
［錠剤化］
ポリプラスドンＸＬ１０（クロスポビドン）０．９８ｇ、アビセルＰＨ３０２（微結晶性セルロース）５５．０９ｇおよび実施例３で得られたラフティ（登録商標）Ｌ１０調製物４１．９３ｇを１ｍｍの篩に通し、タンブラーミキサーで１０分間混合した。

この錠剤用混合物を、シングルパンチプレス（コンプレックスＩＩ）を使用し、２０ｋＮの圧縮力で、重さ約１４００ｍｇの楕円形の錠剤（２２ｍｍ×９ｍｍ）へと圧縮した。

得られた錠剤の特性は以下のようであった。
圧壊力：２５４．４Ｎ（クレーマーＵＴＳ４．１により測定）
壊変時間：５２分０２秒（ＵＳＰ２７による、脱塩水）

［実施例５］
［工程１］
ラフティ（登録商標）Ｌ１０（２７２ｇ）およびステアリン酸マグネシウム（４８ｇ）を１リットル瓶に入れ、４５ＲＰＭで２０分間振盪した（タービュラＴ２Ｃ、ウィリーＡ．バコーフェン、バーゼル、スイス）。

［工程２］
ペクチン（ゲヌー（登録商標）ペクチンＵＳＰ／１００（ＧＥＮＵ（登録商標）ｐｅｃｔｉｎＵＳＰ／１００）、水分含量８．８３％；ＣＰケルコ（ＣＰＫｅｌｃｏ）、リレ・スケンスベド（ＬｉｌｌｅＳｋｅｎｓｖｅｄ）、デンマーク（Ｄｅｎｍａｒｋ））１６．４５ｇを脱イオン水（４８３．５５ｇ）に溶解させて、３％ペクチン溶液を調製した。工程１で得られた生成物（３６０ｇ）を流動層造粒機（ＭＰ−１マルチ−プロセッサー、エアロマティック−フィールダー、ブーベンドルフ、スイス）に入れ、毎分約１．５ｇの割合で３％ペクチン（２１６ｇ）を上部からスプレーした。最後に、ペクチンおよびステアリン酸マグネシウムで被覆したラフティ（登録商標）Ｌ１０を水分含量が４％未満になるまで乾燥させた。生成物の主要フラクション（３０１ｇ）は造粒機の容器に貯留されたが、少量の白っぽい物質のフラクション（５９ｇ）がフィルターに残った。色（ステアリン酸マグネシウム：白、ラフティ：茶色がかった色）に基づけば、フィルター内の物質は大部分がステアリン酸マグネシウムであった。

両フラクションを併せた粒度分布を表７に示す。

流動性：試料１００ｇが首部直径１１ｃｍのロートを通過するのに要する時間を記録することによって流動性を測定した。流動性は１００ｇ当たり２１秒であったが、未処理のラフティ（登録商標）Ｌ１０調製物では粉末流動性は認められなかった。

生成物は次のような表８に示す組成を有する。

フィルターに残った少ないほうのフラクションを除くと、生成物の粒度分布は表９に示す通りである。

流動性：試料１００ｇが首部直径１１ｃｍのロートを通過するのに要する時間を記録することによって流動性を測定した。流動性は１００ｇ当たり１４秒であったが、未処理のラフティ（登録商標）調製物では粉末流動性は認められなかった。

［実施例６］
［圧密化／流動層コーティング］
［工程１］
ステアリン酸カルシウム（６１．５ｇ）、アルファ−トコフェロール（８．５ｇ）および中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ、５ｇ）をビーカー中で混合し、その後、混合物が均一になるまでパスタメーカー（アトラス１５０型、ファブリク・エン・イタリー・パル、カンポダルセゴ、イタリア）で混練した。その後、混合物をラフティ（登録商標）Ｌ１０（４２５ｇ）と混合し、均一でフレーク状になるまでパスタメーカーで混練した。混合物を錠剤プレス機で圧密化し、その錠剤を粉砕して１ｍｍの篩に通した。この工程を計４回繰り返した。最後の回に、混合物を５００ミクロンの篩に加圧通過させて、粒状粒子を形成した。

［工程２］
アルギン酸ナトリウム（水分含量１３％；ＦＭＣバイオポリマー、フィラデルフィア、米国）３３ｇを脱イオン水（５３８．９ｇ）に溶解させて、アルギン酸塩溶液を調製した。ステアリン酸マグネシウムで被覆したラフティ（登録商標）Ｌ１０（工程１で得られたもの、３５０ｇ）を流動層造粒機（ＭＰ−１マルチ−プロセッサー、エアロマティック−フィールダー、ブーベンドルフ、スイス）に入れ、毎分約２．３ｇの割合でアルギン酸塩溶液（１４２．９ｇ）を底部からスプレーした。最後に、生成物を水分含量が４％未満になるまで乾燥させた。材料全体の８．１％を占める８５０ミクロン超のフラクションを除去した。残りの材料の粒度分布を表１０に示す。

最終生成物は次のような表１１に示す組成を有した。

［実施例７］
［ブレンド／流動層コーティング］
［工程１］
ラフティ（登録商標）Ｌ１０（２７２ｇ）およびステアリン酸マグネシウム（４８ｇ）を１リットル瓶に入れ、４５ＲＰＭで２０分間振盪した（タービュラＴ２Ｃ、ウィリーＡ．バコーフェン、バーゼル、スイス）。

［工程２］
アルギン酸ナトリウム（水分含量１３％；ＦＭＣバイオポリマー、フィラデルフィア、米国）６．３２１ｇを脱イオン水（１７６．９ｇ）に溶解させて、３％アルギン酸塩溶液を調製した。塩化カルシウム５ｇを脱イオン水（９５ｇ）に溶解させて５％の塩化カルシウムを調製した。工程１で得られた生成物（３００ｇ）を流動層造粒機（ＭＰ−１マルチ−プロセッサー、エアロマティック−フィールダー、ブーベンドルフ、スイス）に入れ、毎分１〜３ｇの割合で３％アルギン酸塩溶液（１８０ｇ）を、また、毎分０．５〜２ｇの割合で５％塩化カルシウム溶液（２７ｇ）を上部からスプレーした。最後に、アルギン酸塩およびステアリン酸マグネシウムで被覆したラフティ（登録商標）Ｌ１０を水分含量が４％未満になるまで乾燥させて、次のような表１２に示す粒度分布を有する最終生成物を得た。

最終生成物は次のような表１３に示す概略組成を有する。

流動性：実施例１に記載した方法で流動性を測定したところ、１００ｇ当たり１６秒であったが、未処理のラフティ（登録商標）調製物では粉末流動性は認められなかった。

［実施例８］
［錠剤化］
ポリプラスドンＸＬ１０（クロスポビドン）０．９８ｇ、アビセルＰＨ３０２（微結晶性セルロース）５５．０９ｇおよび実施例６で得られたラフティ（登録商標）Ｌ１０調製物４１．９３ｇを１ｍｍの篩に通し、タンブラーミキサーで１０分間混合した。

得られた錠剤の特性は以下のようであった：
圧壊力：２５４．４Ｎ（クレーマーＵＴＳ４．１による測定）

［実施例９］
これらの試行の目的は、ラフティのパイロット規模での製剤と方法、また、生産規模とした場合の可能な推定が有効であることを実証することであった。

［プレミックス処方］
表１４に示すように、オイルの量に対するプレミックスの感度を調べるため、３回の試行を行った。

高剪断ミキサーを用い、１５０ｒｐｍで混合したオイルミックスを、ステアリン酸カルシウムにスプレーした。高剪断ミキサーは、いずれの場合も、問題なく（付着物なし）空にすることができた。プレミックスは塊を含んでおらず、篩に通す必要はなかった。

［粉末混合物］
粉末混合物（ラフティＬ１０／プレミックス）も、次の表１５に示す処方で、高剪断ミキサーを用いて調製した。

その後、ビーペックス（Ｂｅｐｅｘ）圧密装置により、粉末混合物を圧密化した。
使用圧：５〜２０ｋＮ、パス数：２

圧縮した材料を、その後、表１６に示すように篩に通した。最後の２回の試行に使用した回転篩は、５分未満で８〜９ｋｇの篩がけが可能であった。

流動層コーター（エアロマティック（Ａｅｒｏｍａｔｉｃ））により、圧密化／篩がけした材料にコーティングを施した。底部スプレー構造を採用した。容易にスプレーするためには、４％のアルギン酸塩溶液が最適であることが判った。各試行で使用したプロセスの特徴の概要を表１７に示す。

［最終生成物の品質］
得られた生成物はいずれも、良好ないし極めて良好な流動特性を有しており、良好な特性の錠剤の製造に容易に使用される。生成物の密度は高く、包装に好都合である。

得られた粒状物は吸湿性がなく、屋外で数日間放置しても互いにくっつくことがない。粒度分布は、特に試行Ｃで良好である。

粒状化工程の後および錠剤化工程の後の生存率の測定結果は、良好であり、表３または６で得られたデータと同等である。

５回の試行で調製された生成物の特性の概要を表１８に示す。

Claims

微生物を含む固体組成物の製造方法であって、前記微生物を中鎖または長鎖脂肪酸の塩とブレンドして、粉末混合物を調製する第１の工程と、前記粉末混合物に、コーティング物質が水に溶解又は懸濁した溶液又は懸濁液をコーティングし、生成物を乾燥させてコーティングを施す第２の工程とを含む方法。
前記ブレンド工程で使用する前記微生物が、マトリックス材料でコーティングされているか、または、マトリックス材料に内包されている請求項１に記載の方法。
前記マトリックス材料が、タンパク質、マルトデキストリン、トレハロースおよび／またはアスコルビン酸から選択される請求項２に記載の方法。
前記コーティング物質がアルギン酸塩である請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
前記コーティングが、アルギン酸塩水溶液をスプレーすることによって、前記粉末混合物に施される請求項４に記載の方法。
前記中鎖または長鎖脂肪酸の塩が、ステアリン酸マグネシウムである請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
前記中鎖または長鎖脂肪酸の塩が、ステアリン酸カルシウムである請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
前記微生物がプロバイオティックまたはその混合物である請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
前記微生物が凍結乾燥調製物である請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
前記微生物が、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、乳酸桿菌属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）または腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）である請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
前記微生物が、ビフィドバクテリウムインファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウムロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウムアニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウムラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルスアシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルスラムノスス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルスカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃａｓｅｉ）、ラクトバチルスパラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉ）およびラクトバチルスヘルベティクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）からなる群より選択される請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
前記微生物が、ラクトバチルスアシドフィルス株ＣＢＳ１１６４１１、ビフィドバクテリウムアニマリスおよびラクトバチルスカゼイＣＢＳ１１６４１２からなる群より選択される請求項１１に記載の方法。
固体微生物組成物の、流動性の向上および／または吸湿性の低減のための請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。