JP2011121949A - 筋萎縮性側索硬化症の予防および治療用医薬組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】HMG-CoA還元酵素阻害薬を含有する筋萎縮性側索硬化症の予防および治療剤ならびに筋萎縮性側索硬化症患者由来の人工多能性幹細胞を利用した筋萎縮性側索硬化症の予防および治療薬のスクリーニング方法。
【選択図】なし
Description
[1]HMG-CoA還元酵素阻害薬を含有する筋萎縮性側索硬化症の予防および治療剤。
[2]前記のHMG-CoA還元酵素阻害薬が、アトルバスタチンである、[1]に記載の剤。
[3]前記の筋萎縮性側索硬化症が、家族性筋萎縮性側索硬化症である、[1]または[2]に記載の剤。
[4]前記の家族性筋萎縮性側索硬化症が、SOD1遺伝子変異を伴うものである、[3]に記載の剤。
[5]前記のSOD1遺伝子変異が該遺伝子産物のSOD活性を消失させないものである、[4]に記載の剤。
[6]SOD1の106番目のロイシンに変異を有するiPS細胞。
[7]前記のiPS細胞が、Oct3/4、Sox2、Klf4およびc-Mycを導入することにより得られたiPS細胞である、[6]に記載のiPS細胞。
[8]SOD1の106番目のロイシンに変異を有するiPS細胞から分化誘導された神経系細胞。
[9]前記の分化誘導が、ニューロスフェアを形成する工程を含む方法である、[8]に記載の神経系細胞。
[10]SOD1の106番目のロイシンに変異を有するiPS細胞から分化誘導されたアストロサイト。
[11]以下の工程を含む方法で分化誘導された、[10]に記載のアストロサイト;
(1)iPS細胞からニューロスフェアを形成する工程、および
(2)前記ニューロスフェアをLIFとBMPを含有する培地で培養する工程。
[12]筋萎縮性側索硬化症の予防および治療薬をスクリーニングする方法であって、以下の工程を含む方法;
(1)iPS細胞から分化誘導された神経系細胞と試験化合物を接触させる工程、
(2)該神経系細胞のSOD1の発現量を測定する工程、および
(3)試験化合物と接触させなかった対照と比較して、該SOD1の発現量を減少させる試験化合物を選択する工程。
[13]前記のiPS細胞が、筋萎縮性側索硬化症の患者由来のiPS細胞である、[12]に記載のスクリーニング方法。
[14]前記のiPS細胞が、SOD1の106番目のロイシンに変異を有するiPS細胞である、[13]に記載のスクリーニング方法。
[15]前記の神経系細胞が、アストロサイトである、[12]に記載のスクリーニング方法。
本発明は、SOD1に変異を有するALS患者由来のiPS細胞を分化誘導して得られたアストロサイトにおけるSOD1の発現を低下させる化合物をスクリーニングする方法ならびにそのスクリーニング方法により同定されたHMG-CoA還元酵素阻害薬を含むALSの予防および治療のための医薬組成物を提供する。
人工多能性幹 (iPS) 細胞は、ある特定の核初期化物質を、核酸又はタンパク質の形態で体細胞に導入することによって作製することができる、ES細胞とほぼ同等の特性、例えば分化多能性と自己複製による増殖能、を有する体細胞由来の人工の幹細胞である(K. Takahashi and S. Yamanaka (2006) Cell, 126: 663-676; K. Takahashi et al. (2007) Cell, 131: 861-872; J. Yu et al. (2007) Science, 318: 1917-1920; M. Nakagawa et al. (2008) Nat. Biotechnol., 26: 101-106; WO 2007/069666)。核初期化物質は、ES細胞に特異的に発現している遺伝子またはES細胞の未分化維持に重要な役割を果たす遺伝子もしくはその遺伝子産物であれば良く、特に限定されないが、例えばOct3/4, Klf4, Klf1, Klf2, Klf5, Sox2, Sox1, Sox3, Sox15, Sox17, Sox18, c-Myc, L-Myc, N-Myc, TERT, SV40 Large T antigen, HPV16 E6, HPV16 E7, Bmil, Lin28, Lin28b, Nanog, EsrrbまたはEsrrgが例示される。これらの初期化物質は、iPS細胞樹立の際には、組み合わされて使用されてもよい。例えば、上記初期化物質を、少なくとも1つ、2つもしくは3つ含む組み合わせであり、好ましくは4つを含む組み合わせである。
遺伝子名 マウス ヒト
L-Myc NM_008506 NM_001033081
Lin28 NM_145833 NM_024674
Lin28b NM_001031772 NM_001004317
Esrrb NM_011934 NM_004452
Esrrg NM_011935 NM_001438
本発明において、神経幹細胞とは、神経細胞、アストロサイト(astrocyte)およびオリゴデンドロサイト(oligodendrocyte)に分化しうる能力を有し、かつ自己複製能力を有する細胞を言う。
ここで、コーティング剤としては、例えば、コラーゲン、ゼラチン、ポリ−L−リジン、ポリ−D−リジン、フィブロネクチン、ラミニンおよびこれらの組み合わせが挙げられる。好ましくは、ポリ−L−リジンとラミニンの組み合わせである。
前述の方法で誘導された神経幹細胞を、任意の方法で分離し、コーティング処理された培養皿にて、任意の培地中で培養することで、アストロサイトの誘導を行うことができる。
培養開始時の神経幹細胞の濃度は、効率的にアストロサイトを形成させるように適宜設定できる。培養開始時の神経幹細胞の濃度は、特に限定されないが、例えば、約1×103〜約1×106細胞/ml、好ましくは約1×104〜約5×105細胞/mlである。
前述の方法で誘導された神経幹細胞を、任意の方法で分離し、コーティング処理された培養皿にて、任意の培地中で培養することで、ニューロンの誘導を行うことができる。
前述の方法で誘導された神経幹細胞を、任意の方法で分離し、コーティング処理された培養皿にて、任意の培地中で培養することで、オリゴデンドロサイトの誘導を行うことができる。
本発明は、前述のように得られたiPS細胞由来の神経系細胞と試験物質とを接触させ、神経系細胞中のSOD1の発現抑制作用を指標として、筋萎縮性側索硬化症の予防および治療薬の候補物質をスクリーニングする方法を提供する。ここで、神経系細胞とは、ニューロン、アストロサイトおよびオリゴデンドロサイトであり、好ましくはアストロサイトである。また、本発明において、好ましい神経系細胞は、筋萎縮性側索硬化症患者由来のiPS細胞から誘導された細胞であり、より好ましくは、SOD1に変異を有する細胞である。ここで、SOD1の変異は、筋萎縮性側索硬化症の原因となる変異であり、例えば、106番目のロイシンの変異体であり、詳細には、配列番号:1または、配列番号:2に記載のSOD1変異体である。
本発明は、HMG-CoA還元酵素阻害薬を有効成分とする、筋萎縮性側索硬化症の予防および治療剤(以下、ALS予防・治療剤ともいう)を提供する。
生検した4 mmの皮膚を3週間の培養後、ALS患者由来の線維芽細胞として用いた。
KLF4、Sox2、Oct3/4およびc-Mycに対するヒトcDNAを、Takahashi K, et al, Cell 131(5), 861, 2007に記載の方法に従って、レトロウィルスを用いて前記線維芽細胞へ導入した。導入後6日目に、線維芽細胞をSNLフィーダー細胞上に移し、翌日に4 ng/mlのbFGF(Wako)を添加霊長類ES細胞用培養液へ培地を交換した。培地は、1日おきに交換し、遺伝子導入後30日目に、コロニーをピックアップした。ここで樹立したiPS細胞のSOD1の配列を解析したところ、106番目(最初のメチオニンが除かれたタンパク質としてアミノ酸を計数)のロイシンがバリンへと変わる変異が入っていることが確認された。
ニューロスフェアの形成は、Wada T, et al, PLoS ONE 4(8), e6722, 2009に記載の方法に少し変更を加えて行った。詳細には、iPS細胞を小さい塊に分け、1:1でDMEM/F12とNeurobasal medium A を混ぜた培養液へ1% N2、2% B27および200 μMグルタミンを添加したN2B27培地(Gibco社)を用いて、poly-L-lysine/laminine (PLL/LM)(Sigma-Aldrich社)をコーティングしたディッシュにて培養した。さらに、この培地へ100 ng/ml のNoggin を加えた。3日おきに100 ng/mlのNogginを含む培地に交換し、培養10日後に、PLL/LMコーティングディッシュに継代し、1日おきに100 ng/mlのNogginを含む培地へ交換した。継代7日後に、1,000,000 cells/mlの濃度で、2-hydroxyethylmetacrylate (HEMA) コーティングディッシュに蒔き、ニューロスフェアを形成させた。この時、20 ng/ml EGF(R&D systems)、20 ng/ml bFGFおよび50 ng/ml heparin(Sigma-Aldrich社)を添加したN2B27培地を用いた。継代は、30日おきに、ピペッティングを伴って行い、培地は7日おきに1 ml加えた。これらの培養は、すべて37℃、5% CO2、加湿雰囲気下でインキュベートすることで行った。
4次ニューロスフェアをaccutaseを用いて分離し、1% FBS(ジャパン・バイオシーラム)、10 ng/ml bone morphogenetic protein-4 (BMP-4)(R&D systems)および10 ng/ml leukemia inhibitory factor (LIF)(alomone labs)を含有するN2B27培地中に50,000 cells/mlの濃度でゼラチンコーティングしたディッシュ上へ蒔いた。培地は、2日おきに交換し、1週間後に10% FBSおよび1% penicillin/streptomycinを添加したDMEMに交換した。この方法により、GFAP陽性の細胞が得られ、アストロサイトへの分化誘導が確認された。
iPS細胞由来のアストロサイトは、250,000 cells/wellの濃度で6穴プレートに蒔いた。それぞれ、基剤(0.5% dimethylsulfoxide (DMSO))、終濃度5 μg/mlのcycloheximide、各終濃度(5 nM、50 nM、500 nMおよび5 μM)のAtorvastatin Calcium Salt(Toronto Research Chemicals Inc.)を加えて48時間インキュベートした。その後、細胞を回収し、1% triton X-100、10% glycerol、5 mM EDTA、120 mM NaClおよびprotease inhibitor cocktail (Complete; Roche)含有した20 mM Hepes pH 7.4を用いて30分間氷上にて溶解させた。細胞溶解液は、15,000 rpm、4℃で30分間遠心させ、上清を回収した。この細胞溶解上清を用いてウェスタンブロッティングを行った。詳細には、20 μg分のタンパク質をSDS-PAGE法(4-12% polyacrylamide gels)により分離し、PVDF膜へトランスファーし、抗SOD1抗体(1:2000希釈)(stressgen社)または抗β-actin抗体(1:5000希釈)(Sigma-Aldrich社)とインキュベートした。インキュベート後、HRP-linked抗rabbit IgG抗体(1:5000; GE healthcare)とHRP-linked抗mouse IgG抗体(1:5000; GE healthcare)を用いて、ECL(Enhanced ChemiLuminescence)により発現量を検出した。この結果、Atorvastatin Calcium Saltを加えた全ての濃度において、SOD1の発現の減少が確認された(図1)。一方、Nakagawa M, et al. Nat. Biotechnol. 26: 101-6, 2008に記載のヒトiPS細胞253G4および上記SOD1変異iPS細胞へ基剤であるDMSOのみを加えた場合は、SOD1の発現量に変化が見られなかった。以上より、SOD1に変異を有するアストロサイトによる運動神経細胞の傷害に関する影響についての数多くの知見(Yamanaka K, et al, Nat. Neurosci. 11(3): 251, 2008およびNagai et al. Nat. Neurosci. 10: 615, 2007)を考慮すると、AtorvastatinはALSの予防もしくは治療に有用であることが示唆された。
Claims (15)
- HMG-CoA還元酵素阻害薬を含有する筋萎縮性側索硬化症の予防および治療剤。
- 前記のHMG-CoA還元酵素阻害薬が、アトルバスタチンである、請求項1に記載の剤。
- 前記の筋萎縮性側索硬化症が、家族性筋萎縮性側索硬化症である、請求項1または請求項2に記載の剤。
- 前記の家族性筋萎縮性側索硬化症が、SOD1遺伝子変異を伴うものである、請求項3に記載の剤。
- 前記のSOD1遺伝子変異が該遺伝子産物のSOD活性を消失させないものである、請求項4に記載の剤。
- SOD1の106番目のロイシンに変異を有するiPS細胞。
- 前記のiPS細胞が、Oct3/4、Sox2、Klf4およびc-Mycを導入することにより得られたiPS細胞である、請求項6に記載のiPS細胞。
- SOD1の106番目のロイシンに変異を有するiPS細胞から分化誘導された神経系細胞。
- 前記の分化誘導が、ニューロスフェアを形成する工程を含む方法である、請求項8に記載の神経系細胞。
- SOD1の106番目のロイシンに変異を有するiPS細胞から分化誘導されたアストロサイト。
- 以下の工程を含む方法で分化誘導された、請求項10に記載のアストロサイト;
(1)iPS細胞からニューロスフェアを形成する工程、および
(2)前記ニューロスフェアをLIFとBMPを含有する培地で培養する工程。 - 筋萎縮性側索硬化症の予防および治療薬をスクリーニングする方法であって、以下の工程を含む方法;
(1)iPS細胞から分化誘導された神経系細胞と試験化合物を接触させる工程、
(2)該神経系細胞のSOD1の発現量を測定する工程、および
(3)試験化合物と接触させなかった対照と比較して、該SOD1の発現量を減少させる試験化合物を選択する工程。 - 前記のiPS細胞が、筋萎縮性側索硬化症の患者由来のiPS細胞である、請求項12に記載のスクリーニング方法。
- 前記のiPS細胞が、SOD1の106番目のロイシンに変異を有するiPS細胞である、請求項13に記載のスクリーニング方法。
- 前記の神経系細胞が、アストロサイトである、請求項12に記載のスクリーニング方法。
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Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012067265A1 (en) * | 2010-11-18 | 2012-05-24 | Kyoto University | Method for screening drugs for suppressing inflammasome activity |
WO2014020933A1 (ja) * | 2012-07-31 | 2014-02-06 | アルバイオ株式会社 | 新規蛍光物質 |
JPWO2013140927A1 (ja) * | 2012-03-21 | 2015-08-03 | 国立大学法人京都大学 | アルツハイマー病の治療薬および/または予防薬のスクリーニング方法 |
JP2019136042A (ja) * | 2013-12-02 | 2019-08-22 | 国立大学法人京都大学 | Fgfr3病の予防および治療剤ならびにそのスクリーニング方法 |
JP2021525106A (ja) * | 2018-06-01 | 2021-09-24 | ヘルプ・ステム・セル・イノベイションズ・カンパニー・リミテッドHelp Stem Cell Innovations Co., Ltd. | 分化用培地及びオリゴデンドロサイト前駆細胞の製造方法 |
WO2023035867A1 (zh) * | 2021-09-08 | 2023-03-16 | 宁夏杞肽科技有限公司 | 枸杞糖肽在制备预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化的药物中的应用 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014104409A1 (en) * | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Kyoto University | Method for inducing astrocytes |
US10519421B2 (en) | 2013-03-21 | 2019-12-31 | Kyoto University | Induction of motor neurons from pluripotent stem cells |
EP3789027A1 (en) | 2015-01-13 | 2021-03-10 | Kyoto University | Bosutinib, sunitinib, tivozanib, imatinib, nilotinib, rebastinib or bafetinib for preventing and/or treating amyotrophic lateral sclerosis |
WO2017062401A1 (en) | 2015-10-05 | 2017-04-13 | ORIG3N Inc. | Diagnosis and treatment of parkinson's disease based on identification and amelioration of liver dysfunction |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009529498A (ja) * | 2006-03-03 | 2009-08-20 | アモアフィクス ライフ サイエンシズ リミテッド | ミスフォールドsod1媒介疾患を処置および検出するための方法および組成物 |
WO2009110113A1 (ja) * | 2008-03-07 | 2009-09-11 | 学校法人慶應義塾 | 神経損傷治療剤及び神経損傷治療方法 |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4231938A (en) | 1979-06-15 | 1980-11-04 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
ZA81703B (en) | 1980-02-04 | 1982-09-29 | Merck & Co Inc | New antihypercholesterolemic compounds,intermediates and processes |
US4444784A (en) | 1980-08-05 | 1984-04-24 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic compounds |
JPS572240A (en) | 1980-06-06 | 1982-01-07 | Sankyo Co Ltd | Ml-236b derivative |
DK149080C (da) | 1980-06-06 | 1986-07-28 | Sankyo Co | Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre |
US4739073A (en) | 1983-11-04 | 1988-04-19 | Sandoz Pharmaceuticals Corp. | Intermediates in the synthesis of indole analogs of mevalonolactone and derivatives thereof |
JPS60500015A (ja) | 1982-11-22 | 1985-01-10 | サンド・アクチエンゲゼルシヤフト | メバロラクトン同族体とその誘導体、これらの製造法およびこれらを含有する製薬学的組成物 |
US5854259A (en) | 1987-08-20 | 1998-12-29 | Nissan Chemical Industries Ltd. | Quinoline type mevalonolactones |
JP2569746B2 (ja) | 1987-08-20 | 1997-01-08 | 日産化学工業株式会社 | キノリン系メバロノラクトン類 |
FI94339C (fi) | 1989-07-21 | 1995-08-25 | Warner Lambert Co | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen /R-(R*,R*)/-2-(4-fluorifenyyli)- , -dihydroksi-5-(1-metyylietyyli)-3-fenyyli-4-/(fenyyliamino)karbonyyli/-1H-pyrroli-1-heptaanihapon ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi |
JP2648897B2 (ja) | 1991-07-01 | 1997-09-03 | 塩野義製薬株式会社 | ピリミジン誘導体 |
FR2688138B1 (fr) | 1992-03-06 | 1995-05-05 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Application de l'amino-2 trifluoromethoxy-6 benzothiazole pour obtenir un medicament destine au traitement de la sclerose laterale amyotrophique. |
US7011828B2 (en) | 2000-03-14 | 2006-03-14 | Es Cell International Pte. Ltd. | Implanting neural progenitor cells derived for human embryonic stem cells |
AU5676701A (en) | 2000-05-16 | 2001-11-26 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Novel method of inducing the differentiation of embryonic stem cells into ectodermal cells and use thereof |
WO2003042384A1 (fr) | 2001-11-15 | 2003-05-22 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Inducteur de differentiation pour cellules souches d'embryon, procede d'obtention dudit inducteur et utilisation |
WO2004000313A2 (fr) * | 2002-06-24 | 2003-12-31 | Exonhit Therapeutics Sa | Traitement de la sclerose laterale amyotrophique avec des composes modulateurs de l’activite de pgc-1 |
US20050202488A1 (en) * | 2004-03-02 | 2005-09-15 | The General Hospital Corporation | Assay for therapies that inhibit expression of the cytosolic Cu/Zn superoxide dismutase (SOD1) gene |
US8492147B2 (en) | 2004-06-18 | 2013-07-23 | Riken | Method of inducing the differentiation of embryonic stem cells into nerve by serum-free suspension culture |
EP1871359A1 (en) * | 2005-04-07 | 2008-01-02 | Miso Sabovic | Delaying the ageing process and disorders caused by ageing |
US20060252775A1 (en) * | 2005-05-03 | 2006-11-09 | Henderson Samuel T | Methods for reducing levels of disease associated proteins |
ES2367525T3 (es) | 2005-12-13 | 2011-11-04 | Kyoto University | Factor de reprogramación celular. |
KR101516833B1 (ko) | 2007-03-23 | 2015-05-07 | 위스콘신 얼럼나이 리서어치 화운데이션 | 체세포 재프로그래밍 |
US9765297B2 (en) * | 2007-04-13 | 2017-09-19 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Stem cell-based culture system for drug development |
WO2009146098A2 (en) * | 2008-04-02 | 2009-12-03 | President And Fellows Of Harvard College | Stem cells and uses thereof |
-
2010
- 2010-12-14 EP EP10837714.4A patent/EP2512514B1/en not_active Not-in-force
- 2010-12-14 WO PCT/JP2010/072836 patent/WO2011074690A1/en active Application Filing
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009529498A (ja) * | 2006-03-03 | 2009-08-20 | アモアフィクス ライフ サイエンシズ リミテッド | ミスフォールドsod1媒介疾患を処置および検出するための方法および組成物 |
WO2009110113A1 (ja) * | 2008-03-07 | 2009-09-11 | 学校法人慶應義塾 | 神経損傷治療剤及び神経損傷治療方法 |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012067265A1 (en) * | 2010-11-18 | 2012-05-24 | Kyoto University | Method for screening drugs for suppressing inflammasome activity |
JPWO2013140927A1 (ja) * | 2012-03-21 | 2015-08-03 | 国立大学法人京都大学 | アルツハイマー病の治療薬および/または予防薬のスクリーニング方法 |
WO2014020933A1 (ja) * | 2012-07-31 | 2014-02-06 | アルバイオ株式会社 | 新規蛍光物質 |
JP2019136042A (ja) * | 2013-12-02 | 2019-08-22 | 国立大学法人京都大学 | Fgfr3病の予防および治療剤ならびにそのスクリーニング方法 |
JP2021525106A (ja) * | 2018-06-01 | 2021-09-24 | ヘルプ・ステム・セル・イノベイションズ・カンパニー・リミテッドHelp Stem Cell Innovations Co., Ltd. | 分化用培地及びオリゴデンドロサイト前駆細胞の製造方法 |
JP7114134B2 (ja) | 2018-06-01 | 2022-08-08 | ヘルプ・ステム・セル・イノベイションズ・カンパニー・リミテッド | 分化用培地及びオリゴデンドロサイト前駆細胞の製造方法 |
WO2023035867A1 (zh) * | 2021-09-08 | 2023-03-16 | 宁夏杞肽科技有限公司 | 枸杞糖肽在制备预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化的药物中的应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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