JP5823663B2 - ミスフォールドsod1媒介疾患を処置および検出するための方法および組成物 - Google Patents
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Description
本発明は、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、およびパーキンソン病を含む非天然SOD1によって媒介される状態、疾患、および障害を処置および検出するための方法および組成物に関する。
タンパク質のミスフォールディングおよび凝集
タンパク質は、複雑で精密に詰められた構造に折り畳まれうる。フォールディングは生物活性にとって非常に重要であるのみならず、タンパク質が適切に折り畳まれないまたは折り畳まれたままであると、疾患を生じうる(48において論評)。いくつかの場合において、ミスフォールディングは、タンパク質の凝集を引き起こし、これはさらに細胞外(たとえば、プラーク)または細胞内に(サイトソルまたは核における封入体)に孤立性の沈着物を生じうる。
筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、北米において患者約30,000人に罹患する致死的な神経筋疾患であり、毎年5,000人の新たな症例が存在する。「ルー・ゲーリグ病」としても知られるALSでは、四肢、言語および嚥下、ならびに呼吸の筋肉が、脊髄および脳からそれらに供給する運動神経細胞の変性により弱化して萎縮する。罹患患者の半数が3年以内に死亡し、5年より長く生存するのは20%未満である。
ADは、その全てがAPPのタンパク質分解産物である(50において論評)Aβ(1-40)、Aβ(1-42)、およびAβ(1-43)ペプチドで主に構成される細胞外プラークの脳の蓄積に関連する一般的な痴呆性(記憶および認知障害)の神経変性疾患である。さらに、異常にリン酸化されたタウタンパク質(神経微小管関連タンパク質)で主に構成される神経細線維もつれが、死につつあるニューロンの細胞内に蓄積する(49において論評)。家族型のADは、APP遺伝子における変異、またはそのタンパク質産物がAPPのAβへのプロセシングに関係しているプレセニリン1もしくは2遺伝子における変異によって引き起こされうる(51において論評)。アポリポタンパク質E対立遺伝子変種も同様に、散発性および家族型ADの双方の発症年齢に影響を及ぼす(52において論評)。Aβ、タウおよびリン酸化タウは、AD患者および正常対照の血液およびCSFにおいて検出されている(53〜55)。Aβによるアルツハイマー病患者の免疫は、何らかの有望な予備的処置結果を示したが、ヒトにおける自己免疫性髄膜脳炎に限定された(56〜58)。
PDは、ADに次いで発生率が高い(100,000人に〜350人;59において論評)神経変性性の運動障害である。これは、臨床的に硬直、運動緩徐および振せんを特徴とする。パーキンソン病のほとんどの症例は散発性であるが、疾患の散発性および家族型はいずれも、PDにおいて選択的に破壊される中脳ニューロンの集団(〜60,000)である黒質の死につつあるニューロンにおける細胞内レヴィー小体を特徴とする。レヴィー小体は、主にα-シヌクレインで構成される(60)。α-シヌクレインをコードする遺伝子の変異および複製は、家族性のパーキンソン病患者において見いだされている(61において論評)。常染色体劣性PDに関連するもう一つの遺伝子は、αシヌクレイン分解に関係するparkinである(61)。α-シヌクレインで構成されるびまん性の皮質レヴィー小体は、レヴィー小体病(LBD)、パーキンソン様の緊張変化、幻覚、および急激な症状の変動に関連する痴呆症候群(62)において観察されている。LBDはADに次いで最も一般的な神経変性性の痴呆症である可能性があり、年齢60歳より上の人における症例の20〜30%を占める。アルツハイマー病に対するワクチンアプローチ(58〜60)と同様に、パーキンソン/レヴィー小体病のマウスモデルにおいて、αシヌクレインによる免疫によって有望な結果が得られている(63)。他の痴呆症候群には、前頭側頭性痴呆、ピック病、および皮質基底核痴呆、ならびに神経医学において公知の他の疾患が含まれる。
酸化的ストレスは、ALS、PDおよびADを含むいくつかの神経変性疾患に関係している。これらの環境において生成された反応性酸素および窒素種(それぞれ、ROSおよびRNS)は、タンパク質または脂質の異常な酸化が含まれる細胞損傷に関係する可能性がある。そのような疾患の他の病理的特徴には、しばしば酸化的ストレスに起因する細胞骨格破片の蓄積および選択的ニューロン死、ならびに不溶性タンパク質の蓄積が含まれる(74〜81)。SOD1が含まれるいくつかの酵素は抗酸化剤の役割を有する。そのような酵素の活性の変更は、神経変性疾患状態に寄与する可能性がある。
ミスフォールドSOD1はニューロンに対して毒性であり(1)、ニューロンの細胞死、ならびに筋萎縮性側索硬化症および他の神経変性疾患における機能障害に関与すると考えられている。本発明は、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、アルツハイマー病(AD)、パーキンソン病(PD)、およびレヴィー小体病(LBD)が含まれるこれらの疾患に関するワクチンまたは免疫療法の標的としてSOD1疾患特異的エピトープ(DSE)を用いる。本発明は、ALSおよび他の神経変性疾患のようなSOD1媒介状態、疾患および障害に関連する、SOD1の非天然型によって選択的に提示されるエピトープを単離および標的とする。これらのエピトープは、天然型のSOD1において提示されず、または近づくことができない。たとえば、ALS特異的、AD特異的、およびPD特異的エピトープのような疾患特異的エピトープは、SOD1の天然の二量体型によって提示されない。しかし、疾患特異的エピトープは、SOD1単量体がその正常なホモ二量体状態に会合することができないか、またはホモ二量体状態から解離した場合、ならびにミスフォールドSOD1単量体、ミスフォールドSOD1二量体、およびSOD1凝集体が含まれるSOD1の他の非天然型で、提示されるまたは近づくことができる。これらのエピトープは、SOD1の非天然型において選択的に提示され、または近づくことができ、非天然型SOD1関連病態、疾患、および障害の特徴である。
と共に、
が含まれる、SOD1の単量体型に限って提示されるまたは近づくことができるさらなるエピトープが含まれる。
に結合する。もう一つの態様において、抗体は
に結合する。なおもう一つの態様において、抗体は
に結合する。もう一つの態様において、抗体は、エピトープ
に結合する。もう一つの態様において、抗体はエピトープRLAC*GVIGIに結合する。もう一つの態様において、抗体は、エピトープKAVCVLKに結合する。なおもう一つの態様において、抗体はエピトープGLHGFHVHに結合する。
(a)抗体が、筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープに結合して抗体-抗原複合体を産生する、筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープに結合に対して特異的な抗体に、被験体の試験試料を接触させる段階;
(b)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を測定する段階;および
(c)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を対照と比較する段階
を含み、対照と比較して試験試料中の抗体-抗原複合体の量に差があれば、筋萎縮性側索硬化症であることが示される。任意で、およびミスフォールドSOD1エピトープがSOD1凝集体の中に隠されている場合、方法は、段階(a)の前に標的エピトープを露出するようにSOD1凝集体の分離を促進するために試料を処置する段階を提供する。代わりの態様において、本発明は、アルツハイマー病を検出または診断する方法を提供する。もう一つの態様において、本発明は、パーキンソン病を検出または診断する方法を提供する。
本発明は、ミスフォールドおよび凝集したSOD1の分子表面上に露出した免疫学的エピトープ(抗体結合部位)を同定して、これを治療的に利用することによって、ALS、AD、およびPDのような神経変性疾患に関連する可能性があるSOD1コンフォーマーが含まれる、毒性SOD1種を特異的に標的とする最初の免疫治療組成物および方法を提供する。これらのエピトープは、天然の通常に折り畳まれたSOD1には存在しない。本発明は、治療もしくは診断のための化合物を設計するため、または治療もしくは診断のための抗体を誘発するための標的として有用な、これまで未知のエピトープを同定する。本発明はまた、SOD1のミスフォールドおよび凝集型において提示されるが、SOD1の天然型において提示されないとして既に同定されたエピトープの最初の免疫治療的使用を提供する(参照により本明細書に組み入れられる、3およびWO 2005/019828を参照されたい)。これらのエピトープは、疾患の進行を予防するための受動的または能動的免疫治療のための有用な標的である。理論に拘束されたくはないが、これらのエピトープは、毒性のSOD1凝集体の免疫学的清浄化または分離によって、SOD1鋳型特異的ミスフォールディングプロセスを遮断することによって、これらのミスフォールドSOD1種のニューロンに及ぼす毒性効果を中和することによって、および/またはミスフォールドSOD1によって媒介される酸化的ストレスを阻害することによって、疾患の進行を防止する。
本発明者らは、単量体SOD1、または単量体、二量体、もしくは凝集型のSOD1のミスフォールド型によって選択的に提示されるまたは近づくことができるが、SOD1の天然の適切に折り畳まれたホモ二量体型では提示されないまたは存在しないエピトープが存在することを決定した。SOD1のミスフォールド型は、野生型SOD1二量体によって採用されるコンフォメーションとは異なり、および/または筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、およびパーキンソン病のような神経変性疾患が含まれるSOD1障害の特徴であるSOD1凝集体の形成に関与するコンフォメーション、特に二次または三次コンフォメーションを採用することを特徴とする。そのようなミスフォールドSOD1は、野生型配列または変異配列を有しうる。特定の態様において、エピトープは、野生型または天然の配列を有するミスフォールドSOD1において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープである。他の態様において、エピトープは、変異または非野生型配列を有するミスフォールドSOD1において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープである。他の態様において、エピトープは、SOD1単量体(野生型、変異体、ミスフォールドおよび天然が含まれる任意の型)によって提示され、SOD1ホモ二量体から単量体に解離した場合にSOD1単量体において近づくことができるようになる。ミスフォールドSOD1のみを免疫学的に認識することは、正常な天然のSOD1に結合する抗体によって引き起こされる自己免疫の発現を低減または消失させるであろう。特に、野生型であるミスフォールドSOD1の免疫学的認識は、散発性ALSの処置において特に有用となるであろう。
を含む。一つの態様において、筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープに対応する単離ペプチドは、さらなるアミノ酸4個を含み、配列
を含む。
RまたはRLのN-末端切断;たとえばアセチル-RLACGVIVIVGGKGに達するために、G、GG、またはアセチル-GGによるN-末端伸長、および/またはG、GG、GGK、またはGGKGによるC-末端伸長;
(C*はシステイン酸を示す)が含まれるAC*GVIVIVGに達するためにシステイン酸を生じるためのCの酸化を伴う、または伴わない。
のようなペプチドが含まれる。
に達するために、一つまたは二つのH残基のカルボニル化による内部改変を伴うまたは伴わない。
に達するように残基121または121/122のような一つまたは二つのSOD残基によるC-末端伸長。
本発明の一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドの有効量を、薬学的に許容されるような、適した希釈剤または担体と混合して含む、被験体におけるアルツハイマー病を処置するための組成物である。本発明のもう一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドの有効量を、薬学的に許容されるような、適した希釈剤または担体と混合して含む、被験体におけるパーキンソン病を処置するための組成物である。本発明のさらなる局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドの有効量を、薬学的に許容されるような、適した希釈剤または担体と混合して含む、被験体における筋萎縮性側索硬化症を処置するための組成物である。「単離ペプチド」という用語は、たとえば組み換えまたは合成技術によって産生されている、および組み換え型細胞または残存ペプチド合成反応物のようなペプチドを産生する起源から除去されたペプチドを指す。単離ペプチドは任意で「精製され」、これは少なくとも80%、85%、90%、95%、98%、または99%の純度および任意で薬学等級の純度を意味する。
本発明の局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができる単離ペプチドの有効量を、適した希釈剤または担体と混合して含む、動物における免疫応答を誘発するための組成物である。好ましい態様において、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープは、表2もしくは表2Aにおける単離ペプチド、またはその類似体からなる群より選択される単離ペプチドを含む。
本明細書において記述される組成物は、活性物質の有効量が薬学的に許容される媒体と混合して組み合わされるように、任意でワクチンとして被験体に投与することができる薬学的に許容される調製物の本質的に公知の調製法によって調製することができる。適した媒体は、たとえばRemington's Pharmaceutical Sciences(17)において記述される。これに基づいて、組成物には、排他的ではないが一つまたは複数の薬学的に許容される媒体または希釈剤と会合した物質の溶液、および適したpHで生理的液体と等浸透圧である緩衝液に含まれる物質の溶液が含まれる。
本発明の一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸の有効量を、適した希釈剤または担体と混合して含む、アルツハイマー病を処置するための組成物である。本発明のもう一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸の有効量を、適した希釈剤または担体と混合して含む、パーキンソン病を処置するための組成物である。本発明のもう1つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸の有効量を、適した希釈剤または担体と混合して含む、筋萎縮性側索硬化症を処置するための組成物である。
本発明の核酸分子を含有するベクターは任意で、以下に記述される技術を用いる遺伝子治療において、哺乳動物、好ましくはヒトのCNSに投与される。核酸分子から産生されるポリペプチドは、哺乳動物、好ましくはヒトのCNSに容易に投与される。本発明は、本発明のベクターまたは本発明のベクターを含有する細胞を哺乳動物に投与することによって、哺乳動物、好ましくはヒトを医学的に処置する方法に関する。パーキンソン病、アルツハイマー病、および筋萎縮性側索硬化症のような神経疾患は、本出願において記述されるように、または当技術分野において公知の方法(US Patent Nos. 7175840、7157098、7141044、6,309,634;6936594;米国特許出願第2006073119号;第2004265283号;第2002107213号;第2006122116号)を用いて処置される。血液疾患または神経疾患(神経変性性)のような疾患は、本出願において記述されるように、および当技術分野において公知のように処置される。神経幹細胞移植によって処置される幹細胞神経疾患には、神経細胞の損傷または喪失、たとえば麻痺が起こる疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、ALS、多発性硬化症が含まれる。本発明のベクターは、幹細胞マーカーとして、および幹細胞を分化させる遺伝子を発現するために(たとえば、増殖因子)有用である。
本発明には、細胞における分子の発現が、コード核酸分子によってコードされるポリペプチドの生物活性をそれらの細胞に提供するように、被験体にコード核酸分子を提供するための組成物および方法が含まれる。本明細書において用いられるコード核酸は、対応するタンパク質のアミノ酸配列、またはその一部を指定するヌクレオチドを含む核酸を意味する。コード配列は、開始コドンおよび/または終止配列を含んでもよい。
したがって、本発明の一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドを、適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体におけるアルツハイマー病を処置する方法である。本発明のもう一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドを適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体におけるパーキンソン病を処置する方法である。本発明のさらなる局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドを適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体における筋萎縮性側索硬化症を処置する方法である。
本発明のさらなる局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸を、適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体におけるアルツハイマー病を処置する方法である。本発明のさらなる局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸を、適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体におけるパーキンソン病を処置する方法である。本発明のさらなる局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸を、適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体における筋萎縮性側索硬化症を処置する方法である。特定の態様において、核酸は、表2C核酸の群から選択される核酸を含む。
これらの組成物は、動物において免疫応答を誘発するために用いることができ、筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープ、アルツハイマー病特異的エピトープ、またはパーキンソン病特異的エピトープが含まれる、非天然のSOD1において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対する免疫応答を動物において誘発する方法において用いることができる。
本発明のもう一つの局面には、アルツハイマー病を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドをコードする核酸を適した希釈剤または担体と混合して含む組成物を用いて、動物における免疫応答を誘発する方法が含まれる。本発明のさらなる局面には、パーキンソン病を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドをコードする核酸を適した希釈剤または担体と混合して含む組成物を用いて、動物における免疫応答を誘発する方法が含まれる。本発明のさらなる局面には、筋萎縮性側索硬化症を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドをコードする核酸を適した希釈剤または担体と混合して含む組成物を用いて、動物における免疫応答を誘発する方法が含まれる。
本発明のさらなる局面は、アルツハイマー病を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドを用いることである。本発明のさらなる局面は、パーキンソン病を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドを用いることである。本発明のさらなる局面は、筋萎縮性側索硬化症を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離ペプチドを用いることである。
本発明のさらなる局面は、アルツハイマー病を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸を用いることである。本発明のさらなる局面は、パーキンソン病を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸を用いることである。本発明のさらなる局面は、筋萎縮性側索硬化症を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸を用いることである。
本発明のもう一つの局面は、アルツハイマー病を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離核酸を、適した希釈剤または担体と混合して用いることである。本発明のさらなる局面は、パーキンソン病を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離核酸を、適した希釈剤または担体と混合して用いることである。本発明のさらなる局面は、筋萎縮性側索硬化症を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対応する単離核酸を、適した希釈剤または担体と混合して用いることである。代わりの態様において、本発明は、疾患特異的エピトープに対応するペプチドをコードする単離核酸を用いることを含む。
疾患特異的エピトープに結合する物質
ミスフォールドSOD1において提示されるエピトープは、抗体、他のポリペプチド、低分子、アフィボディ(Wahlberg et al., Proc Natl Acad Sci USA, 100:3185-3190, 2003);アンチカリン(Schlehuber and Skerra, Biophys Chem., 96:213-28, 2002);および核酸とタンパク質のアプタマー(Cullen et al. Cell, 58: 423-466, 1989)のような多数の異なる天然のまたは操作された物質によって結合および/または中和されてもよい。特定の態様において、物質は、非天然型SOD1において提示されるまたは近づくことができる疾患特異的エピトープまたはその類似体に選択的に結合する抗体である。
SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープは、抗体を作製するために用いることができる。好ましい態様において、抗体は、ミスフォールドSOD1、好ましくはアルツハイマー病、パーキンソン病、および/または筋萎縮性側索硬化症に関連するミスフォールドSOD1に対して特異的である。
したがって、本発明の一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープまたはその類似体に対して特異的な抗体の有効量を、適した希釈剤または担体と混合して含む、アルツハイマー病を処置するための組成物である。本発明のさらなる局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対して特異的な抗体の有効量を、適した希釈剤または担体と混合して含む、パーキンソン病を処置するための組成物である。本発明のさらなる局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに対して特異的な抗体の有効量を、適した希釈剤または担体と混合して含む、筋萎縮性側索硬化症を処置するための組成物である。
本発明の一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体のような結合物質を、適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体におけるアルツハイマー病を処置する方法である。本発明のもう一つの局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を、適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体におけるパーキンソン病を処置する方法である。本発明のさらなる局面は、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を、適した希釈剤または担体と混合して被験体に投与する段階を含む、それを必要とする被験体における筋萎縮性側索硬化症を処置する方法である。
本発明のさらなる局面は、アルツハイマー病を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を適した希釈剤または担体と混合して用いることである。本発明のさらなる局面は、パーキンソン病を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を適した希釈剤または担体と混合して用いることである。本発明のさらなる局面は、筋萎縮性側索硬化症を処置するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を適した希釈剤または担体と混合して用いることである。
本発明のさらなる局面は、アルツハイマー病を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を用いることである。本発明のさらなる局面は、パーキンソン病を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を用いることである。本発明のもう一つの局面は、筋萎縮性側索硬化症を処置するための薬剤を製造するために、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を用いることである。
本発明の組成物は、たとえば、非経口、静脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、脳室内、鞘内、眼窩内、眼内、嚢内、脊髄内、大槽内、腹腔内、鼻腔内、エアロゾル、または経口投与によって容易に投与される。
投与剤形は任意で、液体投与剤形である。「液体投与剤形」という用語は、非経口、静脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、脳室内、鞘内、頭蓋内、眼内、嚢内、脊髄内、大槽内、腹腔内、鼻腔内、エアロゾル、または経口投与にとって適しているがこれらに限定されない非固体投与剤形を指す。本発明の化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と適切に混合した水において調製されうる。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、DMSO、およびアルコールを含むまたは含まないその混合物、ならびに油において調製することができる。通常の保存および使用条件において、これらの調製物は微生物の成育を防止するために保存剤を含有する。当業者は適した処方を調製する方法を承知しているであろう。適した製剤を選択および調製するための慣例的な技法および成分は、たとえばRemington's Pharmaceutical Sciences (2003 - 20th edition)および1999年に出版されたThe United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19)において記述されている。製剤は任意で、緩衝剤、抗酸化剤、安定化剤、担体、希釈剤、およびpH調節剤が含まれるがこれらに限定されるわけではない賦形剤を含有する。
このように本発明は、ミスフォールドまたは単量体SOD1の存在を特色とする状態、障害、または疾患の処置におけるSOD1抗体の免疫治療的応用を提供する。
筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープのようなSOD1疾患特異的エピトープに対して特異的な抗体はまた、筋萎縮性側索硬化症を診断するために用いることができる。このように、本発明の一つの局面は、被験体における筋萎縮性側索硬化症を検出または診断する方法であり、本方法は、
(a)被験体の試験試料を、筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープに結合して抗体-抗原複合体を産生する本発明の抗体に接触させる段階;
(b)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を測定する段階;および
(c)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を対照と比較する段階
を含み、対照と比較して試験試料中の抗体-抗原複合体の量に差があれば筋萎縮性側索硬化症であることが示される。
(a)被験体の試験試料を、アルツハイマー病特異的エピトープに結合して抗体-抗原複合体を産生する本発明の抗体に接触させる段階;
(b)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を測定する段階;および
(c)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を対照と比較する段階
を含み、対照と比較して試験試料中の抗体-抗原複合体の量に差があればアルツハイマー病であることが示される。
(a)被験体の試験試料を、パーキンソン病特異的エピトープに結合して抗体-抗原複合体を産生する本発明の抗体に接触させる段階;
(b)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を測定する段階;および
(c)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を対照と比較する段階
を含み、対照と比較して試験試料中の抗体-抗原複合体の量に差があればパーキンソン病であることが示される。
(a)抗体がエピトープに結合して抗体-抗原複合体を産生する、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体に、被験体の試験試料を接触させる段階;
(b)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を測定する段階;および
(c)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を対照と比較する段階
を含み、対照と比較して試験試料中の抗体-抗原複合体の量に差があればレヴィー小体病であることが示される。
本発明の抗体はまた、筋萎縮性側索硬化症、または筋萎縮性側索硬化症に関連するミスフォールドSOD1の形成の処置または予防にとって有用な物質を同定およびスクリーニングするために用いることができる。たとえば、筋萎縮性側索硬化症を処置、阻害、または予防するための物質を同定する方法には、以下が含まれる:
(a)物質によって処置した被験体からの試料を本発明の抗体のいずれか一つに接触させる段階であって、結合すれば試料中にミスフォールドSOD1が存在することが示される段階;
(b)試料中の結合レベルを検出する段階;および
(c)対照と比較して試料中の結合レベルが変更されれば、筋萎縮性側索硬化症の処置または予防のための物質であることが示される、試料中の結合レベルを対照における結合レベルと比較する段階。
疾患特異的エピトープ、たとえばDSE1aに対応する単離ペプチドを含む免疫原は、以下の実施例において、類似体に関連するDSE番号(たとえば、DSE1)として類似体DSE配列(たとえば、さらなるN末端G配列を含むDSE1a類似体
)と呼ばれるであろう。
DSE2モノクローナル抗体の生成
N-末端Cys残基を有する筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープ
に対応する単離ペプチドを、BALB/cマウスを免疫するためにKLHに共役させ、およびELISAスクリーニングのためにBSAに共役させた。21日間隔で各マウスに複数回の注射を行った。初回注射のためのアジュバントはフロイントの完全アジュバント(Sigma, Cat# F5881-6×10 mL)であった。フロイントの不完全アジュバント(Sigma, Cat# F5506-6×10 mL)は残りの注射のために用いたアジュバントであった。3回目の注射後7〜10日目にマウスから血液を採取した。いかなるアジュバントも用いない最後の追加免疫後3〜4日目に細胞融合を行った。
大規模モノクローナル抗体産生
大規模抗体産生のために、プリスタン(Sigma, Cat# T-7640)またはIFA 0.2〜0.5 mlを各マウス(BALB/c)にプライミングのためにi.p.注射した。7〜14日目、対数増殖期のハイブリドーマ細胞500,000〜5,000,000個を1×PBS 0.5 mlにおいて各マウスにi.p.注射した。腹水を1〜2週間蓄積させた。腹水2〜5 mlを各マウスから採取したところ、IgG濃度は約1〜9 mg/mlであった。IgG2および3の精製のためにプロテインAを用い、IgG1のためにプロテインGを用いた。
DSE2モノクローナル抗体生成法2
マウスモノクローナル抗体生成:雌性BALB/cマウス4匹を、フロイントの完全アジュバントにおいてマウス1匹あたりDSE2に対応するペプチド(
、プラスジスルフィド架橋形成によってKLHに共役させるためのN末端システイン)に共役させたKLH 25μgの腹腔内注射によって初回免疫した。その後4回の追加免疫を、3週間間隔で、フロイントの不完全アジュバントによって先に記述したように行った。ELISAによって決定して血清力価が免疫前血清試料の10倍より高く上昇した場合に、最高反応マウス2匹にKLH共役ペプチドタンパク質抗原10μgを滅菌PBS pH 7.4 100μlにおいて静脈内にそれぞれ追加免疫した。3日後、ドナーマウスを屠殺して、脾細胞を採取してプールした。SP2/0 BALB/c親骨髄腫細胞株と脾細胞との融合は、ハイブリドーマの一段階選択およびクローニングをクローンEZ培地で行ったことを除き、既に記述されているとおりに行った(先の実施例1を参照されたい)。この半固体培地によって一段階でのHAT選択およびクローニングが可能となり、より急速に生育する、おそらく望ましくないハイブリドーマによるより遅く生育する望ましいクローンの異常生育を消失させる。クローンを融合後11日目に採取して96ウェル組織培養プレートのウェルにおいて、20%ウシ胎児血清を含有するDMEM(Invitrogen)培地200μlに再懸濁した。4日後、BSAに共役させたペプチド1μg/ウェルをコーティングしたプレートにおける抗体活性に関して、上清を間接的ELISAによってスクリーニングした。
スクリーニングおよび試験に関して、DSE-2-BSA抗原をdH2Oにおいて1μg/ウェルでプレートにコーティングして37℃で終夜乾燥させた。
陰性対照抗原での試験:0.5μg/ウェルのHT(ヒトトランスフェリン)抗原をdH2Oにおいて50μl/ウェルでプレートにコーティングして、37℃で終夜乾燥させた。
ブロッキング:プレートをPBS(pH 7.4)において3%スキムミルク粉末によって100μl/ウェルでブロックして室温で1時間インキュベートした。
1°抗体:マウス抗DSE-2ハイブリドーマ組織培養上清およびマウスモノクローナル抗体対照を、スクリーニングおよび試験に関して原液100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら室温で1時間インキュベートした。
スクリーニングおよび試験に用いた2°抗体:用いた1/10000ヤギ抗マウスIgG Fc HRP共役をPBS-Tween(pH 7.4)において希釈し、100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら37℃で1時間インキュベートした。
基質:TMB緩衝液(BioFx cat# TMBW-1000-01)を50μl/ウェルで加えて、室温の暗所でインキュベートした。反応を15分後に1 M HCl 50μl/ウェルによって停止させて、OD450 nmで読み取った。
に対して作製された抗体に関するハイブリドーマクローンのELISAスクリーニングを示す。いくつかのハイブリドーマクローンによって作製された抗体は、疾患特異的エピトープに対応するペプチドに対して非常に特異的であり、対照抗原HT(ヒトトランスフェリン)を検出可能に認識しなかった。これらの結果は、SOD1のミスフォールド型において選択的に提示されるまたは近づくことができると同定されたエピトープに対応するペプチドに対してモノクローナル抗体を産生できることを示している。
ハイブリドーマクローン3H1(アクセッション番号220207-02)を、2007年2月22日にCanada, WinnipegにあるInternational Depository Authority of Canadaに寄託した。
DSE1ポリクローナル抗体
抗体生成および精製
ペプチド合成をPerseptives Biosystems 9050 Plus Pepsynthesizerにおいて標準的なFmocに基づく化学を用いて行った。多数の抗原性ペプチドを、Fmoc保護アミノ酸(Advanced ChemTech;Novabiochem, San Diego, California;Applied Biosystems, Foster City, California)を用いて[Fmoc-Lys(Fmoc)]4-Lys2-Lys-Cys(Acm)-β-Ala-Wang樹脂(Advanced ChemTech, SM5104, Louisville, Kentucky)において合成した。配列は、
であり、組成および配列はアミノ酸分析およびペプチドシンセサイザーオンラインUV-吸光度分析によって確認した。このペプチドを切断して10 mM Tris、10 mM酢酸ナトリウム(Sigma)に対する透析によって精製し、pH 8.0で透析を行ってペプチドデンドリマーの隣接する鎖のあいだでジスルフィド結合を形成させた。MAP抗原は分子量〜11 kDaを有し、これを担体タンパク質に共役させずに用いた。抗原をウサギ抗血清産生のためにSigma-Genosys (Oakville, Ontario, Canada)に送付した(製造元の「部分包装」)。抗血清産生は標準的なプロトコール(Sigma-Genosys)に従い、動物福祉条例(アメリカ)を遵守した。
SDS-PAGEは、予め成型した4〜20%ポリアクリルアミド勾配ゲル(Invitrogen, Carlsbad, CA)によってTris-グリシン緩衝系を用いて行った。部分変性ゲルの場合、ヒト赤血球SOD1(Sigma)を、SDS-ローディング緩衝液において4%β-メルカプトエタノール(Aldrich)と共に15分間沸騰させるか、またはSDS-ローディング緩衝液において氷中で15分間維持した。SOD1 1〜5μgをそれぞれのレーンにおいて泳動させて、同等の結果を得た。ウェスタンブロッティングの場合、ゲルをPVDFメンブレンに転写して5%ミルク-TBST(tris緩衝生理食塩液、0.05%Tween-20)によって終夜ブロックした。5%ミルク-TBSTにおいて希釈した0.2μg/ml(少なくとも5μg/mlまで同等の結果を生じた)SEDI SOD抗体(抗DSE1ポリクローナル)を一次抗体として用い、1:5000希釈の抗ウサギIgG-HRP(Stressgen, Victoria, Canada)を二次抗体として用いた。ECL-Plus(Amersham, Buckinghamshire, UK)を用いてウェスタンブロットを展開し、コダックフィルムにおいて可視化した。ペプチド競合実験に関して、希釈したSEDI SOD抗体を、使用前に、抗原と同じ配列を有する遊離の直線状ペプチドの500×(モル)過剰量と共に4℃で終夜または室温で1時間プレインキュベートした。
抗体の設計およびバリデーション
インビボでのタンパク質コンフォメーションを調べることは難しい問題である。可能性がある一つの戦略は、天然のタンパク質ではなくて、特異的ミスフォールドコンフォメーションを認識する抗体を設計することである。この仮説に基づくアプローチは、タンパク質の凝集を伴う他の神経変性障害に既に応用されているが、これらの設計は、ミスフォールドタンパク質の構造に関する低い解像度の生物物理的情報に依存している。本発明者らのアプローチは、ミスフォールドSOD1に対する抗体を設計するために詳細なX-線結晶構造データを使用している(6,71)。天然の二量体SOD1において近づくことができないが、SOD1凝集体および凝集中間体において露出されるエピトープを認識する抗体は、インビボでミスフォールドSOD1を選択的に検出することができるであろうという仮説を立てた。天然のSOD1二量体(pdb code: 1SPD)(72)のX-線構造を調べると、残基145〜151(ACGVIGI)はSOD1二量体界面で分離され、天然のSOD1において近づくことができないことが示される。このエピトープに対する抗体は、単量体および非天然オリゴマーの場合のように、天然の二量体界面が破壊されて露出するとSOD1のミスフォールド型を認識するという仮説が立てられる。したがって、本発明者らは、これをSOD1二量体界面抗体(SEDI抗体、抗DSE1ポリクローナル抗体とも呼ばれる)と命名した。本発明者らは、デンドリマーのそれぞれの枝が、配列ggRLACGVIGIggkgを有する多数の抗原性ペプチドを合成した;式中、大文字の配列はSOD1配列の一部(残基143〜151位)である。その溶解性を増加するために、SOD1残基143および144位を抗原性ペプチドに加えた;エピトープを内部配列の状況に当てはめるため、溶解度を増加させるため、および免疫原性を増強させるために分子量を増加させるために、N-末端およびC-末端Gly/Lysリンカーを加えた。この抗原による免疫から産生されたウサギ抗血清を、抗原に対して同一の配列を有する固定された直線状ペプチドを用いてアフィニティ精製した。抗体が、二量体SOD1と、選択されたエピトープが露出された単量体SOD1とを識別できるか否かを調べるために、ウェスタンブロットを行った。非還元条件においてSOD1はSDS-PAGEにおいて主に二量体として泳動することから、天然のSOD1は十分に安定である。変性条件で還元されると、これは主に単量体として泳動するが、何らかの二量体もなおも検出される。これらのゲルにおいて、SEDI抗体は、単量体SOD1のみと反応して、天然の二量体SOD1とは反応しない。このようにこの抗体は、選択されたエピトープが露出する場合、SOD1コンフォーマーと反応するが天然のSOD1とは反応しないであろう。これは、天然およびミスフォールドSOD1の双方を識別せずに検出する市販のSOD1抗体とは対比をなす。抗原性ペプチドとの競合により、抗体の特異性が確認された。このように、SEDI抗体は設計基準を満たし、インビボ仮説を調べるための選択的に提示されるまたは近づくことができるアイノル(inol)を提供する。
DSE1モノクローナル抗体生成
マウスモノクローナル抗体生成:雌性BALB/cマウス4匹を、フロイントの完全アジュバントにおいてマウス1匹あたりタンパク質抗原25μgの腹腔内注射によって初回免疫した。その後4回の追加免疫を、3週間間隔で、フロイントの不完全アジュバントによって先に記述したように行った。ELISAによって決定して血清力価が免疫前血清試料の10倍より高く上昇した場合に、最高反応マウス2匹にタンパク質抗原10μgを滅菌PBS pH 7.4 100μlにおいて静脈内にそれぞれ追加免疫する。3日後、ドナーマウスを屠殺して、脾細胞を採取してプールする。SP2/0 BALB/c親骨髄腫細胞株と脾細胞との融合は、ハイブリドーマの一段階選択およびクローニングをクローンEZ培地で行ったことを除き、先の実施例1に記述されているとおりに行う。この半固体培地によって一段階でのHAT選択およびクローニングが可能となり、より急速に生育する、おそらく望ましくないハイブリドーマによるより遅く生育する望ましいクローンの異常生育を消失させる。クローンを融合後11日目に採取して96ウェル組織培養プレートのウェルにおいて、20%ウシ胎児血清を含有するDMEM(Invitrogen)培地200μlに再懸濁する。4日後、1μg/ウェルのタンパク質抗原をコーティングしたプレートにおける抗体活性に関して、上清を間接的ELISAによってスクリーニングする。
スクリーニングおよび試験に関して、DSE-1-BSA抗原をdH2Oにおいて1μg/ウェルでプレートにコーティングして37℃で終夜乾燥させる。
陰性対照抗原での試験:0.5μg/ウェルのHT(ヒトトランスフェリン)抗原をdH2Oにおいて50μl/ウェルでプレートにコーティングして、37℃で終夜乾燥させる。
ブロッキング:プレートをPBS(pH 7.4)において3%スキムミルク粉末によって100μl/ウェルでブロックして室温で1時間インキュベートする。
1°抗体:マウス抗DSE-1ハイブリドーマ組織培養上清およびマウスモノクローナル抗体対照を、スクリーニングおよび試験に関して原液100μl/ウェルで加える。SP2/0組織培養上清において1/800倍に希釈したマウス抗DSE-1a免疫血清およびマウス免疫前血清を、100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら室温で1時間インキュベートする。
スクリーニングおよび試験に用いた2°抗体:1/10000ヤギ抗マウスIgG Fc HRP共役を用いる。二次抗体をPBS-Tween(pH 7.4)において希釈し、100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら37℃で1時間インキュベートする。
基質:TMB緩衝液(BioFx cat# TMBW-1000-01)を50μl/ウェルで加えて、室温の暗所でインキュベートする。反応を15分後に1 M HCl 50μl/ウェルによって停止させて、OD450 nmで読み取る。
DSE1a抗体産生
DSE1aエピトープ(GGGRLAC*GVIGIGSG)に対応する単離ペプチドをBALB/cマウスを免疫するためにKLHに共役させて、ELISAスクリーニングのためにBSAに共役させた。
マウスモノクローナル抗体生成:雌性BALB/cマウス4匹を、フロイントの完全アジュバントにおいてマウス1匹あたりタンパク質抗原25μgの腹腔内注射によって初回免疫した。その後4回の追加免疫を、3週間間隔で、フロイントの不完全アジュバントによって先に記述したように行った。ELISAによって決定して血清力価が免疫前血清試料の10倍より高く上昇した場合に、最高反応マウス2匹にタンパク質抗原10μgを滅菌PBS pH 7.4 100μlにおいて静脈内にそれぞれ追加免疫した。3日後、ドナーマウスを屠殺して、脾細胞を採取してプールした。SP2/0 BALB/c親骨髄腫細胞株と脾細胞との融合は、ハイブリドーマの一段階選択およびクローニングをクローンEZ培地で行ったことを除き、先の実施例1において記述されているとおりに行った。この半固体培地によって一段階でのHAT選択およびクローニングが可能となり、より急速に生育する、おそらく望ましくないハイブリドーマによるより遅く生育する望ましいクローンの異常生育を消失させる。クローンを融合後11日目に採取して、96ウェル組織培養プレートのウェルにおいて、20%ウシ胎児血清を含有するDMEM(Invitrogen)培地200μlに再懸濁した。4日後、1μg/ウェルのタンパク質抗原をコーティングしたプレートにおける抗体活性に関して、上清を間接的ELISAによってスクリーニングした。
スクリーニングおよび試験に関して、DSE-1a-BSA抗原をdH2Oにおいて1μg/ウェルでプレートにコーティングして37℃で終夜乾燥させた。
陰性対照抗原での試験:0.5μg/ウェルのHT(ヒトトランスフェリン)抗原をdH2Oにおいて50μl/ウェルでプレートにコーティングして、37℃で終夜乾燥させた。
ブロッキング:プレートをPBS(pH 7.4)において3%スキムミルク粉末によって100μl/ウェルでブロックして室温で1時間インキュベートした。
1°抗体:マウス抗DSE-1aハイブリドーマ組織培養上清およびマウスモノクローナル抗体対照を、スクリーニングおよび試験に関して原液100μl/ウェルで加えた。SP2/0組織培養上清において1/800倍に希釈したマウス抗DSE-1a免疫血清およびマウス免疫前血清を100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら室温で1時間インキュベートした。
スクリーニングおよび試験に用いた2°抗体:1/10000ヤギ抗マウスIgG Fc HRP共役を用いた。二次抗体をPBS-Tween(pH 7.4)において希釈し、100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら37℃で1時間インキュベートした。
基質:TMB緩衝液(BioFx cat# TMBW-1000-01)を50μl/ウェルで加えて、室温の暗所でインキュベートした。反応を15分後に1 M HCl 50μl/ウェルによって停止させて、OD450 nmで読み取った。
に対応するペプチドに対して作製された抗体に関するハイブリドーマクローンのELISAスクリーニングを示す。ハイブリドーマクローンによって作製された抗体は、疾患特異的エピトープに対して非常に特異的であり、対照抗原HT(ヒトトランスフェリン)を検出可能に認識しなかった。これらの結果は、SOD1のミスフォールド型において提示されるまたは近づくことができると同定されたエピトープに対応するペプチドに対してモノクローナル抗体を産生することができることを示している。
ハイブリドーマクローン6D8(アクセッション番号220207-01)を、2007年2月22日にCanada, WinnipegにあるInternational Depository Authority of Canadaに寄託した。
DSE1aに対して作製された抗体はDSE1ペプチドを認識しない。
抗DSE1a抗体がその同源のペプチド配列(DSE1a)を認識する能力を、抗DSE1a抗体が非酸化ペプチド(DSE1)を認識する能力と比較した。
DSE5抗体生成
マウスモノクローナル抗体生成:雌性BALB/cマウス4匹を、フロイントの完全アジュバントにおいてマウス1匹あたりNに加えたシステインとのジスルフィド形成によってKLHに共役させた、DSE5に対応するペプチド(IKGLTEGLHGF)を含む免疫原25μgの腹腔内注射によって初回免疫した。その後4回の追加免疫を、3週間間隔で、フロイントの不完全アジュバントによって先に記述したように行った。ELISAによって決定して血清力価が免疫前血清試料の10倍より高く上昇した場合に、最高反応マウス2匹にタンパク質抗原10μgを滅菌PBS pH 7.4 100μlにおいて静脈内にそれぞれ追加免疫した。3日後、ドナーマウスを屠殺して、脾細胞を採取してプールした。SP2/0 BALB/c親骨髄腫細胞株と脾細胞との融合は、ハイブリドーマの一段階選択およびクローニングをクローンEZ培地で行ったことを除き、先の実施例1において既に記述されているとおりに行った。この半固体培地によって一段階でのHAT選択およびクローニングが可能となり、より急速に生育する、おそらく望ましくないハイブリドーマによるより遅く生育する望ましいクローンの異常生育を消失させる。クローンを融合後11日目に採取して、96ウェル組織培養プレートのウェルにおいて、20%ウシ胎児血清を含有するDMEM(Invitrogen)培地200μlに再懸濁した。4日後、1μg/ウェルのタンパク質抗原をコーティングしたプレートにおける抗体活性に関して、上清を間接的ELISAによってスクリーニングした。
スクリーニングおよび試験に関して、DSE-BSA抗原をdH2Oにおいて1μg/ウェルでプレートにコーティングして37℃で終夜乾燥させた。
陰性対照抗原での試験:0.5μg/ウェルのHT(ヒトトランスフェリン)抗原をdH2Oにおいて50μl/ウェルでプレートにコーティングして、37℃で終夜乾燥させた。
ブロッキング:プレートをPBS(pH 7.4)において3%スキムミルク粉末によって100μl/ウェルでブロックして室温で1時間インキュベートした。
1°抗体:マウス抗DSE-5ハイブリドーマ組織培養上清およびマウスモノクローナル抗体対照を、スクリーニングおよび試験に関して原液100μl/ウェルで加えた。SP2/0組織培養上清において1/800倍に希釈したマウス抗DSE-1a免疫血清およびマウス免疫前血清を100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら室温で1時間インキュベートした。
スクリーニングおよび試験に用いた2°抗体:1/10000ヤギ抗マウスIgG Fc HRP共役を用いた。二次抗体をPBS-Tween(pH 7.4)において希釈し、100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら37℃で1時間インキュベートした。
基質:TMB緩衝液(BioFx cat# TMBW-1000-01)を50μl/ウェルで加えて、室温の暗所でインキュベートした。反応を15分後に1 M HCl 50μl/ウェルによって停止させて、OD450 nmで読み取った。
に対して作製された抗体に関するハイブリドーマクローンのELISAスクリーニングを示す。ハイブリドーマクローンのいくつかによって生成された抗体は、エピトープに対応するペプチドに対して非常に特異的であり、対照抗原HT(ヒトトランスフェリン)を検出可能に認識しなかった。これらの結果は、SOD1のミスフォールド型において選択的に提示されるまたは近づくことができるとして同定されたエピトープに対応するペプチドに対してモノクローナル抗体を産生できることを示している。
ハイブリドーマクローン5C6(アクセッション番号280207-01)を、2007年2月28日にCanada, WinnipegにあるInternational Depository Authority of Canadaに寄託した。
疾患特異的エピトープ(DSE)および/またはDSE抗原性決定基に対する抗体産生
SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープを、エピトープに反応性のB細胞を生成するために、BALB/cマウスの免疫のためにKLHに共役させる。免疫のためのエピトープは、
からなるペプチドの群から選択される。または、一つまたは複数の抗原性決定基を含み、最少で単独またはKLHと共役させた場合に免疫原性であるペプチド配列のいずれかの3または5隣接アミノ酸を含む、前述のペプチドのいずれかの一部をKLHに共役させる。
スクリーニングおよび試験に関して、DSE-BSA抗原をdH2Oにおいて1μg/ウェルでプレートにコーティングして37℃で終夜乾燥させる。
陰性対照抗原での試験:0.5μg/ウェルのHT(ヒトトランスフェリン)抗原をdH2Oにおいて50μl/ウェルでプレートにコーティングして、37℃で終夜乾燥させる。
ブロッキング:プレートをPBS(pH 7.4)において3%スキムミルク粉末によって100μl/ウェルでブロックして室温で1時間インキュベートする。
1°抗体:マウス抗DSEハイブリドーマ組織培養上清およびマウスモノクローナル抗体対照を、スクリーニングおよび試験に関して原液100μl/ウェルで加える。SP2/0組織培養上清において1/800倍に希釈したマウス抗DSE-1a免疫血清およびマウス免疫前血清を100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら室温で1時間インキュベートする。
スクリーニングおよび試験に用いた2°抗体:1/10000ヤギ抗マウスIgG Fc HRP共役を用いる。二次抗体をPBS-Tween(pH 7.4)において希釈し、100μl/ウェルで加えて、振とうさせながら37℃で1時間インキュベートする。
基質:TMB緩衝液(BioFx cat# TMBW-1000-01)を50μl/ウェルで加えて、室温の暗所でインキュベートする。反応を15分後に1 M HCl 50μl/ウェルによって停止させて、OD450 nmで読み取る。
変性SOD1に対する親和性に関するDSE1aに対する抗体のELISA試験
DSE1a
に対する抗体を産生するハイブリドーマクローンを、天然の折り畳み型SOD1(PBS中のSOD1)、変性もしくはミスフォールドSOD1(6 M GdnHClを有する変性緩衝液中でのSOD1)、または天然の折り畳み型およびミスフォールドBSA対照に対する特異的反応性に関するELISAによってスクリーニングした。
変性SOD1に対する親和性に関するDSE2に対する抗体のELISA試験
DSE2
に対する抗体を産生するハイブリドーマクローンを、天然の折り畳み型SOD1(PBS中のSOD1)、変性もしくはミスフォールドSOD1(6 M GdnHClを有する変性緩衝液中でのSOD1)、または天然の折り畳み型およびミスフォールドBSA対照に対する特異的反応性に関するELISAによってスクリーニングした。
変性SOD1に対する親和性に関するDSE5に対する抗体のELISA試験
DSE5
に対する抗体を産生するハイブリドーマクローンを、天然の折り畳み型SOD1(PBS中のSOD1)、変性もしくはミスフォールドSOD1(変性緩衝液GdnHClにおけるSOD1)、または天然の折り畳み型およびミスフォールドBSA対照に対する特異的反応性に関するELISAによってスクリーニングした。
DSE2に対する抗体による酸化SOD1の認識
酵素の酸化的障害は、神経変性疾患において起こり、SOD1に対する酸化的障害によって、ミスフォールディングおよび凝集SOD1の形成が起こる。本発明者らは、DSE2エピトープに対する抗体(ハイブリドーマクローン10E11C11および3H1)が、精製SOD1を100μm10 mM H2O2と共に、またはアスコルビン酸塩と塩化銅の混合物と共にインキュベートすることによって、そのような酸化的に改変されたSOD1を認識することを示した。これらの処置はいずれも、SOD1におけるアミノ酸を酸化することが知られている。次に、本発明者らは、この酸化SOD1をマイクロタイタープレートウェルに結合させて、二つの異なる抗DSE2抗体の一つを加えた。比較のために、マイクロタイターウェルを無処置の通常の折り畳み型SOD1の緩衝液溶液によって、またはカオトロピック剤(塩化グアニジニウム、GdnHCl)溶液によって変性させたSOD1によってコーティングした。図2において示されるように、抗DSE2抗体はGdnHClにおいてミスフォールドSOD1に優先的に結合するが、緩衝液における天然の折り畳み型SOD1にも非常に少ないが十分に結合する。しかし、酸化後、SOD1は抗DSE2抗体によって効率よく認識される。これは、抗DSE2(10E11C11および3H1)抗体が、神経変性疾患を有する患者において発生する酸化的改変SOD1の種類を認識することを証明している。結果を以下の表10に表す。
ALS特異的エピトープ予測、合成、および精密化
ミスフォールドSOD1によって提示され、天然のSOD1によって提示されないエピトープは、SOD1の通常に折り畳まれた天然のコンフォメーションによって隠される配列領域に関して、天然のSOD1の構造を分析することによって決定される可能性がある。たとえば、DSE2およびDSE3ループはSOD1の天然の構造では抗体結合のために近づくことができないが、アミロイド原線維およびナノチューブ構造におけるSOD1活性部位から除外されることが示された(84)。このように、これらのループの露出は、SOD1ミスフォールディングのマーカーとなる可能性があるが、それらはまた、SOD1の鋳型特異的ミスフォールディングに関係するSOD1の「動員ドメイン」を構成する可能性がある。本発明者らは、SOD1ミスフォールディングの際に近づくことができるようになる推定の隠された配列としてDSE1、DSE4、およびDSE7を同定した。
およびアミノ酸142〜149位(SRLACGVI)を同定した。
類似体エピトープ
以下の一覧に従って、一つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を組み入れて類似体エピトープペプチドを合成する。DSE1におけるシステイン(C)残基をシステインスルフィン酸またはシステイン酸に酸化する(すなわち、DSE1a)。DSE2におけるリジン(K)残基をカルボニル基に酸化する。DSE3におけるアルギニン(R)、リジン(K)、およびヒスチジン(H)残基の一つまたは複数を酸化して、カルボニル基を形成する。DSE4において、リジン(K)をカルボニル基に酸化して、および/またはシステイン(C)をシステインスルフィン酸またはシステイン酸に酸化する。DSE5において、KおよびHの一つまたは複数をカルボニル基に酸化して、および/またはフェニルアラニンをニトロトリプトファンに硝酸化する。DSE6において、HまたはRの一つまたは複数をカルボニル基に酸化して、および/またはCをシステインスルフィン酸またはシステイン酸に酸化する。DSE7において、Hをカルボニル基に酸化して、および/またはFをニトロトリプトファンに硝酸化する。
C:システインをシステインスルフィン酸に酸化して、次にさらにシステイン酸に酸化する。
H、R、K:カルボニル形成
M:酸化、メチオニンスルホキシド
F:硝酸化、ニトロトリプトファン
脳組織の免疫沈降
アルツハイマー病、パーキンソン病、またはALSと診断された患者、およびマッチさせた対照からの脳組織を得る。試料をドライアイスにおいて直ちに凍結する。凍結組織をより小さい小片に切断して、溶解緩衝液(100 mM NaCl、10 mM EDTA、10 mM Tris、0.5%デオキシコール酸塩、0.5%NP-40、pH 7.4)および1×Roche EDTA非含有完全プロテアーゼ阻害剤(Roche)溶液において乳棒乳鉢ホモジナイザーによってホモジナイズ(10%w/v)する。このホモジネートを2000×gで遠心して、上清を「可溶性分画」と呼び、沈降物分画を「不溶性分画」と呼ぶ。組織ホモジネートを直ちにアリコートにして、使用するまで-80℃で凍結する。不溶性分画による実験に関して、沈降物を溶解緩衝液に再懸濁する。タンパク質濃度をBCAタンパク質アッセイ(Pierce)を用いて決定する。1×プロテアーゼ阻害剤を含有するPBSによって1 mlに希釈したタンパク質100μgを、製造元の説明書に従って、Dynabeads M-280トシル-活性化磁気ビーズ(Dynal Biotech, Oslo, Norway)に共役させたSOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合するモノクローナル抗体5〜10μgによって免疫沈降させる。
、たとえば2006年3月3日に提出された米国特許出願第60/778,379号において記述されるように作製されたそれに対する抗体、およびKhare et al.(8)において開示されるエピトープ
が含まれる、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する他の抗体を免疫沈降実験において用いる。
脳組織からのミスフォールドSOD1の免疫沈降および検出
正常ヒト患者、野生型マウス、野生型ヒトSOD1を過剰発現するトランスジェニックマウス、およびSOD1のミスフォールド型を発現するALSのG93Aモデルマウスからの脳組織を得た。試料をドライアイスにおいて直ちに凍結して重量を測定した。凍結組織をより小さい小片に切断して、溶解緩衝液(100 mM NaCl、10 mM EDTA、10 mM Tris、0.5%デオキシコール酸塩、0.5%NP-40、pH 7.4)および1×Roche EDTA非含有完全プロテアーゼ阻害剤(Roche)溶液において乳棒乳鉢ホモジナイザーによってホモジナイズ(10%w/v)した。このホモジネートを2000×gで遠心して、上清を「可溶性分画」と呼び、沈降物分画を「不溶性分画」と呼んだ。組織ホモジネートを直ちにアリコートにして、使用するまで-80℃で凍結した。不溶性分画による実験に関して、沈降物を溶解緩衝液に再懸濁した。タンパク質濃度をBCAタンパク質アッセイ(Pierce)を用いて決定した。1×プロテアーゼ阻害剤を含有するPBSによって1 mlに希釈したタンパク質100μgを、製造元の説明書に従って、Dynabeads M-280トシル-活性化磁気ビーズ(Dynal Biotech, Oslo, Norway)に共役させた、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープ
に結合するモノクローナル抗体5〜10μgによって免疫沈降させた。
に対する抗体は、G93A変異体マウスの脳組織においてSOD1のミスフォールド型を免疫沈降させて、かなり低い程度であるが過剰発現された野生型ヒトSOD1を免疫沈降させた。この抗体はマウスまたはヒトSOD1の天然型を免疫沈降させなかった。しかし、DSE2に対する抗体は、直接イムノブロッティングにより、変性したヒトおよびマウスSOD1を認識した。
、たとえば2006年3月3日に提出された米国特許出願第60/778,379号において記述されるように作製されたそれに対する抗体、およびKhare et al.(8)において開示されるエピトープ
が含まれる、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する他の抗体を免疫沈降実験において用いる。
脳組織の免疫組織化学
アルツハイマー病、パーキンソン病、またはALSと診断された患者およびそのマッチさせた対照から脳組織を得る、試料を10%無メタノールリン酸緩衝ホルマリン(Fisher Scientific)と共にインキュベートする。組織試料を解剖して、パラフィン抱埋し、ロータリーミクロトームを用いて縦方向または横方向のいずれかに6μm切片を作製する。免疫組織化学のための切片は全て、標識前に3%H2O2(v/v)および10 mMクエン酸ナトリウム緩衝液、pH 6.0によって処置する。SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体を用いる。全ての場合において、一次抗体を4℃で終夜反応させる。色素原として3,3'-ジアミノベンジジン(DAB)を用いてDakoCytomation Envison(商標)システムを用いて製造元の説明書に従って切片を顕色させる。二重標識の場合、DakoCytomation Envison(商標)二重染色キットを、色素原としてニトロ-ブルーテトラゾリウム(NBT)と共に用いる。染色した切片をLeica DM 6000顕微鏡を用いて可視化して、Micropublisher 3.3 RTVデジタルカラーカメラ(Qimaging)によってデジタル画像を得る。
アルツハイマー病の脳組織の免疫組織化学
組織をホルマリン固定によって調製してパラフィンに抱埋した。組織を切片(4ミクロン)にして、充填した顕微鏡スライドガラスに載せて、組織乾燥器において60℃で45分間加熱した。スライドガラスをキシレン(3×5分)において洗浄することによって、スライドガラスのパラフィンを除去した後、アルコールの減少濃度(100%アルコールを用いて3×3分;95%アルコールを用いて2×3分;80%アルコールを用いて1×3分)および蒸留水においてスライドガラスを洗浄することによって水和させた。スライドガラスを0.01 Mクエン酸ナトリウム緩衝液、pH 6.0において99〜100℃で20分間蒸気をあてて、RTで20分間インキュベートした。Tweenを含む1×TBS(TBST)においてスライドガラスをRTで1分間再度すすいだ。
に結合する抗体を一次抗体として用いて、組織切片を5μg/mlの濃度で染色した(図5)。抗体を4℃で終夜放置した。色素原として3,3'-ジアミノベンジジン(DAB)を用いてDakoCytomation Envison(商標)システムを用いて製造元の説明書に従って切片を顕色させた。二重標識の場合、DakoCytomation Envison(商標)二重染色キットを、色素原としてニトロ-ブルーテトラゾリウム(NBT)と共に用いた。染色した切片をLeica DM 6000顕微鏡を用いて可視化して、Micropublisher 3.3 RTVデジタルカラーカメラ(Qimaging)によってデジタル画像を得た。末期アルツハイマー病を有する78歳女性から得た海馬の切片は、正常な海馬(図5A)と比較して、DSE2に対する抗体によって、アルツハイマー病脳における老人斑の強い染色を示すと共に(図5B、左のパネル)、アルツハイマー病海馬切片においてニューロンのサブセット内に染色の増加(図5B、右のパネル)を示した。
に対する抗体がアルツハイマー病患者の脳において見いだされるミスフォールドSOD1タンパク質を認識することを証明している。
パーキンソン病の脳組織の免疫組織化学
組織をホルマリン固定によって調製してパラフィンに抱埋した。組織を切片(4ミクロン)にして、充填した顕微鏡スライドガラスに載せて、組織乾燥器において60℃で45分間加熱した。スライドガラスをキシレン(3×5分)において洗浄することによって、スライドガラスのパラフィンを除去した後、アルコールの減少濃度(100%アルコールを用いて3×3分;95%アルコールを用いて2×3分;80%アルコールを用いて1×3分)および蒸留水においてスライドガラスを洗浄することによって水和させた。スライドガラスを0.01 Mクエン酸ナトリウム緩衝液、pH 6.0において99〜100℃で20分間蒸気をあてて、RTで20分間インキュベートした。Tweenを含む1×TBS(TBST)においてスライドガラスをRTで1分間すすいだ。
に対する抗体がパーキンソン病患者の脳において見いだされるミスフォールドSOD1タンパク質を認識することを証明している。
疾患におけるSOD1 DSE2の免疫反応性
本発明者らは、全てのタイプのALS(散発型と共にSOD1家族性ALSおよびSOD1変異を伴わない家族性ALS)においてDSE2免疫反応性を検出した。免疫反応性は、前根における運動神経軸索と共に脊髄前角内の細胞外穿刺沈着物、および運動路軸索内が含まれる、いくつかの脊髄運動ニューロン内の孤立性の密な沈着物として検出可能である。
ALSモデルマウスのALS特異的エピトープ免疫
本研究は、酵素スーパーオキシドジスムターゼ1(SOD1)の特異的ペプチド配列によるワクチン接種が、神経変性疾患である筋萎縮性側索硬化症(ALS)を予防することを示す。
ALSモデルマウスのALS-特異的エピトープ免疫
4週齢のG93AまたはG37Rモデルを免疫のために7群の一つに無作為化する:生理食塩液、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH);DSE1;DSE1a;DSE2;DSE5;およびDSE1a+DSE2+DSE5。ペプチドは全てKLHに共役させる。免疫は全て薬学的に許容される賦形剤と共に投与される。
核酸によるALSモデルマウスの免疫
4週齢のG93AおよびG37Rモデルマウスを、ALS特異的エピトープをコードする核酸、または無関係な対照核酸によって免疫するために無作為化する。核酸は全て、薬学的に許容される賦形剤と共に投与される。
ALSモデルマウスのALS-特異的エピトープ抗体注入
G93AおよびG37Rマウスに、ALS免疫療法をより厳密にモデルとするために疾患の発症時に筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープに対するモノクローナル抗体を静脈内注入(IV)する。SOD凝集および疾患進行の遅延または停止が治療活性抗体に関して起こるが、アイソタイプ対照抗体では効果は認められない。筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープおよび天然の露出されたエピトープが含まれる対照抗体に関して、自己免疫をモニターする。
a)後肢伸展反射:動物を尾で持ち上げた場合の後肢伸展の低減は、変異体SOD1トランスジェニックマウスにおいて観察される初期欠損である。動物を尾の基底部で持ち上げて後肢伸展および姿勢反射を採点する。スコア3は、完全な伸展および正常な姿勢反射を示す。スコア2は、中等度の伸展および正常な姿勢反射を示す。スコア1は、不良な伸展および姿勢反射を示す。スコア0は後肢の運動なしを示す。
b)オープンフィールド試験:オープンフィールド試験は、EthoVision Pro Version 3.1(Noldus Information Technology, Leesburg, VA, USA)を用いて毎週行う。動物を、上部が開口した閉鎖円形アリーナ(直径50 cm)に入れて、頭上からのデジタルビデオカメラによって約5分間記録する。多数の行動学パラメータをオフラインで定量する。動物4匹を異なるアリーナで同時にモニターする。
c)歩行分析:歩行分析はDigiGait(Mouse Specifics, Boston, MA, USA)を用いて毎週行う。前足の置き方およびストライド距離の変化は、DigiGaitを用いて評価した場合に、G93A B6.Cg-Tg SOD1トランスジェニックマウスにおいて観察される最も初期の機能的変化であると報告される。
DSE2抗体によるG93Aマウスの処置
G93AモデルマウスにDSE2ペプチド配列に対するモノクローナル抗体を注入した。G93AモデルマウスはヒトSOD1タンパク質の変異体型を発現して、臨床的および神経病理学的にALS様疾患を発症する。抗体を、脳カテーテル(Alzet(登録商標)カテーテル)および皮下に埋め込まれたポンプ(Alzet(登録商標)浸透圧ポンプ)を用いて脳室内(ICV)注入によって、または抗DSE2抗体の腹腔内注入のいずれかによって投与した。
TgCRND8トランスジェニックマウスの免疫
TgCRND8マウスは、マウスアルツハイマー病モデルである。これらのマウスは、C3H/B6系統バックグラウンドにおいてシリアンハムスタープリオンプロモーターの調節下で変異体(K670N/M671LおよびV717F)ヒトβAPP695トランスジーンを発現する。これらのマウスは、3ヶ月齢で空間的学習欠損を有し、これは脳におけるSDS-可溶性Aβレベルの増加とAβ含有アミロイド斑の数の増加を伴う。Janus C et al.(65)を参照されたい。
TgCRND8トランスジェニックマウスの抗体注入
TgCRND8マウスに、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体またはアイソタイプ対照抗体を注入する。先に記述したように、マウスをモリスの水迷路試験の参照記憶版において試験する。
核酸によるTgCRND8トランスジェニックマウスの免疫
TgCRND8マウスは、マウスアルツハイマー病モデルである。これらのマウスは、C3H/B6系統バックグラウンドにおいてシリアンハムスタープリオンプロモーターの調節下で変異体(K670N/M671LおよびV717F)ヒトβAPP695トランスジーンを発現する。これらのマウスは、3ヶ月齢で空間的学習欠損を有し、これは脳におけるSDS-可溶性Aβレベルの増加とAβ含有アミロイド斑の数の増加を伴う。Janus C et al.(65)を参照されたい。
Hα-Syn Tgマウスの免疫
血小板由来増殖因子βプロモーターの調節制御下でhα-synを発現するヘテロ接合トランスジェニックマウスを用いる(Masliah E et al.(69))。これらの動物は、パーキンソン病およびレヴィー小体病のモデルであることから用いられる(Masliah E et al.(70))。
Hα-Syn Tgマウスの核酸による免疫
血小板由来増殖因子βプロモーターの調節制御下でhα-synを発現するヘテロ接合トランスジェニックマウスを用いる(Masliah E et al.(69))。これらの動物は、パーキンソン病およびレヴィー小体病のモデルであることから用いられる(Masliah E et al.(70))。
Hα-syn tgマウスの抗体注入
hα-syn tgマウスに、SOD1の非天然型において選択的に提示されるまたは近づくことができるエピトープに結合する抗体、またはアイソタイプ対照抗体を注入する。
ALS患者へのヒト化抗体の投与
筋萎縮性側索硬化症特異的エピトープに対するヒト化抗体をヒトALS患者に投与する。患者をSOD凝集および疾患の進行の遅延または停止の指標に関してモニターする。ALS疾患特異的エピトープに対するヒト化抗体の投与は、患者におけるALS疾患の進行を遅らせる。SOD1凝集の遅延または停止および疾患進行の消失は、治療活性抗体について起こる。
ALS患者に対するヒト化抗体の脳室内または鞘内投与
ALS-特異的エピトープに対するヒト化抗体を、MedTronics(Minneapolis, MN, USA)によって製造される注入ポンプのような注入ポンプを用いて、脳室内または鞘内に注入することによって、ALS患者のCNSに直接投与する。ALS患者に、最高速度1 ml/hで注入してCNSにおいて1〜10μg/mlの最終濃度を得るためにヒト化抗体を1日あたり0.5〜5 mg注入する。一つの療法において、製剤はALS特異的エピトープに対する抗体を含む。もう一つの療法において、製剤は、それぞれが異なるALS特異的エピトープに対する二つまたはそれより多いヒト化抗体を含む。
アルツハイマー病患者への投与:エピトープ
アルツハイマー病特異的エピトープDLGKGGNEESTKTGNAGS(DSE2)をヒトアルツハイマー病患者に投与する。エピトープを投与する。
アルツハイマー病患者に対するヒト化抗体の投与
アルツハイマー病特異的エピトープに対するヒト化抗体を、ヒトアルツハイマー病患者に投与する。ヒト化抗体は、CNSにおける局所濃度が1 mlあたり1〜10μgの範囲となる濃度で静脈内注入によって投与する。一つの療法において、製剤は一つのアルツハイマー病特異的エピトープに対する抗体を含む。もう一つの療法において、製剤は、それぞれが異なるアルツハイマー病特異的エピトープに対する、二つまたはそれより多いヒト化抗体を含む。一つの投与療法において、投与は3週間に1回である。他の療法において、投与は1週間に1回、1週間に2回、1週間に3回、または2週間に1回である。または、投与は、患者の生理状態および処置に対する患者の反応に応じて変化する。
パーキンソン病患者に対する投与:エピトープ
パーキンソン病特異的エピトープをヒトパーキンソン病患者に投与する。
パーキンソン病患者に対する投与:抗体
パーキンソン病特異的エピトープに対する抗体をヒトパーキンソン病患者に投与する。
パーキンソン病に対するヒト化抗体の投与
パーキンソン病特異的エピトープに対するヒト化抗体を、ヒトパーキンソン病患者に投与する。ヒト化抗体は、CNSにおける局所濃度が1〜10μg/mlの範囲となる濃度で静脈内注入によって投与する。一つの療法において、製剤は一つのパーキンソン病特異的エピトープに対する抗体を含む。もう一つの療法において、製剤は、それぞれが異なるパーキンソン病特異的エピトープに対する、二つまたはそれより多いヒト化抗体を含む。一つの投与療法において、投与は3週間に1回である。他の療法において、投与は1週間に1回、1週間に2回、1週間に3回、または2週間に1回である。または、投与は、患者の生理状態および処置に対する患者の反応に応じて変化する。
ALSマウスモデルG93AおよびG37Rの採血
創始半接合雄性G93AおよびG37R動物を同じバックグラウンド系統(C57BL/6)の野生型雌性マウスと交配する。雌性動物は6回より多く交配しない。ヘテロ接合G93A雄性動物は、3ヶ月齢で種畜として引退させ、ヘテロ接合G37Rマウスを6ヶ月齢で種畜として引退させた。
ALS伝搬モデルの開発
ALSにおいて、プリオン病の場合と同様に、ニューロンの死は、神経軸索を通して「広がり」、細胞間の病的プロセスの伝搬に関する病的機構が存在することを示唆している。無細胞系、インビトロでの細胞アッセイ、およびプリオン病における類似のモデルシステムに基づく動物において、SOD1ミスフォールディングの伝搬に関するモデルを開発する。これらのモデルは、免疫療法を試験するためにより「疾患に関連する」系を提供し、現在のモデルの起こりうる偽陰性および偽陽性転帰を回避するであろう。
Claims (60)
- 処置を必要とする被験体におけるヒトスーパーオキシドジスムターゼ1(ヒトSOD1)のミスフォールド型によって媒介される医学的状態、疾患、または障害の処置における使用のための医薬であって、 (1)ヒトスーパーオキシドジスムターゼ1(ヒトSOD1)のミスフォールド型において選択的に提示されるかまたは近づくことができるエピトープに選択的に結合する外因性の抗体またはその断片、または (2)ヒトSOD1のミスフォールド型において選択的に提示されるかまたは近づくことができるエピトープに選択的に結合する内因性の抗体の産生を誘発する免疫原 から選択される物質であって、エピトープが野生型配列を有し、抗体がヒトSOD1の天然のフォールド型に比べて、ヒトSOD1のミスフォールド型において選択的に提示されるかまたは近づくことができるエピトープに少なくとも2倍、より効率的に結合する、前記物質を含有する医薬。
- 医学的状態、疾患、または障害が、神経変性状態、疾患、または障害である、請求項1記載の医薬。
- 神経変性状態、疾患、または障害がALS、アルツハイマー病、またはパーキンソン病を含む、請求項2記載の医薬。
- ALSが散発性ALSまたは家族性ALSである、請求項3記載の医薬。
- ヒトSOD1のミスフォールド型が、ヒトSOD1単量体および/またはヒトSOD1単量体を含む凝集体を含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の医薬。
- ヒトSOD1単量体が野生型ヒトSOD1単量体を含む、請求項5記載の医薬。
- 抗体が、SEQ ID NO:1または4で表されるエピトープに選択的に結合する、請求項1〜6のいずれか一項記載の医薬。
- 抗体が、SEQ ID NO:8で表されるエピトープに選択的に結合する、請求項1〜6のいずれか一項記載の医薬。
- 抗体が、モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、またはヒト化抗体を含む、請求項1〜8のいずれか一項記載の医薬。
- 抗体断片が、Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、dsFv、ds-scFv、二量体、ミニボディ、ディアボディ、もしくはその多量体、または二重特異性抗体断片である、請求項1記載の医薬。
- ヒトSOD1単量体またはヒトSOD1単量体を含む凝集体に選択的に結合する内因性の抗体を誘発する免疫原を含む、請求項1〜4のいずれか一項記載の医薬。
- 免疫原が、SEQ ID NO:1またはSEQ ID NO:4の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含み、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、請求項1〜4または11のいずれか一項記載の医薬。
- 免疫原が、SEQ ID NO:8の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含み、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、請求項1〜4または11のいずれか一項記載の医薬。
- ヒトSOD1のミスフォールド型がミスフォールドヒトSOD1二量体である、請求項1〜4のいずれか一項記載の医薬。
- ミスフォールドヒトSOD1二量体が野生型ヒトSOD1二量体である、請求項14記載の医薬。
- 物質が、ミスフォールドヒトSOD1二量体によって提示されたエピトープに選択的に結合する外因性の抗体を含む、請求項1〜4、14、または15のいずれか一項記載の医薬。
- 外因性の抗体が、SEQ ID NO:2、3、5、6、または7の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸に結合する、請求項1〜4、9、10、または14〜16のいずれか一項記載の医薬。
- ミスフォールド二量体ヒトSOD1によって提示されたエピトープに選択的に結合する内因性の抗体を誘発する免疫原を含む、請求項1〜4または14〜16のいずれか一項記載の医薬。
- 免疫原が、SEQ ID NO:2、3、4、5、6、または7の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含み、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、請求項1〜4、14、15、または18のいずれか一項記載の医薬。
- (2)の物質が、物質の免疫原性を増強する分子に共役される、請求項1〜6または11〜15、または18のいずれか一項記載の医薬。
- 分子が、キーホールリンペットヘモシアニンを含む、請求項20記載の医薬。
- ヒトスーパーオキシドジスムターゼ1(ヒトSOD1)のミスフォールド型によって媒介される医学的状態、疾患、または障害を有する被験体の処置において有用な薬学的組成物であって、 薬学的に許容される媒体と、 (1)ヒトSOD1のミスフォールド型において選択的に提示されるかまたは近づくことができるエピトープに選択的に結合する外因性の抗体、または (2)ヒトSOD1のミスフォールド型において選択的に提示されるかまたは近づくことができるエピトープに選択的に結合する内因性の抗体の被験体による産生を誘発する免疫原 から選択される物質とを含み、エピトープが野生型配列を有し、抗体がヒトSOD1の天然のフォールド型に比べて、ヒトSOD1のミスフォールド型において選択的に提示されるかまたは近づくことができるエピトープに少なくとも2倍、より効率的に結合する、薬学的組成物。
- 前記物質が、請求項11〜13または18〜21のいずれか一項で定義される通りである、請求項22記載の薬学的組成物。
- 前記物質が、請求項7〜10、16、および17のいずれか一項で定義される通りである、請求項22記載の薬学的組成物。
- ヒトSOD1のミスフォールド型が、ヒトSOD1単量体またはヒトSOD1単量体を含む凝集体である、請求項22、23、または24のいずれか一項記載の薬学的組成物。
- ヒトSOD1単量体が野生型ヒトSOD1単量体である、請求項22、23、または24のいずれか一項記載の薬学的組成物。
- 外因性の抗体が、ヒトSOD1二量体界面においてエピトープに選択的に結合する、請求項22または24記載の薬学的組成物。
- 免疫原が、ヒトSOD1単量体および/またはその凝集体に選択的に結合する内因性抗体を誘発する、請求項22または23記載の薬学的組成物。
- 免疫原が、SEQ ID NO:1の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含み、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、請求項22または23記載の薬学的組成物。
- 免疫原が、SEQ ID NO:8の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含み、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、請求項22または23記載の薬学的組成物。
- 免疫原が、SEQ ID NO:4の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含み、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、請求項22または23記載の薬学的組成物。
- ヒトSOD1のミスフォールド型がミスフォールドヒトSOD1二量体である、請求項22、23、または24のいずれか一項記載の薬学的組成物。
- ミスフォールドヒトSOD1二量体がミスフォールド野生型ヒトSOD1二量体である、請求項22または23のいずれか一項記載の薬学的組成物。
- 物質が、ミスフォールド二量体ヒトSOD1によって提示されるエピトープに選択的に結合する外因性の抗体である、請求項22または23記載の薬学的組成物。
- アジュバントをさらに含む、請求項22、23、または28〜31のいずれか一項記載の薬学的組成物。
- SEQ ID NO:1〜8の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなるヒトSOD1エピトープに選択的に結合する抗体を含む、ヒトスーパーオキシドジスムターゼ1(ヒトSOD1)のミスフォールド型によって媒介される医学的状態、疾患、または障害を有する被験体の処置において有用な薬学的組成物。
- カナダの国際寄託機関に寄託されているアクセッション番号280207-01、220207-01、および220207-02から選択されるハイブリドーマによって産生される外因性の抗体を含む、請求項36記載の薬学的組成物。
- (1)SEQ ID NO:5、6、または8の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含む免疫原を得る段階、および (2)非ヒト被験体をそれによって免疫する段階 を含む、抗体を調製するための方法であって、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記方法。
- (1)SEQ ID NO:1、4、または7の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含む免疫原を得る段階、および (2)非ヒト被験体をそれによって免疫する段階 を含む、抗体を調製するための方法であって、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記方法。
- 抗体産生ハイブリドーマを形成する段階をさらに含む、請求項38または39記載の方法。
- SEQ ID NO:5、6、または8の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含む、免疫原であって、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記免疫原。
- SEQ ID NO:1、4、または7の全てまたはそのうちの少なくとも7個の連続したアミノ酸からなる単離ペプチドまたはその類似体を含む、免疫原であって、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記免疫原。
- SEQ ID NO:1、4、または7のアミノ酸配列からなる単離ペプチドまたはその類似体であって、類似体が1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記単離ペプチドまたはその類似体。
- SEQ ID NO:8のアミノ酸配列からなる単離ペプチド。
- SEQ ID NO:5、6、および8からなる群より選択される単離ペプチドまたはその類似体に選択的に結合する、単離抗体であって、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記単離抗体。
- SEQ ID NO:1、4、および7からなる群より選択される単離ペプチドまたはその類似体に選択的に結合する、単離抗体であって、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記単離抗体。
- カナダの国際寄託機関に寄託されているアクセッション番号280207-01、220207-01、および220207-02から選択されるハイブリドーマ。
- 請求項47記載のハイブリドーマを培養する段階を含む、請求項46記載の抗体を産生するための方法。
- SEQ ID NO:1、4、または7からなる単離ペプチドまたはその類似体と、担体とを含む、組成物であって、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記組成物。
- SEQ ID NO:8からなる単離ペプチドまたはその類似体と、担体とを含む、組成物であって、類似体が、1つまたは複数の酸化または硝酸化アミノ酸を含む、前記組成物。
- 請求項49または50記載の組成物を投与することによって、非ヒト被験体における免疫応答を誘発する方法。
- (a)抗体が疾患特異的エピトープに結合して抗体-抗原複合体を形成する、請求項45または46記載の抗体のいずれか一つに、被験体の試験試料を接触させる段階; (b)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を測定する段階;および (c)試験試料中の抗体-抗原複合体の量を対照と比較する段階 を含む、被験体におけるヒトスーパーオキシドジスムターゼ(ヒトSOD1)のミスフォールド型を検出する方法であって、 対照と比較して試験試料中の抗体-抗原複合体の量に差があれば、ヒトスーパーオキシドジスムターゼ(ヒトSOD1)のミスフォールド型によって媒介される医学的状態、疾患、または障害を有する被験体であることが示される、方法。
- 疾患特異的エピトープが、ヒトSOD1の非天然型において選択的に提示されるかまたは近づ
くことができ、かつSEQ ID NO:1、4〜8のいずれか一つのアミノ酸配列を有する、請求項52記載の方法。 - 段階(a)の前にヒトSOD1凝集体を脱凝集する段階をさらに含む、請求項52または53記載の方法。
- 医学的状態、疾患、または障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、レヴィー小体病、またはALSを含む、請求項52〜54のいずれか一項記載の方法。
- アルツハイマー病に関する従来の診断技術を用いて被験体を評価する段階をさらに含む、請求項55記載の方法。
- ヒトスーパーオキシドジスムターゼ(ヒトSOD1)のミスフォールド型によって媒介される医学的状態、疾患、または障害を有する被験体を診断するためのキットであって、請求項45または46記載の抗体のいずれか一つと、それを使用するための説明書とを含む、キット。
- ヒトSOD1のミスフォールド型が、ヒトSOD1の非天然型において選択的に提示されるかまたは近づくことができるエピトープを含み、エピトープが、SEQ ID NO:1、4〜8のいずれか一つのアミノ酸配列を有する、請求項57記載のキット。
- 検出可能なシグナルを産生する標識(2)に直接または間接的に付着する請求項45または46記載の抗体(1)を含む診断物質であって、標識が任意で、放射性同位体、蛍光化合物、化学発光化合物、酵素、造影剤、または金属イオンを含む、診断物質。
- 免疫原がペプチド免疫原を含む、請求項1〜6、12〜15、または18〜21のいずれか一項記載の医薬。
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Cited By (1)
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US20080097153A1 (en) * | 2006-08-24 | 2008-04-24 | Ignagni Anthony R | Method and apparatus for grasping an abdominal wall |
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WO2008104386A2 (en) | 2007-02-27 | 2008-09-04 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Method for the treatment of amyloidoses |
US9820671B2 (en) | 2007-05-17 | 2017-11-21 | Synapse Biomedical, Inc. | Devices and methods for assessing motor point electromyogram as a biomarker |
US8428726B2 (en) | 2007-10-30 | 2013-04-23 | Synapse Biomedical, Inc. | Device and method of neuromodulation to effect a functionally restorative adaption of the neuromuscular system |
US8478412B2 (en) | 2007-10-30 | 2013-07-02 | Synapse Biomedical, Inc. | Method of improving sleep disordered breathing |
US9217155B2 (en) | 2008-05-28 | 2015-12-22 | University Of Massachusetts | Isolation of novel AAV'S and uses thereof |
WO2010040209A1 (en) * | 2008-10-06 | 2010-04-15 | The University Of British Columbia | Methods and systems for predicting misfolded protein epitopes |
WO2010138263A2 (en) | 2009-05-28 | 2010-12-02 | University Of Massachusetts | Novel aav 's and uses thereof |
JP2011121949A (ja) * | 2009-12-14 | 2011-06-23 | Kyoto Univ | 筋萎縮性側索硬化症の予防および治療用医薬組成物 |
CA2796339C (en) | 2010-04-15 | 2020-03-31 | Abbott Laboratories | Amyloid-beta binding proteins |
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US9109037B2 (en) | 2010-10-26 | 2015-08-18 | University Of Massachusetts | Anti-SOD1 antibodies and uses thereof |
US20120328605A1 (en) * | 2010-10-27 | 2012-12-27 | Daniel Larocque | Compositions and uses |
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WO2012171030A2 (en) | 2011-06-10 | 2012-12-13 | Biovest International, Inc. | Method and apparatus for antibody production and purification |
CA2920957A1 (en) | 2012-08-28 | 2014-03-06 | Biovest International, Inc. | Biomanufacturing suite and methods for large-scale production of cells, viruses, and biomolecules |
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GB2514407A (en) * | 2013-05-23 | 2014-11-26 | Stefan L Marklund | Aggregates of superoxide dismutase |
WO2014191493A1 (en) * | 2013-05-28 | 2014-12-04 | Vib Vzw | Single domain antibodies against sod1 and their use in medicine |
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US9879080B2 (en) | 2015-01-28 | 2018-01-30 | Prothena Biosciences Limited | Anti-transthyretin antibodies |
EP3256170B1 (en) | 2015-02-13 | 2020-09-23 | University of Massachusetts | Compositions and methods for transient delivery of nucleases |
WO2016172008A1 (en) | 2015-04-24 | 2016-10-27 | University Of Massachusetts | Modified aav constructions and uses thereof |
WO2017115367A1 (en) * | 2015-12-28 | 2017-07-06 | The National Institute for Biotechnology in the Negev Ltd. | Composition and method for treating amyotrophic lateral sclerosis |
WO2017136536A1 (en) | 2016-02-02 | 2017-08-10 | University Of Massachusetts | Method to enhance the efficiency of systemic aav gene delivery to the central nervous system |
EP4094780A3 (en) | 2016-02-12 | 2023-02-08 | University of Massachusetts | Anti-angiogenic mirna therapeutics for inhibiting corneal neovascularization |
WO2017214471A1 (en) * | 2016-06-10 | 2017-12-14 | Saunders, Ann M. | Methods for detecting structural variants in neurodegenerative disease |
US10457940B2 (en) | 2016-09-22 | 2019-10-29 | University Of Massachusetts | AAV treatment of Huntington's disease |
AU2017341849B2 (en) | 2016-10-13 | 2024-03-21 | University Of Massachusetts | AAV capsid designs |
JP2020518258A (ja) | 2017-05-05 | 2020-06-25 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッドVoyager Therapeutics,Inc. | 筋萎縮性側索硬化症(als)治療組成物および方法 |
AU2018264996A1 (en) | 2017-05-09 | 2019-12-05 | University Of Massachusetts | Methods of treating Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) |
EP3684937A4 (en) | 2017-09-22 | 2021-06-02 | University of Massachusetts | DUAL EXPRESSION VECTORS OF SOD1 AND THEIR USES |
SG11202002489YA (en) | 2017-10-06 | 2020-04-29 | Prothena Biosciences Ltd | Anti-transthyretin antibodies |
AU2018352236A1 (en) | 2017-10-16 | 2020-04-23 | The Curators Of The University Of Missouri | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
WO2019079242A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
AU2018355325A1 (en) | 2017-10-25 | 2020-05-07 | Ac Immune S.A. | Compositions of phosphorylated tau peptides and uses thereof |
JOP20200132A1 (ar) | 2017-11-29 | 2022-10-30 | Prothena Biosciences Ltd [Ie/Ie] | صيغة مجففة بالتبريد من جسم مضاد أحادي النسيلة ضد ترانس ثيرتين |
JP2021529513A (ja) | 2018-07-02 | 2021-11-04 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッドVoyager Therapeutics,Inc. | 筋萎縮性側索硬化症および脊髄に関連する障害の治療 |
US11471683B2 (en) | 2019-01-29 | 2022-10-18 | Synapse Biomedical, Inc. | Systems and methods for treating sleep apnea using neuromodulation |
JP7376203B2 (ja) | 2021-08-18 | 2023-11-08 | 株式会社 バイオラジカル研究所 | 身体的フレイルの試験方法、身体的フレイルの試験試薬、身体的フレイルの治療薬候補物質のスクリーニング方法、精神的フレイルの試験方法、精神的フレイルの試験試薬、および精神的フレイルの治療薬候補物質のスクリーニング方法 |
WO2023033050A1 (ja) * | 2021-09-02 | 2023-03-09 | 国立大学法人京都大学 | ボルナウイルスベクターを利用した医薬組成物 |
Family Cites Families (92)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4910133A (en) * | 1985-08-29 | 1990-03-20 | Ube Industries, Limited | Diagnostic test drug comprising monoclonal antibody to human copper.zinc-superoxide dismutase and diagnostic test method using the same |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
US4902505A (en) | 1986-07-30 | 1990-02-20 | Alkermes | Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier |
US4940659A (en) * | 1987-02-20 | 1990-07-10 | Monoclonetics International, Inc. | Screening extra-cellular body fluids for superoxide dismutase (SOD-1) for determining fetal trisomy 21 down syndrome |
CA1331443C (en) | 1987-05-29 | 1994-08-16 | Charlotte A. Kensil | Saponin adjuvant |
US4806627A (en) * | 1987-05-29 | 1989-02-21 | Research Foundation Of Mental Hygiene Inc. | Hybrid cell lines producing monoclonal antibodies dircted against scrapie-associated fibril proteins |
US5672344A (en) | 1987-12-30 | 1997-09-30 | The Regents Of The University Of Michigan | Viral-mediated gene transfer system |
AU2894889A (en) | 1988-02-01 | 1989-08-03 | Monoclonetics International Incorporated | Genetic markers for down's syndrome, fetal abnormalities and twins |
GB8911525D0 (en) | 1989-05-19 | 1989-07-05 | Allied Colloids Ltd | Polymeric composition |
US5399346A (en) | 1989-06-14 | 1995-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Gene therapy |
US5240846A (en) | 1989-08-22 | 1993-08-31 | The Regents Of The University Of Michigan | Gene therapy vector for cystic fibrosis |
US5436146A (en) | 1989-09-07 | 1995-07-25 | The Trustees Of Princeton University | Helper-free stocks of recombinant adeno-associated virus vectors |
DE69120146T2 (de) | 1990-01-12 | 1996-12-12 | Cell Genesys Inc | Erzeugung xenogener antikörper |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5670488A (en) | 1992-12-03 | 1997-09-23 | Genzyme Corporation | Adenovirus vector for gene therapy |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5529774A (en) | 1991-08-13 | 1996-06-25 | The Regents Of The University Of California | In vivo transfer of the HSV-TK gene implanted retroviral producer cells |
US5283185A (en) | 1991-08-28 | 1994-02-01 | University Of Tennessee Research Corporation | Method for delivering nucleic acids into cells |
NZ244306A (en) | 1991-09-30 | 1995-07-26 | Boehringer Ingelheim Int | Composition for introducing nucleic acid complexes into eucaryotic cells, complex containing nucleic acid and endosomolytic agent, peptide with endosomolytic domain and nucleic acid binding domain and preparation |
US5911983A (en) | 1992-06-26 | 1999-06-15 | University Of Pittsburgh | Gene therapy for Gaucher disease using retroviral vectors |
US5843641A (en) * | 1993-02-26 | 1998-12-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods for the daignosis, of familial amyotrophic lateral sclerosis |
DE69434447T2 (de) | 1993-06-07 | 2006-05-18 | Vical, Inc., San Diego | Für die gentherapie verwendbare plasmide |
US5645829A (en) | 1993-06-18 | 1997-07-08 | Beth Israel Hospital Association | Mesothelial cell gene therapy |
US5562909A (en) | 1993-07-12 | 1996-10-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Phosphazene polyelectrolytes as immunoadjuvants |
GB9326174D0 (en) | 1993-12-22 | 1994-02-23 | Biocine Sclavo | Mucosal adjuvant |
US5656465A (en) | 1994-05-04 | 1997-08-12 | Therion Biologics Corporation | Methods of in vivo gene delivery |
US5714353A (en) | 1994-05-24 | 1998-02-03 | Research Corporation Technologies, Inc. | Safe vectors for gene therapy |
US20030072774A1 (en) | 1994-06-10 | 2003-04-17 | Diane M. Gajewczyk | Proteinaceous adjuvants |
US5639642A (en) | 1994-06-16 | 1997-06-17 | Novo Nordisk A/S | Synthetic leader peptide sequences |
GB9506466D0 (en) | 1994-08-26 | 1995-05-17 | Prolifix Ltd | Cell cycle regulated repressor and dna element |
DE19524720A1 (de) | 1995-07-12 | 1997-01-16 | Hoechst Ag | Zellspezifische Gentherapie mit Hilfe eines neuen Promotors für den "Tissue Inhibitor of Metalloproteinasn-3" |
US6019982A (en) | 1994-08-26 | 2000-02-01 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Mutant enterotoxin effective as a non-toxic oral adjuvant |
JP4216350B2 (ja) | 1994-09-19 | 2009-01-28 | 大日本住友製薬株式会社 | 動物細胞感染用の組換えdnaウイルスベクター |
FR2726764B1 (fr) | 1994-11-14 | 1997-01-31 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Adjuvant pour composition vaccinale |
US5789147A (en) | 1994-12-05 | 1998-08-04 | New York Blood Center, Inc. | Method for concentrating white cells from whole blood by adding a red cell sedimentation reagent to whole anticoagulated blood |
US5869040A (en) | 1995-06-07 | 1999-02-09 | Biogen, Inc | Gene therapy methods and compositions |
US6743771B2 (en) | 1995-12-29 | 2004-06-01 | Novactyl, Inc. | Methods and compositions for controlling protein assembly or aggregation |
US5834457A (en) * | 1996-01-26 | 1998-11-10 | The Regents Of The University Of California | Method of modulating radical formation by mutant cuznsod enzymes |
US6270954B1 (en) * | 1996-04-10 | 2001-08-07 | The Regents Of The University Of California | Correction of genetic defects using chemical chaperones |
US5735814A (en) | 1996-04-30 | 1998-04-07 | Medtronic, Inc. | Techniques of treating neurodegenerative disorders by brain infusion |
US5928914A (en) | 1996-06-14 | 1999-07-27 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University | Methods and compositions for transforming cells |
EP0861900A1 (en) * | 1997-02-21 | 1998-09-02 | Erziehungsdirektion Of The Canton Zurich | Immunological detection of prions |
US6436708B1 (en) | 1997-04-17 | 2002-08-20 | Paola Leone | Delivery system for gene therapy to the brain |
DE19742706B4 (de) | 1997-09-26 | 2013-07-25 | Pieris Proteolab Ag | Lipocalinmuteine |
US7157098B1 (en) | 1998-01-06 | 2007-01-02 | Roman Perez-Soler | Gene therapy of tumors using non-viral delivery system |
US6214565B1 (en) * | 1998-10-09 | 2001-04-10 | The Regents Of The University Of California | Assay for disease related conformation of a protein and isolating same |
DE69929600T2 (de) | 1998-05-27 | 2006-09-07 | Avigen Inc., Alameda | Konvektion-erhöhte verabreichung aadc-kodierende aav vektoren |
GB9818756D0 (en) | 1998-08-27 | 1998-10-21 | Microbiological Research Agenc | Superoxide dismutase as a vaccine antigen |
EP1121429A2 (en) | 1998-10-16 | 2001-08-08 | Introgene B.V. | Gene therapy of alzheimer's disease by delivery of an encoded apolipoprotein e |
US7012061B1 (en) | 1998-10-19 | 2006-03-14 | New York University | Method for increasing the permeability of the blood brain barrier |
US7041807B1 (en) * | 1999-06-23 | 2006-05-09 | Caprion Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies to a YYX epitope of a mammalian prion protein |
JP2003521477A (ja) | 1999-06-23 | 2003-07-15 | カプリオン ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド | プリオン蛋白質ペプチドおよびその使用 |
WO2001006989A2 (en) | 1999-07-27 | 2001-02-01 | Abgenix, Inc. | Methods and compositions for inhibiting polypeptide accumulation associated with neurological disorders |
US6936594B1 (en) | 1999-09-21 | 2005-08-30 | Ryuichi Morishita | Gene therapy for cerebrovascular disorders |
CN100463922C (zh) | 2000-06-15 | 2009-02-25 | 诺华疫苗和诊断公司 | 抗hcv抗体的免疫测定 |
DE60234163D1 (de) | 2001-01-05 | 2009-12-10 | Viromed Ltd | Zusammensetzungen zur gentherapie rheumatoider arthritis, die ein gen, das für ein anti-angiogenes protein oder teile davon kodiert, enthalten |
WO2003000853A2 (en) * | 2001-06-20 | 2003-01-03 | Caprion Pharmaceuticals Inc. | Protein aggregation assays and uses thereof |
DE10152677A1 (de) | 2001-10-19 | 2003-05-08 | Aventis Behring Gmbh | Antikörper zum spezifischen Nachweis von pathogenen Prionen humanen Ursprungs und damit durchgeführten Nachweisverfahren |
AU2002349583B2 (en) | 2001-11-28 | 2007-11-22 | Anges Mg, Inc. | Genetic remedies for neurodegenerative diseases |
US7141044B2 (en) | 2001-12-11 | 2006-11-28 | Ekos Corporation | Alternate site gene therapy |
AU2002950217A0 (en) | 2002-07-16 | 2002-09-12 | Prana Biotechnology Limited | 8- Hydroxy Quinoline Derivatives |
ATE506072T1 (de) | 2002-09-12 | 2011-05-15 | Univ California | Immunogene und entsprechende antikörper, die spezifisch sind für häufige hochmolekulare aggregations-zwischenprodukte von amyloiden aus proteinen unterschiedlicher sequenz |
AU2003266801B2 (en) | 2002-12-19 | 2010-02-25 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc | Detection and diagnosis of transmissable spongiform encephalopathies |
US20060248945A1 (en) | 2003-04-15 | 2006-11-09 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Method and apparatus for improved determination of spatial non-agglomerated magnetic particle distribution in an area of examination |
CA2536305C (en) | 2003-08-20 | 2015-10-27 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Sod-1 epitopes and antibodies |
CA2437999C (en) | 2003-08-20 | 2013-10-08 | Neil Cashman | Epitope protection assay |
CA2437675A1 (en) | 2003-08-20 | 2005-02-20 | Neil Cashman | Methods of detecting prion protein |
US20070003977A1 (en) | 2003-08-20 | 2007-01-04 | Amorfix Life Sciences Ltd | Epitope protection assay and method for detecting protein conformations |
US7329742B2 (en) | 2003-09-04 | 2008-02-12 | The Regents Of The University Of California | Aptamers and methods for their in vitro selection and uses thereof |
WO2005077040A2 (en) | 2004-02-11 | 2005-08-25 | Rensselaer Polytechnic Institute | Compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis (als) |
US20060073119A1 (en) | 2004-09-01 | 2006-04-06 | Avigen, Inc. | Methods for treating neurodegenerative disorders |
US20060122116A1 (en) | 2004-11-03 | 2006-06-08 | The Johns Hopkins University | Treatment for disorders of the peripheral nervous system |
US20060129126A1 (en) | 2004-11-19 | 2006-06-15 | Kaplitt Michael G | Infusion device and method for infusing material into the brain of a patient |
US20060211079A1 (en) * | 2005-02-18 | 2006-09-21 | Hazen Stanley L | Systemic markers for asthma and analogous diseases |
US20060194821A1 (en) | 2005-02-18 | 2006-08-31 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Compounds inhibiting the aggregation of superoxide dismutase-1 |
ATE526345T1 (de) * | 2005-08-31 | 2011-10-15 | Univ Laval | Antikörper und ihre verwendung bei der behandlung,vorbeugung und diagnose einer mit sod1-anomalien assoziierten krankheit |
US7794692B2 (en) | 2005-12-02 | 2010-09-14 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Methods and compositions for detecting amyotrophic lateral sclerosis |
US7887803B2 (en) | 2005-12-02 | 2011-02-15 | Amorfix Life Sciences | Methods and compositions to treat misfolded-SOD1 mediated diseases |
WO2007067900A2 (en) | 2005-12-05 | 2007-06-14 | Prosetta Corporation | Biomarkers for amyotrophic lateral sclerosis |
EP2514824A3 (en) | 2006-03-03 | 2013-01-23 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Methods and compositions to treat and detect misfolded-SOD1 mediated diseases |
CN201029168Y (zh) | 2007-03-09 | 2008-02-27 | 富士康(昆山)电脑接插件有限公司 | 电连接器 |
JP4701420B2 (ja) | 2007-07-31 | 2011-06-15 | タイヨーエレック株式会社 | 弾球遊技機 |
WO2010003227A1 (en) | 2008-07-08 | 2010-01-14 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Detection of protein aggregates |
FR2933686B1 (fr) | 2008-07-09 | 2010-11-19 | Saint Gobain Emballage | Composition de renforcement du verre creux et de protection de celui-ci contre la rayure, procedes de traitement correspondants et verre creux traite obtenu |
WO2010040209A1 (en) | 2008-10-06 | 2010-04-15 | The University Of British Columbia | Methods and systems for predicting misfolded protein epitopes |
JP2010153006A (ja) | 2008-12-26 | 2010-07-08 | Konica Minolta Opto Inc | 対物光学素子及び光ピックアップ装置 |
JP2012519190A (ja) | 2009-03-02 | 2012-08-23 | ザ ユニヴァーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア | 誤って折り畳まれたプリオンタンパク質に特異的な抗体およびエピトープ |
JP6268164B2 (ja) | 2012-04-09 | 2018-01-24 | ケース ウエスタン リザーブ ユニバーシティ | Larファミリーホスファターゼの活性を阻害する組成物及び方法 |
WO2013185215A1 (en) | 2012-06-12 | 2013-12-19 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Antibodies and conjugates that target misfolded prion protein |
US9902442B2 (en) | 2015-04-06 | 2018-02-27 | John P. Moyna | Track link |
-
2007
- 2007-03-05 EP EP12161568A patent/EP2514824A3/en not_active Withdrawn
- 2007-03-05 AU AU2007219615A patent/AU2007219615B2/en not_active Ceased
- 2007-03-05 WO PCT/CA2007/000346 patent/WO2007098607A1/en active Application Filing
- 2007-03-05 US US11/682,217 patent/US7977314B2/en active Active
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- 2007-03-05 CA CA2642848A patent/CA2642848C/en active Active
- 2007-03-05 DK DK12161575.1T patent/DK2495327T3/da active
- 2007-03-05 EP EP12161571A patent/EP2502999A3/en not_active Withdrawn
- 2007-03-05 DK DK12161564.5T patent/DK2514823T3/en active
- 2007-03-05 JP JP2008556626A patent/JP5823663B2/ja active Active
- 2007-03-05 EP EP12161564.5A patent/EP2514823B1/en not_active Not-in-force
- 2007-03-05 EP EP07710682.1A patent/EP1989308B1/en not_active Not-in-force
-
2011
- 2011-06-08 US US13/155,939 patent/US8778885B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-06-10 US US14/300,858 patent/US9637552B2/en active Active
-
2017
- 2017-03-31 US US15/476,440 patent/US20180079825A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9637552B2 (en) | 2005-12-02 | 2017-05-02 | Promis Neurosciences Inc. | Methods and compositions to treat and detect misfolded-SOD1 mediated diseases |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2007219615B2 (en) | 2013-11-28 |
EP2502999A3 (en) | 2013-01-23 |
CA2642848A1 (en) | 2007-09-07 |
CA2642848C (en) | 2016-07-12 |
EP1989308A4 (en) | 2009-12-30 |
EP2495327B1 (en) | 2016-09-28 |
US7977314B2 (en) | 2011-07-12 |
JP2009529498A (ja) | 2009-08-20 |
EP2495327A2 (en) | 2012-09-05 |
EP2514824A3 (en) | 2013-01-23 |
EP2514823A2 (en) | 2012-10-24 |
EP2514823A3 (en) | 2013-01-23 |
AU2007219615A1 (en) | 2007-09-07 |
WO2007098607A1 (en) | 2007-09-07 |
EP2495327A3 (en) | 2012-10-17 |
EP2502999A2 (en) | 2012-09-26 |
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